專利名稱：：阿扎霉素a的o-甲基衍生物，其制備方法，其中間體制備方法及其在制備藥物中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及新的含氮化物(azalide)系列的半合成大環(huán)內(nèi)酯抗菌素，尤其是阿扎霉素A(AzithromycinA)的O-甲基衍生物和其藥用鹽，本發(fā)明還涉及制備該大環(huán)內(nèi)酯抗菌素和其中間體的方法，及它們在藥物制備(尤其是在制備抗微生物藥物中)中的用途。紅霉素A是一大環(huán)內(nèi)酯抗菌素，其結(jié)構(gòu)特征為有一個14員糖苷配基環(huán)，在C-9位有一酮基(BunchR.L.etal，USPatent2，653，899;9/1953);目前它已作為大環(huán)內(nèi)酯抗菌素用于治療人類感染。然而在酸性介質(zhì)中，紅霉素A容易轉(zhuǎn)變?yōu)槊撍t霉素，其是具有螺縮酮結(jié)構(gòu)的無活性C-6/C-12代謝物(KurathPetal.，Experientia1971，27362)?，F(xiàn)已知紅霉素A的螺旋環(huán)化可通過C-9(S)和C-9(R)的化學(xué)轉(zhuǎn)移得到C-9肟(DzokicS.etal.J.Org.Chem.1974，39.2492)，或通過消除C-9酮基使糖苷配基環(huán)擴(kuò)展(KobrehelG.etal.USPatent4，328，334;5/1982)。因此，紅霉素A肟經(jīng)貝克曼重排，拉著還原所得的亞氨醚(Djokic.et.al，J.Chem.Soc.PerkinTrans1，1986，1881)，生成11-氮雜-10-脫氧-10-二氫紅霉素A(9-脫氧-9a-氮雜-9a-同-紅霉素A)，其是含氮化物系列的第一個15員大環(huán)內(nèi)酯抗菌素?？稍诩姿岽嬖谙峦ㄟ^用修飾的Eschweiler-Clark步驟(KobrehelG.andDzokicS.，BEPatent892，357;7/1982)用甲醛將糖苷配基環(huán)中新引入的仲氨基甲基化，或通過將該氨基先轉(zhuǎn)變?yōu)槠銷-氧化物來保護(hù)，隨后將所得N-氧化物進(jìn)行烷基化和還原(BrightG.，USPatent4，474，768;10/1984)，從而得到N-甲基-11-氮雜-10-脫氧-10-二氫紅霉素A(9-脫氧-9a-氮雜-9a-甲基-9a-同-紅霉素A)(IUPACNomenclatureofOrganicChemistry，1979，68-70.459，500-503)，其是在azithromycin的非專有名稱情況下進(jìn)行臨床實驗的。與母核抗菌素相比，azithromycin除提高在酸性介質(zhì)中的穩(wěn)定性外，還顯示出提高了體外抗革蘭氏陰性微生物的活性，在組織中有足夠高的濃度，其甚至可用于一天劑量試驗(RatshemaJ.etal，Antimicrob。AgentsChemother.，1987，31，1939)。進(jìn)一步講，現(xiàn)已知紅霉素A的C-6/C-12螺旋環(huán)合可通過糖苷配基環(huán)上C-6位羥基的O-甲基化來抑制(Watanabey.etal.，USPatent4，331，803;5/1982)，將紅霉素A與氯甲酸芐酯反應(yīng)，隨后通過將所得2′-O，3′-N-雙(芐氧羰基)-衍生物進(jìn)行甲基化，消除2′-和3′-位上的保護(hù)基，及在還原條件下將3′-甲氨基進(jìn)行N-甲基化，從而除了生成6-O-甲基紅霉素A外，還生成足夠量的11-O-甲基和6，11-二-O-甲基紅霉素A(MorimotoS.etal.J.Antibiotics1984，37.187)?？赏ㄟ^C-9酮的肟化和相應(yīng)取代或未取代芐氧亞氨基衍生物的O-甲基化達(dá)到更高的選擇性(MorimotoS.etal.USPatent4，680，368;7/1987)。6-O-甲基-紅霉素A是以非專有名稱Clarithromycin進(jìn)行臨床試驗的。與紅霉素A相比，Clarithromylin在體外提高了抗革蘭氏陽性微生物的活性(KiristH.A.etal，AntimicrobialAgentsandChemother.，1989，1419)。本申請人的檢索表明，azithromycinA的O-甲基衍生物在本領(lǐng)域中沒被披露過。因此，本發(fā)明第一目的是新的式ⅠazithromycinA的O-甲基衍生物，其中ⅠaR1＝R2＝CO2CH2C6H5，R3＝CH3，R4＝R5＝HⅠbR1＝R2＝CO2CH2C6H5，R3＝R4＝CH3，R5＝HⅠcR1＝R2＝CO2CH2C6H5，R3＝R5＝H，R4＝CH3ⅠdR1＝R2＝CO2CH2C6H5，R3＝R4＝R5＝CH3ⅠeR1＝R2＝R4＝R5＝H，R3＝CH3ⅠfR1＝R2＝R5＝H，R3＝R4＝CH3ⅠgR1＝R2＝R3＝R5＝H，R4＝CH3ⅠhR1＝R2＝H，R3＝R4＝R5＝CH3ⅠiR1＝R4＝R5＝H，R2＝R3＝CH3ⅠjR1＝R5＝H，R2＝R3＝R4＝CH3ⅠkR1＝R3＝R5＝H，R2＝R4＝CH3ⅠlR1＝H，R2＝R3＝R4＝R5＝CH3和其藥用酸加成鹽。