專利名稱:脫乙酰氨基葡糖-雙(脫氫)-脫氧太可普蘭尼衍生物的制作方法
本發(fā)明的主題是關(guān)于一類新型抗菌素，即以下結(jié)構(gòu)式Ⅰ的脫(乙酰氨基葡糖基(acetylglucosaminyl))-雙(脫氫)-脫氧太可普蘭寧(teicoplanin)衍生物及其加成鹽
式中X和Y各自獨立地表示零或一個附加鍵，A表示氫或N-〔(C10-C11)脂肪酰基〕-β-D-2-脫氧-2-氨基吡喃葡糖基，M表示氫或α-D-吡喃甘露糖基，R0當(dāng)Y為一個附加鍵時表示零，當(dāng)Y為零時表示氫，附帶條件是當(dāng)X為一個附加鍵時y必須是零，而當(dāng)x是零時y只能是一個附加鍵，并且當(dāng)M表示氫時，A也必須表示氫。
在本說明書和權(quán)利要求
中，(C10-C11)脂肪?；鶠?0或11個碳原子的飽和或不飽和的脂肪?；?，優(yōu)先的(C10-C11)脂肪?；睦邮荶-4-癸烯酰、8-甲基壬酰、癸酰、8-甲基癸酰以及9-甲基癸酰。
當(dāng)A和M表示如上定義的糖基時，它們通過0-甙鍵與分子主核相連。
本發(fā)明的一組優(yōu)選化合物包括x為零、y為一個附加鍵的那些式Ⅰ化合物。
本發(fā)明的另一組優(yōu)選化合物是酰胺鍵36、37具有反式構(gòu)型的那些式Ⅰ化合物。
本發(fā)明最優(yōu)選的一組化合物是x為零，y為一個附加鍵以及酰胺鍵36、37為反式構(gòu)型同時滿足時，結(jié)構(gòu)式Ⅰ所表示的化合物。
本發(fā)明的化合物具有抗菌活性，主要是抗革蘭氏陽性菌，還有抗某些凝固酶陰性葡萄球菌的活性。這些化合物是用太可普蘭寧、太可普蘭寧的成分(factor)、組元(component)或假糖苷配基，在極性有機溶劑中，在一定的堿性條件下發(fā)生反應(yīng)來制備的。
太可普蘭寧是國際上一種抗菌素的非專有名稱(INN)，這種抗菌素以前叫作磷壁霉素，它是在含碳、氮和無機鹽的可吸收源的培養(yǎng)基中通過培養(yǎng)游動放線菌的磷壁菌屬新種ATCC31121菌株(Actinoplanes teichomyceticus nov.sp.ATCC31121)而獲得的(見美國專利4，239，751號)。按照這項美國專利所敘述的方法，可以從分離的發(fā)酵肉湯中用適當(dāng)?shù)姆撬苄杂袡C溶劑提取，并按照常規(guī)操作從提取液中析出沉淀，從而回收到一種含磷壁霉素A1、A2和A3的抗菌素復(fù)合物。
然后將磷壁霉素A2〔它是分離出來的抗菌素復(fù)合物中的主要成份(major factor)〕用柱色譜法在Sephadex 上把它與其它成分分開。
英國專利申請公告2121401號中指出，有抗菌作用的磷壁霉素A2實際上是五種密切相關(guān)的共生的(CO-produced)主要組元的混合物。
最近的結(jié)構(gòu)研究結(jié)果表明，可以用下面的結(jié)構(gòu)式Ⅱ表示太可普蘭寧A3(以前稱為磷壁霉素A2)的主要組元1、2、3、4和5
式中A表示-N〔(C10-C11)脂肪酰基〕-β-D-2-脫氧-2-氨基吡喃葡糖基，B表示N-乙酰-β-D-2-脫氧-2-氨基吡喃葡糖基，M表示-D-吡喃甘露糖基。具體些說，在太可普蘭寧A2的組元1、2、3、4和5中，〔(C10-C11)脂肪?；橙〈来畏謩e為Z-4-癸烯酰、8-甲基壬酰、癸酰、8-甲基癸酰和9-甲基癸酰。
當(dāng)上述糖基部分存在時，它們都是通過O-甙鍵與太可普蘭寧核相連。
另外還發(fā)現(xiàn)，采用將一個或二個糖基選擇性水解的方法，可以把太可普蘭寧、太可普蘭寧的一種純成分或者其任何幾種成分按任何比例構(gòu)成的混合物轉(zhuǎn)化成單一的抗菌素產(chǎn)物。這些產(chǎn)物稱為抗菌素L17054和抗菌素L17046，有關(guān)它們的描述分別見歐洲專利申請公告119575號和119574號。
制備抗菌素L17054的較好的水解條件是使用0.5N鹽酸在70-90℃溫度下水解，水解時間一般為15-90分鐘。
當(dāng)A為氫，B為N-乙酰-D-2-脫氧-2-氨基吡喃葡糖基，M為α-D-甘露吡喃糖基，且M的糖部分是通過O-甙鍵與肽核相連時，結(jié)構(gòu)式Ⅱ表示的就是抗菌素L17054。
制備抗菌素L17046的較好水解條件是使用1～3N鹽酸，水解溫度為50-90℃，水解時間一般為30-60分鐘。
當(dāng)A和M為氫原子，B為N-乙酰-β-D-2-脫氧-2-氨基吡喃葡糖基，且B的糖部分同樣通過O-甙鍵與肽核相連時，結(jié)構(gòu)式Ⅱ即代表抗菌素L17046。
如果使太可普蘭寧化合物的所有糖部分全部選擇性裂解，就得到一個糖苷配基分子，叫做抗菌素L17392或脫葡糖太可普蘭寧，即A、B和M都為氫時的上面結(jié)構(gòu)式Ⅱ的化合物。歐洲專利申請84114558.4號敘述了這種選擇性水解過程。
