專利名稱:延長生長促進激素的釋放的制作方法
大量與動物服用生長激素相關(guān)的問題是所需要處理的次數(shù)問題，因而造成所需付出的勞動成本不斷增長的結(jié)果。另外，供人類食用的動物，特別是如牛和羊等反類動物，都是在進行催膘飼養(yǎng)之前，在相當長的時間內(nèi)是放牧飼養(yǎng)的。因此，導致通過注射服用激素顯現(xiàn)其有可行性，從經(jīng)濟觀點上來看也是不實際的。
在美國專利第4，333，919號中公開過一已知受控釋放配方。該配方包含把生長激素與從基本上不含聚合反應(yīng)催化劑的乳酸羥基乙酸衍生的共聚物混合。在此參考資料中公開的生長促進激素的實例包括聚酯如莫能菌素(monensin)、鹽霉素(salinomycin)、拉沙里菌素(lasalocid)及相關(guān)的化合物。這些生長促進劑通過改變在動物的瘤胃中的食物的崩潰而起作用。因此，這些藥劑須投置于動物的瘤胃或蜂窩瘤胃方為有效。證實這些生長促進藥劑在促進生長方面是有效的，同時，往往需要給反動物服用具生理活性肽組合物，例如可進一步促進動物生長的激素。
遺憾的是，從來未知這些生長促進激素是屬于導入動物的腸道內(nèi)的受控釋放配方或傳送系統(tǒng)。因此，有要求提供給反類動物或其他動物用，能延長生長促進激素的釋放的生長促進配方的需要是存在的。
本發(fā)明涉及供給動物用的延長生長激素的釋放的生長促進配方。更具體說涉及關(guān)于生長促進配方，包含把油賦形劑與生長促進激素的過渡金屬混合。生長激素的金屬絡(luò)合物較其以自由形式的生長激素本身的溶解度為低，因而在注射到動物體內(nèi)就會有較慢的釋放速度。
本發(fā)明提供的生長促進配方包含電賦形劑和有效量的生長促進激素的金屬絡(luò)合物。這配方容許在服用所述配方后可以在延長期內(nèi)向動物傳送有效劑量的生長促進劑。本發(fā)明的配方包含各種生長促進激素的過渡金屬絡(luò)合物。適宜的生長促進激素包括具生理活性多肽組合物，例如人類、牛類、馬類、羊類、鳥類和豬類的生長促進激素。
本發(fā)明中所用的生長激素可用各種動物的腦下重體腺通過用提取法而后用濃縮技術(shù)而獲取。用再生DNA方法生產(chǎn)的生長激素也是適宜的。已知有適宜于本發(fā)明的各種激素的氨基酸順序。例如在“化學技術(shù)百科全書”第三版、第十二集、第549-552頁，Kirk、Othmer出版社，C.H.Li敘述的論文中的人類生長促進激素的氨基酸順序。在“核酸研究”第10期7197頁(1982)R.P.Woyc-hik敘述的論文中的牛類生長激素的氨基酸順序。在“生物化學和生物物理學公報”156期493-508頁(1973)C.H劉等人敘述的論文中的羊類的生長激素的氨基酸順序。在“脫氧核糖核酸(DNA)”第2期37.45頁(1983)P.H.Seeburg等人敘述的論文中的豬類的生長激素的氨基酸順序。上述敘述氨基酸順序的參考資料以它們的整體內(nèi)容結(jié)合到本發(fā)明而作為參考資料。除上述外，可通過從氧基酸的氨基末端刪去直至12個氨基酸殘基也可制造已改進生長激素的過渡金屬絡(luò)合物。
各種過渡金屬均可與生長促進激素進行絡(luò)合反應(yīng)。這種金屬包括有鋅、銅、錳、鈷、鐵及其同類，以鋅為最好。這些金屬絡(luò)合化通常是通過將生長促進激素和所述金屬的水溶性形式在水溶液中進行混合而形成。該水溶性化合物包括有該金屬的醋酸鹽、硫酸鹽、溴化物、甲酸鹽、乳酸鹽、丙酸鹽、氯化物及其同類。一般說來，依賴于具體的生長促進激素而定，但每摩爾生長激素至少須有1摩爾、最好2摩爾或更多摩爾的過渡金屬可供與該激素進行絡(luò)合化反應(yīng)。