本發(fā)明另一主題是制備式(Ⅰ)azithromycinA的O-甲基衍生物和其藥用酸加成鹽的方法，其中式Ⅱ的azithromycin或其二水物(DjokicS.etal，J.Chem.Reserchis)1988，152-153;(M)19881239-12621)(其中Ⅱa，R1＝H，R2＝CH3)，在過量的適宜堿(如碳酸氫鈉)存在下，于反應(yīng)惰性溶性(如苯)中，在25°-60℃與氯甲酸芐酯反應(yīng)3-24小時，隨后將C-6，C-11和C-4″位羥基進(jìn)行O-甲基化，生成新的，未被披露過的中間體式Ⅱb2′-O，3′-N-雙-(芐氧羰基)-N-去甲基-azithromycin，其中R1＝R2＝CO2CH2C6H5，將式(Ⅱb)與1-18摩爾過量的適宜甲基化試劑，如甲基碘，硫酸二甲酯，甲磺酸甲酯或?qū)?甲苯磺酸甲酯，在適宜堿，如氫化鈉，氫氧化鉀或氫氧化鈉水溶液，存在下，于適宜反應(yīng)溶劑如二甲亞砜或N，N-二甲基甲酰胺，或它們與反應(yīng)惰性溶劑(如四氫呋喃，乙腈，乙酸乙酯，1，2-二甲氧乙烷)的混合物中，在0℃-室溫反應(yīng)3-30小時，生成式Ⅰ的O-甲基-2′-O，3′-N-雙-(芐氧羰基)-N-去甲基-azirhtromycinA，其中ⅠaR1＝R2＝CO2CH2C6H5，R3＝CH3，R4＝R5＝HⅠbR1＝R2＝CO2CH2C6H5，R3＝R4＝CH3，R5＝HⅠcR1＝R2＝CO2CH2C6H5，R3＝R5＝H，R4＝CH3ⅠdR1＝R2＝CO2CH2C6H5，R3＝R4＝R5＝CH3將所得式(Ⅰ)化合物選擇性進(jìn)行A)在硅膠柱(硅膠60，MerckCo.，70-230mesh)上用溶劑系統(tǒng)(CH2cl2/CH3OH/NH4OH(90∶9∶0.5)進(jìn)行分離，生成色譜均一的Rf為0.660的(Ⅰa)，Rf為0.811的(Ⅰb)，Rf為0.843的(Ⅰc)和Rf為0.881的(Ⅰd)，隨后消除(Ⅰa)-(Ⅰd)的2′-和3′-位上的保護(hù)用芐氧羰基，方法是在低級醇，如甲醇或乙醇，溶液中，在催化劑如鈀黑或鈀炭存在下，在氫氣中，1-20巴壓力下，于室溫，伴隨攪拌氫解2-10小時，濾掉催化劑，通過常規(guī)PH梯度提取法(PH5.0-PH9.0)，由含適宜疏水溶劑(如氯仿，二氯甲烷，乙酸乙酯等)的水分離產(chǎn)物，結(jié)果得到式(Ⅰ)的O-甲基-N-去甲基-azirhtromycinA衍生物，其中ⅠeR1＝R2＝R4＝R5＝H，R3＝CH3ⅠfR1＝R2＝R5＝H，R3＝R4＝CH3ⅠgR1＝R2＝R3＝R5＝H，R4＝CH3ⅠhR1＝R2＝H，R3＝R4＝R5＝CH3然后在等量或二倍量甲酸(98-100%)或另一氫離子源存在下，在選自鹵代烴如氯仿，或低級醇如甲醇或乙醇，低級酮或丙酮的反應(yīng)惰性溶劑中，在反應(yīng)混合物的回流溫度下，用1-3當(dāng)量甲醛(37%)將3′-甲氨基進(jìn)行還原N-甲基化2-8小時，通過常規(guī)PH梯度提取法(PH5.0-PH9.0)分離產(chǎn)物，得到式Ⅰ的O-甲基-azirhromycinA衍生物，其中ⅠiR1＝R4＝R5＝H，R2＝R3＝CH3ⅠjR1＝R5＝H，R2＝R3＝R4＝CH3ⅠkR1＝R3＝R5＝H，R2＝R4＝CH3ⅠlR1＝H，R2＝R3＝R4＝R5＝CH3或B)如A)中所述通過氫解消除2′-和3′-位保護(hù)用的芐氧羰基，生成6-O-甲基-(Ⅰe)，6，11-二-O-甲基(Ⅰf)，11-O-甲基-(Ⅰg)和6，11，4″-三-O-甲基-N-脫甲基azithromycinA(Ⅰh)的混合物，然后如A)中所述，在甲酸(98-100%)或一些其它氫原子源的存在下，用甲醛(37%)進(jìn)行還原N-甲基化，生成6-O-甲基-(Ⅰi)，6-11-二-O-甲基-(Ⅰj)，11-O-甲基-(Ⅰk)和6，11，4″-三-O-甲基-azithromycinA(Ⅰl)的混合物，將該混合物在硅膠柱上用溶劑系統(tǒng)CH2cl2/CH3OH/NH4OH(90∶9∶0.5)進(jìn)行分離，生成色譜均一的(TLc，同一溶劑系統(tǒng))Rf為0.346的azithromycinA(Ⅰi)的O-甲基衍生物，Rf為0.393的(Ⅰj)，Rf為0.428的(Ⅰk)和Rf為0.456的(Ⅰl)。式(Ⅰ)化合物的藥用加成鹽是通過將azithromycinA(Ⅰ)的O-甲基衍生物與至少一等摩爾量的相應(yīng)有機(jī)酸或無機(jī)酸在反應(yīng)惰性溶劑中反應(yīng)制備的，有機(jī)或無機(jī)酸選自氯化氫，碘化氫，硫酸，磷酸，乙酸，丙酸，三氟乙酸，馬來酸，檸檬酸，乙基琥珀酸，琥珀酸，甲磺酸，苯磺酸，對甲苯磺酸，十二烷基磺酸等。如加成鹽在所用反應(yīng)惰性溶劑中不溶，則可通過過濾分離，或通過非溶劑法，最常采用的是冷凍干燥，來產(chǎn)生沉淀分離。