專利名稱：增加天然組織的交聯(lián)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明的技術(shù)范圍本發(fā)明涉及使用交聯(lián)劑如戊二醛對(duì)生物組織如心臟瓣膜進(jìn)行加工。
本發(fā)明的背景情況移植前生物修復(fù)組織的制備，通常包括穩(wěn)定化處理，使它能抵抗以后的體內(nèi)酶解。這種處理又常包括使組織上或組織內(nèi)的分子特別是膠原交聯(lián)。因此，使用了各種醛，包括乙二醛、甲醛和戊二醛。但戊二醛是慣常選用的，部分原因是它可在水溶液的生理pH條件下使用。除了使組織交聯(lián)外，戊二醛還是良好的清毒劑，并能降低移植后組織的抗原性。
而且，使用戊二醛有助于組織形成較大的熱穩(wěn)定性、較大的柔韌性(與常規(guī)交聯(lián)技術(shù)相比)及提高耐久性。
但戊二醛也有細(xì)胞毒性——即使用低濃度，也需要漂洗組織以清除殘留的戊二醛。在通常用于交聯(lián)生物組織的濃度——約0.6％V/V，甚至低到成功地使用的0.2％——戊二醛的毒性仍是一個(gè)較大的問題。
本發(fā)明概要本發(fā)明為用低濃度交聯(lián)劑交聯(lián)或固定膠原類生物組織，如豬心臟瓣膜提供了一種改進(jìn)方法。在保持或提高受處理組織的耐久性和柔韌性的同時(shí)，降低了交聯(lián)劑的殘留量。
因本加工法使用水傳送系統(tǒng)，避免了應(yīng)用不僅可能有毒而且會(huì)使含膠原的物質(zhì)(即靜脈、動(dòng)脈、心臟瓣膜等)脫水、變性或損壞的有機(jī)溶劑，如丙酮。用低濃度戊二醛固定的其它特性包括(1)分子內(nèi)交聯(lián)程度相對(duì)地高，提供了比較柔軟的組織。對(duì)心臟瓣膜說，這意味著改進(jìn)了它的血液動(dòng)力學(xué)性質(zhì)；對(duì)血管移植物說，這意味著它具有較大的抗扭結(jié)性。(2)短鏈分子內(nèi)交聯(lián)(沿膠原鏈)相對(duì)地高，可保護(hù)組織以免引起膠原蛋白基質(zhì)中鏈的斷裂。這是與在高濃度戊二醛交聯(lián)中占優(yōu)勢(shì)的長(zhǎng)鏈分子間交聯(lián)(膠原鏈之間)相比而言。(3)抗鈣化。生物修復(fù)產(chǎn)品如生物修復(fù)心臟瓣膜的鈣化，是一種有大量作用因素的十分復(fù)雜的過程。其中之一是，有殘余游離的戊二醛時(shí)易于發(fā)生鈣化。在低濃度戊二醛中固定，通常降低了殘留在組織中的戊二醛量。而且，當(dāng)在組織裂縫附近也趨向出現(xiàn)鈣化時(shí)，在一定時(shí)間中由低濃度交聯(lián)得到的比較柔軟的組織不太可能發(fā)生斷裂。
本發(fā)明適用于大量的血管修復(fù)術(shù)，于小直徑血管更換場(chǎng)合尤其有價(jià)值。它在冠狀動(dòng)脈入口分流術(shù)操作中有用，特別當(dāng)病人以前作過冠狀動(dòng)脈更換手術(shù)及充分的隱靜脈切除或乳房?jī)?nèi)動(dòng)脈切除。因按本發(fā)明進(jìn)行的修復(fù)術(shù)可等于或優(yōu)于隱靜脈移植，所以使用這種修復(fù)術(shù)會(huì)減少對(duì)隱靜脈切除的需要。它也可應(yīng)用于系統(tǒng)的微血管更換，如手或足的微血管。
圖的簡(jiǎn)短說明

圖1.在0.01％和0.05％戊二醛中交聯(lián)的牛頸動(dòng)脈抗張強(qiáng)度的比較圖2.在0.0％和0.05％戊二醛中交聯(lián)的牛頸動(dòng)脈縫合保持強(qiáng)度的比較圖3.不同固定條件對(duì)牛正中動(dòng)脈抗張強(qiáng)度和縫合保持強(qiáng)度的影響圖4.不同固定條件對(duì)牛正中動(dòng)脈爆裂強(qiáng)度的影響圖5.低濃度戊二醛分子內(nèi)交聯(lián)和高濃度戊二醛分子間交聯(lián)的不同圖6.在0.5％和0.05％戊二醛中交聯(lián)的小葉的收縮溫度比較圖7.電子束輻射對(duì)壓力下降的影響圖8.電子束對(duì)有效孔面積的影響圖9.主動(dòng)脈根組織的固定時(shí)間對(duì)其收縮溫度的關(guān)系本發(fā)明的詳細(xì)說明按本發(fā)明的方法，包括把生物組織暴露在低于約0.1％體積的交聯(lián)溶液中處理或加工，最好是大約0.01％至0.099％體積的固定溶液中。在本發(fā)明的最好增強(qiáng)交聯(lián)法中，固定溶液是含有戊二醛的緩沖溶液。
這里使用的術(shù)語“生物組織”是指可能來自不同動(dòng)物種的含膠原材料，通常是哺乳動(dòng)物。這種生物組織通常是適于移植的軟組織，如生物修復(fù)組織或相似物，但本發(fā)明不受此限。具體例子包括，但不限于，心臟瓣膜，特別是豬心臟瓣膜；主動(dòng)脈根，壁和/或小葉；心包，最好是牛心包或相似物，與來自心包的產(chǎn)品如心包片；來自結(jié)締組織的材料，如硬腦膜，同種移植組織，如主動(dòng)脈同種移植物和隱靜脈旁路移植物；腱、韌帶、皮膚片；血管，特別是牛動(dòng)脈和靜脈，及人臍組織，如靜脈；骨；及類似物。任何其它已知或?qū)⒅獣?huì)適于按本發(fā)明加工的生物來源材料，都在本發(fā)明的考慮之內(nèi)。
按本發(fā)明，從其來源處移植而來的生物組織可在暴露于交聯(lián)劑之前以任何合適的方式加工。通常，生物組織被仔細(xì)清理，然后用濾過的蛋白水解酶濃溶液消化，因而從生物組織大量去除了抗原組織。在利用天然組織時(shí)，清理步驟通常包括從組織剝除外膜及不合需要的脂肪與肌肉組織。
把生物組織暴露于交聯(lián)劑，正如這里所使用的，歸入任何使生物組織與交聯(lián)劑接觸的方法。在本發(fā)明最好的增強(qiáng)交聯(lián)法中，把組織暴露于交聯(lián)劑是指把組織浸泡在交聯(lián)劑中。
