專利名稱：非腸胃使用的穩(wěn)定組合物和它們的用途的制作方法
大分子如LL-F28249α-λ化合物、LL-F28249α-λ化合物的23-氧代和23-亞氨基衍生物。milbemycin化合物和阿弗米丁化合物，對(duì)溫血?jiǎng)游镌谀c胃外施用時(shí)，對(duì)預(yù)防和治療由于蠕蟲、線蟲、螨和內(nèi)、外寄生節(jié)肢動(dòng)物引起的感染是有用的。腸胃外施用的組合物在對(duì)動(dòng)物施用前須進(jìn)行消毒，γ輻射是消滅微生物污染物的有效消毒方法。但是在輻射時(shí)，某些大分子如LL-F28249α-λ化合物、LL-F28249α-λ化合物的23-氧代和23-亞氨基衍生物、milbemycin化合物和阿弗米丁化合物會(huì)降解并失去大部分生物活性。γ輻射所引起的破壞和降解性的后果妨礙了γ輻射作為對(duì)某些含大分子的組合物的消毒方法的應(yīng)用。
本發(fā)明的目的是提供穩(wěn)定的組合物，它能被輻射，在對(duì)溫血?jiǎng)游锓悄c胃施用時(shí)，可防止和治療由蠕蟲、線蟲、螨蟲和內(nèi)、外寄生節(jié)肢動(dòng)物引起的感染和侵?jǐn)_。
本發(fā)明的另一目的是提供一種在一段長(zhǎng)時(shí)間里，把LL-F28249α-λ化合物及它的23-氧代和23-亞氨基衍生物、milbenycin化合物和阿弗米丁化合物引入至溫血?jiǎng)游锏难褐胁⒃谘娱L(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)，保持一定藥物濃度的方法。
本發(fā)明涉及能被輻射消毒而在腸胃外施用的穩(wěn)定微球狀組合物。此組合物含重量約20%-95%的脂肪或蠟或它們的混合物，約1%-50%的LL-F28249α-λ化合物，LL-F28249α-λ化合的23-氧代或23-亞氨基衍生物、milbemycin化合物或阿弗米丁化合物，約1%-30%的油、半軟脂或脂肪酸衍生物或它們的混合物，還有約0.05%-10%的抗氧化劑。
人們出人意料地發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的微球組合物可被γ射線消毒而不減低生物活性。
本發(fā)明的穩(wěn)定微球組合物可通過(guò)分散在適于藥物學(xué)和藥理學(xué)的載體中并在腸胃外使用，且也可使分散于上述載體中的微球組合物釋放緩慢。本發(fā)明也包括一種在一段延長(zhǎng)的時(shí)間里把LL-F28249α-λ化合物及它的23-氧代或23-亞氨基衍生物、milbemycin化合物或阿弗米丁化合物引入溫血?jiǎng)游镅褐胁⒈３衷谘褐兴幬锏臐舛人降姆椒ā?br> 本發(fā)明較好的穩(wěn)定微球組合物含重量為約50%-90%的脂肪或蠟或它們的混合物;約5%-25%的LL-F28249α-λ化合物，它的23-氧代或23-亞氨基衍生物、milbemycin化合物或阿弗米丁化合物;約1%-20%的油、半軟脂、脂肪酸衍生物或它們的混和物和約1%-5%的抗氧化劑。
在NRRL存儲(chǔ)，存儲(chǔ)登記號(hào)為No.15773的菌屬中，花青灰鏈霉菌(streptomyces cyaneogriseus)的亞種noncyanogenus的發(fā)酵液中分離得到的系列化合物。定名為L(zhǎng)L-F28249α-λ。
LL-F28249α-λ化合物以下面的結(jié)構(gòu)式來(lái)代表
LL-F28249α-λ
本發(fā)明的穩(wěn)定微球組合物L(fēng)L-F28249α-λ化合物的23-氧代和23-亞氨基衍生物在美國(guó)專利No.4，916，154中已有所揭示，在此作為參考結(jié)合加以應(yīng)用。
本發(fā)明微球組合物較好的為L(zhǎng)L-F28249α-λ化合物和它的23-亞氨基衍生物，結(jié)構(gòu)式如下F28249α
和23-(O-甲基肟)-F28249α
適于本發(fā)明所用的蠟和脂類其溶點(diǎn)應(yīng)高于40℃。此蠟可以根據(jù)第十一版Hawley的《濃縮化學(xué)詞典》(The Condensed chemical Dictionary)所定義的來(lái)描述，它是一低熔點(diǎn)有機(jī)混和物或高分子量化合物，室溫下為固體，除不含甘油脂外，成份通常與脂類和油類相同。有些是烴;還有些是脂肪酸的酯和醇。這些化合物包括飽和或不飽和長(zhǎng)鏈C10-C24的脂肪酸、醇、酯、鹽、醚或它們的混和物。它們?cè)陬愔愔蟹旨?jí)。蠟是熱塑性的，但由于它不是高聚物，所以不認(rèn)為屬塑料范疇。通常的特征是拒水性。質(zhì)地光滑，無(wú)毒、無(wú)有害顏色和氣味。它可燃并具有良好絕緣性能，能溶于大多數(shù)有機(jī)溶劑并不溶于水。主要類型如下Ⅰ.天然的1.動(dòng)物(蜂蠟、羊毛脂、紫膠蠟、中國(guó)蟲蠟)2.植物(巴西棕櫚，小燭樹蠟，月桂子、甘蔗)3.礦物(a)化石或地蠟(地蠟(ozocerite)、純地蠟、耦煤蠟)(b)石油蠟(石蠟、微晶蠟)(礦渣臘或鱗狀臘)Ⅱ.合成的1.乙烯多聚物和多羥基醚-酯化合物(“聚乙二醇”)2.氯化萘(“鹵蠟”)3.通過(guò)費(fèi)-托(Fischer-Tropsch)合成的烴類本發(fā)明的脂可如第十一版Hawley的《濃縮化學(xué)字典》(The Condensed chemical dictionary)中描述的，用一高級(jí)脂肪酸如硬酯酸和棕櫚酸的甘油酯。這種酯和它們的混和物在室溫下為固體，且顯示晶體結(jié)構(gòu)，豬脂和牛脂就是例子。術(shù)語(yǔ)“脂肪”(fat)通常特指三甘油脂，脂類(Lipid)是把所有的脂都包括在內(nèi)。
脂肪最好是由長(zhǎng)鏈C10-C14脂肪酸的單-、雙-，或三甘油酯組成，單、雙或三甘油酯最好由硬酯酸酯類、棕櫚酸類、月桂酸酯類、亞油酸酯類、亞麻酸酯類、油酸酯類和其余或它們的混和物組成，溶點(diǎn)高于50℃就更好了。甘油三硬酯酸酯是最適用的脂肪。另外脂肪酸的親油鹽如硬脂酸鎂等也可適用。
本發(fā)明的油、半軟脂或脂肪酸衍生物是可溶于熔融硬脂中的物質(zhì)，當(dāng)溶于溶融的硬酯或蠟被霧化后，它們可促進(jìn)硬脂晶體在室溫或接近室溫下從較不穩(wěn)定狀態(tài)向較穩(wěn)定狀態(tài)的物理轉(zhuǎn)化。較佳地這種油或半軟脂可含有混和物或帶有短到中級(jí)脂肪酸的鏈長(zhǎng)，即C2-C18的相對(duì)純態(tài)的單-，雙-或三甘油酯。半軟脂指的是熔點(diǎn)在或接近室溫的甘油酯，脂肪酸衍生物包含短的和中級(jí)的鏈長(zhǎng)脂肪酸、醇、酯、醚、鹽或它們的混和物。由于甘油酯油和半軟脂是身體的生理成份，且有生物相容性，可生物降解，所以它們尤其適用。
本發(fā)明所用的抗氧化劑可用Hawley的第十一版《濃縮化學(xué)詞典》(The Condensed Chemical Dictionary)中提出的來(lái)描述，它作為一種有機(jī)化合物被分別加入到橡膠、自然脂肪和油、食物產(chǎn)品、汽油和潤(rùn)滑油中以阻止相應(yīng)的氧化、變質(zhì)、酸敗和膠質(zhì)形成。橡膠抗氧化劑通常是一種芳香胺如二-β-萘基對(duì)苯二胺和苯基-β-萘胺。許多抗氧化劑是取代酚化合物(丁基化的羥基苯甲醚)，二-叔丁基-對(duì)甲酚和榕酸丙酯)。食物抗氧化劑在低濃度是有效的，它不僅阻酸敗，而且通過(guò)把主要的脂肪酸和維他命的破壞降至最低程度而保持其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。
出人意料的是本發(fā)明的抗氧化劑可使所述的微球成份用γ射線消毒，并在不明顯損失生物活性下保持半衰期。在不存在抗氧化劑時(shí)，大分子例如LL-F28249α-λ化合物、LL-F28249α-λ化合物的23-氧代和23-亞氨基衍生物、milbemycin化合物和阿弗米丁化合物在被輻射時(shí)要降解并失去大部分生物活性。適于本發(fā)明微球組合物的抗氧化劑包括丁基化的羥基甲苯，丁基化的羥基苯甲醚，叔-丁基羥基喹啉，榕酸丙酯，α維生素E，6-乙氧基-1，2-二氫-2，2，4-三甲基喹啉等，較好的抗氧化劑是丁基化的羥基甲苯。
本發(fā)明的穩(wěn)定微球在一藥物學(xué)和藥理學(xué)適用的溶液中分散，得到腸胃外使用的緩釋組合物。載體可以是水緩沖系統(tǒng)或油系統(tǒng)。油系統(tǒng)可從動(dòng)物或植物源或合成得到，較佳的載體包括中性單-，雙-或三甘油液體或它們的混合物。中性油中不含剩余酸。本發(fā)明適用的載體還包括水系統(tǒng)如緩沖的食鹽水，有機(jī)溶劑如1，2-亞乙基二醇和醇;以及和水不混溶液體如油，取決于所適用活性組份的溶解性。
賦形劑如表面活性劑、鹽類、緩沖劑或它們的混和物也被包括在本發(fā)明的范圍中。本發(fā)明適用的所述賦形劑用量為約0.1%-20%(重量)。
通過(guò)給動(dòng)物注射在-適當(dāng)載體中的本發(fā)明組合物可使LL-F28249α-λ化合物及它的23-氧化和23-亞氨基衍生物、milbemycin化合物和阿弗米丁化合物在血液中達(dá)到一定濃度并能保持一段延長(zhǎng)的時(shí)間。保持血液中活性化合物的濃度水平與預(yù)防或治療溫血?jiǎng)游锏娜湎x、線蟲、螨和內(nèi)、外寄生節(jié)肢動(dòng)物感染是能聯(lián)系起來(lái)的。此保持的水平是活性成份緩慢釋放的一個(gè)標(biāo)志。本發(fā)明把組合物引入至動(dòng)物血流。并保持LL-F28249α-λ化合物及它的23-氧化和23-亞氨基衍生物，milbemycin化合物和阿弗米丁化合物在動(dòng)物血流中的濃度。
本發(fā)明組合物通過(guò)腸胃外施用于溫血?jiǎng)游铮绻?、貓、牛、綿羊、馬、豬、山羊、家禽等時(shí)，對(duì)防止和治療蠕蟲、線蟲、螨蟲和內(nèi)、外寄生節(jié)肢動(dòng)物引起的感染及困擾有很高效率。
蠕蟲病是一種動(dòng)物普遍疾病，在整個(gè)世界中造成了很大經(jīng)濟(jì)損失。最常見的蠕蟲是線蟲組。線蟲可在腸道、心臟、肺、血管和動(dòng)物其它身體組織中發(fā)現(xiàn)，是被感染動(dòng)物的貧血、失重和營(yíng)養(yǎng)不良的主要原因。它對(duì)被寄生器官的組織和壁都造成嚴(yán)重危害，如不加治療，可導(dǎo)致被感染動(dòng)物的死亡。
線蟲最常見為反芻類的感染劑，包括常見于皺胃中的血矛線蟲屬和胃線蟲屬;常見于腸道中的雨百合屬、毛圓線蟲屬和細(xì)頸線蟲屬和見于肺中的網(wǎng)尾線蟲屬。非反芻動(dòng)物的重要線蟲包括腸中的弓蛔蟲屬和鉤口線蟲屬;狗心中的惡絲蟲屬;豬腸中的蛔蟲屬;家禽腸中的雞蛔蟲屬和異刺線蟲屬以及馬類的大、小圓蟲類。因此，本發(fā)明治療動(dòng)物以阻止它們被上述線蟲感染或減少、控制這些動(dòng)物中的感染劑的繁殖有著重要的令人希望的優(yōu)點(diǎn)。
本發(fā)明除可控制蠕蟲的線蟲外，還可控制節(jié)肢動(dòng)物內(nèi)寄生感染比如牛皮蠅和外寄生感染比如動(dòng)物癢螨疹癬。
本發(fā)明的微球可這樣來(lái)制備把活性組份，抗氧化劑和其它賦形劑與熔融的脂類、蠟或它們的混和物混合，再加入油、半軟脂、脂肪酸衍生物或它們的混合物，然后通過(guò)各種技術(shù)，例如乳化或霧化上述得到的混和物或把成份的混和物和溶解的脂、蠟或它們的混和物進(jìn)行機(jī)械處理并冷卻。例如用一離心盤進(jìn)行而得到微球體。或者，活性成份的混和物、抗氧化劑、賦形劑和脂類、蠟和它們的混和物和油可被冷卻至固態(tài)，然后進(jìn)行比如粉碎、研磨等的過(guò)程。微球體特別是脂肪微球體，可達(dá)1000微米的直徑，對(duì)腸胃外施用最好重量平均尺寸范圍為約25微米到300微米。
為把本發(fā)明說(shuō)明得更清楚，下列實(shí)施例主要是更具體地描寫其細(xì)節(jié)。除權(quán)利要求書所規(guī)定的以外，本發(fā)明不在此作限定。
實(shí)施例1非腸胃使用的23-(O-甲基肟)-F28249α微球體的制備。
將三硬脂酸酯(72.8g)和三甘油酯油(8.7g)放在一燒杯中并在一熱板上加熱到85°-90°，再將23(O-甲基肟)-F28249α(12.0g)和丁基化羥基甲苯(1.1g)在不停地?cái)嚢柘录尤?，直?3-(0-甲基肟)-F28249α和丁基化羥基甲苯溶解。然后，溶液被倒入實(shí)驗(yàn)室噴射成球機(jī)的進(jìn)料杯中。進(jìn)料杯、輸料管、供氣管和一兩液體噴霧嘴用熱空氣使在85°-90°保持恒溫。用1磅/平方吋的壓力將液體送至噴嘴，霧化空氣壓力是10磅/平方吋(psi)。霧化的混和物用旋風(fēng)分離器從球艙的出口收集。微球體然后被篩除大于180微米的顆粒，那些大于180微米的微球體被收集再循環(huán)。
從上述過(guò)程得到的微球體有下列的成份%(W/W)23-(O-甲基肟)-F28249α 12.0三硬脂酸甘油酯 78.2三甘油酯油 8.7丁基化羥基甲苯(BHT) 1.1實(shí)施例2微球體對(duì)輻射的穩(wěn)定性將下面列出的微球體組合物放入20ml的血清小管瓶中，其中兩個(gè)用干燥氮?dú)鉀_洗去氧氣，管瓶然后用合成橡膠隔膜和卷曲鋁帽封住。接著，微球體在環(huán)境溫度下用鈷60(γ射線輻射)以下表Ⅰ中指明的輻射劑量被輻射。微球體被提取至乙腈/水(1∶1)中，用高效液相色譜法分析23-(O-甲基肟)-F28249α，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下表1所示。
