專利名稱：含上皮細胞上清液衍生的生長因子的頭發(fā)生長調(diào)節(jié)組合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及能調(diào)節(jié)頭發(fā)生長的新的組合物。
總的說來，社會上不斷有脫發(fā)的征象出現(xiàn)。人們對于擁有一頭健康的頭發(fā)的要求導致了多種“治療”禿發(fā)的方法產(chǎn)生。有關毛球的研究已見諸于文獻中曾報道過的大量關于頭發(fā)生長研究的文章中。毛囊有兩個基本特征，這就是上皮和被稱作真皮乳頭的被特化的真皮間隔。上皮生成能產(chǎn)生外根鞘的表皮干細胞和能產(chǎn)生內(nèi)根鞘及毛纖維的基質(zhì)細胞。真皮乳頭的大小與毛囊的大小相關，毛囊的大小又與所生成頭發(fā)的體積有關。例如，每一生發(fā)頭皮上的終毛囊比較長并且能長出長和粗的頭發(fā)。這些毛囊具有大的真皮乳頭。相反，在禿發(fā)頭皮上通常能看到的毫毛毛囊是較小的并且只能長出短而細的頭發(fā)。這些毫毛毛囊具有小的真皮乳頭。在有皮毛的動物身上也得到了關于乳頭和毛囊大小與毛發(fā)的最終生長情況間關系的類似觀察結果。能夠調(diào)節(jié)真皮乳頭大小的特異性因子基本也可調(diào)節(jié)頭發(fā)生長。
申請?zhí)枮?，215，274的歐洲專利申請(Eisinger，轉讓給Memorial Hospital for Cancer and Allied Diseases，1987年3月25日出版)公開了聲波處理表皮細胞以提取細胞內(nèi)物質(zhì)的方法，同時還公開了通過施用表皮細胞提取物來加速傷口愈合、再生表皮和增進頭發(fā)生長的方法。
Eisinger，M.，S.Sadan，I.A.Silver和R.B.Flick(1988年3月)在“通過上皮細胞衍生的因子調(diào)節(jié)皮膚細胞生長對傷口愈合的影響”(Procedures of the National Academy of Sciences，第85卷，第1937-1941頁)一文中公開了一種通過聲波處理表皮細胞或者從無細胞的上清液獲得的表皮細胞衍生的生長因子。這種因子具有下列特性1)直接對表皮細胞促有絲分裂;2)對于3T3細胞沒有直接的促有絲分裂活性;3)直接抑制成纖維細胞的代謝活性;4)分子量約為1000道爾頓。
國際專利申請89/07425(Sackier，Wood，Krishnan和Wigginton，轉讓給Genethics Ltd，1989年8月24日出版)要求了一種含有分散于可藥用載體中的羊膜上皮細胞和所述上皮細胞提取物的油膏、洗劑、霜劑或凝膠。該專利(WO 89/07245)進一步公開了可用于刺激毛囊和毛發(fā)生長的這樣一種組合物。
本發(fā)明的一個目的是提供調(diào)節(jié)頭發(fā)生長的組合物。
本發(fā)明的再一個目的是提供適于局部施用的調(diào)節(jié)頭發(fā)生長的組合物。
本發(fā)明還有一個目的是提供適于皮膚注射用的調(diào)節(jié)頭發(fā)生長的組合物。
本發(fā)明還有一個目的是提供調(diào)節(jié)頭發(fā)生長的方法，它包括對哺乳動物皮膚或毛發(fā)施用局部組合物。
本發(fā)明還有一個目的是提供調(diào)節(jié)頭發(fā)生長的方法，該方法包括將組合物進行皮膚注射。
本發(fā)明涉及一種調(diào)節(jié)頭發(fā)生長的組合物，它含有從上皮細胞(最好是增殖的上皮細胞)培養(yǎng)物獲得的安全并且有效量的上清液，該組合物包括一種生長刺激因子和一種可藥用載體，其中的生長刺激因子的特性是對真皮乳頭細胞和3T3細胞具有促有絲分裂活性，對表皮細胞缺乏促有絲分裂活性，并且分子量大于約3，000道爾頓。
本文所用的“促有絲分裂活性”是指在細胞中刺激生長(有絲分裂)的能力。
本文所用的“調(diào)節(jié)頭發(fā)生長”是指誘導更多數(shù)目的發(fā)絲生成和/或增大每根發(fā)絲的直徑，和/或增加每根發(fā)絲的長度，和/或預防、抑制或阻止脫發(fā)過程。
本文所用的“增殖的細胞”是指正在進行有絲分裂的細胞。
本文所用的“上皮細胞”是指覆蓋所有游離面即皮膚、粘膜和漿液組織，包括腺體及其衍生的其他結構的細胞，例如角膜上皮細胞、食管上皮細胞、表皮細胞和毛囊上皮細胞，但不包括羊膜上皮細胞。這類細胞可以是正常的非惡性細胞，或轉化的/不死的細胞。
本文所用的“毛囊上皮細胞”是指包圍毛囊中真皮乳頭的上皮細胞，如干細胞、外根鞘細胞、基質(zhì)細胞和內(nèi)根鞘細胞。這類細胞可以是正常的非惡性細胞，或轉化的/不死的細胞。
本文所用的“表皮細胞”是指表皮中的上皮細胞。這類細胞可以是正常的非惡性細胞，或轉化的/不死的細胞。
本文所用的“表皮”是指包繞整個器官止于身體裂口的粘膜皮膚連接處的連續(xù)性分層角化細胞層，但不包括毛囊上皮細胞。
本文所用的“局部施用”是指直接涂于或敷于皮膚外面。
本文所用的“轉化的細胞”是指那些自然轉變?yōu)闊o限制生長狀態(tài)的細胞，即它們通過在培養(yǎng)基中無限量分裂獲得生長的能力。
本文所用的“不死的細胞”是指通過化學和/或重組方法改變過的細胞，因而使這些細胞通過在培養(yǎng)基中無限量分裂具有了生長的能力。
本文所用的“皮膚注射”是指用一皮下針頭將物質(zhì)導入緊靠皮膚的下面或皮內(nèi)。
除非另外指明，本文所用的所有百分數(shù)均以重量計。
本發(fā)明的組合物含有一種上皮細胞衍生的生長因子，它刺激真皮乳頭細胞有絲分裂活性而致頭發(fā)生長。除了對真皮乳頭細胞的促有絲分裂活性外，該生長因子的其他特征包括1)對3T3細胞的促有絲分裂活性，2)對表皮細胞缺乏促有絲分裂活性，3)分子量大于約3，000道爾頓，4)對糜蛋白酶敏感，5)在50℃和100℃分別經(jīng)過1小時后對真皮乳頭細胞保留了90%-40%的促有絲分裂活性。
用于本發(fā)明的細胞衍生的頭發(fā)生長因子可以經(jīng)下列步驟獲得在營養(yǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)上皮細胞，然后從該培養(yǎng)物中分離上清液，將上清液離心除去細胞和細胞碎片，濃縮并透析上清液以分離表觀分子量約為3，000道爾頓的物質(zhì)。
經(jīng)上述步驟獲得的無細胞濃縮物含有表觀分子量約為3，000道爾頓的上皮細胞衍生的頭發(fā)生長因子。將頭發(fā)生長因子與一種合適的賦形劑一起混合在本發(fā)明的組合物中。此外，經(jīng)過透析的無細胞濃縮物在混入本發(fā)明組合物中之前可以進行干燥，最好是凍干。
盡管該頭發(fā)生長因子的表觀分子量約為3，000道爾頓，可以相信從頭發(fā)生長因子衍生而來的某些片段也可能顯示出調(diào)節(jié)頭發(fā)生長的活性。
根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實施方案，將無細胞的上皮細胞培養(yǎng)物上清液至少濃縮40-50倍，最好是至少濃縮100倍，以獲得一種含頭發(fā)生長因子且蛋白質(zhì)含量不大于10mg/ml、最好是2-3mg/ml的濃縮物。
與適宜的賦形劑一起摻入局部用組合物中的頭發(fā)生長因子的量可以有很大變化范圍，但總的說來，占組合物重量約0.00001%至約20%、較好是約0.001%至約10%、更好是約0.01%至約5%的以蛋白質(zhì)表示的量將為局部施用該組合物后的皮膚提供足夠量的頭發(fā)生長因子。
與適宜的賦形劑一起摻入到皮膚注射用組合物中的頭發(fā)生長因子的量可以有很大變化范圍，但總的說來，與組合物重量約0.00001%至約10%、較好是約0.001%至約10%、更好是約0.01%至約10%的以蛋白質(zhì)表示的量將對經(jīng)皮膚注射施用藥的特定區(qū)域提供足夠量的頭發(fā)生長因子。
下面的實施例將說明獲得用于某一特定部位(sample)的生長刺激因子的方法，而不是限制本發(fā)明。
實施例Ⅰ表皮細胞衍生的生長刺激因子的制備按照經(jīng)下列改良的S.T.Boyce和R.G.Ham的方法(J Tissue Culture Meth 9，83-93，1985)制備人包皮表皮細胞。用膠原酶處理包皮之后，將表皮放入含0.0125%胰蛋白酶的Hepes緩沖溶液中。研制表皮以釋放出單個表皮細胞。在KGM(Clonetics;＃3001)的細胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)表皮細胞。再用3.0單位/ml的dispase于37℃對表皮細胞進行亞培養(yǎng)直至細胞從培養(yǎng)皿的表面脫落下來。然后將KGM以5∶1的體積比加入到dispase中。將細胞懸浮液轉入錐形管中以200×G的速度離心5分鐘。再用新鮮的KGM重新懸浮并鋪平細胞。在細胞長至2號通道(passage ＃2)時，沖洗細胞，并將培養(yǎng)基改成“角質(zhì)細胞基礎培養(yǎng)基”(培養(yǎng)基不含垂體提取物，也不含正常情況下存在于培養(yǎng)基中的下列生長因子包括氫化可的松、胰島素和表皮生長因子;KBM Clonetics ＃3101)。該表皮細胞在上述培養(yǎng)基中孵育到48小時時將培養(yǎng)基倒出。然后以100，000XG的速度將該培養(yǎng)基(“所定義的條件培養(yǎng)基”)離心30分鐘。將培養(yǎng)基進行分餾并用Amicon Centricon-3濾膜超濾濃縮，該濾膜可濾除的分子量約為3，000道爾頓。正如下述真皮乳頭細胞有絲分裂原試驗測定的，所得分子量大于約3，000道爾頓的超濾殘留物將含有全部生長因子活性，而含有分子量小于約3，000道爾頓物質(zhì)的濾液則沒有任何活性。
用于分餾和濃縮條件培養(yǎng)基的另外一種方法可以包括用具有特定濾過分子量的膜透析培養(yǎng)基，然后凍干培養(yǎng)基，最后在合適的緩沖液中重建培養(yǎng)基。
實施例Ⅱ人毛囊上皮細胞衍生的生長刺激因子的制備從頭皮組織活檢獲取毛囊。將毛囊小心地分離出，并浸入以25mM HEPES(N-2-羥乙基哌嗪-N′-2-乙磺酸)緩沖的Dulbecco改良的Eagle培養(yǎng)基(DMEM)中，并加入如H-J Stark等人(Differentiation 35，236-248，1987)描述的抗菌素。將毛囊轉至含有上述培養(yǎng)基的35mm組織培養(yǎng)皿中。然后將培養(yǎng)基抽吸出來，用0.1%的胰蛋白酶(1∶250)和含0.02%EDTA且不含鈣或鎂的磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)覆蓋毛囊，于37℃孵育10分鐘。在含10%新生小牛血清的DMEM中劇烈吹打毛囊獲得單個細胞懸浮液。必要時，接著再用胰蛋白酶處理毛囊。收集細胞懸浮液并以200XG的速度離心10分鐘。再用不含血清的DMEM洗滌一次細胞。上皮細胞在KGM(Clonetics;＃3101)的細胞培養(yǎng)基中生長。用3.0單位/ml的dispase于37℃對上皮細胞進行亞培養(yǎng)直至細胞從培養(yǎng)皿表面脫落。以5∶1的體積比將KGM加入到dis-pase中。然后將細胞懸浮液轉至錐形管中并以200XG的速度離心5分鐘。用新鮮的KGM重新懸浮并鋪平細胞。在細胞長至2號通道(passage ＃2)時洗滌細胞，并把培養(yǎng)基改成‘所定義的培養(yǎng)基’(培養(yǎng)基不含垂體提取物，也不含正常情況下存在于培養(yǎng)基中的下列生長因子包括氫化可的松、胰島素、表皮生長因子;KBM Clonetics＃3101)。上皮細胞在上述培養(yǎng)基中孵育到48小時時將培養(yǎng)基倒出。然后以100，000XG的速度將該培養(yǎng)基(所定義的條件培養(yǎng)基)離心1小時。將培養(yǎng)基進行分餾并用具有3，000道爾頓濾過分子量的Amicon Centricon-3濾膜超濾濃縮。正如下述真皮乳頭細胞有絲分裂原試驗測定的，所得分子量大于3，000道爾頓的超濾殘留物將含有全部生長因子活性，而含有分子量小于3，000道爾頓物質(zhì)的濾液則沒有任何活性。
用于分餾和濃縮條件培養(yǎng)基的另外一種方法可以包括用具有特定濾過分子量的膜透析培養(yǎng)基，然后凍干培養(yǎng)基，最后在合適的緩沖液中重建培養(yǎng)基。
實施例Ⅲ真皮乳頭細胞有絲分裂原試驗A.人頭皮真皮乳頭細胞的制備用現(xiàn)存方法學(A.G.Messenger，Br J Dermatol 110，685-689，1984;和C.A.B.Jahoda與R.F.Oliver，Br J Dermatol 105，623-627，1981;和C.A.B.Jahoda與R.F.Oliver，J Embryol Exp Morph 79，211-224，1984)的改良方法制備人頭皮真皮乳頭(hDP)細胞。從頭皮還原外科術中獲得人頭皮，并將其置于含20%胎牛血清和抗菌素的冰冷消毒的Dulbecco改良的Eagle培養(yǎng)基/F-12(1∶1)中。在48小時內(nèi)的外科術中，分離皮膚，去掉脂肪，收集單個毛囊并將其置于含10%Hyclone定義的牛血清(Hyclone Lab＃A-2151-L)(′Complete Chang′)的冰冷的Chang培養(yǎng)基(Hana Biological ＃T101-058)中。去掉毛球并經(jīng)顯微分離獲得真皮乳頭。以這種方式收集10個真皮乳頭，將它們轉至裝有2ml Complete Chang培養(yǎng)基的無菌錐形管中，以200XG的速度離心5分鐘。抽吸出培養(yǎng)基，用2ml含Ⅳ型膠原酶(65單位/毫升)的Complete Chang培養(yǎng)基重新懸浮真皮乳頭。膠原酶配制成1mg/ml貯于磷酸鹽緩沖鹽水中。真皮乳頭在37℃下水浴搖育30分鐘后，經(jīng)200XG的速度離心5分鐘進行收集。所得真皮乳頭丸塊在Complete Chang中洗滌一次，再轉至含0.5ml Complete Chang的24孔平皿(Linbro＃76-033-05)中的單個孔中(2.0cm2)，在含5%CO2的潮濕空氣中于37℃下孵育。
一旦觀察到細胞長出移植物(通常為三天)，每周換三次培養(yǎng)基。當細胞融合后，用含0.25%胰蛋白酶的Dulbecco平衡鹽溶液移走細胞，轉至含5ml Complete Chang的25cm2T-25細胞培養(yǎng)瓶中(1號通道(passage ＃1))。Passage ＃3的hDP細胞用于生長促進劑測定。每一passage代表真皮乳頭細胞數(shù)目約3倍量的增長。
B.真皮乳頭細胞有絲分裂原試驗下述方法是有關真皮乳頭細胞有絲分裂活性的測定，該方法可用于檢測生長因子(M.B.Sporn和A.B.Roberts，Nature，332，217-219，1988)。在Complete Chang和含15%胎牛血清及抗菌素(完全的DMEM)的Dulbecco改良的Eagle培養(yǎng)基(含高濃度葡萄糖的‘DMEM’)的1∶1的混合物中，將人真皮乳頭細胞鋪平至20-40%融合。第二天將培養(yǎng)基換成完全的DMEM。第三天將培養(yǎng)基換成含0.5%胎牛血清的DMEM。在24小時培養(yǎng)的最后4小時中，將細胞與[甲基-3-H]-胸苷一起孵育。此時點代表真皮乳頭細胞的基礎有絲分裂活性。然后將放射標記的細胞溶解于含0.1%十二烷基硫酸鈉、0.05mM EDTA和1.0mM Tris(pH8.0)的溶液中。測定三氯乙酸和乙醇可沉淀的放射標記的DNA，并將樣本中細胞DNA的總含量標準化(C.Lebarca和K.Paigen，Analyt Biochem 102，344-351，1980)。
將剩余的真皮乳頭細胞暴露于(a)新鮮的完全DMEM(陽性對照)，(b)含0.5%胎牛血清的新鮮DMEM(陰性對照)，(c)含0.5%胎牛血清的新鮮DMEM和所定義的條件培養(yǎng)基的1∶1混合物，或(d)含0.5%胎牛血清的新鮮DMEM和空白的條件培養(yǎng)基(Conditioned Sham Medium)的1∶1混合物中。用于(c)和(d)中的培養(yǎng)基在加入hDP細胞中之前要將胎牛血清和CaCl2的最終濃度分別調(diào)至0.5%和1.0mM。在24小時培養(yǎng)的最后4小時，將細胞與[甲基-3H]-胸苷一起孵育。按照上述基礎測量的方法，測定細胞的酸和乙醇可沉淀的放射標記的DNA。
所得結果表明所定義的條件培養(yǎng)基相對于空白對照導致了胸苷結合的明顯增加。
實施例Ⅳ3T3細胞有絲分裂原測定3T3細胞有絲分裂原測定是基于下述測定方法即Scher，C.D.等人，Nature 281，390-392，1979;Cohen，S.和Carpenter，G.Proc Nat Acad Sci，USA 72，1317-1320，1975;以及Gospodarowicz，D.F.Biol.Chem 250，D J Biol Chem 250，2515-2520，1975。
將Balb/c 3T3細胞在含有Dulbecco改良的Eagle培養(yǎng)基(DMEM)+10%新生牛血清的24孔組織培養(yǎng)皿中鋪平并生長。每周更換3次培養(yǎng)基直至細胞融合，融合后將培養(yǎng)基改為DMEM+0.5%血清。在此后的48小時之內(nèi)更換一次培養(yǎng)基之后，將培養(yǎng)孔分為每三個孔一組。在第Ⅰ組中，于48小時的最后4小時加入[3H]-胸苷，然后進行胸苷摻入細胞DNA的過程(‘零點基礎對照’)。第Ⅱ組中，將培養(yǎng)基改成DMEM+0.5%血清，將細胞再孵育24小時、放射標記并進行上述處理(‘陰性對照’)。第Ⅲ組中，將培養(yǎng)基改為DMEM+10%血清，將細胞再孵育24小時、放射標記并進行上述處理(‘陽性血清對照’)。第Ⅳ組中，將培養(yǎng)基改成DMEM+0.5%血清與所定義的條件培養(yǎng)基的1∶1混和物。在混合這兩種培養(yǎng)基之前，將條件培養(yǎng)基調(diào)節(jié)為含0.5%血清和1mM CaCl2。在孵育24小時末，如上所述對細胞進行放射標記和處理。第Ⅴ組中，將培養(yǎng)基改成DMEM+0.5%血清與空白培養(yǎng)基1∶1的混合物。在混合這兩種培養(yǎng)基之前，將空白培養(yǎng)基調(diào)節(jié)為含0.5%血清和1mM CaCl2。在孵育24小時末，如上所述對細胞進行放射標記和處理。
所得結果將表明，所定義的條件培養(yǎng)基相對于空白對照導致了胸苷結合的顯著增加。
實施例Ⅴ上皮細胞有絲分裂原測定人包皮上皮細胞和條件培養(yǎng)基的制備如前所述。用dispase分離passage ＃1中的上皮細胞，并在含有完全KGM培養(yǎng)基的8孔培養(yǎng)皿(8cm2)的每一孔中鋪平至細胞融合10-25%以進行有絲分裂原測定。每周更換3次培養(yǎng)基直到細胞融合達到約70%。使細胞在此培養(yǎng)基中再培養(yǎng)5天以減小有絲分裂活性，并耗竭其生長因子活性的培養(yǎng)基。在這一培養(yǎng)的最后4小時中，將[甲基-3H]-胸苷加到3個細胞孔中的一個中(基礎有絲分裂活性)。在4小時孵育期之末，洗滌細胞，并將其溶于含0.1%十二烷基硫酸鈉0.05mMEDTA和1.0mM Tris(pH8.0)的溶液中。測定三氯乙酸和乙醇/乙醚可沉淀的放射標記的DNA，并使樣本中的細胞DNA的總含量標準化。對于剩余細胞，在培養(yǎng)5天之后，去除并保存該培養(yǎng)基(‘老培養(yǎng)基’)。向三個細胞孔中的一個回加老培養(yǎng)基(‘陰性對照’)。將新鮮kGM加入第二孔中(‘陽性對照’)。將老培養(yǎng)基和所定義的條件培養(yǎng)基按1∶1的比例加入第三孔(‘試驗組’)。向第四孔中加入1∶1的老培養(yǎng)基和空白條件培養(yǎng)基1∶1的混合物(‘空白對照’)。在24小時培養(yǎng)的最后4小時，如前所述對細胞進行培養(yǎng)并用胸苷放射標記。
所得結果表明，所定義的條件培養(yǎng)基相對于空白對照并不含有對人上皮細胞具有絲分裂活性的因子。
實施例Ⅵ對蛋白酶的敏感性A.蛋白酶敏感性胰蛋白酶如前所述制備從包皮表皮細胞產(chǎn)生的條件培養(yǎng)基。用終濃度達100μg/ml的Ⅲ型胰蛋白酶(Sigma T-8253)于37℃處理該培養(yǎng)基達4小時。然后加入終濃度為1mg/ml的I-S型大豆胰蛋白酶抑制劑(Sigma Y-9003)。該混合物以20，000G的速度離心30分鐘，傾析并無菌過濾。此培養(yǎng)基用于真皮乳頭細胞有絲分裂原測定。所得數(shù)據(jù)表明，條件培養(yǎng)基的促有絲分裂活性相對于除了不含胰蛋白酶之外完全同樣處理的對照培養(yǎng)基而言不受胰蛋白酶作用的影響。
B.蛋白酶敏感性糜蛋白酶如前所述制備從包皮表皮細胞產(chǎn)生的條件培養(yǎng)基。用終濃度達100μg/ml的I-S型糜蛋白酶(Sigma C-7762)于37℃處理該培養(yǎng)基達5小時。然后加入終濃度1mg/ml的I-S型大豆胰蛋白酶抑制劑(Sigma Y-9003)。該混合物以20，000G的速度離心30分鐘、傾析并無菌過濾。此培養(yǎng)基用于真皮乳頭細胞有絲分裂原測定。所得結果表明，條件培養(yǎng)基的促有絲分裂活性相對于除了不含糜蛋白酶之外完全同樣處理的對照培養(yǎng)基而言有顯著下降。
實施例Ⅶ熱敏感性如前所述制備從包皮表皮細胞產(chǎn)生的條件培養(yǎng)基。培養(yǎng)基分成數(shù)等份，分別于水浴50℃、60℃、70℃、80℃或100℃加熱30分鐘。培養(yǎng)基同時也置于冰浴30分鐘。經(jīng)過這段時間后，將培養(yǎng)基以20，000G的速度離心30分鐘，傾析并無菌過濾。此培養(yǎng)基用于真皮乳頭細胞有絲分裂原測定。所得結果表明，條件培養(yǎng)基在約50℃～80℃加熱后，生長因子的活性出現(xiàn)了從約90%至約40%的線性下降。在約80℃和約100℃加熱后，生長因子活性留存約40%。
頭發(fā)生長調(diào)節(jié)組合物本發(fā)明涉及調(diào)節(jié)頭發(fā)生長的組合物，它含有一種安全和有效量的上皮細胞衍生的頭發(fā)生長因子和一種可藥用載體，其中的生長因子具下列特性;對真皮乳頭細胞和3T3細胞具有促有絲分裂活性，缺乏對表皮細胞的促有絲分裂活性，分子量大于約3，000道爾頓。本文所用的“安全和有效量”是指在健全的評價范圍內(nèi)化合物或組合物的量足以在受試條件下明顯誘發(fā)陽性修飾作用，并且該量也是足夠的低以避免嚴重的付作用(有適當?shù)膬?yōu)點和危險性的比值)。
載體本發(fā)明的組合物包括一種能使生長刺激因子以合適濃度釋放到所需部位的固體、半固體或液體的可藥用載體。本文所用的“可藥用載體”是指適于人類或較低等動物施用的填料/稀釋劑類物質(zhì)。載體本身可以是無活性的，或者它具有自身的生理或藥理特性。載體的性質(zhì)將由所選擇的組合物施用方法決定。生長刺激生長因子組合物的施用方法的范圍可以從象注射之類的體內(nèi)方法到體外局部施用方法。
生長刺激因子的優(yōu)選施用方法是皮膚注射。便于這種施用方法的載體最好含有水或鹽溶液。
更優(yōu)選的生長刺激因子施用方法是局部應用。以噴霧劑、補劑、霜劑、洗劑和洗發(fā)劑等形式的組合物能更好地達到局部施用效果。
本發(fā)明的局部用組合物可以配制成多種液體例如洗劑、乳油、洗發(fā)劑、調(diào)理劑或乳劑。這種液體組合物配成后可與一種灑施器連用。所說灑施器可以是例如滾球式灑施器，或是象含有推進劑的氣溶膠樣的噴霧裝置，或是裝有施用液體物質(zhì)的泵的容器。
此外，本發(fā)明組合物可以是固體或半固體，如棒、乳膏或凝膠。這類固體或半固體組合物配成后可與一種合適的施用器或普通管子、或瓶子、或浸滲液體的織物如組織擦連用。
根據(jù)所需組合物的產(chǎn)品形式，用于本發(fā)明目的的載體的選擇具有很大范圍的可能。合適的賦形劑可按下文所述進行分類。
術語“局部載體”是指能作為生長刺激因子稀釋劑、分散劑或溶劑的物質(zhì)，它能保證生長刺激因子以適宜的濃度施用于并均勻地分布于選定部位上。選用的載體最好是能有助于生長刺激因子滲透皮膚達到緊靠毛囊的部位。在本發(fā)明組合物中有用的局部載體可以包括水作為賦形劑和/或至少一種非水的化妝品可接受的賦形劑。在本發(fā)明局部用組合物中有用的載體可以包括脂質(zhì)體、膠乳、小噬細胞或生長刺激因子的各種形式的微膠囊。
總之，載體可以是有機的或是一種水乳濁液，并且它們能使生長刺激因子分散或溶解其中。載體可包括可藥用潤膚劑、皮膚滲透增強劑、著色劑、香料、乳化劑、增稠劑和溶劑。
下面更詳細地描述優(yōu)選的局部用組合物1.洗劑洗劑可以包含有效量(優(yōu)選約0.01%至約10%，較優(yōu)選約0.1%至約1%)的生長刺激因子;1%～50%，優(yōu)選3%～15%的潤膚劑，用水、C2或C3醇或水和醇的混合物平衡。已知多種潤膚劑。這類潤膚劑的例子如下
a.烴油和蠟它們的例子有礦物油、凡士林、石蠟、純地蠟、地蠟、微晶蠟、聚乙烯和全氫化角鯊烯。
b.硅油，如二甲基聚硅氧烷、甲基-苯基聚硅氧烷、水溶性和醇溶性硅氧烷-乙二醇共聚物和揮發(fā)性硅酮液體如cyclomethicane。
c.從植物、動物和海生資源獲得的甘油三酯脂肪和油類。它們的例子包括蓖麻油、紅花油、棉子油、玉米油、橄欖油、鱈魚肝油、杏但油、鱷梨油、棕櫚油、芝麻油和豆油。
d.乙酰甘油酯類，如乙酰化單甘油酯。
e.乙氧基化甘油酯，如乙氧基化甘油-硬脂酸酯。
f.具有10-20個碳原子的脂肪酸烷基酯。脂肪酸甲酯、異丙酯和丁酯可用于本發(fā)明。它們的例子包括月桂酸己酯、月桂酸異己酯、棕櫚酸異己酯、棕櫚酸異丙酯、肉豆蔻酸異丙酯、油酸癸酯、油酸異癸酯、硬脂酸十六烷酯、硬脂酸癸酯、異硬脂酸異丙酯、己二酸二異丙酯、己二酸二異己酯、己二酸二己基癸酯、癸二酸二異丙酯、乳酸十二烷基酯、乳酸十四烷基酯和乳酸十六烷基酯。
g.具有10-20個碳原子的脂肪酸鏈烯基酯。它的例子包括肉豆蔻酸油酯、硬脂酸油酯和油酸油酯。
h.具有8-22個碳原子的脂肪酸。適宜的例子包括壬酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、異硬脂酸、羥基硬脂酸、油酸、亞油酸、蓖麻油酸、花生四烯酸、山萮酸和芥酸。
i.具有8-22個碳原子的脂肪醇。月桂醇、肉豆蔻醇、鯨蠟醇、十六烷醇、十八烷醇、異十八烷醇、羥基十八烷醇、油醇、蓖麻油醇、山萮醇、芥醇和2-辛基十二烷醇都是令人滿意的脂肪醇的例子。
j.脂肪醇醚。含8-20個碳原子的乙氧基化脂肪醇包括月桂醇、鯨蠟醇、十八烷醇、異十八烷醇、油醇和膽甾醇，它們含有1-50個環(huán)氧乙烷基團或1-50個1，2-環(huán)氧丙烷基團、或二者的混合物與其相連接。
k.醚酯，如乙氧基化脂肪醇的脂肪酸酯。
l.羊毛脂及其衍生物。羊毛脂、羊毛脂油、羊毛脂蠟、羊毛脂醇、羊毛脂脂肪酸、isopropyl lanolate、乙氧基化羊毛脂、乙氧基化羊毛脂醇、乙氧基化膽固醇、丙氧基化羊毛脂醇、乙?；蛎⒁阴；蛎?、羊毛脂醇亞油酸酯、羊毛脂醇蓖麻醇酸酯、羊毛脂醇蓖麻醇酸酯的乙酸酯、乙氧基化醇酯的乙酸酯、羊毛脂氫解、乙氧基化氫化羊毛脂、乙氧基化山梨醇羊毛脂和液體及半固體羊毛脂吸收基質(zhì)都是從羊毛脂衍生來的潤膚劑的例子。
m.多元醇和聚醚衍生物。它們的例子是丙二醇、二丙二醇、聚丙二醇(分子量2000-4000)、聚氧乙烯、聚氧丙二醇、聚氧丙烯聚氧乙二醇、甘油、乙氧基化甘油、丙氧基化甘油、山梨醇、乙氧基化山梨醇、羥丙基山梨醇、聚乙二醇(分子量200-6000)、甲氧基聚乙二醇350、550、750、2000、5000、聚(環(huán)氧乙烷)均聚物(分子量100，000-5，000，000)聚鏈烷二醇及其衍生物、己二醇(2-甲基-2，4-戊二醇)、1，3-丁二醇、1，2，6-己三醇、乙基己二醇USP(2-乙基-1，3-己二醇)C15-C18連乙二醇和三羥甲基丙烷的聚氧丙烯衍生物。
n.多元醇酯。乙二醇一和二脂肪酸酯、二乙二醇一和二脂肪酸酯、聚乙二醇(分子量200-6000)一和二脂肪酸酯、丙二醇一和二脂肪酸酯，聚丙二醇2000-油酸酯、聚丙二醇2000-硬脂酸酯、乙氧基化丙二醇一硬脂酸酯、甘油一和二脂肪酸酯、聚丙三醇多脂肪酸酯、乙氧基化甘油-硬脂酸酯、1，3-丁二醇一硬脂酸酯、1，3-丁二醇二硬脂酸酯、聚氧乙烯多脂肪酸酯、脫水山梨醇脂肪酸酯和聚氧乙烯脫水山梨醇脂肪酸酯都是令人滿意的多元醇酯。
o.蠟酯，如蜂蠟、鯨蠟、肉豆蔻酸肉豆蔻酯、硬脂酸十八烷基酯。
p.蜂蠟衍生物，如聚氧乙烯山梨醇蜂蠟。這些物質(zhì)是蜂蠟與不同環(huán)氧乙烷含量的乙氧基化山梨醇的反應產(chǎn)物，形成了醚酯混合物。
q.植物蠟包括巴西棕櫚蠟和小燭樹蠟。
r.磷脂，如卵磷脂及其衍生物。
s.固醇。它的例子是膽固醇、膽固醇脂肪酸酯。
t.酰胺，如脂肪酸酰胺、乙氧基化脂肪酸酰胺、固態(tài)脂肪酸鏈烷醇酰胺。
