專利名稱：一種治療扁桃體炎的藥物制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及預(yù)防和/或治療β-鏈球菌型扁桃體炎的藥物制劑。
扁桃體炎，即扁桃體的一種炎癥，是一種涉及面很廣的健康問(wèn)題。估計(jì)在瑞典每年有300，000左右的人患急性扁桃體炎，其中大約有30-50%的病例是由β-鏈球菌引起的。通常治療扁桃體炎使用青霉素，例如苯氧甲基青霉素。但是約有10-25%的病例進(jìn)行這種治療無(wú)效。結(jié)果病人患再發(fā)性扁桃體炎。在日托幼兒園、在學(xué)校甚至在家庭里，凡是人群彼此密切接觸而出現(xiàn)一些感染機(jī)會(huì)的地方，扁桃腺炎就特別流行。結(jié)果導(dǎo)致反復(fù)性的藥物治療。看醫(yī)生以及青霉素治療，這不僅是一個(gè)嚴(yán)重的健康問(wèn)題，而且也是一個(gè)經(jīng)濟(jì)問(wèn)題。
在不考慮病人免疫防御方面的局部缺乏和全身性免疫缺乏的情況下，治療無(wú)效高發(fā)生率的原因被認(rèn)為是取決于感染部位抗菌素活性的不足。后者包括的因素如病人對(duì)藥物的適當(dāng)性、青霉素的具體劑量、給藥次數(shù)以及對(duì)藥物的受到削弱的吸收。此外還提到了由于β-內(nèi)酰胺酶產(chǎn)生菌使青霉素失活而造成感染灶處青霉素濃度的不足，與治療β-鏈球菌扁桃體炎無(wú)效有關(guān)的其他因素是正常菌叢的干擾。從而提高了對(duì)鏈球菌感染的易感性和A組β-鏈球菌的青霉素耐受性。
已知在咽喉菌叢的細(xì)菌之中，細(xì)菌干擾對(duì)扁桃體炎起著重要的作用?，F(xiàn)已證明一些鏈球菌的菌株、特別是一些α-鏈球菌能抑制產(chǎn)生普通感染的β-鏈球菌的生長(zhǎng)。受上述復(fù)發(fā)性感染的人在他們的正常咽喉菌叢中經(jīng)常缺乏起抑制作用的α-鏈球菌，而具有α-鏈球菌的人很少患扁桃體炎。
Sanders等人(Sanders，C.，Nelsen，G.，Sanders，E.Bacterialinterference，Ⅱ.EpidemiologicaldeterminantsoftheantagonisticactivityofthenormalthroatfloraagainstgroupAstreptococci.InfectionandImminity1977，16599-603)已證明一些綠色鏈球菌的菌株抑制A組鏈球菌(GAS)的生長(zhǎng)。Sanders還證明了在感染的兒童中通常出現(xiàn)的抗GAS的α-鏈球菌的抑制效果。
α-鏈球菌抗β-鏈球菌感染在咽喉中保護(hù)的作用也已為Grahn和Holm(Grahn，E.，Holm，S.E.Bacterialinterferenceinthethroatfloraduringastreptococcaltonsillitisoutbreakinanapartmenthousearea.ZentralblattfürBakteriologieMikrobiologieandHygieneA1983，25672-79)和Roos等人(Roos，K.，Grahn，E.，Holm，S.E.Evaluationsofbetalactamaseactivityandmicrobialinterferenceintreatmentfailuresofacutestreptococcaltonsilittis.ScandinavianJournalofInfectionsDiseases1986，18313-19)證明。他們還說(shuō)明了缺乏起干擾作用的α-鏈球菌是使鏈球菌型扁桃體炎治療經(jīng)常無(wú)效的一個(gè)重要原因。
