專利名稱：殺病毒、殺菌以及殺精子的陰道栓的制作方法
本申請是申請日為1993年12月3日，申請?zhí)枮?8/161,659的申請的繼續(xù)部分。
本發(fā)明屬于殺菌，殺病毒以及殺精子用具的領域。具體地講，本發(fā)明涉及一種殺精子的陰道栓，該陰道栓能非常有效地阻止在異性性交期間性傳染病的傳播。
殺精子劑，例如nonoxynol 9或者oxtoxynol 9其本身已制成栓劑，乳油，泡騰劑形式以及也與各種器械避孕用具相結合在現有技術中廣泛地用于避孕目的?，F有技術中已報道nonoxynol 9具有一定的殺菌作用，并且至少在體外試驗中能夠殺死人體免疫缺陷性病毒(HIV)。但是，在插入陰道的栓劑，乳油，泡騰劑等等中使用nonoxynol 9(或者octoxynol9)以及其他的殺精子劑和殺菌劑并不解決問題，因為這些藥劑具有減少或毀滅陰道的健康細菌群系的趨勢，并且使婦女趨于遭受酵母感染(念珠菌病)。
根據前面所述，本領域始終需要一種在性交之前用于婦女陰道內并且具有較強的避孕效力，甚至更重要的是能作為一種阻止許多性傳染疾病傳播的藥劑的避孕藥。由于在一般的異性愛者群體中HIV病毒的出現和傳播，更進一步增強了對這樣一種避孕和預防藥劑的需求。此外，本領域內需要一種使女性使用者減少感染酵母的可能性的避孕和預防劑。雖然現有技術中已經認識到需要保持或重建健康的陰道內細菌群系，但現有技術解決這一問題的唯一辦法是使用含有嗜酸乳芽孢桿菌菌落的灌洗器或其他類型的陰道插入物。但是這些灌洗器或其他的插入物并不是100％有效，并且既對避孕沒有作用，也不能抵抗在異性性交期間性傳染病的傳播。
本發(fā)明提供了一種不僅有助于保持或重建正常的非致病性陰道內細菌區(qū)系，而且也是避孕藥并且能夠真正保護使用者免于感染性傳染病的陰道栓。
本發(fā)明的一個目的是提供一種陰道栓，該陰道栓能高效率地阻止，實際上所有通過性行為傳染的疾病的傳播并且也可用作為一種避孕藥。
本發(fā)明的另一個目的是提供一種滿足前面所述目的，并且不會使其使用者易于感染酵母的陰道栓。
采用含有下列活性成分的一種陰道栓或其他類型的陰道passary例如乳油，泡騰劑或軟膏可以達到上述或其他目的和優(yōu)點至少一種藥學上可接受的，局部安全的抗菌劑，例如選自于殺藻銨，十六烷基吡啶氯化物，洗必太葡萄糖酸鹽以及碘伏，咪唑烷基脲(imidiazolidinyl urea)以及二唑烷基脲(dia-zolidinyl urea)組的一種藥劑；以及一種微包膠的乳芽孢桿菌細菌的活菌落。
該活的乳芽孢桿菌以微包膠形式存在于栓劑中，它可以保護細菌在栓劑的“貨架期”期間免受抗菌劑的作用。另一方面包封該細菌的包膜或物質是一種由于水分的作用主要在陰道環(huán)境中釋放該細菌的物質。被釋放出來的乳桿菌用于保持或重建陰道壁上的健康的基于乳桿菌的細菌群，并且分泌過氧化氫以及其他的殺菌劑，其能抑制促進感染的非正常區(qū)系狀態(tài)。
本發(fā)明的優(yōu)選實施方案除含有微包膠的乳桿菌外，還含有一種抗菌劑(殺菌劑)組合物，例如至少一種選自于殺藻銨，十六烷基吡啶氯化物，洗必太葡萄糖酸鹽以及碘伏(BE-TADINETM)和附加的咪唑烷基脲(imidiazolidingl urea)和二唑烷基脲(diazolidinyl urea)組的藥劑；并且還含有一種選自于nonoxynol 9或octoxynol 9的殺精子劑，以及進一步含有一種使用溫和酸如硼酸或一種有機酸例如乳酸，檸檬酸或乙酸的緩沖液，以便將栓劑，乳油，泡騰劑或軟膏的pH值以及使用于陰道壁之后的pH值調節(jié)到3.0至5.5的適度酸性pH范圍內。
針對幾種性傳播病原體，包括白色假絲酵母及其相關的酵母種，陰道毛滴蟲，淋病奈瑟氏球菌，梅毒密螺旋體，沙眼衣原體，單純皰疹病毒以及人體免疫缺陷性病毒的體外試驗以及許多例體內試驗，已經證明本發(fā)明的陰道栓對殺滅性傳播病原體特別有效，并且有助于保持或重建陰道內健康的非病毒細菌群，防止陰道炎和酵母感染。本發(fā)明的陰道栓還基本上沒有不利的副作用(例如，燒傷，瘙癢或其他不愉快的感覺)并且在已進行的試驗中一般能為女性使用者和她的配偶所接受。
下文內容將詳細描述本發(fā)明，并且對證明本發(fā)明效果的一些試驗和結果進行了概述。
本發(fā)明提供了一種陰道栓，乳油，泡騰劑或軟膏，包含有一種抗菌劑與存活的微包膠的嗜酸乳桿菌的特定結合物。該細菌用微膠囊包被，以保護該細菌免遭抗菌劑的作用。大體上講，采用陰道用乳膏，泡騰劑或軟膏均可達到本發(fā)明目的，但優(yōu)選的是栓劑形成，并且進一步針對栓劑來描述本明。但是應該明白也可以將本發(fā)明的一般原理體現和結合到上面介紹的乳油，泡騰劑或軟膏中。這些制劑和陰道栓一起通常被稱作為“陰道passary或passaries”。
在本發(fā)明所述栓劑中摻入的抗菌劑(殺菌劑)可以是藥物學上可接受的，本領域內熟知的局部安全的抗菌劑。這樣的例子是陽離子表面活性劑型抗菌劑(殺菌劑)例如殺藻銨，甲基氯化芐乙氧銨，十六烷基吡啶氯化物，以及Cetrimide(混合的烷基三甲基銨溴化物)?；蛘邠Q成殺菌劑如洗必太葡萄糖酸鹽或含碘的殺菌劑，例如碘伏(通常已知的商品名為BE-TADINETM)。根據本發(fā)明，每個陰道栓中含有大約12—3000mg的殺藻銨或甲基氯化芐乙氧銨，優(yōu)選的量是每個陰道栓中大約含有120mg的殺藻銨。關于這一點應認識到，根據本發(fā)明，女性使用者應在性交之前幾分鐘到幾小時在陰道內使用一個陰道栓。優(yōu)選的陰道栓的總重量是約1.2克(1200mg)，但是，不應該僅限于此量，因為陰道栓的總重量和體積不僅取決于活性成分的量而且也取決于陰道栓中含有的非活性成分(填充劑，藥物賦形劑)的量。在下面描述中，在描述一種成分或組分的優(yōu)選量時，應該明白是指在每個陰道栓中的量，在優(yōu)選的實施方案中一個陰道栓的量大約是1.2克。
根據本發(fā)明，每個陰道栓中使用的十六烷基吡啶氯化物的量為25—400mg范圍內，優(yōu)選的量50—1000mg范圍。洗必太葡萄糖酸鹽的量為10—2000mg范圍，優(yōu)選的范圍為25—1200mg。所使用的碘伏(BETADINETM)的量為25—5000mg，優(yōu)選的量為每個陰道栓約120mg。在優(yōu)選的實施方案中，以上面所述量選擇使用上面介紹的抗菌劑之一，但也可以使用以相等量組合而成的這些藥劑的結合物。除了作為殺菌劑外，陽離子表面活性劑例如殺藻銨也具有殺精子作用。
在本發(fā)明還可以使用的殺菌劑是咪唑烷基脲(imidiazo-lidinyl urea)，其用量為每個陰道栓10—1000mg的范圍，優(yōu)選的量約為100mg。
每個栓劑也可以使用10—1000mg的二唑烷基脲(diazo-lidinyl urea)。優(yōu)選的量約為100mg。用于本發(fā)明中的其他的抗菌劑的例子是己基間苯二酚(25—1000mg)，cetrimide(100—4000mg)，六氯雙酚(25—3000mg)，tridocarban(3，4，4—三氯碳酰替苯胺50—1000mg)，氯二甲苯酚(25—1000mg)以及十六烷基三甲基銨溴化物(25—400mg)。
在前面所述的抗菌劑中，殺藻銨是最優(yōu)選的，尤其是對于僅使用一種抗菌劑的實施方案。
但是在本發(fā)明的優(yōu)選的實施方案中，不是使用一種，而是使用抗菌劑結合物。
一種特別優(yōu)選的實施方案類型是含有一種選自于由殺藻銨，甲基氯化芐乙氧銨，十六烷吡啶氯化物，洗必太葡萄糖酸鹽及碘伏(BETADINETM)組成的組中的抗菌劑。此類優(yōu)選的實施方案還含咪唑烷基脲(imidiazolidinyl urea)以及二唑烷基脲(diazolidinyl urea)。
本發(fā)明所述陰道栓的另一種基本成分是一種嗜酸乳酸桿菌或Lactobacillus rhamnosus的活菌落，每個陰道栓中含有103—107范圍內的活細菌，更優(yōu)選的含菌范圍為105—107個，優(yōu)選的活細菌數目為約每個陰道栓中含有1百萬(106)個細菌。該細菌以微包膠形式存在于陰道栓中。在優(yōu)選的實施方案中，該細菌是Lactobacillus rhamnosus種，并且每個陰道栓至少含約106個活細菌。雖然，一些細菌學家將Lacto-bacillus rhamnosus認作為一種獨立的但與嗜酸乳桿菌相關的細菌種，但更合適的是將它看作為嗜酸乳桿菌種的一個簡單變種。正如本領域內已知的，嗜酸乳桿菌和Lactobacillus rham-nosus都是“友好”細菌，并且形成健康的陰道內細菌群。已知這兩種細菌都可以產生一定的殺菌素以及過氧化氫，這將有助于抑制病原細菌。在本發(fā)明使用Lactobacillus rhamnosus比用嗜酸變異體所具有的優(yōu)點是基于這樣的事實，Lactobacillusrhamnosus變種繁殖力更強(約8—10倍)，并且能夠發(fā)酵更多的碳水化合物(嗜酸變種發(fā)酵12種，而rnnamnosus變種發(fā)酵23種)，并且rhamnosus變種產生L+乳酸，而不是由嗜酸變種產生的外消旋乳酸混合物。上面所述是有利的，因為rhamnosus變種具有發(fā)酵多種類型的碳水化合物的能力使之成為一種更強壯，更易于存活的細菌。能夠產生L+乳酸也是有利的，因為它是一種實際上有抗真菌作用的L+對映異構體。
本發(fā)明中使用的嗜酸乳桿菌和Lactobacillus rhamnosus變種細菌可以通過商業(yè)途徑購買，或者從實驗室菌株獲得。
下面描述的優(yōu)選的實施方案中使用的Lactobacillus rham-nosus變種是從Institute Rosell Montreal，Quebec Canada獲得的。在本發(fā)明中乳桿菌種是用微膠囊包被的，并且是與本發(fā)明中所用的一種或幾種抗菌劑和其他成份一起混合制成微膠囊包被形式。下文中將描述幾種由微膠囊包被這些細菌的方法或操作程序。用微膠囊包被這些細菌的目的是為了在栓劑被使用之前保護這些細菌免受抗菌劑的作用。在本發(fā)明中以這樣的方式選擇包被該細菌的材料或外膜，即在陰道環(huán)境中該材料失去其結構完整性成為膜片(主要由于水份作用)并且釋放出乳桿菌。
除了含有一種或幾種殺菌劑和微膠囊包被的乳桿菌外，本發(fā)明所述陰道栓還含有下列非必需的成分或組分。這些組分之所以被認為是非必需的是因為沒有它們也可以達到本發(fā)明的基本目的。然而，含有這些非必需組分的本發(fā)明的實施方案具有特定的優(yōu)點，因而被看作是優(yōu)選的實施方案，并且還應該認識到將這些實施方案結合起來考慮相對于基本的實施方案而具有新穎性和創(chuàng)新精神。
因此，優(yōu)選的本發(fā)明陰道栓含有一種選自于nonoxynol9或octoxynol 9基本的殺精子劑。后者被認為基本上與nonoxynol 9具有均等的作用，可以實現本發(fā)明目的。每個陰道栓含有含量約為50—500mg范圍內的nonoxynol 9，優(yōu)選的量是100mg。根據現有技術使用nonoxynol 9具有嚴重的缺陷，在重復使用時增加了陰道炎和酵母感染的可能性，主要原因是由于nonoxynol 9具有有害地影響陰道內正常細菌群的傾向。但是，將nonoxynol 9與本發(fā)明所述其他組分結合使用后不具有這些缺點。
優(yōu)選的本發(fā)明所述陰道栓還含有一種緩沖劑，該緩沖劑能使陰道內pH值保持于約3.0—5.5，優(yōu)選的是4.3—4.5的范圍內?？梢詫⑷魏嗡幬飳W上可接受的溫和酸，如硼酸，或溫和的有機酸例如乳酸，抗壞血酸，檸檬酸，或乙酸，與其各自的鈉鹽或其他藥物學上可接受的鹽(必須達到所需pH值)結合起來使用。優(yōu)選的是，陰道栓的pH值緩沖于4.3至4.5的范圍內，優(yōu)選的是使用含有乳酸鈉的乳酸或者乳酸/乳酸鈉和抗壞血酸的結合物作為緩沖劑。
本發(fā)明已經發(fā)現以上述方式緩沖的陰道栓實際上使陰道pH值在性交后保留酸性，這對于避孕是有利的，并且也可以保持健康的陰道細菌群。利用抗壞血酸作為緩沖系統(tǒng)的一部分由于其他的理由是有利的，已經證明抗壞血酸能夠增強子官頸粘液的粘性，從而使得精子或微生物進入子宮變得更困難。因此，抗壞血酸對本發(fā)明的陰道栓具有抗菌和避孕作用都作出貢獻。
本發(fā)明陰道栓還含有使陰道栓成形的藥物學賦形劑。羥基丙基甲基纖維素(每100個陰道栓大約用40克)以及微晶纖維素(每100個陰道栓大約用20克)特別適用，因為這些成分能夠很好地吸附到酸性環(huán)境的陰道壁上，酸性環(huán)境是由于本發(fā)明陰道栓包含的合適緩沖系統(tǒng)產生的。其他的賦形劑如硬脂酸鎂(每100個陰道栓用2—4克)以及二氧化硅(每100個陰道栓用2—4克)以及乳糖(每100個陰道栓使用2—3克)也用于本發(fā)明的優(yōu)選方案中。
用于本發(fā)明陰道栓中的其他可選擇的組分或成分是香料，薄荷腦，按油，甲基水楊酸鹽或相關的水楊酸鹽用作為局部冷卻劑；皮質甾醇或相關的抗炎甾類(每個陰道栓用1—500mg)用作為抗炎劑；EDTA用作為濕潤劑和適度的抗菌劑；丙二醇或其他藥物學上可接受甘醇，對羥基苯甲酸甲酯或相關的對羥基苯甲酸酯類衍生物用作為濕潤劑并用于構成“骨架”結構；對二異丁基苯氧基聚乙氧基乙醇或dodoe-caethylene glycol一月桂酸酯用作為殺精子和適度的抗菌劑；tritions and menfegol作為殺精子劑，適度的抗菌劑和濕潤劑。
在下面的說明書中，申請人首先描述了用微膠囊包被嗜酸乳桿菌或Lactobacillkus rhamnosus的操作實例，以及優(yōu)選的本發(fā)明陰道栓的實施例。