當(dāng)組織浸在給定濃度的交聯(lián)劑如醛類，如戊二醛的溶液中時(shí)，組織小間隙中的戊二醛濃度將與周圍溶液平衡，使組織經(jīng)歷了確實(shí)的低濃度交聯(lián)。但當(dāng)戊二醛經(jīng)由一噴霧器傳送時(shí)，單體的戊二醛是直接沉積在基質(zhì)的表面，不管汽化前溶液的始濃度怎樣，都將是純戊二醛與組織接觸，所以組織中的濃度，如果不是不可能，也是很難控制的。
通常按本發(fā)明使用的戊二醛，是得自例如電子顯微科學(xué)(FortWashington，PA)的商品生物學(xué)級(jí)別50％溶液，這種合用的商品戊二醛也可以是各種其它級(jí)別、純度和/或濃度。生物學(xué)級(jí)別的戊二醛通常不需要額外提純，但可能要把最后的交聯(lián)溶液通過0.2μ孔的親水膜濾器以除去任何生物學(xué)的污染物。
按本發(fā)明，生物組織可暴露于含有戊二醛的合適緩沖液的固定溶液。本發(fā)明所使用的合適緩沖液，是那些具有足以保持生理上可接受的pH的緩沖能力、對(duì)生物組織不會(huì)引起實(shí)質(zhì)性損害和/或不干擾處理過程的緩沖液。代表性的緩沖液包括(但不限于)磷酸鹽緩沖的生理鹽水(PBS)和有機(jī)緩沖液如N-(2-羥乙基)哌嗪-N′-(2-乙磺酸)(HEPES)或嗎啉丙磺酸(MOPS)以及包括硼酸鹽、重碳酸鹽、碳酸鹽、卡可酸鹽或檸檬酸鹽等的緩沖液。最好的固定溶液是低于0.1％V/V戊二醛的檸檬酸鹽緩沖液。
按本發(fā)明的通常規(guī)程，生物組織可在足以引起組織內(nèi)和組織上的膠原交聯(lián)的時(shí)間和溫度條件下暴露于固定溶液。例如，生物組織可從大約4℃到37℃暴露于緩沖的戊二醛溶液，最好約20℃；pH大約6到8，最好約6.3到6.5，時(shí)間可大約10天，最好約2到5天。
按本發(fā)明，技術(shù)熟練的人會(huì)認(rèn)識(shí)到，規(guī)程中的某些參數(shù)可按要實(shí)現(xiàn)的特定意圖予以變更。這些參數(shù)包括(但不限于)戊二醛濃度、溶液組成、pH和離子強(qiáng)度、生物組織暴露于戊二醛的時(shí)間和溫度、組織對(duì)溶液體積的比率以及起始固定時(shí)生物組織的結(jié)構(gòu)。因此本發(fā)明是不受限制的。
通常，交聯(lián)的生物組織而后用任何合適的漂洗物洗凈。在最好的增強(qiáng)交聯(lián)法中，漂洗劑是消毒的生理鹽水。組織可用許多體積的消毒的生理鹽水漂洗近24小時(shí)以上，或直到組織中殘留的加工化學(xué)藥品的濃度低于被認(rèn)為有毒的水平(近1ppm)。
技術(shù)熟練的人也會(huì)認(rèn)識(shí)到，本發(fā)明可包括另外的加工過程。如，交聯(lián)的生物組織可暴露于一種或多種抗鈣化劑、一種或多種生物能壘(bioburden)還原劑、至少一種漂洗溶液以及一種或多種消毒劑或操作規(guī)程。而且，像以下更詳細(xì)地揭示的，按本發(fā)明交聯(lián)的生物組織可在最后消毒以前貯存約一年或更長(zhǎng)時(shí)間。代表性的另外加工過程更詳細(xì)地?cái)⑹鲇谙隆?br> 生物能壘還原本發(fā)明的增強(qiáng)交聯(lián)法(embodiment)可包括把交聯(lián)的生物組織暴露于一種或多種生物能壘還原劑，通常約10小時(shí)，最好約2到4小時(shí)。例如，上面提到的用戊二醛處理的豬心臟瓣膜而后可暴露于約含1％-5％戊二醛、1％-6％甲醛和15％-25％乙醇的緩沖液中。常用的緩沖液包括PBS、HEPES、磷酸鹽和檸檬酸鹽緩沖液。
中間體貯存本發(fā)明的增強(qiáng)交聯(lián)法可包括在最后消毒前把交聯(lián)的生物組織貯存一年或更長(zhǎng)時(shí)間。例如，按本發(fā)明用戊二醛交聯(lián)的豬心臟瓣膜可在室溫下暫存于用PBS、檸檬酸鹽或其相似物緩沖的0.5％戊二醛溶液中。
抗鈣化處理本發(fā)明的增強(qiáng)交聯(lián)法可包括把交聯(lián)的生物組織暴露于一種或多種設(shè)計(jì)來降低或抑制移植后鈣化作用的試劑。工藝上已知有許多抗鈣化試劑。例如，為了降低或抑制鈣化，可把交聯(lián)的生物組織暴露于醇和/或鋁鹽中。在典型的加工過程中，交聯(lián)的生物組織被浸在含有大于50％的低級(jí)脂肪族醇的溶液中直到足以使生物組織抗鈣化，通常大約96小時(shí)。要選用低級(jí)脂肪族醇(C1到C3)如甲醇、乙醇、丙醇或異丙醇。在最好的增強(qiáng)交聯(lián)法中，所用的醇是乙醇。醇處理的時(shí)間長(zhǎng)短可由技術(shù)熟練的人予以以變更。在本發(fā)明的增強(qiáng)交聯(lián)法中，把生物組織浸在醇處理溶液中作為例證的暴露時(shí)間取好在大約24到96小時(shí)之間。
在本發(fā)明的另一種增強(qiáng)交聯(lián)法中，抗鈣化劑可包括多價(jià)金屬陽離子，如鋁鹽或鐵鹽。例如，交聯(lián)的生物組織可浸在含有0.1M到0.001M AlCl3溶液中到足以使生物組織抗鈣化。
按本發(fā)明，交聯(lián)的生物組織可貯存在醇戊二醛溶液中，最好它的量足以維持鈣化抑制和/或消毒。例如，生物組織可貯存于緩沖的含有戊二醛的醇溶液中，通常醇含量大于60％，最好約60％和80％之間，戊二醛含量低于0.5％，最好約0，2％到0.5％之間。
而后，可把抑制鈣化和/或交聯(lián)的生物組織安放或包裝在容器中。按本發(fā)明最好的增強(qiáng)交聯(lián)法，生物組織于生理鹽水中，在最終消毒前，被包裝和密封在它的最后容器中。最好的包裝是指放在適宜于消毒、貯存和/或運(yùn)送的容器中。