生長促進激素的金屬絡(luò)合物是分散在增稠的油賦形劑中。如本專業(yè)的熟練技術(shù)人員所了解的，所述的油賦形劑必須是生物可容性。該油賦形劑提供傳送金屬激素絡(luò)合物的載體同時動物服用后可抑制住由動物的體液中可能獲取的各種絡(luò)合物。能提供給本發(fā)明載體的油類有礦物油及包括下列但不為其所限定的諸如花生油、芝麻籽油及黃豆油等植物油。由于生長激素的金屬絡(luò)合物通常為固體，因此須有充分數(shù)量的油以便把配方注射或通過如植入動物體內(nèi)。通常油的量是由約90%至約99%該增稠油賦形劑的重量。而且以包含從約95%至約98%總配方的重量為最好。
除了油之外，亦可加入各種已知輔助劑或者賦形劑以便進一步延長絡(luò)合著金屬的生長激素的釋放率。這種輔助劑包括蜂蠟、單硬酯酸鋁、巴西扇棕、石蠟及其同類。這些附加物的數(shù)量，通常以總配方重量的約1%至約10%。上述輔助劑的存在以總配方的重量剃以約2%至約5%最好。特別好的增稠油賦形劑包括花生油和單硬酯酸鋁的混合物和黃豆油和蜂蠟的混合物。
本發(fā)明提供的特別好的配方包括對實現(xiàn)促進反類動物或其他動物的生長的非常有用的可被生物降解的劑量形式，它包含按重量計從約50%至0.01%，最好為從約30%至約0.10%的鋅絡(luò)合的生長激素，該激素密切地分散在整個增稠油賦形劑中，該油賦劑包含按重量計從約90%至約99%的花生油和按重量計從約1%至約10%的單硬酯酸鋁。
本發(fā)明還提供連續(xù)地實現(xiàn)促進動物的生長的方法，該方法包括給動物服用有效數(shù)量的延長釋放配方。該配方由按重量計從約0.1%至約30%的過渡金屬絡(luò)合生長促進素與按重量計從約70%至約99.9%的增稠油賦形劑混合而成的而所述增稠油賦形劑則包含按重量計從約90%至約99%的植物油與按重量計從約1%至約10%的蜂蠟或單硬酯酸鋁。按照本發(fā)明的方法，在動物服用所述配方后，動物可在一段延長的時間內(nèi)接受連續(xù)有效劑量的生長促進激素。按照本發(fā)明的最好方法包括給動物服用有效量的配方，該配方包括按重量計從約10%至約0.5%的金屬絡(luò)合的生長促進激素與按重量計從約90%至約99.5%的增稠油賦劑混合。該增稠油賦形劑為包含按重量計從約95%至約98%的植物油與按重量計從約5%至約2%的蜂蠟或單硬酯酸鋁的混合物所組成。
該生長促進配方可用若干方法服用。一個方法為注射。另一方法是借助植入藥物的器械進行服用。已知有若干植入藥物的器械可使用本發(fā)明的配方。植入藥物的器械通常包含一泵或型片，通過它將貯液器中藥物導入周圍的組織中。當服用的方法是借助植入傳送器械時，可選擇除去使用油而只簡單地使用過渡金屬絡(luò)合物。其他固體藥物劑如前所述的賦形劑或輔助劑是可任意選擇使用的。在這種情況下，過渡金屬絡(luò)合物的數(shù)量范圍按重量計為固體生長促進配方的約50%至99.9%，而最好的范圍為從約50%至80%。
下面提供說明本發(fā)明實例，但在任何情況下，不是也不可解釋成為對本發(fā)明的限制。
實例1生產(chǎn)豬類的生長激素一鋅絡(luò)合物。
