專利名稱：生長激素制劑及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及動(dòng)物如奶牛注射用的多肽物質(zhì)如牛生長激素(BST)緩釋劑。
眾所周知，當(dāng)對奶牛給以BST時(shí)，將會(huì)提高牛奶的產(chǎn)量而不影響牛奶的成份。在相對地較長的間隙中簡單地使用緩釋劑以長期保持奶牛血流中高水平的BST是很必要的。
本發(fā)明提供了一種可供注射用的多肽物質(zhì)制劑，如牛生長激素緩釋劑，它含有有效濃度的多肽物質(zhì)分散于含有脂肪酸鹽、吸收調(diào)節(jié)劑和由天然油或合成油組成的可吸收的生物共容基質(zhì)的載體中。
本發(fā)明也提供了一種在動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生持久釋放多肽物質(zhì)的方法，它包括給與動(dòng)物以有效量的本發(fā)明的制劑，優(yōu)選的是皮下注射的方法。
特別是本發(fā)明還進(jìn)一步提供了一個(gè)提高奶牛產(chǎn)奶量的方法，它包括給與母牛的有效量的上述制劑，其中的多肽物質(zhì)是BST，優(yōu)選的是皮下注射的方法。
脂肪酸鹽是優(yōu)選含有10～20個(gè)碳原子的飽和或不飽和脂肪酸的鹽，其陽離子優(yōu)選自鈣、鎂、鋅和鋁。它以硬脂酸鹽為好，而最為優(yōu)選的鹽是硬脂酸鈣。
吸收調(diào)節(jié)劑可以是任何能控制活性物質(zhì)釋放到血流中的適宜物質(zhì)。一組可以優(yōu)選為調(diào)節(jié)劑的物質(zhì)包括多糖，如糊精，和多糖衍生物，如羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素或乙基纖維素，最為優(yōu)選的調(diào)節(jié)劑為糊精和乙基纖維素。
油是選自那些易于以合理的純凈形式得到的油類，它是生理上可接受的并在通常的貯藏條件范圍下是穩(wěn)定的。它可以是天然的或合成的，可以選自例如植物油、礦物油、魚油和硅油等。優(yōu)選的油類是植物油，如豆油、花生油、芝麻油、棉子油、玉米油、橄欖油、海貍油、棕櫚油和杏仁油，最優(yōu)選的是花生油和芝麻油。
脂肪酸鹽和吸收調(diào)節(jié)劑可以任何比率存在，甚至基本上可全部是脂肪酸鹽或全部是吸收調(diào)節(jié)劑。優(yōu)選的比率為1∶95至95∶1，更優(yōu)選的脂肪酸鹽與吸收調(diào)節(jié)劑的比率為1∶9至9∶1。最優(yōu)選的比率是1∶1至3∶1。所有本文提到的比率和百分比均為重量比，除非另外指出。
為了得到具有適宜注射和隨之產(chǎn)生分散性質(zhì)的制劑，油的組分必須至少以一個(gè)最小的量存在，這個(gè)量取決于所存在的其他組分。油的最適宜濃度在某種程度上將取決于脂肪酸鹽和吸收調(diào)節(jié)劑的選擇和它們的相對比率。需要足夠的油來保證所得制劑是具有粘度的油狀懸浮液的形式，在使用皮下注射器時(shí)能很容易地注射到動(dòng)物體內(nèi)同時(shí)保持皮下注射物質(zhì)的完善。這樣，油一般至少以30%的量存在，優(yōu)選的量是30%至80%，更優(yōu)選的是30%至70%。正常的制劑的粘度是2，000至250，000cps，優(yōu)選的是從10，000至200，000cps，典型的約為110，000cps。
