專(zhuān)利名稱(chēng)：卡達(dá)西?？鼓[瘤發(fā)色團(tuán)的制作方法
美國(guó)專(zhuān)利5001112中公開(kāi)了一種叫作卡達(dá)西叮(Kedarcidin)的蛋白抗腫瘤抗菌素。據(jù)報(bào)道，這種抗菌素是由一種單鏈多肽和一種非蛋白發(fā)色團(tuán)組成的復(fù)合物?？ㄟ_(dá)西叮是由一種鏈球菌(streptoallotei-chus)中的特別鏈L585-6(ATCC-53650)發(fā)酵得到的，它的分離和純化已在上述的美國(guó)專(zhuān)利的例4中描述。在此專(zhuān)利中既沒(méi)有公開(kāi)從卡達(dá)西?？咕刂蟹蛛x發(fā)色團(tuán)的方法，也沒(méi)有提及卡達(dá)西叮的抗腫瘤活性應(yīng)歸因于非蛋白發(fā)色團(tuán)。
所謂新制癌菌素的抗腫瘤抗菌素是由1∶1的蛋白和非蛋白發(fā)色團(tuán)復(fù)合而成。文獻(xiàn)中公開(kāi)了新制癌菌素的發(fā)色團(tuán)部分可以通過(guò)用酸性甲醇溶液萃取新制癌菌素的復(fù)合物而得到;新制癌菌素的抗腫瘤特性主要?dú)w因于發(fā)色團(tuán)。新制癌菌素中的發(fā)色團(tuán)結(jié)構(gòu)已被確定(可見(jiàn)于J.Antibiotics，1989，42，761-768)，然而，對(duì)于卡達(dá)西叮，用甲醇萃取的方法卻不能滿意地獲得純發(fā)色團(tuán)。
另外一種叫金霉素的蛋白抗腫瘤抗菌素也由一種蛋白和一種非蛋白發(fā)色團(tuán)組成。這種抗菌素的發(fā)色團(tuán)也是用甲醇萃取抗菌素的方法獲得的。(見(jiàn)于Biochem.Biophys.Res.Commun.，1980，94，255-261)，并且再次發(fā)現(xiàn)了抗腫瘤活性是基于抗菌素中的發(fā)色團(tuán)的。
申請(qǐng)者發(fā)現(xiàn)了其它種類(lèi)的含有非蛋白發(fā)色團(tuán)的蛋白抗腫瘤抗菌素，其發(fā)色團(tuán)既不能成功地運(yùn)用前述的甲醇萃取法，也不能運(yùn)用其它的常規(guī)純化方法獲得。總之，這種蛋白抗菌素的發(fā)色團(tuán)，即便是能夠被分離，同抗菌素復(fù)合物相比，它也是很不穩(wěn)定的。
本發(fā)明涉及一種從卡達(dá)西?？咕刂蝎@得的新型抗腫瘤發(fā)色團(tuán)。
本發(fā)明提供了一種制作卡達(dá)西叮發(fā)色團(tuán)的方法，其步驟如下(a)制備卡達(dá)西叮水溶液;(b)將該水溶液加入乙酸乙酯有機(jī)萃取劑中，(c)收集乙酸乙酯萃取液;(d)將該萃取液加入硅膠色譜柱中，用苯-甲醇分步梯度洗脫;(e)收集含卡達(dá)西叮發(fā)色團(tuán)的級(jí)分。
本發(fā)明的另外一方面是關(guān)于抑制哺乳動(dòng)物中腫瘤生長(zhǎng)的方法，它包括向該宿主給予腫瘤抑制量的卡達(dá)西叮發(fā)色團(tuán)或其藥用組合物。
本發(fā)明還提供了一種藥用組合物，它由腫瘤抑制量的卡達(dá)西叮和藥學(xué)上可接受的稀釋劑或載體組成。