此外，Beck(Interferencebyaα-hemolyticstreptococcusofβ-hemolyticpathogenicstreptococci，Inflammation，3463-465，1979)發(fā)現(xiàn)了一個(gè)對(duì)GAS具有高抑制能力的綠色鏈球菌(streptococcusviridans)的菌株，并且他還建議將該菌株“植入”患復(fù)發(fā)性鏈球菌扁桃體炎的人體。以前Sprunt等人(SpruntK.，LeidyG.，RedmanW.AbnormalcolonisationofneonatesinanICUConversiontonormalcolonisationbypharyngealimplantationofalpha-hemolyticstreptococcusstrain215.PediatrRes14308-313，1980)，也提出過(guò)類似的報(bào)告，他將α-鏈球菌菌株植入擔(dān)心有感染危險(xiǎn)的22個(gè)孩子的鼻咽中，這種植入在16個(gè)孩子中證明是成功的，并且引起7個(gè)孩子的正常菌落發(fā)生變化，使得被植入的菌株是植入后4-18天要被發(fā)現(xiàn)的唯一的α-鏈球菌菌株。
正常菌落中的細(xì)菌以不同方式抑制侵入的細(xì)菌，其他的一些因素是如對(duì)一重要生長(zhǎng)因子競(jìng)爭(zhēng)、PH變異、廢物積累、過(guò)氧化物、細(xì)菌毒素以及酶的形成以及還有稱為細(xì)菌素的物質(zhì)的產(chǎn)生。已知細(xì)菌素與抗生素非常相似，然而差別在于具有非常顯著的選擇作用和不干擾非常重要的厭氧細(xì)菌菌落。α-鏈球菌對(duì)β-鏈球菌的抑制作用已被證明在很大程度上取決于存在由α-鏈球菌產(chǎn)生的細(xì)菌素。所以需要一種在預(yù)防和治療β-鏈球菌型扁桃體炎中有效的藥物制劑。
本發(fā)明的一方面是提供一種預(yù)防和/或治療β-鏈球菌型扁桃體炎的藥物制劑，該制劑的特征在于含有至少一種活的微生物菌株、所述菌株選自寄存號(hào)為NCIB40104，NCIB40105和NCIB40106的血鏈球菌(streptococcussanguis)Ⅱ菌株、寄存號(hào)為NCIB40107的輕型鏈球菌(Streptococcusmitis)菌株以及與這些寄存的菌株的抑制β-鏈球菌能力基本相同的鏈球菌菌株。并置于能使這些微生物保持存活的藥用介質(zhì)中。
本發(fā)明另一方面是上述制劑被用于預(yù)防和/或治療扁桃體炎、很可能是在青霉素治療期后。根據(jù)后面的權(quán)利要求，本發(fā)明的其它特征是很明顯的。
本發(fā)明第三個(gè)方面是提供一種制造上述制劑的方法。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)本發(fā)明藥物制劑在預(yù)防和治療β-鏈球菌型扁桃體炎中特別有效。在下文將要描述的實(shí)驗(yàn)中，一個(gè)最佳實(shí)施例的本發(fā)明制劑內(nèi)同時(shí)存在四種不同的α-鏈球菌的菌株，發(fā)現(xiàn)它能將瑞典三個(gè)地方分離出來(lái)的β-鏈球菌的95-98%消滅掉。所述微生物菌株不同數(shù)目的組合也有效果，但是不如目前當(dāng)所有四種菌株都存在時(shí)獲得的最好效果。特別的是菌株NCIB40104單獨(dú)來(lái)看是非常有效的，而剩余3種菌株各自的效果都不如NCIB40104。
藥用介質(zhì)最好是由NaCl、脫脂牛奶或NutramigenR(1981，3，13日的商標(biāo)注冊(cè)，注冊(cè)號(hào)175，669，權(quán)利人是Mead Johnson &公司，Evansville，Ind.USA)組成的。但也可以使用其他能使微生物保持存活的藥用介質(zhì)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，使用了用于給出具有中性PH的等滲組合物的生理鹽水緩沖溶液。
制劑中的每一種微生物在所述介質(zhì)內(nèi)的濃度為104-1010CFU/ml)，(菌落形成單位/ml)最好為105-109CFU/ml。
對(duì)于這四種微生物菌株，其中有三種屬于血鏈球菌屬Ⅱ(下文稱α89a，α502和α505)，第四種為輕型鏈球菌屬(下文稱為α7213)，它在大多數(shù)人的正常咽喉菌叢中都能發(fā)現(xiàn)。菌株α89a與NCIB40104對(duì)應(yīng)，菌株α502，α505和α7213則分別與NCIB40105、NCIB40106，和NCIB40107對(duì)應(yīng)。
