專利名稱：羥基膽固醇類琥珀酸單脂及其鹽的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種具有下述結(jié)構(gòu)通式(Ⅰ)的羥基膽固醇類琥珀酸單酯及其鹽
其中甾體母環(huán)的C4，C5可為單鍵或雙鍵;C6與O的鍵可為α或β;R為OH，但當C4，C5為雙鍵時R不存在;R為H或-COCH2CH2COOX;X為H或堿金屬。堿金屬為鈉、鉀等，優(yōu)先采用鈉。
癌癥是嚴重威脅人類健康的一類疾病。目前用于治療癌癥的主要手段是化學(xué)療法。但現(xiàn)在臨床應(yīng)用的化療藥物絕大多數(shù)都有使患者骨髓抑制、白細胞下降、惡心嘔吐等副作用。因此在化療過程中需同時監(jiān)測患者的白細胞數(shù)，如下降至一定程度，即使療程未結(jié)束，化療也只能被迫中止。也正因為如此，尋找副作用小的抗癌藥物亦成為新藥研究的一項重要課題。
羥基膽固醇類化合物具有抗癌活性的發(fā)現(xiàn)始于七十年代，是在從中藥僵蠶中分離出7β-羥基膽固醇(Ⅱ)經(jīng)體外試驗表明其具有抗癌活性。(K.P.Cheng et al，J.Chem.Research(M)1977，2501～2509，H.Nagano et al，ibid，1977，2519～2527)。在此基礎(chǔ)上本發(fā)明人合成了7β-羥基膽固醇雙琥珀酸單酯鈉(Ⅲ)。
7β-羥基膽固醇雖具有選擇性的細胞毒作用，但因其水溶性很差，在動物體內(nèi)試驗未能顯示抗癌活性。盡管7β-羥基膽固醇雙琥珀酸單酯鈉水溶性有所改善，體外、體內(nèi)試驗均有抗癌活性，但其水溶性仍不夠大(室溫下只有0.2%)，且體內(nèi)試驗對腹水型動物模型有效，對實體型動物模型效果不穩(wěn)定。
本發(fā)明的目的是提供一種羥基膽固醇類琥珀酸單酯及其鹽，在體外試驗及動物體內(nèi)試驗均比現(xiàn)有結(jié)構(gòu)類似的化合物具有更強的抗病活性，同時還有在動物體內(nèi)試驗不降低其白細胞的優(yōu)點和免疫增強作用。
本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的羥基膽固醇類琥珀酸單酯是采用相應(yīng)的羥基膽固醇類化合物，與過量琥珀酸酐在吡啶及惰性溶劑中，回流反應(yīng)制得。惰性溶劑采用甲苯、苯、二甲苯、乙苯等。優(yōu)先采用甲苯。
羥基膽固醇類琥珀酸單酯鹽是采用上述單酯在無水乙醇中，與等當量的乙醇堿金屬鹽的乙醇溶液反應(yīng)制得，乙醇鹽優(yōu)先采用乙醇鈉。
上述反應(yīng)中的羥基膽固醇類化合物采用膽甾烷-3β，5α、6β-三醇、膽甾烷-3β，5α，6α-三醇、膽甾-4-烯-3β，6β-二醇、膽甾-4-烯-3β，6α-二醇。
利用式(Ⅰ)結(jié)構(gòu)的化合物與至少一種藥物上可接受的賦形劑、稀釋劑或載體制得的藥物組合物可用于治療癌癥。
以下結(jié)合實施方式列舉本發(fā)明的典型化合物。
化合物1 膽甾烷-3β，5α，6α-三醇3，6-雙琥珀酸單酯制備過程如下將2.0g(4.76毫摩爾)膽甾烷-3β，5α，6α-三醇和3.0g(30毫摩爾)琥珀酸酐加入10毫升吡啶與20毫升甲苯的混合液中，回流十小時，減壓濃縮至干，加入碎冰塊，放置、抽濾、水洗，在不超過100℃下烘干，將產(chǎn)物用硅膠柱析純化，得1.4g化合物1。性狀為白色結(jié)晶體，收率45%，熔點184-185℃。
元素分析(C35H56O9)計算值(%) C:67.71 H:9.09測得值(%) C:67.52 H:9.14紅外光譜(cm-1) 1700-1740(
C＝O)化合物2 膽甾烷-3β，5α，6α-三醇3，6-雙琥珀酸單酯二鈉鹽制備過程如下將1.857g(3.00毫摩爾)膽甾烷-3β，5α，6α-三醇3，6雙琥珀酸單酯溶于30毫升無水乙醇，加入4.00毫升 1.500M乙醇鈉(6.00毫摩爾)的乙醇溶液，攪拌、過濾，以乙醇洗滌，得化合物2，性狀為白色無定形粉末，熔點＞300°，收率82.9%。本品水溶液的PH值為7.4。
紅外光譜(cm-1) 1700(
C＝O);
1550，1350-1410(COO-1)化合物3 膽甾-4-烯-3β，6β-二醇3，6-雙琥珀酸單酯制備過程如下將2.0g(4.975毫摩爾)膽甾-4-烯-3β，6β-二醇和3.0g(30毫摩爾)琥珀酸酐加入到10毫升吡啶和20毫升甲苯的混合液中。其余操作與化合物1制備過程相同。得1.2g化合物3，性狀為白色結(jié)晶體，收率為40%。熔點228-229℃。
元素分析(C35H54O8)計算值(%) C:67.71 H:9.09測得值(%) C:67.52 H:9.14紅外光譜(cm-1) 1700-1740(
C＝O)化合物4 膽甾-4-烯-3β，6β-二醇3，6-雙琥珀酸單酯二鈉鹽制備過程如下將1.857g(3.075毫摩爾)膽甾-4-烯-3β，6β-二醇3，6雙琥珀酸單酯溶于30毫升無水乙醇，加入4.10毫升 1.500M乙醇鈉(6.15毫摩爾)的乙醇溶液，其余操作與化合物2的制備過程相同。性狀為白色粉末狀固體，熔點＞300°，收率91.0%。本品水溶液的PH值為7.6。
紅外光譜(cm-1) 1700(
C＝O);
1550，1400-1440(COO-1)從下列實驗數(shù)據(jù)中可清楚地表明本發(fā)明化合物具有很好的抗癌活性和對白細胞的影響。
L1210細胞體外增殖抑制試驗樣品用磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)稀釋后，將各濃度組加入96孔培養(yǎng)板各孔內(nèi)，對照組加相應(yīng)稀釋液。每樣品設(shè)6檔濃度，復(fù)管。取對數(shù)生長期的L1210細胞新鮮培養(yǎng)液稀釋后加入各孔內(nèi)，置于37℃，5%二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)。48小時后計數(shù)各孔內(nèi)存活細胞數(shù)，與對照組比較，計算出各濃度組的百分抑制率，然后計算出各種樣品的直線回歸方程，進而求出各樣品的IC50(抑制50%細胞增殖所需的樣品濃度)。結(jié)果如下樣品名稱 回歸 方程 相關(guān)系數(shù) IC50(γ) (μg/ml)化合物1
=-86.4870+113.0618 lgx 0.9617 16.11化合物2
=-23.7348+92.1204 lgx 0.9659 6.32式(III)
=-106.9062+106.0791 lgx 0.9843 30.14化合物對淋巴白血病P-388癌細胞的抗癌活性試驗體外抗癌活性采用淋巴白血病P-388癌細胞以排染法進行，先將P-388細胞傳代培養(yǎng)于RPMI1640培養(yǎng)液中，內(nèi)含10%小牛血清及青霉素和鏈霉素。實驗時取對數(shù)生長期的癌細胞接種于40孔微量培養(yǎng)板內(nèi)，同時加入不同濃度的樣品的生理食鹽溶液。對照孔加入生理食鹽溶液，在5%二氧化碳培養(yǎng)箱中于37°培養(yǎng)24小時，用排染法計數(shù)活細胞，與對照組相比計算細胞生長抑制百分率。結(jié)果如下不同濃度的抑制率(%)樣品名稱100μg/ml 10μg/ml 1μg/ml化合物2 100 100 30化合物4 100 43 14式(III)化合物 100 100 -體內(nèi)抗癌活性以小鼠肝癌實體瘤作為動物模型，接種后次日開始腹腔給藥，連續(xù)給藥9天，每天一次。第十天將動物處死，稱取瘤重，與對照組(腹腔注射生理鹽水)對照，計算其抑制率。結(jié)果如下
樣品名稱 劑量 給藥途徑及次數(shù) 抑制率(%)化合物2 50mg/kg ip×9 64.912.5mg/kg ip×9 58.0化合物4 12.5mg/kg ip×9 59.03mg/kg ip×9 51.7用小鼠試驗其對白細胞的影響，腹腔給藥連續(xù)4天。第五天取血化驗。
樣品名稱 劑量 給藥途徑 白細胞數(shù)及次數(shù) (×106個/ml)化合物2 20mg/kg ip×4 9.13±2.0110mg/kg ip×4 8.67±1.74化合物4 20mg/kg ip×4 10.00±1.6310mg/kg ip×4 9.33±1.87生理鹽水 10mg/kg ip×4 8.86±1.17(對照組)水中溶解度本發(fā)明化合物的溶解度值為30毫克/毫升以上。
權(quán)利要求
1.一種具有下述結(jié)構(gòu)通式(Ⅰ)的化合物-羥基膽固醇類琥珀酸單酯及其鹽
其中甾體母環(huán)的C4、C5可為單鍵或雙鍵；C6與O的鍵可為α或β；R為OH，但當C4、C5為雙鍵時R不存在；R′為H或-COCH2CH2COOX；X為H或堿金屬。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征是堿金屬采用鈉、鉀。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征是堿金屬為鈉。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物的用途，其特征是采用式(Ⅰ)化合物與至少一種藥物上可接受的賦形劑、稀釋劑或載體制得的藥物可用于治療癌癥。
全文摘要
本發(fā)明涉及下述結(jié)構(gòu)通式的化合物其中甾體母環(huán)的C
文檔編號A61K31/575GK1094410SQ9311108
公開日1994年11月2日 申請日期1993年4月27日 優(yōu)先權(quán)日1993年4月27日
發(fā)明者容士宏, 張新華 申請人:沈陽藥學(xué)院