專利名稱:富含肌醇和總黃酮的蕎麥提取物、制備方法及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物保健技術(shù)領(lǐng)域：
。具體涉及一種具有預(yù)防、治療糖尿病、高血壓、高血脂、多囊卵巢綜合癥(PC0Q、機(jī)體胰島素抵抗所致疾病的蕎麥提取物產(chǎn)品。
背景技術(shù)：
我國(guó)民間謗語就有“作物種類多，作物蕎為大”、“五谷蕎為首”的說法。我國(guó)古籍中關(guān)于蕎麥防病治病的記載有很多《齊民要術(shù)》有“頭風(fēng)畏冷者，以面湯和粉為餅，更令罨出汗，雖數(shù)十年亦愈”的記載；《圖經(jīng)本草》有“實(shí)腸胃，益氣力，，的記載；《本草綱目》有“降氣寬腸磨積滯，消熱腫風(fēng)痛，除白濁血滯，脾積泄瀉”的論述，記載蕎麥性味苦、平、寒，有益氣力、續(xù)精神、利耳目、降氣寬腸健胃的作用；《植物名實(shí)圖考》稱蕎麥“性能消積，俗呼凈腸草”。蕎麥能降血壓、降血脂、降血糖，改善微循環(huán)等作用，又被稱作“三降”食品。
蕎麥?zhǔn)菍儆谵た?Polygonaceae)蕎麥屬(Fagopyrum)，主要有甜蕎(Fagopyrum esculentum Moench，也口L]普通養(yǎng)麥)禾口苦養(yǎng)(Fagopyrum tararicum Gaerth，也口L]軸革旦養(yǎng)麥)兩個(gè)栽培品種。蕎麥的生產(chǎn)國(guó)有中國(guó)、俄羅斯、日本、波蘭、法國(guó)、加拿大、美國(guó)等。我國(guó)主要分布在西北、華北、西南和東北各省，湖北、湖南、江西也有較多的種植區(qū)。我國(guó)常年種植面積在270萬公頃，占世界總面積的55%，年產(chǎn)量約263萬噸左右，總產(chǎn)量居世界第二。
蕎麥含有多種營(yíng)養(yǎng)成分，如高活性蛋白、維生素、高活性膳食纖維、淀粉、脂肪酸含量較高且結(jié)構(gòu)合理，礦物質(zhì)含量也十分豐富，并且含有其它禾谷類糧食所沒有的葉綠素和蘆丁。同時(shí)，蕎麥富含生物類黃酮(Flavonoid)、糖醇(Fagopyritol)、花青素 (Anthocyahidin)等功能成分。這些成分結(jié)構(gòu)明確，含量豐富，在抗腫瘤、抗氧化和清除自由基、防治心腦血管疾病，有效調(diào)節(jié)血糖、血脂、血壓等方面效果顯著。蕎麥獨(dú)特的營(yíng)養(yǎng)保健功能使之成為現(xiàn)代臨床營(yíng)養(yǎng)學(xué)最具影響力的糧食資源之一。
黃酮類化合物屬植物次生代謝產(chǎn)物，蕎麥含量較高的類黃酮物質(zhì)是蘆丁、槲皮素、 桑色素、茨菲醇等。蕎麥中黃酮對(duì)心腦血管具有較強(qiáng)的調(diào)節(jié)作用。研究發(fā)現(xiàn)，蕎麥中的黃酮能夠軟化血管，改善微循環(huán)，清熱解毒、活血化瘀、拔毒生肌、益氣提神，有降血糖和尿糖的作用。黃酮還有擴(kuò)張血管的作用，能維持毛細(xì)血管的抵抗力，降低其通透性及脆性，促進(jìn)細(xì)胞增生和防止血細(xì)胞的凝集，還有降血脂、擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、增強(qiáng)冠狀動(dòng)脈血流量等作用。
胰島素抵抗(IR)是指各種原因引起機(jī)體對(duì)生理水平的胰島素失去敏感性，需要高水平胰島素才能控制血糖的現(xiàn)象。從頂?shù)陌l(fā)生條件分析，可分為生理性和病理性頂。
生理性胰島素抵抗在生理情況下，頂是體內(nèi)一種自我保護(hù)機(jī)制。這種機(jī)制對(duì)于保證大腦細(xì)胞能量供應(yīng)是必須的。