圖1是卡達(dá)西叮發(fā)色團(tuán)的紅外吸收光譜(KBr片)。
圖2是卡達(dá)西叮發(fā)色團(tuán)溶于甲醇后的紫外吸收光譜。
圖3是卡達(dá)西叮發(fā)色團(tuán)在DMSO-d6中質(zhì)子磁共振光譜(500.13MHz)。
圖4是卡達(dá)西叮發(fā)色團(tuán)在DMSO-d6中的13C磁共振光譜(125.76MHz)。
卡達(dá)西叮發(fā)色團(tuán)可以按照美國(guó)專(zhuān)利5001112從卡達(dá)西叮抗腫瘤抗菌素中獲得，也可以從制得的卡達(dá)西叮發(fā)酵液中獲得。一種優(yōu)選的原料是用上述專(zhuān)利實(shí)施例4中描述的方法分離和純化了的卡達(dá)西叮，另外一種優(yōu)選的原料是通過(guò)過(guò)濾生產(chǎn)卡達(dá)西叮的菌株(Streptoallotei-chus)的發(fā)酵液得到的。將濾液加入陰離子交換色譜中，先用PH7-8的陽(yáng)離子緩沖液，再用含NaCl的這種緩沖液洗脫，收集NaCl緩沖液洗脫的溶液。這種色譜方法去除了卡達(dá)西叮溶液中的許多雜質(zhì)而且有很高的卡達(dá)西叮發(fā)色團(tuán)收率。本申請(qǐng)者發(fā)現(xiàn)在將要進(jìn)行下述的萃取步驟前把該洗脫液親水化處理后便于貯存，但實(shí)際上，這種洗脫液也可被直接使用。前述的過(guò)濾發(fā)酵液也可以不經(jīng)過(guò)陰離子交換純化步驟直接使用，但是要獲得純的發(fā)色團(tuán)則需進(jìn)一步的純化，此方法同以純化的卡達(dá)西叮為原料或以陰離子交換部分純化的發(fā)酵液為原料的方法相比，效率要低得多。
然后，將上述方法純化或部分純化得到的水溶液加入乙酸乙酯的有機(jī)萃取液中。另外的一些有機(jī)溶劑，例如，提取新制癌菌素的酸性甲醇、正丁醇、苯-甲醇和氯仿-甲醇卻導(dǎo)致發(fā)色團(tuán)降解或形成乳濁液。再將乙酸乙酯萃取液加入硅膠液相色譜柱，用苯-甲醇溶液分步梯度洗脫，甲醇濃度逐漸增大。洗脫液由薄層色譜監(jiān)控，然后真空濃縮含有純化了的卡達(dá)西叮發(fā)色團(tuán)的洗脫液，以獲得淺黃色的無(wú)定形產(chǎn)品。
卡達(dá)西叮發(fā)色團(tuán)具有以下的物化特性外觀淺黃色無(wú)定形固體。
穩(wěn)定性很不穩(wěn)定，在苯、甲醇、氯仿和二甲基亞砜(DMSO)等溶液中數(shù)小時(shí)降解。
分子式C53H60N3O16Cl分子量1029.3626質(zhì)譜Kratos MS50質(zhì)譜[M+H]+1030，F(xiàn)AB使用間硝基苯乙醇。
紅外光譜Perkin Elmer 1800傅立葉轉(zhuǎn)換紅外光譜儀，KBr底片，主要吸收峰(cm-1)3432，3076，2976，2832，2188，1742，1656，1622，1524，1470，1450，1434，1386，1354，1298，1240，1192，1164，1114，1080，1060，1032，1010，980，936，902，862，824，798，680.
紫外光譜Hewlett Packard 8452A二極管光譜，λmax(MeOH)256，316nm(Logε4.78，4.16)。
高壓液相色譜分析柱子Q-BEX C18(10μ)＃10230洗脫液4份四氫呋喃6份0.2M的乙酸銨流速2ml/min
檢測(cè)波長(zhǎng)254nm樣品濃度每微升甲醇4微克保留時(shí)間12分鐘。
元素分析碳，58.78;氫，5.78氮，3.56;氯量試驗(yàn)，正;硫量試驗(yàn)，負(fù)。
1H核磁共振布魯克(Bruker)AM-500型光譜儀;
溶劑DMSO-d6;
觀察到的化學(xué)位移(相對(duì)于DMSO信號(hào)的δ2.531)1.09(s，3H)，1.16(s br，6H)，1.34(s br，6H)，1.74(m，2H)，1.92(m，1H)，2.05(d，1H，J＝14.3)，2.36(m，1H)，2.46(s，6H)，2.86(m，2H)，3.21(m，1H)，3.78(s，3H)，3.95(s，3H)，3.95(m，1H)，4.04(m，1H)，4.09(m，1H)，4.12(m，1H)，4.27(m，1H)，4.30(m，1H)，4.34(m，1H)，4.53(s br，1H)，4.75(m，1H)，4.81 s br，1H)，5.11(s br，1H)，5.44(s br 1H)，5.56(m，1H)，6.19(s，1H)，6.62(s，1H)，6.97(s，1H)，7.11(s，1H)，7.22(d，1H，J＝8.3)，8.06(d，1H，J＝8.3)，
8.48(s，1H)，9.56(d，1H，J＝7.4).
13C核磁共振布魯克AM-500型光譜儀;
溶劑DMSO-d6;
觀察到的化學(xué)位移相對(duì)于DMSO信號(hào)δ39.113，39.268，39.447，39.601，39.780，39.935，40.113)序號(hào) PPM 峰裂數(shù):
1 17.13 q2 18.25 q3 21.86 q4 27.19 q5 36.38 t6 37.62 t7 41.64 t8 44.63 q9 48.31 d10 49.94 d11 60.71 q12 61.62 q13 64.05 d14 64.24 t15 65.57 d16 65.96 d17 68.45 s18 68.93 d19 70.11 d20 71.85 s21 71.91 d22 76.22 d23 78.46 d
24 83.14 d25 88.16 s26 94.64 d27 99.81 d5 28 99.91 s29 102.13 d30 103.96 s31 109.79 s32 110.01 d10 33 115.86 s34 117.10 s35 120.06 d36 122.80 d37 123.99 d15 38 129.02 s39 134.33 s40 136.22 d41 139.02 s42 139.10 d20 43 141.40 s44 144.46 s45 146.28 s46 148.43 s47 153.29 s25 48 155.17 s49 155.37 s50 167.24 s51 169.06 s
薄層色譜Rf 0.29 苯-甲醇 9∶2Rf 0.16 苯-甲醇 9∶1板硅膠GHLF單一板，0.25毫米厚;
檢測(cè)短波長(zhǎng)紫外光、二硫酸鈰噴灑劑。
鑒于上述物化性質(zhì)，卡達(dá)西叮發(fā)色團(tuán)被確認(rèn)為