容器可是玻璃或多聚體塑料構(gòu)造的，如聚丙烯、聚乙烯和/或環(huán)氧樹脂。本發(fā)明不受所用容器和密封類型的限制，其它材料以及混合體、融合體和/或共聚體都可用。
交聯(lián)的、包裝的生物組織可像下面指出的那樣消毒或在消毒前貯存約一年或更長(zhǎng)時(shí)間。按本發(fā)明，貯存包括長(zhǎng)期貯存如6個(gè)月、12個(gè)月或約5年及更長(zhǎng)時(shí)間。
消毒按本發(fā)明方法，也可包括組織的消毒。這里所用的“消毒”是指把生物組織暴露于消毒用的加速電子束，即電子束。組成電子束的粒子束最好包含有定向的轟擊(只從一個(gè)方向轟擊)與單側(cè)或多側(cè)照射。按本發(fā)明交聯(lián)的生物組織可以消毒，最好在包裝后。合適的消毒規(guī)程包括(但不限于)X線或γ輻射、電子束輻射及相似物。交聯(lián)組織的最好消毒法是把包裝在生理鹽水中的生物組織暴露于加速的電子下。例如，生物組織可經(jīng)受電子束輻射到劑量約25KGy或約1-10分鐘，依材料大小而定。
電子束加工優(yōu)于常規(guī)γ輻射主要是，能量被應(yīng)用時(shí)的加工速度或高速率可以控制，這常使消毒的費(fèi)用變得較低。
按本發(fā)明，生物組織是通過它暴露于足以有效消毒的電子束進(jìn)行處理的。另外，本發(fā)明提供的電子束輻射消毒的生物組織顯示出增強(qiáng)了效能特性。按本發(fā)明的方法和組織具有減少感染危險(xiǎn)和不需要無菌操作規(guī)程的額外優(yōu)點(diǎn)。而且，本發(fā)明方法加工組織使用的試劑較少，需要的加工較少，為勞力、試劑、時(shí)間和人員提供的費(fèi)用較低。
電子束輻射消毒有效地避免了使用有毒的消毒化學(xué)藥品。而且，電子束消毒所需的輻射量不會(huì)使生物組織明顯降解，因此提供了更耐久的移植組織。
γ輻射的劑量率接近每分鐘110grays，電子束的劑量率接近每分鐘7800grays。所以，就γ輻射說，暴露時(shí)間顯然較長(zhǎng)，低劑量需要延長(zhǎng)有效消毒時(shí)間。與γ輻射截然不同，電子束照射所含的高劑量率促進(jìn)氧氣擴(kuò)散到生物組織中去，擴(kuò)散的速度不足以參與可能有助于組織和多聚體降解的自由基形成反應(yīng)。這在那些包括把生物組織于輻射前放進(jìn)容器中的增強(qiáng)交聯(lián)法特別有利，因?yàn)榭墒菇M織和容器中的多聚體降解減到最小程度。
而且，電子束比γ射線高的劑量率允許有較高的消毒加工速率，一般要高一個(gè)數(shù)量級(jí)。
相對(duì)而言，γ輻射穿透同一材料的能力接近10倍于10MeV電子。
γ射線引起被消毒材料原子內(nèi)部電子的激發(fā)。另一方面，電子束提供高能電子到材料表面，接著材料表面的電子穿入物質(zhì)，依次使其后的電子運(yùn)動(dòng)。
因?yàn)殡娮邮膭┝柯氏鄬?duì)地高，氧不能以參與可導(dǎo)致材料降解的氧化反應(yīng)所需的速率擴(kuò)散到材料中去。
而且，包裝和組織中降解的防止，允許組織作最終消毒，即組織的消毒是在它最后的密封的包裝中進(jìn)行。這樣，本發(fā)明避免了對(duì)費(fèi)用昂貴的無菌操作技術(shù)的需要，提供了無菌保證，只要包裝完整直到組織準(zhǔn)備應(yīng)用時(shí)。
當(dāng)高能電子穿透表面時(shí)，它們與材料原子中的電子發(fā)生撞擊，后者依次反沖如撞擊使更多的電子運(yùn)動(dòng)。所以由相對(duì)地少的穿透表面的電子，在材料中產(chǎn)生了大量電子貯存能量，主要靠離子和自由基的產(chǎn)生。這過程稱作集結(jié)(buildup)，在這過程中，從材料表面下的深處傳送著較高劑量的電子，在材料表面上原有的電子束及其反沖電子不再產(chǎn)生電離作用。
按本發(fā)明，電子束輻射量足以消毒生物組織，而在有些增強(qiáng)交聯(lián)法中電子束輻射量足以消毒包裝在其最后容器中的生物組織。技術(shù)熟練的人會(huì)認(rèn)識(shí)到并能決定適合于特定組織和基于所用加速劑特性的消毒劑量和時(shí)間。
通常，生物組織一側(cè)暴露于電子束直到輻射的消毒劑量被吸收。吸收的輻射劑量以KGy表示。1KGy等于每kg材料貯存1000焦耳能量。例如，生物組織受照射的劑量可達(dá)到接近25KGy或更多。
消毒效果可容易地用常規(guī)的微生物學(xué)技術(shù)測(cè)定，例如包括用合適的生物指示劑測(cè)定每一批受照射的生物組織，或?qū)⒔M織與培養(yǎng)基接觸并溫育以測(cè)定組織的消毒情況。劑量也可用放射色譜染色薄膜測(cè)定。這種薄膜，通常在γ射線場(chǎng)合，通過參考國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)被校準(zhǔn)。
照射引起的生物組織的降解也可用熟知的和常規(guī)的試驗(yàn)和標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定，如收縮溫度Ts的降低、對(duì)酶作用如膠原酶的敏感性、降解產(chǎn)物如膠原片段的可抽提性、及物理性質(zhì)如抗張強(qiáng)度的降低。
按本發(fā)明的通常規(guī)程，生物組織可在足以引起其內(nèi)部和表面的膠原交聯(lián)的時(shí)間和溫度條件下暴露于固定溶液。例如，生物組織可從大約4℃到37℃暴露于緩沖的戊二醛溶液，最好約20℃；pH約6到8，最好6.3到6.5；時(shí)間大約10天，最好約2到5天。
前面提到的步驟結(jié)合起來產(chǎn)生的修復(fù)術(shù)比用其它加工法產(chǎn)生的修復(fù)術(shù)，具有更大的強(qiáng)度和柔韌性、抗原性低及更便于使用。