洗劑最好還含有1%～10%、更好是2-5%的乳化劑。乳化劑可以是非離子型、陰離子型或陽離子型。合適的非離子型乳化劑的例子包括含10-20個碳原子的脂肪醇、與2-20mol環(huán)氧乙烷或環(huán)氧丙烷縮合的含10-20個碳原子的脂肪醇、與2-20mol環(huán)氧乙烷縮合的烷基鏈中含6-12個碳原子的烷基酚、環(huán)氧乙烷的一和二脂肪酸酯、乙二醇的一和二脂肪酸酯(其中脂肪酸部分含10-20個碳原子)、二乙二醇、聚乙二醇(分子量200-6000)、丙二醇(分子量200-3000)、甘油、山梨醇、脫水山梨醇、聚氧乙烯山梨醇、聚氧乙烯脫水山梨醇和親水蠟酯。合適的陰離子型乳化劑包括脂肪酸皂，例如鈉、鉀和三乙醇胺皂，其中脂肪酸部分含10-20個碳原子。其它合適的陰離子乳化劑包括堿金屬、銨或取代的烷基硫酸銨、芳基磺酸烷基酯、在烷基部分含10-30個碳原子的乙氧基醚磺酸烷基酯。乙氧基醚磺酸烷基酯，含有1-50個環(huán)氧乙烷單位。合適的陽離子乳化劑是季銨化合物、嗎啉化合物和吡啶鎓化合物。前文描述的某些潤膚劑也具有乳化特性。雖然在組合物中可以包括一種乳化劑，但是當配制的洗劑含有這樣的潤膚劑時，不必另加乳化劑。
洗劑的余量是水或者C2或C3醇，或是水與醇的混合物。將所有成分簡單地混合在一起配制洗劑。本發(fā)明優(yōu)選的化合物是溶解在混合物中，可以包括常規(guī)的任意成分。這類添加劑之一是增稠劑，其含量為組合物的1%-10%。合適的增稠劑的例子包括交聯(lián)羧基聚亞甲基聚合物、乙基纖維素、聚乙二醇、黃蓍膠、gum kharaya、和皂土、羥乙基纖維素和羥丙基纖維素。
2.霜劑霜劑含有有效量(優(yōu)選約0.01%至約10%、更優(yōu)選約1%至約5%)的生長刺激因子;5～50%、優(yōu)選10%～25%的潤膚劑;以及余量的水。上述潤膚劑也可用于霜劑組合物。如上所述霜劑形式任意含有一種合適的乳化劑。當包括乳化劑時，其含量為組合物的3～50%、優(yōu)選5～20%。
3.溶劑溶劑劑型含有有效量(優(yōu)選約0.01%至約10%、更優(yōu)選約0.1%至約1%)的生長刺激因子;余量的水和/或合適的有機溶劑。適于作為溶劑或溶劑體系一部分的合適有機物如下丙二醇、聚乙二醇(分子量200-600)、聚丙二醇(分子量425-2025)、甘油、山梨醇酯、1，2，6-己三醇、異丙醇、酒石酸二乙酯、丁二醇及其混合物。該溶劑體系也可以包括水。
這些溶液形式的組合物可以直接施用于皮膚上，或者也可以配制成氣溶膠，以噴霧方式施用于皮膚上。氣溶膠組合物進一步含有25～80%、最好是30～50%的合適推進劑。這種推進劑的例子是氯化的、氟化的和氯氟化的低分子量碳氫化合物。一氧化二氮、二氧化碳、丁烷和丙烷也可用作推進劑氣體。使用足夠量的推進劑以排出容器中的成分。
4.凝膠通過將一種合適的增稠劑與前文所述的溶液組合物簡單混合可以配制凝膠組合物。合適的增稠劑的例子已在前文有關洗劑部分作為描述。
凝膠組合物含有有效量(優(yōu)選約0.01%至約10%、更優(yōu)選約1%至約5%)的生長刺激因子;5-75%、優(yōu)選10-50%如前所述的有機溶劑;0.5-20%、優(yōu)選1%-10%的增稠劑;余量的水。
5.固體固體形式的組合物是以棒狀組合物形式施用于頭皮或身體的其他部位。該組合物含有有效量(優(yōu)選約0.01%至約10%、更優(yōu)選約1%至約5%)的生長刺激因子，50-98%、優(yōu)選60-90%如前所述的潤膚劑。該組合物可以進一步包括1-20%、優(yōu)選5-15%的一種合適的增稠劑，并任意含有乳化劑和水。前文有關洗劑部分所述的增稠劑也適用于此。
滲透增強劑滲透增強劑可以通過促進生長因子透過角質(zhì)層，釋放到靠近真皮乳頭的毛囊周圍的生長因子作用部位，加強頭發(fā)生長刺激因子的作用。
滲透增強劑按其功能可以有多種作用方式。例如，它可以改善頭發(fā)生長促進劑在皮膚表面的分布?；蛘?，當局部施用時，滲透增強劑可以增加生長刺激因子從組合物中分配到皮膚內(nèi)，從而有助于其到達作用位點。滲透增強劑增強生長刺激因子的作用也可能包括其他機制。
滲透增強劑的例子包括但不限于下列物質(zhì)與某種C3-C4二醇結合的1-十二烷基氮雜環(huán)庚烷-2-酮或1-取代的氮雜環(huán)烷基-2-酮(見US4，557，934，Cooper，1985年12月10日公告);C3-C4二醇和“細胞包膜紊亂化合物”的二元結合(見US4，552，872，Cooper，Loomans和Fawzi，1985年11月12日公告);N-(2-羥乙基)吡咯烷酮和一種“細胞包膜紊亂化合物”的二元結合(見US4，537，776，Cooper，1985年8月27日公告);含下列物質(zhì)的化合物月桂醇、癸二酸二異丙酯、癸二酸二丁酯、己二酸二辛酯、丙二醇二壬酸酯、月桂酸丁酯、肉豆蔻酸乙酯、肉豆蔻酸丁酯、棕櫚酸異丙酯、油醇、癸二酸二乙酯、癸二酸二辛酯、壬二酸二辛酯、月桂酸己酯、癸酸乙酯、硬脂酸丁酯、異硬脂酸異丙酯、壬酸2-乙基己酯、苯甲酸丁酯、苯甲酸芐酯、水楊酸芐酯、鄰苯二甲酸二丁酯和/或月桂酸乙酯(見US4，299，826，Luedders，1981年11月10日公告);糖酯與亞砜或氧化膦結合(見US4，150，114，Smith，1979年4月17日公告;US4，148，917，smith，1979年4月10日公告;US4，148，887，Smith，1979年4月10日公告;US4，148，874，Smith，1979年，4月，10日公告;US4，148，893，Smith，1979年4月10日公告;US4，130，667，Smith，1978年12月19日公告;US4，130，643，Smith，1978年12月19日公告;US4，046，886，Smith，1977年9月6日公告;US3，952，099，Smith，1976年4月20日公告;US3，952，099，Smith，1976年4月20公告;US3，896，238，Smith，1975年7月22日公告);含有脂族亞砜的載體(見US 3，953，599，Mac-Millan和Lyness，1976年4月27日公告;US 3，903，256，MacMillan和Lyness，1975年9月2日公告;US3，839，566，Mac-Millan和Lyness，1974年10月1日公告;US3，678，156，MacMillan和Lyness，1972年7月18日公告);含有C3-C4二醇或C3-C6三醇和特異性C16或C18醇極性脂化合物二元結合的載體(見EP249397，Kasting，Smith，Massaro和Snyder，1987年12月16日出版)。含C3-C4二醇、二醇酯或二醇醚和細胞包膜紊亂化合物的載體(見EP095813，Cooper，1983年12月7日出版;EP043738，Wickett，Cooper和Loomans 1982年1月13日出版);含C6-C14的伯鏈烷醇和丙二醇或丁二醇的載體(見EP013459，Wickett，Cooper和Loomans，1980年7月23日出版)。