在500毫升埃倫逐厄氏(Erlenmeyev)燒瓶中放置500毫克豬類生長激素(巴勞(Parlow)4640-c)和400毫升0.075N氯化鈿溶液其PH已調(diào)整至7.在室溫下將所述混合物攪拌24小時(磁攪拌器)，而后以9000轉(zhuǎn)/分的離心機離心旋轉(zhuǎn)20分鐘以分離小量不溶物質(zhì)。將上清液從不溶物質(zhì)(干燥后為60毫克)傾析，而后通過0.2薄膜濾器消毒之。
將該豬生長激素溶液放置于500毫升血清瓶中，并在磁攪拌條件下將20毫升無菌0.01M醋酸鋅滴加，將混合物攪拌15分鐘，以及用0.1N氫氧化鈉調(diào)整PH至達7.4。將沉積物和溶液等分的轉(zhuǎn)移到兩個250毫升的離心瓶中并存放在溫度為5℃的冰箱中過夜。將離心瓶中的物體再用轉(zhuǎn)速為9000轉(zhuǎn)分的離心機旋轉(zhuǎn)離心20分鐘，再把上清液傾析。把上清液分成兩等份各裝入500毫升的消血毒清瓶，殼層冷凍，并冷凍干燥兩天得2.34克產(chǎn)品。將沉淀的鋅絡(luò)合的生長激素(ZnpGH)淤漿化在100毫升消毒的去離子水中，用9000轉(zhuǎn)/分的離心機旋轉(zhuǎn)離心20分鐘，并從上清液中分離出來。將上液冷凍干燥得36.5毫克物質(zhì)。把已洗滌的Zn PGH在室溫條件下真空干燥給出0.290g產(chǎn)品。在Zn PGH中每摩爾PGH含有2.35摩爾鋅，并發(fā)現(xiàn)與在hypox率生長測定中未絡(luò)合化的豬類生長激素同樣有活性。將所獲2.34克鹽溶解在10毫升的水中并用離心機離心。將所獲得的上清液傾析，將沉淀物真空干燥，獲得240毫克的固體。將各種分離出的固體用生物放射試驗方法進行蛋白質(zhì)分析，而用AA(原子吸收光譜)來分析鋅含量。其結(jié)果列于表1中。
表1分離出固體Zn PGH制品的成分餾分說明 蛋白質(zhì)重量 鋅 平均重量增益(生物放射) (%) 速度生長測定290毫克Zn PGH 305.95±36.6 6998 21.236.5毫克從Zn PGH洗滌 9.22±3.87 2.84 22.7240毫克從濃縮上清液 40.56±27 0.8674 11.9(無活性)實例2p GH-銅絡(luò)合物在磁攪拌的50毫升離心管中放置50毫克PGH(巴勞(p arl-oW)4640-C)及40毫升0.075M氯化鉀該混合物在室溫下攪拌24小時，而后用9000轉(zhuǎn)/分旋轉(zhuǎn)離心20分鐘。上清液從不溶物(干燥后13.5毫克)中傾析、并將之與2毫升的0.01M醋酸銅。將反應(yīng)混合物存放在5℃的冰箱中過夜，并用離心機分離銅的絡(luò)合物。將絡(luò)合物用10毫升水洗滌并在室溫下真空干燥，產(chǎn)生27.8毫克銅-豬類生長激素絡(luò)合物(CupPH)。借助AA測出CupGH中含有0.6043%銅，在速率生長測定中證實與未絡(luò)合的p GH一樣有活性，并借助生物放射測出含61.7%蛋白質(zhì)。
實例3用消毒的珀金斯-艾爾末(Perkin-Elmer)溴化鉀藥丸壓制機在5000-6000磅壓力下將ZnpGH(264毫克)壓進1/2英寸藥丸中。把藥丸用消毒的研缽和槌搗碎成粉末，并用消毒的60-目篩節(jié)，產(chǎn)出202毫克細白色鋅絡(luò)合物。