歐洲專利申請公告0090578號披露了一個具有相同結(jié)構(gòu)式的化合物，叫做抗菌素A41030成分B。這種化合物是通過一種微生物方法獲得的，該方法包括將菌種維及尼鏈霉菌屬(Streptomycesvirginiae)NRRL12525或維及尼鏈霉菌屬NRRL15156在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基中發(fā)酵，離析，提純并分離成抗菌素A41030(這是由包括抗菌素A41030成分B在內(nèi)的至少七個成分構(gòu)成的復(fù)合物)的各個組分。
以上命名的化合物中的一些，即太可普蘭寧、太可普蘭寧A2復(fù)合物、太可普蘭寧A2組元1、太可普蘭寧A2組元2、太可普蘭寧A2組元3、太可普蘭寧A2組元4、太可普蘭寧A2組元5、抗菌素L17054、抗菌素L17046以及這些化合物按任意比例構(gòu)成的混合物，都是制備本發(fā)明衍生物的適宜起始原料。
在本說明書和權(quán)利要求
中，“太可普蘭寧起始原料”指的是上述起始原料中的任何一種，即按照美國專利4，239，751號制得的太可普蘭寧;其進(jìn)一步純制的產(chǎn)物;太可普蘭寧A2復(fù)合物;當(dāng)A表示氫或-N〔(C10-C11)脂肪?；?β-D-2-脫氧-2-氨基吡喃葡糖基((C10-C11)脂肪酰基意義同前)，B表示氫或N-乙酰-β-D-2-脫氧-2-氨基吡喃葡糖基，M表示氫或α-D-吡喃甘露糖基時，且在A、B及M不同時為氫，M僅在A表示氫時才表示氫的條件下，結(jié)構(gòu)式Ⅱ所表示的化合物;以及它們的鹽;或者這些化合物以任何比例組成的混合物。
本發(fā)明的化合物主要是在有控制的堿性條件下處理適當(dāng)?shù)钠鹗荚隙频玫?，在這種條件下，太可普蘭寧原料分子中的N-乙酰-β-D-2-脫氧-2-氨基葡糖基可以被有選擇地脫去。
Barna J.C.J.等人曾經(jīng)在“太可普蘭寧抗菌素的差向異構(gòu)體衍生物的結(jié)構(gòu)與構(gòu)象”一文〔見抗菌素雜志(Antibiotics)，37∶1204-1208(1984)〕中敘述了太可普蘭寧或它的一種成分、組元、假糖苷配基或糖苷配基的堿處理過程。但是該文中描述的堿處理的結(jié)果是3位上總發(fā)生差向異構(gòu)，從而得到低活性的抗菌素。
制備本發(fā)明化合物的方法中所用的堿性條件能夠從太可普蘭寧起始原料中除去N-乙酰-β-D-2-脫氧-2-氨基吡喃葡糖基，同時對其它糖部分沒有影響。由于太可普蘭寧起始原料中的所有糖部分(如果存在的話)都是通過甙鍵與分子的肽“核”相連的，所以能夠只除去其中一個糖部分(即N-乙酰-D-2-脫氧-2-氨基吡喃葡糖基部分)的選擇性條件是必需的。而且這些選擇性條件還必須在分子的任何手性中心上不產(chǎn)生差向異構(gòu)，或差向異構(gòu)的速率很低。
現(xiàn)在已找到了由適當(dāng)?shù)奶善仗m寧起始原料制備本發(fā)明化合物的適宜的、有控制的堿性條件，包括使原料在極性有機溶劑中，在有強堿存在下，同時在低于60℃的溫度下反應(yīng)。
極性有機溶劑的例子有低級鏈烷醇、低級烷基碳酰胺、低級烷基硫酰胺、低級烷基磷酰胺、低級烷基亞砜、低級烷基砜等以及它們的混合物。
上述的低級鏈烷醇是1～4個碳原子的鏈烷醇，包括甲醇、乙醇、丙醇、1-甲基乙醇、丁醇和2-甲基丙醇。
上面的“低級烷基”一詞是指含1、2、3或4個碳原子的烷基。
低級烷基碳酰胺的例子有二甲基甲酰胺、二乙基甲酰胺等。優(yōu)先的低級烷基亞砜是二甲亞砜，優(yōu)先的低級烷基砜是二甲砜，而優(yōu)先的低級烷基磷酰胺是六甲基磷酰三胺。
根據(jù)實施本發(fā)明方法的一個具體做法，上面定義的極性有機溶劑是一個極性的質(zhì)子惰性有機溶劑與極性的質(zhì)子活性有機溶劑的混合物。在如上定義的那些有機溶劑中，優(yōu)選的極性質(zhì)子惰性溶劑是叔烷基酰胺、二烷基亞砜以及二烷基砜，而優(yōu)選的極性質(zhì)子活性溶劑是低級鏈烷醇。
從起始原料中置換N-乙酰-D-2-脫氧-2-氨基吡喃葡糖基團所用的堿性條件是用強堿達(dá)到的。所述強堿的優(yōu)先例子是堿金屬氫氧化物、堿金屬氧化物和含1、2、3或4個碳原子的堿金屬烷氧化物的濃水溶液。堿金屬最好是鈉或鉀，烷氧基團最好是甲氧基、乙氧基、丙氧基及丁氧基。
如果該堿是堿金屬烷氧化物，那么極性有機溶劑最好是相應(yīng)的醇與如上定義的極性質(zhì)子惰性溶劑的混合物。為使本發(fā)明反應(yīng)過程有效地進(jìn)行，反應(yīng)環(huán)境中必須含有一定量的水。通常，這些水早已存在于起始原料中，因為在許多情況下這些原料是水合物。
當(dāng)該強堿是堿金屬的氫氧化物或氧化物時，水量最好是0.5-2%(重量百分比)，或者相對起始原料來說過量15-20摩爾。水量過多會由于助長副反應(yīng)而發(fā)生不良影響。
反應(yīng)溫度也需要控制，一般保持在60℃以下，以0-50℃為宜，采用室溫最好而且最方便。反應(yīng)時間隨其它反應(yīng)參數(shù)而變。由于反應(yīng)過程可以通過TLC(薄層色譜)或HPLC(高效液相色譜，比前者更好)進(jìn)行跟蹤，所以熟練的操作人員能夠控制反應(yīng)條件并確定反應(yīng)在什么時候才算完成。
本發(fā)明方法的一個較佳實例如下述在如上所述的方法中，極性有機溶劑為二甲基甲酰胺(DMF)與二甲亞砜(DMSO)的混合物，強堿為氫氧化鈉或氫氧化鉀的濃水溶液，反應(yīng)溫度為室溫。最好是，DMF與DMSO之體積比為4∶1-3∶2，而氫氧化鈉或氫氧化鉀的濃度在85與90%(重量比)之間。
本發(fā)明方法的另一較佳實例如下述在上述方法中，強堿為上述堿金屬烷氧化物，極性有機溶劑是與所說烷氧化物對應(yīng)的醇，同時還可以有或沒有極性質(zhì)子惰性溶劑(最好是二甲基甲酰胺)存在。較好的強堿與極性有機溶劑的混合物是1-10%的甲醇鈉甲醇溶液-二甲基甲酰胺混合液。
當(dāng)起始原料是太可普蘭寧A2時，得到的是34位上沒有N-乙酰-D-2-脫氧-2-氨基吡喃葡糖基(見結(jié)構(gòu)式Ⅰ)，在35、52位上有一個C-N雙鍵(x為零，y為附加鍵)的相應(yīng)化合物，鑒定結(jié)果表明它是下面表Ⅰ中的化合物Ⅰ。同樣，在用太可普蘭寧組元作起始原料時，得到35、52位上有一個C-N雙鍵的相應(yīng)的脫糖基衍生物。若起始原料是抗菌素L17054，也得到在35，52位置上具有C-N雙鍵的相應(yīng)的脫糖基化合物，它被鑒定為表Ⅰ中的化合物Ⅱ。NMR分析結(jié)果與已知結(jié)構(gòu)的比較表明，相對于起始原料來說，在這兩個新化合物中，整個分子的構(gòu)型沒有發(fā)生明顯變化，也就是說，從M代表D-吡喃甘露糖基、其它取代基的定義如上的結(jié)構(gòu)式Ⅱ化合物出發(fā)，在強堿條件下處理，可以得到x為零、y為附加鍵的相應(yīng)化合物。
當(dāng)起始原料是抗菌素L17046(即A和M為氫原子、其它取代基的定義同上的結(jié)構(gòu)式Ⅱ原料)時，得到在34、35位上帶C-C雙鍵的相應(yīng)的脫糖基化合物。在這種情況下，使用不同的堿性條件，可得到化合物Ⅳ或化合物Ⅴ。具體來說，如果延長反應(yīng)時間或使用最強的堿性條件，那么在上述堿性條件下處理抗菌素L17046所得到的產(chǎn)物是化合物Ⅳ。反之，化合物Ⅴ是在較溫和的條件下得到的，例如用過量50-100摩爾的堿金屬烷氧化物，并在相應(yīng)醇存在下，在室溫下處理24-72小時。如果反應(yīng)時間更長，化合物Ⅴ就將完全轉(zhuǎn)變成化合物Ⅳ。在弱酸性條件下，化合物Ⅳ還可以轉(zhuǎn)變成化合物Ⅲ，即A和M為氫、x為零、y為雙鍵的結(jié)構(gòu)式Ⅰ化合物(見表Ⅰ)?；衔铫艮D(zhuǎn)化為化合物Ⅲ的典型弱酸性條件是用無機酸水溶液，通常為0.5-1N的鹽酸達(dá)成的。
采用強酸性水解，化合物Ⅰ或化合物Ⅱ也可轉(zhuǎn)變?yōu)榛衔铫?。這時要用醚、酮或它們的混合物作溶劑。這些溶劑在室溫下應(yīng)是液體。這里所說的“醚”包括環(huán)醚和二醚(di-ethers)?！懊选钡膬?yōu)先的具體實例可用以下結(jié)構(gòu)通式表示
其中R和R1各自獨立地選自1-8個碳原子的烷基、5-8個碳原子的環(huán)烷基、苯基和苯基(C1-C4)烷基，或R與R1合并而與氧原子一起形成完全氫化的五至十元雜環(huán);n是整數(shù)2或3;R2和R3各自獨立地選自1-4個碳原子的低級烷基、苯基和苯基(C1-C4)烷基，或R2與R3合并而與-O-(CH2)n-O-基團在一起形成五到十元全氫化雜環(huán)結(jié)構(gòu)?！巴痹谶@里指的是3-8個碳原子的脂肪酮，并包括5-8個碳原子的脂環(huán)酮，可用下面的通式表示
其中R4和R5相互獨立地選自1-6個碳原子的低級烷基，條件是在通式中總碳數(shù)不大于8，或者R4和R5連在一起形成4-7個碳原子的多亞甲基鏈。在上面列出的這些溶劑中，特別推薦下面幾種用于這類酸性水解反應(yīng)四氫呋喃、四氫吡喃、1，2-二甲氧基乙烷、1，2-二乙氧基乙烷、二氧陸環(huán)以及它們的混合物。所用溶劑與原料太可普蘭寧化合物相比一般是大大過量的。盡管可根據(jù)特定的溶劑及其溶解能力和沸點來確定各種情況下最合適的溶劑量，但一般來說，每克原料太可普蘭寧化合物用10-50毫升有機溶劑來進(jìn)行這類酸水解是比較好的。
進(jìn)行強酸性水解反應(yīng)所需的強酸可從強無機酸和強有機酸中選擇，在強無機酸中，鹽酸、氫溴酸、濃硫酸和濃磷酸較好。在強有機酸中，α-鹵代低級脂肪酸、鏈烷磺酸、多氟鏈烷磺酸、環(huán)烷磺酸和芳基磺酸是較好的，其中最好的是下面幾種三氟乙酸、三氯乙酸、甲磺酸、乙磺酸、三氟甲磺酸及對甲苯磺酸。特別是用95-98%(重量濃度)的硫酸和85-98%(重量濃度)的正磷酸效果最好。有機酸中最好用98%(重量濃度)的甲磺酸和98%(重量濃度)的三氟乙酸。
在10-50℃溫度下，用強有機酸(如75-95%三氟乙酸水溶液)進(jìn)行有控制的酸性水解還可以把化合物Ⅰ轉(zhuǎn)變成化合物Ⅱ。較好的酸是90%的三氟乙酸;反應(yīng)溫度最好是室溫。
在本說明書和權(quán)利要求
書中，雖然使用了“溶劑”一詞，但根據(jù)本發(fā)明的方法，不論是原料太可普蘭寧化合物還是(或者)最終的結(jié)構(gòu)式Ⅰ的抗菌素產(chǎn)物都沒有必要完全溶解在反應(yīng)溶劑中而形成均相反應(yīng)溶液。不過，原料太可普蘭寧化合物在反應(yīng)溫度下還是需要充分溶解于極性有機溶劑和強堿的混合物中，這就是說，原料太可普蘭寧化合物在溶液中的濃度不能太低，否則反應(yīng)速度太慢并且(或者)在試驗階段或在工業(yè)規(guī)模生產(chǎn)中，需使用大量溶劑。
表Ⅰ列出了本發(fā)明的一些有代表性的化合物。
下表(表Ⅱ)列出了分析結(jié)果，鹽形式、快原子轟擊質(zhì)譜(FAB)上的(M+H)+峰、電位分析和高壓液相色譜(HPLC)分析結(jié)果。
對C、H、N、Cl的元素分析結(jié)果在理論值的±0.4%之內(nèi)。用熱重分析(TGA)測定的重量損失量(溶劑含量)總是約為6-7%。900℃下在氧氣中測定的無機殘渣量始終小于0.3%分析結(jié)果針對的是表Ⅱ中所指明的鹽形式。
記錄FAB-MS正離子圖譜用的是裝有標(biāo)準(zhǔn)FAB源和高場磁鐵的kratos MS-50質(zhì)譜儀。樣品分散在硫甘油∶雙甘油為1∶1(體積比)的混合物中，用6-9千電子伏的氙原子來轟擊。
酸堿滴定(pkMCS)是在加入適量的0.01N鹽酸后用0.01N氫氧化鈉在2-甲氧基乙醇〔甲基纖維素
(Methyl Cellosolve
)〕/水為4∶1(體積比)的溶液中進(jìn)行的。所給當(dāng)量(EW)已對溶劑含量和無機雜質(zhì)進(jìn)行了校正。
HPLC分析是在配有20微升Rheodyne7125型進(jìn)樣器和254毫微米紫外檢測器的Varian型5000液相色譜泵上進(jìn)行的。
色譜柱(1)填充有30微米Perisorb RP-8(Merck公司產(chǎn)品)的5厘米前置柱，(2)后接預(yù)填10微米Li-Chrosorb RP-8的25厘米Hiber RT250-4柱(Merck公司產(chǎn)品)。色譜條件流動相A0.2%的甲酸銨水溶液;流動相B100%乙腈;在2毫升/分鐘的流速下，在30分鐘內(nèi)，線性梯度為A中的B從15-35%;進(jìn)樣量為20微升。用稀釋到足以獲得1毫克/毫升最終濃度的溶液進(jìn)樣來跟蹤反應(yīng)。最終產(chǎn)物是通過用每10毫克產(chǎn)物溶于10毫升乙腈0.2%甲酸銨溶液(對化合物Ⅲ則是0.1N鹽酸)為1∶1(體積比)的混合物中所得的溶液20微升進(jìn)樣來檢驗的。
本發(fā)明的化合物的抗菌活性可在體外通過標(biāo)準(zhǔn)的瓊脂稀釋試驗進(jìn)行測定。分別用Isosensitest肉湯(Oxoid)和Todd Hewitt肉湯(Difco)來培養(yǎng)葡萄球菌和鏈球菌。肉湯培養(yǎng)基被稀釋到最終接種物為104個菌落形成單位/毫升(CFU/ml)。最小抑制濃度(MIC)認(rèn)為是在37℃下培養(yǎng)18-24小時而觀察不到細(xì)菌生長的最低濃度。結(jié)構(gòu)式Ⅰ的代表性化合物的抗菌試驗結(jié)果(MIC)匯總于下面的表Ⅳ中
表Ⅵ體外抗菌活性(MIC，mg/ml)生物體 化合物Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ金葡菌0.5 0.25 0.25 1 2ATCC6538金葡菌0.5 0.25 0.25 1 4TOUR表皮葡萄球菌0.25 0.5 0.12 0.12 0.4ATCC12228化膿性葡萄球菌0.06 2 1 4 8C203肺炎鏈球菌0.06 2 1 4 8UC41糞鏈球菌1 1 1 8 16ATCC7080大腸埃希氏菌＞128 ＞128 ＞128 ＞128 ＞128SKF12140普通假桿菌＞128 ＞128 ＞128 ＞128 ＞128ATCC881
在一個代表性的實驗中，測試了化合物Ⅲ，即35，52-二脫氫-34-脫氧-太可普蘭寧糖苷配基抵抗一些臨床上分離出來的凝固酶陰性葡萄球菌的能力。以下表Ⅶ所列是試驗結(jié)果及其與太可普蘭寧的比較。MIC是以微量滴定法，采用Iso-Sensitest肉湯(Oxoid公司)測定的，每毫升接種物內(nèi)大約含104個菌落形成單位(CFU)。
表Ⅶ體外抗凝固酶-陰性葡萄球(臨床分離物)的活性MIC(微克/毫升)生物體 太可普蘭寧化合物Ⅲ表皮葡萄球菌L1378 0.125 0.5S.Simulans＊L785 0.125 0.25人型鏈球菌＊L1142 0.125 0.125S.hominis L1070 0.125 0.25S.warneri L1375 1 2S.haemoliticus L1520 0.5 4＊對甲氧苯青霉素有抗性本發(fā)明的化合物除了具有體外抗菌活性外，在體內(nèi)實驗中也表現(xiàn)出抗菌活性。特別是在V.Arioli等人所述的對老鼠進(jìn)行的實驗性感染中〔見抗菌素雜志(Journal of Antibiotics)，29卷，511頁(1976)〕，化合物Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ分別表現(xiàn)出0.35、5.8和5毫克/公斤的ED50(半數(shù)有效量)值。
從上述的抗菌活性看來，本發(fā)明的化合物可作為用于人的抗菌制劑以及獸藥中的有效活性成分，用來預(yù)防和治療那些由對這類活性成分敏感的病菌所引起的傳染性疾病。在這種治療中，本發(fā)明化合物既可單獨使用，也可按任意比例混合使用。本發(fā)明化合物可以口服、局部使用或腸胃外給藥，但最好是腸胃外給藥。根據(jù)給藥途徑，這些化合物可配制成不同的劑型。口服制劑可以是膠囊、片劑、溶液或懸浮液。正如在本技術(shù)領(lǐng)域：
中熟知的，膠囊和片劑中除活性成分外還可以含有賦形劑，例如稀釋劑(例如乳糖、磷酸鈣、山梨糖醇等)、潤滑劑(例如硬脂酸鎂、滑石粉、聚乙二醇)、粘合劑(例如聚乙烯基吡咯烷酮、明膠、山梨糖醇、黃蓍膠、阿拉伯膠等)、調(diào)味劑以及可接受的崩解劑和濕潤劑。液體制劑的形式一般是水或油性的溶液或懸浮液，其中可含有懸浮劑等傳統(tǒng)添加劑。局部使用時，本發(fā)明化合物還可制成適于通過鼻腔和咽喉或支氣管組織粘膜吸收的劑型，它們適于做成液體噴霧劑或吸入劑、錠劑或咽喉涂劑等形式。醫(yī)治眼或耳時可使用液態(tài)或半液態(tài)藥劑。局部使用的藥劑可配成疏水或親水基質(zhì)，象軟膏、乳劑、洗滌劑、涂劑或粉末。直腸給藥時，本發(fā)明化合物是以與常規(guī)賦形劑(例如可可油、蠟、鯨腦油或聚乙二醇及其衍生物)混合而成的栓劑形式用藥的。注射劑可以是在油或水媒介中的懸浮液、溶液或乳濁液，其中可以含懸浮劑，穩(wěn)定劑及(或)分散劑等添加劑。
另外，活性成分可以是粉末形式，用藥時可用合適的賦形劑如滅菌水進(jìn)行調(diào)制。
活性成分的用量取決于多種因素，例如治療對象的體重和病情、給藥方式和次數(shù)，以及發(fā)病原因等等。
本發(fā)明化合物的有效劑量一般是每千克體重大約0.5到30毫克活性成分，且每天最好分2至4次服用。特別是，最好將藥劑制成單位藥劑形式，每單位藥劑中含有20-300毫克活性成分。制造藥劑的典型例子如下把100毫克化合物Ⅰ溶解在2毫升滅菌水中制成注射液。注射液的另一個例子是250毫克化合物Ⅱ在3毫升無菌水中的溶液。用200毫克化合物Ⅲ和3.6克聚乙二醇400U.S.P(美國藥典)或6.2克聚乙二醇4000U.S.P配制成一種局部使用的軟膏。
除了作為藥物中的抗菌活性成分外，本發(fā)明的化合物還可用作動物生長促進(jìn)劑。為此目的，可在適當(dāng)飼料中添加一種或多種本發(fā)明化合物供口服?；衔锏恼_用量應(yīng)該是在飼料消耗量正常的情況下，加入的活性劑能有效地促進(jìn)動物生長。向動物飼料中添加本發(fā)明活性化合物時最好分兩步進(jìn)行先配成一種適宜的含有效量活性化合物的飼料預(yù)混物，然后再把預(yù)混物與全部定量飼料混合。另一種方法是，把中間濃縮物或含有活性成分的補充飼料摻混到飼料中。預(yù)混物和全部定量飼料的制作及喂食方法在參考書(例如《實用動物營養(yǎng)》(Applied Animal Nutrition)W.H.Freedman，和S.Franoisco，USA，1969或《家禽飼料與喂養(yǎng)》(Lives-tock Feeds)，O and B Books，Corvallis，Oregon U.S.A.，1977)中已有敘述，并收編于此以供參考。
以下實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
實施例142-α-D-甘露糖基-56-N-乙酰-β-D-氨基葡糖基-35，32-二脫氫-34-脫氧太可普蘭寧配基(化合物Ⅰ)的制備先把23克(12毫摩爾)太可普蘭寧(約含15%重量濃度的水)溶解在2.5升DMF/DMSO(3∶2，體積比)混合物中，然后在室溫和攪拌下，把50克(0.75摩爾)85%的商品KOH溶于1升甲醇后所得的溶液滴加到上述溶液中，結(jié)果形成懸浮液。在相同溫度下攪拌此懸浮液24小時(反應(yīng)容器用堿石灰閥密封)。在10℃下放置48小時后，加入1升甲醇。將所得棕色溶液在室溫下攪拌2小時。加入1升乙醚，收集析出的固體并將其懸浮在1升甲醇中。收集其中的不溶物，用1升乙醚洗滌，再在室溫下用P2O5真空干燥過夜，得到21克以相應(yīng)鉀鹽形式存在的標(biāo)題化合物粗品。
取7克上述粗鉀鹽溶于400毫升CH3CN/H2O〔1∶2(體積比)〕的混合液，所得混濁液體用冰乙酸調(diào)節(jié)pH值到2.8，再加入25克硅烷化硅膠(Silicagel 60，Merck公司產(chǎn)品;0.06-0.02毫米)和500毫升丁醇。在減壓條件下將溶劑完全蒸發(fā)，剩余物放到色譜柱的頂端中。此柱裝填有1.5千克同樣的硅烷化硅膠，并充有0.01M的磷酸二氫銨水溶液。色譜柱的展開條件是線性梯度為在0.5%乙醇水溶液中乙腈從10%到70%，時間為30小時，流速為300毫升/小時。展開后每個譜帶收集25毫升，用HPLC進(jìn)行檢驗。把所有含標(biāo)題化合物復(fù)合物的5個純組元都集中起來，加入丁醇，濃縮混合物除去全部乙腈和水。加5毫升1NHCl后再濃縮溶液至小體積。再加入乙酸乙酯，出現(xiàn)固體沉淀。濾出沉淀后用乙醚洗滌，室溫下真空干燥過夜，得到5.04克純標(biāo)題化合物的鹽酸鹽。
b)內(nèi)鹽的制備。
將1.7克(1毫摩爾)上述鹽酸鹽溶于200毫升水-乙腈(2∶1，體積比)的混合液中，所得溶液用0.1N NaOH調(diào)節(jié)到pH＝6。加入80毫升丁醇，把混合物濃縮至最終體積約為40毫升，濾出析出的固體，用50毫升水和丙酮-乙醚(1∶2，體積比)的混合物洗滌，室溫下真空干燥48小時(用P2O5)，得到1.4克標(biāo)題化合物的內(nèi)鹽。
實施例242-α-D-甘露糖基-35，52-雙脫氫-34-脫氧太可普蘭寧配基的制備(化合物Ⅱ)a)以抗菌素L17054為原料(1)1.8克(27毫摩爾)85%商品KOH溶于200毫升甲醇中，得溶液(1);(2)1.1克(0.7毫摩爾)抗菌素L17054溶于300毫升DMF-DMSO(3∶2，體積比)的混合物中，得溶液(2)。室溫下攪拌溶液(2)，并將溶液(1)加入其中。所得懸浮液在相同溫度下攪拌30小時。然后加入800毫升乙醚。收集產(chǎn)生的沉淀，用乙醚洗，室溫下真空干燥過夜，得1.2克標(biāo)題化合物的鉀鹽粗品。然后用柱色譜法純制。所用色譜柱填充有750克硅烷化硅膠，在以上對于化合物Ⅰ所描述的條件下進(jìn)行分離，但線性梯度洗脫用5%～35%的乙腈水溶液，時間為24小時，流速為250毫升/小時。收集含純標(biāo)題化合物的譜帶，按實施例1所述方法處理。除去乙腈和水后，將1毫升1N鹽酸加入到所得丁醇溶液中，濃縮此溶液使其最終體積為40毫升左右。加入乙醚后，有固體析出，過濾收集此固體，用乙醚洗，在35℃真空干燥過夜，得0.6克標(biāo)題化合物的鹽酸鹽。
b)以化合物Ⅰ為原料ⅰ)把5克(3毫摩爾)按前述實施例1方法制得的化合物1溶于60毫升90%的三氟乙酸(TFA)水溶液中，所得溶液分別在5℃和室溫下攪拌10分鐘和90分鐘。然后加入240毫升乙醚，收集析出的沉淀。再將沉淀重新溶于200毫升甲醇中，濾去不溶物，減壓濃縮濾液至小體積。加入乙醚后，收集析出的固體，用乙醚洗，在35℃真空干燥過夜，得到3.96克純標(biāo)題化合物的三氟乙酸酯。
ⅱ)把6克(3毫摩爾)化合物Ⅰ的鉀鹽粗品(滴定值為85%，用HPLC峰面積百分比表示;雜質(zhì)是未確定的副產(chǎn)物)溶于100毫升90%TFA水溶液中。所得溶液分別在0℃和室溫下攪拌15分鐘和2小時。室溫下減壓除去全部溶劑，油狀剩余物溶于150毫升水-乙腈(1∶1，體積比)的混合物中，所得溶液用300毫升水稀釋后加到一個色譜柱頂端，此色譜柱裝有750克硅烷化硅膠，并充有0.5%甲酸銨水溶液-乙腈(90∶10，體積比)混合液。色譜柱先用500毫升水-乙腈(85∶15，體積比)混合液洗，然后進(jìn)行展開(條件線性梯度乙腈在0.001N鹽酸中從15%到30%;時間為24小時;流速為250毫升/小時)。各譜帶均收集25毫升，將其中含純標(biāo)題化合物的集中起來。收集出現(xiàn)的似晶體產(chǎn)物，用乙腈-乙醚(1∶2，體積比)混合液洗，室溫下用P2O5真空干燥過夜，得到0.85克純標(biāo)題化合物的內(nèi)鹽。母液中加入足量丁醇后濃縮，最后得到約200毫升干燥的丁醇懸浮液。加入3毫升1N鹽酸后，懸浮液變成清溶液，將其減壓濃縮至小體積。再加入乙醚，濾出析出的固體，用乙醚洗，室溫下用KOH顆粒真空干燥過夜，得到2.3克純凈的標(biāo)題化合物的鹽酸鹽。