微球組合物A1B2成份 (%W/W) (%W/W)23-(O-甲基肟)-F28249α 12.0 12.0甘油三硬脂酸酯 79.2 78.2中鏈的三甘油酯油 8.8 8.7丁基化羥基甲苯 0 1.11.除不使用乙基化羥基甲苯之外，按實(shí)施例1的過(guò)程制備。
2.實(shí)施例1中制備的微球組合物表 Ⅰ
從輻射后的微球組合物回收23-(O-甲基肟)-F28249α的百分率成份A B輻射量(mrad) 空氣 氮?dú)? 空氣 氮?dú)? 94.5 94.5 96.5 96.50.55 68.5 92.5 95.0 96.52.1 27.5 90.5 96.0 95.0此實(shí)驗(yàn)表明，在空氣或氮?dú)庵杏忙蒙渚€輻射時(shí)，微球體中存在的活性成份(沒有BHT時(shí))有降解，當(dāng)BHT在配方中時(shí)，活性組份是穩(wěn)定的。
實(shí)施例3本發(fā)明組合物對(duì)狗的持續(xù)釋放狗被分成每三條或四條的組，整個(gè)試驗(yàn)中，所有狗都喂同樣飼料配份。狗被稱重并且注射入一組合物，此組合物含有標(biāo)準(zhǔn)鹽溶液(2ml)，其中溶入2.5%的甲基纖維素，以及將實(shí)施例1的組合物微球體混和在內(nèi)，所用劑量為達(dá)到每公斤體重所要求的有效成份量。狗血液中的23-(O-甲基肟)-F28249α濃度定期用HPLC技術(shù)測(cè)得。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下表Ⅱ所示，它表明了本發(fā)明組合物對(duì)引入和保持血液中23-(O-甲基肟)-F28249α濃度的有效性。
表 Ⅱ?qū)吩囼?yàn)時(shí)23-(O-甲基肟)-F28249α在血漿中的平均濃度(用HPLC測(cè)，單位ppb)時(shí)間 劑量(mg/kg)(天) 511.721 111 393 197 808 340 10015 133 5021 80 2928 68 2135 51 1442 33 1049 20 71. 3條狗2. 4條狗
權(quán)利要求
1.一種微球體組合物，其特征在于含以重量計(jì)為約20%-95%的脂肪或蠟或它們的混和物，約1%-50%的從LL-F282492α-λ、LL-F282492α-λ的23-氧代或23-亞氨基衍生物、milbe-mycin和阿弗米丁中選出的一化合物，約1%-30%的油、半軟脂、脂肪酸衍生物或它們的混合物，約0.05-10%的一種抗氧化劑，以及0%-20%的表面活性劑、鹽、緩沖劑或它們的混合物。
2.如權(quán)利要求1所述的微球體組合物，其特征在于所述的化合物是從23-(O-甲基肟)-F28249α和LL-F282492α中選出的，所述的脂肪是三硬甘油脂，所述的油是中性三甘油酯油，所述的抗氧化劑是丁基化羥基甲苯，所述微球體組合物的重量平均直徑是在約25～300微米范圍。
3.如權(quán)利要求1所述的非腸胃道使用和緩釋的微球體組合物，其特征在于，在一藥物學(xué)和藥理學(xué)適用的載體中分散所述的微球體。
4.一種預(yù)防和治療溫血?jiǎng)游锊皇苋湎x、線蟲、螨和內(nèi)、外寄生節(jié)肢動(dòng)物感染的方法，其特征在于，對(duì)動(dòng)物非腸胃道使用微球體組合物，此組合物含重量為約20-95%的脂肪或蠟或它們的混合物，約1%-50%從LL-F282492α-λ，LL-F282492α-λ的23-氧代和23-亞氨基衍生物，milbemycin和阿弗米丁中選出的化合物，約1%-30%的油、半軟脂、脂肪酸衍生物或它們的混和物，約0.05%-10%的抗氧化劑和0%-20%的表面活性劑，鹽、緩沖劑或它們的混和物;所述的微球體在藥物學(xué)和藥理學(xué)適用的液體載體中分散。