按下列程序分離本發(fā)明制劑內(nèi)的上述4種菌株。由每200人左右分離出五種具有不同菌落表觀的α-鏈球菌菌株、總計(jì)約1000種菌株。采用下列方式用這些菌株進(jìn)行體外抗不同類型的β-鏈菌球試驗(yàn)。
首先在TY-肉湯內(nèi)培養(yǎng)所有的α-鏈球菌，洗滌并稀釋至500nm(Viatron)時(shí)光密度為0.3，相應(yīng)濃度為104-105CFU/ml。將這些菌株的微滴(含在有10-100CFU)采用Steer氏針形復(fù)制器(見(jiàn)Steers E.，F(xiàn)oltz E.L.，Graves B.S.，Riden J.An inocula replicating apparatus for routine testing of bacterial susceptibility to antibiotics，Antibiot Chemother 9307-311 1959)轉(zhuǎn)移到血瓊脂平板上(每皿25個(gè)菌株)，并使其干燥10-15分鐘。用于本次實(shí)驗(yàn)中的瓊脂平皿是由具有5%滅菌去纖維蛋白的馬血的BBL Colombia Agar Base(Div.Becton Dickinson & Co.，Cockeysville，MD21030，USA)作成的，其PH為7.49-7.57。
將β-鏈球菌不同的菌株迅速地涂在每一株α鏈球菌鄰近，將該平板置于5%CO2中于37℃培養(yǎng)。為了消滅過(guò)氧化物的產(chǎn)生，一些平板是在厭氧條件下培養(yǎng)的。然后通過(guò)研究瓊脂平板上能觀察到的特殊的生長(zhǎng)抑制圖型來(lái)記錄α菌株對(duì)β鏈球菌的抑制作用。
就對(duì)β-鏈球菌干擾而論，以不同的組合形式進(jìn)一步研究了最好的起抑制作用的菌株，并選擇出四種最有效的菌株，這四種菌株即α89a，α502，α505和α7213。然后分別在含0.2%葡萄糖的TY肉湯內(nèi)于37℃下培養(yǎng)過(guò)夜。然后洗滌并懸浮于鹽水中。四種選擇出來(lái)的菌株再對(duì)來(lái)自Umea，Uppsala和Gothenburg的100種不同的β鏈球菌進(jìn)行檢驗(yàn)。這些菌株分別80%、92%和89%被抑制。
本發(fā)明制劑中的這四種微生物菌株可以懸浮于藥用的介質(zhì)中。冷凍至-20℃，或冷凍干燥，以使保藏，向病人投藥使用噴霧器最為合適，借助于噴霧器，可將融化的、液體制劑向口中和/或鼻內(nèi)投藥。
用于本發(fā)明一個(gè)實(shí)施方案的噴霧器，可含有109CFU/mlα鏈球菌的5ml生理鹽水懸浮液。每次噴霧的劑量107CFU，相當(dāng)于約0.01ml。
本發(fā)明制劑中的這些微生物菌株于1989.2.3寄存于國(guó)家工業(yè)與海運(yùn)細(xì)菌收集公司(NCIMB)Torry研究站，郵政信箱31，135AbbeyRoad，AberdeenAB98DG，英國(guó)，寄存號(hào)為NCIB40104，NCIB40105，NCIB40106和NCIB40107。按照API20系統(tǒng)(API系統(tǒng)-LaBalmelesGrottes-38390Montalieu-Vercieu，F(xiàn)rance)對(duì)所述生物體菌株進(jìn)行說(shuō)明或分類。說(shuō)明表和說(shuō)的結(jié)果示于下頁(yè)。
對(duì)鏈球菌菌株干擾所獲結(jié)果試驗(yàn)α89aα502α505α7213VP----HIP----ESC----PYRA----αGAL+++-βGUR----βGAL----PAL++++LAP++++ADH++++RIB----ARA----MAN----SOR----LAC++++TRE(+)--+INU----RAF+++-AMD++++GLYG----溶血----全部具有α溶血(綠溶血)。