實施例335，52-雙脫氫-34-脫氧太可普蘭寧配基(化合物Ⅲ)的制備a)以化合物Ⅰ為原料攪拌0.6克化合物Ⅰ(其制備見實施例1)在50毫升二甲氧基乙烷(DME)中的懸浮液，同時緩慢地向其中鼓入干燥的HCl氣，要保持液體內(nèi)部溫度在15-20℃。數(shù)小時后懸浮液變成清溶液。減壓蒸發(fā)此溶液至干。剩余物溶于100毫升水-乙腈(75∶25，體積比)的混合液中，所得溶液放入含100克硅烷化硅膠且充有水的色譜柱頂端。色譜柱在下述條件下展開線性梯度洗脫，乙腈在0.001N鹽酸中從25-60%;時間為20小時;流速為150毫升/小時。各譜帶收集15毫升。集中含純化合物Ⅲ的譜帶，加入足量丁醇后濃縮之，得到約100毫升干燥的丁醇溶液。加入300毫升干燥的氯化氫乙醚溶液(hydrochloric ethyl ether)，收集析出的固體，用乙醚洗，室溫下用KOH顆粒真空干燥48小時，得到0.35克標(biāo)題化合物的鹽酸鹽。
b)以化合物Ⅱ為原料攪拌3克化合物Ⅱ(其制法見實施例2)在100毫升二甲氧基乙烷(DME)中的懸浮液，同時向其中滴加25毫升96-98%的硫酸，并冷卻到0℃。形成的溶液在室溫下攪拌5小時，然后加入250毫升乙醚，收集析出的沉淀，用乙醚洗，室溫下真空干燥過夜，得到2.5克標(biāo)題化合物的硫酸鹽。
c)以化合物Ⅴ為原料將50毫克純化合物Ⅴ(由下面實施例5的方法制得)在室溫下溶于100毫升1N鹽酸中。反應(yīng)5小時后，得到化合物Ⅴ和化合物Ⅲ的5∶95混合物，然后用柱色譜法在硅烷化硅膠上把化合物Ⅲ從混合物中分離出來。分離條件同a)。
實施例4(36，37-順-51，52-反)-34，35-雙脫氫-34-脫氧-太可普蘭寧配基(化合物Ⅳ)的制備a)以抗菌素L17046為原料(1)將75克(0.12摩爾)商品85%KOH水溶液溶于200毫升甲醇中，得溶液(1);(2)將5克(～3.5毫摩爾)抗菌素L17046溶于200毫升DMF，得溶液(2)。室溫下攪拌溶液(2)，同時將溶液(1)加入其中(堿石灰閥)。20小時后在5～10℃下滴加10毫升乙酸，然后把溶液倒入1.5升乙醚中。濾出析出的沉淀，并在激烈攪拌下，將沉淀再溶解于3升水-正丁醇-甲醇(3∶2∶1，體積比)混合液中，同時用冰乙酸調(diào)節(jié)pH至3.5。分離出有機層，用1升水洗滌，然后濃縮至最終體積為約200毫升。加入250毫升乙醚后，收集析出的固體，用乙醚洗，室溫下真空干燥過夜，得1.7克純的標(biāo)題化合物。
b)以化合物Ⅲ或化合物Ⅴ為原料基本上按照上面實施例4的a)中當(dāng)以抗菌素L17046為原料時所述的方法操作，標(biāo)題化合物〔化合物Ⅳ(36，37-順-51，52-反)-34，35-雙脫氫-34-脫氧-太可普蘭寧配基〕也可以由化合物Ⅲ(制法見實施例3)或化合物Ⅴ(制法見實施例5)制得，而且產(chǎn)率基本上相同。
實施例5(36，37-反-51，52-反)-34，35-雙脫氫-34-脫氧太可普蘭尼配基(化合物Ⅴ)的制備a)以抗菌素L17046為原料(1)將6克(0.11摩爾)新制備的甲醇鈉溶于300毫升甲醇中，得溶液(1);(2)將2.8克(2毫摩爾)抗菌素L17046溶于300毫升DMF/DMSO(4∶1，體積比)的混合液中，得溶液(2)。室溫下攪拌溶液(2)，并把溶液(1)加入到其中。所得溶液在裝有堿石灰閥的容器中密封，室溫下攪拌72小時。冷卻到0℃后，滴加7毫升冰乙酸，并保持溫度在0～10℃。30℃下真空蒸發(fā)除去甲醇，濾除沉淀物。將濾液倒入1.5升水中，所得混濁溶液的pH值用冰乙酸調(diào)節(jié)至6?；旌衔镉?升正丁醇-乙酸乙酯(3∶1，體積比)提取。分離出有機層，減壓濃縮到小體積。加入乙醚，收集析出的固體，用乙醚沖洗，室溫下真空干燥過夜，得到0.95克標(biāo)題化合物的粗品。將此粗品溶解在100毫升乙腈-水(1∶1，體積比)的混合液中，所得懸浮液中加入5克硅烷化硅膠(Silicagel 60;Merck公司產(chǎn)品;0.06-0.2毫米)和200毫升水后，在室溫下攪拌30分鐘，然后放到裝有200克相同硅膠、且充有水的色譜柱的頂端，先用200毫升0.01M甲酸銨水溶液展開，然后用線性梯度為2-40%的乙腈水溶液展開，時間為20小時，流速為200毫升/小時。每個譜帶收集20毫升，用HPLC檢驗。將含純化合物Ⅴ的譜帶集中起來，加入丁醇，濃縮混合物直到完全除去乙腈和水。加入乙醚，收集析出的沉淀，用乙醚洗，室溫下真空干燥過夜，得到0.22克純的標(biāo)題化合物。
