專利名稱:制造微脂粒之方法及組成的制作方法
本發(fā)明系有關新穎微脂粒形成的組成，可提供形成微脂粒之新方法;特別是，本發(fā)明系有關使用水合劑，該化合物至少有二個可離子化基團，與微脂粒形成材料制成凝膠;該凝膠當以水溶液稀釋時可自動形成微脂粒。
曾經發(fā)表過多種方法以制造不同類別及大小之微脂粒并用膠囊把活性成份封閉圮來;其中大部份方法集中在使用有機溶劑以確保在分散于含水系統(tǒng)之前磷脂與脂肪酸可完全且均勻地溶解;第二種發(fā)展系使用超聲波照射以便分散磷脂/脂肪酸物料。
例如Robinson，Trans.Faraday Soc.，56∶1260(1960)及Papahadjopoulos等人在〔Biochim.Biophys.Act，135，639(1967)〕，描述從二相醚/水系統(tǒng)形成磷脂分散液，包括將氮冒泡通過混合物而蒸發(fā)醚。類似地，Chowhan等人，在Biochim.Biophys.Acta.266∶320(1972)描述曾經使用氯仿以確保磷脂在分散之前完全且徹底地混合。超聲波分散，首先由D.Papahadjopoulos及N.Miller在Biochim.Biophys.Acta.135∶624(1967)所述，產生小的單層膠囊，但因為包囊之效率低故此技術有限制。Batzri及Kron等人在〔Biochim.Biophys.Acta.198∶1015(1973)〕使用一種技術將有機相(乙醇)內之脂質注射入水溶液內。Deamer及Bangham將醚使用于實質上相同技術中〔Biochim.Biophys.Acta.443∶619(1976)〕。
又另一種技術及從含有磷酯醯絲氨酸衍生物而得之胞囊中由鈣誘發(fā)結構轉變，但是據報導由于再生胞囊的方法其包囊效率是相當低的，參見Papahadjopoulos，等人，在Biochim.Biophys.Acta.394∶483(1975)及H.Hauser，Trends in Pharm.，Science3，274，-77(1982)中敘述的。
若干其他專利陳述了對本發(fā)明感興趣之脂質胞囊形成法。美國專利號3，804，776描述一種生產油及脂肪包囊氨基酸形成多肽之方法，系將物料干粉分散于脂肪或油之融熔混合物內，然后將混合物倒入水中。胞囊物料含于相當大的脂肪小滴中。此種胞囊僅限于口服并不適于靜脈注射。
經由將藥物及脂質之含水磷脂質分散液冷凍而將某些藥物捕集于脂質胞囊內，此描述于美國專利號4，016，100。
Papahadjoplous及Szoka于美國專利號4，235，871中揭示一種微脂粒之制造方法，其乃將胞囊形成材溶解于有機溶劑內，然后與含有有待包囊形材料之水溶液混合;形成均勻之油于水中的乳膠液并蒸發(fā)有機溶劑而得仿膠混合物，然后此膠懸浮于水中耐成胞囊。
另一種感興趣之方法揭示于美國專利號3，932，657，其中教示包囊聚胺聚羧酸螯合劑EDTA及TDPA。又另一某個專利號4，217，344 Vanlerberghe等人，描述某些添加劑可與非離子脂質化合物結合而改變脂質胞囊之滲透能力及表面電荷。在若干所述添加劑中包括多肽及蛋白質。Mackaness等人在美國專利號4，192，859中描述含有微脂粒做載體之對照介質。所列對比劑鹽包括精氨酸鹽，半胱氨酸鹽，甘氨酸鹽，甘氨醯甘氨酸鹽及N-甲基葡萄糖胺鹽。此等物料之特征為脂肪族及環(huán)脂肪族胺可用以制備各種對照劑之水溶性鹽而可用做X射線之對照劑。
1984年三月科學Janos Fendler所寫文章中列出許多合成表面活性劑可用以形成胞囊。Fendler列舉四價銨及羧酸鹽，硫酸鹽，磺酸鹽及磷酸鹽兩性離子物料可參考如下文獻J.H.Fendler，Acc.Chem.Res.，13，7(1980);T.Kunitake及S.Shinkai，Adv.Phis.Org.Chem.，17，435(1980);T.Kunitake，等人.，J.Am.Chem.Soc.，103，5401(1981);J.H.Fuhrhop及J.Matthieu，J.Chem.Soc.Chem.Commun.P141(1983);及W.Talmon，等人.，Science，221，1047(1983)。
已經發(fā)現當磷脂及/或脂肪酸(微脂粒形成材料)分散于含水合劑之水溶液中時自動形成微脂粒。借本發(fā)明目的用之此類化合物由精氨酸及類似之氨基酸在分子之α及ω終端制造至少具有一個可離子化官能基者加以例示說明?！八稀被衔镌诜肿由暇哂邢嗤悇e可離子化基，其或為陽離子，或為陰離子或具有電荷相反之可離子化基?？呻x子化基無需位在α及ω碳上，但此等化合物代表本發(fā)明之較佳具體例。
實用名詞上，使用本發(fā)明所形成之微脂粒調配成“前一微脂粒凝膠”于本發(fā)明中稱之為“凝膠”者，其中磷脂及/或脂肪酸混合物可形成微脂粒者與適當濃縮之水化物水溶液混合。此膠體在分散于水溶液中時可自動且有效地形成微脂粒而無須蒸發(fā)溶劑，超聲波照射或任何其他方式以確保適當地形成脂質胞囊，微脂粒。
以水合劑制成之微脂粒較習知之方法所形成之微脂粒更穩(wěn)定(習知方法包括使用有機溶劑及超聲波能量)。具有此等水合劑之微脂粒配方并無現行技術去除溶劑之問題亦無老式方法所存在之超聲波照射不均勻破壞力之問題。
此外，前一微脂粒凝膠可脫水并實質性貯存一段時間而于再度水合時仍可自動形成微脂粒。
前一微脂粒刻膠極為穩(wěn)定，其穩(wěn)定性足以供高壓加熱滅菌。此外，有待包囊之水溶性或水不溶性或水不溶性物質可加入凝膠內，然后在凝膠分散時加入微脂粒內。此種能力大為促進包囊效率。
此外，亦發(fā)現水合劑濃度可在特定PH以一種可以預測方式影響所形成微脂粒之大小。相對應地，改變分散含水溶液之PH而仍保持水合劑常數亦可以可預測之方式影響所形成微脂粒之大小。
如此，本發(fā)明提供一種較過去所用方法更容易，更便利且可預測之控制胞囊大小之方法。此方法對于微脂粒制劑中之脂質濃度并無限制。
發(fā)明概述本發(fā)明系有關一種微脂粒產物，其制法系將如下a，b，c，及d以足夠形成微脂粒之方式分散于水溶液內，該組成包含a.微脂粒形成材料;
b.水合劑，其中該水合劑相對于微脂粒形成材料系以1∶20至1∶0.05之莫耳比而存在;
c.水，其量相對于固體高達300莫耳;及d.可選擇的，有待包囊之物料。
第二方面，本發(fā)明包括一種分散于水溶液中可形成微脂粒之組成，該組成包含a.微脂粒形成材料;
b.水合劑，其中該水合劑相對于微脂粒形成材料系以1∶20至1∶0.05之莫耳比而存在;
c.可選擇之有待包囊之物料;及d.水，相對于固體其量高達300莫耳。
另一方面本發(fā)明系有關形成穩(wěn)定微脂粒之方法，其中該方法包含將水合劑相對于微脂粒形成材料以1∶20及1∶0.05莫耳比而加入微脂粒形成材料內;以足夠形成微脂粒之方式將混合物分散于水溶液內。另外，水合劑，微脂粒形成材料及帶有包囊物質可分別加入水溶液內，然后施加以分散方式而形成微脂粒。
特殊具體例定義對本發(fā)明目的，水合劑意指具有至少兩個可離子化基之化合物，最好其電荷相反，如此則其中一者可形成容易解離之離子鹽，該鹽可與微脂粒形成材之離子官能基絡合。水合劑本質上不會形成微脂粒;此種試劑亦須為生理上可接受的。亦即對于在本發(fā)明使用當中給予受體不會產生不合宜或有害之生理反應。
本文中絡合意指形成可解離之離子鹽，其中一官能基與微脂粒形成材料之離子官能基結合，而另一官能基具親水性質以給予所形成之絡合物水溶性。
水合絡合物指水合劑與微脂粒形成材料中間形成絡合物，因些形成半結晶分子排列。某些特定光譜資料可指出存在有此種絡合物。
水合劑及微脂料形成材料于某特定量水之混合物形成仿凝膠團塊。當此種膠體形成時，水合劑及微脂粒形成材料排列形成“水合絡合物”，此乃具有高次序之液體結晶。雖然液體結晶結構隨PH及水合劑之量而有變化，但仍保有液體結晶結構。NMR光譜證實結晶結構包含多層脂肪雙層及親水層以交替方式疊在一起。31P-NMR光譜展現各向異性峰，進一步證實存在有多層雙層。
“微脂?！币辉~已經被提出并已被接受用于科技希望中以描述合成少層脂質胞囊。此種胞囊通常包含一種或多種天然或合成脂質雙層環(huán)繞于內部之含水相。
“微脂粒形成材料”一詞意指所有天然合成化合物具有一個可離子化官能基及一疏水組分，脂肪組分如磷脂質，非揮發(fā)性脂肪酸，非揮發(fā)性烷基胺等，當它們分散于水容易時單獨或結合形成微脂粒。此定義不限制其范圍而包括過去，現在及未來所有可形成脂肪胞囊之化合物。
微脂粒形成材料之實例包括可皂化及不可皂化脂質，例如醯基某油，磷酸甘油酯，神經鞘脂類，糖脂等。脂肪酸包括飽和或不飽和烷基(C8～C24)羧酸，單烷基(C8～C27)，C4～C10二羧酸酯〔如膽固醇半琥珀酸及胺基酸之脂肪酸衍生物，其中也包括任何N-醯基羧酸(例如N-油醯蘇氨酸，N-亞油醯絲胺酸等)〕;一或二烷基(C8～C24)磺酸酯及一或二烷基(C8～C24)磷酸酯可取代脂肪酸;此外一或二醯基(C8～C24)磷酸之甘油衍生物及一或二醯基(C8～C24)硫酸之甘油衍生物可用以取代脂肪酸。
此外，脂肪酸亦可由飽和或不飽和烷基胺所取代(例如C8～C24NH2)，胺之C8～C24脂肪酸衍生物(如C8～C24CONH-NH2)，氨基酸之C8～C24脂肪醇衍生物(例如C8～C24OOC～NH2)，及胺之C8～C24脂肪酸酯(如C8～C24COO～NH2)。
可光聚合之類脂及/或脂肪酸(或胺)(如二乙炔基脂肪酸)亦可包括在內，其在由光激發(fā)聚合之時可提供具有交聯膜雙層之密封微脂粒。
雖然此等微脂粒之主要組成份為脂，磷脂，其他脂肪酸;但亦可加入各種其他組分以改變微脂粒之滲透性，例如可加入非離子類脂組份，如多氧醇化合物，多甘油基化合物或多元醇之酯，多氧醇亞油酸化醇;多元醇及合成脂之酯，例如糖酯。其他物料如長鏈醇及二醇，固醇，長鏈胺及其四價銨衍生物;多氧乙醯化脂肪胺，長鏈胺醇之酯及其鹽及四價銨衍生物;脂肪醇磷酸酯，多肽及蛋白質之磷酸酯。
微脂粒組合物可由超過一種組分制成，其包含各種類脂，脂肪酸，烷基胺等及水合劑。
亦已發(fā)現類脂組成無須包括脂肪酸(或胺)或水合劑以形成“前一微脂粒凝膠”或微脂粒〔若類脂物本身或有待包囊之物質(如醫(yī)藥，生物活性化合物，化妝品等)具有上述性質即可〕。例如二棕櫚醇磷脂醇膽堿(DPPC)及二硬脂醯磷脂醯乙醇胺之混合物與谷氨酸水溶液形成“前一微脂粒凝膠”或微脂粒;及DPPC與油酸之混合物與腎上腺素水溶液形成“前一微脂粒凝膠”及微脂粒。
然而作為微脂粒藥物輸送系統(tǒng)之藥學用途之磷酯質，油酸(或磷脂醯乙醇胺)及精氨酸或賴氨酸(或谷氨酸及/或天冬酸)之組合物為較佳。
固體系指微脂粒形成材料，水合劑及有待包囊物料。
本發(fā)明較佳水合劑為α氨基酸具有羧酸，胺，胍官能基之ω可離了化取代如下式化合物X-(CH2)n-Y Ⅰ式中X為H2N-C(NH)-NH-，H2N-，ZO3S-，Z2O3P-，或ZO2C-而Z為H或無機或有機陽離子;
Y為-CH(NH2)-CO2H，-NH2，-NH-C(NH)-NH2-COOH，CH(NH2)-SO3Z或ZH(NH2)PO3Z2而其中Z定義如上;及n為整數1-10;或其藥物上可接受的鹽。亦含括于較佳化合物表中者有N，N′-二烷基取代之精氨酸化合物及烷基鏈長可變之類似化合物。
更佳水合劑為ω-取代之α氨基酸，如精胺酸其N-醯基衍生物，高精胺酸，r-氨基丁酸，天門冬酰胺，賴氨酸，鳥氨酸，谷氨酸，天門冬氨酸，或如下式化合物H2NC(NH)-NH-(CH2)n-CH(NH2)COOH ⅡH2N-(CH2)n-CH(NH2)COOH ⅢH2N-(CH2)n-NH2ⅣH2NC(NH)-NH-(CH2)n-NH-CH(NH)-NH2ⅤHOOC-(CH2)n-CH(NH2)COOH ⅥHOOC-(CH2)n-COOH ⅦHO3S-(CH2)n-CH(NH2)COOH ⅧH2O3S-(CH2)n-CH(NH2)COOH ⅨHO3S-(CH2)n-CH(NH2)SO3H ⅩH2O3S-(CH2)n-CH(NH2)PO3H2Ⅺ