生物活性卡達(dá)西叮發(fā)色團(tuán)的活性在體外針對(duì)數(shù)種人的腫瘤細(xì)胞系的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)中、在體內(nèi)針對(duì)移植小白鼠P388白血病和B-16黑素瘤細(xì)胞中評(píng)估。所用的方法及所獲結(jié)果如下Ⅰ.方法A.體外細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)用于體外估價(jià)細(xì)胞毒性效能的細(xì)胞系包括人體克隆腺癌HCT116藥敏感系;HCT116/VP35和HCT116/VM46子藥抗細(xì)胞系，這種抗細(xì)胞系包含有低(分子量)的拓?fù)渫之悩?gòu)酶Ⅱ和較多量的P-170糖蛋白;人卵巢癌A2780藥物敏感系和A2780/DDP子藥抑制細(xì)胞系。據(jù)報(bào)道A2780/DDP細(xì)胞系通過(guò)增強(qiáng)DNA修復(fù)機(jī)制和增加GSH/GST水平來(lái)起對(duì)抗作用。細(xì)胞是在McCoy培養(yǎng)基和10%胎牛血清中培養(yǎng)的。在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，把細(xì)胞轉(zhuǎn)移至96孔微量滴定板，每孔4×103個(gè)細(xì)胞，并在95%氧氣、5%二氯化碳的氣體中，37℃下孵育24小時(shí)，以使細(xì)胞附著孔壁。在第一排孔中加入系列稀釋(4倍稀釋)的化合物，再孵育72小時(shí)。每孔中活細(xì)胞的數(shù)量可用目前常用方法計(jì)數(shù)，即在最終濃度為0.005毫摩爾吩嗪N-甲硫酸鹽中加入最終濃度為0.05mg/ml升的四唑鎓鹽染色劑(XTT)。室溫下孵育3小時(shí)，以使顏色變深，用DynatechMR600板計(jì)數(shù)器在450nm下讀數(shù)。IC50值(抑制細(xì)胞生長(zhǎng)50%的藥物濃度)用最優(yōu)密度計(jì)數(shù)淺性回歸計(jì)算得到。在分開(kāi)的96孔板中對(duì)角種藥劑作用于各種細(xì)胞系實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。
B.小鼠體內(nèi)模型1.P388小鼠白血病模型P388腫瘤在DBA/2小鼠腹水中培養(yǎng)。此腫瘤實(shí)驗(yàn)是在CDF′小鼠中經(jīng)由腹膜內(nèi)和靜脈內(nèi)在第零天，按照指定路徑和計(jì)劃注入加了一定藥劑的1×106個(gè)白血病細(xì)胞。小鼠在第零天和第五天(或第六天)稱(chēng)重，重量減輕了20%以上的說(shuō)明了藥物毒性。每組實(shí)驗(yàn)由6個(gè)小鼠及10個(gè)未處理小鼠對(duì)照組成。配藥計(jì)劃為Q1DX1;1。每天進(jìn)行死亡檢查，并確定平均壽命。藥物處理的小鼠同未藥物處理的小鼠相對(duì)比，壽命延長(zhǎng)了25%以上作為藥物有活性(%T/C大于125%)的判據(jù)。實(shí)驗(yàn)的完成大約需要30天。
2.B-16小鼠固體腫瘤模型B-16小鼠黑素瘤被作為皮下生長(zhǎng)瘤在C57BL/6小鼠中培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)是在CDF′小鼠中經(jīng)由大腿骨上部突起處在第零天注入25毫克腫瘤片段?？ㄟ_(dá)西叮發(fā)色團(tuán)是按Q1DX1;1配藥計(jì)劃下藥的。小鼠在第零天和第9天稱(chēng)重。
Ⅱ.結(jié)果A.在體外如下表所示，卡達(dá)西叮發(fā)色團(tuán)對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制是特別有效的(和VP-16相比，IC50值表示為每毫升化合物的毫微克數(shù)，最終濃度)?？ㄟ_(dá)西叮發(fā)色團(tuán)對(duì)兩種VP-16敏感細(xì)胞系比VP-16的效能要分別高285和1725倍。另外，卡達(dá)西叮發(fā)色團(tuán)對(duì)HCT116/VP35或HCT116/VM46細(xì)胞系和VP-16沒(méi)有交叉對(duì)抗。當(dāng)評(píng)價(jià)對(duì)A2780和A2780 DDP細(xì)胞系的敏感性時(shí)，VP-16和卡達(dá)西叮發(fā)色團(tuán)對(duì)對(duì)抗細(xì)胞系的效能比對(duì)敏感細(xì)胞系的效能大約低6.6倍。
