專利名稱：唾液酰甘油脂及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是關(guān)于新的、含有唾液酸的脂衍生物的的堿金屬鹽形式的唾液酰甘油脂(sialocylglycerolipids)及其制備方法。
一般說來，大多數(shù)神經(jīng)病類疾病都被認(rèn)為是難以治療或治愈的。再者，治療上述疾病的藥劑為數(shù)很少。
目前臨床上試用的上述藥劑例如有天然的神經(jīng)節(jié)苷脂(其市售品的商品名為Cronassial;見日本專利未審公開(下文中記為“J.P.KOKAI”)號5234912)和甲鈷胺(通用藥名)，后者是一種維生素。但這兩種藥對神經(jīng)病類疾病的療效都不能令人滿意，因此需要研制出性能更好的這類藥劑。
另外，眾所周知，象神經(jīng)節(jié)苷脂一類的酸性神經(jīng)節(jié)苷脂以及象磷脂酰肌醇和磷脂酰絲氨酸一類的酸性磷脂，在動物的神經(jīng)傳遞系統(tǒng)中起著重要的作用。本發(fā)明的發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)節(jié)苷脂類的混合物或其中某個單一成分能促使初始培養(yǎng)的神經(jīng)細(xì)胞及成神經(jīng)細(xì)胞瘤細(xì)胞增生，促使軸突形成和伸展，并且發(fā)現(xiàn)，上述混合物或單一成分在動物模型中的效果和甲鈷胺相似。本發(fā)明的發(fā)明人之一已經(jīng)提交了一份專利申請(J.P.KAOKAI№59-222424)。
如上所述，神經(jīng)節(jié)苷脂混合物目前已用于治療末梢神經(jīng)紊亂或中樞神經(jīng)紊亂。但由于這些神經(jīng)節(jié)苷脂是從不同動物中提取得到的天然產(chǎn)品，因而會因這些神經(jīng)節(jié)苷脂本身或因有雜質(zhì)而產(chǎn)生抗原性問題。
此外，由于上述神經(jīng)節(jié)苷脂并不總是醫(yī)藥上穩(wěn)定和均勻的，所以很難為其規(guī)定出嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)。
另一方面，這些神經(jīng)節(jié)苷脂中的唾液酸也在例如糖蛋白中找到了，或存在于動物或細(xì)菌細(xì)胞的細(xì)胞表面。最近，由于這些物質(zhì)涉及免疫、癌、炎癥、各種傳染病、細(xì)胞分化、激素受體等方面，在醫(yī)學(xué)及藥理方面引起了人們的重視。還無人報導(dǎo)過含有唾液酸的脂衍生物對于神經(jīng)紊亂的治療效果。
在這種情況下，本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，有一種唾液酰甘油脂具有促使軸突伸展的作用，此甘油脂也許可以用來治療神經(jīng)疾病或使其好轉(zhuǎn)(見日本專利申請(以后簡記為“J.P.A”)61-214787)，這種唾液酰甘油脂是一種含有唾液酸的脂衍生物的鈉鹽，即3-O-(5-乙酰胺基-3，5-二脫氧-x-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸鈉)-1，2-二-O-十四烷基-Sn-丙三醇。
可以預(yù)期，其他唾液酰甘油脂也具有同上述唾液酰甘油脂相似的作用，但尚未見到合成這種脂的報道。
日本專利公告公報(以下簡記為“J.P.KOKOKU”)59-164798中披露，有若干種唾液酸衍生物可以這樣制得按已知方法將唾液酸轉(zhuǎn)變?yōu)樘墙o體，再使此糖給體與同樣按已知方法制得的糖受體反應(yīng)。
但此方法是按照以下過程實施，因此在許多方面都必須改進
(式中Ac代表乙?；?。
更具體地說，上述方法包括，將化合物(Ⅳ)溶于甲醇中，加1N Na OCH3，室溫下攪拌溶液1小時，再用Ambelist A-15(商標(biāo)名，A-15大孔樹脂)將溶液中和，然后過濾溶液，減壓濃縮濾液使化合物(Ⅴ)析出，收率為67%。但此方法所得目的產(chǎn)物的收率很低;該產(chǎn)物需經(jīng)以下三步才能得到能有效地治療神經(jīng)疾病的化合物(Ⅵ)。
為了解決常規(guī)方法中的這些問題，本發(fā)明的發(fā)明人研究出下面所述的方法并就該方法申請了專利(J.P.A.61-189340)。該方法包括，使以下通式(Ⅶ)所示的化合物水解
(式中Ac為乙酰基，R代表低級烷基)，水解在NaOH的ROH溶液中或在四氫呋喃(THF)水溶液中進行，再用反相柱色譜法純化產(chǎn)物，得到以下通式(Ⅵ)所示的化合物
式中Ac為乙?；?。
但在申請上述專利時，制備具有高生物活性的唾液酰甘油脂的本方法適用的分子種類尚不清楚(見J.P.A.61-214787)，反應(yīng)中可以使用的溶劑也未予說明。
本發(fā)明的主要目的是提供一類新的唾液酰甘油脂，它們是含有唾液酸的脂衍生物的鈉鹽。
本發(fā)明的另一個目的是提供制備這類新唾液酰甘油脂的方法。
因此，本發(fā)明的一個方面是提供以下通式(Ⅰ)所示的唾液酰甘油脂
式中R1為氫原子或基團CH3CO-，R2為堿金屬、氫原子或低級烷基，R3代表氫原子或基團Cn H2n+1-(n為1～30的整數(shù))，R4為基團Cm H2m+1-(m為1～30的整數(shù))。
本發(fā)明的唾液酰甘油脂的較好實例有R2為鈉原子、R3為基團Cn H2n+1-(n為6、10、18或22)、R4為基團Cm H2m+1-(m為6、10、18或22)的通式(Ⅰ)化合物。
本發(fā)明化合物可按J.P.A.61-189340和61-214787中介紹的方法制備(上述日本專利是同一申請人，即本發(fā)明的受讓人申請的)，或者按下面詳述的本發(fā)明方法制備。