在125毫升血清瓶中裝進5克Mallin Ckrodt N.F.單硬酯酸鋁和100毫升p lanter′s花生油(91.6克)。在熱盤上用磁攪拌把混合物加熱至150℃。并組持2小時。冷卻至室溫后，凝膠化的花生油用軟膏刀攪拌，并把25毫升(22.34克)的混合物轉(zhuǎn)送到50毫升的燒杯中。然后將200毫克60-目ZnpGH加到該花生油中，用3片SS-攪拌器以750轉(zhuǎn)分攪拌所得上述混合物直至獲得均勻懸浮液(15分鐘)將一部分(5毫升)懸浮體抽進4個消毒的5毫升可隨意使用的注射器中。將注射器存放在冷卻設(shè)備里直至第2天。
實驗4動物研究為證實本發(fā)明的配方的延長釋放，4只重量各為120磅的閹豬注射5毫升按實例3中所述步驟制備的配方液。每個配方包含40毫升的鋅絡(luò)合的豬類生長激素。所述5毫升的配方是皮下注射到各豬的頸部。由豬的頸靜脈抽取血樣，并借助放射免疫測定法(RIA)分析其中生長的激素。在注射生長激素前已抽取血樣供內(nèi)部對照之用。表2列出根據(jù)抽血日期進行放射免疫測定的結(jié)果。
表2豬中生長激素的血液濃度(毫微克/毫升)皮下注射ZnpGH配方后1號豬 2號豬 3號豬 4號豬 (p GH)注射前 -1 3.8 1.2 2.5 5.8 7.6±2.15注射前 0 1.2 4.0 3.0 7.2 8.1±1.7注射后 1 45.8 45.0 34.7 34.4 128±33.1注射后 5 20.6 7.2 7.8 9.1 18.8±7.7注射后 7 9.4 5.2 6.3 6.6 12.5±2.1注射后 9 7.5 5.3 8.6 10.8 13.9±2.0實例5下列實例證實在給豬服用生長激素(p GH)后三個不同貯放系統(tǒng)的有效性。在服用各種配方之前，讓九只閹豬適應(yīng)圈養(yǎng)的條件，并使用列于下表的豬食料。
表3飼料成分項目 g磨粉黃粟米 73.5黃豆飼料-44% 23.5磷酸二鈣 1.2石灰粉 0.8鹽 0.5Dawes維生素預混料 0.5100.0計算成分(以-飼喂為基)
粗蛋白質(zhì) 16.8鈣 0.62磷 0.54為比較一種金屬絡(luò)合的生長激素的有效性，使用了三個不同配方。配方1包含花生油及5%(重量/體積)單硬酯酸鋁并含有8毫克/毫升的未絡(luò)合的收巴勞(Parlow)豬類生長激素(批AFP-S324 C)的混合物。配方2包含黃豆油及4.5%(重量/體積)蜂蠟并含有8毫克/毫升的未絡(luò)合的巴勞(Parlow)豬類生長激素(批AFP-S324 C)的混合物。配方3包含花生油及5%(重量/體積)單硬酯酸鋁并含有8毫克/毫升ZnpGH的混合物。
兩只豬在耳基處皮下注射5毫升化合物1。三只豬只以同樣方式注射化合物2。四只豬也以同樣方式注射化合物3。
定期地從各動物的前大靜脈抽取20毫升血液。把血清樣分離，并進行血清生長激素、血清尿氮(BUN)分析。
血液測定結(jié)果列于表4及表5中。
表4在豬中BUN，p GH及葡萄糖濃度在花生油單硬酯酸鋁或黃豆油蜂蠟中服用非絡(luò)合的p GH平均值化合物1 化合物2p GH/花生 標準偏差 黃豆油 標準偏差油單硬酯酸鋁 蜂蠟血清尿素氮(毫克/毫升)0小時 11.41 (0.54) 13.33 (0.50)3小時 13.49 (1.39) 14.46 (0.50)6小時 11.79 (0.24) 13.21 (0.48)