其他頭發(fā)生長刺激劑本發(fā)明的組合物也可以任意含有能經(jīng)不同途徑行使增強生長刺激因子作用的其他頭發(fā)生長刺激劑。這種自身具有調(diào)節(jié)頭發(fā)生長能力的其他物質(zhì)的例子包括但不限于下列物質(zhì)長壓定、視黃酸、氯甲苯噻嗪、甘氨酸-組氨酸-賴氨酸(已知又稱為肝細胞生長因子)及其過渡金屬衍生物、環(huán)孢菌素、抗炎劑、鈣通道阻斷劑、抗菌劑、非離子型表面活性劑、粘多糖、抗雄激素劑、糖苷酶抑制劑和葡糖胺聚糖酶抑制劑。
蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑頭發(fā)生長因子是蛋白質(zhì)，因此，在本發(fā)明的組合物中加入蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑可以維持或改善頭發(fā)生長因子的促進頭發(fā)生長的作用。作為這種效果的例子，應該注意到皮膚含有至少可以部分降解頭發(fā)生長促進劑的天然蛋白酶。因此，象蛋白酶抑制劑或能與頭發(fā)生長促進劑競爭以被皮膚天然蛋白酶降解的第二蛋白質(zhì)這樣的蛋白穩(wěn)定劑的存在能保護頭發(fā)生長促進劑，直至它到達靠近毛球的周圍。
蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑的例子包括甘油、乙二胺四乙酸、半胱氨酸、α2-巨球蛋白、血清和其它蛋白酶抑制劑。
其他成分本發(fā)明的組合物按照所需產(chǎn)品的劑型可以含有上述以外的成分。例如可能包括殺菌劑、防腐劑、抗氧劑、著色劑、皂和清潔劑。
本發(fā)明的組合物也可以作為賦形劑廣泛應用于化妝品或藥物活性成分中，尤其是當應用于皮膚時能產(chǎn)生促進毛發(fā)生長作用以外的其他一些有益作用的成分中。
本發(fā)明的組合物也可以任意含有足夠量的香料，以使組合物能夠被消費者接受并樂于使用。通常，香料將占組合物重量的0.01～0.1%。
組合物誘導、維持或增加頭發(fā)生長的應用本發(fā)明還提供了以從培養(yǎng)的上皮細胞中分離的頭發(fā)生長因子治療禿發(fā)的應用。下列應用方法可用于逆轉、抑制或防止禿發(fā)的發(fā)生。
本發(fā)明的組合物優(yōu)選以皮膚注射的方式應用。組合物的用量和皮膚注射的次數(shù)根據(jù)個人的需要可以有很大變化。但是作為皮膚注射施用一般情況下建議每天一次至每6個月一次、更優(yōu)選每周3次至每月1次、最優(yōu)選每周1次至每月2次皮膚注射含有生長刺激因子的適于皮膚注射的組合物。用于皮膚注射的組合物每一劑量含約4pg/kg至約4μg/Kg的生長刺激因子、優(yōu)選約400pg/kg至約4μg/kg、更優(yōu)選約2ng/kg至約3μg/kg、最優(yōu)選約50ng/kg至約0.3μg/kg。注射期可以為約1個月至約10年，優(yōu)選約3個月至約2年，更優(yōu)選約6個月至約1年，從而導致調(diào)節(jié)頭發(fā)生長。
更優(yōu)選的施用本發(fā)明組合物的方法是局部施用于人頭皮以調(diào)節(jié)頭發(fā)生長，尤其是已禿發(fā)的頭部，或有跡象表明將禿發(fā)(即脫發(fā))的人頭部。組合物的用量和施用于頭發(fā)和/或頭皮的次數(shù)根據(jù)個人需要可以有很大變化，但是一般情況下建議每天局部施用約1次至約10次，優(yōu)選每天約2次至約6次，更優(yōu)選每天約3次至約4次，最優(yōu)選每天1次。局部施用的組合物每一劑量含有生長刺激因子約1ng/cm2至約1mg/cm2，優(yōu)選約100ng/cm2至約0.9mg/cm2，更優(yōu)選約0.5μg/cm2至約0.7mg/cm2，最優(yōu)選約10μg/cm2至約0.5mg/cm2。局部施用期將優(yōu)選約1個月至約10年，更優(yōu)選約3個月至約2年，最優(yōu)選約6個月至約1年，從而導致調(diào)節(jié)頭發(fā)生長。
下面的實施例進一步描述和說明了在本發(fā)明范圍內(nèi)優(yōu)選的實施方案。所給出的實施例僅僅用于說明本發(fā)明的目的，不構成對本發(fā)明的限制，因為在不違背本發(fā)明精神和范圍的情況下對本發(fā)明進行許多改變是可能的。
根據(jù)本發(fā)明，實施例Ⅷ-Ⅹ說明了適合于局部施用于頭皮以促進頭發(fā)生長的生發(fā)劑。洗劑的配制如下實施例Ⅷ 實施例Ⅸ 實施例Ⅹ(%重量/重量) (%重量/重量) (%重量/重量)頭發(fā)生長因子 0.1 1.0 10.0乙醇 10.0 15.0 15.0甘油 1.0 2.0 3.0香料 0.2 0.2 0.2水 足量 足量 足量生發(fā)劑施用于頭皮的劑量為每天一次1ml。當有明顯的反應時，可減少施用次數(shù)。
實施例Ⅺ-ⅩⅢ說明了可局部施用于治療禿發(fā)或禿發(fā)男性和女性頭部的洗劑。
實施例ⅩⅠ 實施例ⅩⅡ 實施例ⅩⅢ(%重量/重量) (%重量/重量) (%重量/重量)羥乙基纖維素 0.4 - 0.4無水乙醇 15.0 15.0 15.01，2-丙二醇 - - 30.61，3-丁二醇 33.4 33.4 -對甲基苯甲酸酯 0.2 0.2 0.2(paramethyl benzoate)