實施例微膠囊包被方法將已在除去培養(yǎng)基后凍干的活凍干乳桿菌用于進行微膠囊包被。該細菌可從商業(yè)途徑購買，或者從實驗室菌株獲得。在本優(yōu)選實施方案中，Lactobacillus rhamnosfus細菌是從Institute Rosell Montreal，Quebec，Canada購買的。將該生物體在營養(yǎng)培養(yǎng)基中生長至對數期。合適的培養(yǎng)基包括Thayer—Martin培養(yǎng)基，黃豆胰酶解酪蛋白，腦—心浸汁肉湯，或者其他任何適用于培養(yǎng)該細菌的豐富培養(yǎng)基，因為沒有特定的培養(yǎng)基對此種陰道栓的成功制備起著關鍵作用。唯一重要因子是該微生物的存活性和量，而這兩因子總是由標準的臨床實驗室稀釋方法測定的，如在37℃，5—10％二氧化碳氣氛中，將定量稀釋的細菌在血瓊脂平板上培養(yǎng)24—48小時，然后進行菌落計數。通過在0—4℃以14,000xg離心而除去營養(yǎng)培養(yǎng)基，然后在起始的離心步驟后用無菌的平衡鹽和5％葡萄糖溶液至少洗滌三次。然后用液氮將該細菌“快速冰凍”，然后在高度真空條件下凍干。
包囊方法A將上面描述方法中獲得的新鮮的，經洗滌的并凍干的細菌懸浮于10ml的5％萄萄糖鹽水溶液中，所加入的細菌的體積為得到在4℃時每升中含有10億—100億個生物體的細菌濃懸液所需體積。除非另有說明，所有這些操作都是在0—4℃溫度范圍內完成的，以便使在室溫下將喪失生命力的乳桿菌保持存活性。向該細菌懸液中加入0.2—0.4ml的海藻酸鈉溶液(1.5％W/V)后快速但溫和地振蕩該懸液。使用氮氣流，通過一個包了外鞘的14計量注射針將上述混合物轉移到一個4升圓底燒瓶中。在完成該步驟前事先用5％白蛋白溶液洗滌該4升圓底燒瓶，之后在65℃至少加熱10小時，并且在該步驟中使用的注射針和管道也用該方法處理。
然后在加壓條件下利用一個大量注射器和氮氣流將上述混和物強行通過一個30計量多個傾斜角的注射針。在該注射針的末端產生非常少的微滴，這些微滴被30計量注射針周圍的氮和空氣氣流干燥，當這些微滴形成凝膠時將它們收集于1.3—2％CaCl2的水溶液中。之后，用0.08—0.13％2—(N—環(huán)乙基—氨基)乙烷磺酸(CHES)溶液和1.0—1.5％氯化鈣溶液至少洗滌三次。
進一步用至少5倍以上的0.1％CHES和1.1％CaCl2以及正常的鹽水溶液洗滌已成膠狀的微滴或球。然后將得到的小球在液氮中“快速冰凍”，然后凍干。完成這些步驟之后，將該膠囊包被的生物體用于制備本發(fā)明的藥劑。
包囊方法B由于在包囊方法A的基礎上進行了改進，因而完成下面的步驟給該細菌提供了更強的抗陽離子抗菌劑的抗性。這些步驟是在0—4℃下完成的。因此，在包囊方法A中描述的洗滌步驟之后，將所得物質與聚L—賴氨酸(Sigma)溶液(0.05％W/V)球體一起反應10分鐘。然后用被乳酸緩沖至pH為4.5的普通鹽水洗滌球狀體。然后將得到的球體體在液氮中“快速冰凍“，然后凍干。在完成這些步驟后，將膠囊包被的生物體用于制備本發(fā)明的藥劑。
包囊方法C在0—4℃，用羥基丙基甲基纖維素與剛制備的，經過洗滌的，凍干的細菌一起混合，以達到細菌與羥基丙基甲纖維素的重量比為10/90，但該范圍可分別在1/99至99/1范圍內變化。這將影響膠囊包被的生物體的最終質量和存活性。應該明白，較高的纖維素比率趨向于在包囊步驟中保護該細菌。由“盤狀”膠膜包被凍干細菌和羥丙基甲基纖維素的混合物。這一過程是用首先已用懸于水中的1％硬脂酸鎂“包被”的不銹鋼圓底燒瓶來完成的。將無水的可滲透的丙烯酸異丁烯酯共聚物和含部分水的可滲透的丙烯酸異丁烯酸共聚物(分別為EUDRAGIT RLTM和EVDRAGIT RSTM(從德國的Rohm Parm.Ltd.獲得))的結合物以5—10％的濃度懸浮于含1％W/V蓖麻油的比例為1∶1的丙酮—異丙醇中。兩種共聚物的比例可在1∶1至1∶10范圍內變化，而優(yōu)選的比例為1∶2。將該懸浮液置于不銹鋼圓底燒瓶中。由于該共聚物懸浮液可快速地殺死細菌，因而該方法不得不用羥丙基甲基纖維素與細菌的高比例來快速地完成。因此，向該不銹鋼燒瓶中加入小量的細菌與纖維素的混合物，將該材料用氮氣流干燥，在干燥過程中劇烈攪拌3—10分鐘。
包囊方法D在0—4℃時邊快速但輕度地搖動，邊向聚乙烯吡咯烷酮(從德國的BASF購買)的濃懸液中加入剛制備的，經洗滌的，凍干細菌，其中所述濃懸液可用或不用溶于pH為5.0(4.5—8.0范圍)的5％葡萄糖平衡的鹽溶液中的0.1％的二乙烯基苯(Biorad)溶液交聯2—12小時。將該混合物搖動1—12小時而包被該乳桿菌。然后將該物質“快速冰凍”并凍干。
包囊方法E通過快速而輕度地搖動而將剛制備的，經過洗滌的，凍干的細菌加入聚乙烯吡咯烷酮(CrospovidoneTM)懸液中。具體地講，在0—4℃時將10克凍干細菌加到50克聚乙烯吡咯烷酮(CrospovidoneTM)的懸液中。振動30—60分鐘，但也可使用更長時間，出現了包囊作用。在一個干燥器中真空處理而從該混合物中除去水分，或將該材料“快速冰凍”并且凍干。
制備陰道栓方法A在35—37℃時邊徹底地振動邊向溶于無菌普通鹽水溶液(其量足于制備一種濃稠糊劑，通常為120ml)中的羥丙基甲基纖維素(每批約100個陰道栓用40克)和微晶纖維素(每批約100個陰道栓用20克)的懸液緩慢地加入殺藻銨或甲基氯化芐乙氧銨(每批100個陰道栓用12.5克)，咪唑烷基脲(imidiazolidinyl urea)(每批100個陰道栓用11克)和二唑烷基脲(diazoidinyl urea)(每批100個陰道栓用1.1克，或者用1.1克的二唑烷基脲和1.1克的咪唑烷基脲使得濃度降低10倍)。用試劑級乳酸將pH緩慢地降至約6.0—6.3。(該步驟將抗菌劑結合到“纖維素”賦形劑)。該懸浮液振動2小時，然后邊輕度地振動邊緩慢地加入10.0克抗壞血酸，該抗壞血酸溶于約10—15ml的無菌鹽水中。此時，該物質是一種非常稠的糊劑。此時加入殺精子劑(每批100個陰道栓中加入11克Nonoxynol 9)并且徹底地混合。在完成該步驟后，該方法在0—4℃下完成。然后用試劑級乳酸將該混和物的pH值降至4.3—4.5。然后加入剛制備的膠囊包被的乳桿菌，使其終濃度達到至少為每個陰道栓一百萬個活細菌。由于目的是使其終濃度達到每個陰道栓至少含一百萬個活細菌，因而通常加入6倍量的細菌，因為在各混合步驟中存活性出現一些損失。這意味著通常要加入約500mg的經膠囊包被的細菌。不僅徹底地混合這些生物體以確?；旌衔锞恍允侵匾?，而且快速地混合也是重要的，因為水分會對生物體的存活性產生不利的影響。例如通過將糊劑在無菌玻璃平皿中鋪成一薄層并且然后用一個復制照將細菌均勻地鋪在糊劑層上，可以達到上面所述的快速和徹底混合。此后，以在每批的100個陰道栓中各加入約2—4克的量加入硬脂酸鎂和二氧化硅，并且加入或不加2—3克乳糖。
在將上述物質在0—4℃徹底混合后，將其擠壓到一個模型中并在真空條件下0—4℃時在一個干燥罐中干燥。(在室溫(25℃)或更高的溫度下進行干燥會降低活細菌數目)。然后將陰道栓密封于不透空氣和水的容器中，直至使用。在貯存期間，應避免水分和高溫以確保乳桿菌的存活性。
