專利名稱:免疫抑制狀態(tài)雞用作測(cè)試藥物免疫增強(qiáng)作用的動(dòng)物模型的制作方法
所屬技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用作測(cè)試藥物免疫增強(qiáng)作用的動(dòng)物模型及其建立方法，屬生物技術(shù)領(lǐng)域：
。
背景技術(shù)：
在臨床應(yīng)用中，一些化藥和中藥被認(rèn)為對(duì)人及動(dòng)物有免疫增強(qiáng)作用。由于缺乏一種可用來(lái)科學(xué)和客觀評(píng)價(jià)藥物的免疫增強(qiáng)作用的實(shí)驗(yàn)體系，在申報(bào)新藥證書時(shí)，均不能提供必要的試驗(yàn)數(shù)據(jù)。因此，迄今為止尚沒(méi)有一種具免疫增強(qiáng)作用的藥物或制劑被批準(zhǔn)為正式藥品。免疫抑制狀態(tài)雞的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ妥鳛橐环N實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)可為檢測(cè)和評(píng)價(jià)對(duì)雞的免疫增強(qiáng)作用提供科學(xué)和客觀的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。這對(duì)新藥的開發(fā)和評(píng)價(jià)將會(huì)有很大的應(yīng)用前景。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所涉及的設(shè)計(jì)原理對(duì)于免疫功能正常的人或動(dòng)物來(lái)說(shuō)，免疫功能的增強(qiáng)可能意味著病態(tài)，而用于治療目的的免疫增強(qiáng)性藥物，應(yīng)是針對(duì)免疫功能低下的個(gè)體和群體。如能在雞群中建立起可控程度的免疫抑制狀態(tài)，就可用做測(cè)試藥物免疫增強(qiáng)作用的動(dòng)物模型，這也就是本發(fā)明所要達(dá)到的目的。
建立免疫抑制狀態(tài)雞的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷脑瓌t方法 將用不同劑量的免疫抑制性病毒接種不同日齡、沒(méi)有特定母源抗體的雛雞，建立起不同程度免疫抑制狀態(tài)的雞群。對(duì)以上所建立的免疫抑制狀態(tài)的雞在1周、2周或3周齡時(shí)使用雞新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)、H5-AIV型或H9-AIV型的禽流感病毒(Avian influenza virus，AIV)制備的滅活油乳疫苗。在免疫后3、4和5周采血提取血清分別測(cè)定對(duì)NDV和H5-AIV和H9-AIV的血凝抑制(HI)抗體滴度，以此作為免疫功能狀態(tài)的客觀量化的指標(biāo)。
本發(fā)明具體實(shí)施方案1 禽網(wǎng)狀內(nèi)皮增生病毒(Avian Reticuloendotheliosis viruses，REV)感染免疫抑制狀態(tài)試驗(yàn)1.1 REV的標(biāo)準(zhǔn)化為了保證病毒毒力的穩(wěn)定性從而有效地控制感染雞群的免疫抑制狀態(tài)，本發(fā)明使用REV-C99株的傳染性克隆作為病毒的來(lái)源。在用該傳染性克隆DNA(可用基因工程的方法無(wú)限復(fù)制而且不會(huì)有明顯變異)轉(zhuǎn)染雞胚成纖維細(xì)胞產(chǎn)生病毒后，在雞胚成纖維細(xì)胞(CEF)上連續(xù)傳代不超過(guò)6代(該病毒已于2001年07月28日保藏在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏號(hào)為CGMCCNo.1429；專利申請(qǐng)?zhí)?005101262182)。
1.2雞群免疫抑制狀態(tài)的建立方法取沒(méi)有REV母源抗體的雞(SPF來(lái)源雞或經(jīng)預(yù)先測(cè)定沒(méi)有REV母源抗體的雞)，分別在1、7、14日齡接種100、1000、10000個(gè)TCID50的REV-C99病毒，將可建立處于不同程度免疫抑制狀態(tài)的雞群作為動(dòng)物模型；也可以用沒(méi)有J亞群雞白血病病毒(ALV-J)母源抗體的雞(SPF來(lái)源雞或經(jīng)預(yù)先測(cè)定沒(méi)有CLV-J母源抗體的雞)，分別在1、7、14日齡接種1000、10000、100000個(gè)TCID50的NX0101株ALV-J病毒(張紀(jì)元等，J亞群白血病病毒NX0101株感染性克隆化病毒的構(gòu)建及其致病性，微生物學(xué)報(bào)，2005，45437-440；Cui et al.，Reduced serologic response to Newcastle disease virus inbroiler chickens exposed to a Chinese field strain of subgroup J avian leukosis virus.Avian Diseases，2006，50191-195.)，建立起處于不同程度免疫抑制狀態(tài)的雞群作為動(dòng)物模型。
1.3 REV感染建立免疫抑制狀態(tài)的檢測(cè) 以用對(duì)NDV、H5-AIV型或H5-AIV型滅活疫苗免疫雞只后的HI抗體滴度為指標(biāo)，可以客觀并可量化地確定REV感染雞群的免疫抑制狀態(tài)(程度)，結(jié)果見表1、表2、表3和表4。