血鏈球菌Ⅱ血鏈球菌Ⅱ血鏈球菌Ⅱ輕鏈球菌實(shí)驗(yàn)下述實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖峭ㄟ^(guò)使用本發(fā)明的含有四種α鏈球菌菌株，能抑制病人GAS的制劑再移植到患復(fù)發(fā)性扁桃體炎的病人身上，并分析這種新菌落抗復(fù)發(fā)GAS扁桃體炎的保護(hù)能力。
在1986年的最后三個(gè)半月中，家庭A(雙親和三個(gè)孩子)經(jīng)受了25次急性扁桃體炎。重復(fù)培養(yǎng)咽喉樣品顯示出所有家庭成員都存在β鏈球菌GAST型12。交替給他們施用苯氧甲基青霉素(每日按12.5mg/kg體重兩次，10天)和紅霉素(每日按20mg/kg體重兩次，10天)，然而只出現(xiàn)暫時(shí)性的好轉(zhuǎn)。
1986年的最后3個(gè)月中，家庭B(雙親和兩孩子)經(jīng)歷11次急性扁桃體炎(GAS-T型12)。情況如同家庭A，所有家庭成員都用苯氧甲基青霉素和紅霉素治療。從家庭B分離出的一些β鏈球?qū)t霉素有耐藥性[MIC(最低抑制濃度)大于8mg/l]。兩個(gè)家庭發(fā)生的鏈球菌扁桃體炎的情況列于表1。
由兩個(gè)家庭全部的9名病人分離出的α鏈球菌都缺乏對(duì)他們自身GAS的生長(zhǎng)抑制能力。用于證明對(duì)GAS的生長(zhǎng)抑制，即細(xì)菌干擾的方法已為Grahn等人(Grahn，E.，Holm，S.E.，Roos，K.，EkedahlC由扁桃體表面分離出的α溶血鏈球菌對(duì)β溶血鏈球菌、釀膿鏈球菌的干擾-方法學(xué)的研究，ZentralblattfürBakteriologieMikrobiologieundHygieneA1983，254459-468)所說(shuō)明。
1987年2月兩個(gè)家庭的所有成員都用本發(fā)明的制劑治療，將以這4種α鏈球菌中的每一種在藥用介質(zhì)中大約107CFU/ml的量的制劑通過(guò)鼻子噴入9個(gè)人的咽上部，并通過(guò)咀噴入咽扁桃體炎區(qū)域。該方法每天重復(fù)一次共四次，然后一星期一次共一個(gè)月，再以后一個(gè)月一次兩/三個(gè)月，從開始治療起的8個(gè)月中，通過(guò)反復(fù)培養(yǎng)咽喉樣品病人得以控制。在用本發(fā)明制劑選擇出來(lái)的α鏈球菌開始重新移植時(shí)，所有九個(gè)病人都缺乏抗自身GAS的起干擾作用的α鏈球菌，家庭A中的所有成員在治療前都是GAS的攜帶者，而另一家庭B設(shè)有一個(gè)成員是GAS的攜帶者，無(wú)論家庭A或家庭B沒(méi)有一個(gè)表現(xiàn)出任何感染的臨床征兆，治療后期的4個(gè)月只有一個(gè)病人仍然是原始GAS菌株的攜帶者，而且此人同樣缺乏起抑制作用的α鏈球菌。在所有其余的病人中，都發(fā)現(xiàn)了植入的α鏈球菌劇烈地生長(zhǎng)。該生長(zhǎng)通過(guò)對(duì)不同的GAS菌株典型的生長(zhǎng)抑制圖型及其生化反應(yīng)所證實(shí)。如由表2所見(jiàn)，該表表明引入了對(duì)GAS起抑制作用的α鏈球菌以后治療的頻率和微生物結(jié)果。家庭B的孩子們?cè)谌胀杏變涸豪锝佑|GAS因而是所述細(xì)菌的攜帶者，但是他們并沒(méi)有感染。同一家庭的雙親在同一時(shí)期內(nèi)甚至不是帶菌者。
表3表明了在重新移植α鏈球菌前后鏈球菌扁桃體炎的發(fā)生情況。在重新移植對(duì)GAS起抑制作用的α鏈球菌后和在隨后的八個(gè)月當(dāng)中。兩個(gè)家庭沒(méi)有一個(gè)人表現(xiàn)出鏈球菌扁桃體炎的臨床征兆。確實(shí)一些家庭成員在這個(gè)時(shí)期是GAS的帶菌者，但沒(méi)有一個(gè)人患扁桃體炎。
如本實(shí)驗(yàn)證實(shí)的那樣，本發(fā)明制劑可以非常成功地用于鏈球菌扁桃體炎的預(yù)防和治療中。在需要對(duì)扁桃體炎進(jìn)行強(qiáng)有力和有效的治療時(shí)，在最佳劑量的青霉素療程終結(jié)時(shí)使用所述制劑。
表1鏈球菌扁桃體炎的發(fā)生情況，M代表男性，F(xiàn)代表女性。
