專利名稱：新的法呢基轉(zhuǎn)移酶抑制劑、其制法及其藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及通式(I)所示新型法呢基轉(zhuǎn)移酶抑制劑、其可能的鹽類、其制備方法和含有它們的藥物組合物。 對法呢基轉(zhuǎn)移酶的抑制作用以及因此而產(chǎn)生的對蛋白質(zhì)Ras的法呢基化反應(yīng)的抑制作用會阻止突變蛋白質(zhì)將正常細胞轉(zhuǎn)變?yōu)榘┘毎?br> 基因Ras的C-末端序列包含圖案“CAAX”或“Cys-Aaa1-Aaa2-Xaa”，其中Aaa代表脂族氨基酸，Xaa代表任何一種氨基酸。
眾所周知，具有CAAX序列的四肽能夠抑制蛋白質(zhì)Ras的法呢基化。例如，PCT WO91/16340與EP0461869描述了法呢基轉(zhuǎn)移酶的肽抑制劑Cys-Aaa1-Aaa2-Xaa，它們特別地是以在約10-6或10-7M濃度下呈現(xiàn)其抑制活性的肽Cys-Val-Len-Ser，Cys-Val-Ile-Met與Cys-Val-Met為代表的。
業(yè)已發(fā)現(xiàn)，作為本發(fā)明的主題，通式(I)所示的肽在約10-8或10-9的濃度下表現(xiàn)出抑制活性(IC50)。在通式(I)中，R1代表通式Y(jié)-S-A1-所示基團，其中Y代表氫原子，或氨基酸的其余部分或脂肪酸的殘基或烷基或烷氧羰基或其中R4代表C1-4烷基、視需要而定被苯基或下列通式所示基團取代的基團R4-S- 式中A1、X1、R1′、R2、R2′與R如下定義，A1代表直鏈或支鏈C1-4亞烷基，在基團＞C(X1)(Y1)的α位可視需要而定被下列基團取代氨基，直鏈或支鏈C1-6烷基氨基，其中每一烷基部分均為C1-6烷基的直鏈或支鏈二烷基氨基，直鏈或支鏈C1-6鏈烷酰氨基或其中烷基部分為直鏈或支鏈C1-6烷基的烷氧羰基氨基，X1和Y1分別代表氫原子或者二者連同與其結(jié)合的碳原子共同形成基團＞C＝O，R1′代表氫原子或甲基，R2代表可視具體情況而定被羥基、C1-4烷氧基、巰基、C1-4烷硫基、C1-4烷基亞磺?；駽1-4烷基磺酰基取代的C1-6直鏈或支鏈烷基、鏈烯基或炔基，當(dāng)R2代表被羥基取代的烷基時，R2可以與α位羧基形成內(nèi)酯，R2′代表氫原子或甲基，R代表氫原子或可被下列基團取代的C1-6烷基C1-4烷氧基、C1-4烷基硫、C1-4烷基亞磺酰、C1-4烷基磺酰、苯基、苯氧基、苯硫基、苯基亞磺酰、苯磺酰、C1-4烷基氨基、其中每一個烷基均含1-4個碳原子的二烷基氨基，或者可被一個或多個選自氫原子和烷基、烷氧基、烷硫基或鏈烷酰基的原子或基團取代的苯基，條件是基團 處于萘核的5或6位。
更具體地，R1代表式Y(jié)-S-A1-所示基團，其中Y代表氫原子或賴氨酸或含多達20個碳原子的脂肪酸的其余部分，A1代表可被氨基或C1-4烷基氨基取代的亞乙基或亞丙基，X1和Y1各自代表氫原子或者連同與其相結(jié)合的碳原子共同形成基團＞C＝O，R1′代表氫原子或甲基，R2代表可被羥基、甲氧基、巰基、甲硫基、甲基亞磺酰基或甲基磺?；〈腃1-4烷基，R2′代表氫原子或甲基，R代表氫原子或可被烷氧基取代的C1-4烷基，或苯基。
進一步更具體地，R1代表式Y(jié)-S-A1-所示基團，其中Y代表氫原子，A1代表可被氨基取代的亞乙基或亞丙基，X1和Y1分別代表氫原子或連同與其結(jié)合的碳原子共同形成基團＞C＝O，R1′代表氫原子，R2代表可被羥基、甲氧基、巰基或甲硫基取代的甲基、乙基、丙基或丁基，R2′代表氫原子，R2代表氫原子或C1-4烷基。
作為尤其令人感興趣的通式I所示化合物，其中R1代表2-巰基乙基或1-氨基-2-巰基乙基，X1和Y1分別代表氫原子或連同與其結(jié)合的碳原子共同形成基團＞C＝O，R1′代表氫原子，R2代表正丁基或2-甲硫基乙基，R2′代表氫原子，R代表氫原子或甲基。
本發(fā)明還涉及通式(I)的產(chǎn)物的立體異構(gòu)形式。由R1C(X1)(Y1)(NR1′)和R3CH(NR3′)CO-OH表示的其余氨基酸優(yōu)選具有天然氨基酸的構(gòu)型。
本發(fā)明還涉及通式(I)的產(chǎn)物的有機或無機鹽。
本發(fā)明的新型產(chǎn)物可以通過采用由更具體地于肽化學(xué)中使用的方法派生的已知方法來制備以便嵌接分子鏈。
一般地，在通式(I)所示的產(chǎn)物中，X1與Y1連同與其結(jié)合的碳原子共同形成基團＞C＝O，該產(chǎn)物由與通式(III)所示氨基酸縮合的5-硝基或6-硝基萘-1-羧酸得到 式中R2與R2′如上所述，R′代表可被苯基取代的C1-4烷基，優(yōu)選為叔丁基，上述制備過程在諸如羥基苯并三唑和二環(huán)己基碳化二亞胺或N′-(3-二甲氨基丙基)-N-乙基碳化二亞胺的鹽酸鹽之類縮合劑以及諸如三乙胺之類堿存在下在諸如二甲基甲酰胺之類有機溶劑中進行以便得到通式IV所示產(chǎn)物 式中R2、R2′與R′如上定義，該產(chǎn)物優(yōu)選借助氯化亞錫或通過氫氣在催化劑如鈀存在下被還原為通式(V)所示產(chǎn)物 式中R2、R2′與R′如上所述，通式(VI)所示化合物與其縮合 式中R1如上所定義，X1與Y1連同與其結(jié)合的碳原子共同形成基團＞C＝O，條件是R1上的氨基與巰基官能團可以由諸如適用于巰基官能團的三苯甲基或適用于氨基官能團的叔丁氧羰基之類適宜的保護基得到保護，該過程優(yōu)選在鹵代甲酸烷基酯(氯代甲酸異丁酯)和有機堿(N-甲基嗎啉)存在下于惰性有機溶劑(四氫呋喃)中進行以便得到通式(VII)所示產(chǎn)物 式中R1、R1′、X1、Y1、R2、R2′和R′如上定義，其中保護基借助三氟乙酸在乙二硫醇或三乙基硅烷存在下被氫原子取代，這些保護基為三苯甲基、叔丁氧羰基或叔丁基，以便得到其中X1與Y1連同與其結(jié)合的碳原子共同形成基團＞C＝O的產(chǎn)物(I)。
一般情況下，其中X1與Y1分別代表氫原子的化合物(I)可以通過其中R1如上限定的通式(VIII)所示醛R1-CHO與化合物(V)在還原劑如氰基硼氫化鈉、硼氫化鈉、三乙酸基硼氫化鈉或氫存在下，在催化劑存在下相互作用來獲得，條件是R1具有的氨基與巰基官能團可以由諸如適用于巰基的三苯甲基或適用于氨基的叔丁氧羰基之類適宜保護基得到保護。一般地，該反應(yīng)在有機溶劑例如醇如甲醇中進行，該溶劑可視具體情況而定與另一種有機溶劑例如醚如四氫呋喃結(jié)合使用。特別有利的是在無水介質(zhì)中進行操作。
一旦完成胺與醛的縮合過程，便可以通過應(yīng)用常規(guī)技術(shù)用氫原子替代保護基。因此，可以借助三氟乙酸在乙二硫醇或三乙基硅烷存在下用氫原子代替Boc或三苯甲基或叔丁基保護基。
當(dāng)通式(I)中的R2與α位的羧基官能團形成內(nèi)酯時，在堿性介質(zhì)中對相應(yīng)的化合物進行處理可以得到其中R2為被羥基取代的烷基的化合物(I)。一般地，一旦pH高于7便發(fā)生內(nèi)酯的開環(huán)反應(yīng)。特別有利的是在無機堿(碳酸鈉、氫氧化鉀)的存在下于稀酒精介質(zhì)如水-甲醇混合物中進行。
其中R代表氫原子的化合物(I)可以通過其中R代表可被取代的烷基或苯基的化合物(I)發(fā)生皂化反應(yīng)而獲得。
其中R代表可被取代的烷基或苯基的上述化合物(I)可以通過其中R代表氫原子的化合物(I)在不觸及分子中其余部分的酯化反應(yīng)的通常條件下進行酯化反應(yīng)來獲得。
可以按照T.NAKAYAMA等人在Chem.Pharm.Bull.32，3968(1984)中描述的方法制備5-硝基或6-硝基萘-1-羧酸。
可以按照歐洲專利申請EP 0618221所述方法制備S-三苯甲基-N-叔丁氧羰基半胱氨酸醛。
可以按照諸如色譜分離之類的常規(guī)方法提純化合物(I)。
下列實施例描述本發(fā)明化合物的制備方法。
實施例1按照T.NAKAYAMA等人的Chem.Pharm.Bull.32，3968(1984)所述方法制備5-硝基萘-1-羧酸。
在由2.17g 5-硝基萘-1-羧酸與30cm3二氯甲烷和13cm3二甲基甲酰胺形成的溶液中，加入2g(L)-蛋氨酸甲酯鹽酸鹽、1.35g 1-羥基-苯并三唑、1.4cm3三乙胺和2.06g二環(huán)己基碳化二亞胺。在約20℃下將反應(yīng)混合物攪拌20小時，隨后用燒結(jié)玻璃過濾，用5cm3二甲基甲酰胺洗滌2次，隨后減壓濃縮至于。將所得到的殘余物溶于100cm3二氯甲烷之中，先用10％(P/V)碳酸氫鈉水溶液、隨后用10％乙酸水溶液、最后用飽和氯化鈉水溶液洗滌。用MgSO4干燥有機相，過濾，減壓濃縮至干。得到3.4g棕色固體，在硅膠上進行色譜提純〔洗脫劑二氯甲烷-乙酸乙酯(95/5體積/體積)〕。因此得到2.6g N-〔(5-硝基萘基)-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯固體，其特征如下所示-質(zhì)子核磁共振譜(300 MHz；(CD3)2SO d6；δppm)2，00～2，25(mt，2HCH2)；2，11(s，3HSCH3)；2，65(mt，2HSCH2)；3，77(s，3HOCH3)；4，70(mt，1HCHN)；7，82和7，89(2t，J＝8，5 Hz，2H3位H和7位H)；7，85(d，J＝8，5 Hz，1H2位H)；8，36(d，J＝8，5 Hz，1H4位H)；8，43(d，J＝8，5 Hz，1H8位H)；8，57(d，J＝8，5 Hz，1H6位H)；9，17(d，J＝7，5 Hz，1HCONH).
向由N-〔(5-硝基萘基)-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯1.09g與23m3乙酸乙酯和6cm3乙醇組成的溶液中加入3.39g氯化亞錫(II)二水合物。在約70℃將反應(yīng)混合物攪拌30分鐘，將其傾入冰中，通過加入5％(P/V)碳酸氫鈉水溶液將pH值調(diào)至約7-8。在配有C鹽的燒結(jié)玻璃上過濾所得到的混合物。通過傾析分離有機相，用50cm3乙酸乙酯萃取水相3次。合并有機相，用MgSO4干燥，過濾并減壓濃縮至干。因此得到油狀N-〔(5-氨基萘基)-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯0.9g，其特征在于-質(zhì)子核磁共振譜
(200 MHz，(CD3)2SO d6加入數(shù)滴CD3COOD d4，δppm)1，95～2，25(mt，2HCH2)；2，09(s，3HSCH3)；2，62(mt，2HSCH2)；3，71(s，3HOCH3)；4，63(mt，1HCHCOO)；6，71(d，J＝8，5 Hz，1H6位)；7，15～7，60(mt，4H芳族H)；8，18(d，J＝8，5 Hz，1HHen 8)；8，84(d殘基，J＝7，5 Hz，1HCONH).
向由1.25g N-叔丁氧羰基氨基-S-三苯甲基-L-半胱氨酸與0.3cm3N-甲基嗎啉和25cm3四氫呋喃組成的約-15℃溶液中加入0.3Scm3氯甲酸異丁酯，隨后加入由0.9gN-〔(5-氨基萘基)-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯與20cm3四氫呋喃形成的溶液。在約20℃將反應(yīng)混合物攪拌2天，隨后過濾并減壓濃縮至干。將所得到的殘余物溶于50cm3乙酸乙酯，先用蒸餾水、隨后用0.5NNaHCO3水溶液、10％(p/v)檸檬酸水溶液、最后用蒸餾水洗滌。用MgSO4干燥有機相，過濾并在減壓下濃縮至干。因此，得到2g黃色烤蛋白狀物質(zhì)，在氧化硅上通過色譜提純〔洗提劑CH2Cl2-乙酸乙酯(90-10，體積)〕得到1.5g固狀N-〔5-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙酰氨基)-萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯，其特征在于-質(zhì)子核磁共振譜(300 MHz，(CD3)2SOd6，δppm)1，43(s，9HC(CH3)3)；2，00～2，25(mt，4HCH2和CH2SAr)；2，08(s，3HSCH3)；2，60(mt，2HSCH2)；3，74(s，3HOCH3)；4，32(mt，1HNCH)；4，64(mt，1HCHCOO)；7，20～7，80(mt，20H芳族H和CONH)；8，00～8，15(mt，2H8位H和6位H)；9，02(d，J＝8 Hz，1HCONH)；10，08(s，1HArNH).
向由0.45g N-〔5-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙酰氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯與1cm3水和10cm3四氫呋喃組成的溶液中于約5℃加入0.061g二水合氧化鋰。在約20℃將溶液攪拌4小時，隨后減壓濃縮。得到0.47g烤蛋白狀N-〔5-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙酰氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸。
向由0.44g N-〔5-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙酰氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸與2cm3水和2cm3乙二硫醇組成的混合物于約5℃加入2cm3三氟乙酸。在約20℃攪拌2小時，隨后滴加20cm3三氟乙酸。將該反應(yīng)混合物攪拌2小時。過濾并減壓濃縮。用30cm3乙醚研磨所得到的殘余物2次，隨后減壓干燥。因此得到0.23g白色固狀N-〔5-(2(R)-氨基-3-巰基丙酰氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸的三氟乙酸鹽，其特征在于-質(zhì)子核磁共振譜(200 MHz，(CD3)2SO d6，δppm)1，90～2，25(mt，2HCH2)；2，10(s，3HSCH3)；2，65(mt，2HSCH2)；3，15(d，J＝7 Hz，2HSCH2)；4，28(mt，1HNCH)；4，61(mt，1HCHCOO)；7，45～7，80(mt，4H芳香H)；8，10～8，30(mt，2H8位上的H和6位上的H)；8，90(d，J＝8 Hz，1HCONH)；10，20(mf，1HArNHCO)元素分析C19H23N3O4S2，1，5CF3CO2H計算值(％)C＝45，78；H＝4，33；N＝7，45；S＝11，37實測值(％)C＝45，92；H＝4，05；N＝7，54；S＝11，66.
實施例2按照實施例1中制備N-〔5-(2(R)-氨基-3-巰基丙酰氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸的三氟乙酸鹽的方法進行操作，不同的是以N-〔5-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙酰氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯0.52g為原料，得到0.17g N-〔5-(2(R)-氨基-3-巰基丙酰氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯的三氟乙酸鹽，其特征如下-質(zhì)子的核磁共振譜 (300 MHz，(CD3)2SO d6，δppm)2，08(mt，2HCH2)；2，10(s，3HSCH3)；2，64(mt，2HCH2S)；3，21(d，J＝6 Hz，2HSCH2)；3，78(s，3HCOOCH3)；4，39(t，J＝6 Hz，1HCHN)；4，69(mt，1HCHCOO)；7，60～7，80(mt，4HH2-H3-H6和H7)；8，13(d，J＝8，5 Hz，1HH8)；8，25(dd，J＝7，5和2，5 Hz，1HH4)；8，00～8，60(mf，
2HNH2)；9，05(d，J＝7.5 Hz，1HArCONH)；10，60(mf，1HArNHCO).
元素分析C20H25N3O4S2，1，33CF3CO2H計算值(％) C＝46，33；H＝4，52；N＝7，15；S＝10，91實測值(％) C＝46，2；H＝4，5；N＝7，3；S＝11，4實施例3向由0.55g N〔(5-氨基萘基)-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯和30cm3甲醇組成的溶液中加入0.74g按照歐洲專利申請EP0618 221制備的S-三苯甲基-N-叔丁氧羰基半胱氨酸醛(Cysteinal)、0.1cm3濃乙酸和分子篩(3A)。在約20℃攪拌20小時，隨后加入0.32g氰基硼氫化鈉。在約20℃攪拌24小時，在配有C鹽的燒結(jié)玻璃上過濾。用甲醇洗滌燒結(jié)玻璃。濾液經(jīng)減壓濃縮后形成的糊狀物在硅膠上被色譜提純〔洗提劑二氯甲烷-乙酸乙酯(90-10，體積)〕。因此得到黃色固狀N-〔5-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯0.3g，其特征在于-質(zhì)子核磁共振譜(300 MHz，(CD3)2SO d6，δppm)1，42(s，9HC(CH3)3)；2，08(mt，2HCH2)；2，10(s，3HSCH3)；2，25～2，55(mt，2HCH2S)；2，65(mt，2HCH2S)；3，00～3，25(mt，2HNCH2)；3，75(s，3HCOOCH3)；3，82(mt，1HNCH)；4，76(mt，1HCHCOO)；6，15(mf，1HArNH)；6，52(d寬峰，J＝7，5 Hz，1H芳族H處于胺的鄰位)；7，02(d，J＝8 Hz，1HOCONH)；7，10～7，60(mt，19H芳族H)；8，02(d寬峰J＝8 Hz，1H芳族H處于酰胺的鄰位)；8，92(d，J＝7，5 Hz，1HCONH).
向由0.3g N-〔5-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯與1cm3水和10cm3四氫呋喃組成的溶液中于約5℃加入0.04g二水合氧化鋰.在約20℃將溶液攪拌20小時，隨后減壓濃縮。得到0.3g烤蛋白狀N-〔5-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸。
向由0.3g N-〔5-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸與1.5cm3水和1.5cm3乙二硫醇組成的混合物于約5℃加入1.5cm3三氟乙酸。于約20℃攪拌2小時，隨后滴加15cm3三氟乙酸。將該反應(yīng)混合物攪拌3小時并減壓濃縮。用25cm3乙醚研磨所得到的殘余物3次，隨后減壓干燥。因此得到0.14g黃色糊狀N-〔5-(2(R)-氨基-3-巰基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸的三氟乙酸鹽，其特征在于-質(zhì)子核磁共振譜(200 MHz，(CD3)2SOd6加入幾滴 CD3COOD d4，δ ppm)1，95～2，20(mt，2HCH2)；2，10(s，3HSCH3)；2，50～2，70(mt，2HCH2S)；2，88(mt，2HCH2)；3，30～3，70(mt，3HNCH2和NCH)；4，59(mt，(mf殘余ArNH)；6，71(d寬峰J＝8 Hz，1H芳族H處于胺的鄰位)；7，30～7，60(mt，4H芳族H)；8，26(d寬峰，J＝8，5 Hz，1H芳族H處于酰胺的鄰位)；8，70(d，J＝9 Hz，1H(殘基CONH)。
元素分析C19H25N3O3S2，1，25CF3CO2H計算值(％)C＝46，94；H＝4，81；N＝7，64；S＝11，66實測值(％)C＝46，69；H＝4，32；N＝7，46；S＝11，90.
實施例4按照實施例1中制備N-〔5-(2(R)-氨基-3-巰基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸的三氟乙酸鹽的方法進行操作，不同的是以N-〔5-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯0.33g為原料，得到0.05g N-〔5-(2(R)-氨基-3-巰基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯的三氟乙酸鹽，其特征如下-質(zhì)子的核磁共振譜(300 MHz，(CD3)2SO d6，δppm)2，10(mt，2HCH2)；2，12(s，3HSCH3)；2，63(mt，2HCH2S)；2，92(mt，2HCH2S)；3，30～3，70(mtNCH2CHN)；3，76(s，3HCOOCH3)；4，79(mt，1HCHCOO)；6，40(mf，1HArNH)；6，72(d，J＝8 Hz，1HH6)；7，40(t，
J＝8 Hz，1HH7)；7，52(d，J＝8 Hz，1HH8)；7，40～7，60(mt，2HH2 et H3)；8，13(mf，3HNH3+CF3COO-)；8，30(d寬峰，J＝8 Hz，1HH4)；8，92(d，J＝7，5 Hz，1HArCONH).
元素分析C20H27N3O3S2，1，2CF3CO2H計算值(％) C＝48，18；H＝5，09；N＝7，52；S＝11，48實測值(％) C＝48，0；H＝5，1；N＝7，7；S＝11，9實施例5按照實施例1中制備N-〔(5-硝基萘基)-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯的方法進行操作，不同的是以1.1g 5-硝基萘-1-羧酸與L-己氨酸甲酯為原料，得到N-〔(5-硝基萘基)-1-羰基〕-L-己氨酸甲酯1.3g。
按照實施例1中制備N-〔(5-硝基萘基)-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯的方法進行操作，不同的是以1.3gN-〔(5-硝基萘基)-1-羰基〕-L-己氨酸甲酯為原料，得到N-〔(5-硝基萘基)-1-羰基〕-L-己氨酸甲酯1.2g。
按照實施例3中制備N-〔5-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯的方法進行操作，不同的是以1.4g N-〔(5-氨基萘基)-1-羰基〕-L-己氨酸甲酯為原料，得到0.67g N-〔5-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-己氨酸甲酯，其特征如下-質(zhì)子核磁共振譜 (200 MHz，(CD3)2SO d6，δppm)0，91(t，J＝7，5 Hz，3HCH3)；1，25～1，60(mt，4HCH2)；1，43(s，9HC(CH3)3)；1，80(mt，2HCH2)；2，20～2，70(mt，2HCH2S)；3，00～3，50(mt，2HNCH2)；3，75(s，3HCOOCH3)；3，82(mt，1HNCH)；4，50(mt，1HCHCOO)；6，10(mf，1HArNH)；6，52(d寬峰，J＝7，5 Hz，1H芳族H處于胺的鄰位)；6，97(d，J＝8，5 Hz，1HOCONH)；7，00～7，60(mt，19H芳族H)；8，05(d寬峰，J＝8 Hz，1H芳族H處于酰胺的鄰位)；8，80(d，J＝7 Hz，1HCONH).
質(zhì)譜 (DIC)M/Z＝746(MH+)
按照實施例3中制備N-〔5-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸的方法進行操作，不同的是以0.65g N-〔5-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-己氨酸甲酯為原料，得到0.6gN-〔5-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-己氨酸。
按照實施例3中制備N-〔5-(2(R)-氨基-3-巰基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸三氟乙酸鹽的方法進行操作，不同的是以0.6g N-〔(5-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-己氨酸為原料，得到0.06g N-〔5-(2(R)-氨基-3-巰基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-己氨酸三氟乙酸鹽，其特征如下-質(zhì)子核磁共振譜 (250 MHz，(CD3)2SOd6，δppm)0，93(t，J＝7，5 Hz，3HCH3)；1，40(mt，4HCH2)；1，81(mt，2HCH2)；2，91(mt，2HCH2S)；3，30～3，70(mt，3HCHN和NCH2)；4，44(mt，1HCHCOO)；6，40(mf，1HArNH)；6，71(d寬峰，J＝7，5 Hz，1H芳族H處于胺的鄰位)；7，30～7，60(mt，4H芳族H)；8，10(mf，2H，NH2)；8，30(d寬峰，J＝8 Hz，1H芳族H處于酰胺的鄰位)；8，73(d，J＝7，5 Hz，1HCONH)元素分析C20H27N3O3S，CF3CO2H計算值(％)C＝52，48；H＝5，60；N＝8，34；S＝6，37實測值(％) C＝51，19；H＝5，46；N＝7，93；S＝6，18質(zhì)譜(LSIMS)M/Z＝390(MH+).
實施例6按照實施例1中制備N-〔(5-硝基萘基)-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯的方法進行操作，不同的是以4.7g L-蛋氨酸乙酯為原料，得到7.35g N-〔(5-硝基萘基)-1-羰基〕-L-蛋氨酸乙酯，其特征如下-質(zhì)子核磁共振譜 (300 MHz，(CD3)2SO d6，δppm)1，28(t，J＝7，5 Hz，3H乙基的CH3)；2，08(mt，2HCH2)；2，11(s，3HSCH3)；2，65(mt，2HCH2S)；4，22(mt，2H乙基的COOCH2)；4，66(mt，1HCHCOO)；7，80 8，00(mt，3HH2-H3和H7)；8，36(d，J＝7，5 Hz，1HH4)；8，46和8，56(2d，J＝8 Hz，1HH6和H8)；9，17(d，J＝7，5 Hz，1HArCONH).
按照實施例1中制備N-〔(5-氨基萘基)-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯的方法進行操作，不同的是以1.38g N-〔(5-硝基萘基)-1-羰基〕-L-蛋氨酸乙酯為原料，得到1.02g N-〔(5-氨基萘基)-1-羰基〕-L-蛋氨酸乙酯，無須進一步提純便可用于后續(xù)步驟。
按照實施例3中制備N-〔5-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙氨基)-萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯的方法進行操作，不同的是以1g N-〔(5-氨基萘基)-1-羰基〕-L-蛋氨酸乙酯為原料，得到0.94g N-〔5-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸乙酯，無須進行其它提純便可用于后續(xù)步驟。
按照實施例3中制備N-〔5-(2(R)-氨基-3-巰基丙氨基)-萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸的三氟乙酸鹽的方法進行操作，不同的是以0.4g N-〔5-(2-(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸乙酯為原料，得到0.033g粉狀N-〔5-(2(R)-氨基-3-巰基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨基乙酯，其特征如下所示-質(zhì)子核磁共振譜 (400 MHz，(CD3)2SO d6，δppm)1，30(t，J＝7，5 Hz，3H乙基的CH3)；2，10(mt，2HCH2)；2，11(s，3HSCH3)；2，65(mt，2HCH2S)；2，90(AB拆分，J＝14和5 Hz，2HCH2S)；3，30～3，70(mtNCH2CHN)；4，21(mt，2H乙基的COOCH2)；4，65(mt，1HCHCOO)；6，38(mt，1HArNH)；6，72(d，J＝8 Hz，1HH6)；7，40(t，J＝8 Hz，1HH7)；7，52(d，J＝8 Hz，1HH8)；7，40～7，60(mt，2HH2和
H3)；8，30(d寬峰J＝8 Hz，1HH4)；8，90(d，J＝7，5 Hz，1HArCONH).
-ana 元素分析C21H29N3O3S2，CF3CO2H計算值(％)C＝50，26；H＝5，5；N＝7，65；S＝11，67實測值(％)C＝49，9；H＝5，8；N＝7，7；S＝11，7實施例7向由5.36g N-叔丁氧羰基-L-蛋氨酸與100cm3乙醚組成的溶液中加入2.68g 5-茚滿醇(indanol)，隨后加入0.24g4-二甲氨基哌啶和4.96g1，3-二環(huán)己基碳化二亞胺。在約20℃攪拌該反應(yīng)混合物直至酯化反應(yīng)進行完全為止。隨后用燒結(jié)玻璃進行過濾，用100cm3水洗滌3次、再用100cm35％(V/V)乙酸水溶液洗滌，隨后用100cm3水洗，最后用100cm310％(P/V)NaHCO3水溶液洗滌2次。用MgSO4干燥有機相，過濾并進行減壓濃縮至干。得到4.03g無須進行其它提純便可以用于后續(xù)步驟的N-叔丁氧羰基-L-蛋氨酸5-茚滿醇酯。
向由0.96g N-叔丁氧羰基-L-蛋氨酸5-茚滿醇酯在25cm3CH2Cl2中形成的溶液中加入5cm3三氟乙酸，在約20℃攪拌3小時，脫除溶劑并在二異丙醚中結(jié)晶后，得到0.5g無須其它提純便可用于后續(xù)步驟的L-蛋氨酸的5-茚滿醇酯。
按照實施例1中制備N-〔(5-硝基萘基)-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯的方法進行操作，不同的是以0.5g L-蛋氨酸5-茚滿醇酯為原料，得到0.28g N-〔(5-硝基萘基)-1-羰基〕-L-蛋氨酸5-茚滿醇酯，其特征在于-質(zhì)子核磁共振譜(250 MHz，(CD3)2SO d6，δppm)2，10(mt，2H茚滿基的CH2)；2，14(s，3HSCH3)；2，24(mt，2HCH2)；2，73(mt，2HCH2S)；2，87和2，90(2t，J＝7，5 Hz，2H 茚滿基的ArCH2)；4，88(mt，1HCHCOO)；6，95(dd，J＝9 et 2 Hz，1H茚滿基的H6)；7，06(d，J＝2 Hz，1H茚滿基的H4)；7，30(d，J＝9 Hz，1H茚滿基的H7)；7，76(t，J＝8 Hz，1HH7)；7，85～8，00(mt，2HH2和H3)；8，35和8，60(2d，J＝8 Hz，1H H6和H8)；8，43(dd，J＝7，5和3 Hz，1HH4)；9，36(d，J＝7，5 Hz，1HArCONH).