長(zhǎng)期貯存在本發(fā)明的另一增強(qiáng)交聯(lián)法，按本發(fā)明交聯(lián)的生物組織可包裝在近0.5％戊二醛溶液中。用無菌技術(shù)，生物組織可用消毒的生理鹽水(0.9％NaCl)徹底漂凈。生理鹽水漂洗的目的是降低組織表面和組織間隙中殘留的戊二醛濃度，這樣使在病人體內(nèi)發(fā)生有毒反應(yīng)的機(jī)會(huì)降到最小。生物組織可放入塑料或多聚體容器中，注滿消毒的生理鹽水，加蓋或密封。產(chǎn)品加蓋應(yīng)是長(zhǎng)期密封，在移植前才能開封。
本發(fā)明提供考慮到在強(qiáng)度、柔韌性、低抗原性方面改進(jìn)的生物組織。這些特性是特別令人期望的，這是由于移植生物組織步驟的緊迫性以及身體產(chǎn)生排斥的可能性。就有些生物組織的移植步驟說，生物組織必須抗扭結(jié)、有好的縫合穿孔性與迅速封閉縫孔的性能?？p合保持強(qiáng)度即抗張力的能力，必須高。另外，移植物須有高的抗爆裂能力以承受可能的高收縮壓，以及抗動(dòng)脈瘤形成。強(qiáng)度不夠和/或抗原性高的移植物對(duì)病人可有潛在致命性。
按本發(fā)明提出的修復(fù)術(shù)可包裝成試劑盒，最好是消毒的濕包裝在0.9％NaCl溶液中。選擇這種附加成分對(duì)技術(shù)熟練程度較差者是合適的。
例子例1.從當(dāng)?shù)丶庸?chǎng)所(牛、豬、羊等)取得新鮮組織(如血管、心臟、心臟瓣膜或心包)并收在冰冷的生理鹽水(0.9％NaCl)中。組織或立即分割成小塊或放進(jìn)新鮮的消毒生理鹽水中冷藏過夜。從所要的組織仔細(xì)除去不需要的組織如動(dòng)物脂肪、骨骼肌、心肌、骨、氣管等，然后再用新鮮的消毒生理鹽水漂洗并浸泡其中。
雖然本技術(shù)以各種濃度戊二醛進(jìn)行了操作，但接近0.03％V/V的戊二醛提供了防輻射性質(zhì)，并且交聯(lián)時(shí)間適合于所制造時(shí)間表內(nèi)的時(shí)間。
配10l、50mM檸檬酸鹽緩沖的0.03％(V/V)戊二醛的步驟如下(1)50mM檸檬酸鹽緩沖液按下列配方制備(10l)取9.0l消毒的無離子水加140.0g檸檬酸鈉、5.0g檸檬酸單堿和38.6gNaCl加消毒的無離子水到溶液體積達(dá)到10.0l。
(2)取9.0l步驟(1)制備的50mM檸檬酸鹽緩沖液加6.0ml 50％生物學(xué)級(jí)戊二醛加步驟(1)制備的50mM檸檬酸鹽緩沖液到溶液體積達(dá)到10.0l。
(3)用HCl或NaOH把溶液pH調(diào)到6.4.0±0.05然后在室溫下(20-25℃)把組織浸在戊二醛溶液中進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)。如收縮溫度曲線所示(見圖9)，隨固定時(shí)間行進(jìn)，交聯(lián)數(shù)量增加。溶液中戊二醛濃度隨著被組織耗用于形成聚戊二醛交聯(lián)物而下降。所以可期望，在整個(gè)交聯(lián)反應(yīng)始終，間隙中充滿了固定溶液。因?yàn)榇蠖鄶?shù)交聯(lián)較早地形成，建議在反應(yīng)開始后約8小時(shí)更換溶液，以后每日換一次。
把組織暴露于戊二醛溶液進(jìn)行加工的時(shí)間范圍從大約24到120小時(shí)，依溶液中戊二醛濃度而定。一般，戊二醛濃度高所需固定時(shí)間短，戊二醛濃度低所需固定時(shí)間長(zhǎng)。對(duì)0.03％溶液說，暴露近72小時(shí)足以使組織間隙內(nèi)的交聯(lián)密度達(dá)到最大。這需要收縮溫度接近80-89℃，依所用組織類型而定。
當(dāng)交聯(lián)反應(yīng)結(jié)束時(shí)，把組織浸沒在含有2％(V/V)戊二醛、3％(V/V)甲醛和20％(V/V)乙醇的消毒溶液中。這種多成分消毒液在漂洗和包裝前減少了任何殘留在組織上的生物能壘。
然后用足夠的消毒生理鹽水徹底漂凈組織，使存在的加工化學(xué)藥品減到最少。這通常需要用40或50l，洗40小時(shí)以上。漂洗時(shí)間應(yīng)注意掌握，因?yàn)闅堄辔飶慕M織擴(kuò)散是依賴時(shí)間的現(xiàn)象。在最后漂凈后，把組織放進(jìn)消毒的容器中(瓣膜罐、血管移植物小瓶等)，并注滿消毒的生理鹽水。而后把包裝長(zhǎng)期密封。
注意用多成分消毒液對(duì)生物能壘還原過程后的組織實(shí)施的所有操作，應(yīng)該盡可能無菌進(jìn)行，使電子束消毒前的污染程度減到最小。
例2.為了評(píng)估不同濃度戊二醛對(duì)牛頸動(dòng)脈血管修復(fù)物物理性質(zhì)的影響，進(jìn)行了二個(gè)相同的實(shí)驗(yàn)。
動(dòng)脈放在冷的消毒生理鹽水(0.9％NaCl)中。從血管組織剝?nèi)ネ獠拷M織如脂肪、骨、軟骨、結(jié)締組織等。用檸酸鹽緩沖的無花果蛋白酶溶液消化動(dòng)脈以除去平滑肌組織中指定的部分。把動(dòng)脈徹底漂凈并分別放進(jìn)二個(gè)含有戊二醛準(zhǔn)備使組織中膠原成分交聯(lián)的罐中。一個(gè)罐含有50mM檸檬酸鹽緩沖的0.01％戊二醛；另一個(gè)罐含有50mM的檸檬酸鹽緩沖的0.05％戊二醛。動(dòng)脈在0.01％溶液中交聯(lián)近5天，在0.05％溶液中交聯(lián)近2天，交聯(lián)反應(yīng)完成后，所有動(dòng)脈放入50mM檸檬酸鹽緩沖的2％戊二醛溶液中消毒。
然后，鑒定組織樣品的徑向抗張強(qiáng)度和縫合保持強(qiáng)度。徑向抗張強(qiáng)度試驗(yàn)包括切割一段交聯(lián)的頸動(dòng)脈，作縱向切口，及在一種器械如Instron上徑向牽拉組織直到破裂?？p合保持強(qiáng)度試驗(yàn)包括在離組織樣品橫截面切割邊緣特定距離處插入一圈外科縫線，如5-0 PTFE浸透的聚酯縫線。例如，這距離即咬合長(zhǎng)度大約3mM。在一種器械如Instron上牽拉縫線直到組織斷裂?？箯垙?qiáng)度和縫合保持強(qiáng)度試驗(yàn)的結(jié)果分別表示在圖1和圖2。
抗張強(qiáng)度試驗(yàn)結(jié)果顯示，沒有組織強(qiáng)度的明顯差別可歸因于固定溶液濃度的改變?？此茖挻蟮恼`差條帶是由在生物組織中找到的內(nèi)在差別引起。
特別是，縫合保持強(qiáng)度顯出一種傾向，在第一批和第二批中，兩種濃度的強(qiáng)度都較低。這最可能是酶促消化過程不同的結(jié)果。每次無花果蛋白酶溶液的活性都稍有不同。換句話說，可能為第二批制備的消化溶液的酶活性比為第一批制備的稍高。不管怎樣，同一批內(nèi)的強(qiáng)度差別可忽略不計(jì)。
例3 作了一個(gè)實(shí)驗(yàn)以評(píng)估不同濃度戊二醛對(duì)牛正中動(dòng)脈血管修復(fù)物一些物理性質(zhì)的影響。組織如例2所述加工到交聯(lián)前一步。消化過的動(dòng)脈分別放進(jìn)三個(gè)交聯(lián)罐。罐1含有50mM檸檬酸鹽緩沖的0.01戊二醛；罐2含有50mM檸檬酸鹽緩沖的0.075％戊二醛；罐3含有50mM檸檬酸鹽緩沖的2.0％戊二醛。動(dòng)脈在每一個(gè)固定罐中留存到交聯(lián)反應(yīng)完成或大約4天。待交聯(lián)反應(yīng)完成，從罐1和罐2各取出一半動(dòng)脈分別放入50mM檸檬膠鹽緩沖的2％戊二醛溶液中消毒。另一半動(dòng)脈留存在原溶液中。24小時(shí)后，所有動(dòng)脈各放入含有40％乙醇的玻璃瓶中并加蓋。然后每組樣品經(jīng)受下列試驗(yàn)徑向抗張強(qiáng)度、縫合保持強(qiáng)度和爆裂強(qiáng)度。
圖3顯示本實(shí)驗(yàn)每種條件下加工的組織的徑向抗張強(qiáng)度和縫合保持強(qiáng)度非常相似。兩種極端條件(0.01％和2.0％)的特別有趣，因?yàn)槠鋽?shù)據(jù)代表較低的終極范圍。這數(shù)據(jù)否定了工業(yè)中持有的關(guān)于高濃度固定導(dǎo)致高的熱穩(wěn)定性以致導(dǎo)致高強(qiáng)度的非常普遍的看法。這些結(jié)果與圖6的收縮溫度數(shù)據(jù)一樣，顯示情況不是那樣。0.01％/2％組的抗張強(qiáng)度比其它組稍低的現(xiàn)象被認(rèn)作一種假象。期望以后用2％戊二醛的處理要說有什么不同，就是將會(huì)強(qiáng)化組織而不是削弱它。
圖4顯示爆裂強(qiáng)度試驗(yàn)結(jié)果。血管修復(fù)物樣品用水充脹到它爆裂，爆裂時(shí)的內(nèi)部壓力記作爆裂強(qiáng)度。再次看一下極端條件的情形，結(jié)果幾乎是相同的，雖然低戊二醛試驗(yàn)組把戊二醛濃度定在常規(guī)2％交聯(lián)的1/200。
例4 圖5是由低戊二醛產(chǎn)生的短鏈分子內(nèi)交聯(lián)形成與高-戊二醛固定產(chǎn)生的長(zhǎng)鏈分子間交聯(lián)形成的簡(jiǎn)化表示。這圖形有助于顯示，在分子內(nèi)交聯(lián)存在時(shí)，膠原鏈可保持較多的完整性，即使肽鍵因暴露于輻射而斷裂。
通過測(cè)量給定樣品的收縮溫度或變性溫度，可以分析組織的交聯(lián)密度。用低戊二醛交聯(lián)的組織形成較高的分子內(nèi)交聯(lián)密度，這可用其收縮溫度比常規(guī)固定的組織高表示。這種相互關(guān)系被用0.5％和0.05％戊二醛分別交聯(lián)的二組十五個(gè)豬主動(dòng)脈瓣膜小葉所揭示。收縮溫度由差別掃描量熱法測(cè)定，結(jié)果包括在圖6中。
例5 實(shí)驗(yàn)顯示，暴露于電子束輻射的戊二醛交聯(lián)的組織表現(xiàn)出血液動(dòng)力學(xué)行為特性增強(qiáng)，如柔韌性。柔韌性提高的證據(jù)，由測(cè)定血流經(jīng)過心臟瓣膜時(shí)的壓力下降(從心臟瓣膜的流入一側(cè)到流出一側(cè)的壓力變化)提供，如圖7所示；也由測(cè)定有效孔面積，即血流穿過部分的面積所顯示，如圖8。這些試驗(yàn)揭示，心臟瓣膜暴露于電子束輻射結(jié)果使小葉此未受輻射的有較大程度變軟而更易打開。這對(duì)接受瓣膜移植者提供了短期和長(zhǎng)期的好處，因?yàn)檩^大的有效孔面積具有較大的心臟輸出量，所以提高了心臟活動(dòng)效率，降低了發(fā)生瓣膜尖破裂導(dǎo)致最后鈣化和瓣膜故障的傾向。
8個(gè)心臟瓣膜由戊二醛交聯(lián)如例1所示并暴露于電子束輻射。比較心臟瓣膜受電子束輻射前后血流經(jīng)過心臟瓣膜時(shí)的壓力下降。圖7表明用穩(wěn)態(tài)體外流量測(cè)試儀測(cè)試時(shí)壓力下降減少了。作參考的無障礙直管的壓力下降是0。
圖8比較了心臟瓣膜用電子束輻射前后的有效孔面積，顯示出電子束輻射后有效孔面積增加。
有效孔面積的測(cè)定是通過把試驗(yàn)瓣膜放在脈搏重復(fù)試驗(yàn)計(jì)(PulseDuplicator)系統(tǒng)中做的。脈搏重復(fù)試驗(yàn)計(jì)通過測(cè)定含有試驗(yàn)瓣膜的模擬心臟內(nèi)關(guān)鍵位置上的壓力和流速計(jì)算許多與瓣膜相關(guān)的功能。
有效孔面積(EOA)定義如下FOA＝Qrms/(51.6VΔP)，以cm2表示。
這里Qrms＝絕對(duì)壓力下降時(shí)期中所得的均方根流速，以ml/sec表示；ΔP＝平均絕對(duì)壓力下降，以mmHg表示。
經(jīng)照射的組織心臟瓣膜中增強(qiáng)的血液動(dòng)力學(xué)背后的理論，包含了使保持膠原三股螺旋完整的分子鍵的破壞。本技術(shù)提供的分子內(nèi)交聯(lián)，在膠原的結(jié)構(gòu)框架被輻射削弱時(shí)，起著增強(qiáng)膠原骨架的作用。在有足夠的分子內(nèi)交聯(lián)的情況下，25KGy的劑量將蛋白質(zhì)骨架削弱到足以使組織更柔韌，還改進(jìn)了組織功能。
每次都得到相似結(jié)果，這二種實(shí)驗(yàn)都是可重復(fù)的。確切的機(jī)制還不知道，理論上推測(cè)膠原分子內(nèi)發(fā)生了斷裂反應(yīng)。當(dāng)組織經(jīng)受電子束輻射時(shí)，把膠原鏈維持在一起的鍵出現(xiàn)斷裂。無論如何，分子內(nèi)戊二醛交聯(lián)存在似乎使膠原分子的一級(jí)結(jié)構(gòu)保持完整，因此保持了軟化組織的完整性。
例6 對(duì)輻射作為生物組織的消毒方法的主要批評(píng)是它影響產(chǎn)品的長(zhǎng)期耐久性。美國(guó)食品和藥物管理局(FDA)通常要組織瓣膜證明能在加速的耐磨測(cè)試儀上經(jīng)受2億次心搏周期。這相當(dāng)于約5年實(shí)際時(shí)間。在將來某時(shí)，可能需要3億8千萬次心搏周期的同樣試驗(yàn)。
作了電子束輻射對(duì)組織瓣膜抗磨性影響的測(cè)定實(shí)驗(yàn)。測(cè)試了4組瓣膜組1在0.03％戊二醛中交聯(lián)；在0.5％戊二醛中貯存。(電子束負(fù)對(duì)照)。
組2在0.03％戊二醛中交聯(lián)；漂洗除去殘留物；在0.9％NaCl中貯存；電子束清毒，25KGy。
組3在0.03％戊二醛中交聯(lián)；經(jīng)抗鈣化加工處理；漂洗除去殘留物；在0.9％NaCl中貯存；電子束消毒，25KGy。
組4在0.5％戊二醛中交聯(lián)；漂洗除去殘留物；在0.9％NaCl中貯存；電子束消毒，25KGy(濃度負(fù)對(duì)照)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果列于表1。這些結(jié)果清楚指出，經(jīng)體外3億8900萬次心搏周期的試驗(yàn)證明，與對(duì)照瓣膜(組1和組4)相比，組織瓣膜暴露于電子束輻射對(duì)耐久性沒有消極影響。事實(shí)上，有最好的耐磨數(shù)據(jù)的組是經(jīng)抗鈣化處理后暴露于電子束的組。
表1 3億8900萬次心搏周期的加速磨損試驗(yàn)結(jié)果
例7 血管移植修復(fù)物，例如動(dòng)脈，剝?nèi)テ渫饽?、脂肪和肌肉組織并以活化的蛋白酶消化。剝離和清理過的動(dòng)脈用琥珀酸酐在控制的堿性pH下處理使在動(dòng)脈表面產(chǎn)生負(fù)電荷。帶負(fù)電的動(dòng)脈然后可用濃度范圍從大約0.05％到5％戊二醛的檸檬酸鹽緩沖液交聯(lián)以固定和強(qiáng)化。最好濃度低于0.01％。按本發(fā)明，根據(jù)用低濃度和高濃度戊二醛交聯(lián)的移植產(chǎn)品的定性比較評(píng)估，低濃度戊二醛通常產(chǎn)生較軟和較柔韌的產(chǎn)品。定性地來說，用低濃度戊二醛交聯(lián)會(huì)增強(qiáng)移植產(chǎn)品的柔韌性，這可用評(píng)估移植物曲率半徑來證明，在低濃度戊二醛中固定的產(chǎn)品的曲率半徑比在高濃度戊二醛中固定的小。
然后，固定的移植物可用濃度范圍大約1％到4％的戊二醛消毒，最好約2％。
由這些步驟結(jié)合起來生產(chǎn)出的修復(fù)物提高了強(qiáng)度、耐久性、柔韌性和減少血栓形成。
本發(fā)明中消化步驟包含用活化的蛋白酶從移植物表面除去抗原物質(zhì)。已經(jīng)知道利用蛋白水解酶無花果蛋白酶作為制備血管的清理步驟的一部分，現(xiàn)在的方法通過使用活化的蛋白酶提供了從天然移植修復(fù)物更有效地清除抗原組織的手段。消化后剩留的是膠原基質(zhì)。
例8 收獲后，移植物用蛋白酶消化除去抗原物質(zhì)，最好用活化的蛋白酶。在最好的增強(qiáng)交聯(lián)法中，活化的蛋白酶是無花果蛋白酶，更好是加半胱氨酸激活的經(jīng)過濾的無花果蛋白酶濃縮液。在最好的增強(qiáng)交聯(lián)法中，所用的緩沖液是由檸檬酸和檸檬酸鈉組成的，雖然可以用其它緩沖液。
本發(fā)明操作中使用的無花果蛋白酶的特定量依賴于所用無花果蛋白酶的活性，因?yàn)槊富罨降淖兓浅Ｊ?。為了解決所用無花果蛋白酶活性水平不同的問題，制造移植物需要的無花果蛋白酶的準(zhǔn)確用量通常每次都要調(diào)整，使移植的制造達(dá)到恒定的體積活性(constant volumetricactivity)。即，決定移植物生產(chǎn)期間所用的無花果蛋白酶特定用量，通常需要評(píng)估無花果蛋白酶活性與按指定的活性，調(diào)整所用無花果蛋白酶的用量。按本發(fā)明通常使用的無花果蛋白酶的濃度，共計(jì)大約20l反應(yīng)器容積加入無花果蛋白酶近65g。在最好的增強(qiáng)交聯(lián)法中，消化溶液的無花果蛋白酶活性大約9.8mmol NPZG/l-min。
消化時(shí)，溫度和pH應(yīng)予監(jiān)控。在一個(gè)增強(qiáng)交聯(lián)法中，溫度應(yīng)在30℃和50℃之間的范圍內(nèi)，最好40℃±2℃。pH應(yīng)在5和7之間，最好6.3±0.1。所用的消化時(shí)間不是嚴(yán)格的，但應(yīng)該足以除去任何抗原物質(zhì)，通常2-3小時(shí)足夠。然后移植物應(yīng)在蒸餾水中漂洗幾次。在最好的增強(qiáng)交聯(lián)法中，移植物漂洗4次。消化在一終止浴鍋中結(jié)束，最好是含有NaCl的終止浴鍋。在最好的增強(qiáng)交聯(lián)法中，NaCl濃度是0.1％.然后，移植物再漂洗，最好4次。
例9 用止血鉗把一根動(dòng)脈懸掛在環(huán)形架上。用清潔剪刀剝?nèi)?dòng)脈的外膜、防脂和肌肉組織。把動(dòng)脈放入安置在冰上裝有0.9％NaCl的清潔燒杯中。重復(fù)這個(gè)步驟到所有動(dòng)脈剝除好。
用縫線結(jié)札旁支，用三重外科結(jié)盡可能結(jié)札得緊靠重要?jiǎng)用}。剪去近結(jié)地方的過多旁支。在所有旁支部結(jié)札好后，把動(dòng)脈從環(huán)形架上取下。
用0.9％NaCl溶液裝滿一個(gè)大注射器，路厄注射器尖端接上合適的滲漏測(cè)試計(jì)用止血鉗夾緊動(dòng)脈的一端，把注射器的尖端插進(jìn)動(dòng)脈的另一端。用一只手把注射器尖端牢固地接到動(dòng)脈的末端，慢慢地把生理鹽水注入動(dòng)脈腔探查滲漏情況。用3-0、4-0或5-0縫線封閉一切漏隙。用縫線打三重外科結(jié)。不斷縫合動(dòng)脈漏隙到注射器在適度壓力下無滲漏?？p好的動(dòng)脈放入裝有0.9％NaCl溶液安置在冰上的清潔燒杯中。重復(fù)這些操作到所要數(shù)量的動(dòng)脈都縫好。
溶解420g檸檬酸鈉和14.4g檸檬酸于水中，把體積調(diào)整到21l。如必要，測(cè)pH并調(diào)整到6.3。檸檬酸鹽總濃度是71.3mM，鈉鹽95.4％、酸4.6％。
用17.32無花果蛋白酶緩沖液裝滿反應(yīng)器，打開攪拌器。把加熱盤管放進(jìn)罐內(nèi)，打開熱水開始加熱緩沖液到40℃。把縫好的軟管倒鉤裝置(threaded hose barb fittings)插入動(dòng)脈，用線札牢。用這個(gè)裝置把動(dòng)脈連接于移植物多支管上(graft manifold)。把一些移植物多支管相互連接并用3/8“×2”不銹鋼小釘把它們附著在支持器上，放進(jìn)反應(yīng)器中。開始用泵以1.05l/min流速抽吸每一個(gè)移植物多支管。在反應(yīng)器溫度穩(wěn)定在40時(shí)，加入活化的無花果蛋白酶濃溶液。
制備無花果蛋白酶濃溶液相當(dāng)于85g Sigma乳汁粉/l。把2.8l無花果蛋白酶緩沖液放入安置在40℃振動(dòng)水浴中的燒瓶?jī)?nèi)。約需65g無花果蛋白酶粉。無花果蛋白酶粉溶于40℃緩沖液中并通過一個(gè)5micronGelman Acro 50A濾器過濾。
量取2.68l過濾的酶濃液并放入燒瓶中，安置在40℃水浴中。稱取6g L-半胱氨酸加到酶濃液中使之活化。5分鐘后，把酶濃液加進(jìn)反應(yīng)器開始消化。消化進(jìn)行2.5小時(shí)，溫度保持在40℃±2℃；監(jiān)控pH，應(yīng)保持在6.3±0.1。
定時(shí)檢查動(dòng)脈，排除過多扭結(jié)，讓液流平均分布通過移植物多支管。動(dòng)脈在20分鐘內(nèi)由粉紅色變?yōu)殂y灰色。消化期間，動(dòng)脈管腔稍有擴(kuò)大，長(zhǎng)度增加約35％。消化結(jié)束，用水充分洗4次。
停浴時(shí)(for the stop bath)，溶解20g NaCl于20l H20中。關(guān)掉泵和攪拌器。打開排水閥讓罐流空。關(guān)閉排水閥并用20 lH2O注滿反應(yīng)器。打開泵和攪拌器讓其平衡幾分鐘。重復(fù)操作洗4次。
關(guān)掉泵和攪拌器并打開排水閥讓罐流空。關(guān)閉排水閥并用停浴溶液注滿反應(yīng)器。打開泵和攪拌器，停浴持續(xù)15-20分鐘使任何殘余的酶失活。反應(yīng)器排水。進(jìn)行4次清洗。
溶解1680.2gNaHCO3于水中并稀釋到20l。關(guān)掉泵和攪拌器，把最后的洗滌液排出罐外。用20l.NaHCO3溶液注滿反應(yīng)器。打開泵和攪拌器，讓其平衡15分鐘。
稱取142.8g琥珀酸酐。將1/2酸酐加到平衡15分鐘后的反應(yīng)器中，讓晶體分散在溶液中，攪拌使它們混溶。30分鐘后加另一半酸酐，操作要費(fèi)60-90分鐘。到所有晶體溶解，溶液中不再產(chǎn)生氣泡時(shí)操作完成，停止泵和攪拌器，排水。重復(fù)操作洗4次。
量取8.0l H2O放入清潔的大玻璃瓶中.稱取112.0g檸檬酸鈉和4.0g檸檬酸加到該瓶中。在該瓶中放進(jìn)一磁力攪棒。把該瓶放在攪拌盤上，攪拌到所有固體溶解。檸檬酸鹽濃度應(yīng)是50mM，由95.2％檸檬酸納和4.8％檸檬酸組成。
量取1.6ml50％戊二醛加到仍在攪拌盤上的檸檬酸鹽緩沖液中。讓溶液平衡10-15分鐘。測(cè)試pH并用6M NaOH或6M HCl調(diào)整到所需的6.40±0.05。
把一清潔的固定罐放在排氣罩下，把一固定架放進(jìn)固定罐中(一般每批2罐)把0.01％戊二醛溶液從大玻璃瓶轉(zhuǎn)移到固定罐中。保持交聯(lián)條件近120小時(shí)，定時(shí)即每24小時(shí)更換戊二醛溶液。
從反應(yīng)器移走移植物多支管。用清潔剪刀剪下一段尺側(cè)副動(dòng)脈分叉點(diǎn)的遠(yuǎn)端的動(dòng)脈。把動(dòng)脈放入一個(gè)裝有擊礦質(zhì)水的燒杯中。重復(fù)這一步到所有動(dòng)脈都從移植物多支管移走。
從燒杯取出一塊移植物。使移植物沿長(zhǎng)度方向充分拉長(zhǎng)。把移植物放在合適大小的軸柄(mandrel)上使它沿長(zhǎng)度方向充分拉長(zhǎng)。把帶著移植物的軸柄放進(jìn)在固定罐中的固定架某一個(gè)位置上。重復(fù)這些操作到所有移植物放到軸柄上并放進(jìn)固定罐。記下進(jìn)罐時(shí)間并蓋罐。
當(dāng)移植物在固定溶液中存放24小時(shí)時(shí)，制備一批新鮮的0.01％戊二醛溶液并轉(zhuǎn)到一個(gè)清潔的固定罐中。把整個(gè)固定架(包括移植物)由原固定罐轉(zhuǎn)到新鮮的二醛溶液罐。排棄舊的戊二醛液。把裝有新鮮戊二醛的罐放在排氣罩下。蓋固定罐。每隔24小時(shí)后更換溶液。
量取7.68l去礦質(zhì)水并放入一個(gè)清潔的大玻璃瓶中。稱取112.0g檸檬酸鈉和4.0g檸檬酸加到大玻璃瓶中。把大玻璃瓶放在攪拌盤上并攪拌到所有固定溶解。檸檬酸鹽濃度應(yīng)是50mM，由95.0％檸檬酸鈉和4.8％檸檬酸組成。
量取320ml 50％戊二醛并加到仍在攪拌盤上的檸檬酸鹽緩沖液中，讓溶液平衡10-15分鐘。測(cè)試pH并用6M NaOH或6M HCl調(diào)整到所需的6.40±0.05。在消毒前把戊二醛溶液轉(zhuǎn)到一個(gè)清潔的固定罐中。
固定近120小時(shí)后，把移植物轉(zhuǎn)到2％戊二醛溶液中。把固定罐放在排氣罩下。蓋固定罐。讓移植物留在2％戊二醛中4-5小時(shí)。
例10 生物組織的生產(chǎn)如下各組織瓣膜在20℃暴露中于檸檬酸鹽(pH6.4)或HEPES(pH7.4)緩沖的0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％戊二醛中2、4、5、7、9或10天。
然后交聯(lián)的生物組織在含有2％戊二醛、3％甲醛和20％乙醇的緩沖液的多成分消毒液中開始消毒。開始消毒的生物組織經(jīng)乙醇(60％乙醇)抽提，也可選用包括0.1M AlCl3，在生理鹽水中洗24小時(shí)。
而后，把生物組織包裝進(jìn)生理鹽水中，暴露于電子束輻射進(jìn)行終末消毒。
在本發(fā)明通過說明書和例子敘述一些細(xì)節(jié)時(shí)，應(yīng)懂得本發(fā)明容許各種修改和變換，不限于前述特定增強(qiáng)交聯(lián)法。應(yīng)該懂得，這些特定的增強(qiáng)交聯(lián)法，不是要限制本發(fā)明，相反，而是打算包括所有屬于本發(fā)明精神和范圍的修改、等價(jià)物和替換物。
權(quán)利要求
1.一種處理生物組織的方法，包括把生物組織暴露在低于約0.2％體積的交聯(lián)溶液中。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，交聯(lián)溶液是戊二醛。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，交聯(lián)溶液是0.01-0.099％體積的戊二醛。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，生物組織是膠原材料。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述方法，生物組織選自牛心包、豬主動(dòng)脈瓣、硬腦膜、人臍靜脈、從各種哺乳動(dòng)物來源的血管組織和心臟瓣膜同種移植物組成的一類物體。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，還包括把交聯(lián)的生物組織暴露于生物能壘還原劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，還包括把交聯(lián)的生物組織暴露于抗鈣化劑。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述方法，包括把交聯(lián)的生物組織暴露于選自至少一種鋁鹽、一種含有至少50％乙醇的溶液組成的抗鈣化溶液或二者結(jié)合的鈣化溶液。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，還包括消毒交聯(lián)的生物組織。
10.根據(jù)權(quán)利要求6所述方法，還包括消毒交聯(lián)的生物組織。
11.根據(jù)權(quán)利要求8所述方法，還包括消毒交聯(lián)的生物組織。
12.根據(jù)權(quán)利要求9所述方法，消毒交聯(lián)的生物組織包括把交聯(lián)的生物組織暴露于電子束粒子轟擊。
13.一種穩(wěn)定的生物組織，包括將生物組織暴露低于約0.2％重量交聯(lián)溶液，收縮溫度約80℃-90℃。
14.一種用于組織移植的制備方法，包括把組織暴露在低于約0.2％體積的交聯(lián)溶液和消毒交聯(lián)組織。
15.一種包裝組織的方法，包括暴露組織在低于0.02％體積的交聯(lián)溶液。
16.一種生物組織，包括生物組織暴露在低于0.2％體積的交聯(lián)溶液。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的生物組織，包括生物組織暴露在約0.01％至0.099％體積的戊二醛。
18.一種處理生物組織的方法，包括暴露生物組織在約0.01％-0.099％體積的戊二醛。
19.一種處理生物組織的方法，包括暴露生物組織于從約0.01％至0.099％體積的戊二醛與暴露生物組織在至少一種鋁鹽、一種含有至少50％乙醇的抗鈣化溶液或二者結(jié)合的抗鈣化溶液。
20.一種生物組織，包括生物組織暴露于約0.01％至0.099體積的戊二醛。
全文摘要
本發(fā)明涉及用低濃度交聯(lián)試劑處理生物組織。
文檔編號(hào)A61L27/36GK1131913SQ9519072
公開日1996年9月25日 申請(qǐng)日期1995年6月15日 優(yōu)先權(quán)日1994年6月15日
發(fā)明者米歇·M·威廉·Ii, 奧而安德·L·托馬斯, 施安凱雷利·基馬爾 申請(qǐng)人:圣·裘德醫(yī)療公司