那些專業(yè)技術(shù)熟練的人應(yīng)會(huì)意識(shí)到當(dāng)僅僅含有上述成份時(shí)，一個(gè)完全令人滿意的制劑的制備還需要加入少量其他成分，如染料，防腐劑，防止注射部位感染的抗菌素、粘度調(diào)節(jié)劑或穩(wěn)定劑和抗氧化劑，以延長制劑的適用期。這些成分的量能占到最終制劑的百分之幾。這些添加劑是為制劑化學(xué)家所熟知的。
此處使用的牛生長激素即BST，包括天然存在的從動(dòng)物得到的BST和由遺傳改良的微生物產(chǎn)生的，也包括已知的在多肽鏈的末端多余一個(gè)或幾個(gè)氨基酸的改良的生長激素。
本發(fā)明還將特別對BST進(jìn)行進(jìn)一步的介紹。但是應(yīng)該理解到本發(fā)明同樣可以應(yīng)用于需要給與動(dòng)物使在其血流中產(chǎn)生持久濃度的任何多肽。這樣的多肽具有有益的效應(yīng)，如對生長、產(chǎn)奶量、健康等。這樣的多肽包括例如生長激素釋放因子(GRF)、胰島素等。
BST或其他多肽可以粉末狀直接加入，例如它可以在無菌條件下通過空氣研磨而制得。不管怎樣，它可以很方便地以微顆粒的形式加入，優(yōu)選的是粒子大小小于500微米，最優(yōu)選的粒子大小在50-500微米之間。這樣的微顆粒可以用熟知的方法制備并可以加入任何合適的獸醫(yī)上可接受的成粒劑。合適的成粒劑是流動(dòng)劑和粘合劑，其中可以作為例子列出的如氫化的海貍油、硬脂酸鈣、羥丙基纖維素和糊精。
作為制粒方法和例子，可以采用空氣研磨粉碎至任意適宜大小的BST與干的惰性賦形劑，如糊精或羥丙基纖維素(HPC)混合，然后制粒，干法制粒較為有利，優(yōu)選采用不產(chǎn)生熱的方法制粒。成粒的方法，例如以干壓榨的方式進(jìn)行，如常規(guī)制片法，繼之以常規(guī)方法研磨并篩出優(yōu)選范圍內(nèi)大小的顆粒。當(dāng)使用制片方法時(shí)，一種流動(dòng)劑，如硬脂酸鈣存在于制片組合物中將會(huì)是有利的。顆?？梢噪S意地被例如乙基纖維素或任何適宜的包復(fù)材料所包復(fù)。應(yīng)用于本發(fā)明的制劑和方法時(shí)，以選擇適宜的賦形劑和變化BST在顆粒中的濃度的方法，將可能以普通的技術(shù)得到以不同速度釋放的顆粒。這樣有利于加入到具有不同釋放速度的制劑顆粒中，當(dāng)注射到母牛體中會(huì)使BST產(chǎn)生比較均勻的釋放速度。這樣的顆粒在制劑中能提供外加的柔韌性，此外還為BST對熱和潮濕的破壞作用提供保護(hù)。
使用非顆?；蹱頑ST時(shí)，發(fā)現(xiàn)空氣研磨對粉碎程度不同的作用會(huì)影響B(tài)ST制劑粘度的增減，這取決于所包含的賦形劑。在這個(gè)方法中，還發(fā)現(xiàn)制劑中減少使用賦形劑，如硬脂酸鈣和/或糊精時(shí)可能會(huì)延緩BST的釋放。
制劑需含有有效濃度的BST或其他多肽。其濃度取決于幾個(gè)因素，如所要求的劑量水平，所需要的緩釋期限和所使用的活性物質(zhì)的藥效。實(shí)際上有經(jīng)驗(yàn)的制劑化學(xué)家在確定所需要的指標(biāo)后能很容易作出決定。在一般情況下，每個(gè)奶牛注射1克至10克的制劑能持久釋放相當(dāng)長的期限，也就是大約28天左右，不會(huì)引起不適。BST在制劑中的濃度為5%至45%，優(yōu)選為15%至30%，最優(yōu)選的約為25%。