實施例ⅩⅠ 實施例ⅩⅡ 實施例ⅩⅢ(%重量/重量) (%重量/重量) (%重量/重量)頭發(fā)生長因子 1.0 0.1 5.0香料 0.5 0.5 0.5水 足量 足量 足量洗劑施用于頭皮的劑量為每天一次1ml。在有明顯的反應后，可以減少施用次數(shù)。
實施例ⅩⅣ說明了含本發(fā)明頭發(fā)生長因子的油包水乳劑。
實施例ⅩⅣ油相 (%重量/重量)脫水山梨醇-油酸酯 20.0季胺-18水輝石 5.0液體石蠟 75.0水相頭發(fā)生長因子 1.0黃原膠 1.0防腐劑 0.3香料 0.2氯化鈉(1%重量/重量溶液) 足量在攪拌下向10份體積的油相中緩慢加入90份體積的水相中制得乳劑。
實施例ⅩⅤ說明了含有本發(fā)明頭發(fā)生長因子的水包油霜劑。
實施例ⅩⅤ(%重量/重量)油相十六烷醇 5.0硅油，200液體 1.0肉豆蔻酸異丙酯 2.0硬脂酰-2-乳酸鈉 2.0水相丙二醇 5.0檸檬酸鈉 0.2頭發(fā)生長因子 0.1香料 0.1純水 加至100通過混合油相并加熱至65℃制備霜劑。混合水相并加熱至70℃。將水相加入油相中并適當攪拌。當冷卻時進行適當攪拌混合。
下面的實施例ⅩⅥ-ⅩⅧ說明了用于洗頭發(fā)和頭皮，以在頭皮上調(diào)節(jié)頭發(fā)生長的洗發(fā)劑。
實施例ⅩⅥ(%重量/重量)十二烷醚硫酸鈉 41.4(2EO)21%AD
實施例ⅩⅥ(%重量/重量)十二烷基二甲氨基乙酸 4甜菜堿30%AD椰子脂肪酸二乙醇胺 1.5Oleth-3-磷酸(CRODAFOS N 3 1 ;Croda)PEG-15脂多胺(POLYQUART 1.5 ;Henkel)50%活性防腐劑，著色物質(zhì)，鹽 0.58頭發(fā)生長因子 10.0香料 適量水 加至100實施例ⅩⅤⅡ(%重量/重量)十二烷醚硫酸鈉(2 EO) 12100% ADPOLYQUART ;50%活性 2.5CRODAFOS N 3 2.5頭發(fā)生長因子 8.0硫酸鋅 5香料 適量水 加至100
實施例ⅩⅧ(%重量/重量)十二烷基硫酸單乙醇胺 20100% ADPOLYQUART ;50%活性 3CRODAFOS N 3 1.7椰子二乙醇酰胺 5頭發(fā)生長因子 10香料 適量水 加至100pH調(diào)至6.5洗發(fā)劑施用于頭皮的劑量為1ml。將洗發(fā)劑涂在頭皮上，然后沖洗掉。再重復涂一次，然后沖洗掉。
實施例ⅩⅨ-ⅩⅩⅦ說明了本發(fā)明的洗劑，每一種都含有能局部用于治療禿發(fā)或禿發(fā)男性和女性的頭部以調(diào)節(jié)頭發(fā)生長的活性增強劑。
實施例ⅩⅨ 實施例ⅩⅩ 實施例ⅩⅩⅠ(%重量/重量) (%重量/重量) (%重量/重量)長壓定 0.5 2.0 5.0無水乙醇 20.0 20.0 20.0丙二醇 30.0 30.0 30.0頭發(fā)生長因子 5.0 1.0 0.1香料 0.2 0.2 0.2水 足量 足量 足量實施例ⅩⅩⅡ 實施例ⅩⅩⅢ 實施例ⅩⅩⅣ(%重量/重量) (%重量/重量) (%重量/重量)CuII甘氨酸-組氨酸 0.1 1.0 5.0-賴氨酸-正辛基酯無水乙醇 20.0 20.0 20.0丙二醇 30.0 30.0 30.0頭發(fā)生長因子 5.0 2.0 0.5香料 0.2 0.2 0.2水 足量 足量 足量實施例ⅩⅩⅤ 實施例ⅩⅩⅥ 實施例ⅩⅩⅦ(%重量/重量) (%重量/重量) (%重量/重量)糠偶酰二肟 0.1 1.0 5.0無水乙醇 20.0 20.0 20.0丙二醇 30.0 30.0 30.0頭發(fā)生長因子 10.0 3.0 1.0香料 0.2 0.2 0.2水 足量 足量 足量下面的實施例ⅩⅩⅧ和ⅩⅩⅨ說明了用于促進頭皮上頭發(fā)生長的頭發(fā)生長因子的可注射劑型。
實施例ⅩⅩⅧ 實施例ⅩⅩⅨ(%重量/重量) (%重量/重量)頭發(fā)生長促進劑 0.1 0.1Ringer氏溶液 適量 -乳酸化Ringer氏溶液 - 適量雖然描述了本發(fā)明的具體實施方案，但是在不違背本發(fā)明精神和范圍的情況下對本發(fā)明進行各種改變和修改對本領域的專業(yè)人員來說是顯而易見的。本發(fā)明范圍內(nèi)所作出的所有這種修改將包括在所附權利要求書中。
權利要求
1.一種調(diào)節(jié)頭發(fā)生長的組合物，其特征在于它含有a.安全和有效量的從上皮細胞培養(yǎng)物獲得的上清液，其中含有一種生長刺激因子，該生長因子具有以下特性ⅰ.對真皮乳頭細胞的促有絲分裂活性，ⅱ.對3T3細胞的促有絲分裂活性，ⅲ.缺乏對表皮細胞的促有絲分裂活性，ⅳ.分子量大于約3，000道爾頓；b.一種可藥用載體。
2.根據(jù)權利要求1的組合物，其中的生長刺激因子還具有另外的特性，即它在用終濃度高達約100μg/ml的I-S型糜蛋白酶于37℃處理5小時后對真皮乳頭細胞的有絲分裂原測試活性降低。
3.根據(jù)權利要求1或2的組合物，其中的生長刺激因子還具有另外的特性，即它在經(jīng)過約50℃至約100℃加熱處理后仍保留約40%至約90%的對真皮乳頭細胞的有絲分裂原測試活性。
4.根據(jù)權利要求1的組合物，它含有約0.01%至約10%的生長刺激因子，所用載體是局部載體。
5.根據(jù)權利要求4的組合物，其中的細胞是毛囊上皮細胞。
6.根據(jù)權利要求4的組合物，其中的細胞是表皮細胞。
全文摘要
本發(fā)明涉及調(diào)節(jié)頭發(fā)生長的組合物，它含有安全和有效量的從上皮細胞培養(yǎng)物獲得的上清液和一種可藥用載體。其中，上清液含有具如下特性的生長刺激因子對真皮乳頭細胞的促有絲分裂活性，對3T3細胞的促有絲分裂活性，缺乏對表皮細胞的促有絲分裂活性、分子量大于約3,000道爾頓。
文檔編號A61K8/98GK1062081SQ9111113
公開日1992年6月24日 申請日期1991年10月31日 優(yōu)先權日1990年10月31日
發(fā)明者T·K·黃, R·活倫 申請人:普羅格特-甘布爾公司