專利名稱：吞噬細(xì)胞的吞噬作用增進(jìn)劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及增進(jìn)多核白血球、單核細(xì)胞、組織細(xì)胞等吞食細(xì)胞的吞食異物作用的吞食作用增進(jìn)劑。本發(fā)明的吞食作用增進(jìn)劑，用于人體后，可有效地提高對細(xì)菌感染的防御力和抵抗力。
靈芝(GanodermaLucidum)的子實(shí)體(下文中稱為靈芝)，在中國作為藥用已有2000年以上的歷史。近年來，其臨床應(yīng)用、有效成分的分析等進(jìn)一步有所發(fā)展，例如驗(yàn)證了對心絞痛、高脂血癥、神經(jīng)衰弱、急性病毒性肝炎、白血球減少癥的效用，此外還發(fā)現(xiàn)了增進(jìn)巴比妥的中樞抑制作用以及赤芝(靈芝的一種)的鎮(zhèn)咳、強(qiáng)心、降低血清GPT等藥物作用。
另外，近年來人們還嘗試配合現(xiàn)有的化學(xué)療法，使用靈芝來增強(qiáng)人體的免疫力，提高治療效果。例如，提高癌癥患者的抵抗力、免疫力、增強(qiáng)抗腫瘤藥的效果，或者提高手術(shù)后患者的免疫力，予防二次感染。
免疫系統(tǒng)是與多種細(xì)胞組織及臟器有關(guān)的復(fù)雜系統(tǒng)，其中起重要作用的是吞噬細(xì)胞的吞噬異物作用。為了從免疫學(xué)的角度弄清靈芝的藥理作用，人們作了許多嘗試，例如近
大學(xué)藥學(xué)部久保道德研究室編的《漢方藥醫(yī)學(xué)雙書-別卷1，靈芝》(三一書房，1985年)中寫道將靈芝給小鼠用藥后，血液中的碳清除速度加快。但是，該書中僅僅寫了服用靈芝能降低異物在血液中的濃度，但并未說明靈芝對多核白血球、組織細(xì)胞、單核細(xì)胞等吞噬細(xì)胞的吞噬性能的藥理作用。
本發(fā)明是針對上述情況而進(jìn)行的，其目的是提供提高吞噬細(xì)胞的吞噬異物作用的藥劑。
本發(fā)明的吞噬作用增進(jìn)劑能解決上述任務(wù)，它含有從靈芝(GanodermaLucidum)子實(shí)體傘狀部分提取的物質(zhì)作為主要成分。
吞噬細(xì)胞一般可以大致分為多核白血球系的小噬細(xì)胞;和組織細(xì)胞、單核細(xì)胞、肝臟星形細(xì)胞系等的巨噬細(xì)胞兩大類。小噬細(xì)胞主要吞噬細(xì)菌;而巨噬細(xì)胞則將細(xì)菌以外的其它異物、膠質(zhì)、脂肪、蛋白質(zhì)、細(xì)胞及組織的壞死物、白血球、紅血球、色素等吞噬并消化。
本發(fā)明人對提高這些吞噬細(xì)胞的吞噬作用的藥劑進(jìn)行了各種研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，含有靈芝、特別是其傘狀部分的提取物的藥劑能有效地增進(jìn)吞噬作用，從而完成了本發(fā)明。
對吞噬作用的評價(jià)須從(1)吞噬細(xì)胞的動(dòng)員，(2)捕食狀態(tài)，(3)吞噬細(xì)胞內(nèi)異物的變化(殺菌、消化等)三個(gè)方面綜合進(jìn)行。本發(fā)明人，按下述試驗(yàn)例中所述，使用白金微粒子對活體內(nèi)吞噬細(xì)胞的吞噬作用、特別是捕食狀態(tài)進(jìn)行測試，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，將含有靈芝提取物的藥劑在一定期間內(nèi)對動(dòng)物體持續(xù)給藥時(shí)，動(dòng)物的組織細(xì)胞、單核細(xì)胞及中性白細(xì)胞的吞噬作用均有明顯提高。另外，吞噬細(xì)胞內(nèi)的異物，如白金微粒子的場合，由于不能被吞噬細(xì)胞消化而蓄積在胸腺內(nèi)的狀況也已證實(shí)。
本發(fā)明的吞噬作用增進(jìn)劑的藥劑形式?jīng)]有特別的限制，內(nèi)服劑可以有粉劑、膠囊劑、液劑等，外用劑可以有液劑、軟膏劑等，此外還有注射劑。以內(nèi)服劑的形式用于人體時(shí)，從靈芝傘狀部分提取的干燥粉末，以每日用藥2-3次、每次給藥量7.0-35.0mg/kg體重為宜。
此外，本發(fā)明的吞噬作用增進(jìn)劑，除了靈芝提取成分外，根據(jù)不同的劑型，還可以含有維生素C、維生素B12、維生素E、維生素K、葉酸或者賦形劑、甜味劑、穩(wěn)定劑等。
本發(fā)明的吞噬作用增進(jìn)劑的制造方法亦沒有特殊限定，例如，可以采用常規(guī)的方法，將靈芝的傘狀部分粉碎，用熱水法提取，再將提取液噴霧干燥，制成粉末。
另外，本發(fā)明的吞噬作用增進(jìn)劑廣泛適用于多核白血球(中性白細(xì)胞、嗜酸性白細(xì)胞)、單核細(xì)胞、組織細(xì)胞、肝臟星形細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、淋巴節(jié)的網(wǎng)狀細(xì)胞等具有吞噬異物作用的細(xì)胞。
下面列舉實(shí)施例及試驗(yàn)例來進(jìn)一步詳細(xì)說明本發(fā)明，不過，下面的實(shí)施例和試驗(yàn)例不是對本發(fā)明的限定，在不超出上、下文所述的范圍內(nèi)所做的變更，均包含在本發(fā)明的技術(shù)范圍內(nèi)。
實(shí)施例制劑例(液劑制造例)從靈芝子實(shí)體上除去柱狀部分，將剩下的傘狀部分粉碎，用熱水法最高濃度地提取達(dá)幾小時(shí)，所得到的提取液制成干燥粉末，稱為純末，再將純末用蒸餾水溶解，制成含1%(重量)純末的液劑，作為注射劑或內(nèi)服劑供下述試驗(yàn)使用。
試驗(yàn)例1(腹腔內(nèi)組織細(xì)胞的吞噬作用試驗(yàn))(1)供試驗(yàn)用的動(dòng)物用Sprague-Dawley系的大鼠作為被試驗(yàn)動(dòng)物，15-17周齡的雌性和雄性10只作為一組，雌鼠體重為180-200g，雄鼠體重為290-310g。
(2)試驗(yàn)方法將上述試驗(yàn)例中制得的液劑(含1%重量靈芝提取物粉末)按每日一次1.5ml對各被試驗(yàn)動(dòng)物給藥，把它們作為本發(fā)明組。另外，按每日一次1.5ml生理食鹽水(胃內(nèi)給藥時(shí)用自來水)給予對照組。給藥部位及方法(a)皮下給藥背中央部位皮下注射;(b)胃內(nèi)給藥使用大鼠胃管引針給藥;(c)腹腔內(nèi)給藥使用注射器腹腔內(nèi)注射。
給藥時(shí)間分別設(shè)為1周組、2周組、3周組、4周組。對1周組進(jìn)行試驗(yàn)的場合，將靈芝液劑(用于本發(fā)明組)和生理食鹽水(用于對照組)連續(xù)給藥5天，停止2天，然后連續(xù)3天腹腔內(nèi)注射生理食鹽水，雌鼠10ml，雄鼠15ml。最后一天(第3天)注射的生理食鹽水里摻有白金微粒子。其它的組也是一樣，例如4周組，給藥5天，停止2天，如此重復(fù)4次，然后與1周組同樣注射3天生理食鹽水。在最后一天對各試驗(yàn)組都用摻有白金微粒子的生理鹽水進(jìn)行注射，經(jīng)過30-50分鐘后，進(jìn)行腹腔液采樣。
采集的腹腔液經(jīng)過離心分離后，除去上層澄清液，將沉淀的腹腔內(nèi)組織細(xì)胞放在載玻片上，滴入一滴亞甲藍(lán)進(jìn)行活體染色，然后用相位差顯微鏡(400倍)檢查，對隨機(jī)取樣的100個(gè)組織細(xì)胞，按照

圖1中所示的標(biāo)準(zhǔn)測定其吞噬白金微粒子的程度。結(jié)果示于表1-2中。
＊評定標(biāo)準(zhǔn)參照圖1＊＊測定每一個(gè)個(gè)體的100個(gè)組織細(xì)胞的分布，算出一組10只的平均值。
＊評定標(biāo)準(zhǔn)參照圖1＊＊對每一個(gè)個(gè)體測定100個(gè)組織細(xì)胞的分布，算出一組10只的平均值。
由表1和表2可以看出，使用了本發(fā)明的液劑給藥的本發(fā)明組，無論性別、給藥部位、給藥時(shí)間長短，由細(xì)胞質(zhì)內(nèi)吞入的白金微粒子數(shù)量所表示的吞噬作用均比對照組有所增加。從給藥部位來看，腹腔給藥后的吞噬開始時(shí)間比皮下及胃內(nèi)給藥稍稍早一點(diǎn)。
試驗(yàn)例2(單核細(xì)胞和中性白細(xì)胞的吞噬作用試驗(yàn))(1)供試驗(yàn)的動(dòng)物及試驗(yàn)方法供試驗(yàn)的動(dòng)物選用試驗(yàn)例1中4周組里投用白金微粒子時(shí)體重最重的個(gè)體。在試驗(yàn)例1中進(jìn)行腹腔液采樣后，用“戊巴比妥鈉”(大日本制藥株式會(huì)社生產(chǎn))全身麻醉后，用含4%枸櫞酸鈉的注射器作心臟采血。即，剃掉左胸部體毛，從第5、6肋間切開，露出跳動(dòng)著的心臟，從右心室采血。采集的血液經(jīng)離心分離，去除血清，取出紅血球?qū)又系陌籽?，放入盛有泰羅德溶液的表皿中，再加入白金微粒子懸浮液，用毛細(xì)管吸移管進(jìn)行混合，將其采集到6根毛細(xì)管吸移管中，用火焰封閉吸移管的頂端，在37℃下培養(yǎng)。15、30、60和90分鐘后，切開頂端，將其涂在載玻片上，干燥，用甲醇固定后進(jìn)行吉姆薩氏染色，再利用顯微鏡隨機(jī)地選取單核細(xì)胞和中性白細(xì)胞各100個(gè)，按圖2和圖3所示的評定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評價(jià)。另外，吞噬作用是依據(jù)吞噬白金微粒子數(shù)量多的細(xì)胞的個(gè)數(shù)來進(jìn)行評價(jià)的。其結(jié)果示于表3和表4中。不過，把大鼠的白血球放入泰羅德溶液中與白金微粒子混合后培養(yǎng)，必然出現(xiàn)一種非吞噬性的捕食現(xiàn)象(一)，在評定時(shí)將其排除在外。
由表3和表4可以看出，用靈芝提取物給藥的本發(fā)明組，其單核細(xì)胞和中性白細(xì)胞的吞噬率都比對照組高。并且從不同的培養(yǎng)時(shí)間來看，本發(fā)明組的吞噬率上升迅速，吞噬細(xì)胞的動(dòng)員也因靈芝提取物給藥而顯得活躍。
從以上試驗(yàn)結(jié)果可知，由于靈芝提取物的用藥，吞噬細(xì)胞的動(dòng)員以及吞噬異物的功能都變得活躍了。
以上描述了本發(fā)明的構(gòu)成。采用本發(fā)明，可以提供促使中性白細(xì)胞、單核細(xì)胞、組織細(xì)胞等吞噬細(xì)胞的動(dòng)員和吞噬異物作用活性化、提高吞噬能力的吞噬作用增進(jìn)劑。
附圖的簡要說明圖1所示為試驗(yàn)例1中的腹腔內(nèi)組織細(xì)胞吞噬率的評定標(biāo)準(zhǔn)。
圖2所示為試驗(yàn)例2中的單核細(xì)胞的吞噬率的評定標(biāo)準(zhǔn)。
圖3所示為試驗(yàn)例2中的中性白細(xì)胞的吞噬率的評定標(biāo)準(zhǔn)。
權(quán)利要求
1.吞噬細(xì)胞的吞噬作用增進(jìn)劑，其特征是含有靈芝(GanodermaLucidum)子實(shí)體傘狀部分的提取物。
全文摘要
本發(fā)明是含有靈芝(Ganoderma Lucidum)子實(shí)體傘狀部分提取物的吞噬細(xì)胞的吞噬作用增進(jìn)劑。它具有促進(jìn)中性白細(xì)胞、單核細(xì)胞、組織細(xì)胞等吞噬細(xì)胞的動(dòng)員和吞噬異物作用活性化，提高吞噬作用的效果。
文檔編號A61P31/04GK1085447SQ9310351
公開日1994年4月20日 申請日期1993年3月31日 優(yōu)先權(quán)日1992年10月15日
發(fā)明者藤原弘, 澤井健 申請人:東洋制藥株式會(huì)社