病理性胰島素抵抗病理情況下，引起生理性頂?shù)囊蛩?FFA、糖皮質(zhì)激素及炎癥介質(zhì))長(zhǎng)期處于高水平，一旦監(jiān)時(shí)性頂變成持久性頂，造成病理變化，稱之為病理性IR。此時(shí)機(jī)體對(duì)生理水平的胰島素失去敏感性，并需要高水平的胰島素才能控制血糖，并由此導(dǎo)致一系列疾病的產(chǎn)生。
胰島素通過與細(xì)胞膜表面的特異性受體結(jié)合發(fā)揮其生物學(xué)作用。其生物學(xué)作用多種多樣，但最主要的作用包括刺激細(xì)胞吸收葡萄糖，促進(jìn)毛細(xì)血管擴(kuò)張而改善微循環(huán)，誘導(dǎo) TG合成并促進(jìn)脂肪細(xì)胞儲(chǔ)存能量。這些作用都依賴于胰島素受體信號(hào)通路在體內(nèi)暢通無阻。這條信號(hào)通路由多種蛋白激酶和配體蛋白組成，胰島素的信號(hào)依次由受體往下傳遞。關(guān)于頂?shù)臋C(jī)制，存在多種學(xué)說，包括內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、氧化應(yīng)激、炎癥、線粒體功能障礙、脂肪肝、 低脂聯(lián)素血癥及高胰島素血癥等。
脂肪細(xì)胞功能障礙是肥胖條件下頂發(fā)生的根源。脂肪細(xì)胞的功能分兩種，一是儲(chǔ)存TG，二是分泌激素或細(xì)胞因子，如瘦素、脂聯(lián)素及炎癥介質(zhì)。脂肪組織在肥胖條件下過度增生，導(dǎo)致其內(nèi)部不斷重建，以滿足組織厚度增加帶來的新需要，如細(xì)胞間質(zhì)重組、細(xì)胞體積增大、毛細(xì)血管延伸等。這種重建過程有一定限度，當(dāng)達(dá)到極限時(shí)，脂肪組織會(huì)因微循環(huán)不足而產(chǎn)生缺氧。在缺氧反應(yīng)中，脂肪細(xì)胞失去儲(chǔ)存脂肪的能力，產(chǎn)生脂聯(lián)素的能力降低， 同時(shí)引起巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)及慢性炎癥反應(yīng)，還可導(dǎo)致內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和氧化應(yīng)激。這些變化都可促進(jìn)頂?shù)漠a(chǎn)生。肥胖發(fā)展到一定階段，脂肪組織的儲(chǔ)存功能達(dá)到滿負(fù)荷，導(dǎo)致脂肪在血液及其他非脂肪組織或器官中堆積。過多的脂肪酸會(huì)通過中間產(chǎn)物(如DAG或神經(jīng)胺)引起 IR。
不同個(gè)體的脂肪組織在肥胖時(shí)的重建能力不同，重建能力強(qiáng)的個(gè)體肥胖時(shí)較晚甚至不發(fā)生脂肪組織功能障礙，不易出現(xiàn)頂；重建能力差的個(gè)體，障礙發(fā)生較早，易出現(xiàn)頂。 這就是頂存在個(gè)體差異的原因之一。此外，脂肪在體內(nèi)的分布也是個(gè)體差異的原因?？傊?， 個(gè)體差異由遺傳背景決定。
由于胰島素具有廣泛的生物作用，因此在發(fā)生胰島素抵抗時(shí)，除了葡萄糖代謝會(huì)發(fā)生改變外，脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、水和電解質(zhì)的代謝也會(huì)發(fā)生變化。近年來發(fā)現(xiàn)II型糖尿病、高血壓、高血脂、PC0S、高甘油三酯血癥、低高密度脂蛋白膽固醇血癥、腹型肥胖、動(dòng)脈粥樣硬化、冠心病、腦血管病、糖耐量異常、高尿酸血癥、纖溶功能異常、微量白蛋白尿以及瘦素抵抗等均與胰島素抵抗有關(guān)。因?yàn)檫@些疾病大多為糖、脂代謝紊亂，目前許多學(xué)者稱其為胰島素抵抗綜合征或代謝綜合征(metabolic syndrome)。