表1 不同劑量REV感染對(duì)NDV HI抗體滴度的影響(Log2)
表中數(shù)字為平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(樣本數(shù))。
兩個(gè)不同大字母表示差異極顯著(p＜0.01)，不同字母表示差異顯著(p＜0.05)。
表2不同劑量REV感染對(duì)免疫雞H9-AIV HI抗體滴度的影響(Log2)
表中數(shù)字為平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(樣本數(shù))。
兩個(gè)不同大字母表示差異極顯著(p＜0.01)，不同字母表示差異顯著(p＜0.05)。
表3 REV感染對(duì)免疫雞AIV-H5 HI抗體滴度的影響(Log2)
兩個(gè)不同大字母表示差異極顯著(p＜0.01)，兩個(gè)不同小寫字母表示差異顯著(p＜0.05)，不同字母表示差異顯著(p＜0.05)。
表4 REV感染對(duì)SPF雞中樞免疫器官的影響(％)
兩個(gè)不同大字母表示差異極顯著(p＜0.01)，兩個(gè)不同小寫字母表示差異顯著(p＜0.05)，不同字母表示差異顯著(p＜0.05)。
由此建立的免疫抑制狀態(tài)的雞群，可作為用來(lái)判斷或評(píng)價(jià)藥物是否有免疫增強(qiáng)的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?br> 2 REV誘發(fā)免疫抑制狀態(tài)雞群作為測(cè)試免疫增強(qiáng)性藥物的動(dòng)物模型的初步應(yīng)用利用本發(fā)明建立的動(dòng)物模型，根據(jù)對(duì)NDV或H5-AIV型和H9-AIV型的HI抗體滴度的差異，可以科學(xué)而又客觀地評(píng)價(jià)藥物的免疫增強(qiáng)作用。初步實(shí)驗(yàn)的結(jié)果見表5。由表5可見，免疫抑制狀態(tài)的雞群使用藥物A可使對(duì)NDV和AIV的HI抗體水平顯著高于對(duì)照組，但在正常雞群，同樣該藥物無(wú)此作用。
表5不同藥物對(duì)不同健康狀態(tài)下雞的抗體水平的比較
B組雞在1日齡接種5000TCID50的REV-C99株，7日齡接種NDV和H5-AIV型滅活疫苗。在免疫后4、5、6周分別作檢測(cè)ND、H5-AIV的HI抗體水平3次。
A組雞未經(jīng)REV感染，Al、A2和A3三組間抗體滴度無(wú)顯著差異，表明所用的二種藥物對(duì)正常雞不顯示任何免疫增強(qiáng)作用。
而經(jīng)REV感染造成免疫抑制狀態(tài)的B1，B2和B3三組雞，對(duì)NDV和H5-AIV的HI抗體效價(jià)均顯著低于未經(jīng)REV感染的雞。但是，經(jīng)喂飼某種中藥浸劑的B2組，其HI抗體滴度顯著高于不喂藥的B1組或喂另一種藥物的B3組。這表明，該中藥浸劑對(duì)于處于免疫抑制狀態(tài)的雞，可顯示一定程度的免疫增強(qiáng)作用。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)本發(fā)明利用雞免疫抑制病毒感染雞造成動(dòng)物體可控的免疫抑制狀態(tài)，建立的動(dòng)物模型，根據(jù)對(duì)NDV或H5-AIV型和H9-AIV型AIV的HI抗體滴度的差異，可以科學(xué)而又客觀地評(píng)價(jià)藥物的免疫增強(qiáng)作用。
權(quán)利要求
1.一種用于測(cè)試藥物免疫增強(qiáng)作用的動(dòng)物模型，其特征在于1)將用不同劑量的可穩(wěn)定保持毒力水平的REV-C99株禽網(wǎng)狀內(nèi)皮增生病毒接種不同日齡、沒(méi)有特定母源抗體的雛雞，建立起可控程度免疫抑制狀態(tài)的雞群；2)處于免疫抑制狀態(tài)的雞群作為動(dòng)物模型，并以對(duì)雞新城疫滅活疫苗和禽流感滅活疫苗的血凝抑制抗體反應(yīng)為指標(biāo)，用以測(cè)定和評(píng)價(jià)特檢藥物的免疫增強(qiáng)作用。
2如權(quán)力要求1所述的用于測(cè)試藥物免疫增強(qiáng)作用的動(dòng)物模型，其特征在于用NX0101株J亞群雞白血病病毒(ALV-J)替代REV-C99株禽網(wǎng)狀內(nèi)皮增生病毒感染雞建立起可控程度免疫抑制狀態(tài)的雞群。
專利摘要
本發(fā)明涉及一種用作測(cè)試藥物免疫增強(qiáng)作用的動(dòng)物模型及其建立方法。用免疫抑制性病毒(如REV或ALV－J)誘發(fā)雞群的可控程度的免疫抑制狀態(tài)。以處于免疫抑制狀態(tài)的雞為動(dòng)物模型作為一種實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)可為檢測(cè)和評(píng)價(jià)藥物對(duì)雞的免疫增強(qiáng)作用提供科學(xué)和客觀的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。這對(duì)新藥的開發(fā)和評(píng)價(jià)將會(huì)有很大的應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)A61K49/00GK1994471SQ200610167314
公開日2007年7月11日 申請(qǐng)日期2006年12月27日
發(fā)明者崔治中, 孫淑紅 申請(qǐng)人:山東農(nóng)業(yè)大學(xué)導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan