專利名稱：抑制艾滋病病毒感染的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及抑制艾滋病病毒(即造成獲得性人體免疫缺乏綜合征的病毒)感染的藥物組合物，所說的組合物包括D-β-賴氨酰甲二胺、其鹽或水合物作為有效成分。本發(fā)明還涉及抑制人體T-細(xì)胞被造成獲得性免疫缺乏綜合征的病毒感染的方法，其中包括用D-β-賴氨酰甲二胺、其鹽或水合物處置人體T-細(xì)胞。本發(fā)明也包括使用D-β-賴氨酰甲二胺、其鹽或水合物制造抗AIDS病毒的抗病毒組合物。
據(jù)發(fā)現(xiàn)，獲得性免疫缺乏綜合征(有時只叫作艾滋病，“AIDS”)是因人體T-細(xì)胞被人體血液中的致病病毒感染而引起的疾病。這種導(dǎo)致獲得性免疫缺乏綜合征的病毒，通常叫作獲得性免疫缺乏綜合征病毒，常常簡記作HIV或AIDS病毒。據(jù)報(bào)導(dǎo)，某些已知化合物可以用作使HIV滅活的藥劑或抗HIV的抗病毒劑。但是，這些已知的化合物作為治療艾滋病的有用治療劑使用時，沒有一種化合物是令人滿意的。
艾滋病是一種給人類社會帶來嚴(yán)重問題的重要疾病，因此人們強(qiáng)烈而迫切地要求開發(fā)和提供出一些新的高效藥物，這些藥不僅毒性低，而且對于抑制HIV感染具有高活性，希望將這些藥作為治療或預(yù)防性處置艾滋病病人的有用的藥劑。
另一方面，D-β-賴氨酰甲二胺是具有抗革蘭氏陽性細(xì)菌的低抗菌活性的一種已知的抗菌素，它利用一種微生物Streptomycesnashvillensis MD 743-GF4生產(chǎn)(參見“Journalof Antibiotics”，Vol.39No.3，476-478頁，1986年，和1987年5月26日公開的特開昭62-114947號日本專利申請的說明書)。D-β-賴氨酰甲二胺具有由下式(Ⅰ)表示的獨(dú)特結(jié)構(gòu)
D-β-賴氨酰甲二胺半碳酸鹽呈無色粉末狀，它具有吸濕性而且沒有可測量的確定的焙點(diǎn)，其比旋光度[α]26D為-7.4°(濃度0.5，水)。
我們發(fā)現(xiàn)，D-β-賴氨酰甲二胺，其鹽或水合物對于人體T-細(xì)胞被HIV感染表現(xiàn)出高抑制活性，尤其是在將人體T-細(xì)胞用D-β-賴氨酰甲二胺或其鹽或水合物處置后在培養(yǎng)基中培養(yǎng)過，再使之與HIV接觸時，人體T-細(xì)胞被HIV的感染在D-β-賴氨酰甲二胺或其鹽水或水合物鹽作用下能夠得到抑制。D-β-賴氨酰甲二胺、其鹽和水合物對于抑制人體T-細(xì)胞被HIV感染來說具有很高活性，而且廣而言之具有抗HIV的抗病毒活性。
因此，本發(fā)明首先提供一種抑制被造成獲得性免疫缺乏綜合征的病毒感染的藥物組合物，其中包含作為活性成分的D-β-賴氨酰甲二胺(式Ⅰ)、其鹽或其水合物，
同時還包含所說活性成分的可藥用載體。
其次，本發(fā)明包括一種抑制人體T-細(xì)胞被造成獲得性免疫缺乏綜合征的病毒感染的方法，包括使用抑制感染所說病毒有效量的、上面示出的D-β-賴氨酰甲二胺、其可藥用鹽或水合物處置人體T-細(xì)胞。
此外，本發(fā)明還包括使用式(Ⅰ)的D-β-賴氨酰甲二胺、其可藥用鹽或水合物，制造用于抑制感染導(dǎo)致獲得性免疫缺乏綜合征的病毒用的藥物組合物。
本發(fā)明也涉及制造抑制感染導(dǎo)致獲得性免疫缺乏綜合征的病毒用藥物組合物的方法，其中包括D-β-賴氨酰甲二胺、其可藥用鹽或水合物與可藥用的載體混合。