本發(fā)明的制劑按所需比例簡單地混合各種組分即能很容易地制備。任何適宜的混合裝置均可使用，各組分可以任何次序加入并混合得到一個(gè)均勻的懸浮液。BST或其他多肽可以粉末或以微顆粒形式加入到放在燒杯內(nèi)的油中后進(jìn)行攪拌，再將其余的組分加入到所生成的懸浮液中并繼續(xù)攪拌直到得到均勻的物質(zhì)。
另外，所有惰性賦形劑都可以任何次序混合后滅菌，如在120℃的高壓釜中加熱15分鐘。冷卻后，BST可以專業(yè)人員已知的任何適宜方法，如過濾，進(jìn)行滅菌后加入并充分混合。
如果需要加入防腐劑，則以作為第一步進(jìn)行為佳。油加熱后可使防腐劑分散在其中。所得的懸浮液最好在BST加入之前先使之冷卻。
BST最好在和緩攪拌下進(jìn)行混合。如果采用劇烈攪拌則需小心避免局部過熱或過分粉碎。BST粉末或微顆粒粒子的大小需要充分小到足以使注射到母牛體內(nèi)的制劑通過皮下注射器的針頭。
現(xiàn)在參照以下實(shí)施例和附

圖1至3將更詳細(xì)地說明實(shí)施本發(fā)明的方法，如下所述，其中注射了下列實(shí)施例的制劑的動(dòng)物，其血漿BST水平是以3或4個(gè)星期的期限來表示。
實(shí)施例1在燒杯中放入5克芝麻油，再加入1.8克BST粉末并攪拌之。然后加入硬脂酸鈣(2.35克)和糊精150(分子量150，000)(0.85克)，繼續(xù)攪拌至生成均勻物質(zhì)。
此制得的制劑含有18%BST、50%芝麻油，8.5%糊精和23.5%硬脂酸鈣(%均以重量計(jì))。以Brookfield粘度計(jì)(型號(hào)LVT，No.4軸，1.5轉(zhuǎn)數(shù)/分)測定，其粘度為110，000cps。
實(shí)施例2～10以下制劑以實(shí)施例1所用的相同方法配制。圖表中各個(gè)組分的重量以所占制劑總量的百分?jǐn)?shù)表示。
樣品芝麻油糊精硬脂酸鈣BST250-321835032-184505.326.71854011.230.81865016161876011111883013.938.1189302626181040212118實(shí)施例11為了評價(jià)本發(fā)明的BST的緩釋效果，上述實(shí)施例中所制得的制劑的樣品以羊的體內(nèi)試驗(yàn)進(jìn)行評價(jià)。每個(gè)實(shí)施例用4個(gè)羊試驗(yàn)，在羊肩胛后以2毫升制劑，約含320毫克BST，進(jìn)行皮下注射。血樣(大約5毫升)以頸靜脈穿刺法間歇地取得，并置于含有肝素的試管中。血漿以離心機(jī)分離并用雙抗體放射免疫分析法測定BST的濃度。
在注射前三天開始的24天期內(nèi)測定的四個(gè)羊的血漿的BST平均水平值列于圖1和2。可以看到其BST水平維持得很好，在整個(gè)期限內(nèi)高于注射制劑前所測定的起始水平。
實(shí)施例12按實(shí)施例1的方法得到其他幾批產(chǎn)品，每批使用5倍于實(shí)施例1的量的物料。將芝糜油、硬脂酸鈣和糊精混合均勻，然后于一高壓釜中在120℃滅菌15分鐘。BST以過濾法進(jìn)行滅菌后加入到冷的賦形劑中并使之完全混合。
試驗(yàn)在小菜牛體內(nèi)進(jìn)行，以評價(jià)此處理的有效期限。用于試驗(yàn)的全部動(dòng)物均飼以同樣的飼料，每天二次。在整個(gè)試驗(yàn)期內(nèi)，水可以隨意供給。收集尿樣并測定脲素氮排出水平。脲素氮水平的降低是作為由于生長激素的效用使得氨基酸轉(zhuǎn)變?yōu)榈鞍踪|(zhì)的能力增加的量度。