陰道栓組合物B按照制備陰道栓藥劑A的方法實施制備該組合物的方法，所不同的是使用十六烷基吡啶氯化物(每批100個陰道栓使用12.5克)代替殺藻銨。
陰道栓制劑C基本上按陰道栓制劑A相同的制備方法該制劑，所不同的是用洗必太葡萄糖酸鹽(每批100個陰道栓使用12.5克)代替殺藻銨。
含有碘伏(BETADINETM)，甘油主劑的陰道栓制劑D該組合物和制備方法與上面描述陰道栓制劑A相似，不同之處如下用碘伏(BETADINETM)(每批100個陰道栓中用12.5克)替代殺藻銨。緩慢地將三種抗菌劑咪唑烷基脲1.1至11克，二唑烷基脲11—1.1克以及碘伏)加入到溶于無菌的0.15普通(0.85％)鹽水溶液中的濃度為20—80％的1升甘油懸液中，在加入的同時進行徹底的振動。用試劑級乳酸將pH值緩慢地降至約6.0—6.3。該步驟使該混和物稍微增稠。
在將懸液振蕩2小時后，在輕度振動條件下將溶于約10—15ml無菌鹽水中610—10克抗壞血酸緩慢地加入。此時，該混和物是一種很稠的懸浮液。然后用試劑級乳酸整個混合物的pH值降至4.3—4.5。如在前面描述的方法中所述，在加入剛制備的膠囊包被的細菌時將該物質快速地冷卻到0—4℃，但在本方法中通常加入約600—800mg的膠囊包被的細菌，同時加入4—6克乳糖并徹底地混合。與前面描述的方法和組合物不同的是，不加入硬脂酸鎂或二氧化硅，此時該制劑是非常堅硬的，在0—4℃時象軟蠟，并且很容易倒入模子里。然后將得到的陰道栓密封于不透空氣和水分的容器中直到使用。該組合物的陰道栓在37℃時快速融化，此后特別小心地操作以使其在貯存期間和使用之前保持冷卻。
陰道栓制劑E(甘油為主劑)。
向溶于無菌0.15普通鹽水溶液中的濃度為20—80％的1升甘油懸浮液中緩慢地加入殺藻銨(每批100個陰道栓用12.5克)，咪唑烷基脲(imidiazolidinyl urea)(11至1.1克)以及二唑烷基脲(diazolidinyl urea)(11至1.1克)，加入的同時徹底地振動。用試劑級乳酸將pH緩慢地降至約6.0—6.3。該步驟稍微增加了該混合物的稠度。在將該懸浮液振動2小時之后，邊輕度振動邊緩慢地加入溶于約10—15ml無菌鹽水中的6.0—10克的抗壞血酸。此時，該混合物是一種稠密的粘性懸浮液(其稠度類似于濃稠蜂蜜)，然后加入11克的Nonoxynol 9并徹底地混合。用試劑級的乳酸將整個混合物的pH值降至4.3—4.5。在加入剛制備的膠囊包被的乳桿菌同時將該物質快速冷卻0—4℃。通常將600—800mg的膠囊包被的細菌與4—6克乳糖一起加入并且徹底地混合，得到每個陰道栓至少含有106個活細菌的終產物。在該階段，該制劑是非常堅硬的，在0—4℃時象松軟的蠟，并且易于傾倒入模子里。然后將得的陰道栓密封于不透空氣和水的外包裝中直到使用。在貯存期間應避免水份，并且應特別注意使之保持冷卻，因為以甘油為主劑的陰道栓在約37℃時融化。
陰道栓制劑F(以甘油為主劑)基本上按照制劑E同樣方法制備該制劑。并且基本上有相同成份，不同的是用十六烷基吡啶氯化物(每批100個陰道栓中用12.5克)代替殺藻銨。
陰道栓制劑H(以甘油為主劑)基本上按照制劑E同樣方法制備該制劑，并且基本上具有同樣的成分，不同的是用洗必太葡萄糖酸鹽(每批的100個陰道栓中用12.5克)代替殺藻銨。
陰道栓制I(以甘油為主劑)基本上按照制劑E同樣的制備方法制備該制劑并且基本上具有同樣的組分，所不同的是用聚乙烯吡咯烷酮碘(BE-TADINETM)(每批100個陰道栓用12.5克)代替殺藻銨。
大批量制劑的制備(制劑J)在另外一種“試驗性生產量”方案中，每個周期可制備約20,000個陰道栓。將按照需要足以達到在每個陰道栓中最終量分別為大約120—1000mg，10—100mg以及10—100mg所需量的殺藻銨，咪唑烷基脲和二唑烷基脲與足以在每個陰道栓中達到90—110mg的終濃度所需量的nonoxynol 9一起混合。將上述所有成分同時加入到足夠量的無菌鹽水溶液中，通過徹底混合而制備一種濃稠的糊劑。在徹底混合后加入乳酸將pH降至4.5，在室溫下加入膠囊包被的乳桿菌。利用在“包囊方法E”中介紹的大規(guī)模方法包被該乳桿菌。將得到的混合物與適當的硬脂酸鎂和二氧化硅混合，得到可鑄型的混合物并將它在35—38℃時用8磅的微濕的壓力擠壓到模子里。通常，要達到上面所述結果，硬脂酸鎂和二氧化硅在該混合物中的濃度對每種試劑而言各占重量的0.01—0.1％。該方法得到了穩(wěn)定的陰道栓，但是微生物的存活性是隨不同的生產批量而變化的。
用單一的抗菌劑制備陰道栓制劑K邊徹底攪拌邊在35—37℃時向溶于無菌普通鹽水溶液中的羥丙基甲基纖維素(每批約100個陰道栓用40克)和微晶纖維素(每批約100個陰道栓用20克的懸浮液(其量足以制備一種濃稠的糊劑，通常為120ml)緩慢加入殺藻銨(每批100個陰道栓用12.5克)。用試劑級乳酸將pH緩慢地降至約6.0—6.3。該步驟將抗菌劑結合到主劑上。此時，該混合物是一種非常濃稠的均勻的糊劑。完成該步驟后，所有操作都是在0—4℃下完成。然后加入試劑級乳酸將整個混合物的pH降至4.3—4.5。然后加入剛制備的膠囊包被的乳桿菌，使其終濃度達到每個陰道栓至少有100萬個活細菌。通常要達到這一濃度需要加入4—6倍過量的膠囊包被的細菌(約500mg)，因為在操作過程中出現損失現象。由于水分對該生物體的存活有不利的影響，因而快速而徹底地混合是至關重要的。通過將糊劑在無菌玻璃平皿上鋪一薄層，然后再用一復制器將細菌均等地鋪在糊狀物上面而實現充分混合。暴露于約25℃或更高的溫度下對陰道栓中細菌的存活性產生不利的影響。之后，將約各為2—4克的硬脂酸鎂和二氧化硅與2—3克的乳糖一起加入或不加入乳糖。將該物質在0—4℃徹底地混合，然后擠壓到一個模型中并在0—4℃，真空條件下在一個干燥罐中干燥。然后將陰道栓密封于不透空氣和水分的容器中直到使用。在貯存期間應保護陰道栓免遭水分和高溫，以確保乳桿菌存活。
用單一抗菌劑和甘油主劑制備的陰道栓制劑L。
邊徹底攪拌邊向溶于1升無菌的0.15普通鹽水溶液中的濃度為20—80％的甘油懸浮液中緩慢地加入殺藻銨(每批100個阻道栓使用12.5克)。該步驟使混合物稍微增稠。在此時，混合物是一種類似濃蜂蜜的稠度的濃稠而發(fā)粘的懸浮液。然后用試劑級乳酸將整個混合物的pH值降至4.3—4.5。將該物質快速地冷卻至0—4℃，并且加入剛制備的膠囊包被的乳桿菌。為了使最終濃度達到每個陰道栓含有一百萬個活細菌，將6—8倍過量的膠囊包被的細菌(大約600—800mg)與4—6克乳糖一起加入并徹底混合。在該階段，制劑非常硬，在0—4℃時類似軟蠟，并且易于將它擠壓到模子里。然后將陰道栓密封于不透空氣和水的容器中直到使用。