24小時 4.33 (0.76) 5.63 (0.56)2天 6.54 (1.18) 10.18 (2.03)3天 7.55 (0.84) 9.45 (1.29)7天 11.90 (0.73) 12.23 (0.86)10天 9.69 (0.37) 10.16 (1.34)15天 10.19 (1.16) 10.76 (0.68)血清葡萄糖(毫克/毫升)0小時 65.99 (12.39) 76.06 (9.52)3小時 99.08 (3.03) 96.55 (6.89)6小時 118.09 (13.60) 105.09 (6.74)24小時 124.62 (10.14) 117.78 (4.82)2天 93.13 (14.10) 94.74 (12.77)3天 93.13 (5.59) 104.61 (11.09)7天 102.85 (12.18) 99.27 (12.96)10天 77.94 (7.18) 92.07 (4.78)15天 85.91 (3.32) 91.73 (21.27)血清生長激素(毫微克/毫升)0小時 1.1＊ 3.7 (2.9)3小時 76.1 (47.2) 64.5 (5.3)6小時 97.5 (53.2) 93.0 (12.8)24小時 84.6 (37.1) 57.9 (4.5)2天 19.5 (3.5) 15.7 (2.8)3天 14.4 (3.6) 7.3 (2.4)7天 1.6 (0.3) 0.1＊＊從一樣品中得到的值表5豬中BUN、p GH及葡萄糖濃度在花生油單體硬酯酸鋁中服用ZnpGH平均值化合物3ZnpGH/花生油單 標準偏差硬酯酸鋁血清尿素氮(毫克/毫升)-1天 12.63 (2.44)0小時 9.30 (3.35)24小時 7.19 (1.53)5天 10.49 (3.41)7天 10.71 (3.11)9天 16.99 (4.56)血清葡萄糖(毫克/毫升)-1天 102.74 (4.52)0小時 92.41 (7.28)24小時 140.30 (4.64)5天 99.10 (6.10)7天 94.16 (11.70)9天 125.22 (48.93)血清生長激素(毫微克/毫升)-1天 3.3 (2.0)0小時 3.9 (2.5)24小時 40.0 (6.3)5天 11.2 (6.3)
7天 6.9 (1.8)9天 8.1 (2.3)上述表中的數(shù)據(jù)顯示血清尿素氮濃度對三組動物是在注射后稍許下降，經(jīng)7天后才恢復到0時值。葡萄糖濃度對三組動物在大多數(shù)血液樣品中在第一天抽取最后血樣時是高于未注射時的濃度。那些注射化合物1改化合物2的豬只在注射后3小時內(nèi)血清p GH上升并在三天內(nèi)一直保持在高的(超過底線值)濃度。那些服用鋅絡(luò)合的豬類生長激素的豬的血清濃度，在注射后也陡然上升，并在第9天的血清樣品中發(fā)現(xiàn)仍然是高的。因此，用金屬絡(luò)合生長激素，如用鋅在花生油/單硬酯酸鋁的基質(zhì)中絡(luò)合生長激素增長了釋放生長激素的時間，與未絡(luò)合的生長激素釋放時間相比，前者增長了200%，并顯示對動物沒有不利的影響。
權(quán)利要求
1.一種能延長生長促進激素釋放的生長促進配方，其特征在于所述配方包括油賦形劑及有效量的生長促進激素的金屬絡(luò)合物。