美國(guó)科學(xué)家研究發(fā)現(xiàn)，正常人血液中及尿液中含有一定濃度的D-手性肌醇，而在 II型糖尿病人中則幾乎檢測(cè)不到，因此，提示D-手性肌醇在胰島素作用的信號(hào)傳遞過程中扮演了重要角色。2003年，加拿大科學(xué)家在《農(nóng)業(yè)與食品化學(xué)》雜志上公布了一項(xiàng)研究成果， 他們發(fā)現(xiàn)蕎麥提取物可以顯著的降低糖尿病大鼠的血糖，并推測(cè)其中的功效分子是一種手性INOSITOL類小分子。
一直以來，科學(xué)家的研究主要集中于蕎麥總黃酮，將其作為普通營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑為研究目的，隨著中國(guó)書公開號(hào)CN1442399公開了一種將蕎麥中的INOSITOL衍生物轉(zhuǎn)化為INOSITOL單體的方法，越來越多的對(duì)蕎麥的研究?jī)A向于INOSITOL，利用其胰島素增敏劑樣作用，應(yīng)用于解決機(jī)體內(nèi)的胰島素抵抗類疾病。但由于通過蕎麥內(nèi)INOSITOL衍生物轉(zhuǎn)化為INOSITOL產(chǎn)品得率較低，以及通過化學(xué)方法合成INOSITOL條件要求高，生產(chǎn)成本太高致使無法大規(guī)模生產(chǎn)。且大部分研究?jī)H對(duì)INOSITOL和蕎麥總黃酮單獨(dú)進(jìn)行研究，沒有綜合考慮這兩種功效成分對(duì)于解決胰島素抵抗及相關(guān)疾病的協(xié)同作用研究。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種蕎麥提取物，它在制備過程中綜合考慮INOSITOL與蕎麥總黃酮這兩種協(xié)同功效成分，其中含有8-25 % INOSITOL和30-50 %的總黃酮。含有此比例的INOSITOL與蕎麥總黃酮的蕎麥提取物與高純度的INOSITOL、蕎麥總黃酮相同劑量相比，對(duì)于解決胰島素抵抗及相關(guān)疾病具有更好的協(xié)同作用。
更佳的功效成分配比的蕎麥提取物為10-20%的INOSITOL和35% -45%的總黃酮；
最佳的功效成分配比的蕎麥提取物為15%的INOSITOL和40%的總黃酮；
為了制備上述發(fā)明所得的蕎麥提取物，本發(fā)明提供如下制備方法取得一定量的蕎麥種子，加入酶激活劑浸泡處理后，在一定的條件下發(fā)芽得發(fā)芽蕎麥種子后，用乙醇提取得蕎麥種子提取液后，加入0. 5-30ppm的高分子殼聚糖作為絮凝劑，過濾得過濾液后上大孔吸附樹脂如AB-8或聚酰胺樹脂后，用50-80%的乙醇洗脫，收集洗脫液后送干燥，得蕎麥提取物干粉。該方法包含有具體生產(chǎn)步驟如下
1.將成熟蕎麥種子在酶激活劑浸泡充分后，發(fā)芽；
2.收集萌芽后的蕎麥種子，加入一定量的乙醇，粉碎，回流提取后，過濾，收集蕎麥種子提取液；
3.將重量比為0. 5-30ppm的高分子殼聚糖作為絮凝劑加入蕎麥種子提取液中，攪拌均勻后，靜置吸附；
4.過濾去除絮凝劑，過濾液上柱層析分離，層析柱為大孔吸附樹脂，如AB-8型大孔吸附樹脂或聚酰胺，用50-80%的乙醇進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，濃縮回收乙醇，送干燥，得上述蕎麥提取物。