大批量制備制劑M按照本方案制備每批試驗性規(guī)模批量約300個陰道栓，但是該方案也可用于制備更大或更少的量。按照需要將使其最終量分別達到每個陰道栓為100—1,000mg，10—100mg和10—100mg所需的足夠量的殺藻銨。咪唑烷基脲和二唑烷基脲與使其終濃度達到每個陰道栓為90—110mg所需的足夠量的nonoxynal 9一起混合。將上述所有成分同時加入到足夠量的無菌鹽水溶液中，通過徹底混合制備一種濃稠的糊劑。在一個有代表性的實施方案中，在室溫下將30克殺藻銨，2.5克咪唑烷基脲和2.5克二唑烷基脲加入到大約50ml的無菌鹽水溶液中。然后以每個陰道栓加入100mg的足夠量(總共為30.0克)加入抗壞血酸，接著加入下列物質14克乳糖(Fast MoWTM)，甲基纖維素(MethocelTM)2.5克，硬脂酸10克，淀粉羥基醋酸鈉(TabcoTM)10克，檸檬酸鈉1.5克，二氧化硅20—60克。將上述物質徹底混合后，在室溫下加入膠囊包被乳桿菌(總共3.0克)?；旧习凑丈厦婷枋龅摹鞍曳椒˙”的步驟，用膠囊包被該乳桿菌。在室溫和溫和的壓力下用藥丸壓模機將得到的混合物擠壓到模子里。
體內和體外生物學試驗試驗基本上按照方法A或B所述的步驟制備的本發(fā)明優(yōu)選的陰道栓對下列病源生物體的作用效果，并且發(fā)現在通常計劃的陰道栓的使用期間體內被達到的濃度時可以殺死這些生物體。
細菌Gardnerella vaginalis，化膿鏈球菌，無乳鏈球菌，糞鏈球菌，金黃色葡萄球菌，金黃色葡萄球菌(產生毒素的毒性株)，淋病殺瑟氏球菌，大腸桿菌，肺炎克氏桿菌，痢疾志賀氏菌，傷寒沙門氏菌，人型枝原體，肺炎枝原體，解脲脲原體，Mobilluncus curtisii，以及沙眼衣原體。
病毒人免疫缺陷性病毒，I型單純皰疹病毒，II型單純皰疹病毒，巨細胞病毒(CMV)，甲型肝炎病毒，乙型肝炎病毒。
酵母白色假絲酵母，近平滑假比酵母，熱帶假絲酵母，Cardida glabrata，假熱帶假絲酵母。
毛滴蟲屬陰道毛滴蟲下文中進一步描述體外和體內試驗在體外研究中，在約30ml體積的合適的豐富培養(yǎng)基中引入待測定病原體，以試驗一個陰道栓的抗菌效果?？偟膩碚f，將106個對數生長期的病原生物體導入到培養(yǎng)基中，該數目比合理估計出的女性在與感染的男性配偶性交時可被接觸到的病原生物體(一個種類)的數目高出2或3個數量級。對于一個陰道栓，使用30ml的體積被認為與在性交之后一個陰道栓的抗菌劑在陰道里受到的稀釋程度至少相同或者稀釋程度更大。因此，可以認為，就所涉及的病原體的數目和抗菌劑的數目而言，這些檢測試驗至少與體內存在的狀態(tài)，也就是按計劃的方式使用本發(fā)明的陰道栓時的狀態(tài)同樣苛刻或更苛刻。
Gardnerella vaginalis在試驗抗Gardnerella vaginalis的效果時。將來自300個臨床分離物(診斷為細菌性陰道疾病的患者)的106個活生物體(設置二個重復)加入到Mueller—Hinto豐富肉湯中。在10％CO2的培養(yǎng)箱中在37℃將本發(fā)明的陰道栓，培養(yǎng)基和生物體緩慢地攪拌。在1，2和3小時時將一份樣品定量地涂布于巧克力(色)瓊脂平板上并在一個10％CO2培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)。在24，48和72小時時對平板上菌落計數。結果在上述條件下完成的Gardnerella vaginalis的300個臨床分離物抗本發(fā)明陰道栓的檢測試驗中，發(fā)現在1，2，3或4小時間隔取樣的樣本中沒有存活的生物體。
化膿鏈球菌，糞鏈球菌，無乳鏈球菌，金黃色葡萄球菌以及產毒的金黃色莆萄球菌。
利用經典的實驗室技術從婦科病人獲得了化膿鏈球菌，糞鏈球菌，無乳鏈球菌，金黃色葡萄球菌和產毒金黃色葡萄球菌的臨床分離株。將對數生長期的106/ml(1ml)的臨床分離株加入到Mueller—Hinton豐富肉湯培養(yǎng)基中。在10％CO2的培養(yǎng)箱中37℃時將本發(fā)明的陰道栓，培養(yǎng)基和生物體緩慢攪動。在1，2和3小時后，取一份樣品定量于涂布于巧克力(色)瓊脂平板上，并在一個10％CO2培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)。在24，48和72小時時讀出平板上菌落數。結果在1，2或3小時取樣期取樣時，對于金黃色葡萄球菌，無乳鏈球菌，糞鏈球菌，化膿鏈球菌的臨床分離株以及產毒的金黃色葡萄球菌的30個臨床分離株未出現有存活菌落。
革蘭氏陽性桿菌(細菌)對大腸桿菌(100個分離株)，肺炎克氏桿菌(100個分離株)，痢疾志賀氏菌(30個分離株)以及傷寒沙門氏菌(30個分離株)的臨床分離株進行檢測，觀察其對本發(fā)明陰道栓的抵抗性。
將106/(1ml)的臨床分離株加入到Mueller—Hinton豐富肉湯中。在一個10％CO2培養(yǎng)箱中37℃時將本發(fā)明的陰道栓，培養(yǎng)基，和生物體緩慢攪動。在1，2和3小時時，取一份樣品定量涂布于巧克力(色)瓊脂平板上并在一個10％CO2培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)。在24，48和72小時時對平板上菌落計數。結果在上述條件下進行的抗本發(fā)明陰道栓的檢測試驗中，在1，2或3小時間隔取樣時，未發(fā)現大腸桿菌，肺炎克氏桿菌，痢疾志賀氏桿菌，傷寒沙門氏桿菌的臨床分離株出現活菌。
酵母從臨床診斷患有陰道炎的婦科患者獲得白色假絲酵母(100個分離株)，近平滑假絲酵母(50個分離株)，熱帶假絲酵母(50個分離株)，Candida glabrata(50個分離株)和假熱帶假絲酵母(50個分離株)的臨床分離株。將這些臨床分離株106/ml(1ml)加入到Mueller—Hinton豐富肉湯中。在10％CO2培養(yǎng)箱中37℃時將本發(fā)明陰道栓，培養(yǎng)基和生物體緩慢攪動。在1，2和3小時時取樣定量地涂布于巧克力(色)瓊脂平板上并置于10％CO2培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)。在24，48和72小時時計算平板上菌落數。結果在上述條件對白色假絲酵母，近平滑假絲酵母，熱帶假絲酵母，Candida glabrata以及假熱帶假絲酵母的臨床分離株進行的抗本發(fā)明陰道栓的檢測試驗中，在1，2或3小時間隔取樣時未發(fā)現有存活菌。
陰道毛滴蟲從臨床診斷為陰道炎的婦科患者獲得陰道毛滴蟲的臨床分離株。
將該臨床分離株106/ml(1ml)加入到Feinstein—Weiberg豐富培養(yǎng)基中。在一個10％CO2培養(yǎng)箱中37℃時將本發(fā)明的陰道栓，培養(yǎng)基和生物體緩慢攪動。在1，2和3小進取樣，定量地加到其他的Feinstein—Weiberg培養(yǎng)基中并在10％CO2培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)。在24，48和72小時時對試管讀數。結果在上述條件下對陰道毛滴蟲的30個臨床分離株進行的抗本發(fā)明的陰道栓的檢測試驗中，在1，2或3小時間隔取樣時未發(fā)現有活生物體。
Hemophilus ducreyii從經診斷患有Hemophilus ducreyii的病人以及從實驗室原始菌株獲得Hemophilus ducreyii的臨床分離株(30)。
將臨床分離株106/ml(1ml)加入到Mueller—Hinton豐富培養(yǎng)基中。在一個10％CO2培養(yǎng)箱中37℃將本發(fā)明陰道栓，培養(yǎng)基以及生物體緩慢攪動。在1，2和3小時取樣定量地涂布于另一富含Mueller—Hinton巧克力(色)瓊脂平板上，并在一個10％CO2培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)。在24，48和72小時對平板進行讀數。結果在上述條件下對Hemophilusducreyii的臨床分離株進行的抗本發(fā)明陰道栓的檢驗中，在1，2或3小時間隔取樣時未發(fā)現存活的生物體。
淋病奈瑟氏球菌從臨床診斷為患有陰道炎或子宮頸炎的婦科病人獲得淋病奈瑟氏菌的100個臨床分離株。
將臨床分離株106/ml(1ml)加入到Mueller—Hinton豐富肉湯中。在一個10％CO2培養(yǎng)箱中37℃時將本發(fā)明的陰道栓，培養(yǎng)基和生物體緩慢攪動。在1，2和3小時取樣定量地涂布于巧克力(色)瓊脂平板上，并在10％CO2培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)。在24，48和72小時對平板進行讀數。結果在上述條件下對淋病奈瑟氏菌的臨床分離株進行的抗本發(fā)明陰道栓的檢測試驗中，在1，2或3小時間隔取樣未發(fā)現活生物體。
專性的胞內病原體沙眼衣原體，II型單純皰疹病毒，以及最近發(fā)現的人免疫缺陷性病毒(HIV)，如果不是最重要的性傳染的疾病，也必定涉及到。所有這些病原菌是專性的，胞內寄生物，因此，不能用上面描述的用本發(fā)明陰道栓進行的體外檢測試驗進行檢測。而且，陰道栓中的抗菌劑，殺精子劑和其他物質并不對組織培養(yǎng)物系統(tǒng)起作用，在檢測本發(fā)明陰道栓抗這些病原體時，不能考慮到這些因素。因此，按下列方式進行試驗。
將本發(fā)明陰道栓在30ml的培養(yǎng)基中溶解后，加到病毒或衣原體感染單位(106)中，并在10％CO2培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)1小時。通過超聲處理破碎細胞，然后將整個30C的物質以5000×g離心。將上清液和沉淀都接種到敏感細胞系中。在1小時間隔取樣時發(fā)現本發(fā)明的阻道栓能殺滅II型單純皰疹病毒，沙眼衣原體，以及HIV培養(yǎng)物。
體外和體內的聯合研究設計一個試驗，在僅給藥一個本發(fā)明的陰道栓(基本上按方法A和B描述的步驟制備)后幾小時，檢測陰道內pH和抗菌劑水平。在該試驗中，分別在插入陰道栓后0時，以及每間隔一小時直到8個小時檢測陰道pH值，在0時以及每間隔一小時從后穹窿獲得陰道液樣。將陰道樣液加到病原體或潛在病原體菌苔上，以試驗在陰道內能保持多長的抗菌活性。選擇出按革蘭氏染色，濕滴法以及陰道液pH檢測時未測出有性傳染疾病跡象或癥狀的病人進行研究。在該方式中，對21至35歲的30個志愿病人進行評估。在進行一些試驗后，發(fā)現用無菌巴斯德吸管的毛細作用引力連續(xù)地從陰道后穹窿中可取出200—300ml的液體。
每間隔一周給每個志愿者使用一個陰道栓。利用該方法，在每個間隔期獲得適于研究5—7種生物體的材料。應注意在研究期間(三周)，要求志愿者在插入陰道栓當天之前至少5天抑制性活動。
用pH試紙檢測陰道pH值。將10ml的陰道樣液加到下列各種生物體在豐富的巧克力瓊脂培養(yǎng)基上的剛接種的“菌苔上”Gardnerelia Vaginalis，糞鏈球菌，化膿鏈球菌，無乳鏈球菌，金黃色葡萄球菌，金黃色葡萄球菌(產毒的毒珠)；淋病奈瑟氏球菌，大腸桿菌，肺炎克氏桿菌，痢疾志賀氏桿菌，傷寒沙門氏菌，白色假絲酵母，近平滑假絲酵母，熱帶假絲酵母，假熱帶假絲酵母以及Candida glabrata。
結果在試驗期間pH保持在4.5。在整個研究期間陰道樣液殺死上述微生物。
為了評估抗菌劑活性對病毒和沙眼衣原體的長期作用，將按上述方法獲得的陰道樣液加入到含有敏感細胞以及104感染單位的沙眼衣原體或II型單純皰疹病毒或HIV的10cc試管中。將該混合物培養(yǎng)1小時。然后超聲振動破碎細胞，并將以10,000xg離心后的上清物質加到易感細胞中并進行適當的培養(yǎng)。利用這些條件，將沙眼衣原體以及病毒完全破壞。
每天使用本發(fā)明的陰道栓連續(xù)使用60天后安全性的估測該項研究的目的是為了對健康人使用本發(fā)明的陰道栓的忍受以及任何有害作用進行評估。在該研究中，患者每天插入一個陰道栓連續(xù)60天后并報道該患者或其性配偶在使用陰道栓后產生了有害作用。
對這些患者的臨床和主觀評估包括有或沒有皮膚發(fā)炎，有害作用，排泄物增加，感覺上改變等等，以及為了估測陰道菌群而進行的合適的微生物學檢測以及如果適用于研究的話對其性伙伴也進行適當評價。
在該研究中，只有年齡為18歲至45歲之間的，一夫一妻制的，并且沒有任何種類的婦科疾病，利用合適方法進行避孕的患者參加。下列患者應排除在本研究之外即對本研究的產品過敏的患者，在整個研究時期內全身或局部需要使用抗菌劑的患者，有與念珠菌病相一致的臨床或實驗室病癥的患者，有與活性II型單純皰疹病毒感染相一致的損傷的患者，有萎縮性陰道炎的患者，有子官頸炎的患者，或者是有與細菌性陰道炎相一致的跡象或癥狀的患者。
結果每天使用本發(fā)明的陰道栓共使用60天的103名婦女中，有四名出現了輕度發(fā)炎，她們中的三名沒有繼續(xù)使用該產品。有四名患者其配偶出現發(fā)炎癥狀。沒有患者抱怨敏感性發(fā)生了改變，干擾了其日常的活動或不利的排泄物。
因此，總的來說幾乎在所有的研究群體中，都能很好地忍受本發(fā)明的陰道栓。本發(fā)明的陰道栓相對于其他類型的避孕和預防障礙方法更能被接受的原因應歸納于幾個因素。它們是本發(fā)明的陰道栓能很快分散。該陰道栓的賦形劑對于在優(yōu)選實施方案的乳酸緩沖系統(tǒng)保持的自然溫和酸性pH范圍內的陰道上皮具有親和力。由于陰道栓的組成成分對陰道上皮有親和力，抗菌劑，包括殺精子劑不會引起陰道發(fā)炎。本發(fā)明的陰道栓不會導致不利的排泄物出現。總的來說，在優(yōu)選的實施方案中，2克小塊的陰道栓相當于許多常規(guī)殺精子劑的5克劑量。由于其快速分散并吸附到上皮上，也可以快速地被生物降解。最后，該陰道栓具有幫助減少陰道排泄物的殺精子劑和某些抗菌劑的溫和的去污作用。另外，該陰道栓不合有任何脂類(油，脂肪等)，但含有吸附到整個陰道穹窿上的物質。因而使用該陰道栓不會有“亂糟糟”病癥。
每隔一天使用本發(fā)明的陰道栓使用60天后的安全性的評估本項研究的目的是為了評估健康人對使用本發(fā)明陰道栓的忍受性以及任何種類的不良影響。在該研究中，患者每隔一天插入一個陰道栓共使用60天，并且報告其自身或其性伙伴出現的不良影響。
臨床和主觀評估包括有或沒有皮膚發(fā)炎，任何不良影響，排泄物的增加，感覺上的變化等等，以及為了評估陰道菌群而進行的適當的微生物學檢測，以及如果適合該研究對其性伙伴進行的適當評估。在本項研究中，參加的患者的年齡為18至45歲之間，一夫一妻制的并且沒有任何種類的婦科疾病，并且使用合適的避孕方法。
與患者每天使用一個陰道栓共使用60天的研究中排除患者的同樣理由在本項研究中也排除同樣情況的患者。
結果，在每隔一天使用本發(fā)明陰道栓的119名婦女中，有三人報告有輕度發(fā)炎。沒有任何參加者的性伙伴報告對所使用的產品有中等或嚴重的副反應。只有6名患者抱怨其性伙伴有輕度發(fā)炎。沒有患者抱怨其感受性發(fā)生了改變，干擾了其通常的習慣或有不正當的排泄物。
本發(fā)明陰道栓對性病傳染疾病發(fā)生率的影響設計該項研究是為了評估本發(fā)明的陰道栓用于阻止非一夫一妻制患者陰道感染時的安全性及效果。只有申明每年有4或更多個不同性伙伴的患者才被考慮參與該項研究。患者還必須使用一種有效的避孕方式，適用于該研究目的的有效避孕方式的定義是子宮內裝置(IVD)，口服避孕藥，陰道隔膜或子宮頸帽。參加該項研究的患者年齡在18至45歲之間并且月經有規(guī)律。
在該研究中，患者最好在性交前5分鐘但也可以只有2分鐘插入一個本發(fā)明的陰道栓。
基于參加者對安全性和效果的直接反應對其進行評估。例如患者回答這樣的問題你經受了灼燒或刺痛感嗎？或者你想到你的配偶有同樣問題嗎？任何感受性上變化，以及對個人健康方面的影響例如在使用后存在不良排泄物都在被調查之列。此外，患者還應提供對其日常習慣的評估。在患者進入研究期間對其(陰道液)進行培養(yǎng)，估測是否存在酵母，淋病奈瑟氏菌，沙眼衣原體，Gardnerella vaginalis以及定性地評估其主要的陰道細菌群。在研究開始和結束時都對患者進行VDRL和HIV檢測。在研究開始和結束時還對患者進行結腸鏡檢查以估測是否存在人乳頭瘤病毒(HPV)。該項研究的持續(xù)時間為6個月。
結果
主觀判斷結果在被研究的168名婦女中，有四名抱怨有陰道發(fā)炎，兩名抱怨其性伙伴有發(fā)炎現象。
臨床結果在被研究的168名婦女中，未發(fā)現有人感染了淋病奈瑟氏菌。VDRL和HIV血清學結果保留陰性。四名患者感染了陰道毛滴蟲，她們都沒有癥狀。四名患者被診斷為細菌性陰道炎。在曾患有II型單純皰疹毒感染的43名患者中，有16人爆發(fā)了II型單純皰疹病毒臨床癥狀。在以前沒有II型單純皰疹病毒感染史的患者中沒有新的原始II型單純皰疹發(fā)生。沒有患者感染上沙眼衣原體，性病淋巴肉芽腫或性病肉芽腫。
所有患者在研究結束時陰道鏡檢查者正常。這不能絕對地排除研究期間患者能抗HPV感染，至少可以排除在本發(fā)明陰道使用期間HPV感染臨床表現的發(fā)展。
關于該項研究，可以注意到在非一夫一妻制的人群中在每次接觸前不能培養(yǎng)患者和其性伙伴的菌群(當然，培養(yǎng)是不可能的)因而要對其可能感染的危險性和類型進行定量估測顯然是非常困難或不可能的。因此，只能以病人以前歷史作為對照，才能從統(tǒng)計學計算和實際計算在性交之前使用本發(fā)明陰道栓，對研究群體中性傳染疾病感染的發(fā)生率的降低程度。還值得注意的是，在研究期間沒有遭受感染的患者承認她們不能保證，在性交之前“一直”使用了陰道栓。
本發(fā)明陰道栓對再發(fā)性念珠菌(酵母)感染的影響該項研究的目的是為了調查本發(fā)明陰道栓在阻止有多種陰道酵母感染史的患者感染酵母時的安全性以及效果。
在該研究中參加的患者在前一年按季度分有至少四種不同的念珠菌感染癥狀。為了該研究目的，在每一種酵母感染癥狀出現前至少一周內沒有癥狀出現(沒有puritis，感染或排泄物出現)。此外，最近一次發(fā)病出現后至少一周沒有癥狀出現?；颊叩哪挲g在18和45歲之間，并且月徑期有規(guī)律。已知對本發(fā)明的產品成分有過敏性的患者不參與該項研究。在進入研究階段時她們在臨床和/或微生物檢查中有陰門陰道炎癥狀時也不參加該研究。
基于其對涉及安全性和效果和臨床檢查的直觀回答而對患者進行評估。例如被問這樣的問題你經受了灼燒，刺痛和或使用陰道栓后有排泄物嗎？研究持續(xù)期為6個月。如果沒有癥狀每二個月以及在各種陰道炎癥狀出現時對患者菌群進行培養(yǎng)。
結果每隔一天使用本發(fā)明陰道栓的所有患者都能很好地忍受。唯一的發(fā)炎癥是由酵母感染引起的，在癥狀出現的任意間隔期內沒有產生由于使用該陰道栓而導致的疾癥。
在參加本項研究的四十名患者中，有13人四次發(fā)作酵母感染，12人三次發(fā)作酵母感染，有15人在研究期間只有二次感染發(fā)作。
在遭受四次感染的13名患者中，有四人正使用細胞毒性藥物，有二名使用細胞毒性藥和糖皮(質)甾類以及四名使用糖皮(質)甾類。另外，四名患者有胰島素依賴性糖尿病。也有過分肥胖的，體重超過理想值50％的患者。三次感染發(fā)作的12名患者中，有三名使用糖皮質甾類，二名使用胞毒劑，三人有胰島素依賴性糖尿病，四人過分肥胖。
從118次感染發(fā)作中分離到的酵母種中，有六十種是白色假絲酵母，18種是Candida globrata，有四種是熱帶假絲酵母，三種是近平滑假絲酵母。其余的人有混合感染，但在不同的感染速率組之間沒有顯著不同。
討論在有多種酵母感染史的患者中使用了本發(fā)明的陰道栓后可以明顯地降低該患者群中疾病復發(fā)的發(fā)生率。而在該項研究中，患有再發(fā)性感染史的患者組要完全消除酵母感染發(fā)生是不可能的，遭受3—4種念珠菌感染的大多數患者使用胞毒劑和/或糖皮(質)甾類。此外，其他的代謝性有害狀況例如糖尿病或過度肥胖，毫無疑問也會導致酵母感染難于治愈。
沒有代謝紊亂狀況，但有其他所謂的環(huán)境因素影響例如十分活躍性格以及穿緊身和約束性衣服的患者其感染速率最低。
重要的是這些患者中僅有5人在停止使用本發(fā)明陰道栓后二周內，不再具有作為主要陰道細菌群系的乳桿菌。這些資料意味著有多種因素與患者患有繼發(fā)性發(fā)作的酵母感染有關。導致患有此癥的至少一種因素是沒有能力重建以乳桿菌作為主要菌群的陰道細菌群，該因素極大地和有利于地影響本發(fā)明的陰道栓。
權利要求
1.一種陰道passary，它包含有效量的一種藥物學上可接受的局部可用的抗菌劑；至少約103個活細菌數的嗜酸乳桿菌種或該種的Lactobacillusrhamnosus變種，所述細菌是由微膠囊包被的，在該膠囊中，盡管存在抗菌劑但在passary貯存期間細菌保持存活，作為包被細菌的膠囊膜材料是在陰道環(huán)境中較長期接觸水分后能釋放出細菌的物質，以及一種與抗菌劑和微膠囊包被細菌徹底混合的藥物學上可接受的賦形劑。
2.根據權利要求1所述的陰道Passary，它進一步含有有效量的殺精子劑。