式中n為2-4。
最佳化合物為精氨酸，高精氨酸，r-氨基丁酸，賴氨酸，鳥氨酸，谷氨酸或天門冬氨酸。
相對于微脂粒形成材料，約有1∶20莫耳比之水合劑可提供本發(fā)明滿意之功效(其上限約1∶0.05)。水合劑之較佳濃度范圍為水合劑相對于微脂粒形成材料約1∶2至1∶0.5莫耳比。
本發(fā)明水合劑可單獨或呈混合物使用，而并未限制使用此種水合材料之混合物。
如此，實用上，較佳之微脂粒從具有負電荷之微脂粒形成材料制成，較好使用含有至少一個可解離氮之水合劑，例如精氨酸，高精氨酸，賴氨酸，鳥氨酸等。相反地，若兩性物料用以形成微脂粒者系以氮為基礎則較好使用二酸，如谷氨酸，天門冬氨酸;任一種烷基二酸，例如單純二酸如戊二酸，己二酸，辛二酸，癸二酸等;或具有二磷酸根或二硫酸根官能基之該二酸;或具有混合-COOH/-SO3H或-COOH/-PO3H。官能基之該二酸。
本發(fā)明水合劑列于許多化學品生產者之目錄中，可由廠商制造或可用已知方式制造。
精氨酸，高精氨酸，賴氨酸，谷氨酸，天門冬氨酸及其他天然氨基酸可經由水解蛋白質及分離各別氨基酸或可從細菌來源而得。
式Ⅱ化合物可藉Eisele.K.等人，Justuslibigs.Ann.Chem.，P2033(1975)之方法制造。此等化合物若干代表性實例之進一步資料可經由各別化學摘要獲得，其服務編號如下新精氨酸，CAS＃ 14191-90-3;精氨酸，CAS＃ 74-79-3;及高精氨酸，CAS＃ 151-86-5。
式Ⅲ之代表例參見2，4-二氨基丁酸CAS＃ 305-62-4及賴氨酸CAS＃ 56-87-1。
式Ⅳ代表性化合物制法可從化學摘要獲得如下乙二胺，CAS＃ 305-62-4;丙二胺-54618-94-9;及1，4-二氨基丁烷，CAS＃ 52165-57-8。特別參見Johnson，T.B.，J.Am.Chem.Soc.38，1854(1916)。
式Ⅵ化合物中谷氨酸為技藝所熟知，可得自許多商業(yè)來源。如何制造其他代表性化合物含于文獻當中，例如2-氨基己二酸-CAS＃ 62787-49-9及二氨基庚二酸-CAS＃ 32224-51-0。
谷氨酸，n為2之式Ⅶ化合物為技藝所熟知，可藉Maryel及Tuley，Org.Syn.5，69(1925)之方法制造。其它代表性化合物可根據技藝參考如下CAS編號而制造己二酸，CAS＃ 123-04-9及庚二酸，CAS＃ 110-16-0。
高半胱胺酸在技藝中已知為CAS＃ 56892-03-6?；衔?-硫纈氨酸在文獻中稱之為CAS＃ 23405-34-2。
前一微脂粒凝膠微脂粒形成材料與一種或多種含有至最多300莫耳水(相對于總微脂粒形成材料)水合劑之混合物可形成一種膠體，其在加入水溶液內時直接形成微脂粒。此膠體標為前一微脂粒凝膠之原因有(ⅰ)其結構特征主要為微脂粒;及(ⅱ)膠體以水溶液稀釋時容易轉為微脂粒。超過約300莫耳水溶液可使微脂粒開始形成。
此膠體結構為有高度秩序之液體結晶，形成光學透明溶液。液體結晶之X，Y及Z維度在特定PH隨著水合劑濃度而變化，亦隨著溶液之PH而變化。經由在特定PH改變水合劑濃度或改變PH而保持水合劑百分率可控制所形成微脂粒胞囊脂類雙層之多層結構尺寸及數目。
膠體結構本身可容納約300莫耳水/每莫耳脂質或脂肪酸而未干擾膠體結構之穩(wěn)定性。膠體結構由質子NMR光譜測定，包含多層脂質雙層及親水層以交替方式堆疊在一起。相同膠體之P-NMR光譜展現各向異性峰，進一步證實此膠體包含多層雙層。
此膠體可藉高壓蒸氣滅菌，此為一種便利之滅菌方式。此外，膠體不會褪色且在室溫保持透明至少一年(在高壓蒸氣滅菌之后)。膠體進一步可通過滅菌濾器以過濾滅菌。
在膠體分散入水溶液時微脂粒可有效地自動產生。
