專利名稱：一種多肽蛋白質(zhì)藥物微球的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及水溶性藥物的微球的制備方法，尤其涉及一種多肽蛋白質(zhì)藥物微球的制備方法。
近十幾年來，藥物控釋微球在醫(yī)藥領(lǐng)域獲得廣泛應(yīng)用。(1)作為各種藥物的控釋及多途徑給藥制劑，如可用作注射、口服、鼻腔吸入等多途徑使用；(2)作為各種化學(xué)栓塞制劑發(fā)揮栓塞及控釋雙重功能；(3)作為抗原的載體實(shí)現(xiàn)一次注射達(dá)到長(zhǎng)期免疫作用。目前，用于控釋微球的載體材料有多種，按來源可分為(1)天然高分子如纖維素、蛋白質(zhì)；(2)合成高分子。按生物降解特性可分為(1)非生物降解型高分子如聚丙烯酸酯及其衍生物；(2)生物降解型高分子如聚酯、聚酸酐、聚原酸酯等，其中聚乳酸(PLA)、聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLGA)，由于其很好的生物相容性及生物降解性已被美國(guó)FDA批準(zhǔn)作為醫(yī)用材料使用?？蒯屛⑶蛑谢钚运幬锟梢允鞘杷缘囊部墒怯H水性的藥物，其中多肽蛋白質(zhì)作為一類新型藥物隨生物工程技術(shù)的發(fā)展引起人們高度的重視。有的已經(jīng)臨床使用，有的顯示出很廣的應(yīng)用前景，如利用胰島素治療糖尿病、環(huán)孢菌素在骨髓移植、器官移植和自身免疫性疾病中已被用作具有殺真菌和抗炎性質(zhì)的免疫抑制劑、促性腺激素釋放激素(LHRH)則可用來治療前列腺癌、子宮內(nèi)膜異位癥等。但多肽蛋白質(zhì)藥物由于在體內(nèi)半衰期短需多次注射給藥才能達(dá)到療效。如經(jīng)生物降解型聚合物包埋成微球后不僅可以控制其釋放速度，減少給藥次數(shù)，還可以防止酶的攻擊使多肽蛋白質(zhì)藥物在體內(nèi)保持生物活性。
制備PLA及PLGA控釋微球常采用的方法是水包油(O/W)乳液一溶劑蒸發(fā)法，但用這種方法制備包埋多肽蛋白質(zhì)類水溶性藥物的控釋微球時(shí)，一方面因多肽蛋白質(zhì)的水溶性導(dǎo)致在制備過程中大量損失，藥物包埋率很低，另一方面多肽蛋白質(zhì)藥物會(huì)因接觸有機(jī)溶劑而變性失活。近年來發(fā)展了水包(油包水)(W/O/W)乳液一溶劑蒸發(fā)技術(shù)來制備多肽蛋白質(zhì)藥物的控釋微球。由于這種方法是使多肽蛋白質(zhì)藥物先溶于水中，然后再分散于有機(jī)相中，減少了多肽蛋白質(zhì)藥物與有機(jī)溶劑接觸發(fā)生變性失活的機(jī)會(huì)，同時(shí)多肽蛋白質(zhì)藥物由內(nèi)水相擴(kuò)散到外水相需經(jīng)過一個(gè)有機(jī)層障礙，因而制備過程中藥物損失量減少。盡管如此，由于在制備W/O/W乳液時(shí)，乳液會(huì)因油膜破裂，內(nèi)水相聚集等原因遭到破壞使藥物包埋率降低，同時(shí)多肽蛋白質(zhì)在水溶液中也會(huì)因劇烈攪拌等導(dǎo)致活性遭到不同程度的破壞。Jeffery等人用W/O/W乳液一溶劑蒸發(fā)技術(shù)制備了包埋卵清蛋白(OVA)的PLGA微球，OVA在PLGA(85∶15)中包埋率僅在15～20％之間。為了進(jìn)一步提高包埋率，Ogawa等人采用明膠水溶液作為內(nèi)水相，先在60℃下將內(nèi)水相乳化于PLGA的二氯甲烷(DCM)溶液中，然后降溫使內(nèi)水相中明膠因凝膠化而固化，限制了多肽蛋白質(zhì)的擴(kuò)散，用這種方法制得的多肽蛋白質(zhì)藥物控釋微球其包埋率可接近100％，但這種方法存在幾個(gè)重要缺點(diǎn)(1)明膠作為內(nèi)水相后微球尺寸由8.1μm增加到42μm，這限制了微球的應(yīng)用范圍(2)明膠應(yīng)用于人體時(shí)可能會(huì)引起免疫反應(yīng)；(3)微球中明膠的存在對(duì)多肽蛋白質(zhì)藥物的控制釋放帶來更復(fù)雜的因素；(4)在60℃下制備W/O乳液時(shí)容易引起某些多肽蛋白質(zhì)變性失活。
本發(fā)明的目的是提供一種多肽蛋白質(zhì)藥物微球的制備方法，為了達(dá)到上述的目的本發(fā)明采取下列措施，該方法內(nèi)水相采用甘油水溶液，甘油體積濃度為1～100％，多肽蛋白質(zhì)藥物濃度為1～100mg/ml，中油相采用二氯甲烷(或氯仿)丙酮混合溶劑，丙酮體積濃度為1～80％，聚乳酸(PLA)或聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLGA)濃度為1～50mg/ml，外水相采用聚乙烯醇(PVA)水溶液，水解度＞90％，濃度為0.5～10％(重量體積比)，制備時(shí)，將內(nèi)水相置于攪拌容器中，在室溫和以每分鐘1000至4000轉(zhuǎn)中速攪拌下，乳化于中油相，形成W/O乳液，在每分鐘400～1200轉(zhuǎn)的低速攪拌下乳化于外水相中，W/O/W乳液在5～40℃下電磁攪拌蒸發(fā)中油相溶劑，微球硬化后，離心分離，洗滌，真空干燥。
本發(fā)明采用甘油水溶液作為內(nèi)水相，用W/O/W乳液一溶劑蒸發(fā)技術(shù)制備了包埋多肽蛋白質(zhì)藥物的PLA、PLGA控釋微球，這一方法的主要優(yōu)點(diǎn)在于(1)甘油作為內(nèi)水相穩(wěn)定劑有利于保持多肽蛋白質(zhì)藥物的活性；(2)W/O乳液可在室溫或低于室溫下制備，減少多肽蛋白質(zhì)失活的機(jī)會(huì)；(3)與W/O/W法相比較，甘油的加入可以使多肽蛋白質(zhì)藥物的包埋率提高20～50％；(4)甘油水溶液作為內(nèi)水相時(shí)，中油相可以采用二氯甲烷與丙酮的混和液作為PLA及PLGA的溶劑，使微球粒徑減少，以滿足更多的使用要求。
下面結(jié)合實(shí)施例作進(jìn)一步詳細(xì)說明。
本發(fā)明內(nèi)水相采用甘油水溶液，甘油體積濃度為5～70％，多肽蛋白質(zhì)藥物濃度為1～50mg/ml，中油相采用二氯甲烷(或氯仿)丙酮混合溶劑，丙酮體積濃度為1～50％，聚酸(PLA)或聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLGA)濃度為1～30mg/ml。外水相采用聚乙烯醇(PVA)水溶液濃度為0.5～10％(重量體積比)制備時(shí)，將內(nèi)水相置于攪拌容器中，在室溫和以每分鐘1000至4000轉(zhuǎn)中速攪拌下，乳化于中油相，形成W/O乳液，在每分鐘400～1200轉(zhuǎn)的低速攪拌下，乳化于中油相中，W/O/W乳液在5～40℃下電磁攪拌蒸發(fā)中油相溶劑，微球硬化后，離心分離，洗滌，真空干燥。多肽蛋白質(zhì)藥物通常采用激素，生長(zhǎng)因子，免疫球蛋白，多肽疫苗，環(huán)孢菌素，細(xì)胞色素，干擾素，淋巴因子。
實(shí)施例1內(nèi)水相采用5ml濃度為3mg/ml的牛血清蛋白(BSA)(購(gòu)自Sigma公司，Mw＝67000)的甘油水溶液，甘油體積濃度為20％，中油相為25ml濃度為12mg/ml的PLA-二氯甲烷溶液(PLA自制，分子量＝58000)，外水相為1.25％(W/V)PVA水溶液，制備時(shí)內(nèi)水相置于攪拌容器中在中速攪拌(2000rpm)下乳化于中油相，形成的W/O乳液在低速攪拌(1200rpm)下乳化于外水相中，W/O/W乳液在37℃下電磁攪拌蒸發(fā)中油相溶劑；微球硬化后離心分離并洗滌，真空干燥，BSA包埋率為90.3％，微球數(shù)均粒徑為5.0μm。
實(shí)施例2內(nèi)水相采用5ml的濃度為3mg/ml的肌紅蛋白(MG)(Sigms公司產(chǎn)品，分子量為18000)甘油水溶液(甘油體積濃度為20％)，其它條件與實(shí)施例1相同。包埋率為95％，微球數(shù)均粒徑為3.2μm。
實(shí)施例3內(nèi)水相采用5ml的濃度為3mg/ml的人絨毛促性腺素(hCG)(Sigma公司產(chǎn)品，分子量為23000)的甘油水溶液(甘油體積濃度5％)，中油相為25ml濃度為12mg/ml的PLGA(90∶10)(PLGA自制，分子量為60000)的二氯甲烷溶液，其余同實(shí)施例1。hCG包埋率為90％，數(shù)均粒徑5.4μm。
實(shí)施例4中油相為25ml濃度為12mg/ml的PLA(分子量為58000)的二氯甲烷一丙酮混合溶液，丙酮體積濃度為40％，其余同實(shí)施例1。BSA包埋率為95％，數(shù)均粒徑0.8μm。
權(quán)利要求
1.一種多肽蛋白質(zhì)藥物微球的制備方法，其特征在于內(nèi)水相采用甘油水溶液，甘油體積濃度為1～100％，多肽蛋白質(zhì)藥物濃度為1～100mg/ml，中油相采用二氯甲烷(或氯仿)丙酮混合溶劑，丙酮體積濃度為1～80％，聚乳酸(PLA)或聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLGA)濃度1～50mg/ml，外水相采用聚乙烯醇(PVA)水溶液，水解度＞90％，濃度為0.5～10％(重量體積比)，制備時(shí)，將內(nèi)水相置于攪拌容器中，在室溫和以每分鐘1000至4000轉(zhuǎn)中速攪拌下，乳化于中油相，形成W/O乳液，在每分鐘400～1200轉(zhuǎn)的低速攪拌下乳化于外水相中，W/O乳液在5～40℃下電磁攪拌蒸發(fā)中油相溶劑，微球硬化后，離心分離，洗滌，真空干燥。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種多肽蛋白質(zhì)藥物微球的制備方法，其特征在于所說的內(nèi)水相中甘油水溶液，甘油體積濃度為5～70％，多肽蛋白質(zhì)藥物濃度為1～50mg/ml。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種多肽蛋白質(zhì)藥物微球的制備方法，其特征在于所說的中油相中丙酮的體積濃度為1～50％，聚乳酸(PLA)或聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLGA)濃度為1～30mg/ml。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種多肽蛋白質(zhì)藥物微球的制備方法，其特征在于所說的多肽蛋白藥物為激素，酶，生長(zhǎng)因子，免疫球蛋白，多肽疫苗，環(huán)孢菌素，細(xì)胞色素，干擾素，淋巴因子。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種多肽蛋白質(zhì)藥物微球的制備方法，該方法內(nèi)水相采用甘油水溶液和多肽蛋白質(zhì)藥物，中油相采用聚乳酸或聚(丙交酯-共-乙交酯)的二氯甲烷丙酮混合溶液，外水相采用含聚乙烯醇的水溶液，制備時(shí)將內(nèi)水相置于攪拌容器中以中速攪拌下乳化于中油相中，再以低速攪拌下乳化于外水相中，然后蒸發(fā)中油相溶劑，微球硬化后，離心分離，洗滌，真空干燥。本發(fā)明可使藥物的包埋率提高20～50％，微球粒徑減小，能滿足更多的使用要求。
文檔編號(hào)A61K9/52GK1122690SQ9510720
公開日1996年5月22日 申請(qǐng)日期1995年6月9日 優(yōu)先權(quán)日1995年6月9日
發(fā)明者朱康杰, 蔣洪亮 申請(qǐng)人:浙江大學(xué)