性別年齡家庭AM30＊＊＊＊F27＊＊＊＊＊＊＊M7＊＊＊＊＊＊＊M4＊＊＊＊＊＊＊F1＊＊＊＊＊＊＊＊家庭BM36＊F33＊＊＊＊＊M4＊F1＊＊＊＊六月七月a八月t九月十月十一十二一月1986月月表2在施用本發(fā)明的含有對(duì)GAS起抑制作用的α鏈球菌制劑后的微生物結(jié)果的影響，+表示GAS存在。
性別/年齡家庭AM30++++------F27+++----+--M7+---------M4++--------F1+++-------家庭BM36---------F33---------M4---+++-++F1---++++--2月3月4月5月……9月1987表3在重新移植本發(fā)明的含有α-鏈球菌的制劑之前和以后的β-鏈球菌型扁桃體炎的發(fā)病情況
權(quán)利要求
1.一種預(yù)防和/或治療β鏈球菌型扁桃體炎的藥物制劑，其特征在于在一種能保持所含微生物有活性的藥用介質(zhì)中含有至少一種存活的微生物菌株，該菌株選自寄存號(hào)為NCIB 40104、NCIB 40105和NCIB 40106的血鏈球菌Ⅱ菌株(Streptococcus sanguisⅡstrains)、寄存號(hào)為NCIB 40107的輕型鏈球菌菌株(Streptococcus mitisstrain)以及與這些存菌株具有基本相同的抑制β-鏈球菌能力的鏈球菌菌株。
2.一種按照權(quán)利要求1所述的藥物制劑，其特征在于存在于制劑中的每一種鏈球菌菌株的濃度為104-1010CFU/ml，最好為105-109CFU/ml。
3.一種按照權(quán)利要求1或2所述的藥物制劑，其特征在于藥用介質(zhì)是NaCl，脫脂牛奶或NutramigenR。
4.一種按前述權(quán)利要求中任意一個(gè)所述的藥物制劑，其特征在于以對(duì)鼻腔和/或口采用噴霧的形式給藥。
5.一種按前述權(quán)利要求中任意一個(gè)所述的藥物制劑，其特征在于包含所有這4種微生物菌株。
6.在能保持所含微生物存活性的藥用介質(zhì)中至少包含一種存活的微生物菌株的一種藥物制劑在預(yù)防和治療β鏈球菌型扁桃體炎中的應(yīng)用，該菌株選自于寄存號(hào)為NCIB 40104，NCIB 40105和NCIB40106的血鏈球菌Ⅱ菌株、寄存號(hào)為NCIB 40107的輕型鏈球菌菌株以及與這些寄存菌株在抑制β-鏈球菌能力上基本相同的鏈球菌菌株。
7.按權(quán)利要求6的應(yīng)用，其特征在于該應(yīng)用在青霉素療程結(jié)束時(shí)進(jìn)行。
8.一種生產(chǎn)預(yù)防和/或治療β鏈球菌扁桃體炎的藥物制劑的方法，菌株被加入能保持微生物，其特征在于至少有一種存活的微生物菌株被加入能保持微生物存活的藥用介質(zhì)中，所述菌株選自寄存號(hào)為NCIB 40104、NCIB 40105和NCIB 40106的血鏈球菌Ⅱ(Streptococcus sanguis Ⅱ)菌株、寄存號(hào)為NCIB 40107的輕型鏈球菌(streptococcus mitis)菌株以及與這些寄存菌株的抑制β鏈球菌能力基本相同的鏈球菌菌株。
9.一種按權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于藥用介質(zhì)由生理鹽水溶液組成。
全文摘要
本發(fā)明描述一種預(yù)防和/或治療鏈球菌扁桃炎的藥物制劑。該制劑包含至少一種存活的微生物菌株，它選自寄存號(hào)為NCIB40104、NCIB10105和NCIB10106的血鏈球菌菌株、寄存號(hào)為NCIB40107的輕型鏈球菌菌株以及與寄存的菌株在抑制β鏈球菌能力上基本相同的鏈球菌菌株組成的組，所述微生物在一種能保持其存活的藥活的藥用介質(zhì)中，還描述該制劑在預(yù)防和/或治療β鏈球菌型扁桃體炎中的使用。
文檔編號(hào)A61K35/74GK1046099SQ9010177
公開日1990年10月17日 申請(qǐng)日期1990年2月15日 優(yōu)先權(quán)日1989年2月15日
發(fā)明者伊娃·伊麗莎白·格拉恩, 斯蒂格·埃德溫·福爾克·霍爾姆 申請(qǐng)人:伊娃·伊麗莎白·格拉恩, 斯蒂格·埃德溫·福爾克·霍爾姆