按照實施例1中制備N-〔(5-硝基萘基)-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯的方法進行操作，不同的是以4.64g N-〔(5-硝基萘基)-1-羰基〕-L-蛋氨酸5-茚滿醇酯為原料，得到3.40g N-〔(5-硝基萘基)-1-羰基〕-L-蛋氨酸5-茚滿醇酯，其特征在于-質(zhì)子核磁共振譜(200 MHz，(CD3)2SO d6，δppm)2，07(mt，2H茚滿基的CH2)；2，14(s，3HSCH3)；2，10～2，30(mt，2HCH2)；2，72(mt，2HCH2S)；2，88和2，94(2t，J＝7 Hz，2H茚滿基的ArCH2)；4，82(mt，1HCHCOO)；5，81(s寬峰，2HNH2)；6，72(d寬峰，J＝7，5 Hz，1HH6)；6，94(dd，J＝8和2 Hz，1H茚滿基的H6)；7，05(d，J＝2 Hz，1H茚滿基的H4)；7，22(t，J＝7，5 Hz，1HH7)；7，30(d，J＝8Hz，1H茚滿基的H7)；7，35～7，55(mt，3HH2-H3和H8)；8，20(d寬峰，J＝8 Hz，1HH4)；9，08(d，J＝7，5 Hz，1HArCONH).
按照實施例3中制備N〔5-(2-(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯的方法進行操作，不同的是以0.22g N-〔(5-氨基萘基)-1-羰基〕-L-蛋氨酸5-茚滿醇酯為原料，得到0.38g N-〔5- (2-(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸5-茚滿醇酯，其特征在于-質(zhì)子核磁共振譜(250 MHz，(CD3)2SOd6滴加幾滴 CD3COOD d4，δ ppm)1，38(s，9HOC(CH3)3)；2，07(mt，2H茚滿基的CH2le)；2，12(s，3HSCH3)；2，25(mt，2HCH2)；2，55～2，80(mt，4HCH2S)；2，86和2，90(2t，J＝7，5 Hz，2H茚滿是的ArCH2)；3，00～3，30(mt，2HNCH2)；3，81(mt，1HCHN)；4，82(mt，1HCHCOO)；6，52(d寬峰，J＝8 Hz，1HH6)；6，92(dd，J＝8和2 Hz，1H茚滿基的H6)；7，02(d，J＝2 Hz，1H茚滿基的H4)；7，10～7，60(mt，20H茚滿基的H7-SC(C6H5)3-H2-H3-H7et H8)；8，03(d寬峰，J＝8，5Hz，1HH4)，
按照實施例3中制備N-〔5-(2(R)-氨基-2-巰基丙氨基)-萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸的三氟乙酸鹽的方法進行操作，不同的是以0.38g N-〔5-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸5-茚滿醇酯為原料，得到0.064g N-〔5-(2(R)-氨基-3-巰基丙氨基)苯基-1-羰基〕-L-蛋氨酸5-茚滿醇酯的三氟乙酸鹽，其特征如下所示-質(zhì)子核磁共振譜 (300 MHz，(CD3)2SO d6，δppm)2，06(mt，2H茚滿基的CH2)；2，12(s，3HSCH3)；2，22(mt，2HCH2)；2，70(mt，2HCH2S)；2，75～2，85(mt，6H茚滿基的ArCH2和CH2S)；3，00～3，60(mtNCH2CHN)；4，82(mt，1HCHCOO)；6，36(mt，1HArNH)；6，68(d寬峰，J＝8 Hz，1HH6)692(dd，J＝8和2 Hz，1H茚滿基的H6 le)；7，02(d，J＝2 Hz，1H茚滿基的H4)；7，26(d，J＝8 Hz，1H茚滿基的H7 le)；7，32(t，J＝8 Hz，1HH7)；7，45～7，65(mt，3HH2-H 3et H8)；8，26(d寬峰，J＝8，5 Hz，1HH4)；9，10(d，J＝7，5 Hz，1HArCONH).
元素分析C28H33N3O3S2，CF3CO2H計算值(％)C＝56，5；H＝5，37；N＝6，59；S＝10，06實測值(％)C＝56，2；H＝5，6；N＝6，6；S＝10，1實施例8向由0.3g N-〔5-(2-(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸于5cm3二乙醚中形成的溶液中加入0.048g芐醇，隨后加入0.054g 4-二甲氨基哌啶和0.1g1，3-二環(huán)己基碳化二亞胺。在約20℃攪拌該反應(yīng)介質(zhì)直到酯化反應(yīng)進行完全為止，隨后用燒結(jié)玻璃過濾，用100cm3水洗三次后，用100cm35％(V/V)乙酸水溶液洗滌，隨后用100cm3水洗，最后用NaHCO310％(P/V)水溶液100cm3洗滌2次。用MgSO4干燥有機相，過濾后減壓濃縮至干。得到0.21g無需進一步提純便可用于下列步驟的N-〔5-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸芐酯。
按照實施例3中制備N-〔5-(2-(R)-氨基-3-巰基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸的三氟乙酸鹽的方法進行操作，不同的是以0.21g N-〔5-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸芐酯為原料，得到0.021粉狀N-〔5-(2(R)-氨基-3-巰基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸芐酯三氟乙酸鹽，其特征在于-質(zhì)子核磁共振譜 (200 MHz，(CD3)2SOd6滴加數(shù)滴 CD3COOD d4，δ ppm)2，10(mt，2HCH2)；2，10(s，3HSCH3)；2，50～3，00(mt，4HCH2S)；3，10～3，90(mt，3HNCH2CHN)；4，73(mt，1HCHCOO)；5，23(AB明顯，J＝13，5 Hz，2HCOOCH2Ar)；6，32(mt殘基ArNH)；6，70(d，J＝7，5 Hz，1HH6)；de 7，20～7，60(mt，9H芳族H-H2-H3-H7和H8)；8，27(d寬峰，J＝7，5 Hz，1HH4)；8，98(d殘基，J＝7，5 HzArCONH).
元素分析C26H31N3O3S2，1，25 CF3CO2H計算值(％) C＝53，47；H＝5，08；N＝6，56；S＝10，02實測值(％) C＝53，3；H＝4，9；N＝6，7；S＝10，2實施例9按照實施例8中制備N-〔5-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸芐酸的方法進行操作，不同的是以0.053g 2-(2-甲氧乙氧基)乙醇為原料，得到0.43g產(chǎn)物，在硅膠上經(jīng)色譜提純〔洗提液環(huán)己烷-乙酸乙酯(70-30，體積)〕得到0.31g N-〔5-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸-2-(2-甲氧乙氧基)乙酯，其特征在于-質(zhì)子核磁共振譜 (200 MHz，CDCl3，δppm)1，45(s，9HOC(CH3)3)；2，12(mt，2HCH2)；2，12(s，3HSCH3)；2，54和2，64(2 mts，2H CH2S)；3，05～3，30(mt，2HNCH2)；3，36(s，3HCOOCH3)；3，40～4，05(mt，7HOCH2和CHN)；4，37(mt，2HCOOCH2)；4，68(d，J＝8 Hz，1HNHCOO)；5，05(mt，1HCHCOO)；6，52(d寬峰，J＝7，5Hz，1HH6)；6，68(d，J＝8 Hz，1HArCONH)；7，10～7，90(mt，21HSC(C6H5)3-H2-H3-H4-H7-H8和ArNH).
按照實施例3中制備N-〔5-(2(R)-氨基-3-巰基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸的三氟乙酸鹽的方法進行操作，不同的是以0.21g N-〔5-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯為原料，得到0.051g N-〔5-(2(R)-氨基-3-巰基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸2-(2-甲氧乙氧基)乙酯的三氟乙酸鹽，其特征如下所示-質(zhì)子核磁共振譜 (200 MHz，(CD3)2SOd6，δppm)2，10(mt，2HCH2)；2，12(s，3HSCH3)；2，64(t，J＝7，5 Hz，2HCH2S)；2，90(AB明顯，2HCH2S)；3，25(s，3HOCH3)；3，30～3，80(mt，9HOCH2和NCH2CHN)；4，28(mt，2HCOOCH2)；4，67(mt，1HCHCOO)；6，32(mf，1HArNH)；6，72(d寬峰，J＝8 Hz，1HH6)；7，37(t，J＝8 Hz，1HH7)；7，40～7，65(mt，3HH2-H3和H8)；8，09(mf，3HNH3+CF3COO-)；8，28(d寬峰，J＝8 Hz，1HH4)；8，87(d，J＝7，5 Hz，1HArCONH).
元素分析C24H35N3O5S2，1，25 CF3CO2H計算值(％) C＝48，8；H＝5，60；N＝6，44；S＝9，83實測值(％) C＝48，8；H＝5，7；N＝6，6；S＝10，0實施例10按照實施例7制備N-叔丁氧羰基-L-蛋氨酸5-茚滿醇酯的方法進行操作，不同的是以3.73g 2-(苯基磺?；?乙醇為原料，得到7.9gN-叔丁氧羰基-L-蛋氨酸2-(苯基磺?；?乙酯，無需進一步提純便可用于后續(xù)步驟。
按照實施例7制備L-蛋氨酸5-茚滿醇酯的方法進行操作，不同的是以4.17g N-叔丁氧羰基-L-蛋氨酸2-(苯基磺?；?乙酯為原料，得到3.54gL-蛋氨酸2-(苯基磺酰基)乙酯，無需進-步提純便可用于后續(xù)步驟。
按照實施例1中制備N-〔(5-硝基萘基)-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯的方法進行操作，不同的是以2.75gL-蛋氨酸2-(苯基磺酰基)乙酯為原料，得到2.06gN-〔(5-硝基萘基)-1-羰基〕-L-蛋氨酸-2-(苯基磺酰基)乙酯，其特征在于-質(zhì)子核磁共振譜 (300 MHz，(CD3)2SO d6，δppm)1，92(mt，2HCH2)；2，06(s，3HSCH3)；2，55(mt，2HCH2S)；3，81(t，J＝6 Hz，2HCH2SO2)；4，35～4，55(mt，2HCOOCH2)；4，48(mt，1HCHCOO)；7，68(t，J＝7，5 Hz，2H芳族H位于磺?；g位)；de 7，757，95(mt，4HH2-H3-H7芳族H位于磺?；鶎ξ?；7，96(d，J＝7，5Hz，2H芳族H位于磺?；徫?；8，34(dd，J＝7，5和1，5 Hz，1HH4)；8，40和8，53(2d寬峰，J＝8 Hz，1HH6和H8)；9，09(d，J＝7，5 Hz，1HArCONH).
按照實施例1中制備N-〔(5-硝基萘基)-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯的方法進行操作，不同的是以2.06g N-〔(5-硝基萘基)-1-羰基〕-L-蛋氨酸2-(苯基磺酰基)乙酯為原料，得到3.40gN-〔(5-硝基萘基)-1-羰基〕-L-蛋氨酸-2-(苯基磺?；?乙酯，無須進一步提純便可用于后續(xù)步驟。
按照實施例3中制備N-〔5-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨基甲酯的方法進行操作，不同的是以0.972g N-〔(5-氨基萘基)-1-羰基〕-L-蛋氨酸2-(苯磺酰)乙酯為原料，得到0.21g N-〔5-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸2-(苯磺酰)乙酯，無需進一步提純便可以被用于后續(xù)步驟。
按照實施例3中制備N-〔5-(2(R)-氨基-3-巰基丙氨基)萘基〕-1-羰基〕-L-蛋氨酸三氟乙酸鹽的方法進行操作，不同的是以 0.21g N-〔5-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸2-(苯磺酰)乙酯為原料，得到0.013g N-〔5-(2-(R)-氨基-3-巰基丙氨基)萘基〕-1-羰基〕-L-蛋氨酸2-(苯磺酰)乙酯的三氟乙酸鹽，其特征如下-質(zhì)子核磁共振譜 (400 MHz，(CD3)2SOd6滴入幾滴 CD3COOD d4，δen ppm)1，90(mt，2HCH2)；2，05(s，3HSCH3)；2，54(mtCH2S)；2，88(mt，2HCH2S)；3，40～3，65(mt，3HNCH2CHN)；3，76(AB明顯2HCH2SO2)；4，38和4，45(AB明顯，1HCOOCH2)；4，46(mt，1HCHCOO)；6，70(d.J＝7，5 Hz，1HH6)；7，36(t，J＝7，5 Hz，1HH7)；7，45～7，60(mt，3HH2-H3和H8)；7，68(t，J＝7，5Hz，2H芳族H位于磺?；g位)；7，78(t，J＝7，5 Hz，1H芳族H位于磺?；鶎ξ?；7，96(d，J＝7，5 Hz，2H芳族H位于磺?；徫?；8，26(d寬峰，J＝8 Hz，1HH4)；8，76(d殘基，J＝7，5 HzArCONH).
質(zhì)譜 (DIC)M/Z＝576(MH+).實施例11向由4.7g 5-硝基-1-萘酸于50cm3甲醇中形成的懸浮液中加1cm397％硫酸，隨后將其回流12小時。將溶液重新冷卻至約20℃，干燥所形成的沉積物，用5cm3冰冷卻甲醇洗滌2次，隨后干燥直至其重量恒定為止。得到4.56g熔點為105℃的5-硝基-1-萘甲酸甲酯。
向由4.45g 5-硝基-1-萘甲酸甲酯于150cm3乙酸乙酯和35cm3乙醇的混合物中形成的溶液中加入21.5g氯化亞錫(II)的二水合物，在約70℃加熱30分鐘。隨后冷卻至約20℃，將反應(yīng)混合物傾入200cm3冰中，通過添加5％(P/V)NaHCO3溶液將pH逐漸地調(diào)至7-8。用配有C鹽的燒結(jié)玻璃過濾所得到的混合物，通過傾析分離有機相并且用150cm3乙酸乙酯萃取水相2次。合并有機相，用MgSO4干燥，過濾并且減壓濃縮至于。得到4.5g油狀5-氨基-1-萘甲酸甲酯，無需進一步提純便可用于后續(xù)步驟。
向4.5g 5-氨基-1-萘酸甲酯于30cm3甲醇中形成的溶液中加入14.75g S-三苯甲基-N-叔丁氧羰基半胱氨酸醛、0.14cm3濃乙酸、分子篩(3A)和4.15g氰基硼氫化鈉。在約20℃將反應(yīng)混合物攪拌2天。用配有C鹽的燒結(jié)玻璃過濾。用甲醇洗滌燒結(jié)玻璃。減壓濃縮濾出物，將其溶于150cm3乙酸乙酯并依次用100cm310％(p/v)NaHCO3水溶液、100cm310％(p/v)檸檬酸水溶液、100cm3蒸餾水、100cm310％(p/v)NaHCO3水溶液和100cm3NaCl飽和水溶液洗滌。用MgSO4干燥有機相，過濾并減壓濃縮至干。用硅膠色譜提純產(chǎn)物〔洗提劑環(huán)己烷-乙酸乙酯(85-15，體積)〕。得到3.5g米色烤蛋白狀5-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙氨基)-1-萘酸甲酯，無需進一步提純便可用于后續(xù)步驟。
向由1.5g 5-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙氨基)-1-萘酸甲酯于25cm3二甲基甲酰胺中形成的溶液中邊攪拌邊加入3.6cm3碘代甲烷和7g固體NaHCO3。在約20℃攪拌反應(yīng)混合物20小時，隨后將其傾入200cm3冰中。用150cm3乙酸乙酯萃取水相3次。合并有機相，用MgSO4干燥，過濾并且減壓濃縮至干。借助硅膠色譜提純所得到的紅油狀物質(zhì)〔洗脫劑環(huán)己烷-乙酸乙酯(90-10，體積)〕。得到0.56g 5-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙基-N-甲氨基)-1-萘甲酸甲酯，其特征如下-質(zhì)子核磁共振譜(400 MHz，(CD3)2SO d6，δppm)1，42(s，9HOC(CH3)3)；2，28(mt，2HSCH2)；2，62(s，3HNCH3)；2，85和3，04(2 dd，J＝13和7 Hz和J＝13和6.5 Hz，1HNCH2)；3，82(mt，1HCHN)；3，96(s，3HCOOCH3)；6，83(d，J＝9 Hz，1HNHCOO)；7，15(d，J＝8 Hz，1HH6)；7，20～7，40(mt，15HSC(C6H5)3)；7，47和7，52(2t，J＝8 Hz，1HH3和H7)；8，10～8，15和8，36(mt和 d，J＝8 Hz，2H和1HH2-H4和H8).
向由0.56g 5-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙基-N-甲氨基)-1-萘酸甲酯于25cm3蒸餾水和55cm3乙醇中形成的溶液中加入0.2g氫氧化鉀?；亓骷訜?小時后，減壓濃縮。將殘余物溶于蒸餾水中，隨后用10％(p/v)檸檬酸水溶液將其pH值調(diào)至3。用50cm3乙酸乙酯萃取水相3次。合并有機相，用NaCl飽和水溶液洗滌，用MgSO4干燥，過濾并減壓濃縮至干。得到0.55g 5-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙基-N-甲氨基)-1-萘酸，該黃色油狀物無須進一步提純便可用于后續(xù)步驟。
按照實施例1中制備N-〔(5-硝基萘基)-1-羰基〕--蛋氨酸甲酯的方法進行操作，不同的是以0.55g 5-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙基-N-甲氨基)-1-萘酸為原料，得到1.2g橙色油，硅膠色譜提純后〔洗提劑環(huán)己烷-乙酸乙酯(80-20，體積)〕，得到0.55g N-〔5-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙基-N-甲氨基)-萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯，其特征如下-質(zhì)子核磁共振譜(300 MHz，(CD3)2SO，δppm)1，41(s，9HOC(CH3)3)；2，06(mt，2HCH2)；2，10(s，3HSCH3)；2，38(mt，2HSCH2)；2，60(mt，2HCH2S)；2，60(s，3HNCH3)；2，85和3，04(2 mts，1HNCH2)；3，75(s，3HCOOCH3)；3，82(mt，1HCHN)；4，69(mt，1HCHCOO)；6，85(d，J＝9 Hz，1HNHCOO)；7，10(d，J＝8 Hz，1HH6)；7，20～7，45和7，42(2 mts，16H和1HSC(C6H5)3- H3和H7)；7，55(d，J＝8 Hz，1HH2)；7，85和7，92(2d，J＝8 Hz，1HH4和H8)；8，91(d，J＝7.5 Hz，1HArCONH).
按照實施例3中制備N-〔5-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙基氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸的方法進行操作，不同的是以0.3g N-〔5-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙基-N-甲氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯為原料，得到0.3g N-〔5-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙基-N-甲氨基)-萘基-1-羰基)-L-蛋氨酸，無需進一步提純便用于后續(xù)步驟。
按照實施例3中制備N-〔5-(2-(R)-氨基-3-巰基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸的三氟乙酸鹽的方法進行操作，不同的是以0.25g N-〔5-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙基-N-甲氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸為原料，得到0.045g粉狀N-〔5-(2(R)-氨基-3-巰基丙基-N-甲氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸的三氟乙酸鹽，其特征在于-質(zhì)子核磁共振譜 (400 MHz，(CD3)2SO d6，δppm)1，95～2，15(mt，2HCH2)；2，10(s，3HSCH3)；2，63(mt，2HSCH2)；2，78(s，3HNCH3)；2，84(mt，2HCH2S)；3，28和3，40(2 dd，J＝11和8 Hz和J＝11和6 Hz，1HNCH2)；3，57(mt，1HCHN)；4，60(mt，1HCHCOO)；7，35(d，J＝7，5 Hz，1HH6)；7，53(t，J＝8 Hz；1HH7)；7，55～7，70(mt，2HH2和H3)；7，95(mf，2HNH2)；7，99(d，J＝8 Hz，1HH8)；8，55(dd，J＝8和2 Hz，1HH4)；8，83(d，J＝7.5 Hz，1HArCONH).
元素分析C20H27N3O3S2，1，25CF3CO2H計算值(％)C＝47，9；H＝5，05；N＝7，45；S＝11，37實測值(％)C＝47，7；H＝5，3；N＝7，4 S＝11，4實施例12按照實施例3中制備N-〔5-(2-(R)-氨基-3-巰基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸的三氟乙酸鹽的方法進行操作，不同的是以0.25g N-〔5-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙基-N-甲氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯為原料，得到0.049g粉狀N-〔5-(2(R)-氨基-3-巰基丙基-N-甲氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯的三氟乙酸鹽，其特征在于-質(zhì)子核磁共振譜(250 MHz，(CD3)2SO d6加入幾滴 CD3COOD d4，δppm)2，06(mt，2HCH2)；2，10(s，3HSCH3)；2，63(mt，2HSCH2)；2，80(s，3HNCH3)；2，84(mt，2HCH2S)；3，30和3，42(2 dd，J＝13，5和9 Hz和J＝13，5和5，5 Hz，1HNCH2)；3，59(mt，1HCHN)；3，75(s，3HCOOCH3)；4，70(mt，1HCHCOO)；7，35(d，J＝7，5 Hz，1HH6)；7，50～7，70(mt，3HH2-H3和H7)；7，97(d，J＝8，5 Hz，1HH8)；8，53(dd，J＝7，5和2 Hz，1HH4)；8，93(d，J＝7.5 Hz，1HArCONH).
元素分析C21H29N3O3S2，1，25CF3CO2H計算值(％) C＝48，82；H＝5，27；N＝7，27；S＝11，09實測值(％) C＝48，3；H＝5，1；N＝7，0；S＝11，2
實施例13向由3.75g S-三苯甲基-L-半胱氨酸于15cm3水中形成的懸浮液中邊攪拌邊加入1.5cm333％(P/P)碳酸鈉和1.5cm3硫酸二甲酯。邊攪拌邊將反應(yīng)混合物加熱至90℃，直至形成透明溶液為止，隨后回流加熱2小時，冷卻后，過濾所形成的沉淀，先用水洗，后用乙醚洗滌。得到1.95g熔點為114℃的N-甲基-S-三苯甲基-L-半胱氨酸。
向由1.95g N-甲基-S-三苯甲基-L-半胱氨酸于20cm3二氯甲烷中形成的溶液中加入0.68cm3三乙胺和1.06g二碳酸二叔丁酯。在約20℃將反應(yīng)混合物攪拌20小時，隨后用10％(p/v)檸檬酸水溶液洗滌，隨后用蒸餾水洗滌。用MgSO4干燥有機相，過濾并減壓濃縮。用硅膠色譜提純所得到的米色固體〔洗脫劑乙酸乙酯〕。得到0.4g N-甲基-N-叔丁氧羰基-S-三苯甲基-L-半胱氨酸，其特征在于-質(zhì)子核磁共振譜 (250 MHz，(CD3)2SOd6加入幾滴CD3COOD d4，溫度為393K，δppm)1，40(s，9HOC(CH3)3)；2，55～2，82(mt，2HSCH2)；2，68(s，3HNCH3)；4，16(dd，J＝10和5，5 Hz，1HCHN)；7，20～7，45(mt，15H芳族H).
向由1.57g N，O二甲羥基胺于10cm3CH2Cl2中形成的懸浮液中于0℃左右加入1.96cm3N-甲基哌啶。將該溶液加入由7.8g N-甲基-N-叔丁氧羰基-S-三苯甲基-L-半胱氨酸、1.96cm3N-甲基哌啶、2.08cm3氯甲酸異丁酯和20cm3CH2Cl2于約-8℃形成的反應(yīng)混合物中。在約20℃將反應(yīng)混合物攪拌2小時，用10％(p/v)檸檬酸水溶液洗滌，隨后用2％(p/v)NaOH水溶液、最后用飽和NaCl溶液洗滌。用MgSO4干燥有機相，過濾并減壓濃縮。所得的紅色稠油用硅膠色譜提純〔洗提液二氯甲烷-乙酸乙酯(95-5，體積)〕。得到4.2g紅油狀N-(N-甲基-2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙酰)-N，O-二甲羥基胺，其特征在于-質(zhì)子核磁共振譜(200 MHz，(CD3)2SOd6加入幾滴CD3COOD d4，溫度為373K，δppm)1，41(s，9HOC(CH3)3)；2，35～2，75(mt，2HSCH2)；2，62(s，3HNCH3)；3，06(s，3HNCH3)；3，60(s，3HNOCH3)；4，89(dd，J＝9，5和6Hz，1HCHN)；7，20～7，45(mt，15H芳族H).
向由0.386g氫化鋰鋁于35cm3乙醚中形成的約-45℃懸浮液中加入4.2g處于15cm3乙醚中的N-(N-甲基-2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙?；?-N，O-二甲羥胺。邊攪拌邊將溫度升至0℃。冷卻至約-35℃后，加入由1.77g NaHCO3與6.5cm3水組成的溶液。用10cm3鹽酸標準溶液洗滌有機相3次、用10cm3NaHCO3飽和溶液洗滌2次，最后用10cm3NaCl飽和溶液洗滌。用MgSO4干燥有機相，過濾并進行減壓濃縮。得到2.2g無需進-步提純便可以用于后續(xù)步驟的N-甲基-N-叔丁氧羰基-S-三苯甲基半胱氨酸醛。
按照實施例3中制備N-〔5-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯的方法進行操作，不同的是以2.9g N-甲基-N-叔丁氧羰基-S-三苯甲基半胱氨酸醛為原料，得到0.55g N-{5-〔(N-甲基-2(R)-叔丁氧羰基氨基)-3-三苯甲硫基丙氨基〕-萘基-1-羰基}-L-蛋氨酸甲酯，無需進一步提純便可用于后續(xù)步驟。
按照實施例3中制備N-〔5-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸的方法進行操作，不同的是以035g N-{5-〔(N-甲基-2(R)-叔丁氧羰基氨基)-3-三苯甲硫丙氨基〕-萘基-1-羰基}-L-蛋氨酸甲酯為原料，得到0.33g N-{5-〔(N-甲基-2(R)-叔丁氧羰基氨基)-3-三苯甲硫基丙氨基〕-萘基-1-羰基}-L-蛋氨酸，無需進一步提純便可用于后續(xù)步驟。
按照實施例3中制備N-〔5-(2-(R)-氨基-3-巰基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸的三氟乙酸鹽的方法進行操作，不同的是以0.33g N-{5-〔(N-甲基-2(R)-叔丁氧羰基氨基)-3-三苯甲硫基丙氨基〕萘基-1-羰基}-L-蛋氨酸為原料，得到0.05g N-〔5-(2(R)-甲氨基-3-巰基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸的三氟乙酸鹽，其特征在于-質(zhì)子核磁共振譜 (300 MHz，(CD3)2SO d6加入幾滴CD3COOD d4，δppm)2，08(mt，2HCH2)；2，08(s，3HSCH3)；2，64(mt，2HCH2S)；2，68(s，3HNCH3)；2，92(mt，2HCH2S)；3，30～3，65(mt，3HNCH2CHN)；4，58(mt，1HCHCOO)；6，73(d，J＝8 Hz，1HH6)；7，35(t，J＝8 Hz，1HH7)；7，45～7，65(mt，3HH2-H3和H8)；8，24(d寬峰，J＝8，5 Hz，1HH4)；8，71(d 殘基，J＝7，5 HzArCONH).
元素分析C20H27N3O3S2，1，25CF3CO2H計算值(％)C＝47，91；H＝5，05；N＝7，45；S＝11，37實測值(％)C＝47，8；H＝4，7；N＝7，5；S＝11，5實施例14按照實施例3中制備N-〔5-(2-(R)-氨基-3-巰基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸的三氟乙酸鹽的方法進行操作，不同的是以0.35g N-{5-〔(N-甲基-2(R)-叔丁氧羰基氨基)-3-三苯甲硫基丙氨基〕萘基-1-羰基}-L-蛋氨酸甲酯為原料，得到0.049g粉狀N-〔5-(2(R)-甲氨基-3-巰基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯的三氟乙酸鹽，其特征在于-質(zhì)子核磁共振譜(400 MHz，(CD3)2SOd6加入幾滴CD3COOD d4，δppm)2，25和2，40(2 mts，
1HCH2)；2，69(s，3HSCH3)；2，94(mt，2HCH2S)；2，94(s，3HNCH3)；3，30～3，65(mt，5HCH2S和NCH2CHN)；3，75(s，3HCOOCH3)；4，72(dd，J＝9和4，5 Hz，1HCHCOO)；6，73(d，J＝8 Hz，1HH6)；7，39(t，J＝8Hz，1HH7)；7，45～7，65(mt，3HH2-H3和H8)；8，28(d寬峰，J＝8 Hz，1HH4).
元素分析C21H29N3O3S2，2，5CF3CO2H計算值(％) C＝43，33；H＝4，41；N＝5，83；S＝8，9實測值(％) C＝43，9；H＝4，6；N＝5，9；S＝8，7實施例15向由12.5g氫化鉀于80cm3四氫呋喃中組成的約0℃懸浮液中加入2.6g冠醚18-6，隨后滴加由5g N-叔丁氧羰基-L-蛋氨酸甲酯于15cm3四氫呋喃和2.5cm3碘代甲烷中形成的溶液。在約0℃攪拌2小時。隨后加入6cm3乙酸，將反應(yīng)混合物傾入200g冰中。通過加入10％(p/v)NaOH溶液將pH值調(diào)至約9。用20cm3乙醚將反應(yīng)混合物洗滌3次。通過添加10％(v/v)鹽酸溶液將水溶液的pH值調(diào)至約3，隨后用20cm3乙酸乙酯萃取3次。合并有機相，用NaCl飽和溶液洗滌，用MgSO4干燥，過濾并且減壓濃縮至于。得到6g無需進一步提純便可用于后續(xù)步驟的N-甲基-N-叔丁氧羰基-L-蛋氨酸甲酯。
向由4.6g N-甲基-N-叔丁氧羰基-L-蛋氨酸甲酯于150cm3甲醇中組成的溶液中加入6.6g對甲苯磺酸一水合物，在分子篩(3A)存在下回流24小時。將反應(yīng)介質(zhì)冷卻至約20℃，在燒結(jié)玻璃上過濾并且減壓蒸除溶劑。將殘余物溶于150cm3水中并且用己烷-二乙醚(50-50，體積)混合物洗滌。通過添加NaHCO3飽和溶液將水相的pH值升至10左右。用50cm3乙酸乙酯萃取水相4次，合并有機相，用飽和NaCl溶液洗滌，用MgSO4干燥，過濾，減壓濃縮至干。得到6g N-甲基-L-蛋氨酸甲酯，其特征如下所示-質(zhì)子核磁共振譜(200 MHz，(CD3)2SO d6，dppm)1，75(mt，2HCH2)；1，95(mf，1HNH)；2，04(s，3HSCH3)；2，22(s，
3HNCH3)；2，52(mt，2HCH2S)；3，21(dd，J＝7和5 Hz，1HNCHCOO)；3，66(s，3HCOOCH3).
按照實施例1制備N-〔(5-硝基萘基)-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯的方法進行操作，不同的是以0.68gN-甲基-L-蛋氨酸甲酯為原料，得到1.34g N-甲基-N-〔(5-硝基萘基)-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酸，無需進一步提純便可以用于后續(xù)步驟。
按照實施例1制備N-〔(5-硝基萘基)-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯的方法進行操作，不同的是以1.17gN-甲基-N-〔(5-硝基萘基)-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯為原料，得到0.97gN-甲基-N-〔(5-硝基萘基)-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酸，無需進一步提純便可以用于后續(xù)步驟。
按照實施例3制備N-〔5-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙氨基)-萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯的方法進行操作，不同的是以0.95g N-甲基-N-〔(5-氨基萘基)-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯為原料，得到0.97g N-甲基-N-〔5-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯，無需進一步提純便可用于后續(xù)步驟。
按照實施例3制備N-〔5-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙氨基)-萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸的方法進行操作，不同的是以0.37g N-甲基-N-〔5-(2(R)叔丁羰基氨基-3-三苯甲硫基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸為原料，得到0.36g N-甲基-N-〔5-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸，無需進一步提純便可用于后續(xù)步驟。
按照實施例3制備N-〔5-(2(R)-氨基-3-巰基丙氨基)-萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸的方法進行操作，不同的是以0.35gN-甲基-N-〔(5-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸為原料，得到0.13g N-甲基-N-〔5-(2(R)-氨基-3-巰基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸，無需進一步提純便可用于后續(xù)步驟。
其特征在于-質(zhì)子核磁共振譜 (400 MHz，(CD3)2SO d6加入幾滴CD3COOD d4，溫度為413K，δppm)1，90～2，40(mt，5HCH2和SCH3)；2，40～2，90(mt，5HCH2S和NCH3)；3，13和3，22(2dd，J＝14和6，5 Hz，1HCH2S)；3，56和3，76(2mts，2H和1HNCH2CHN)；5，10(mf展開，1HCHCOO)；6，68(d，J＝8 Hz，1HH6)；7，10～7，50(mt，4HH2-H3-H7和H8)；8，15(d寬峰，J＝8 Hz，1HH4).
元素分析C20H27N3O3S2，1，14CF3CO2H計算值(％) C＝48，5；H＝5，14；N＝7，61；S＝11，62實測值(％) C＝48，4；H＝5，2；N＝7，6；S＝11，6實施例16按照實施例3中制備N-〔5-(2-(R)-氨基-3-巰基-丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸三氟乙酸鹽的方法進行操作，不同的是以0.34g N-甲基-N-〔5-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙基氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯為原料，得到0.045g粉狀N-甲基-N-〔5-(2(R)-氨基-3-巰基丙基氨基)-萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯，其特征在于-質(zhì)子核磁共振譜 (400 MHz，CD3)2SOd6加入幾滴CD3COOD d4，溫度為413°K，δppm)1，90～2，30(mt，5HCH2和SCH3)；2，40～2，90(mt，5HCH2S和NCH3)；3，13和3，22(2 dd，J＝14和6，5 Hz，1HCH2S)；3，45～3，80(mt，3HNCH2CHN)；3，70(s，3HCOOCH3)；5，10(mf展開，1HCHCOO)；6，68(d，J＝8 Hz，1HH6)；7，10～7，50(mt，4HH2-H3-H7和H8)；8，15(d寬峰，J＝8 Hz，1HH4).
元素分析C21H29N3O3S2，1，14CF3CO2H計算值(％) C＝49，42；H＝5，37；N＝7，43；S＝11，33實測值(％) C＝49，4H＝5，0；N＝7，5；S＝11，5實施例17按照T.NAKAYAMA等人在Chem.Pharm.Bull.32，3968(1984)中所述方法制備6-硝基萘-1-羧酸。
向9.84g 6-硝基萘-1-羧酸與3-硝基萘-1-羧酸的混合物于200cm3氯仿和60cm3二甲基甲酰胺中形成的溶液中加入9.9gL-蛋氨酸甲酯的鹽酸鹽、6.8g 1-羥基苯并三唑、5cm3三乙胺和10.3g二環(huán)己基碳化二亞胺。在約20℃將反應(yīng)混合物攪拌2天。用燒結(jié)玻璃過濾，用50cm3氯仿洗滌。用200cm3NaHCO3水溶液10％(p/v)洗滌有機溶液2次、隨后用10％(p/v)檸檬酸水溶液、用蒸餾水、再用NaCl飽和水溶液洗滌。用MgSO4干燥有機相，過濾，減壓濃縮至干。得到13.3g油狀物，在硅膠上進行色譜提純，洗提劑為環(huán)己烷-乙酸乙酯(1∶1，體積)混合物。得到0.64g N-〔(6-硝基萘基)-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯固體和3.7gN〔(6-硝基萘基)-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯和N-〔(3-硝基萘基)-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯的混合物。
N〔(6-硝基萘基)-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯的特征如下所示-質(zhì)子核磁共振譜 (300 MHz；(CD3)2SO d6；δppm)de 2，10(mt，2HCH2)；2，12(s，3HSCH3)；2，65(mt，2HCH2S)；3，77(s，3HCOOCH3)；4，70(mt，1HCHCOO)；7，82(t，J＝7，5 Hz，1HH3)；7，95和8，45(2d，J＝7，5 Hz，1HH2和4)；8，36(dd，J＝9和2 Hz，1HH7)；8，48(d寬峰，J＝9 Hz，1HH8) ；9，12(d，J＝2 Hz，1HH5)；9，18(d，J＝7，5 Hz，1HCONH).
向0.64g N-〔(6-硝基萘基)-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯于40cm3乙醇中的溶液中加入2g氯化亞錫(II)的二水合物。在約70℃將反應(yīng)混合物攪拌30分鐘，隨后冷卻至約20℃。加入40cm3乙酸乙酯。將反應(yīng)混合物傾入冰中，隨后將pH值通過添加5％(p/v)NaHCO3水溶液調(diào)至約7-8。用配有C鹽的燒結(jié)玻璃過濾所得到的混合物。傾析分離有機相，用150cm3乙酸乙酯萃取水相3次。合并有機相，用MgSO4干燥，過濾并在減壓下濃縮至干。得到0.66g油狀物，用硅膠進行色譜提純，洗提劑環(huán)己烷-乙酸乙酯(1∶1體積)。得到0.38g油狀N-〔(6-氨基萘基)-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲醋，其特征在于-質(zhì)子核磁共振譜 (200 MHz，(CD3)2SO d6，δppm)2，06(mt，2HCH2)；2，09(s，3HSCH3)；2，60(mt，2HCH2S)；3，80(s，3HCOOCH3)；4，63(mt，1HCHCOO)；5，48(s，2HAr-NH2)；6，86(dd，J＝9和2 Hz，1HH7)；7，19～7，62(2d，J＝8 Hz，1HH2和4)；7，32(t，J＝8 Hz，1HH3)；7，90(d寬峰)，J＝9 Hz，1HH8)；8，82(d，J＝7，5Hz，1HCONH).
向0.66g N-〔(6-氨基萘基)-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯于20cm3CH2Cl2中的溶液中加入1.02g S-三苯甲基-N-叔丁氧羰基半胱氨酸、0.297g1-羥基苯并三唑和0.42g 1-(3-二乙氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽，在約20℃攪拌反應(yīng)混合物24小時。用15cm3蒸餾水洗滌3次。用MgSO4干燥有機相。過濾并減壓濃縮至干。得到的烤蛋白狀物用硅膠進行色譜提純〔洗提劑CH2Cl2-乙酸乙酯(8∶2體積)〕。得到0.6gN-〔(6-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙酰氨基)-萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯白色固體，其特征如下-質(zhì)子核磁共振譜(400 MHz，CDCl3，溫度為333°K，δppm)1，45(s，9HOC(CH3)3)；2，14(s，3HSCH3)；2，16et 2，35(2 mts，1HCH2)；2，55(t，J＝7，5 Hz，2HCH2S)；2，73et2，83(2dd，J＝13和5，5 Hz和J＝13和7，5 Hz，1HCH2S)；3，83(s，3HCOOCH3)；3，99(mt，1HCHN)；4，84(d，J＝7，5 Hz，1HNHCOO)；5，03(mt，1HCHCOO)；6，64(d，J＝8 Hz，1HArCONH)；7，05～7，50(mt，16HSC(C6H5)3和H3)；7，38(dd，J＝9和1，5 Hz，1HH7)；7，59(d，J＝7，5 Hz，1HH2)；7，85(d寬峰，J＝7，5 Hz，1HH4)；8，22(mf，1HArNHCO)；8，27(d，J＝1，5 Hz，1HH5)；8，33(d，J＝9 Hz，1HH8).