式(Ⅰi)-(Ⅰl)的azithromycinA的O-甲基衍生物和它們的藥用加成鹽具有很強(qiáng)的抗微生物活性。6-O-甲基-azitheromycinA(Ⅰi)的體外初始抗菌活性是通過與紅霉素A比較，用一系列革蘭氏陽性和陰性試驗菌及臨床分離出的菌測定的。該測定是用“試管稀釋”法進(jìn)行的，在研究中，采用“標(biāo)準(zhǔn)菌株的腦心肉湯”中24小時培養(yǎng)及來自臨床樣品的新分離的菌株。結(jié)果用最小抑制濃度或殺菌濃度(分別為MIC和MBC，ug/ml)表示并表示在表1和2中，結(jié)果表明，與紅霉素A比較，6-O-甲基-azithromycinA提高了抗所研究菌株的活性。表3是與azithromycin比較，6-O-甲基-(Ⅰi)，6，11-二-O-甲基-(Ⅰi)，11-O-甲基(Ⅰk)和6，11，4″-三-氧-甲基-azithromycinA(Ⅰl)的體外試驗。在一系列標(biāo)準(zhǔn)菌株上測定的最小抑制濃度(MIC;ug/ml)表明6-O-甲基-azirhromycinA(Ⅰi)對枯草桿菌NCTC8241和騰黃八疊球菌ATCC9341的活性是azithromycin的二倍，對黃色微球菌ATCC6538P的活性是azithromycin的四倍。11-O-甲基-azirhromycinA(Ⅰk)也顯示出更高的活性。因此，本發(fā)明化合物與其母體抗菌素相比，對大多數(shù)試驗中的菌株的敏感性是母體化合物的2-4倍。本發(fā)明再一主題是提供含有效藥用劑量的本發(fā)明新化合物的藥物?；衔?Ⅰi)-(Ⅰl)及它們的藥用鹽可用做治療劑來治療由革蘭氏陽性菌，枝原體或病原菌(這些菌對化合物(Ⅰi)-(Ⅰl)敏感)引起的人類或動物感染疾病。因此，化合物(Ⅰi)-(Ⅰl)和它們的藥用加成鹽可口服或非腸道給藥，如以S.C或i.m形式，它們還可根據(jù)常規(guī)制藥慣例配成注射劑，片劑，膠囊，散劑等。表1與紅霉素A比較，6-O-甲基-azithromycinA(Ⅰi)的體外抗菌活性基質(zhì)腦心肉湯培養(yǎng)24小時，37℃MIC最小抑制濃度(ug/mL)MBC最小殺菌濃度(ug/mL)表2與紅霉素A比較，6-O-甲基-azithromycinA(Ⅰi)于體外對臨床分出的菌的殺菌活性基質(zhì)腦心肉湯培養(yǎng)24小時，37℃MIC最小抑制濃度(ug/mL)MBC最小殺菌濃度(ug/mL)新的O－甲基－azithromycinA與azithromycin在體外抗菌活性上的比較<tablesid="table3"num="003"><tablealign="center">試驗菌株MIC(μg/mL)黃色微球菌ATCC6538P干燥棒桿菌NCTC9755金黃色葡萄球菌ATCC10240枯草桿菌NCTC8241短小芽孢桿菌NCTC8241蠟狀芽孢桿菌NCTC10320藤黃八疊球菌ATCC9340表皮葡萄球菌ATCC12228糞鏈球菌ATCC8043銅綠假單胞菌NCTC10490大腸桿菌ATCC10536(Ila)(Ii)(Ij)(Ik)(Il)1.560.391.560.23.1256.2512.512.51.5625.00.390.790.780.13.1250.390.20.780.13.1250.20.20.780.053.1250.390.781.560.13.1250.050.01250.050.01250.050.10.11.560.13.1250.050.050.780.050.78100.0100.0100.025.0200.00.783.1256.250.786.25</table></tables>基質(zhì)腦心肉湯培養(yǎng)24-48小時，37℃接種10-5-10-6cfu/mL本發(fā)明通過下面實例進(jìn)一步描述實例12′-O，3′-N-雙(芐氧羰基)-N-去甲基-azithromycinA(Ⅱb)方法A將NaHCO3(48g)加到azithromycin二水合物(30g;0.038mole)的140ml無水苯溶液中，該混合物在攪拌下被加熱到55-60℃，于1小時內(nèi)往其中滴加25ml(89.63g;0.53mole)氯甲酸芐酯。反應(yīng)混合物于該溫度下保持?jǐn)嚢?小時，然后于室溫靜置過夜。用150ml0.25NHcl提取苯懸浮液三次，用Cacl2干燥苯溶液，過濾，減壓蒸發(fā)成稠油狀物，所得殘余物通過攪拌滴加到500ml冷卻的石油醚中，反應(yīng)懸浮液在冷卻下攪拌4小時，過濾沉淀，用石油醚洗滌，干燥，生成27.5g(71.6%)標(biāo)題產(chǎn)物，用乙醚/石油重結(jié)晶得m.p.148-154℃的產(chǎn)物。EI-MSm/s1003(M+)TLC，CH2Cl2/CH3OH/NH4OH(90∶9∶0.5)Rf0.704IR(CHCl3)3510，3350，2960，1740，1690，1605，1450，1380，1330，1290，1255，1160，1115，1050，995cm-1.1HNMR(CDCl3)2.301(3H，9a-NCH3)，2.844，2.802(3H，3′-NCH3)，3.397(3H，3″-OCH3).13CNMR(CDCl3)177.260(C-1)，100.115(C-1')，95.149(C-1″)，75.028(C-6)，74.607(C-12)，69.415(C-9)，64.617(C-10)，36.964(9a-NCH3)and26.016(C-8)ppm.