B.在體內(nèi)1.P388小鼠白血病模型評(píng)估卡達(dá)西叮發(fā)色團(tuán)對(duì)腹膜內(nèi)注入的P388小鼠白血病細(xì)胞的抑制作用，可知，在注入腫瘤細(xì)胞一天后，卡達(dá)西叮發(fā)色團(tuán)的優(yōu)化腹膜注入量為每次1毫克/千克。優(yōu)化劑量下，卡達(dá)西叮發(fā)色團(tuán)產(chǎn)生175的T/C%。在同樣的實(shí)驗(yàn)中，靜脈內(nèi)注射P388腫瘤細(xì)胞，卡達(dá)西叮發(fā)色團(tuán)對(duì)之也是敏感。的。在腫瘤細(xì)胞靜脈注入一天后，卡達(dá)西叮發(fā)色團(tuán)的優(yōu)化靜脈注入量為每次0.25毫克/千克。在優(yōu)化劑量下，卡達(dá)西叮發(fā)色團(tuán)產(chǎn)生214的T/C%。在此靜脈注入實(shí)驗(yàn)中，比較不同量的卡達(dá)西叮注入后的效果，可知，兩個(gè)差別很大的卡達(dá)西叮注入量，其效能卻幾乎是相同的?？ㄟ_(dá)西叮發(fā)色團(tuán)對(duì)于P388小鼠白血病的抗腫瘤活性在實(shí)驗(yàn)8328中得以證實(shí)。在腹膜內(nèi)注入模型中(依照Q1DX1;1方案)，當(dāng)優(yōu)化劑量為每次注入0.25毫克/千克時(shí)，產(chǎn)生185的T/C%。在本實(shí)驗(yàn)的靜脈注射部分，按照同樣的注射計(jì)劃，優(yōu)化劑量為每次0.125毫克/千克時(shí)產(chǎn)生186的T/C%。在這個(gè)實(shí)驗(yàn)中，卡達(dá)西叮發(fā)色團(tuán)量雖然差別很大，但效果卻相差不多。
在P388小鼠白血病模型中，卡達(dá)西叮發(fā)色團(tuán)是有效的。不論是腹膜模型還靜脈模型，都被用來(lái)評(píng)價(jià)該化合物的抗腫瘤活性。在P388模型中，卡達(dá)西叮發(fā)色團(tuán)同卡達(dá)西叮相比具有同樣的，或許還更高一些的效能。
2.B-16小鼠固體腫瘤模型在實(shí)驗(yàn)796中，卡達(dá)西叮發(fā)色團(tuán)的抗腫瘤活性是用B-16小鼠黑素瘤模型來(lái)評(píng)價(jià)的。當(dāng)皮下注入腫瘤細(xì)胞一天后，靜脈注射的卡達(dá)西叮發(fā)色團(tuán)的優(yōu)化劑量為每次0.0062毫克/千克，其T/C%為164。根據(jù)壽命判據(jù)可知卡達(dá)西叮發(fā)色團(tuán)是有活性的。在同樣的實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)用同樣的途徑和方案，每次注入優(yōu)化量為0.75毫克每千克的卡達(dá)西叮時(shí)，產(chǎn)生同樣的T/C%。根據(jù)腫瘤壽命判據(jù)，卡達(dá)西叮和卡達(dá)西叮發(fā)色團(tuán)都是具有活性的。
Ⅲ.結(jié)論由腹膜和靜脈注入P388小鼠白血病細(xì)胞模型和皮下注入B-16小鼠黑素瘤模型，依據(jù)壽命判據(jù)，卡達(dá)西叮發(fā)色團(tuán)顯示出了明顯的抗腫瘤活性，同卡達(dá)西叮相比，卡達(dá)西叮發(fā)色團(tuán)具有同樣的，甚至更有效的活性。
Ⅳ.參考資料1.Long，B.H.，Wang，L.，Lorico，A.，Wang，R.C.C.，Brattain，M.G.and Casazza，A.M.《在獲取抑制人體克隆和肺癌細(xì)胞系中Etoposide和Teniposide的抑制機(jī)理》，Cancer Research 51;待發(fā)表(1991)。
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實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，卡達(dá)西叮發(fā)色團(tuán)在體外對(duì)數(shù)種人的腫瘤細(xì)胞系展示了強(qiáng)有力的抗腫瘤活性，在體內(nèi)對(duì)小鼠白血病P388和BO-16黑素瘤也具有抗腫瘤活性。
本發(fā)明包括含抑制腫瘤有效果的卡達(dá)西叮發(fā)色團(tuán)和藥學(xué)上可接受的稀釋劑或載體的組合物。該組合物還可以含有其它的活性抗腫瘤試劑。可以根據(jù)一定的路徑和方法制成任何合適的藥物形式。這種藥物形式可以有口服固體組合物形式，如，片劑、膠囊、丸劑、粉劑和粒劑;液體口服物形式，如，溶液、懸浮液、糖漿、酏劑;非口服形式有，無(wú)菌溶液、懸浮液或乳液;它們亦可被制成無(wú)菌固體組合物形式，這種固體可以在使用前迅速溶于無(wú)菌水、生理鹽水或其它的無(wú)菌注射介質(zhì)中。
對(duì)于哺乳動(dòng)物宿主，這種抗腫瘤試劑的最佳劑量和攝入量可以很容易地被本領(lǐng)域技術(shù)人員確定。當(dāng)然，應(yīng)當(dāng)理解，藥物用量要根據(jù)具體的制劑、用藥途徑、病灶部位、宿主類(lèi)別、疾病形式來(lái)決定。影響藥效的因素有年令、體重、性別、飲食、用藥時(shí)間、用藥方式、排泄速度、患者狀況、藥物組成、過(guò)敏反應(yīng)、病情等。
本發(fā)明可由以下實(shí)施例得以說(shuō)明，但這些實(shí)施例并不能概括發(fā)明的范圍。沒(méi)有特別說(shuō)明的情況下，下文的所有活劑比均為體積比。
實(shí)施例1實(shí)驗(yàn)方法原料氯仿、苯、乙酸乙酯和甲醇均為ACS(美國(guó)化學(xué)學(xué)會(huì))無(wú)水級(jí)溶劑，四氫呋喃為高壓液相色譜級(jí)溶劑，這些溶劑都未重新純化或蒸餾。部分實(shí)驗(yàn)中溶劑水為室內(nèi)去離子水。色譜實(shí)驗(yàn)中所使用的水是由去離子水通過(guò)Millipore4試劑級(jí)系統(tǒng)柱后得到的(10兆歐Milliq水)。乙酸銨是高壓液相色譜級(jí)試劑。真空液相色譜所用硅膠為默克里克帕(Merck Lichroprep)硅60，粒徑25-40微米。水合硫酸鈰和四水合鉬酸銨(VI)為ACS級(jí)試劑。
薄層分析色譜(TLC)予涂了單二硅膠GHLF薄層色譜板(尺寸為10×20厘米，250微米)。樣品用2微升的取樣器取樣點(diǎn)板，點(diǎn)樣后的板放入盛有苯-甲醇(9∶2 V/V)的容器中展開(kāi)，可用短波紫外光或硫酸高鈰噴灑劑顯示各組成色譜結(jié)果。
硫酸高鈰噴灑劑硫酸高鈰噴灑劑是由6克水合硫酸高鈰和28克四水合鉬酸銨溶于20%的硫酸水溶液(500毫升)中形成的。噴灑后的薄層色譜板在約150℃下加熱5-10分鐘。
高壓液相色譜(HPLC)分析高壓液相色譜系統(tǒng)的組件如下締合水，M-45型溶劑處理系統(tǒng);締合水，V6K型注射器;締合水，Guard-Pak前置柱模塊(C18柱);Q-BEX科技公司C18(10微米)柱(3.9毫米內(nèi)徑×30厘米QBX-10230)。組件間由316不銹鋼管(116毫米外徑，0.23毫米內(nèi)徑)連接。洗脫劑的泵速為2.0毫升每分鐘。檢測(cè)系統(tǒng)為Hewlett Packard HP-1040A檢測(cè)系統(tǒng)。這套系統(tǒng)由HewlettPacked二極管檢測(cè)器、HP-85B型計(jì)算機(jī)、HP-9121磁盤(pán)驅(qū)動(dòng)器和HP-7470繪圖儀組成。
卡達(dá)西叮發(fā)色團(tuán)的純化，見(jiàn)圖5。
萃取物A的制備按照美國(guó)專(zhuān)利5001112實(shí)施例1-3中的方法，我們可以得到卡達(dá)西叮的發(fā)酵液，這種發(fā)酵液粗品經(jīng)過(guò)濾和陰離子交換色譜后得到美國(guó)專(zhuān)利5001112中第13段34行中所描述的洗脫液，把含部分純化了的卡達(dá)西?？咕叵疵撘豪鋬龈稍锖螅鳛橄旅孑腿〔襟E中的原料。
部分純化，冷凍干燥后的上述卡達(dá)西叮76克溶于1100毫升水中，在6升的分液漏斗中用等體積的乙酸乙酯萃取四次，收集乙酸乙酯萃取液，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空蒸發(fā)至干燥，得到0.34克殘余物A。
殘余物A的真空液相色譜把12克干硅膠(默克.里克帕，25～40微米)，裝入一小的多孔玻璃過(guò)濾漏斗，至四分之三滿(漏斗內(nèi)徑2.5厘米×11厘米)。用100毫升苯平衡柱子并真空抽脫出溶劑。殘余物A溶解在5毫升3∶1的乙酸乙酯-甲醇溶劑中，并預(yù)吸附到3克硅膠上，樣品在苯中制成漿狀，然后轉(zhuǎn)移至柱上并抽真空，分步梯度洗脫，分別用苯，1%的甲醇的苯溶液，2%，5%，7.5%甲醇的苯溶液各100毫升洗脫三次。色譜檢測(cè)使用薄層色譜，并用短波長(zhǎng)紫外光或硫酸高鈰噴灑劑顯示。所需物質(zhì)是在100毫升7.5%的甲醇的苯溶液中洗脫出來(lái)的。這部分洗脫液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中真空(25℃)蒸發(fā)至干燥，可以生成0.2克的卡達(dá)西叮發(fā)生團(tuán)。
權(quán)利要求
1.一種稱(chēng)為卡達(dá)西叮發(fā)色團(tuán)的抗生素，其特征在于(a)外觀為淡黃色無(wú)定性固體；(b)質(zhì)譜得到的分子量為1029；(c)分子式為C53H60N3O16Cl；(d)(溴化鉀)匯外吸收光譜如圖1所示；(e)溶于甲醇后的紫外吸收光譜如圖2所示；(f)溶于DMSO-d6中后，質(zhì)子磁共振如圖3所示；(g)溶于DMSO-d6中后，13C磁共振光譜如圖4所示；(h)硅膠薄層色譜中，當(dāng)使用的溶劑系統(tǒng)為苯-甲醇(9∶2V/V)時(shí)，Rf值為0.29；當(dāng)溶劑系統(tǒng)為苯-甲醇(9∶1V/V)時(shí)，Rf值為0.16；(i)高壓液相色譜保留時(shí)間為12分鐘，色譜用及C18反相硅膠柱和四氫呋喃-0.2摩爾乙酸銨(2∶3V/V)溶劑系統(tǒng)。
2.一種藥用組合物，它包括腫瘤抑制量的卡達(dá)西叮發(fā)色團(tuán)和藥學(xué)上可接受的稀釋劑或載體。
3.抑制哺乳動(dòng)物宿主中的腫瘤生長(zhǎng)的方法，它包括給予所述宿主腫瘤抑制有效量的卡達(dá)西叮發(fā)色團(tuán)。
4.卡達(dá)西叮發(fā)色團(tuán)的生產(chǎn)方法，包括如下步驟(a)制備卡達(dá)西叮水溶液;(b)用乙酸乙酯萃取該水溶液;(c)收集乙酸乙酯萃取相;(d)把乙酸乙酯萃取液加入硅膠色譜中，用苯-甲醇分步梯度洗脫;(e)收集卡達(dá)西叮發(fā)色團(tuán)的級(jí)分。
全文摘要
卡達(dá)西叮發(fā)色團(tuán)是一種由卡達(dá)西叮抗腫瘤抗菌素中分離出來(lái)的非蛋白發(fā)色團(tuán)，它是通過(guò)溶劑萃取和色譜方法純化或部分純化卡達(dá)西叮而得到。該發(fā)色團(tuán)被發(fā)現(xiàn)具有卡達(dá)西叮的幾乎所有抗腫瘤特性。
文檔編號(hào)A61K31/70GK1073447SQ9211025
公開(kāi)日1993年6月23日 申請(qǐng)日期1992年8月26日 優(yōu)先權(quán)日1991年9月26日
發(fā)明者J·E·李特 申請(qǐng)人:布里斯托爾-邁爾斯斯奎布公司