按此生產(chǎn)工藝制備的蕎麥提取物含有重量比為8-25% INOSITOL和30_50%的總黃酮。
本發(fā)明提供的蕎麥提取物可用于制備具有治療、預(yù)防機(jī)體胰島素抵抗所致疾病的藥品、保健食品、營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充食品。
本發(fā)明人對(duì)蕎麥提取物進(jìn)行了動(dòng)物藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明蕎麥提取物能有效治療、預(yù)防胰島素抵抗綜合征如糖尿病、高血脂、高血壓、多囊卵巢綜合癥，且蕎麥提取物中的INOSITOL和總黃酮在此比例下表現(xiàn)出較好的協(xié)同作用。
本發(fā)明的蕎麥提取物可與各種藥學(xué)上可以接受的載體混合制成膠囊、懸浮物、口服液等劑型藥物組合物、保健食品。
具體實(shí)施方式
為了進(jìn)一步理解本發(fā)明，以下將結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做出詳細(xì)的、非限定性的說明。
實(shí)施例1
稱取100克成熟蕎麥種子，加入酶激活劑浸泡2小時(shí)后，取出于25士2°C，光照條件下萌芽；收集萌芽后的蕎麥種子，加入10倍量的60%藥用乙醇，粉碎后、沸騰回流提取3 小時(shí)，濾出提取液；加入重量比為IOppm的絮凝劑——高分子殼聚糖，攪拌后靜置3小時(shí)， 過濾，濾出液上層析柱分離，層析柱為AB-8型大孔吸附樹脂，洗脫液為55%乙醇，收集洗脫液，真空濃縮回收乙醇后，干燥得蕎麥提取物干粉。采用GC-MS檢測(cè)方法檢測(cè)INOSITOL含量，其中D-chiro-inositol含量為14. 1 % ,Myo-inositol含量為8. 3%;采用UV法檢測(cè)總黃酮含量為35.8%。
實(shí)施例2
稱取100克成熟蕎麥種子，加入酶激活劑浸泡2小時(shí)后，取出于25士2°C，光照條件下萌芽；收集萌芽后的蕎麥種子，加入10倍量的60%藥用乙醇，粉碎后、沸騰回流提取3小時(shí)，濾出提取液；加入重量比為3ppm的絮凝劑——高分子殼聚糖，攪拌后靜置3小時(shí)，過濾，濾出液上層析柱分離，層析柱為聚酰胺，洗脫液為50 %乙醇，收集洗脫液，真空濃縮回收乙醇后，干燥得蕎麥提取物干粉。采用GC-MS檢測(cè)方法檢測(cè)INOSITOL含量，其中 D-chiro-inositol含量為8. 6%,Myo-inositol含量為8. 7% ；采用UV法檢測(cè)總黃酮含量為 32. 8%。
實(shí)施例3
稱取100克成熟蕎麥種子，加入酶激活劑浸泡2小時(shí)后，取出于25士2°C，光照條件下萌芽；收集萌芽后的蕎麥種子，加入10倍量的60%藥用乙醇，粉碎后、沸騰回流提取 3小時(shí)，濾出提取液；加入重量比為30ppm的絮凝劑——高分子殼聚糖，攪拌后靜置2小時(shí)，過濾，濾出液上層析柱分離，層析柱為聚酰胺，洗脫液為80%乙醇，收集洗脫液，真空濃縮回收乙醇后，干燥得蕎麥提取物干粉。采用GC-MS檢測(cè)方法檢測(cè)INOSITOL含量，其中 D-chiro-inositol含量為19. 6% ,Myo-inositol含量為4. 8%;采用UV法檢測(cè)總黃酮含量為 40. 8%。
實(shí)施例4