前一微脂粒凝膠(含或不含有待包囊之物料)亦可脫水(凍干)并將粉末重新水合而得微脂粒，甚至在長期貯存后亦如此;此種能力使得本發(fā)明特別可用于需要長期貯存之水敏感性藥物。
水不溶性或水溶性藥物，化學品，化妝品，食品等可摻入使用此種物料及經由此種方法制成之微脂粒內。如此，膠體可用做經由口服，腸胃外，靜脈注射，局部的，栓劑途徑或任何其他藥物或化學品輸送途徑給予藥物之輸送系統(tǒng)。
此類微脂粒之使用不限于人類或哺乳動物，亦可用于任何工業(yè)，農業(yè)，藥物，化妝品或化學品用途等需要使用脂質空胞包囊及給予化合物或物料之處。
本發(fā)明之多樣性由如下實例予以例示而非用以限制之。
實例＃1微脂粒(膠相)之制備二棕櫚醯基磷脂醯基膽堿3.0g放入50ml燒杯內，加入油酸1.2g混合而形成均勻糊狀。
精氨酸0.72g于30ml蒸餾去離子水加入二棕櫚醯基磷脂醯基膽堿-油酸糊內加熱至45℃，以手混合使混合物形成澄清安定之膠。此膠貯存后將膠體以磷酸鹽緩沖之食鹽水稀釋而形成微脂粒。
實例＃2微脂粒之制備二棕櫚醯基磷脂醯基膽堿120mg與24mg油酸混合在一起且徹底混合至觀察得白色均勻糊為止。
然后20mg精氨酸溶解在60ml磷酸鹽緩沖鹽水內(離子強度＝0.15，PH＝7.4)。精氨酸-鹽水溶液加入糊內并加熱至40℃經歷1/2小時，或至觀察得略為混濁之溶液為止。
實例＃3大規(guī)模膠體及微脂粒之制備(ⅰ)膠體之制造50g烷磷脂粉末類別20(朝日化學品)中加入20g油酸(N.F.)。混合而得白色糊，冷卻至4℃并碾成細粉。此粉未加入含有20g精氨酸及500g去離子蒸餾水之水溶液內?；旌衔镆运幊谆旌希瑫r溶液加熱至約35℃以輔助水合磷脂形成均勻而略呈黃色之凝膠。此凝膠貯存于4℃或可冷凍后重新調制。
(ⅱ)微脂粒之制造前段制成之膠體自冷貯存處取出，回到室溫，然后與21磷酸鹽緩沖鹽水(PH7.4)混合而形成白色不透明微脂粒溶液。
實例＃4從膠體形成微脂粒形成均勻糊包含1.0g二棕櫚?；字祷憠A(DPPC)及400mg油酸。然后300mg精氨酸混入10ml磷酸鹽緩沖鹽水內，加熱至45℃并加入DPPC/油酸糊內，形成微脂粒。
實例＃5前微脂粒凝膠1g二棕櫚醯基磷脂醯基膽堿(DPPC)與400mg油酸混合而形成均勻糊。300mg精氨酸與2ml水于45℃混合至溶解為止。精氨酸溶液與DPPC/油酸糊在約45℃混合而得稠厚之膠。此膠以磷酸鹽緩沖鹽水稀釋之時形成微脂粒。
實例＃6含膽醇15mg與100mg二棕櫚醯基磷脂醯基膽堿(DPPC)混合形成均勻粉末。然后23mg油酸加入至粉末中并徹底混合至形成均勻糊。欲制后微脂粒可將30mg精氨酸加入至10ml磷酸鹽緩沖鹽水內，加熱至40℃并加入至DPPC/膽固醇/油酸糊內。此組合于40℃混合而得微脂粒。
實例＃7含棕櫚酸之微脂粒二棕櫚醯基磷脂醯基膽堿(DPPC)250mg與25mg棕櫚酸混合而得均勻粉末。然后80mg油酸與此粉末混合并恒定攪拌加熱至45℃，獲得均勻糊為止。精氨酸100mg溶解于25ml去離子蒸餾水中并加熱至45℃。此精氨酸溶液于45℃加入糊內并混合至形成均勻膠體為止。膠體以磷酸鹽緩沖鹽水稀釋十倍而形成微脂粒。
實例＃8含異硬脂酸之微脂粒二棕櫚醯基磷脂醯基膽堿100mg與50mg異硬脂酸混合形成均勻糊。50mg精氨酸與2.0ml去離子蒸餾水精氨酸溶液經制備加入異硬脂酸糊內并加熱至45℃?；旌衔锘旌现列纬赏该髂z體為止。以磷酸鹽緩沖鹽水烯釋之時形成微脂粒。
實例＃9含油醯基蘇氨酸之微脂粒二棕櫚醯基磷脂醯基膽堿125mg與75mg油醯基蘇氨酸混合在一起并加熱至40℃而形成糊。然后于40℃恒定混合加2ml去離子蒸餾水形成透明膠體。透明膠體可以PH5之磷酸鹽緩沖鹽水烯釋而形成微脂粒。
實例＃10含肉豆蔻醯胺之微脂粒二棕櫚醯基磷脂醯基膽堿192mg加入至72mg肉豆蔻醯胺內并以恒定混合至形成均勻糊為止。谷氨酸65mg于5ml去離子蒸餾水可入糊內并加熱至形成體體為止。加入磷酸鹽緩沖鹽水至膠體內而形成微脂粒。
實例＃11含DLOPC之微脂粒二月桂醯基磷脂醯基膽堿(DLPC)50mg與20mg油酸混合而形成均勻糊。將精氨酸20mg加入至10ml磷酸鹽緩沖鹽水內，加入糊內并以手混合至形成混濁微脂粒溶液為止。
實例＃12磷脂醯基乙醇胺-谷氨酸微脂粒L-谷氨酸32mg溶解于2.0ml去離子蒸餾水內并以1.0N氫氧化鈉調整其PH至5.2。此溶液加熱至60℃并加入100mg磷脂醯基乙醇胺;溶液以恒定混合保持于60至觀察但均勻黏性膠為止。
磷脂醯基乙醇胺-谷氨酸膠以磷酸鹽緩沖鹽水稀釋1∶10。類似胞囊之結構在對照光學顯微鏡之下可觀察得。
實例＃13二特戊醯基腎上腺素微脂粒1g二棕櫚醯基磷脂醯基膽堿與396mg油酸混合至形成均勻糊為止。然后400mg精氨酸于20ml去離子蒸餾水加入而形成前一胞囊澄清膠體。
欲制造微脂?？蓪?42mg二特戊?；I上腺素溶解于10ml去離子蒸餾水。然后5g前-胞囊膠與5g二特戊醯基腎上腺素溶液混合后，再加入50ml磷酸鹽緩沖鹽水而形成微脂粒溶液。
實例＃14氟畢樸芬(Flurbiprofen)微脂粒欲制造此種微脂?？蓪?80mg二棕櫚醯基磷酸醯基膽堿，370mg油酸及320mg氟畢樸芬(Flurbiprofen)(游離酸)混合至觀察得均勻糊為止。然后510mg精氨酸于10ml純水加入糊內以恒定攪拌加熱至41℃經歷30分鐘而形成透明前-胞囊膠，其中5g引進50ml磷酸鹽緩沖鹽水內并以攪棒混合至觀察得藍色透明溶液為止。
實例＃15左布諾羅(Levobunolol)微脂粒30mg二棕櫚醯基磷脂醯基膽堿及15mg膽固醇稱量加入4ml小瓶內，加入10mg亞麻油酸混合而形成均勻糊。將2ml 1%含10mg精氨酸之左布諾羅(Levobunolol)水溶液加入糊內并混合。然后加入10ml磷酸鹽緩沖溶液并加入至45℃而形成微脂粒。
實例＃16毛果蕓香微脂粒120mg二棕櫚醯基磷脂醯基膽堿內加入40mg油酸而形成均勻糊。40mg毛果蕓香堿游離堿加入10ml去離子蒸餾水內，此溶液加入糊內并加熱至45℃而形成一微脂粒膠。所形成之膠以20ml磷酸鹽緩沖鹽水稀釋而形成微脂粒。
實例＃17腎上腺素微脂粒二棕櫚醯基磷脂醯基膽堿250mg與100mg油酸混合而形成均勻糊。50mg腎上腺素(游離)溶解于5.0ml去離子蒸餾水內，加熱至40℃并加入二棕櫚醯基磷酸醯基膽堿/油酸糊內。溶液混合至觀察得均勻黏稠霜狀膠為止。此凝膠以磷酸鹽緩沖鹽水(PH7.22)稀釋而形成微脂粒。
實例＃18精氨酸濃度對微脂粒大小之影響502mg二棕櫚醯基磷酸醯基膽堿(DPPC)中加入10微升(2-棕櫚?；?1-14C)(0.1m Ci/ml)二棕櫚醯基磷酸醯基膽堿。加入氯仿以便完全混合放射活性，然后蒸發(fā)。油酸(OA)195mg于其后混合入脂質中而形成糊。將5ml含119mg精氨酸之蒸餾水加入糊內并于45℃混合至形成透明膠。
1g膠體稱入四個不同小瓶內并將精氨酸如下加入
樣品組成樣品ID DPPC∶OA∶Arg小瓶1+1ml水 (1∶1∶1)小瓶2+1ml of 50mg/ml Arg于H2O (1∶1∶3)小瓶3+1ml of 84mg/ml Arg于H2O (1∶1∶5)小瓶4+1ml of 192mg/ml Arg于H2O (1∶1∶10)0.5g各種溶液釋入PH7.8之50ml磷酸鹽緩沖鹽水內。
估計之重量直徑從西法希(Sephracyl)S-1000管柱層析分析獲得，(采用14C同位素標記DPPC)。其影響列于下表。
表Ⅱ精氨酸濃度對胞囊大小之影響系統(tǒng) pH 估計重量直徑(nm)DPPC∶OA∶Arg(1∶1∶1) 7.8 ～220DPPC∶OA∶Arg(1∶1∶3) 7.8 ～140DPPC∶OA∶Arg(1∶1∶5) 7.8 ～90DPPC∶OA∶Arg(1∶1∶10) 7.8 ～20實例＃19pH對胞囊大小之影響此外，胞囊大小可經由改變緩沖水溶液之pH而改變。
100mg二棕櫚醯基磷酸醯基膽堿(DPPC)內加入25微升(2-棕櫚醯基-1-14C)(0.1mCi/ml)二棕櫚醯基磷脂醯基膽堿。加入氯仿以完全混合放射活性，然后蒸發(fā)。油酸(OA)40.1mg于其后混合入類脂內形成糊。1ml含24mg/ml精氨酸于水之溶液加入類脂混合物內并于45℃混合而形成澄清膠體。
兩份100mg膠體稀釋于pH9.0及7.4之10ml磷酸鹽緩沖液內。
再度從西法希(Sephracyl)S-1000管柱層析分析獲得估計之重量直徑(A)(采用 C-同位素標記二棕櫚醯基磷酸醯基膽堿)。結果列于下表。
表ⅢpH對胞囊大小之影響估計重量系統(tǒng) pH 直徑(nm)DPPC∶OA∶Arg(1∶1∶1) 7.4 ～＞300DPPC∶OA∶Arg(1∶1∶1) 7.8 ～200DPPC∶OA∶Arg(1∶1∶1) 7.8 ～25.4如此，則可藉改變精氨酸濃度或含水緩沖液之pH而制得合意大小之微脂粒胞囊。
實例＃20微脂粒安定性從加熱滅菌之前-微脂粒膠可制得無菌微脂粒。另外，微脂粒膠或微脂?？山浻蛇m當滅菌濾器而過濾滅菌。
從pH8.0DPPC∶OA∶Arg(1∶1∶2)制得之微脂粒經熱滅菌貯存于室溫約一年(未加入抗微生物劑及抗氧化劑)而未觀察得微生物生長，褪色及沉淀。貯存一年之微脂粒做電子顯微鏡檢查呈陰性染色反應，此乃顯示微脂粒胞囊穩(wěn)定。
實例＃21使用包囊有14C-蔗糖之DPPC∶OA∶Arg(1∶1∶1)微脂粒系統(tǒng)在含水磷酸鹽緩沖溶液于pH7.8測定包囊蔗糖之潛伏期。結果列入表Ⅳ。
表Ⅳ%蔗糖潛伏日 %潛伏0 1001 97.43 93.47 91.4如此可見本微脂粒系統(tǒng)對藥物之輸送具有卓越之潛伏作用。
實例＃22包囊之效率多種藥物以10mg/ml DPPC∶油酸∶Arg(1∶1∶1)微脂粒包囊以例示藥物包囊用做藥物輸送系統(tǒng)。結果列入表Ⅴ。
表Ⅴ藥物之捕集藥物 pH %捕集氟畢樸芬(Flurbiprofen) 7.8PBs 90%二特戊醯基腎上腺素 7.1PBs 80%實例＃23凍干微脂粒油酸30.0g及7.5g膽固醇(U.S.P.)熔合在一起。然后75.0g磷酸型20粉末(朝日化學品公司)與油酸/膽固醇混合物混合至形成均勻糊。
然后15.0g精氨酸(游離堿)溶解于183g去離子蒸餾水中。此精氨酸溶液與類脂糊緩慢混合而形成均勻膠并使用5.0N HCl調整其pH至7.4。
10.0g此種前一微脂粒凝膠轉移入10ml之小瓶內并凍干。所形成之粉末以5ml磷酸鹽緩沖鹽水稀釋形成微脂粒。
實例＃24酸穩(wěn)定之微脂粒制劑采用本發(fā)明酸穩(wěn)定微脂粒之一例例示為以如下物料制成之微脂?！枚仓祷字祷憠A，二棕櫚醯基磷脂醯基膽堿，油酸，精氨酸及膽固醇。此等物料以1∶2∶2∶2∶0.2之莫耳比合并如下膽固醇20mg與144mg油酸混合并處理至40℃;DSPC 200mg及400mg DPPC加入并于40℃混合，混合物攪拌至形成均勻糊為止。
精氨酸88mg溶解于1.15g去離子蒸餾水中。此精氨酸溶液加入類脂糊內，并于45℃混合至形成均勻前一微脂粒膠為止。使用0.1NHCl調整此凝膠之pH至各種pH。膠體以0.9% NaCl稀釋10倍而形成胞囊。
在pH4.4之微脂粒穩(wěn)定性時間/日數 大小/(Nm×10)0 1.0243 1.1367 1.12權利要求
1.一種微脂粒組成，其制法系以足夠形成微脂粒之方式分散于水溶液內a.微脂粒形成材料；b.一種水合劑，其中該水合劑相對于微脂粒形成材料系以1∶20至1∶0.05之莫耳比而存在者；及c.有待包囊之物料。
2.根據權利要求
1所述之組成，其中該水合劑為α氨基酸具有羧酸，胺，胍官能基之ω取代或其藥物上可接受的鹽或如下式化合物X-(CH2)n-Y Ⅰ式中X為H2N-C(NH)-NH-，H2N-，ZO3S-，Z2O3P-，或ZO2C-而Z為H或無機或有機陽離子;Y為-CH(NH2)-CO2H，-NH2，-NH-C(NH)-NH2-COOH，CH(NH2)SO3Z或ZH(NH2)POZ而其中Z定義如上;及n為整數1-10;或其藥物上可接受的鹽。
3.根據權利要求
2所述之組成，其中該水合劑存在量相對于微脂粒形成材料為1∶2至1∶0.5莫耳比。
4.根據權利要求
3所述之組成，其中該水合劑為精氨酸，高精氨酸，或其N-酰基衍生物，r-胺基丁酸，天冬酰胺，賴氨酸，鳥氨酸，谷氨酸，天門冬氨酸，或如下式化合物H2NC(NH)-NH-(CH2)n-CH(NH2)COOH ⅡH2N-(CH2)n-CH(NH2)COOH ⅢH2N-(CH2)n-NH2ⅣH2NC(NH)-NH-(CH2)n-NH-CH(NH)-NH2ⅤHOOC-(CH2)n-CH(NH2)COOH ⅥHOOC-(CH2)n-COOH ⅦHO3S-(CH2)n-CH(NH2)COOH ⅧH2O3S-(CH2)n-CH(NH2)COOH ⅨHO3S-(CH2)n-CH(NH2)SO3H Ⅹ或式中n為2-4 H2O3S-(CH2)n-CH(NH2)PO3H2Ⅺ或其藥物上可接受的鹽。
5.根據權利要求
4所述產品，其中該水合劑為精氨酸，高精氨酸，r-氨基丁酸，賴氨酸，或鳥氨酸，或其藥物上可接受的鹽。
6.根據權利要求
5所述之組成，其中該水合劑為谷氨酸或天門冬氨酸或其藥物上可接受的鹽。
7.一種分散于水溶液中可形成微脂粒之組成及所制成之微脂粒，該組成包括a.微脂粒形成材料;b.水合劑，其中該水合劑相對于微脂粒形成材料系以1∶20至1∶0.05之莫耳比而存在者;c.可選擇之有待包囊之物料;及d.水，相對于固體其量高達300莫耳。
8.根據權利要求
7所述之組成，其中該水合劑為α氨基酸具有羧酸，胺，胍官能之ω取代或其藥物上可接受的鹽或如下式化合物X-(CH2)n-Y Ⅰ式中X為H2N-C(NH)-NH-，H2N-，ZO3S-，Z2O3P-，或ZO2C-而Z為H或無機或有機陽離子;Y為-CH(NH2)-CO2H，-NH2，-NH-C(NH)-NH2-COOH，CH(NH2)SO3Z或ZH(NH2)PO3Z2而其中Z定義如上;及n為整數1-10;或其藥物上可接受的鹽。
9.根據權利要求
8所述之組成，其中該水合劑為精氨酸，高精氨酸，或其N-醯基衍生物，r-氨基丁酸，天冬酰胺，賴氨酸，鳥氨酸，谷氨酸，天門冬氨酸，或如下式化合物H2NC(NH)-NH-(CH2)n-CH(NH2)COOH ⅡH2N-(CH2)n-CH(NH2)COOH ⅢH2N-(CH2)n-NH2ⅣH2NC(NH)-NH-(CH2)n-NH-CH(NH)-NH2ⅤHOOC-(CH2)n-CH(NH2)COOH ⅥHOOC-(CH2)n-COOH ⅦHO3S-(CH2)n-CH(NH2)COOH ⅧH2O3S-(CH2)n-CH(NH2)COOH ⅨHO3S-(CH2)n-CH(NH2)SO3H Ⅹ或H2O3S-(CH2)n-CH(NH2)PO3H2Ⅺ式中n為2-4或其藥物上可接受的鹽。
10.根據權利要求
2所述的組成，其中該水合劑存在量相對于微脂粒形成材料為1∶2至1∶0.5莫耳比。
11.根據權利要求
10所述的組成，其中該水合劑為精氨酸，高精氨酸，r-氨基丁酸，賴氨酸，或鳥氨酸，或其藥物上可接受的鹽。
12.根據權利要求
10所述的組成，其中該水合劑為谷氨酸或天門冬氨酸或其藥物上可接受的鹽。
13.一種形成穩(wěn)定之微脂粒之方法，其中包括在微脂粒形成材料分散于水溶液之前或之時，于其中加入一種水合劑，該水合劑量相對于微脂粒形成材料為1∶20至1∶0.05莫耳比。
專利摘要
水合劑，如精氨酸或谷氨酸與微脂粒形成材料混合可得前一微脂粒凝膠，于水溶液中自動形成高度穩(wěn)定性微脂粒并具有極高捕集效率。
文檔編號A61K8/30GK86104874SQ86104874
公開日1987年2月4日 申請日期1986年8月7日
發(fā)明者約翰·Y·帕克, 舒爾·A·湯普森 申請人:阿勒根藥品公司導出引文BiBTeX, EndNote, RefMan