專利名稱：藥用組合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及藥用化合物及其制備和用途。
先有技術公開了某些吡喃并喹啉，例如下述文獻所述的4H-吡喃并[3，2-h]喹啉Z.H.Khalil et al.Bull.Chem.Soc.Jpn.，64，668-670(1991)，A.G.A.Elagamey et al.Collection Czechoslovak Chem.Commun.，53(7)，1534-8(1988)，F(xiàn).M.A.El-Taweel et al.Pharmazie，45(9)，671-3(1990)，and K.D.Paull et al.Cancer Res.，52(14)，3892-3900(1992).
我們發(fā)現(xiàn)，下述通式的化合物及其鹽可用作藥物
R1是苯基或選自噻吩基、吡啶基、苯并噻吩基、喹啉基、苯并呋喃基或苯并咪唑基的雜芳基，所述苯基或雜芳基可帶有取代基;或者R1是可被C1-4烷基取代的呋喃基;
R2是氰基、羧基、-COOR4(其中R4是酯基)、-CONR5R6(其中R5和R6各自是氫或C1-4烷基)或R7SO2-(其中R7是C1-4烷基或可被取代的苯基)，R3是-NR8R9，-NHCOR8，-N(COR8)2，-N＝CHOR8(其中R8和R9各自是氫或C1-4烷基)或-NHSO2R10(其中R10是C1-4烷基或可被取代的苯基);或
式中X是C2-4亞烷基;基團
代表與苯并吡喃核稠合的吡啶環(huán)。
我們發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明化合物在治療過度細胞增生或酶釋放起主要作用的免疫性疾病的試驗中具有活性，顯示出其治療效能。
上述式(Ⅰ)化合物是新化合物，但如下定義的式(Ⅰ)化合物除外其中
并且(ⅰ)R′是苯基或在對位上被一個氯、羥基或甲氧基基團取代的苯基，R2是氰基，且R3是-NH2，(ⅱ)R′是苯基或在對位上被一個氯、羥基或甲氧基基團取代的苯基，R2是COOC2H5，且R3是-NH2，或者(ⅲ)R′是苯基，R2是氰基，且R3是-NHCOCH3或-N＝CHOC2H5。
排除在新化合物之外的具體化合物的一個例子是2-氨基-4-苯基-4H-吡喃并[3，2-h]喹啉-3-甲腈。
應當明白，本發(fā)明化合物可以下述四種形式存在
優(yōu)選的化合物是用結構式(Ⅱ)、(Ⅲ)和(Ⅳ)表示的化合物，特別優(yōu)選式(Ⅱ)和(Ⅳ)表示的化合物。結構式(Ⅱ)表示的新化合物中有某些化合物不屬于新化合物，詳見上文。
在上述式(Ⅰ)中，C1-4烷基包括例如甲基、乙基、丙基和丁基，優(yōu)選甲基或乙基。
取代的苯基基團是被一個或多個、最好是一個或兩個取代基取代的苯基，所述取代基選自例如鹵素、三氟甲基、C1-4烷氧基、羥基、硝基、C1-4烷基、C1-4烷硫基、羥基-C1-4烷基、羥基-C1-4烷氧基、三氟甲氧基、羧基、COOR11(R11是酯基)、-CONR12R13或-NR12R13(其中R12和R13各自是羥基或C1-4烷基)。當取代基為-COOR11時，R11可以是例如芳基-CH2-，如芐基，最好是C1-4烷基，尤其是甲基或乙基。取代的萘基和雜芳基可類似地被取代。此外，取代的苯基包括相鄰原子被-O(CH2)mO-(其中m是1，2或3)取代的苯基。
當R′是雜芳基時，它最好是α-噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-苯并噻吩基、3-苯并噻吩基、2-喹啉基、3-喹啉基、2-苯并呋喃基、3-苯并呋喃基、2-苯并咪唑基、2-呋喃基或3-呋喃基。在1位或2位上連有萘基基團。所述基團可在任何空位上被取代，但最好是不被取代。
優(yōu)選的R′是苯基或取代的苯基，最好是被單個取代基取代的苯基，尤其是被硝基、三氟甲基、C1-4烷氧基、特別是甲氧基取代的苯基?；蛘呤潜?COOR11取代的苯基，其中R11是C1-4烷基，特別是甲基。一組優(yōu)選的化合物是其中R1是在間位上被一個取代基取代的苯基的化合物，所述取代基是任何上述的就苯基取代基所列的取代基。
基團R2最好是氰基。當R2是-COOR4時，R4可以是任何酯基，例如芳基-CH2-如芐基，最好是C1-4烷基，尤其是甲基或乙基。
基團R3最好是-NR8R9，尤其是-NH2。
優(yōu)選的化合物是那些R1是可被取代的苯基、R2是氰基并且R3是-NH2的化合物。
一組優(yōu)選的上述式Ⅱ化合物是其中R′是在間位上被一個取代基取代的苯基，R2是氰基并且R3是-NH2。
還有一組優(yōu)選的式Ⅱ化合物，其中R1是被硝基、三氟甲基、甲氧基或-CO2Me取代的苯基，R2是氰基并且R3是-NH2。
應當理解，例如當R2是-COOH時，有可能形成鹽。它們可自任何公知的堿衍生物而來。堿鹽的例子是那些從氫氧化銨和堿金屬氫氧化物和堿土金屬氫氧化物、碳酸鹽和碳酸氫鹽衍生物而來的鹽，以及從脂肪胺和芳香胺、脂肪二胺和羥烷基二胺衍生而來的鹽。在制備上述鹽時特別有用的堿包括氫氧化銨、碳酸鉀、碳酸氫鈉、氫氧化鋰、氫氧化鈣、甲胺、二乙胺、乙二胺、環(huán)己胺和乙醇胺。特別優(yōu)選鉀鹽、鈉鹽和鋰鹽的形式。
應當明白，吡啶核還提供了制備酸加成鹽的機會。酸加成鹽可由適當?shù)乃嶂频?，例如無機酸如鹽酸、氫溴酸、硝酸、硫酸或磷酸，或有機酸如有機羧酸象乙醇馬來酸、富馬酸、馬來酸、酒石酸、檸檬酸、水楊酸或鄰乙酰氧基苯甲酸，或有機磺酸象甲磺酸、2-羥基乙磺酸、對甲苯磺酸或萘二磺酸。
除藥學上可接受的鹽之外，本發(fā)明還包括其它鹽。它們可用作化合物純化中的中間產(chǎn)物，或可用來制備其它如藥學上可接受的酸加成鹽，或者可用于鑒定、表征或純化。
應當明白，本發(fā)明化合物含有能產(chǎn)生對映體的不對稱碳原子。制備的化合物通常是外消旋體，可方便地直接使用，但如果需要，亦可用常規(guī)技術分離出單獨的對映體。上述外消旋體和單獨的對映體構成了本發(fā)明的一部分。
本發(fā)明還包括上述式(Ⅰ)化合物的制備方法，它包括(1)將式(Ⅵ)化合物
反應，得到R3是-NH2的式(Ⅰ)化合物;或者(2)將式(Ⅷ)化合物
轉(zhuǎn)化為R3是-NR8R9，NHCOR8，-N(COR8)2，-N＝CHOR8，-NHSO2R10或
的式(Ⅰ)化合物。
作為方法之一的(1)，該反應最好于0-100℃并且在有機溶劑(例如乙醇)存在下進行。式(Ⅵ)化合物是已知的或可按已知方法容易地合成。
式(Ⅶ)反應物可通過使適當?shù)碾鍾2CH2CN與醛R′CHO反應而制得。反應最好于20-100℃并且在有機堿(例如哌啶)催化劑和有機溶劑(例如乙醇)存在下進行。反應物腈和醛是已知的化合物或是可按本領域公知的方法制備的化合物。
至于方法(2)，游離烯胺可通過反應(1)制得，隨后轉(zhuǎn)化為R取其它值的化合物。例如游離氨基可用式R8X或R9X(X＝鹵素)的反應物烷基化，得到一或二烷基化的產(chǎn)物。類似地，氨基也可用式R8COX或(R8CO)2O?；瘎；?，得到R3是-NHCOR8或-N(COR8)2的化合物。R3是-N＝CHOR8的化合物通過與適當?shù)脑姿崛轷シ磻频茫琑3是-NHSO2R10的化合物通過與磺酰氨R10SO2X反應制得。
如上所述，該化合物具有藥學活性。它們對于細胞類具有抗增生效應，從而表明可用來治療過度細胞增生或酶釋放是主要病源的疾病。
例如，本發(fā)明化合物抑制3T3纖維細胞的自然增生，其IC50濃度低于10μM。
此外，該化合物在P.Lacombe等人所述的試驗(FEBS，3048，191，227-230)中通過抑制伴刀豆球蛋白A引起的T細胞增生而顯示出對免疫應答的改善。
該化合物還抑制NS-1鼠B-淋巴瘤系的細胞增生和佛波醇酯激發(fā)的血漿酶原活化劑在牛視網(wǎng)膜毛細內(nèi)皮細胞中的合成。
在K.Deshmukh-Phadke，M.Lawrence和S.Nanda所述的試驗(Biochem.Biophys.Res.Commun.，1978，85，pp.490-496)中還觀察到對巨噬細胞調(diào)節(jié)的中介物質(zhì)引起的中性蛋白酶釋放的抑制作用。
這些性質(zhì)表明，本發(fā)明化合物能有效地治療很寬范圍的疾病，例如類風濕性關節(jié)炎、動脈粥樣硬化、肝硬變和癌癥;并可用來治療自動免疫疾病，例如治療全身性狼瘡;和用來預防移植物排斥。它們也適用于骨關節(jié)炎和糖尿病并發(fā)癥。
此外，本發(fā)明化合物顯示出對血管平滑肌細胞增生的抑制作用，這點已通過使用取自兔子主動脈的、經(jīng)培養(yǎng)的平滑細胞而證實，增生的測定是測定DNA的合成。細胞是按照Ross所述的移出方法(J.of Cell Bio.50172(1971))獲得的。將細胞置于96穴微量滴定板上5天時間。培養(yǎng)物融合并停止生長。然后將細胞轉(zhuǎn)移到Dulbecco′s改性Eagle′s培養(yǎng)基(DMEM)中，該培養(yǎng)基含0.5-2%貧血小板血漿、2mM L-谷氨酰胺、100U/ml素霉素、100μg/ml鏈霉素、1μC/ml3H-胸苷、20ng/ml血小板衍生的生長因子和不同濃度的化合物。化合物的常備溶液在二甲亞砜中制備，然后在上述評定介質(zhì)中稀釋至適當濃度(0.01-10μg/ml)。然后于37℃在5%CO2/95%空氣的條件下將細胞培養(yǎng)24小時。24小時后，在甲醇中將細胞固定?；烊隓NA的3H-胸苷隨后用閃爍計數(shù)器測定，測定方法參見Bonin等人，Exp.Cell Res.181475-482(1989)。
本發(fā)明化合物對平滑肌細胞的抑制還可通過測定其對指數(shù)生長細胞的效應而證實。將取自兔子主動脈的平滑肌細胞置于12穴組織培養(yǎng)板上在DMEM中接種。該DMEM中含有10%胎牛血清、2mM L-谷氨酰胺、100μ/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素。24小時后，將細胞附好，將培養(yǎng)基換成含2%貧血小板血漿、2mM L-谷氨酰胺、100μ/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素、40ng/ml血小板衍生的生長因子和指定濃度化合物的DMEM。讓細胞生長4天，用胰蛋白酶處理細胞各培養(yǎng)物的細胞數(shù)用ZM-Coulter計數(shù)器進行計數(shù)測定。
上述試驗中的活性表明，本發(fā)明化合物能有效地治療再狹窄，其特征為由外傷引起的平滑肌的胞遷移和增生。
因此，本發(fā)明還包括一種藥用組合物，該組合物中含有藥學上可接受的稀釋劑或載體以及式(Ⅰ)化合物或其藥學上可接受的鹽。
該化合物可以多種途徑給藥，例如口服或直腸給藥，局部或腸道外給藥例如注射，通常以藥用組合物的形式使用。所述組合物構成了本發(fā)明的一部分，可按制藥行業(yè)公知的方式制得，通常包含至少一種活性化合物以及藥學上可接受的稀釋劑或載體。在制備本發(fā)明組合物時，活性成分通常與載體混合，或用載體稀釋，和/或用例如膠囊、小藥囊、紙或其它包容物形式的載體包裹。當載體起稀釋劑作用時，它可以是固體、半固體或液體材料，它起活性成分的載體、賦形劑或介質(zhì)的作用。因此，組合物可以是片劑、錠劑、小藥囊、扁囊劑、酏劑、混懸液、固體或液體介質(zhì)形式，含有例如不超過10%(重量)活性化合物的軟膏、軟和硬明膠囊、栓劑、注射溶劑和混懸液和滅菌粉劑。
適當載體的一些例子是乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯樹膠、磷酸鈣、藻朊酸鹽、黃蓍膠、明膠、糖漿、甲基纖維素、羥基苯甲酸甲酯和丙酯、滑石粉、硬脂酸鎂和礦物油。注射用組合物可按本領域公知的方法制成向病人給藥后能快速、延緩或延遲釋放活性成分的制劑。
當本發(fā)明化合物制成單位劑型時，它最好含5mg-500mg，例如10-200mg?！皢挝粍┬汀笔侵高m于人和動物宿主單位劑量的物理上不連續(xù)的單元。每個單元包含所需的藥用載體和予先計算好能產(chǎn)生期望的治療效果量的活性物質(zhì)。
活性化合物在很寬的劑量范圍內(nèi)都是有效的，例如日劑量通常為0.5-300mg/kg，更常用5-100mg/kg。但是，應當明白，用藥量應由醫(yī)師根據(jù)相應情況包括待治病性、給藥選用的化合物及給藥途徑來確定，因此，上述劑量范圍決無制定本發(fā)明范圍之意。
下列實施例是對本發(fā)明的說明。
實施例1
將丙二腈(7.52g)和3，4-二甲氧基苯甲醛(18.95g)在乙醇(100ml)中的懸浮液攪拌下溫熱至回流溫度。將桔色溶劑移離熱源，從冷凝管上部加哌啶(0.5ml)。劇烈的反應一旦變緩，則再將反應混合物加熱至回流溫度，這樣持續(xù)35分鐘。這時出現(xiàn)大量亮黃色固體。將混合物在冰浴中冷卻10分鐘，濾出黃色固體，用乙醇和乙醚洗滌，于70℃真空干燥，得3，4-二甲氧基亞芐基丙二腈，m.p.137℃。
按類似方法制得下列化合物3-硝基亞芐基丙二腈，m.p.103℃3-甲氧基亞芐基丙二腈，m.p.102℃3-甲酯基亞芐基丙二腈，m.p.125℃3-三氟甲基亞芐基丙二腈，m.p.81℃3-二氯亞芐基丙二腈，m.p.154℃實施例2攪拌下，將哌啶(1.70g)滴加到5-羥基異喹啉(2.90g)和3，4-二甲氧基亞芐基丙二腈(4.28g)的乙醇(11ml)混懸液中。然后將混懸液加熱回流一小時，得紅色溶液。然后讓它冷卻至室溫，有棕色固體析出。將其濾出，用乙醇和乙醚洗滌，于60℃真空干燥，得2-氨基-4-(3，4-二甲氧基苯基)-4H-吡喃并[2，3-f]異喹啉-3-甲腈黃棕色固體，m.p.225-228℃。
按類似方法制得下列化合物2-氨基-4-(3，4-二氯苯基)-4H-吡喃并[2，3-f]異喹啉-3-甲腈，m.p.215-218℃。
2-氨基-4-(3-甲氧基苯基)-4H-吡喃并[2，3-f]異喹啉-3-甲腈，m.p.223-224℃。
2-氨基-4-(3-硝基苯基)-4H-吡喃并[2，3-f]異喹啉-3-甲腈，m.p.239-243℃。
2-氨基-4-(3-三氟甲基苯基)-4H-吡喃并[2，3-f]異喹啉-3-甲腈，m.p.117-118℃。
3-(2-氨基-3-氰基-4H-吡喃并[2，3-f]異喹啉-4-基)苯甲酸甲酯，m.p.229-230℃。
實施例3攪拌下，用哌啶(1.70g)處理8-羥基喹啉(2.90g)和3，4-二甲氧基亞芐基丙二腈(4.28g)的乙醇(15ml)懸浮液中，室溫下攪拌1小時。然后將混合物加熱回流90分鐘。然后讓此紅色溶液冷卻至室溫過夜。濾出沉淀的桔色固體，用乙醇和乙醚洗滌，于60℃真空干燥，得2-氨基-4-(3，4-二甲氧基苯基)-4H-吡喃并[3，2-h]喹啉-3-甲腈黃褐色固體，m.p.118-120℃。
按類似方法制得了下列化合物2-氨基-4-(3，4-二氯苯基)-4H-吡喃并[3，2-h]喹啉-3-甲腈，m.p.218-222℃。
2-氨基-4-(3-甲氧基苯基)-4H-吡喃并[3，2-h]喹啉-3-甲腈，m.p.190-192℃。
2-氨基-4-(3-硝基苯基)-4H-吡喃并[3，2-h]喹啉-3-甲腈，m.p.198-200℃。
2-氨基-4-(3-三氟甲基苯基)-4H-吡喃并[3，2-h]喹啉-3-甲腈，m.p.228-231℃。
3-(2-氨基-3-氰基-4H-吡喃并[3，2-h]喹啉-4-基)苯甲酸甲酯，m.p.208-210℃。
實施例4攪拌下，用哌啶(410mg)處理5-羥基喹啉(703mg)和3-三氟甲基亞芐基丙二腈(1.07g)在乙醇(5ml)中的懸浮液。將此紅色溶液于室溫攪拌過夜，然后真空濃縮。殘留物經(jīng)合成硅酸鎂層析，以二氯甲烷為洗脫劑，得188mg 2-氨基-4-(3-三氟甲基)-4H-吡喃并[2，3-f]喹啉-3-甲腈乳白色固體，m.p.167-168℃。
按類似方法制得了下列化合物2-氨基-4-(3，4-二氟苯基)-4H-吡喃并[2，3-f]喹啉-3-甲腈，m.p.223-228℃。
2-氨基-4-(3-甲氧基苯基)-4H-吡喃并[2，3-f]喹啉-3-甲腈，m.p.218-222℃。
2-氨基-4-(3-硝基苯基)-4H-吡喃并[2，3-f]喹啉-3-甲腈，m.p.200-202℃。
2-氨基-4-(3，4-二甲氧基苯基)-4H-吡喃并[2，3-f]喹啉-3-甲腈，m.p.160-163℃。
3-(2-氨基-3-氰基-4H-吡喃并[2，3-f]喹啉-4-基)苯甲酸甲酯，m.p.203-206℃。
實施例5軟明膠膠囊每一粒軟明膠膠囊包含活性成分 150mg花生油 150mg
混合在一起后，用適當?shù)脑O備將混合物裝入軟明膠膠囊。
實施例6硬明膠膠囊每一粒膠囊包含活性成分 50mgPEG4000 250mg將PEG4000烷化后與活性成分混合，在熔化狀態(tài)下裝入膠囊殼中，自然冷卻。
實施例7片劑每片含10mg活性成分的片劑制備如下活性成分 10mg淀粉 160mg微晶纖維素 100mg聚乙烯吡咯烷酮 13mg(在水中的10%溶液)羧甲基淀粉鈉 14mg硬脂酸鎂 3mg共計 300mg
將活性成分、淀粉和纖維素充分混合。向所得粉末中混入聚乙烯吡咯烷酮溶液，過篩。將制得的顆粒干燥后再過篩。然后向顆粒中加入羧甲基淀粉鈉和硬脂酸鎂，混合物用壓片機壓成重300mg的片劑。
實施例8用大鼠脾細胞的伴刀豆球蛋白A反應作為本發(fā)明化合物活性的體外評估測定。文獻中已描述了許多伴刀豆球蛋白A反應的測定方法。所用方法類似于P.Lacombe等人(FEBS3048191，227-230)所述的方法。我們在每個培養(yǎng)池中加2×105個細胞，伴刀豆球蛋白A的濃度為1μg/ml。必須加入2-巰基乙醇(2×10M-5)，加入氚化胸苷0.25μCi，6小時后收集細胞。實施例1-4公開的全部化合物均能抑制細胞增生，在本試驗中IC50均低于5μM。
權利要求
1.式(Ⅰ)化合物及其鹽的制備方法
R1是苯基或選自噻吩基、吡啶基、苯并噻吩基、喹啉基、苯并呋喃基或苯并咪唑基的雜芳基，所述苯基或雜芳基可帶有取代基；或者R1是可被C1-4烷基取代的呋喃基；R2是氰基、羧基、-COOR4(其中R4是酯基)、-CONR5R6(其中R5和R6各自是氫或C1-4烷基)或R7SO2-(其中R7是C1-4烷基或可被取代的苯基)，R3是-NR8R9，-NHCOR8，-N(COR8)2，-N=CHOR8(其中R8和R9各自是氫或C1-4烷基)或-NHSO2R10(其中R10是C1-4烷基或可被取代的苯基)；或
式中X是C2-4亞烷基；基團
代表與苯并吡喃核稠合的吡啶環(huán)；但如下定義的式(Ⅰ)化合物除外其中
并且(i)R1是苯基或在對位上被一個氯、羥基或甲氧基基團取代的苯基，R2是氰基，且R3是-NH，(ii)R1是苯基或在對位上被一個氯、羥基或甲氧基基團取代的苯基，R2是COOC2H5，且R3是-NH2，或者(iii)R1是苯基，R2是氰基，且R3是-NHCOCH3或-N=CHOC2H5；它包括(1)將式(Ⅵ)化合物
與式(Ⅶ)化合物
反應，得到R3是-NH2的式(Ⅰ)化合物；或者(2)將式(Ⅷ)化合物
轉(zhuǎn)化為R3是-NR8R9，NHCOR8，-N(COR8)2，-N=CHOR8，-NHSO2R10或
的式(Ⅰ)化合物。
2.按照權利要求1的方法，用來制備下式化合物
3.按照權利要求1的方法，用來制備下式化合物
4.權利要求1-3定義的任一化合物的制備方法，其中R′是可帶有取代基的苯基。
5.權利要求1-4定義的任一化合物的制備方法，其中R2是氰基。
6.權利要求1-5定義的任一化合物的制備方法，其中R3是-NR8R9。
7.權利要求2定義的化合物的制備方法，其中R′是在間位上有一個取代基的苯基，R2是氰基且R3是-NH2。
8.藥用組合物的制備方法，它包括將藥用稀釋劑或載體與式(Ⅰ)化合物或其藥學上可接受的鹽混合，式(Ⅰ)化合物如下
(Ⅰ)R1是苯基或選自噻吩基、吡啶基、苯并噻吩基、喹啉基、苯并呋喃基或苯并咪唑基的雜芳基，所述苯基或雜芳基可帶有取代基;或者R′是可被C1-4烷基取代的呋喃基;R2是氰基、羧基、-COOR4(其中R4是酯基)、-CONR5R6(其中R5和R6各自是氫或C1-4烷基)或R7SO2-(其中R7是C1-4烷基或可被取代的苯基);R3是-NR8R9，-NHCOR8，-N(COR8)2，-N＝CHOR8(其中R8和R9各自是氫或C1-4烷基)或-NHSO2R10(其中R10是C1-4烷基或可被取代的苯基);或
式中X是C2-4亞烷基;基團
代表與苯并吡喃核稠合的吡啶環(huán)。
全文摘要
本發(fā)明公開了式(I)化合物的制備方法和藥學用途，式(I)化合物結構中各取代基定義見說明書。
文檔編號A61P9/10GK1092072SQ93115028
公開日1994年9月14日 申請日期1993年11月17日 優(yōu)先權日1992年11月18日
發(fā)明者C·P·德爾, A·C·威廉斯 申請人:利利工業(yè)公司