稱取100克成熟蕎麥種子，加入酶激活劑浸泡2小時(shí)后，取出于25士2°C，光照條件下萌芽；收集萌芽后的蕎麥種子，加入10倍量的60%藥用乙醇，粉碎后、沸騰回流提取3 小時(shí)，濾出提取液；加入重量比為ISppm的絮凝劑——高分子殼聚糖，攪拌后靜置3小時(shí)， 過濾，濾出液上層析柱分離，層析柱為AB-8型大孔吸附樹脂，洗脫液為70%乙醇，收集洗脫液，真空濃縮回收乙醇后，干燥得蕎麥提取物干粉。采用GC-MS檢測(cè)方法檢測(cè)INOSITOL含量，其中D-chiro-inositol含量為13. 1 % ,Myo-inositol含量為6. 3%;采用UV法檢測(cè)總黃酮含量為45.8%。
實(shí)施例5
蕎麥提取物對(duì)胰島素抵抗大鼠胰島素敏感性的影響
方法用高脂脂飼料誘導(dǎo)的胰島素抵抗大鼠作為模型，用高胰島素-正葡萄糖鉗夾技術(shù)作為評(píng)價(jià)方法，選用蕎麥提取物作為實(shí)驗(yàn)樣品，觀察對(duì)胰島素敏感性的影響。
1.材料與方法
1. 1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
Wistard 大鼠，雄性，4-5 周齡，體重 137_146g。
1. 2模型的建立與實(shí)驗(yàn)分組
Wistard雄性大鼠80只適應(yīng)性喂養(yǎng)2天后，模型組70只給予高脂飼料(每100克飼料總熱量為1900千焦，其中脂肪提供熱量占52%，蛋白質(zhì)占15%，碳水化合物占33%脂肪主要為煉豬油)，對(duì)照組繼續(xù)給予普通飼料(每100克飼料總熱量為1554. 4千焦，其中脂肪提供熱量占12 %，蛋白質(zhì)占19 %，碳水化合物占69 ，喂養(yǎng)10周后，模型組再隨機(jī)分為 7組，即①模型組10只(給予普通飼料)；②飲食控制組10只(普通飼料，模型組攝食量的 80%)；③羅格列酮組10只C3mg/kg體重/日灌胃，普通飼料)；④純D-chiro-inositol低劑量組10只(10mg/kg體重/日灌胃，普通飼料)；⑤純D-chiro-inositol高劑量組10只 (20mg/kg體重/日灌胃，普通飼料)；⑥蕎麥提取物(19. 6%的DCI和40. 8%總黃酮)低劑量組(50mg/kg體重/日灌胃，普通飼料)；⑦蕎麥提取物(19. 6%的DCI和40. 8%總黃酮) 高劑量組(100mg/kg體重/日灌胃，普通飼料)。治療各組連續(xù)給藥3周，正常對(duì)照組、模型組和飲食控制組分別以相應(yīng)量的生理鹽水連續(xù)灌胃三周。
實(shí)驗(yàn)用蕎麥提取物中含有19. 6%的DCI和40. 8%總黃酮。
1. 3高胰島素一正葡萄糖鉗夾試驗(yàn)每組取一只大鼠開始分批隔夜禁食10小時(shí)， 稱體重，尾靜脈取血測(cè)基礎(chǔ)血糖值，然后以10%水合氯醛(0.3mL/kg)進(jìn)行腹腔麻醉。分離大鼠右側(cè)頸總動(dòng)脈和左側(cè)頸內(nèi)或頸外靜脈，75IU/mL肝素抗凝，進(jìn)行插管(美國(guó)產(chǎn)硬膜外麻醉用硅膠導(dǎo)管，內(nèi)徑0. 6mm,外徑Imm)，動(dòng)脈插管以取血測(cè)血糖及穩(wěn)態(tài)胰島素，靜脈插管以接微量注射泵以輸注胰島素及葡萄糖。插管完畢后，將大鼠靜置30分鐘后開始試驗(yàn)，開始時(shí)先恒定輸注短效豬胰島素(輸注速率為8mu/kg ^irT1,臨用時(shí)胰島素用10. 5%牛血清白蛋白稀釋)，每5或10分鐘從左頸動(dòng)脈取血測(cè)血糖i次，當(dāng)血糖下降至基礎(chǔ)血糖+2. Ommol/ L時(shí)，開始小量輸注20%葡萄糖溶液，并根據(jù)血糖水平不斷調(diào)整葡萄糖輸注率，使血糖逐漸達(dá)到穩(wěn)態(tài)。將所有大鼠衄糖都鉗夾在基礎(chǔ)血糖土 0. 2mmol/L水平，記錄穩(wěn)態(tài)下連續(xù)30分鐘內(nèi)的葡萄糖輸注率，取均值。