更具體些說，使Bn為芐基的化合物(1)與1-溴烷反應(yīng)生成化合物(2)。再使化合物(2)脫去芐基得到化合物(3)(見Agric.Biol.Chem.，1982，Vol.46(1)，p.255;以及Biochemistry，1963，Vol.2，p.394)。
另一方面，按照Kuhn的方法(見Chem.Ber.，1966，Vol.99，p.611)，可由唾液酸(N-乙酰神經(jīng)氨酸)制得化合物(4)(其中Ac為乙?；?。
使所得化合物(4)與按上述方法得到的化合物(3)反應(yīng)，生成化合物(5)(α構(gòu)型)和化合物(6)(β構(gòu)型)，再分離出化合物(5)，將其脫乙酰并水解，生成本發(fā)明的化合物(7)。這里水解一步可在THF或在醇如甲醇或乙醇中進行。水解最好在上述溶劑中，在堿性條件下進行。此外，如果在合成中使用其它囟代烷，如溴代烷，可制得化合物(13)、(19)、(25)等化合物。
這些反應(yīng)的細(xì)節(jié)如下面所示
因此，本發(fā)明的另一方面是提供制備由下述式(Ⅲ)所表示的新的唾液酰甘油脂的方法，
(其中，M為堿金屬，R3和R4與上述式(Ⅰ)中的定義相同)，該方法包括在堿性含水溶劑中處理由下述式(Ⅱ)所表示的化合物
(其中，R5為CH3CO-，R6為氫原子或低級烷基，R3和R4與上述定義相同)。
在上式中，M最好為鈉原子，R3最好為氫原子或基團Cn H2n+1-(n為整數(shù)6、10、18或22)，R4最好為基團CHm H2m+1-(m為整數(shù)6、10、18或22)。
水解最好在四氫呋喃中，于上述堿性條件下進行。
現(xiàn)通過下述非限制作用的實施例來進一步詳細(xì)地說明本發(fā)明。
實施例1(ⅰ)化合物(2)(1，2-二-O-己基-3-O-芐基-sn-丙三醇)的合成
C22H38O3(Mw＝350.52)將化合物(1)(3-O-芐基-sn-丙三醇，11.3g，62.1mmol)溶于150ml二甲基甲酰胺中，加入7.5g(187.5mmol)60%NaH并于冰-甲醇浴中冷卻，混合物于室溫下攪拌20分鐘。然后向反應(yīng)混合物中加入1-溴己烷(51.2g)，在室溫下攪拌6小時。用鈰硅石層過濾反應(yīng)溶液，將濾液蒸發(fā)至干。將殘余物再次溶于乙醚中，用0.1NHCl溶液和2.5%碳酸氫鈉溶液洗滌，用無水硫酸鎂干燥，濃縮至干。用柱色譜(Kieselgel60，MerckCo.;洗脫液∶己烷/乙酸乙酯(50∶1)提純殘余物，得到26.3g化合物(2)。
(ⅱ)化合物(3)(1，2-二-O-己基-sn-丙三醇)的合成
C15H32O3(Mw＝260.41)
將化合物(2)(26.3g)溶于400ml乙酸乙酯中，向溶液中加入2.6g10%的披鈀木炭。在氮氣氛下，于室溫下將溶液攪拌4天。從反應(yīng)溶液中濾去披鈀木炭，從濾液中蒸去溶劑，用柱色譜(Kieselgel 60，Merck Co.;洗脫液CHCl3-甲醇系統(tǒng))提純得到的殘余物，得到12.86g(49.38mmol)化合物(3)。按反應(yīng)(1)→(2)→(3)計算，總產(chǎn)率為79.5%。
化合物(3)的物理性質(zhì)[α]30℃D-17.1(c＝1.1，CHCl3)1H NMR(500 MHz;CDCl3，四甲基硅烷(TMS))δH0.886(3H，t，J＝7.0Hz，-CH3)，0.889(3H，t，J＝7.0Hz，-CH3)，1.271-1.370(12H，m，-CH2x 6)，1.530-1.604(4H，m，-OCH2CH2x 2)，3.405-3.746(9H琺，CH2)CH-O-CH2CH2-O-CH2(ⅲ)化合物(5)和(6)的合成
向攪拌中的粉末狀分子篩4A(8.0g)、氰化汞(Ⅱ)(2.87g，11.4mmol)和溴化汞(Ⅱ)(4.11g，11.4mmol)的混合物中，加入于CHCl(100ml)中的化合物(3)并在氬氣氛中于室溫下攪拌。用冰浴冷卻反應(yīng)溶液，加入30ml化合物(4)(8.0g，15.6mmol)的氯仿溶液，隨后在室溫下將溶液攪拌3天。將反應(yīng)溶液過濾，用氯仿洗滌得到的殘余物，隨后將濾液與洗滌液合并，再從中蒸去溶劑。用柱色譜(WecogelC-300，WakoChemicals，洗脫液∶乙醚/乙醇系統(tǒng)和甲苯/乙酸乙酯系統(tǒng))提純得到的殘余物，得到2.6gα-型化合物(5)、1.51gβ-型化合物(6)和2.0g兩者的混合物(共計6.11g)。產(chǎn)率為45.7%。
化合物(5)(3-O-｛(5-乙酰胺基-4，7，8，9-四-O-乙?；?3，5-二脫氧-α-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸甲酯｝-1，2-二-O-己基-sn-丙三醇)的物理性質(zhì)Rf＝0.48(Merck高效薄層色譜，乙醚/乙醇＝50/1)[α]30℃D＝-12.1(c＝1.0，CHCl3)1H NMR(500 MHz;CDCl3，TMS)δ3H0.886(6H，t，-CH3x 2)，1.330(12H，m，-CH2- x 6)，1.888(3H，s，CH3CONH-)，1.975(1H，t，J＝12.5Hz，H-3ax)，2.025(3H，s，CH3COO-)，2.038(3H，s，CH3COO-)，2.131(3H，s，CH3COO-)，2.186(3H，s，CH3COO-)，2.602(1H，dd，J＝4.4，12.8Hz，H-3eq)，3.791(3H，s，-COOCH3)，4.298(1H，dd，J＝2.6，12.5Hz，H-9)，4.853(1H，ddd，H-4)，5.100(1H，d，-CONH)，5.321(1H，dd，J＝1.5，8.4Hz，H-7)，和5.371(1H，ddd，H-8).