5.一種引入并保持溫血?jiǎng)游镅褐袕腖L-F282492α-λ、LL-F282492α-λ的23-氧化或23-亞氨基衍生物、milbemycin和阿弗米丁中選出的一種化合物的血液濃度的方法，其特征在于，對(duì)動(dòng)物非腸胃使用微球體組合物，此組合物含重量為約20%-95%的脂肪或蠟或它們的混合物，約1%～50%的化合物，約1%-30%的油、半軟脂、脂肪酸衍生物或它們的混和物;約0.05%-10%的一種抗氧化劑和0%-20%的表面活性劑、鹽、緩沖劑或它們的混和物;所述的微球體在藥物學(xué)和藥理學(xué)適用的液體載體中分散。
6.如權(quán)利要求4或5所述的方法，其特征在于，所述化合物是LL-F282492α或23-(O-甲基肟)-F28249α，所述脂肪是甘油三硬脂酸酯，所述油是中性甘油酯油，所述抗氧化劑是丁基化羥基甲基，微球體載體是甲基纖維素和鹽的混和物;所述的微球體組合物的重量平均粒徑約在25-300微米范圍。
7.如權(quán)利要求4或5的方法，其特征在于，所述的恒溫動(dòng)物是選自狗、貓、牛、綿羊、馬、豬、家禽和山羊。
8.一種對(duì)恒溫動(dòng)物非腸胃施用的微球體組合物的制備方法，其特征在于(a)把從LL-F282492α-λ、LL-F282492α-λ的23-氧化或23-亞氨基衍生物、milbemycin和阿弗米丁中選出的一種化合物;抗氧化劑;隨機(jī)選用的表面活性劑鹽、緩沖劑或它們的混和物;與溶融的脂肪、蠟或它們的混和物混和;(b)加入油、半軟脂、脂肪酸衍生物或它們的混和物以形成一熔融的混和物;(c)通過(guò)乳化、霧化、或離心盤加工熔融的混和物形成微球體;或冷卻熔融的混和物并磨碎或研磨冷卻好的混和物以形成微球體。
9.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，(a)步驟和(b)步驟可同時(shí)進(jìn)行。
10.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述的微球體組合物是權(quán)利要求1所述的組合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種穩(wěn)定的微球體組合物，它含有脂肪或蠟或它們的混合物；從LL-F282492α-λ化合物、LL-F282492α-λ化合物的23-氧代和23-亞氨基衍生物、milbemycin和阿弗米丁中選出的一種活性成分；一種油、半軟脂、脂肪酸衍生物或它們的混合物；和一種抗氧化劑。本發(fā)明也涉及通過(guò)對(duì)恒溫動(dòng)物非腸胃道施用本發(fā)明的化合物，預(yù)防和治療在恒溫動(dòng)物中由蠕蟲、線蟲、螨和內(nèi)、外寄生節(jié)肢動(dòng)物引起的感染的方法。
文檔編號(hào)A61P33/00GK1068735SQ9210539
公開日1993年2月10日 申請(qǐng)日期1992年6月30日 優(yōu)先權(quán)日1991年7月23日
發(fā)明者蘇珊·曼奇尼·卡迪, 威廉·戴維·斯蒂伯, 菲利普·韋恩·海斯, 瑪麗·埃勒斯·德舍爾, 庫(kù)爾特·A·施溫哈默 申請(qǐng)人:美國(guó)氰胺公司