試驗(yàn)結(jié)果列于圖3。9個(gè)動(dòng)物每個(gè)均以含有960毫克BST的上述制劑進(jìn)行皮下注射。當(dāng)與未經(jīng)處理的對照組動(dòng)物(圓點(diǎn))比較時(shí)，在大約28天的期間內(nèi)，結(jié)果(圖3中的方塊)顯示，試驗(yàn)的小牛的尿中脲素氮受到了持續(xù)的遏制。
在以下的實(shí)施例中，制劑是按實(shí)施例12的方法配制的。所用微顆粒是把所述成分經(jīng)過制片并將之磨碎產(chǎn)生100-425微米的顆粒的方法制備的。
實(shí)施例組分百分比13BST25硬脂酸鈣8糊精1508芝麻油5914BST18硬脂酸鈣10硅石R9744芝麻油6815BST(微顆粒)35硬脂酸鈣10糊精9.45芝麻油50
BST微顆粒含有BST50硬脂酸鈣3HPC4716組分如15，但在微顆粒中以糊精9.4代替HPC17組分如15，但在微顆粒中以乙基纖維素代替HPC18-20組分如15-17，但顆粒以1%乙基纖維素包衣21BST微顆粒35硬脂酸鈣5糊精9.45硅石R9742芝麻油53BST微顆粒如實(shí)施例15中所用的。
22BST微顆粒35硬脂酸鈣10糊精1505芝麻油50BST微顆粒如實(shí)施例16中所用的。
23BST微顆粒35硬脂酸鈣8糊精9.45硅石R9742芝麻油50
BST微顆粒如實(shí)施例17中所用的。
24BST18硬脂酸鈣8.8糊精1503.2硅石R9742芝麻油68
權(quán)利要求
1.一種注射用多肽物質(zhì)緩釋劑，含有分散在載體中的有效濃度的多肽物質(zhì)，該載體包括由天然油或合成油組成的可吸收的生物共容基質(zhì)和至少一種選自脂肪酸鹽和吸收調(diào)節(jié)劑的組分。
2.注射用多肽物質(zhì)緩釋劑的制備方法，包括將有效濃度的多肽物質(zhì)分散在載體中，該載體中含有由天然油或合成油組成的可吸收的生物共容基質(zhì)，在該分散液中至少還有一種選自脂肪酸鹽和吸收調(diào)節(jié)劑的組分。
3.按照權(quán)利要求2的方法，其中的多肽物質(zhì)是牛生長激素。
4.按照權(quán)利要求2或3的方法，含有一種脂肪酸鹽和一種吸收調(diào)節(jié)劑。
5.按照權(quán)利要求2至4的任何一個(gè)方法，其中的賦形劑是在多肽物質(zhì)加入之前先一起混合。
6.按照權(quán)利要求2至5的任何一個(gè)方法，其中的脂肪酸鹽是硬脂酸鈣。
7.按照權(quán)利要求2至6的任何一個(gè)方法，其中的吸收調(diào)節(jié)劑是糊精。
8.按照權(quán)利要求2至7的任何一個(gè)方法，其中的油是芝麻油。
9.按照權(quán)利要求2至8的任何一個(gè)方法，其中脂肪酸鹽和吸收調(diào)節(jié)劑的比率是1∶9至9∶1。
10.按照權(quán)利要求2至9的任何一個(gè)方法，其中油至少占制劑總量的30重量%。
11.按照權(quán)利要求2至10的任何一個(gè)方法，其中的多肽物質(zhì)占制劑總量的5～45重量%。
12.將權(quán)利要求2至11之任何一項(xiàng)方法制備的生長激素制劑的有效劑量用于增加奶牛產(chǎn)奶量的方法。
全文摘要
由多肽與載體和吸收調(diào)節(jié)劑分布于油中組成的一種緩釋劑。
文檔編號(hào)A61K38/27GK1032743SQ8810746
公開日1989年5月10日 申請日期1988年10月27日 優(yōu)先權(quán)日1987年10月30日
發(fā)明者馬克·理查德·布拉姆利, 安東尼·本杰文·卡特, 戴維·威廉·鄧威爾 申請人:利利工業(yè)公司