1. 4統(tǒng)計(jì)方法
計(jì)數(shù)資料以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間顯著性差異采用t檢驗(yàn)。
1. 5實(shí)驗(yàn)結(jié)果
各組葡萄糖輸注率(mg/kg. min)檢測(cè)結(jié)果如下
權(quán)利要求
1.一種蕎麥提取物，其特征在于含有重量比為8-25%肌醇和30-50%的總黃酮，該提取物的通過以下方法制備的1)將成熟蕎麥種子在酶激活劑浸泡充分后，發(fā)芽；2)收集萌芽后的蕎麥種子，加入一定量的乙醇，粉碎，回流提取后，過濾，收集蕎麥種子提取液；3)將重量比為0.5-30ppm的高分子殼聚糖作為絮凝劑加入蕎麥種子提取液中，攪拌均勻后，靜置吸附；4)過濾去除絮凝劑，過濾液上柱層析分離，層析柱為大孔吸附樹脂，用50-80%的乙醇進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，濃縮回收乙醇，送干燥，得上述蕎麥提取物。
2.如權(quán)利要求
1所述的蕎麥提取物，其特征在于含有重量比為10-20%的肌醇和 35% -45%的總黃酮。
3.如權(quán)利要求
1所述的蕎麥提取物，其特征于含有重量比為15%的肌醇和40%的總黃酮。
4.一種如權(quán)利要求
1所述的蕎麥提取物的制備方法，其特征在于該方法為1)將成熟蕎麥種子在酶激活劑浸泡充分后，發(fā)芽；2)收集萌芽后的蕎麥種子，加入一定量的乙醇，粉碎，回流提取后，過濾，收集蕎麥種子提取液；3)將重量比為0.5-30ppm的高分子殼聚糖作為絮凝劑加入蕎麥種子提取液中，攪拌均勻后，靜置吸附；4)過濾去除絮凝劑，過濾液上柱層析分離，層析柱為大孔吸附樹脂，用50-80%的乙醇進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，濃縮回收乙醇，送干燥，得上述蕎麥提取物。
5.如權(quán)利要求
4所述的蕎麥提取物的制備方法，其特征在于所述的大孔吸附樹脂的類型為AB-8型大孔吸附樹脂或者聚酰胺型大孔樹脂。
6.如權(quán)利要求
1所述的蕎麥提取物在制備治療機(jī)體胰島素抵抗所致疾病的藥物的用途。
7.如權(quán)利要求
1所述的蕎麥提取物在制備治療機(jī)體胰島素抵抗所致疾病的保健食品中的用途。
專利摘要
本發(fā)明涉及一種富含INOSITOL和總黃酮的蕎麥提取物及其制備方法。所述的制備方法，步驟為1)將成熟蕎麥種子用酶激活劑浸泡充分后發(fā)芽；2)收集萌芽后的蕎麥種子，加入一定量的乙醇，粉碎，回流提取后過濾，收集種子提取液；3)將絮凝劑加入蕎麥種子提取液中，攪拌均勻后，靜置吸附；4)過濾去除絮凝劑，過濾液上柱層析分離，層析柱為大孔吸附樹脂，洗脫，收集洗脫液，濃縮回收乙醇，送干燥，得蕎麥提取物。該蕎麥提取物有效濃縮了INOSITOL和總黃酮類物質(zhì)，協(xié)同作用使蕎麥提取物具有了制備具有治療、預(yù)防或者輔助治療糖尿病、高血壓、高血脂、PCOS等機(jī)體胰島素抵抗所致疾病的食品、保健食品、藥物中的用途。
文檔編號(hào)A61P3/06GKCN101904907 B發(fā)布類型授權(quán) 專利申請(qǐng)?zhí)朇N 200910057368
公開日2012年4月18日 申請(qǐng)日期2009年6月3日
發(fā)明者劉華奇, 吳芬宏, 夏濤, 陳丹青 申請(qǐng)人:上海諾金科生物科技有限公司導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan專利引用 (6), 非專利引用 (3),