化合物(6)(3-O-(5-乙酰胺基-4，7，8，9-四-O-乙?；?3，5-二脫氧-β-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸甲酯)-1，2-二-O-己基-sn-丙三醇的物理性質(zhì)Rf＝0.54(Merck高效薄層色譜，乙醚/乙醇＝50/1)[α]30℃D＝-17.2(c＝0.95，CHCl3)1H NMR(500MHz;CDCl3，TMS)δH0.889(3H，t，-CH3)，0.902(3H，t，-CH3)，1.310(12H，r -CH2- x 6)，1.882(3H，s，CH3CONH-)，1.900(1H，t，J＝12.8Hz，H-3ax)，2.013(3H，s，CH3COO-)，2.023(3H，s，CH3COO-)，2.064(3H，s，CH3COO-)，2.140(3H，s，CH3COO-)，2.454(1H，dd，J＝4.8，12.8Hz，H-3eq)，3.794(3H，s，-COOCH3)，4.722(1H，dd，J＝2.6，12.5Hz，H-9)，5.122(1H，d，-CONH)，5.220-5.290(2H，H-4，H-8)，和5.378(1H，dd，J＝1.5，4.4Hz，H-7).
(ⅳ)化合物(7)(3-O-(5-乙酰胺基-3，5-二脫氧-α-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸鈉｝-1，2-二-O-己基-sn-丙三醇)的合成
將化合物(5)(1.69g，2.30mmol)溶于3ml四氫呋喃中，向溶液中加入11ml 1N NaOH溶液，在室溫下攪拌7小時。用陽離子交換樹脂(Amberlite IRC-50，Rohm and Hass Co.)(PH＝7)中和反應(yīng)溶液，隨后濾去樹脂，用蒸餾水洗滌樹脂，將濾液與洗滌液合ⅲ彌祝∣D S60
，YAMAMURA CHEM ICAL LABORATORIES，60/200目，溶劑水，甲醇)提純，收集甲醇組分，蒸去溶劑，冷凍干燥殘余物，得到986.8mg(1.72mmol)白色粉末狀化合物(7)。產(chǎn)率＝74.8%。
化合物(7)的物理性質(zhì)Rf＝0.47(Merck高效薄層色譜，CHCl3/甲醇/CH3COOH＝5/3/0.5)[α]30℃D＝-1.96(c＝1.0，THF)1H NMR(500MHz;D2O，TS)δH0.880(6H，t，J＝6.6Hz，-CH3x 2)，1.340(12H，s，-CH2- x 6)，1.580(4H，m，-OCH2CH2- x 2)，1.691(1H，t，J＝12.5Hz，H-3ax)，2.730(1H，dd，J＝4.8，12.5Hz，H-3eq).
(ⅴ)化合物(8)(3-O-(5-乙酰胺基-3，5-二脫氧-β-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸鈉)-1，2-二-O-己基-sn-丙三醇)的合成
將1.15g(1.56mmol)化合物(6)溶于3ml四氫呋喃，然后加入10ml 1N NaOH溶液，在室溫下攪拌混合物7小時。用陽離子交換樹脂(Amberlite IR C-50，PH＝7)中和反應(yīng)溶液，然后濾去樹脂，用蒸餾水洗滌樹脂，將洗滌液與濾液合并，用柱色譜(ODS 60
，YAMAMURA CHEMICAL LABORATORIES，60/200目，溶劑水，甲醇)提純合并液，收集甲醇組分，蒸去溶劑，冷凍干燥殘余物，得到748.0mg(1.30mmol)白色粉末狀化合物(8)。產(chǎn)率＝83.3%。
化合物(8)的物理性質(zhì)
Rf＝0.54(Merck 高效薄層色譜，CHCl3/甲醇/CH3COOH＝5/3/0.5)[α]30℃D＝-32.4(c＝0.97，THF)1H NMR(500MHz;D2O，TSP)δH0.880(6H，-CH3x 2)，1.330(12H，s，-CH2- x 6)，1.600(4H，m，-OCH2CH2- x 2)，1.626(1H，t，J＝12.8Hz，H-3ax)，2.057(3H，s，CH3CONH-)，2.408(1H，dd，J＝4.8，12.8Hz，H-3eq).
實施例2(ⅰ)化合物(9)(1，2-二-O-癸基-3-O-芐基-sn-丙三醇)的合成
C30H54O3(Mw＝462.73)將13.6g(74.7mmol)化合物(1)(3-O-芐基-sn-丙三醇)溶于20ml無水二甲基甲酰胺中，加入8.96g(224.1mmol)60%NaH，同時在冰-甲醇浴中冷卻溶液，在室溫下攪拌20分鐘。向溶液中加入66.4g1-溴癸烷或300.22mmol1-氯癸烷，然后將得到的溶液于室溫下攪拌6小時。用鈰硅石層過濾反應(yīng)溶液，然后用乙醚洗滌殘余物，將洗滌液與濾液合并，減壓蒸發(fā)至干。將殘余物再次溶于乙醚中，依次用0.1NHCl溶液和2.5%碳酸氫鈉溶液洗滌，然后用無水硫酸鎂干燥，蒸去溶劑，用柱色譜(Kieselgel60，MerckCo.，洗脫液∶己烷/乙酸乙酯(50∶1))提純得到的殘余物，得到33.5g產(chǎn)物(通過薄層色譜分析得知，其中包括1-溴癸烷)。將該產(chǎn)物直接用于隨后的脫芐基反應(yīng)而無需進一步提純。
(ⅱ)化合物(10)(1，2-二-O-癸基-sn-丙三醇)的合成
C23H48O3(Mw＝372.61)將化合物(9)(33.5g，通過薄層色譜分析得知，其中包括1-溴癸烷)溶于450ml乙酸乙酯中，加入3.5g 10%披鈀活性炭。在氫氣流中，于室溫下將反應(yīng)溶液攪拌4天。從溶液中濾去披鈀活性炭，然后蒸去溶劑，用柱色譜(Kieselgel 60，Merck Co.，洗脫液CHCl3)提純得到的殘余物。將得到的產(chǎn)物用石油醚重結(jié)晶，得到26.2g(70.31mmol)化合物(10)。根據(jù)反應(yīng)(1)→(9)→(10)計算，產(chǎn)率為94.1%。
化合物(10)的物理性質(zhì)[α]30℃D＝-11.7(c＝1.1，CHCl3)1H NMR(500MHz;CDCl3，TMS);δH0.880(3H，t，J＝7.0Hz，-CH3)，0.884(3H，t，J＝7.0Hz，-CH3)，1.200-1.400(28H，m，-CH2- x 14)，1.500-1.600(4H，m，-OCH2CH2- x 2)，3.400-3.750(9H，m，
)(ⅲ)化合物(11)(3-O-(5-乙酰胺基-4，7，8，9-四-O-乙酰基-3，5-二脫氧-α-D-甘油-D-半乳-6-吡喃壬糖酮酸甲酯)-1，2-二-O-癸基-sn-丙三醇)和化合物(12)的合成
在氬氣氛下，向由粉末狀分子篩4A(4.0g)，氰化汞(Ⅱ)(1.65g，6.5mmol)和溴化汞(Ⅱ)(2.35g，6.5mmol)組成的混合物中加入于CHCl3(80ml)中的化合物(10)(4.0g，10.7mmol)，在室溫下攪拌2小時。
將反應(yīng)混合物在冰浴中于0～5℃冷卻，加入于氯仿(20ml)中的化合物(4)(4.0g，7.8mmol)，于室溫下攪拌溶液3天。過濾反應(yīng)溶液，用氯仿洗滌殘余物，將濾液與洗滌液合并，真空濃縮。用柱色譜(WacogelC-300，洗脫液∶乙醚/乙醇系統(tǒng)和甲苯/乙酸乙酯系統(tǒng))提純油狀殘余物，得到388.7mgα-型化合物(11)，469.5mgβ-型化合物(12)和2.23g兩者的混合物(共計3.09g)。產(chǎn)率為46.8%。
化合物(11)的物理性質(zhì)Rf＝0.54(Merck高效薄層色譜，乙醚/乙醇＝50/1)30℃D＝-9.9(c＝1，CHCl3)1H NMR(500MHz;CDCl3，TMS)δH0.878(6H，t，J＝7.0Hz，-CH3x 2)，1.810(28H，m，-CH2- x 14)，1.881(3H，s，CH3CONH-)，1.975(1H，t，J＝12.5Hz，H-3ax)，2.025(3H，s，CH3COO-)，2.038(3H，s，CH3COO-)，2.131(3H，s，CH3COO-)，2.137(3H，s，CH3COO-)，2.602(1H，dd，J＝4.8，12.8Hz，H-3eq)，3.791(3H，s，-COOCH3)，4.299(1H，dd，J＝2.6，12.5Hz，H-9)，4.856(1H，ddd，H-4)，5.102(1H，d，-CONH-)，5.321(1H，dd，H-7)和5.371(1H，ddd，H-8).
化合物(12)(3-O-(5-乙酰胺基-4，7，8，9-四-O-乙?；?3，5-二脫氧-β-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸甲酯)-1，2-二-O-癸基-sn-丙三醇)的物理性質(zhì)Rf＝0.68(Merck高效薄層色譜，乙醚/乙醇＝50/1)[α]30℃D＝-13.3(c＝1，CHCl3)1H NMR(500MHz;CDCl3，TMS)δH0.881(6H，t，-CH3x 2)，1.285(28H，m，-CH2- x 14) .882(3H，s，CH3CONH-)，2.012(3H，s，CH3COO-)，2.023(3H，s，CH3COO-)，2.063(3H，s，CH3COO-)，2.141(3H，s，CH3COO-)，2.454(1H，dd，J＝4.9，13.2Hz，H-3eq)，3.794(3H，s，-COOCH3)，4.723(1H，dd，J＝2.4，12.2Hz，H-9)，5.138(1H，d，-CONH-)，5.200-5.290(2H，H-4，H-8)，和5.376(1H，H-7).
(ⅳ)化合物(13)(3-O-(5-乙酰胺基-3，5-二脫氧-α-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸鈉)-1，2-二-O-癸基-sn-丙三醇)的合成
將化合物(11)(343.3mg，0.41mmol)溶于1ml四氫呋喃，然后加入3ml 1N Na OH溶液。將得到的溶液在室溫下攪拌5小時。用陽離子交換樹脂(Amberlite IRC-50 Rhom and Haas Co.)(pH＝7)中和反應(yīng)溶液，濾去樹脂，用蒸餾水洗滌樹脂，將洗滌液與濾液合并，用柱色譜(ODS60 ，YAMAMURA CHEMICAL LABORATORIES，60/200目，溶劑水，甲醇)提純。收集甲醇組分，從中蒸去溶劑，冷凍干燥殘余物，得到218.9mg(0.32mmol)化合物(13)。產(chǎn)率為78.0%。
化合物(13)的物理性質(zhì)Rf＝0.54(Merck高效薄層色譜，氯仿/甲醇/乙酸＝5/3/0.5)[α]30℃D＝-2.25(c＝0.93，THF)1H NMR(500MHz;D2O，TSP)δH0.885(6H，m，-CH3x 2)，1.310(28H，s，-CH2- x 14)，1.583(4H，br.s，-OCH2CH2-x2)，1.700(1H，t，J＝12.5Hz，H-3ax)，2.049(3H，s，CH3CONH-)和2.733(1H，br.d，J＝8.4Hz，H-3eq).
(ⅴ)化合物(14)(3-O-(5-乙酰胺基-3，5-二脫氧-β-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸鈉)-1，2-二-O-癸烷-sn-丙三醇)的合成
將化合物(12)(397.0mg，0.47mmol)溶于1ml四氫呋喃，然后加入3.5ml 1NaOH溶液，將得到的溶液在室溫下攪拌5小時。用Amberlite IRC-50(PH＝7)中和反應(yīng)溶液，然后濾去樹脂，用蒸餾水洗滌，將濾液與洗滌液合并，用柱色譜(ODS 60 ，YAMAMURA CHEMICAL LABORATORIES，60/200目，溶劑水，甲醇)提純，收集甲醇組分，從中蒸去溶劑，將殘余物冷凍干燥得到155.0mg(0.23mmol)白色粉末狀化合物(14)。產(chǎn)量為48.9%。
化合物(14)的物理性質(zhì)Rf＝0.68(Merck高效薄層色譜，氯仿/甲醇/乙酸＝5/3/0.5)[α]30℃D＝-47.7(c＝1，THF)1H NMR(500MHz;D2O，TSP)δH0.897(6H，m，-CH3x 2)，1.323(28H，s，-CH2- x 14)，1.602(4H，br.s，-OCH2CH2- x 2)，2.074(3H，s，CH3CONH-)和2.430(1H，m，H-3eq).
實施例3(ⅰ)化合物(15)(1，2-二-O-十八烷基-3-O-芐基-sn-丙三醇)的合成
C46H86O3(Mw＝687.15)將化合物(1)(4.0g，22.0mmol，3-O-芐基-sn-丙三醇)溶于10ml二甲基甲酰胺中，加入2.7g(66.0mmol)60%NaH，將得到的溶液在室溫下攪拌10分鐘。向溶液中加入25g1-溴十八烷或75.0mmol1-氯十八烷，在室溫下攪拌溶液6小時。通過鈰硅石層過濾反應(yīng)溶液，用乙醚洗滌得到的殘余物，將濾液與洗滌液合并，減壓蒸發(fā)至干。將殘余物再次溶于乙醚，用0.1NHCl溶液和2.5%碳酸氫鉀溶液洗滌，用無水硫酸鎂干燥，然后蒸去溶劑，得到16.0g油狀物質(zhì)。用柱色譜(WacogelC-300，550g，甲苯/乙醚系統(tǒng))提純該油狀物質(zhì)，得到9.25g(13.46mmol)化合物(15)。產(chǎn)率為61.3%?？蓪⑵渲苯佑糜谙率霾襟E而無需進一步提純。
(ⅱ)化合物(16)(1，2-二-O-十八烷基-sn-丙三醇)的合成
C39H80O3(Mw＝597.03)將化合物(15)(8.8g，13.0mmol)溶于150ml乙酸乙酯中，加入800mg10%披鈀活性炭，在氫氣流下，將溶液于室溫下攪拌40小時。
濾去披鈀活性炭，從濾液中蒸去溶劑，得到6.21g(10.4mmol)化合物(16)。產(chǎn)率為79.8%。
化合物(16)的物理性質(zhì)[α]30℃D＝-7.5(c＝1，CHCl3)1H NMR(500MHz，CHCl3;TMS)δH0.880(6H，t，J＝7.0Hz，-CH3x 2)，1.150-1.380(60H，m，-CH2- x 90)，1.540-1.590(4H，m，-OCH2CH2- x 2)，3.400-3.750(9H，m，
)(ⅲ)化合物(17)(3-O-(5-乙酰胺基-4，7，8，9-四-O-乙?；?3，5-二脫氧-α-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸甲酯)-1，2-二-O-十八烷基-sn-丙三醇)和化合物(18)的合成
將已于180℃加熱減壓條件下干燥過的粉狀4A分子篩(5.0g)懸浮于50mlTHF中，或之后將2.82g(4.72mmol)化合物(16)加入其中并于室溫下將所得溶液攪拌30分鐘。反應(yīng)液于冰-甲醇浴中冷卻后再于氬氣流保護下避光加入3.65g(14.23mmol)AgOTf，或氰化汞(Ⅱ)和溴化汞的混合物，攪拌15分鐘后再加入20ml4.83g(9.49mmol)化合物(4)的THF溶液并于室溫下攪拌3小時。反應(yīng)液過濾后剩余物用氯仿洗滌并從合并的濾液和洗滌液中蒸出溶劑。將所得殘余物溶于氯仿中，用飽和碳酸氫鈉溶液和飽和氯化鈉溶液洗滌后用無水硫酸鎂干燥，再蒸出溶劑。所得剩余物用柱色譜法提純(WacogelC-300;洗脫劑采用乙醚/甲苯/乙酸乙酯體系)，得到640mgα-型(化合物(17))、221mgβ-型(化合物(18))和515mgα-和β-型的混合物。以化合物(16)計算的收率為27.3%。
化合物(17)的物理性質(zhì)Rf＝0.70(MerckHPTLC;乙醚/乙醇＝50/1)[α]30℃D＝-8.4(c＝1，CHCl3)1H NMR(500MHz;CDCl3，TMS)δH0.879(6H，t，-CH3x 2)，1.315(60H，m，-CH2- x 30)，1.880(3H，s，CH3CONH-)，1.975(1H，t，J＝12.5Hz，H-3ax)，2.025(3H，s，CH3COO-)，2.038(3H，s，CH3COO-)，2.132(3H，s，CH3COO-)，2.136(3H，s，CH3COO-)，2.603(1H，dd，J＝4.4，12.8Hz，H-3eq)，3.789(3H，s，-COOCH3)，4.308(1H，dd，J＝2.9，12.5Hz，H-9)，4.856(1H，ddd，H-4)，5.254(1H，d，-CONH-)，5.328(1H，dd，H-7)and5.371(1H，ddd，H-8).
化合物(18)(3-O-(5-乙酰胺基-4，7，8，9-四-O-乙?；?3，5-二脫氧-β-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸甲酯)-1，2-二-O-十八烷基-sn-丙三醇)的物理性質(zhì)Rf＝0.80(MerckHPTLC;乙醚/乙醇＝50/1)30℃D＝-10.8(c＝1，CHCl3)1H NMR(500MHz;CDCl3，TMS)δH0.880(6H，t，-CH3x 2)，1.250(60H，m，-CH2- x 30)，1.881(3H，s，CH3CONH-)，1.900(1H，t，J＝11.7Hz，H-3ax)，2.011(3H，s，CH3COO-)，2.022(3H，s，CH3COO-)，2.063(3H，s，CH3COO-)，2.140(3H，s，CH3COO-)，2.454(1H，dd，J＝4.8，12.8Hz，H-3eq)，3.793(3H，s，-COOCH3)，4.726(1H，dd，J＝2.6，12.5Hz，H-9)，5.138(1H，d，-CONH-)，5.200-5.300(2H，H-4，H-8)and 5.376(1H，H-7).
(ⅳ)化合物(19)(3-O-(5-乙酰胺基3，5-二脫氧-α-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸鈉)-1，2-二-O-十八烷基-sn-丙三醇)的合成
將化合物(17)(520.0mg;0.49mmol)溶于3ml THF中，然后加入6ml 1N NaOH溶液并于室溫下將溶液攪拌5小時。反應(yīng)液用Amberlite IRC-50(PH＝7)中和后，濾出樹脂，并用蒸餾水洗滌樹脂，濾液和洗滌液合并后用柱色譜法提純(ODS 60
，YAMAMURA CHEMICAL LABORATORIES;60/200目，溶劑水，甲醇)，然后收集甲醇組分，蒸出溶劑并凍干殘余物，得到362mg(0.40mmol)白色粉狀化合物(19)，收率81.6%。
化合物(19)的物理性質(zhì)
Rf＝0.60(MerckHPTLC;氯仿/甲醇/乙酸＝5/3/0.5)[α]30℃D＝-1.98(c＝0.96，THF)1H NMR(500MHz，DMSOd6+D2O，TMS)δH0.852(6H，t，J＝7.0Hz，-CH3x 2)，1.100-1.350(60H，m，-CH2- x 30)，1.400-1.500(4H，m，-OCH2CH2- x 2)and1.896(3H，s，CH3CONH-)(ⅴ)化合物(20)(3-O-(5-乙酰胺基-3，5-二脫氧-β-D-甘油-D-半乳-2-吡喃壬糖酮酸鈉)-1，2-二-O-十八烷基-sn-丙三醇)的合成
將化合物(18)(140.0mg;0.13mmol)溶于2ml THF中，加入4ml 1N NaOH溶液，于室溫下將溶液攪拌6小時。反應(yīng)液用Amberlite IRC-50(PH＝7)中和后，濾出樹脂并用蒸餾水洗滌樹脂，濾液和洗滌液合并后用柱色譜法提純(ODS 60
，YAMAMURA CHEMICAL LABORATORIES;60/200目，溶劑＝水，甲醇)，然后收集甲醇組分，蒸出溶劑并凍干剩余物，得到50mg(0.05mmol)白色粉狀化合物(20)，收率38.5%。
化合物(20)的物理性質(zhì)Rf＝0.70(MerkHPTLC，氯仿/甲醇/乙酸＝5/3/0.5)
1H NMR(500MHz，DMSOd6+D2O，TMS)δH0.853(6H，t，J＝7.3Hz，-CH3x 2)，1.100-1.360(60H，m，-CH2- x 30)，1.400-1.500(4H，m，-OCH2CH2- x 2)，1.882(3H，s，CH3CONH-)and 2.122(1H，m，H-3eq).
實施例4(ⅰ)化合物(21)的合成
C54H102O3(Mw＝799.36)將化合物(1)(5.8g;32.0mmol)溶于20ml無水二甲基甲酰胺(DMF)中，然后加入3.1g(96.0mmol)60%NaH，并于室溫下將溶液攪拌10分鐘。向溶液中加50.0g(128.4mmol)1-溴二十二烷并于室溫下攪拌溶液6小時。反應(yīng)液通過鈰硅石層過濾，剩余物用乙醚洗滌并于減壓條件下將合并起來的濾液和洗滌液蒸發(fā)至干。剩余物重新溶于乙醚中，所得溶液用0.1NHCl溶液和2.5%碳酸氫鈉溶液洗滌，并用無水硫酸鎂干燥，然后蒸出溶劑，得到28.3g油狀物。該油狀物用柱色譜法提純(800gWacogelC-300;洗脫劑＝己烷/乙酸乙酯＝50/1)，從而得到17.3g化合物(21)(其中含1-溴二十二烷)。產(chǎn)物無需提純即可用于后續(xù)步驟。
(ⅱ)化合物(22)的合成
C47H96O3(Mw＝709.24)將化合物(21)(17.3g;其中含1-溴二十二烷)溶于200ml乙醚/乙酸乙酯/甲醇(1/1/1)混合溶劑中，然后加入1.7g10%披鈀活性炭并于室溫下和氫氣氛中將溶液攪拌2天。反應(yīng)液過濾后的剩余物用氯仿洗滌，并從合并起來的濾液和洗滌液中蒸出溶劑。所得剩余物用柱色譜法提純(MerckCo.，Kieselgel60;洗脫劑＝己烷/乙酸乙酯(5∶1-3∶1))，蒸出溶劑，剩余物用己烷/乙醚重結(jié)晶得到14.5g(20.4mmol)化合物(22)?？偸章?從化合物(1)到化合物(22)為63.4%。
化合物(22)的物理性質(zhì)1H NMR(500MHz，CDCl3，TMS)δH0.880(6H，t，J＝7.0Hz，-CH3x 2)，1.150-1.450(76H，m，-CH2- x 38)，1.500-1.650(4H，m，-OCH2CH2- x 2)and 3.400-3.750(9H，m，
)(ⅲ)化合物(23)和(24)的合成
將已于180℃下加熱減壓干燥后的粉狀4A分子篩(7.1g)，氰化汞(Ⅱ)(2.06g;8.1mmol)和溴化汞(Ⅱ)(2.94g;8.1mmol)懸浮于60ml無水氯仿中，然后加入化合物(22)(5.31g;7.5mmol)并于室溫和氬氣流保護條件下攪拌反應(yīng)液2小時。反應(yīng)液用冰冷卻后加10ml化合物(4)(2.55g;5.0mmol)的氯仿溶液并于室溫下攪拌溶液24小時。反應(yīng)液過濾后所得剩余物用氯仿洗滌并從合并起來的濾液和洗滌液中蒸出溶劑。所得剩余物用柱色譜法提純(WacogelC-300，洗脫劑采用乙醚/乙醇和甲苯/乙酸乙酯體系)，從而得到1.95gα-型(化合物(23))、1.38gβ-型(化合物(24))和1.0g其混合物(總產(chǎn)量4.33g)，收率為73.2%化合物(23)的物理性質(zhì)Rf＝0.68(MerckHPTLC;乙醚/乙醇＝24/1)
1H NMR(500MHz;CDCl3，TMS)δH0.880(6H，t，J＝7.0Hz，-CH3x 2)，1.253(76H，m，-CH2- x 38)，1.882(3H，s，CH3CONH-)，1.976(1H，t，J＝12.5Hz，H-3ax)，2.025(3H，s，CH3COO-)，2.039(3H，s，CH3COO-)，2.132(3H，s，CH3COO-)，2.137(3H，s，CH3COO-)，2.601(1H，dd，J＝4.8，12.8Hz，H-3eq)，3.791(3H，s，-COOCH3)，4.298(1H，dd，J＝2.9，12.5Hz，H-9)，4.852(1H，ddd，H-4)，5.120(1H，d，-CONH-)，5.322(1H，dd，H-7)and 5.371(1H，ddd，H-8).
化合物(24)的物理性質(zhì)Rf＝0.73(MerckHPTLC;乙醚/乙醇＝24/1)1H NMR(500 MHz;CDCl3，TMS)δH0.880(6H，t，-CH3x 2)，1.253(76H，m，-CH2- x 38)，1.882(3H，s，CH3CONH-)，1.898(1H，t，J＝11.7Hz，H-3ax)，2.013(3H，s，CH3COO-)，2.024(3H，s，CH3COO-)，2.064(3H，s，CH3COO-)，2.143(3H，s，CH3COO-)，2.455(1H，dd，J＝4.8，12.8Hz，H-3eq)，3.794(3H，s，-COOCH3)，4.468(1H，dd，J＝2.6，12.5Hz，H-9)and 5.379(1H，dd，H-7).
(ⅳ)化合物(25)的合成
將化合物(23)(1.59g;1.35mmol)溶于約30mlTHF中，然后加入11ml1NNaOH溶液并于室溫下將溶液攪拌7小時。反應(yīng)液用Amberlite IRC-50(PH＝7)中和，然后濾出樹脂，用蒸餾水洗滌樹脂，通過填充(ODS 60 ，YAMAMURA CHEMICAL LABORATORIES;60/200目;溶劑＝水，甲醇)的柱提純合并的濾液和洗滌液，收集甲醇部分，蒸出溶劑并凍干所得剩余物，得到1.19g白色粉狀化合物(25)，收率為86.7%。
化合物(25)的物理性質(zhì)1H NMR(500MHz;CDCl3+CD3OD(1∶1)，TMS)δH0.889(6H，t，J＝7.3Hz，-CH3x 2)，1.150-1.400(76H，m，-CH2- x 38)，1.500-1.700(4H，m，-OCH2CH2- x 2)and 2.030(3H，s，CH3CONH-).
(ⅴ)化合物(26)的合成
將化合物(24)(1.04g;0.88mmol)溶于約20mlTHF中，然后加入5.3ml 1N NaOH溶液并于室溫下將溶液攪拌7小時。反應(yīng)液用Amberlite IRC-50(PH＝7)中和，然后濾出樹脂，用蒸餾水洗滌樹脂，用柱色譜法提純合并的濾液和洗滌液(ODS 60 ，YAMAMURACHEM ICAL LABORATORIES;60/200目，溶劑＝水，甲醇)，收集甲醇部分，蒸出溶劑并凍干所得殘余物得到748mg白色粉狀化合物(26)，收率為83.6%。
化合物(26)的物理性質(zhì)1NMR(500MHz，CDCl3+CD3OD(1∶1)，TMS)δH0.888(6H，t，J＝7.0Hz，-CH3x 2)，1.100-1.450(76H，m，-CH2- x 38)，1.500-1.700(4H，m，-OCH2CH2- x 2)，2.046(3H，s，CH3CONH-).
實施例5(ⅰ)化合物(28)和(29)的合成
將已于180℃加熱減壓干燥過的粉狀4A分子篩(5.0g)、溴化汞(Ⅱ)(2.09g;5.8mmol)和氰化汞(Ⅱ)(1.46g;5.8mmol)或三氟甲烷磺酸銀懸浮于50ml無水氯仿、THF或二氯甲烷中，然后向懸浮液中加入0.92g(2.7mmol)鯊肝醇(S-構(gòu)型)并于室溫和氬氣流保護條件下將溶液攪拌2小時。
反應(yīng)液用冰冷卻后加15ml化合物(27)(2.03g;4.0mmol)的無水氯仿溶液，并于室溫下將溶液攪拌3天。反應(yīng)液過濾后殘余物用氯仿洗滌并從合并的濾液和洗滌中蒸出溶劑。所得殘余物用柱色譜法提純(WacogelC-300;洗脫劑＝乙醚/乙醇體系和甲苯/甲醇體系)，得到1.2g化合物(27)(α-，β-和脫氫-型混合物)。
向化合物(27)中加入30ml乙酸酐和40ml無水吡啶并于室溫下將溶液攪拌18小時。反應(yīng)液減壓蒸發(fā)至干，然后將所得殘余物重新溶于乙酸乙酯中，用飽和碳酸氫鈉溶液和飽和氯化鈉溶液洗滌，溶液再用無水硫酸鎂干燥后蒸出溶劑，得到1.6g殘余物。
所得殘余物用柱色譜法提純(MerckCo.，Kieselgel60;洗脫劑＝乙醚/甲醇(60/1))，然后讓其通過C型lobar柱(洗脫劑＝甲苯/甲醇(15∶1)，得到193.4mgα-型(化合物(28))、171.3mgβ-型(化合物(29))和513.1mg其混合物(共877.8mg)。以鯊肝醇計算的收率為37.8%。
α-型的物理性質(zhì)1H NMR(500MHz，CDCl3，TMS)δH0.884(3H，t，-CH3)，1.888(3H，s，-NHCOCH)，1.949(1H，t，H-3ax)，2.586(1H，dd，H-3eq)，3.817(3H，s，-COOCH3)and 1.870(1H，m，H-4).
β-型的物理性質(zhì)1H NMR(500MHz，CDCl3，TMS)δH0.878(3H，t，-CH3)，1.885(3H，s，-NHCOCH3)，1.898(1H，t，H-3ax)，2.465(1H，dd，H-3eq)，3.800(3H，s，-COOCH3)and 5.219(1H，m，H-4)。
(ⅱ)化合物(30)的合成
向化合物(28)(163.4mg;0.19mmol)中加入1.14ml 1N NaOH溶液并于室溫下將溶液攪拌8小時。反應(yīng)液用陽離子交換樹脂(Amberlite IRC-50;PH＝7)中和，然后濾出樹脂，用蒸餾水洗滌樹脂，將濾液與洗滌液合并后用柱色譜提純(ODS 60
，YAMAMURA CHEMICAL LABORATOR IES，60/200目，溶劑＝水，甲醇)，收集甲醇部分，蒸出溶劑并凍干殘余物，得到112.3mg白色粉狀化合物(30)，收率為89.9%。
化合物(30)的物理性質(zhì)1H NMR(500MHz，C5D5N，TMS)δH0.883(s，-CH3)，2.066(s，-NHCOCH3)，2.349(t，H-3ax)and3.737(q，H-3eq).
(ⅲ)化合物(31)的合成
向147.6mg(0.17mmol)化合物(29)中加入1.02ml 1N NaOH溶液并于室溫下將溶液攪拌8小時。反應(yīng)液用陽離子交換樹脂(Amberlite IRC-50;PH＝7)中和，然后濾出樹脂，用蒸餾水洗滌樹脂，濾液與洗滌液合并后用柱色譜提純(ODS 60 ，YAMAMURA CHEMICAL LABORATORIES;60/200目，溶劑＝水，甲醇)占狀疾糠鄭又姓舫鋈薌斂⒍掣傷貌杏轡錚玫槳咨圩椿銜錚 1)(90mg)，收率為79.5%。
化合物(31)的物理性質(zhì)1H NMR(500MHz，C5D5N，TMS)δH0.892(s，-CH3)，2.010(s，-NHCOCH3)，2.400(t，H-3ax)and3.079(q，H-3eq)。
如上所詳述，已確證可按本發(fā)明方法制得含唾液酸的脂衍生物的鈉鹽形式的新型唾液酰甘油脂。
還已證明，本發(fā)明方法可簡化唾液酰甘油脂的制備步驟并提高其收率。
權(quán)利要求
1.以下通式(Ⅰ)的唾液酰甘油脂
是式中R1為氫原子或基團CH3CO-；R2為堿金屬、氫原子或低級烷基；R3為氫原子或基團CnH2n+1-(n為1～30的整數(shù))；R4為基團CmH2m+1(m為1～30的整數(shù))。
2.權(quán)利要求1所述唾液酰甘油脂，其中R2為鈉原子。
3.權(quán)利要求1所述唾液酰甘油脂，其中R3為氫原子或基團Cn H2n+1-(n為整數(shù)6、10、18或22)。
4.權(quán)利要求1所述唾液酰甘油脂，其中R4為基團Cm H2m+1-(m為整數(shù)6、10、18、或22)。
5.權(quán)利要求1所述唾液酰甘油脂，其中R2為鈉原子，R3為氫原子或基團Cn H2n+1-(n為整數(shù)6、10、18或22)，R4為基團Cm H2m+1-(m為整數(shù)6、10、18或22)。
6.制備以下通式(Ⅲ)所示的唾液酰甘油脂的方法
式中M為堿金屬，R3為氫原子或基團Cn H2n+1-(n為1～30的整數(shù))，R4為基團Cm H2m+1-(m為1～30的整數(shù))，該方法包括，在堿性含水溶劑中處理以下通式(Ⅱ)所示的化合物
式中R5為基團CH3CO-;R6為氫原子或低級烷基;R3、R4定義同上。
7.權(quán)利要求6所述方法，其中M為鈉原子。
8.權(quán)利要求6所述方法，其中R3為氫原子或基團Cn H2n+1-(n為整數(shù)6、10、18或22)。
9.權(quán)利要求6所述方法，其中R4為基團Cm H2m+1-(m為整數(shù)6、10、18或22)。
10.權(quán)利要求6所述方法，其蠷2為鈉原子，R3為氫原子或基團Cn H2n+1-(n為整數(shù)6、10、18或22)，R4為基團Cm H2m+1-(m為整數(shù)6、10、18或22)。
11.權(quán)利要求6所述方法，其中水解在堿性條件下，在四氫呋喃、甲醇或乙醇中進行。
全文摘要
本發(fā)明提供下式(I)的唾液酰甘油脂，式中R
文檔編號A61P25/00GK1033056SQ8810772
公開日1989年5月24日 申請日期1988年11月10日 優(yōu)先權(quán)日1987年11月10日
發(fā)明者吉村昌治, 松崎祐二, 杉本守, 伊藤正善, 志馬善保, 小川智也 申請人:美克德株式會社