方法B在攪拌下，將NaHCO(22g)加到氯甲酸芐酯(30ml;0.21mole)的50ml無水苯溶液中，于3小時內(nèi)往其中加入15g(0.019mole)azithromycin，azithromycin加到其總量的3/4時，再加15ml(0.106mole)氯甲酸芐酯。該反應(yīng)混合物于室溫攪拌24小時，然后過濾，濾液用150ml0.25NHcl提取三次，用MgSO4干燥，減壓蒸發(fā)。加石油醚，沉淀出粗2′-O，3′-N-雙(芐氧羰基)-N-去甲基-azithromycinA，過濾沉淀并馬上在攪拌下懸浮在50ml冷乙醚中。室溫下攪拌該反應(yīng)懸浮液1小時，濾除沉淀，干燥，生成8.67g(43.09%)如方法A)所述的同樣理化特征的均一產(chǎn)物(TLC)。實施例22′-O，3′-N-雙(芐氧羰基)-N-去甲基-azithromycinA(Ⅰa)，(Ⅰb)，(Ⅰc)和(Ⅰd)的O-甲基化方法A將甲基碘(6ml;0.106mole)加到實施例1產(chǎn)物(6g;0.006mole)的64ml二甲亞砜與四氫呋喃(1∶1)的溶液中，往其中再加甲基碘(6.6ml;0.106mole)，然后于室溫，在4小時內(nèi)，往其中逐漸加入2.4g(約0.06mole)于油中的NaH(55.60%)。反應(yīng)懸浮液再攪拌5小時，靜置過夜，然后傾入飽和Nacl溶液(10ml)中，用100ml乙酸乙酯提取兩次。合并有機(jī)提取液，用飽和Nacl溶液洗滌三次，用K2CO3干燥，蒸發(fā)，生成6.35g粗產(chǎn)物，將該粗產(chǎn)物按實施例9所述方法氫解，或，在硅膠柱上(硅膠60，MerchCo.，70-230mesh)，用溶劑系統(tǒng)CH2cl2/CH3OH/NH4OH(90∶9∶0.5)進(jìn)行選擇性純化。將餾分Ff為0.881(TLC;同一溶劑系統(tǒng))的1.5g粗產(chǎn)物濃縮，蒸發(fā)，得0.12g色譜純的2′-O，3′-N-雙(芐氧羰基)-N-去甲基-6，11-4″-三-O-甲基-azithromycinA(Ⅰd)。1HNMR(CDCl3)2.246(3H，9a-NCH3)，2.831，2.798(3H，3'-NCH3)，3.367(3H，3″-OCH3)，3.305(3H，6-OMe)，3.465(3H，4″-OCH3)，and3.485(3H，11-OCH3)ppm.13CNMR(CDCl3)176.975(C-1)，69.920(C-9)，35.967(9a-NCH3)，79.1(C-6)，52.8(6-OCH3)，89.0(C-11)，62.0(11-OCH3)，87.357(C-4″)，61.131(4″-OCH3)，49.176and49.526(3″-OCH3)and36.457(3'-NCH3)ppm.合并并蒸發(fā)Rf為0.843的餾分，得0.32g色譜純2′-O，3′-N-雙-(芐氧羰基)-N-脫甲基-11-O-甲基-azithromycinA(Ⅰc)。EI-MSm/s1016(M+)1HNMR(CDCl3)2.239(3H，9a-NCH3)，2.805，2.847(3H，3'-NCH3)，3.374(3H，3″-OCH3)，and3.573(3H，11-OCH3)ppm.蒸發(fā)Rf為0.811的餾分，得0.316g2′-O，3′-N-雙(芐氧羰基)-N-去甲基-6，11-二-O-甲基-azithromycinA(b)IR(CHCl3)3570，3490，1740，1690，1455，1380，1330，1295，1260，1200，1160，1120，1095，1055，1005，990，980cm-1.1HNMR(CDCl3)2.292(3H，9a-NCH3)，2.838，2.795(3H，m3'-NCH3)，3.380(6H，6-OCH3and3″-OCH3)and3.488(3H，11-OCH3)ppm.13CNMR(CDCl3)177.764(C-1)，69.471(C-9)，35.271(9a-NCH3)，88.994(C-11)，52.892(6-OCH3)，61.09(11-OCH3)，36.851(3’-NCH3)，and49.549，49.154(3″-OCH3)ppm.濃縮并蒸發(fā)Rf為0.661的餾分至干，得0.384g2′-O，3′-N-雙(芐氧羰基)-N-去甲基-6-O-甲基-azithromycinA(Ⅰa)EI-MSm/s1016(M+)IR(CHCl3)3570，3500，2960，2920，1740，1690，1450，1380，1325，1290，1255，1200，1160，1120，1050，995cm-1.1HNMR(CDCl3)2.288(3H，9a-NCH3)，2.805，2.847(3H，3’-NCH3)，3.380(6H，6-OCH3and3″-OCH3)ppm.13CNMR(CDCl3)177.764(C-1)，69.850(C-9)，34.851(9a-NCH3)，78.106(C-6)，74.661(C-11)，，73.873(C-12)，and52.822(6-OCH3)ppm.方法B于攪拌下，2小時內(nèi)，0-5℃，將甲基碘和2.1gNaH(55-60%)加到實施例1產(chǎn)物(6g)的60ml二甲亞砜與四氫呋喃(1∶1)溶液中。反應(yīng)混合物于0-5℃攪拌1小時，所得懸浮液傾到飽和Nacl溶液中，用乙酸乙酯提取。用飽和Nacl溶液洗滌有機(jī)提取液，用K2CO3干燥，減壓蒸發(fā)至干。所得產(chǎn)品(2g)在硅膠柱上層析純化，用溶劑系統(tǒng)CH2cl2/CH3OH/NH4OH(90∶9∶0.5)，結(jié)果生成0.89g6-O-甲基衍生物(Ⅰa)，0.11g6，11-二-O-甲基衍生物(Ⅰb)和0.48g11-O-甲基衍生物(Ⅰc)方法C將甲基碘(6ml)加到實施例1產(chǎn)物(6g)的N，N-二甲基甲酰胺中，于室溫2小時內(nèi)，伴隨攪拌往其中加入2.4gNaH(55-60%)。反應(yīng)混合物于室溫再攪拌2小時，然后放置過夜。按方法A)所述步驟分離產(chǎn)物，得到4.54g6，11-二-O-甲基衍生物(Ⅰb)和6，11，4″-三-O-甲基衍生物(Ⅰd)的混合物。該混合物在NaOAc/HoAC緩沖液(PH5)存在下，在甲醇(60ml)中，用鈀/碳(2g;5%)，作為催化劑，按實施例3所述步驟進(jìn)行氫解。分離產(chǎn)物并于PH9.0下蒸發(fā)溶劑，則分離出Rf0.220的6，11-二-O-甲基-N-脫甲基-azithromycinA(Ⅰf)與Rf0.263的6，11，4″′-三-O-甲基-N-去甲基-azithromycinA(Ⅰh)的混合物(2.33g)，將它們在硅膠柱上分離，溶劑系統(tǒng)為CH2cl2/CH3OH/NH4OH(90∶9∶0.5)，生成色譜均一的產(chǎn)物(Ⅰf)和(Ⅰh)。實施例36-O-甲基-N-去甲基-azithromycinA(Ⅰl)將2.0g(0.002mole)2′-O，3′-N-雙(芐氧羰基)-N-去甲基-6-O-甲基-azithromycinA(Ⅰa)溶于30ml乙醇。將含0.185ml乙酸，0.3g乙酸鈉(PH5)和0.7g鈀碳(10%)的水加入到該溶液中。在氫氣壓(10巴)下攪拌該反應(yīng)混合物10小時，濾除催化劑，蒸發(fā)至干。殘余物溶于CHcl3(30ml)，加(30ml)水，用1NHcl調(diào)節(jié)反應(yīng)混合物的PH至5.0，分層，用CHcl3提取水層兩次(每次15ml)。往反應(yīng)混合物中加CHcl3(30ml)，攪拌下用2NNaOH調(diào)節(jié)PH至9.0，分層，水層再用CHcl3提取兩次(每次15ml)。合并的有機(jī)提取液(PH9.0)用K2CO3干燥，過濾，蒸發(fā)，得到1.03g(70%)標(biāo)題產(chǎn)物。EI-MSm/s748TLC，Rf0.182IR(CHCl3)3670，3500，2960，2920，1725，1460，1375，1345，1320，1280，1260，1165，1120，1085，1045，1010，995，900cm-1.1HNMR(CDCl3)2.278(3H，9a-NCH3)，2.406(3H，3'-NCH3)，3.312(3H，3″-OCH3)，3.384(3H，6-OCH3)ppm.實施例46，11-二-O-甲基-N-脫甲基-azithromycinA(Ⅰf)按實施例3步驟，將0.165g(0.16mole)2′-O，3′-N-雙(芐氧羰基)-N-去甲基-6，11-二-O-甲基-azithromycinA(Ⅰb)用鈀/碳(10%)氫解，反應(yīng)條件是于乙醇中，在乙酸鈉/乙酸緩沖液(PH5.0)存在下。從而得到0.093g(76.2%)色譜均一的標(biāo)題產(chǎn)物，m.p.95-98℃。EI-MSm/s762TLC，Rf0.3311HNMR(CDCl3)2.265(3H，9a-CH3)，2.422，(3H，3'-NCH3)，3.312(3H，3″-OCH3)，3.374(3H，6-OCH3)and3.521(3H，11-OCH3)ppm.13CNMR(CDCl3)177.7(C-1)，65.9(C-9)，36.8(9a-NCH3)，79.3(C-6)，88.9(C-11)，52.7(6-OCH3)，62.0(11-OCH3)，33.1(3'-NCH3)，and49.7(3″-OCH3)ppm.實施例511-O-甲基-去甲基-azithromycinA(Ⅰg)按實施例3步驟，于甲醇中，在乙酸鈉/乙酸(PH5.0)緩沖液存在下，用鈀/碳(10%)氫解0.250g(6.246mmole)2′-O，3′-N-雙(芐氧羰基)-N-去甲基-11-O-甲基-azithromycinA(Ⅰc)得到0.168g(89.5%)11-O-甲基-N-去甲基-azithromycinA(Ⅰg)。TLC，Rf0.244IR(CDCl3)3500，2970，2940，1736，1460，1380，1165cm-1.1HNMR(CDCl3)2.44(3H，9a-NCH3)，2.458(3H，3'-NCH3)，3.336(3H，3″-OCH3)and3.590(3H，11-OCH3)ppm.13CNMR(CDCl3)177.6(C-1)，70.7(C-9)，35.8(9a-NCH3)，74.4(C-6)，85.0(C-11)，62.7(11-OCH3)，36.7(3'-NCH3)，and49.4(3″-OCH3)ppm.實施例66-O-甲基-azithromycinA(Ⅰi)方法A往0.78g(0.00104mole)6-O-甲基-N-去甲基-azithromycinA(Ⅰe)的CHcl3(50ml)溶液中加入0.085ml(0.00113mole)甲醛(37%)和0.078ml(0.00203mole)甲酸(98-100%)。該反應(yīng)混合物在回流下攪拌8小時，然后冷卻到室溫，傾入50ml水中。用1NHcl調(diào)節(jié)反應(yīng)混合物的PH至5.0，分層，用CHcl3提取水層兩次(每次20ml)。將CHcl3(20ml)加到含水部分中，攪拌下用2NNaOH調(diào)節(jié)PH至9.0，分層，水層再用CHcl3提取兩次(每次20ml)。合并的CHcl3提取液(PH9.0)用K2CO3干燥，蒸發(fā)，得0.495g(62.7%)標(biāo)題產(chǎn)物，其可通過柱膠選擇性純化，溶劑系統(tǒng)為CH2cl2/CH3OH/NH4OH(90∶9∶0.5)，生成色譜均一的(Ⅰi)，m.p.103-109℃。EI-MSm/s762TLC，RfO.346IR(KBr)3500，2980，2940，1740，1462，1385，1330，1280，1260，1170，1112，1059，1018，and1055cm-1.1HNMR(CDCl3)2.300(3H，9a-NCH3)，2.316(6H，3'-N(CH3)2)，3.333(3H，3″-OCH3)and3.384(3H，6-OCH3)ppm.13CNMR(CDCl3)177.540(C-1)，68.850(C-9)，36.8(9a-NCH3)，79.2(C-6)，52.822(6-OCH3)，61.627(C-10)，40.350(3'-N(CH3)2)and49.457(3″-OCH3)ppm.生物活性1mg含754μgazithromycin。方法B往0.5g(0.668mmole)6-O-甲基-N-甲基-azithromycinA的丙酮(30ml)溶液加入0.128ml(1.71mmole)甲醛(37%)和0.118ml(3.06mmole)甲酸(90-100%)，所得混合物回流攪拌2小時。冷卻反應(yīng)混合物至室溫，蒸除丙酮，得稠漿物。加20ml水到產(chǎn)物中，按方法A)所述，用二氯甲烷，采用梯度PH提取法分離產(chǎn)物。產(chǎn)量0.46g(90.3%)。實施例76，11-二-O-甲基-azithromycinA(Ⅰj)按實施例6步驟，在甲酸(98-100%)存在下，用甲醛(37%;0.083ml)將0.49g(6.4mmole)6，11-二-O-甲基-N-去甲基-azithromycinA(Ⅰf)進(jìn)行還原N-甲基化，得0.46g(92.3%)，標(biāo)題產(chǎn)物EI-MSm/s776(M+)TLC，RfO.3911HNMR(CDCl3)2.295(3H，9a-NCH3)，2.316(6H，3'-N(CH3)2)，3.321(3H，3″-OCH3)3.38(3H，6-OCH3)and3.524(3H，11-OCH3)ppm.13CNMR(CDCl3)177.540(C-1)，68.237(C-9)，36.739(9a-NCH3)，88.112(C-11)，52.653(6-OCH3)and61.852(11-OCH3)ppm.實施例811-O-甲基-azithromycinA(Ⅰk)按實施例6步驟，在甲酸(98-100%)存在下，用甲醛(37%)對0.32g(0.42mmole)11-O-甲基-N-去甲基-azithromycinA(Ⅰg)進(jìn)行還原甲基化，得0.238g(72.44%)標(biāo)題11-O-甲基衍生物(Ⅰk)。EI-MSm/s762(M+)TLC，RfO.428IR(KBr)3510，2975，2940，1738，1460，1350，1165，1054cm-1.1HNMR(CDCl3)2.246(3H，9a-NCH3)，2.307(6H，3'-N(CH3)2)，3.352(3H，3″-OCH3)and3.591(3H，11-OCH3)ppm.實施例96-O-甲基-azithromycinA(Ⅰi)，6，11-二-O-甲基-azithromycinA(Ⅰj)，11-O-甲基-azith-romycinA(Ⅰk)，和6，11，4′-三-O-甲基-azith-romyciaA(Ⅰl)。1)往2.16g實施例2的粗產(chǎn)物的30ml乙醇溶液中加入含0.185ml乙酸和0.3g乙酸鈉及0.7g鈀/碳(10%)的10ml水，按實施例3所述將該反應(yīng)混合物氫解。于PH9.0，得到0.98g6-O-甲基-(Ⅰe)，6，11-二-O-甲基-(Ⅰf)，11-O-甲基-(Ⅰg)，和6，11，4″-三-O-甲基-N-去甲基-azithromycinA(Ⅰh)的混合物。2)將0.98g1)中所得混合物溶于CHcl(50ml)中，往其中加入0.106ml甲醛(37%)和0.096ml甲酸(98-100%)，按實施例6所述進(jìn)行N-甲基化。于PH9.0，分離出0.537g混合物，將其于硅膠柱(硅膠60，Merckco.70-230merh)上層析，用CH2cl2/CH3OH/NH4OH(90∶9∶0.5)作溶劑系統(tǒng)，得0.238g色譜均一的Rf為0.346的(Ⅰi)，0.065gRf為0.391的(Ⅰj)，0.105gRf為0.428的(Ⅰk)和0.094gRf為0.456的(Ⅰl)。實施例10將實施例3的步驟，在乙醇中，于乙酸鈉/乙酸(PH5.0)，緩沖液存在下，用鈀/碳(10%;1g)對3.35g(3.21mmole)2′-O，3′-N-雙(芐氧羰基)-N-去甲基-6，11，4″-三-O-甲基azithromycinA(Ⅰd)進(jìn)行氫解，得1.41g(56.7%)標(biāo)題產(chǎn)物，將其在硅膠柱上選擇性層析，用CH2cl2/CH3OH/NH4OH(90∶9∶0.5)做溶劑系統(tǒng)，得到TLC均一的產(chǎn)物(Ⅰh)EI-MSm/s775TLC，RfO.2631HNMR(CDCl3)2.262(3H，9a-NCH3)，2.393(3H，3'-NCH3)，3.308(6H，3″-OCH3and6-OCH3)，3.475(4″-OCH3)and3.521(11-OCH3)ppm.13CNMR(CDCl3)175.0(C-1)，64.8(C-9)，79.8(C-6)，50.6(6-OCH3)86.1(C-11)，59.1(11-OCH3)，87.7(C-4″)and60.9(4″-OCH3)ppm.實施例116，11-4″-三-O-甲基-azithromycinA(Ⅰl)按實施例6步驟，用0.131ml甲醇(37%;1.71mmole)和0.121ml(3.5mmole)甲酸(98-100%)處理1.2g(1.55mmole)6，11，4″-三-O-甲基-N-去甲基-azithromycinA(h)，得0.75g(64.4%)標(biāo)題產(chǎn)物。EI-MSm/s789TLC，RfO.4561HNMR(CDCl3)2.216(3H，9a-NCH3)，2.311(6H，3'-N(CH3)2)，3.321(3H，3″-OCH3)，3.302(6-OCH3)，3.482(4″-OCH3)and3.521(11-OCH3)ppm.13CNMR(CDCl3)177.859(C-1)，68.6(C-9)，36.8(9a-NCH3)，80.7(C-6)，51.0(6-OCH3)，89.0(C-11)，62.0(11-OCH3)，87.3(C-4″)and61.3(4″-OCH3)ppm.權(quán)利要求1.式(Ⅰ)的azithromycinA的O-甲基衍生物和其與無機(jī)或有機(jī)酸所成的藥用鹽，其中IaR1=R2=CO2CH2C6H5，R3=CH3，R4=R5=HIbR1=R2=CO2CH2C6H5，R3=R4=CH3，R5=HIcR1=R2=CO2CH2C6H5，R3=R5=H，R4=CH3IdR1=R2=CO2CH2C6H5，R3=R4=R5=CH3IeR1=R2=R4=R5=H，R3=CH3IfR1=R2=R5=H，R3=R4=CH3IgR1=R2=R3=R5=H，R4=CH3IhR1=R2=H，R3=R4=R5=CH3IiR1=R4=R5=H，R2=R3=CH3IjR1=R5=H，R2=R3=R4=CH3IkR1=R3=R5=H，R2=R4=CH3IlR1=H，R2=R3=R4=R5=CH32.權(quán)利要求1要求的物質(zhì)，其特征在于R1和R2相同并代表芐氧羰基，R3為CH3，而R4和R5為H。3.權(quán)利要求1要求的物質(zhì)，其特征在于R1和R2相同并代表芐氧羰基，R3和R4為CH3，而R5為H。4.權(quán)利要求1要求的物質(zhì)，其特征在于R1和R2相同并代表芐氧羰基，R3和R5為H，而R4＝CH3。5.權(quán)利要求1要求的物質(zhì)，其特征在于R1和R2相同并代表芐氧羰基，R3，R4和R5為CH3。6.權(quán)利要求的所要求的物質(zhì)，其特征在于R1，R2，R4和R5相同并代表氫，而R3代表CH3。7.權(quán)利要求的所要求的物質(zhì)，其特征在于R1，R2，和R5相同并代表氫，而R3和R4代表CH3。8.權(quán)利要求的所要求的物質(zhì)，其特征在于R1，R2，R3和R5相同且為氫，而R4為CH3。9.權(quán)利要求的所要求的物質(zhì)，其特征在于R1和R2相同且為氫，R3，R4和R5為CH3。10.權(quán)利要求的所要求的物質(zhì)，其特征在于R1，R4，和R5相同并為氫，R2和R3為CH3。11.權(quán)利要求的所要求的物質(zhì)，其特征在于R1和R5相同且為氫，R2，R3和R4為CH3。12.權(quán)利要求的所要求的物質(zhì)，其特征在于R1，R3，和R5相同并為氫，而R2和R4為CH3。13.權(quán)利要求的所要求的物質(zhì)，其特征在于R1為氫，R2，R3，R4和R5相同并為CH3。14.式(Ⅱ)的物質(zhì)其中(Ⅱb)R1＝R2＝CO2CH2C6H5。15.制備式(Ⅰ)azithromycinA的O-甲基衍生物和其藥用酸加成鹽的方法，其中ⅠaR1＝R2＝CO2CH2C6H5，R3＝CH3，R4＝R5＝HⅠbR1＝R2＝CO2CH2C6H5，R3＝R4＝CH3，R5＝HⅠcR1＝R2＝CO2CH2C6H5，R3＝R5＝H，R4＝CH3ⅠdR1＝R2＝CO2CH2C6H5，R3＝R4＝R5＝CH3ⅠeR1＝R2＝R4＝R5＝H，R3＝CH3ⅠfR1＝R2＝R5＝H，R3＝R4＝CH3ⅠgR1＝R2＝R3＝R5＝H，R4＝CH3ⅠhR1＝R2＝H，R3＝R4＝R5＝CH3ⅠiR1＝R4＝R5＝H，R2＝R3＝CH3ⅠjR1＝R5＝H，R2＝R3＝R4＝CH3ⅠkR1＝R3＝R5＝H，R2＝R4＝CH3ⅠlR1＝H，R2＝R3＝R4＝R5＝CH3該方法特征在于將式Ⅱazithromycin或其二水合物(Ⅱa，R1＝H，R2＝CH3)在過量適宜堿如碳酸氫鈉存在下，在反應(yīng)惰性溶劑如苯中，在25℃-60℃，與氯甲酸芐酯反應(yīng)，隨后將C-6，C-11和C-4″位的羥基O-甲基化得中間體式(Ⅱ)2′-O，3′-N-雙(芐氧羰基)-N-去甲基-azithromycinA(其中Ⅱb，R1＝R2＝CO2CH2C6H5)，然后在適宜堿如氫化鈉，氫氧化鉀和氫氧化鈉水溶液存在下，在適宜溶劑如二甲亞砜或N，N-二甲基甲酰胺，或它們與反應(yīng)惰性溶劑如四氫呋喃，乙腈，乙酸乙酯，1，2-二甲氧乙烷的混合物中，于0℃-室溫，將所得式Ⅱ化合物與1-18摩爾量的適宜甲基化試劑，如甲基碘，硫酸二甲酯，甲磺酸甲酯或?qū)?甲苯磺酸甲酯，反應(yīng)3-30小時，產(chǎn)生式Ⅰ的O-甲基-2′-O，3′-N-雙(芐氧羰基)-N-去甲基-azithromycinA的混合物，其中ⅠaR1＝R2＝CO2CH2C6H5，R3＝CH3，R4＝R5＝HⅠbR1＝R2＝CO2CH2C6H5，R3＝R4＝CH3，R5＝HⅠcR1＝R2＝CO2CH2C6H5，R3＝R5＝H，R4＝CH3ⅠdR1＝R2＝CO2CH2C6H5，R3＝R4＝R5＝CH3對所得式(Ⅰ)化合物選擇性進(jìn)行A)在硅膠柱上分離，得到色譜均一的化合物(Ⅰa)-(Ⅰd)，隨后在低級醇如甲醇或乙醇中，在催化劑如鈀黑或鈀炭存在下，于1-20巴氫氣壓下，于室溫及攪拌下，將(Ⅰa)-(Ⅰd)化合物氫解2-10小時以除去2′-和3′-位上的保護(hù)基，生成式(Ⅰ)O-甲基-N-去甲基-azirthromycinA衍生物，其中ⅠeR1＝R2＝R4＝R5＝H，R3＝CH3ⅠfR1＝R2＝R5＝H，R3＝R4＝CH3ⅠgR1＝R2＝R3＝R5＝H，R4＝CH3ⅠhR1＝R2＝H，R3＝R4＝R5＝CH3然后在選自鹵代烴如氯仿或低級醇如甲醇或乙醇，低級酮如丙酮的反應(yīng)惰性溶劑中，在反應(yīng)混合物的回流溫度下，用1-3當(dāng)量甲醛(37%)和等量或二倍量的甲酸(98-100%)或其它氫原小源對(Ⅰe)-(Ⅰh)化合物的3′-甲氨基進(jìn)行還原N-甲基化合2-8小時，生成式(Ⅰ)的O-甲基azithromycinA衍生物其中ⅠiR1＝R4＝R5＝H，R2＝R3＝CH3ⅠjR1＝R5＝H，R2＝R3＝R4＝CH3ⅠkR1＝R3＝R5＝H，R2＝R4＝CH3ⅠlR1＝H，R2＝R3＝R4＝R5＝CH3或B)如A)所述，通過氫解除去2′-和3′-位的保護(hù)基-芐氧羰基，生成式I的O-甲基-azithromycinA衍生物，其中ⅠiR1＝R4＝R5＝H，R2＝R3＝CH3ⅠjR1＝R5＝H，R2＝R3＝R4＝CH3ⅠkR1＝R3＝R5＝H，R2＝R4＝CH3ⅠlR1＝H，R2＝R3＝R4＝R5＝CH3將所得(式Ⅰ)混合物在硅膠柱上分離，生成色譜均一的azithromycinA(Ⅰi)-(Ⅰl)的O-甲基衍生物，然后將它們與至少一當(dāng)量無機(jī)或有機(jī)酸反應(yīng)生成藥用加成鹽。16.將權(quán)利要求1要求的式(Ⅰ)azithromycinA的O-甲基衍生物用于制備抗菌藥物制劑，其包括抗菌有效量且藥用量的式(Ⅰ)化合物和藥用載體。全文摘要本發(fā)明涉及式I的AzithromycinA的O-甲基文檔編號A61P31/04GK1059728SQ9110490公開日1992年3月25日申請日期1991年7月18日優(yōu)先權(quán)日1990年7月18日發(fā)明者加里潔拉·科布雷赫爾,斯洛博丹·喬吉科,戈吉納·拉扎斯金申請人:普里瓦醫(yī)藥·化學(xué)·化妝品公司