3.根據權利要求1所述的陰道passary，它進一步包含有效量的藥物學上可接受的緩沖體系，該體系將該passary的pH值緩沖在3.0至5.0范圍內。
4.根據權利要求3所述陰道passary，其中的緩沖體系緩沖于pH4.3—4.5范圍內。
5.根據權利要求1所述陰道passary，其中抗菌劑選自于由殺藻銨，甲基氯化芐乙氧銨，十六烷基吡啶氯化物，烷基三甲基銨溴化物，洗必太葡萄糖酸酯以及碘伏組成的組。
6.根據權利要求1所述陰道passary，它包含至少三種抗菌劑的混合物，其中之一選自于由殺藻銨，甲基氯化芐乙氧銨，十六烷基吡啶氯化物，烷基三甲基銨溴化物，洗必太葡萄糖酸酯以及碘伏，其他兩種抗菌劑是咪唑烷基脲和二唑烷基脲。
7.根據權利要求1所述陰道passary，其中嗜酸乳桿菌或Lactobacillus rhamnosus細菌是用海藻酸鈉膜包被的。
8.根據權利要求1所述陰道passary，其中嗜酸乳桿菌或Lactobacillus rhamnosus細菌包囊于丙烯酸異丁烯酸共聚物膜中。
9.根據權利要求1所述陰道passary。其中的嗜酸乳桿菌或Lactobacillus rhamnosus包囊于由聚乙烯吡咯烷酮和二乙烯苯組成的膜中。
10.根據權利要求1所述陰道passray，其中嗜酸乳桿菌或Lactobacillus rhamnosus包囊于由polyvinylpovidone組成的膜中。
11.根據權利要求1所述陰道passary，它還含有有效地增加子官粘液粘性所需量的抗壞血酸。
12.一種陰道栓，它含有有效量的藥物學上可接受的，可局部使用的抗菌劑；至少約103個活細菌數的嗜酸乳桿菌種或其Lactobacil-lus rhamnosus變種，所述細菌由微膠囊包被，在膠囊中，盡管陰道栓在貯存期間有抗菌劑存在但細菌保持存活，作為包囊細菌的膜材料的物質是那些在陰道環(huán)境中與水分長期接觸后能釋放出細菌的物質，以及與抗菌劑和微膠囊包被的細菌徹底混合的藥物學上可接受的賦形劑。
13.根據權利要求12所述陰道栓，它還含有有效量的選自于nonoxynol 9和octoxynol 9組成組中的殺精子劑。
14.根據權利要求13所述陰道栓，它還含有有效量的藥物學上可接受的緩沖體系，該體系能將陰道栓的pH值緩沖于3.0至5.0的范圍內。
15.根據權利要求14所述陰道栓，其中的緩沖體系緩沖于4.3至4.5的范圍內。
16.根據權利要求15所述陰道栓，其中抗菌劑選自于由殺藻銨，甲基氯化芐乙氧銨，十六烷基吡啶氯化物，烷基三甲基銨溴化物，洗必太葡萄糖酸酯，以及碘伏組成的組中。
17.根據權利要求16所述陰道栓，它含有至少三種抗菌劑的混合物，其中之一選自于由殺藻銨，甲基氯化芐乙氧銨，十六烷基吡啶氯化物，洗必太葡萄糖酸酯以及碘伏組成的組，其他兩種抗菌劑是咪唑烷基脲和二唑烷基脲。
18.根據權利要求17所述陰道栓，包含有至少106個嗜酸乳桿菌種或其Lactobacillus rhamnosus變種的活細菌。
19.根據權利要求18所述陰道栓，其中的嗜酸乳桿菌或Lactobacillus rhamnosus細菌包囊于海藻酸鈉膜中。
20.根據權利要求18所述陰道栓，其中的嗜酸乳桿菌或Lactobacillus rhamnosus包囊于丙烯酸異丁烯酸共聚物膜中。
21.根據權利要求18所述陰道栓，其中的嗜酸乳桿菌或Lactobacillus rhamnosus包囊于由聚乙烯吡咯烷酮和二乙烯苯組成的膜中。
22.根據權利要求18所述陰道栓，其中的嗜酸乳桿菌或Lactobacillus rhamnosus包囊于由polyvinylpovidone組成的膜中。
23.根據權利要求12所述陰道栓，包含有12至3000mg的殺藻銨或甲基氯化芐乙氧銨或25—4000mg的十六烷基吡啶氯化物，或10—2000mg的洗必太葡萄糖酸酯或25—5000mg的碘伏。
24.根據權利要求12所述陰道栓，它含有大約10—1000mg的咪唑烷基脲或二唑烷基脲。
25.根據權利要求12所述陰道栓，它含有大約50至500mg和nonoxynol 9或octoxynol 9。
26.根據權利要求12所述陰道栓，它還含有能有效地增加子官粘液的粘性所需量的抗壞血酸。
27.根據權利要求26所述陰道栓，它含有40—120mg的抗壞血酸。
28.一種陰道栓，它含有有效量的藥物學上可接受的，可局部使用的抗菌劑，該抗菌劑選自于由12—3000mg量的殺藻銨，12—3000mg量的甲基氯化芐乙氧銨，25—4000mg的十六烷基吡啶氯化物，25—4000mg量的烷基三甲基銨氯化物，以及25—5000mg量的碘伏組成的組；10—1000mg的咪唑烷基脲；10—1000mg的二唑烷基脲；50—500mg的nonoxynol 9或octoxynol 9；40—120mg的抗壞血酸；有效量的藥物學上可接受的緩沖體系，該緩沖體系可將該陰道栓的pH值緩沖于4.3—4.5的范圍內；至少約103個嗜酸乳桿菌種或Lactobacillus rhamnosus變種的活細菌，所述細菌由微膠囊包被的，該膠囊在陰道栓貯存期間盡管由于存在抗菌劑但細菌仍保持存活，用于包囊細菌的膜材料是那些在陰道環(huán)境中長期接觸水氣后能釋放細菌的物質，以及與抗菌劑和微膠囊包被的細菌徹底混合的藥物學上可接受的賦形劑。
29.根據權利要求28所述陰道栓，其中抗菌劑是殺藻銨，并且其中每個陰道栓含有大約120mg的殺藻銨。
30.根據權利要求28所述陰道栓，其中抗菌劑是十六烷基吡啶氯化物，其中每個陰道栓含有大約50—1000mg的十六烷基吡啶氯化物。
31.根據權利要求28所述的陰道栓，其中抗菌劑是洗必太葡萄糖酸酯，其中每個陰道栓含有大約25—1200mg的洗必太葡萄糖酸酯。
32.根據權利要求28所述陰道栓，其中抗菌劑是碘伏，并且每個陰道栓含有約120mg的碘伏。
33.根據權利要求28所述陰道栓，其中細菌是Lacto-bacillus rhamnosus，該細菌包囊于膜材料中，該材料選自于由微包膠膜組成的組，該組材料包括海藻酸鈉膜，丙烯酸異丁烯酸共聚體膜，聚乙烯吡咯烷酮和二乙烯苯膜，以及polyvinylpovidone膜。
34.根據權利要求30所述陰道栓，其總質量接近于約1.2克。
35.根據權利要求33所述陰道栓，它含有作為賦形劑的羥丙基甲基纖維素和二氧化硅。
全文摘要
一種陰道栓或其他類型的陰道passary，例如乳油，泡騰劑或軟膏，包含有作為活性成分的至少一種藥物學上可接受的，局部安全的抗菌劑，如一種選自于殺藻銨，十六烷基吡啶氯化物，洗必太葡萄糖酸酯以碘伏，咪唑烷基脲和二唑烷基脲的藥劑，以及一種微膠囊包被的乳桿菌活菌落。該活乳桿菌以微膠囊包被形式存在于陰道栓中，微膠囊能保護細菌在陰道栓貯存期間免受殺菌劑的作用。當暴露于陰道環(huán)境中時，微膠囊的包被作用被完全打破而釋放出乳桿菌。
文檔編號A61K9/00GK1126071SQ9510608
公開日1996年7月10日 申請日期1995年6月2日 優(yōu)先權日1993年12月3日
發(fā)明者拉里·C·福特 申請人:萊弗實驗有限公司