2.一種能延長生長促進激素釋放的生長促進配方，其特征在于所述配方飲食按重量計從約0.10%至約30%的生長促進激素的過渡金屬絡(luò)合物及按重量計從約70%至約99.9%的油賦形劑，該油賦形劑包括按重量計從約90%至99%選自包括礦物油?；ㄉ?、黃豆油及芝麻籽油及按重量計從約1%至10%輔助劑。
3.按權(quán)利要求
2所述的配方，其特征在于其中所述輔助劑是選自包括蜂蠟、單硬酯酸鋁、巴扇棕及石蠟的一組輔助劑。
4.延長生長促進激素的釋放的配方，其特征在于其中所述配方包括按重量計從約10%至約0.5%的金屬絡(luò)合生長促進激素及按重量計從90%至約99.5%的增稠油賦形劑、該增稠油賦形劑包含按重量計從約95%至約98%的植物油及按重量計從約5%至約2%的蜂蠟或單硬酯酸鋁。
5.按權(quán)利要求
4要求的生長促進激素配方，其特征在于其中所述的生長促進激素是選自鳥類的、人類的、鳥類的、豬類的、羊類的或牛類的生長促進激素。
6.按權(quán)利要求
5所述的生長促進激素配方，其特征在于其中所述的生長激素是豬的生長激素。
7.按權(quán)利要求
4所述的生長促進配方，其特征在于其中所述的金屬是選自包括鋅、銅、錳、鈷及鐵的一組金屬。
8.按權(quán)利要求
7的生長促進激素配方，其特征在于其中所述的金屬是鋅。
9.一種生長促進組合物，其特征在于所述組合物包含生長促進激素的過渡金屬絡(luò)合物中所述生長促進激素是選自一組包括豬類的、羊類的、人類的、鳥類的、馬類的及牛類的生長促進激素。
10.按權(quán)利要求
9所述的生長促進組合物，其特征在于其中所述的金屬是選自包括鋅、銅、錳、鈷及鐵的一組金屬。
11.按權(quán)利要求
10所述的生長促進組合物，其特征在于其中所述激素是選自豬精、牛類的、馬類的、人類的、鳥類的及羊類的生長激素。
12.按權(quán)利要求
9所述的生長促進組合物，其特征在于其中所述的過渡金屬絡(luò)合物是與輔助劑混合。
13.按權(quán)利要求
12所述的生長促進組合物，其特征在于其中所述的過渡金屬是以輔助劑和過渡金屬絡(luò)合物的按總混合物的重量計從約50%至99.9%的量的情況存在在于組合物中。
14.按權(quán)利要求
13所述的生長促進組合物，其特征在于其中所述的過渡金屬是按重量計從約50%至約80%的量存在于組合物中。
15.連續(xù)地實現(xiàn)促進物生長的方法，其特征在于所述的方法包括給所述的動物服用有效量的按權(quán)利要求
1所述的組合物。
16.一種連續(xù)地實現(xiàn)促進動物生長的方法，其特征在于所述的方法包括給所述的動物服用有效量的按權(quán)利要求
2所述的組合物。
17.一種連續(xù)地實現(xiàn)促進動物生長的方法，其特征在于所述的方法包括給所述的動物服用有效量的按權(quán)利要求
4所述的組合物。
18.一種連續(xù)地實現(xiàn)促進動物生長的方法，其特征在于所述的方法包括給所述的動物服用有效量的按權(quán)利要求
9的組合物。
專利摘要
本發(fā)明涉及能在動物中延長生長激素的釋放的生長激素配方。所述配方包含油賦形劑及有效量的生長激素的過渡金屬絡(luò)合物。本發(fā)明也涉及通過給動物服用所述生長促進配方來促進動物生長的方法。
文檔編號A61K47/12GK86105023SQ86105023
公開日1988年2月24日 申請日期1986年8月12日
發(fā)明者杰羅姆·L·馬丁, 約翰·F·克雷默 申請人:國際礦物和化學公司導出引文BiBTeX, EndNote, RefMan