b)以化合物Ⅲ為原料將1克化合物Ⅲ溶解在2升乙腈-水(1∶1，體積比)混合液中，室溫下加入2克碳酸氫鈉，振蕩30秒鐘，室溫下靜置，同時用HPLC監(jiān)控反應(yīng)過程(每次進(jìn)樣10微升)。30和50分鐘后，分別觀察到有58%和90%的化合物Ⅲ轉(zhuǎn)變成化合物Ⅴ。與可靠樣品比較，證實了化合物Ⅴ的生成。化合物Ⅲ的回收按上面a)中所述進(jìn)行，即用冰乙酸酸化至pH6，蒸掉有機溶劑，用正丁醇-乙酸乙酯(3∶1，體積比)提取，分離粗品粉末，再用反相柱色譜法提純。
權(quán)利要求
1.結(jié)構(gòu)式1的脫(乙酰氨基葡糖基)-雙(脫氫)-脫氧太可普蘭寧衍生物及其加成鹽，
式中X和Y各自獨立地表示零或一個附加鍵，A表示氫或-[(C10-C11)脂肪?；鵠-B-D-2-脫氧-2-氨基吡喃葡糖基，M表示氫或α-D-甘露吡喃糖基，R0當(dāng)Y為一個附加鍵時表示零，當(dāng)Y為零時表示氫，附帶條件是當(dāng)X為一個附加鍵時Y必須為零，而當(dāng)X是零時Y只能是一個附加鍵，并且當(dāng)M表示氫時，A也必須表示氫。
2.根據(jù)權(quán)利要求
1的化合物，其中X代表零，Y代表一附加鍵。
3.根據(jù)權(quán)利要求
1的化合物，其中酰胺鍵36、37具有反式構(gòu)型。
4.制備權(quán)利要求
1的化合物的方法，包括在有控制的堿性條件下處理具有以下結(jié)構(gòu)式Ⅱ的太可普蘭寧原料及其鹽或其任何比例的混合物。
式中，R代表氫，Y代表羥基，A表示氫或-N〔(C10-C11)脂肪?；?β-D-2-脫氧-2-氨基吡喃葡糖基，其中(C10-C11)脂肪?；哂星懊嬉岩?guī)定的意義，B表示氫或N-乙酰-β-D-2-脫氧-2-氨基吡喃葡糖基，M表示氫或α-D-吡喃甘露糖基，條件是A、B和M不能同時表示氫，且M僅在A是氫時才能是氫。
5.根據(jù)權(quán)利要求
4的方法，其中有控制的堿性條件如下在極性有機溶劑中，在低于60℃的溫度下使用強堿。
6.根據(jù)權(quán)利要求
5的方法，其中極性溶劑選自(C1-C4)鏈烷醇、(C1-C4)烷基碳酰胺、(C1-C4)烷基磺酰胺、(C1-C4)烷基磷酰胺、(C1-C4)烷基亞砜和(C1-C4)烷基砜以及它們的混合物。
7.根據(jù)權(quán)利要求
5的方法，其中極性溶劑選自二甲基酰胺、二乙基甲酰胺、二甲亞砜、二甲砜、六甲基磷酰三胺以及它們的混合物。
8.根據(jù)權(quán)利要求
5的方法，其中，該強堿選自堿金屬的氫氧化物、氧化物或1、2、3或4個碳原子的烷氧化物。
9.根據(jù)權(quán)利要求
8的方法，其中該堿金屬是鈉或鉀。
10.根據(jù)權(quán)利要求
4的方法，其中，反應(yīng)環(huán)境中含有0.5～2%(重量百分比)的水。
11.根據(jù)權(quán)利要求
4的方法，其中，反應(yīng)環(huán)境中所含水的摩爾數(shù)超過太可普蘭寧起始原料的15～20倍。
12.根據(jù)權(quán)利要求
4的方法，其中，反應(yīng)溫度在0℃和50℃之間。
13.根據(jù)權(quán)利要求
4的方法，其中，反應(yīng)溫度為室溫。
14.根據(jù)權(quán)利要求
5的方法，其中，極性有機溶劑是二甲基甲酰胺與二甲亞砜的混合物，強堿是氫氧化鈉或氫氧化鉀的濃水溶液。
15.根據(jù)權(quán)利要求
14的方法，其中二甲基甲酰胺與二甲亞砜的比例為4∶1到3∶2，而氫氧化鈉或氫氧化鉀水溶液的濃度在85%-90%(重量/體積比)之間。
16.根據(jù)權(quán)利要求
4的方法，其中，強堿是堿金屬烷氧化物，極性有機溶劑是與該烷氧化物對應(yīng)的烷鏈醇，極性的質(zhì)子惰性溶劑的存在與否可隨意選擇。
17.根據(jù)權(quán)利要求
4的方法，其中，強堿是甲醇鈉或甲醇鉀，極性有機溶劑是甲醇與二甲基甲酰胺的混合物。
18.將權(quán)利要求
1、2或3中的化合物用作藥物。
19.含權(quán)利要求
1、2或3中的化合物作為活性成分的藥物組合物。
專利摘要
本發(fā)明是關(guān)于一類新型脫(乙酰氨基葡糖基)-雙(脫氫)脫氧太可普蘭寧衍生物。這些衍生物主要具有對革蘭氏陽性菌的抗菌活性，這類新化合物是對太可普蘭寧抗菌物質(zhì)進(jìn)行化學(xué)改造而得到的。
文檔編號C07K1/02GK86108016SQ86108016
公開日1987年11月11日 申請日期1986年11月28日
發(fā)明者阿德里安諾·馬拉巴巴, 阿爾多·特拉尼, 彼特羅·弗拉里, 吉奧吉奧·塔茨亞 申請人:格魯波菜佩蒂特公司導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan