專利名稱：低分子量植物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有消炎作用的低分子量植物組合物。
奶薊(Milk Thistle)(日本名Santorisoh;學(xué)名Silybum marianum，silybinin)是一種加拿大、美國(guó)南部、以及歐洲北部荒野中的野生植物，其種子是一種在其表面具有象牙狀光澤的實(shí)心的，長(zhǎng)的和細(xì)長(zhǎng)棒狀的種子。有關(guān)奶薊種子的常規(guī)研究已報(bào)導(dǎo)(1)含有大量類黃酮;(2)由動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果表明，它具有有效的解毒活性并具有保護(hù)肝的作用;(3)也由動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果表明，它促進(jìn)肝臟RNA(核糖核酸)的合成;等等，但從未報(bào)導(dǎo)過(guò)有關(guān)其消炎作用。
另一方面，K.Niwa的日本專利申請(qǐng)公開號(hào)63-79834“抗氧化劑組合物”(相應(yīng)的美國(guó)專利No.5009891)提供了一種組合物，該組合物通過(guò)用遠(yuǎn)紅外線加熱植物種子，如稻谷、小麥、大豆、赤豆、脂麻種子和“hatomugi”(珍珠大麥)，或它們的胚芽，然后將它們經(jīng)受釀造處理，并添加用相同方法由植物得到的植物油而獲得，并且表明，這樣得到的該組合物具有一種抑制活性氧(O-O-)的活性(抗氧化劑活性)，但是，這一組合物除抗氧化劑活性外，幾乎沒(méi)有顯示出消炎作用。
本發(fā)明人進(jìn)行了有關(guān)對(duì)其施加了如下所述專門處理的奶薊種子和未處理過(guò)的奶薊種子對(duì)人體白血細(xì)胞作用的試驗(yàn)，并在實(shí)際中給炎癥病人口服這些奶薊種子，已發(fā)現(xiàn)，處理后的奶薊種子顯示出顯著的消炎作用，從而完成了本發(fā)明。
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種由奶薊種子制得的消炎劑。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種由奶薊種子制得的食品添加劑。
本發(fā)明的低分子量植物組合物可以按照如下方法通過(guò)處理奶薊種子得到。
首先，用遠(yuǎn)紅外線將奶薊種子加熱。更確切地是，利用一種容器，如在其內(nèi)表面涂復(fù)輻射遠(yuǎn)紅外線，較佳的是輻射波長(zhǎng)4-14μm的遠(yuǎn)紅外線，即所謂升高線的陶瓷的皿和坩堝，或一種容器，如輻射遠(yuǎn)紅外線的陶土與含金屬氧化物的石料、砂礫、砂子等混合制得的陶器，將奶薊種子加熱。
加熱較佳是在溫度接近100℃但不超過(guò)100℃進(jìn)行，同時(shí)緩慢攪拌種子以使得不造成燒焦。附帶地說(shuō)，用于加熱的遠(yuǎn)紅外線源不僅限于上述容器，如皿、坩堝和陶器，而且可以使用任選的材料，只要該材料可輻射遠(yuǎn)紅外線(較佳是波長(zhǎng)約4-14μm的升高線)，如鉑電磁波纖維。加熱時(shí)間取決于所用遠(yuǎn)紅外線源的種類以及遠(yuǎn)紅外線的強(qiáng)度，盡管通常為約半小時(shí)至約2小時(shí)。除常規(guī)的加熱外，只要所使用的是輻射遠(yuǎn)紅外線的容器，可以應(yīng)用汽蒸。
其次，將加熱后的種子經(jīng)受釀造。更確切地說(shuō)，釀造是通過(guò)使用釀造細(xì)菌，如“Koji”真菌(Aspergillus oryzae)在溫度27-35℃進(jìn)行3-7天。
對(duì)釀造而言，除釀造細(xì)菌外可以利用如(1)具有釀造活性的物質(zhì)，例如成熟的番木瓜果、鳳梨果汁、無(wú)花果皮、葡萄皮、青竹皮，(2)消化酶如淀粉糖化酶、胰酶，(3)由微生物得到的蛋白質(zhì)水解酶，如蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶，以及(4)得到上述消化酶或蛋白質(zhì)水解酶的前體。
當(dāng)使用本發(fā)明的低分子量植物組合物作為消炎劑時(shí)，將經(jīng)受上述遠(yuǎn)紅外線加熱處理和釀造處理的物料研成粉末，或通過(guò)常規(guī)公知的方法制成顆粒、片劑或膠囊并以合適的劑量口服?？梢砸?-27克/天的范圍使用本發(fā)明的組合物作為消炎劑。
還有，上述粉末可以添加入各種食品和飲料中以提供給它們作為保健食品。
在奶薊種子中，低分子量消炎物質(zhì)，如類黃酮、胡蘿卜素、兒茶素、多酚、維生素E和維生素C以互相聚合狀態(tài)，換言之以非活性狀態(tài)存在。因此，甚至當(dāng)不經(jīng)任何處理口服奶薊種子時(shí)，不能得到任何顯著的消炎作用。
這就是，通過(guò)遠(yuǎn)紅外線加熱處理，而后釀造處理以切割該非活性類聚合物的分子鏈，以活化該低分子量的消炎物質(zhì)。
然而，甚至當(dāng)對(duì)其它含有消炎物質(zhì)，如類黃酮的植物種子進(jìn)行遠(yuǎn)紅外線加熱處理和釀造處理時(shí)，未顯示出顯著的消炎作用。對(duì)于這一事實(shí)可以認(rèn)為是，在奶薊種子中，除類黃酮等外，顯示極優(yōu)良消炎作用的低分子量物質(zhì)是以非活性狀態(tài)存在，并且通過(guò)施加遠(yuǎn)紅外線加熱處理和釀造處理而被活化。
實(shí)施例以下詳細(xì)描述奶薊種子的消炎作用。
實(shí)施例1-對(duì)人體白血細(xì)胞試驗(yàn)-
由健康人的外周血液中收集白血細(xì)胞(嗜中性細(xì)胞和淋巴細(xì)胞)并盛入試管中，向其中加入未處理過(guò)的奶薊種子或施用本發(fā)明處理的種子。然后就5個(gè)測(cè)點(diǎn)檢測(cè)其作用，該5個(gè)測(cè)點(diǎn)被認(rèn)為是炎癥的促進(jìn)因素，即(1)嗜中性細(xì)胞中鈣離子濃度，(2)嗜中性細(xì)胞的遷移能力，(3)嗜中性細(xì)胞的吞噬能力，(4)通過(guò)嗜中性細(xì)胞制備活性氧(O-O-)，和(5)淋巴細(xì)胞對(duì)植物凝血素(PHA)的反應(yīng)性(致癌現(xiàn)象)。
試驗(yàn)方法(1)嗜中性細(xì)胞中鈣離子濃度收集外周靜脈血液并通過(guò)使用Ficoll Hypaque分離和得到嗜中性細(xì)胞和淋巴細(xì)胞。在2ml含有0.1mM(毫摩爾)氧化鈣的KRP中懸浮107細(xì)胞/ml的嗜中性細(xì)胞，向其中添加0.1μM Fura-2 A/M并在37℃將該混合物緩慢振蕩30分鐘。然后將該混合物用KRP洗滌兩次，向其中添加15μl 10-6M fMLP并用熒光分光光度計(jì)F-4000(商品名，Hitachi Ltd)。測(cè)定鈣離子濃度。
(2)嗜中性細(xì)胞的遷移能力將2.5ml添加有10%失活的牛犢血清的RPMI和2.5ml 2.4%瓊脂溶液混合制得瓊脂平面。然后在由中心至外端8mm的間隔中形成直徑3mm的三個(gè)孔穴。在中心孔穴中，放置10μl懸浮有106細(xì)胞/ml的嗜中性細(xì)胞的RPMI1640溶液;在中間孔穴中，放置10μl PRMI1640溶液作為對(duì)照，在外端孔穴中，放置10μl10-6M fMLP作為遷移刺激劑。接著，在這之后使瓊脂平面在37℃保持2小時(shí)，測(cè)量中心孔穴中向外端孔穴移動(dòng)的嗜中性細(xì)胞距離，它代表嗜中性細(xì)胞的遷移能力。
(3)嗜中性細(xì)胞的吞噬能力收集0.1ml受人體血清調(diào)理的石蠟油并添加0.9ml在其中已加有2×107嗜中性細(xì)胞的KRP溶液，使該混合物在37℃下保持5分鐘。然后向該混合物添加冰冷的KRP以使反應(yīng)停止，并充份洗滌嗜中性細(xì)胞表面3次以除去粘附在嗜中性細(xì)胞表面的石蠟油。隨后，用氯仿/甲醇(1∶2)的混合物萃取被嗜中性細(xì)胞吞噬的石蠟油滴并用分光光度計(jì)(吸收率525nm)測(cè)定。
(4)由嗜中性細(xì)胞產(chǎn)生活性氧(O-O-)在2ml含有5mM葡萄糖和1mg/ml白明膠的KRP溶液中，懸浮106嗜中性細(xì)胞，使該混合物在37℃下保持5分鐘。然后，向其中添加0.1mM亞鐵細(xì)胞色素C和1mg/ml調(diào)理過(guò)的酵母聚糖并使該混合物在37℃下放置5分鐘。然后收集0.1ml上清液，并將此加入2ml 100mM含有0.1mM EDTA的磷酸鉀溶液(PH7.8)中，通過(guò)具有2種波長(zhǎng)的分光光度計(jì)(吸收率550nm)測(cè)定還原細(xì)胞色素C的活性氧還原程度以計(jì)算活性氧的量。
(5)淋巴細(xì)胞對(duì)植物凝血素的反應(yīng)性(致癌現(xiàn)象)向2ml含有20%失活牛犢血清和2×105用絲裂霉素處理過(guò)的單核細(xì)胞的RPMI1640溶液中懸浮3×106淋巴細(xì)胞。然后向其中加入10μg/mlPHA，并使該混合物在37℃下保持3天。在反應(yīng)完成前24小時(shí)，添加2Ci/mM[3H]，并測(cè)量在最后24小時(shí)內(nèi)被淋巴細(xì)胞奪取的[3H]的量。
試驗(yàn)分別將已按本發(fā)明施加了遠(yuǎn)紅外線加熱和釀造處理的奶薊種子和未處理的奶薊種子粉化，并用超聲波將各為1.6mg/ml的上述種子進(jìn)行聲波處理，然后將它們加入5種炎癥因素，即嗜中性細(xì)胞的鈣離子濃度、遷移能力、吞噬能力和產(chǎn)生活性氧以及淋巴細(xì)胞對(duì)PHA的反應(yīng)性的測(cè)量體系中，然后檢測(cè)對(duì)測(cè)量值的作用。
此外，將1.6mg/ml日本專利公開申請(qǐng)?zhí)?3-79834中所公開的抗氧化劑組合物，以及名為10-4M的市售消炎劑Rideron(Shionogi Seiyaku出售的促腎上腺皮質(zhì)激素，倍他米松)、Pontal(Sankyo出售的甲滅酸)、Voltaren(Ciba-Geigy公司出售的二氯苯胺苯乙酸鈉)和Brufen(Kaken Seiyaku出售的異丁苯丙酸)加入上述5種炎癥因系的測(cè)量系統(tǒng)中作為比較藥物，并且也檢測(cè)對(duì)測(cè)量值的作用。
試驗(yàn)結(jié)果示于表1。
表1奶薊和其它藥物對(duì)白血細(xì)胞的作用嗜中性細(xì)胞 淋巴細(xì)胞鈣離子濃度 遷移能力 吞噬能力 活性氫產(chǎn)生 PHA致癌奶薊(加熱和釀 47.5(%) 50.6(%) 41.6(%) 51.8(%) 47.7(%)造過(guò)的)奶薊(未處 72.3 76.1 69.1 74.8 70.2理過(guò)的)抗氧化劑 89.5 91.5 92.1 60.4 90.4組合物Rinderon 52.9 54.9 59.4 68.7 54.4Pontal 82.5 86.0 85.4 82.8 82.2Voltaren 84.9 86.8 86.3 86.9 84.6Brufen 87.1 87.7 87.9 89.0 88.1對(duì)照(*) 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0(618nm) (16.8mm) (0.031OD) (1.94nm (33.456×10
/106細(xì)胞/分鐘 CPM)
每一行的數(shù)字分別表示以對(duì)照(＊)值計(jì)的百分值。對(duì)照(＊)表示當(dāng)未添加藥物時(shí)的炎癥因素值。對(duì)照(＊)行中空格的數(shù)字表示炎癥因素的真實(shí)值。
由表1清楚地可見，在比較藥物中，抗氧化劑組合物顯著地降低有效炎癥因素之一的活性氧(O-O-)，但基本上對(duì)其它四種炎癥因素沒(méi)有作用。還有，除Rinderon外，市售消炎劑僅對(duì)五種炎癥因素中的某些略有抑制作用。
另一方面，可以理解到，用遠(yuǎn)紅外線加熱并釀造過(guò)的奶薊種子顯示出有效的消炎作用，并比Rinderon更有效地抑制和降低5種炎癥因素，Rinderon是一種促腎上腺皮質(zhì)激素，并以具有副作用而聞名。
未處理過(guò)的奶薊種子也顯著地抑制和降低5種炎癥因素，但其程度與施加遠(yuǎn)紅外加熱和釀造處理過(guò)的種子相比較弱。
實(shí)施例2給總共39個(gè)所謂難治療疾病人的病例，包括10例慢性風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人，8例進(jìn)行性全身硬化病或皮肌炎病病人，6例全身紅斑狼瘡，6例Crohn′s病、5例Behcet′s病、和4例潰瘍性結(jié)腸炎(這些病人對(duì)使用抗氧劑組合物，日本專利申請(qǐng)公開號(hào)64-85919所公開的易于吸收的原藥、促腎上腺皮質(zhì)激素劑等的治療有抵抗力)以9g/天(每天三次)口服已施加遠(yuǎn)紅外線加熱和釀造處理的奶薊種子粉末，以及以9g/天(每天三次)口服未處理過(guò)的奶薊種子粉末，每四周判斷其作用，得到示于表2的結(jié)果。
“無(wú)變化”是指與使用促腎上腺皮質(zhì)激素有相同效果，與使用該激素比較既未觀察到改進(jìn)，也未觀察到惡化。
“無(wú)效”是指疾病比使用腎上腺皮質(zhì)激素的情況惡化。
“有效率”表示總病例中顯著有效、有效和略為有效的百分比。
由表2清楚可見，用遠(yuǎn)紅外線加熱和釀造過(guò)的奶薊對(duì)66-83%口服它的難治療疾病病人有效。
結(jié)果，許多使用拐棍或步行機(jī)行走的慢性風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人可以自己行走。在四名由胸X-P觀察證實(shí)具有肺硬化的晚期進(jìn)行性全身硬化病或皮肌炎病并顯著呼吸困難的病人中，呼吸困難有改善并在所有病例中通過(guò)胸X-P觀察證實(shí)了消失。
還有，在總共7例已進(jìn)行多次腸管手術(shù)的Crohn′s病人、Bechcet′s病人(腸管型)和潰瘍性結(jié)腸炎病人中，5例已變得不必進(jìn)行腸管手術(shù)，并在以后繼續(xù)好轉(zhuǎn)。
另一方面，未處理過(guò)的奶薊種子的效果基本上與市售的消炎劑相同(除了促腎上腺皮質(zhì)激素劑外)并低于促腎上腺皮質(zhì)激素劑。遠(yuǎn)低于那些用遠(yuǎn)紅外線加熱并釀造過(guò)的種子，特別是未處理過(guò)的奶薊種子對(duì)任何對(duì)促腎上腺皮質(zhì)激素劑或抗氧化劑組合物有抵抗力的病例無(wú)效。
實(shí)施例3給總共61病例上述難治療疾病的新病人(29例慢性風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、10例進(jìn)行性全身硬化病或皮肌炎病、8例全身紅斑狼瘡、6例Crohn′s病、6例Bchcet′s病(腸管型)和2例潰瘍性結(jié)腸炎)以9g/天(每天分別給藥3次)口服用遠(yuǎn)紅外線加熱和釀造過(guò)的奶薊種子粉末，以9g/天(每天分別給藥3次)口服未處理過(guò)的奶薊種子粉末，以9g/天(每天分別給藥3次)口服抗氧化劑組合物。口服Rinderon(0.5mg×3片劑/天)，Pontal(250mg×4片劑/天)，Voltaren(25mg×3片劑/天)，以及Brufen(200mg×6片劑/天)，每4周判斷其效果，從而得到示于表3的結(jié)果。
在本實(shí)施例中，不是給全部病人每4周連續(xù)服用所有藥劑。此外，僅在一部份病例中，給相同疾病的全部病人口服相同的藥物。還有，在一部份病例中服用某些藥物4周，此后服用其它藥物4周。
由表3清楚可見，用遠(yuǎn)紅外線加熱并釀造過(guò)的奶薊種子大多顯示出顯著有效和有效，促腎上腺激素(Rinderon)跟隨其后。其它藥物顯示出基本上與市售消炎劑相同的效果。
實(shí)施例4給總共56例普通炎癥病人(16例腰痛、10例肌痛、9例肩強(qiáng)直、10例擦傷和11例冷體質(zhì))以實(shí)施例3中相同劑量口服相同藥物4周，判斷其效果。結(jié)果示于表4。
表4奶薊和市售消炎劑對(duì)普通炎癥病人的效果
由表4清楚可見，結(jié)果基本上與上述實(shí)施例3相同，但用遠(yuǎn)紅外線加熱和釀造過(guò)的奶薊種子和其它藥物之間的差別沒(méi)有實(shí)施例3明顯。
由實(shí)施例1的結(jié)果清楚可見，施用過(guò)遠(yuǎn)紅外加熱和釀造處理的奶薊種子與未處理的種子比較，對(duì)作為白血細(xì)胞炎癥因素的嗜中性細(xì)胞鈣離子濃度、遷移能力、吞噬能力和活性氧的產(chǎn)生、以及淋巴細(xì)胞對(duì)PHA的反應(yīng)性之中的每一種都顯著地是有抑制性的。
還有，在對(duì)上述有關(guān)炎癥因素的有關(guān)抑制作用方面，本發(fā)明的組合物比日本專利申請(qǐng)公開號(hào)63-79834中所公開的抗氧化劑組合物或市售消炎劑的效果遠(yuǎn)為優(yōu)良。
由實(shí)施例2、3和4中有關(guān)結(jié)果清楚可見，用遠(yuǎn)紅外線加熱和釀造過(guò)的奶薊種子不僅對(duì)普通炎癥疾病，如腰痛、肌痛、肩強(qiáng)直、擦傷和冷體質(zhì)，而且還對(duì)慢性風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎顯示出顯著的效果。
還有，它對(duì)難治療疾病，即為日本Health和Welfare部所指定的特殊疾病，如進(jìn)行性全身硬化病、皮肌炎、全身紅斑狼瘡、Crohn′s病、Behcet′s病和潰瘍性結(jié)腸炎顯示出顯著效果。此外，它特別對(duì)甚至使用以副作用聞名的促腎上腺皮質(zhì)激素也不能收到任何效果的病例顯示出顯著效果，以致它作為消炎劑是劃時(shí)代的，而且其使用價(jià)值極為巨大。
權(quán)利要求
1.一種低分子量植物組合物，該組合物含有經(jīng)受用遠(yuǎn)紅外線加熱并隨后釀造處理的奶薊種子。
2.權(quán)利要求1的低分子量植物組合物，其中加熱處理是通過(guò)使用波長(zhǎng)為4-14μm的遠(yuǎn)紅外線進(jìn)行的。
3.權(quán)利要求1的低分子量植物組合物，其中加熱處理是在含有陶瓷的容器中進(jìn)行。
4.權(quán)利要求1的低子分量植物組合物，其中加熱處理是在溫度不超過(guò)100℃時(shí)進(jìn)行。
5.權(quán)利要求1的低分子量植物組合物，其中釀造處理是通過(guò)釀造細(xì)菌、消化酶、蛋白質(zhì)水解酶或得到所述酶或所述蛋白質(zhì)水解酶的前體進(jìn)行的。
6.權(quán)利要求5的低分子量植物組合物，其中釀造細(xì)菌是“koji”真菌、
7.權(quán)利要求1的低分子量植物組合物，其中該組合物是一種消炎劑。
8.權(quán)利要求7的低分子量植物組合物，其中藥劑的形式是粉末、顆粒、片劑或膠囊。
9.權(quán)利要求1的低分子量植物組合物，其中該組合物是一種食品添加劑。
10.制備低分子量植物組合物的方法，該方法包括用遠(yuǎn)紅外線將奶薊種子加熱并將該種子釀造。
全文摘要
一種低分子量植物組合物。該組合物含有用遠(yuǎn)紅外線，例如利用含有陶瓷的容器加熱，并隨后用釀造細(xì)菌，如“Koji”真菌、消化酶、蛋白質(zhì)水解酶或得到所述酶或所述蛋白質(zhì)水解酶的前體釀造過(guò)的奶薊種子。
文檔編號(hào)A61K41/00GK1070574SQ9211046
公開日1993年4月7日 申請(qǐng)日期1992年8月14日 優(yōu)先權(quán)日1991年8月14日
發(fā)明者山嵜宏子, 黑田昌宏, 丹羽耕三 申請(qǐng)人:丹羽耕三