用作活性成分或本發(fā)明化合物的D-β-賴氨酰甲二胺，是一種水溶性堿性物質(zhì)，能夠與酸(無機(jī)或有機(jī)酸)形成酸加成鹽。適用于形成這樣的酸加成鹽的酸，包括可藥用的無機(jī)酸，例如鹽酸、硫酸、氫溴酸、磷酸、硝酸等等，以及可藥用的有機(jī)酸，例如乙酸、馬來酸、檸檬酸、抗壞血酸、甲磺酸等等。
本發(fā)明使用的D-β-賴氨酰甲二胺，特征在于其對于哺乳動物的低毒性。例如，在評定此化合物的急性毒性試驗(yàn)中，給鼠靜脈注射了D-β-賴氨酰甲二胺，結(jié)果發(fā)現(xiàn)接受D-β-賴氨酰甲二胺用藥的鼠能耐受250mg/Kg的D-β-賴氨酰甲二胺而不致死。
本發(fā)明的藥物組合物包含D-β-賴氨酰甲二胺、其酸加成鹽或水合物作為活性成分，同時還包含所說活性成分的可藥用的固體或液體載體;所說的組合物可以按常規(guī)方式制成傳統(tǒng)劑型的藥劑，例如粉劑、顆粒劑、片劑、糖漿、注射劑等等口服或非腸道給藥的劑型。
為了證明D-β-賴氨酰甲二胺對于抑制人體T-細(xì)胞感染HIV(即艾滋病病毒)具有很高活性，作為下列分析試驗(yàn)，其操作步驟如下試驗(yàn)例1按照與在“Proc.Natl.Acad.Sci.USA”，80，6061-6065(1983);“J.Antibiot.”，40，1077-1078(1987);“J.Antibiot”.，42，344-346(1989)和“J.Antibiot”，44，1228-1236(1991)中所述的試驗(yàn)方法相似的方式，測定了D-β-賴氨酰甲二胺抑制人體T細(xì)胞感染HIV的效果。
將處于磷酸鹽緩沖的鹽水中的MT-4細(xì)胞(人體T-細(xì)胞系)(1×105個細(xì)胞/毫升)接種到48孔的Costar板上，每孔接種0.5ml。在每個孔中加入0.05ml試驗(yàn)化合物(即D-β-賴氨酰甲二胺)溶液(在磷酸鹽緩沖的鹽水中溶解濃度為3、10、30和100μg/ml的試驗(yàn)化合物)。在5%CO2和37℃下培養(yǎng)2小時之后，使MT-4細(xì)胞感染0.05mlHIV(HTLV-IIIB菌株)，每個孔的多重感染(m.o.i.)量為0.025-0.05。在37℃和5%CO2下將試驗(yàn)板培養(yǎng)4天，以便使所說的T-細(xì)胞在不同濃度試驗(yàn)化化合物存在下得到處理。取出數(shù)份培養(yǎng)過的培養(yǎng)物，將所說的MT-4細(xì)胞涂抹在載玻片上，干燥后用丙酮固定之。利用間接免疫螢光分析法[參見Y.Himuna等，“Proc.Natl.Acad.Sci.USA”，78，6476-6480(1981)和Y.Tackeuchi等，“Gann.”，78，11-15(1987)]檢查存在的HIV抗原陽性的MT-4細(xì)胞。細(xì)胞涂斑在37℃下用在磷酸鹽緩沖的鹽水中稀釋度為1∶10的艾滋病病人血漿處置30分鐘后，作為第一抗體。用磷酸鹽緩沖的鹽水洗滌之后，將此MT-4細(xì)胞在37℃下用有螢光的結(jié)合有異硫代氰酸鹽的免抗人體IgG血漿(美國賓西法尼亞州Cochranville Cappel實(shí)驗(yàn)室)處置30分鐘作為第二抗體。細(xì)胞涂斑經(jīng)磷酸鹽緩沖的鹽水洗滌后蓋上蓋玻片，在螢光顯微鏡下測定MT-4細(xì)胞。計(jì)算出病毒抗原陽性的MT-4細(xì)胞(即表示結(jié)合HIV的抗原的免疫螢光細(xì)胞)數(shù)在總細(xì)胞數(shù)中的百分?jǐn)?shù)。
對照試驗(yàn)中，不加D-β-賴氨酰甲二胺的條件下重復(fù)上面的試驗(yàn)操作。
此外，D-β-賴氨酰甲二胺對MT-4細(xì)胞的細(xì)胞毒性是按下法評定的按照和上面提到過的用來試驗(yàn)D-β-賴氨酰甲二胺抑制T-細(xì)胞感染HIV活性所用試驗(yàn)操作相同的方法，采用與MT-4細(xì)胞培養(yǎng)相同的條件和相同的方式，在無HIV存在下，加入不同濃度的D-β-賴氨酰甲二胺培養(yǎng)MT-4細(xì)胞。下表1中，符號“-”表示未觀察到所說的細(xì)胞毒性。
為了評定D-β-賴氨酰甲二胺抑制人體T-細(xì)胞(即MT-4細(xì)胞)感染HIV的活性，計(jì)算了T對C的百分?jǐn)?shù)T/C%其中T是在上面提到的試驗(yàn)中即在試驗(yàn)化合物存在下培養(yǎng)MT-4細(xì)胞時測得的HIV抗原陽性細(xì)胞的數(shù)目;而C是在上面提到的對照試驗(yàn)中，即不加試驗(yàn)化合物培養(yǎng)MT-4細(xì)胞時測得的HIV抗原陽性細(xì)胞的數(shù)目。表1中列出了這種T/C值(%)的計(jì)算結(jié)果，用存在或產(chǎn)生HIV抗原陽性細(xì)胞的比例(%)表示。
表1試驗(yàn)化合物 存在HIV抗原陽性 細(xì)胞濃度 細(xì)胞的比例 毒性(μg/ml) (%)3 30 -10 15 -30 10 -100 5 -上表1中試驗(yàn)結(jié)果清楚地說明，按本發(fā)明使用D-β-賴氨酰甲二胺證明沒有細(xì)胞毒性，即使?jié)舛葹?00μg/ml也是如此;而且在濃度不高于100μg/ml條件下能夠顯著地減少HIV抗原陽性細(xì)胞的數(shù)目;換句話說，能夠顯著地抑制HIV病毒抗原的存在。D-β-賴氨酰甲二胺抗HIV的50%有效濃度(ED50)為0.62μg/ml。
此事實(shí)表明由于D-β-賴氨酰甲二胺存在，HIV不能在MT-4細(xì)胞中增殖，從而使HIV病毒抗原在人體T-細(xì)胞中的發(fā)展能夠得到抑制。
然而，人們通過近代實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，濃度為100μg/ml的D-β-賴氨酰甲二胺既未對HIV的逆轉(zhuǎn)錄酶表現(xiàn)出抑制活性，又未對HIV的蛋白酶表現(xiàn)出抑制活性。
因此，D-β-賴氨酰甲二胺能夠有效地抑制人體T-細(xì)胞感染HIV顯然是按迄今未知的機(jī)理作用的。
順便指出，上面提到的試驗(yàn)同時還用DDI(即2′，3′-二脫氧肌苷)重復(fù)過，DDI是近來用于治療艾滋病的藥物;結(jié)果發(fā)現(xiàn)，DDI抗HIV的ED50值為0.46μg/ml，這說明DDI抑制人體T-細(xì)胞感染HIV的效果，與本發(fā)明的D-β-賴氨酰甲二胺的效果相當(dāng)。
在實(shí)際給藥時，一般情況下既可以以抑制感染HIV的抗病毒劑形式也可以以使HIV滅活的藥劑形式經(jīng)口或非腸道施用D-β-賴氨酰甲二胺。
按本發(fā)明使用的活性成分化合物(即D-β-賴氨酰甲二胺、其鹽或水合物)以抑制感染HIV的或使HIV滅活的抗病毒劑給藥時，可以單獨(dú)地或者以制劑形式(如含有與賦形劑或載體混合態(tài)下之所說活性化合物的注射劑、口服制劑或栓劑等等)給藥?？少徺I到的任何藥用的賦形劑或載體都適于此目的。所用載體的性質(zhì)和組成可以依給藥途徑和方式而變化。例如，作為液體載體可以使用水、乙醇、動物油或植物油(如豆油、芝麻油)或礦物油或合成油。適用的固體載體包括糖例如麥芽糖或蔗糖，氨基酸，羥丙基纖維素等纖維素衍生物，環(huán)糊精等多糖，硬脂酸鎂等有機(jī)酸鹽等等。
制備注射劑時，一般優(yōu)選的液體介質(zhì)包括生理鹽水、各種緩沖溶液、糖(如葡萄糖、肌醇、甘露糖醇的水溶液，或二元醇如乙二醇或聚乙二醇。也可以制成凍干制劑，其中含D-β-賴氨酰甲二胺、其鹽或水合物作為活性成分，并且還混合有賦形劑，例如糖(如肌醇、甘露醇、葡萄糖、甘露糖、麥芽糖或蔗糖)或氨基酸(如苯基丙氨酸)。給藥時，可以將這樣的凍干制劑溶解于適當(dāng)?shù)淖⑸溆萌軇┲校鐭o菌水或靜脈注射用液體(如生理鹽水、葡萄糖水溶液、電解質(zhì)水溶液或氨基酸水溶液)中。
D-β-賴氨酰甲二胺在所制成的組合物中存在的比例可以因制劑不同而有很大的變化，但是一般情況下該比例處于0.1～100重量%范圍內(nèi)，優(yōu)選1-90重量%。制備注射劑時，例如一般情況下最好使可注射的溶液含有濃度為0.1-5重量%的D-β-賴氨酰甲二胺作為活性成分。對于口服給藥來說，可以將作為活性成分的化合物與固體載體一起制成片劑、膠囊、粉劑或顆粒劑，或者可以與液體載體一起制成溶液或糖漿等等。在膠囊、片劑、顆粒劑或粉劑之中，其中作為活性成分存在的D-β-賴氨酰甲二胺的比例，一般處于大約3-100重量%范圍內(nèi)，優(yōu)選5-90重量%，余量為載體。
D-β-賴氨酰甲二胺的劑量，可以根據(jù)病人的年令、體重和癥狀以及預(yù)期的治療目的來適當(dāng)確定。D-β-賴氨酰甲二胺的治療(即有效)劑量，對于非腸道給藥和口服來說，一般情況下分別為1-100和5-500mg/Kg/天。此劑量既可以連續(xù)地也可以間歇地給藥，只要總劑量不超過由動物試驗(yàn)和各種因素確定的這種指定水平就行。
同樣，為非腸道給藥規(guī)定的所說總劑量，當(dāng)然也可以根據(jù)給藥方式，接受治療的病人或動物的條件(如年令、體重、性別、敏感性、食物或飼料、給藥時間、給藥途徑、同時服用的藥物、以及病人和疾病的情況)作適當(dāng)變化。在給定的條件下，D-β-賴氨酰甲二胺的適用劑量和給藥頻率，必須由專門醫(yī)生根據(jù)確定最佳劑量的試驗(yàn)和按照上述指導(dǎo)確定。這些用藥要求也應(yīng)當(dāng)適用于口服D-β-賴氨酰甲二胺。
以下參照下列實(shí)施例詳細(xì)說明本發(fā)明，這些實(shí)施例說明本發(fā)明的抑制感染HIV用組合物的各種劑型。
實(shí)施例1向10克D-β-賴氨酰甲二胺鹽酸鹽中加入適量純水?；衔镌谒腥芙庵?，使之通過商品名為“Millipore Filter GS)的微孔過濾器，用這種方法使所制備的溶液(100ml)無菌過濾。取出如此制得的1ml無菌濾液，各放入一個5ml小瓶中，然后冷凍干燥之，得到一種注射用的凍干制劑，每個小瓶中含100mgD-β-賴氨酰甲二胺鹽酸鹽。
實(shí)施例2將5克D-β-賴氨酰甲二胺鹽酸鹽、60克乳糖、33克結(jié)晶纖維素和2克羥丙基纖維素共同充分混合。形成的粉末混合物用輥型壓力機(jī)(商標(biāo)名Roller Compactor)壓制后破碎形成的被壓的固體。將如此破碎的物質(zhì)過篩，收集粒度為16～60目的粒顆部分作為所需的顆粒型劑。
實(shí)施例3將3克D-β-賴氨酰甲二胺、12克結(jié)晶乳糖、5克結(jié)晶纖維素和0.3克硬脂酸鎂共同在V型混合機(jī)中混合后壓成片，每片含50mgD-β-賴氨酰甲二胺作為活性成分。
因?yàn)镈-β-賴氨酰甲二胺是利用培養(yǎng)已知微生物(Streptomyces nashvillensis MD743-GF4菌株)的方法生產(chǎn)的，所以將所說的發(fā)酵法生產(chǎn)這種抗生素的方法說明如下。
可以按如下方法生產(chǎn)D-β-賴氨酰甲二胺在含能被一般微生物利用的營養(yǎng)源的培養(yǎng)基中接種所說的MD743-GF4菌株，然后在有氧條件下培養(yǎng)所說的菌株。D-β-賴氨酰甲二胺產(chǎn)自所說的培養(yǎng)肉湯中并于其中初步積聚，然后從所產(chǎn)生的培養(yǎng)物中，尤其是從所說的培養(yǎng)肉湯或其濾液中加以回收。
用于培養(yǎng)的培養(yǎng)基中適用的營養(yǎng)源，可以是可用來作為培養(yǎng)已知放線菌(Actinomycetes)菌株的營養(yǎng)源的任何傳統(tǒng)的碳源和氮源。例如，可同化的氮源可以包括豆粉、花生粉、棉籽粉、干酵母、蛋白胨、肉汁、酪蛋白、玉米漿液、硝酸鈉和硫酸銨，這些都能從市場上買到?？赏奶荚纯梢园ㄊ惺鄣奶妓衔锶缙咸烟恰肴樘?、淀粉、甘油、麥芽糖糊精、蔗糖、乳糖或豆油和脂肪。所說的培養(yǎng)基還可以含無機(jī)鹽(如氯化鈉、碳酸鈣、硫酸鎂、氯化錳、硫酸銨和磷酸銨類，此外還可以包含各種氨基酸。適于培養(yǎng)已知放線菌的營養(yǎng)物質(zhì)，都可以用來培養(yǎng)所說的MD743-GF4菌株，條件是這些物質(zhì)能夠被生產(chǎn)D-β-賴氨酰甲二胺的菌株所利用而且適于這種微生物生產(chǎn)D-β-賴氨酰甲二胺。
培養(yǎng)所說的MD743-GF4菌株時，優(yōu)選采用有氧和攪動下的浸沒液體培養(yǎng)法來工業(yè)化生產(chǎn)D-β-賴氨酰甲二胺。培養(yǎng)溫度可以在產(chǎn)生D-β-賴氨酰甲二胺的菌株能夠生長和產(chǎn)生所需的D-β-賴氨酰甲二胺的溫度范圍內(nèi)選擇。具體地講，培養(yǎng)溫度優(yōu)選為25～30℃。MD743-GF4菌株的培養(yǎng)通?？梢猿掷m(xù)到在形成的培養(yǎng)物中產(chǎn)生和積累了足夠量D-β-賴氨酰甲二胺時為止。一般來說，培養(yǎng)可以進(jìn)行2-7天。
D-β-賴氨酰甲二胺、其酸加成鹽和水合物易溶于水中，而且主要存在于產(chǎn)生D-β-賴氨酰甲二胺的菌株之培養(yǎng)物的液體部分之中。存在于培養(yǎng)物液體部分中的D-β-賴氨酰甲二胺基本上不能用丁醇、乙酸丁酯、氯仿和其它有機(jī)溶劑所萃取，因此必要時可以利用這些有機(jī)溶劑除去所不需要的化合物或共同存在的雜質(zhì)。存在于培養(yǎng)肉湯或水溶液中的D-β-賴氨酰甲二胺，可以用各種吸附劑吸附法回收。用活性炭作吸附劑時，被吸附的抗生素，即D-β-賴氨酰甲二胺可以通過用弱酸性水或弱酸性的甲醇水溶液、丙醇水溶液或丙酮水溶液等等洗脫的方法從活性炭中解吸。
由于D-β-賴氨酰甲二胺呈堿性，所以此化合物能有效地被陽離子交換樹脂吸附，并且用適當(dāng)?shù)南疵搫臉渲邢疵?。適于此目的陽離子交換樹脂包括含羧基宮能團(tuán)的H-型、Na-型或NH4-型陽離子交換樹脂，如Amberlite IRC-50 Amberlite CG-50(美國Rohm & Haas公司出品，商品名)、Lewatit CNP(商品名，德國Bayer公司出品)和CM-Sephadex(商品名，瑞典Pharmacia公司出品)，可單獨(dú)或混合使用。用酸性水、稀氨水或無機(jī)鹽的水溶液等等可以有效地從樹脂中洗脫被樹脂吸附的抗生素。通常可以使用0.1～1N鹽酸和0.5-2N氨水制備所說的洗脫劑。D-β-賴氨酰甲二胺基本上不能被陰離子交換樹脂吸附，此性質(zhì)可以用于中和含所說化合物的酸性溶液或者從所說化合物中除去酸性雜質(zhì)。
通過將上述的提取法和分離法適當(dāng)組合或者重復(fù)使用一或多個這樣的方法，可以獲得純凈的D-β-賴氨酰甲二胺。
產(chǎn)生D-β-賴氨酰甲二胺的菌株Streptomyces nashvillensis MD743-GF4，其微生物學(xué)性質(zhì)詳細(xì)地記載于上面說到的日本專利申請?zhí)亻_昭62-114947的說明書中。這種MD743-GF4菌株的微生物學(xué)性質(zhì)總結(jié)如下。
在顯微鏡下觀察到MD743-GF4菌株具有需氧菌絲螺旋狀從中發(fā)展的分支底物菌絲。無旋轉(zhuǎn)物形成。成熟孢子的鏈?zhǔn)嵌嘤?0個孢子的鏈，而且孢子的尺寸為0.6-0.7×1.4-1.7微米并具有光滑的表面。在各種培養(yǎng)基中，MD743-GF4菌株表現(xiàn)出從無色長成深黃棕色，或者隨著白色至淡褐灰色的需氧菌絲的發(fā)展而形成淡褐色，而且?guī)缀醵疾恍纬煽扇苄陨鼗蛐纬蓸O少的淡黃色可溶色素。以黑色素為特征的色素的形成呈陽性。MDF743-GF4菌株的蛋白質(zhì)分解作用程度為中等，而且淀粉水解活性程度相當(dāng)強(qiáng)。比較發(fā)現(xiàn)，MD743-GF4菌株與已知微生物Streptomyces nashvillensis IMC S-0342(ISP 5314)相當(dāng)一致(參見“International Journal of Srstematic Bacteriologr”，Vol.19，455頁，1969年)，唯一的例外是MD743-GF4菌株未呈現(xiàn)利用D-木糖的作用，而IMCS-0342菌株(ISP5314)卻表現(xiàn)出利用D-木糖的作用。
上述的Streptomyces nashvillensis MD743-GF4菌株于1985年9月7日保藏在(FERM P-8442)而且于1991年12月25日再次保藏在日本國際貿(mào)易和工業(yè)部工業(yè)科學(xué)技術(shù)辦事處的日本主管保藏單位“發(fā)酵研究所”之中，自1991年12月25日起保藏號為“FERM P-12676”。這種MD743-GF4菌株現(xiàn)在按布達(dá)佩斯條約規(guī)定，以保藏號“FERM BP-4127”保藏在“發(fā)酵研究所”中，此所設(shè)在日本Ibaragi省筑波城中。
此外，發(fā)酵生產(chǎn)D-β-賴氨酰甲二胺的實(shí)例在下列參照例中加以說明。
參照例1將在斜面瓊脂培養(yǎng)基中培養(yǎng)過的一定量Streptomyces nashvillensis MD743-GF4菌株(FERMP-12676，但是按布達(dá)佩斯條約已轉(zhuǎn)變成新保藏號“FERM BP-4127”)接種在一種液體培養(yǎng)基之中，該液體培養(yǎng)基含有2.0%半乳糖、2.0%糊精、1.0%胨(以商品名“Bacto-Soytone”出售的Difco公司產(chǎn)品)，0.5%玉米漿液(Ajinomoto公司出品)、0.2%硫酸銨和0.2%碳酸鈣，該液體培養(yǎng)基處于數(shù)個500ml錐形瓶中110ml處。在旋轉(zhuǎn)振搖(180轉(zhuǎn)/分)下將接種的培養(yǎng)基在28℃下培養(yǎng)2天，以提供第一接種培養(yǎng)物。致此第一接種培養(yǎng)物各2ml接種到處于90個錐形瓶中的110ml組成如上的液體培養(yǎng)基中，在與上述同樣的培養(yǎng)條件下將這90個錐形瓶中的已接種的培養(yǎng)基培養(yǎng)3天。
收集此法得到的培養(yǎng)肉湯后合并之，過濾得到9000ml培養(yǎng)肉湯濾液(pH6.0，其效力為80μg/ml)。使此濾液通過有550ml陽離子交換樹脂AmberliteIRC-50(NH4型與H型的7∶3混合物)的柱，以便用樹脂吸附D-β-賴氨酰甲二胺。樹脂柱用1100ml水洗滌后，用1.2N氨水洗脫，收集洗脫液的活性餾份，合并(1370ml)后減壓濃縮至干，得到636mg粗品粉末(效力為644μg/mg)。
將此粗品粉末溶解在10ml水中，使得到的水溶液通過有60mlAmberlite CG-50(NH4型)的柱，吸附所說的活性化合物。樹脂柱用120ml水洗滌(按編號1～18收集柱流出液的諸餾份)后，用300ml0.6N氨水洗滌(收集的流出液按餾份19～60編號)。最后用300ml1.2N氨水洗脫樹脂柱得到洗脫液的諸餾份61～101。
將餾份77～95合并，濃縮至干后進(jìn)一步干燥產(chǎn)出D-β-賴氨酰甲二胺半碳酸鹽，是一種吸濕性無色粉末狀物質(zhì)。產(chǎn)出量370mg(效力為1000μg/mg)，而且根據(jù)培養(yǎng)肉湯計(jì)算出的產(chǎn)率為50.8%。此物質(zhì)的比旋光度值為[α]26D＝-7.4°(C0.5，水)。此物質(zhì)吸附水后變成無色漿狀。
權(quán)利要求
1.一種抑制感染導(dǎo)致獲得性人體免疫缺乏綜合征的病毒的藥物組合物，其中包含式(Ⅰ)D-β-賴氨酰甲二胺、其鹽或水合物作為活性成分，
同時還包含所說活性成分的可藥用的載體。
2.一種抑制人體T-細(xì)胞感染導(dǎo)致獲得性人體免疫缺乏綜合征的病毒的方法，其中包括用抑制感染所說病毒有效量的權(quán)利要求1所述的式(Ⅰ)D-β-賴氨酰甲二胺、其可藥用鹽或水合物處置人體T-細(xì)胞。
3.使用權(quán)利要求1所述的式(Ⅰ)的D-β-賴氨酰甲二胺、其可藥用鹽或水合物，制造抑制被導(dǎo)致獲得性人體免疫缺乏綜合征的病毒感染的藥物組合物。
4.一種制造抑制感染導(dǎo)致獲得性人體免疫缺乏綜合征的病毒的藥物組合物的方法，其中包括將權(quán)利要求1所述的D-β-賴氨酰甲二胺、其可藥用鹽或水合物與可藥用的載體混合。
全文摘要
本發(fā)明提供了含D-β-賴氨酰甲二胺、其鹽或水合物的藥物組合物。該組合物可以用于抑制人體T-細(xì)胞感染HIV，即導(dǎo)致獲得性人體免疫缺乏綜合癥(艾滋病)的病毒。因此，D-β-賴氨酰甲二胺及其鹽或水合物可以用作抗HIV的抗病毒劑。
文檔編號A61P31/18GK1074369SQ9211384
公開日1993年7月21日 申請日期1992年12月26日 優(yōu)先權(quán)日1991年12月27日
發(fā)明者近藤信, 池田洋子, 濱田雅, 竹內(nèi)富雄, 星野洪郎 申請人:財(cái)團(tuán)法人微生物化學(xué)研究會