向0.3g N-〔6-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙酰氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯于0.75cm3蒸餾水和7.5cm3四氫呋喃中形成的溶液中加入0.057g水合含氧化鋰。在約20℃將溶液攪拌20小時，隨后減壓濃縮。得到0.29g烤蛋白狀N-〔6-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙酰氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸無須進一步提純該產(chǎn)物便可用于后續(xù)步驟。
向0.29gN-〔6-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙酰氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸于2.6cm3二氯甲烷中形成的溶液中于約20℃加入0.1cm3三乙基甲硅烷，隨后加入2.6cm3三氟乙酸。在約20℃將反應(yīng)混合物攪拌2小時，隨后減壓濃縮。用25cm3己烷研磨殘余物3次、用25cm3戊烷研磨3次、用25cm3乙醚研磨3次，隨后減壓干燥。用高性能液體色譜提純殘余物(相C18)，用乙腈-水混合物(含0.1％三氟乙酸)洗提。得到0.02g粉狀N-〔6-(2(R)-氨基-3-巰基丙酰氨基)-萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸的三氟乙酸鹽，其特征如下-質(zhì)子核磁共振譜 (300 MHz，(CD3)2SO d6，δppm)2，08(mt，2HCH2)；2，11(s，3HSCH3)；2，63(mt，2HCH2S)；3，11(mt，2HCH2S)；4，22(mt，1HCHN)；4，61(mt，1HCHCOO)；7，58(mt，2HH2和H3)；7，68 dd，J＝9和2，5 Hz，1HH7)；8，01(dd，J＝7，5和2，5 Hz，1HH4)；8，28(d，J＝9 Hz，1HH8)；8，38(d，J＝2，5 Hz，1HH5)；8，43(mf，3HNH3+CF3COO-)；8，88(d，J＝7，5 Hz，1HArCONH)；10，82(s，1HArNHCO).
元素分析C19H23N3O4S2，1CF3CO2H計算值(％)C＝47，1；H＝4，52；N＝7，85；S＝11，9實測值(％)C＝47，1；H＝4，3；N＝7，6；S＝10，7.
實施例18按照實施例17中制備N-〔6-(2(R)-氨基-3-巰基丙酰氨基)-萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸三氟乙酸鹽的制備方法進行操作，不同的是以0.25g N-〔6-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙酰氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯為原料，得到0.035g N-〔6-(2(R)-氨基-3-巰基丙酰氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯的三氟乙酸鹽，其特征在于-質(zhì)子核磁共振譜 (400 MHz，(CD3)2SO d6，δppm)2，08(mt，2HCH2)；2，10(s，3HSCH3)；2，64(mt，2HCH2S)；3，11(d，J＝6 Hz，2HCH2S)；3，74(s，3HCOOCH3)；4，19(t，J＝6 Hz，1HCHN)；4，67(mt，1HCHCOO)；7，50～7，60(mt，2HH2和H3)；7，68(dd，J＝9和1，5Hz，1HH7)；8，00(d寬峰，J＝8和2 Hz，1HH4)；8，23(d，J＝9 Hz，1HH8)；8，36(d，J＝1，5 Hz，1HH5)；8，43(mf，2HNH2)；8，98(d，J＝8 Hz，1HArCONH)；10，78(s，1HArNHCO).
元素分析C20H25N3O4S2，1CF3CO2H計算值(％)C＝48，08；H＝4，77；N＝7，65；S＝11，6實測值(％)C＝48，3；H＝4，6；N＝7，5；S＝11，2.
實施例19向0.34g N-〔(6-氨基萘基)-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯于20cm3甲醇中形成的溶液中加入1.34g按照EP0618221 A2所述方法制備的S-三苯甲基-N-叔丁氧羰基半胱氨酸醛、0.17cm3乙酸、分子篩(3A)和0.19g氰基硼氫化鈉。在約20℃將該反應(yīng)混合物攪拌3天，用配有C鹽的燒結(jié)玻璃過濾。用甲醇洗滌燒結(jié)玻璃。減壓濃縮濾出液，將其重新溶解于100cm3乙酸乙酯中并依次用100cm3NaHCO3水溶液10％(p/v)、80cm310％(p/v)檸檬酸水溶液、100cm3蒸餾水、100cm310％(p/v)NaHCO3水溶液和100cm3NaCl飽和水溶液洗滌。MgSO4干燥有機相，過濾并減壓濃縮至干。得到的烤蛋白狀物用硅膠進行色譜提純〔洗提劑環(huán)己烷-乙酸乙酯(1∶3，體積)〕。得到0.48g黃色固狀N-〔6-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯，其特征在于-質(zhì)子核磁其振譜
(300 MHz，(CD3)2SO d6，δppm)1，40(s，9H(CH3)3)；2，10(mt，2HCH2)；2，12(s，3HSCH3)；2，20～2，55和2，63(2 mts，2HCH2S)；3，06(mt，2HNCH2)；3，74(mt，1HCHN)；3，74(s，3HCOOCH3)；4，67(mt，1HCHCOO)；5，92(t寬峰，J＝5，5 Hz，1HArNH)；6，75(s寬峰，1HH5)；6，89和7，63(2d，J＝7，5 Hz，1HH2和H4)；6，95(dd，J＝9和1，5 Hz，1HH7)；7，20～7，45(mt，16HH3和芳族H)；7，93(d寬峰J＝9 Hz，1HH8)；8，85(d，J＝7，5 Hz，1HCONH).
向0.48g N-〔6-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯于2.6cm3蒸餾水和7.2cm3四氫呋喃中形成的溶液中加入0.05g水合氧化鋰。于約20℃攪拌20小時，減壓濃縮。將殘余物溶于蒸餾水中并且通過添加10％(p/v)檸檬酸水溶液將pH值調(diào)至3。用50cm3乙酸乙酯萃取水相3次。合并有機相，用NaCl飽和水溶液洗滌，用MgSO4干燥，過濾和減壓濃縮至干。得到0.43g烤蛋白狀N-〔6-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸。無須進-步提純便可用于后續(xù)步驟。
向0.42g N-〔6-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙氨基)-萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸與1.0cm3乙二硫醇的混合物中于約20℃加入20cm3三氟乙酸。在約20℃攪拌2小時，減壓濃縮。用25cm3乙醚研磨殘余物3次，減壓干燥。用高性能液相色譜(相C18)提純殘余物，用含0.1％三氟乙酸的乙腈-水混合物洗提。得到0.14g粉狀N-〔6-(2(R)-氨基-3-巰基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸三氟乙酸鹽，其特征在于-質(zhì)子核磁共振譜 (300 MHz，(CD3)2SOd6，δppm)2，05(mt，2HCH2)；2，10(s，3HSCH3)；2，62和2，88(2 mts，2HchacunCH2S)；3，30～3，70(mt，3HCHN和NCH2)；4，58(mt，1HCHCOO)；6，20(mf，1HArNH)；6.92(s寬峰，1HH5)；7，05(dd，J＝9和1，5Hz，1HH7)；7，28和7，70(2d，J＝7，5 Hz，1HH2和H4)；7，40
(t，J＝7，5 Hz，1HH3)；8，08(d寬峰，J＝9 Hz，1HH8)；8，09(mf，3HNH3+)；8，70(d，)＝7，5 Hz，1HCONH)元素分析C19H25N3O3S2，1，4CF3CO2H計算值(％)C＝46，16；H＝4，69；N＝7，41；S＝11，31實測值(％)C＝46，13；H＝4，59；N＝7，45；S＝11，25.
實施例20按照實施例19中制備N-〔6-(2(R)-氨基-3-巰基丙氨基)-萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸三氟乙酸鹽的制備方法進行操作，所不同的是以0.6g N-〔6-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯為原料，得到0.15g N-〔6-(2(R)-氨基-3-巰基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯的三氟乙酸鹽，其特征在于-質(zhì)子核磁共振譜 (300 MHz，(CD3)2SOd6加入幾滴CD3COODd4，δppm)2，05(mt，2HCH2)；2，05(s，3HSCH3)；2，56和2，83(2 mrs，2HCH2S)；3，35～3，60(mt，3HCHN和NCH2)；3，68(s，3HCOOCH3)；4，54(mt，1HCHCOO)；6.90(d，J＝1，5 Hz，1HH5)；7，03(dd，J＝9和1，5 Hz，1HH7)；7，28和7，67(2d，J＝7，5 Hz，1HH2和H4)；7，34(t，J＝7，5 Hz，1HH3)；8，00(d寬峰，J＝9 Hz，1HH8).
元素分析C20H27N3O3S2，1，2 CF3CO2H計算值(％)C＝48，19；H＝5，09；N＝7，52；S＝11，48實測值(％)C＝48，05；H＝4，98；N＝7，75；S＝11，80.
實施例21向由0.57g間氯過苯甲酸于6cm3CH2Cl2中形成的約0℃溶液中在10分鐘內(nèi)滴加0.5g溶于4cm3CH2Cl2中的N-〔(6-硝基萘基)-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯。在約20℃將反應(yīng)混合物攪拌20小時，冷卻至約0℃。加入5cm3NaOH標準溶液。傾析后，用10cm3CH2Cl2萃取水相2次。合并有機相，用NaCl飽和水溶液洗滌，用MgSO4干燥，過濾，減壓濃縮至干。得到0.6g 2(S)-(6-硝基-1-萘甲酰氨基)-4-甲磺?；∷峒柞?，無需進一步提純便可用于后續(xù)步驟。
向0.42g溶于30cm3乙酸乙酯和20cm3乙醇的2(S)-(6-硝基-1-萘甲酰氨基)-4-甲磺酰基丁酸甲酯的溶液中加入0.04g10％鈀/碳，在約20℃將該溶液置于1.5大氣壓的氫壓力下，歷時3小時。用配有C鹽的燒結(jié)玻璃過濾反應(yīng)混合物并且減壓濃縮至干，得到0.6g 2(S)-(6-氨基-1-萘甲酰氨基)-4-甲磺酰基丁酸甲酯，其特征如下-質(zhì)子核磁共振譜 (300 MHz，(CD3)2SO d6加入數(shù)滴CD3COOD d4，δppm)2，10～2，40(mt，2HCH2)；3，00(s，3HSO2CH3)；3，15～3，40(mt，2HCH2SO2)；3，75(s，3HCOOCH3)；4，67(mt，1HCHCOO)；6.89(d，J＝2 Hz，1HH5)；7，01(dd，J＝9和2 Hz，1HH7)；7，25(d寬峰)，J＝7，5 Hz，1HH2)；7，32(t，J＝7，5 Hz，1HH3)；7，63(d寬峰，J＝7，5 Hz，1HH4)；7，95(d，J＝9 Hz，1HH8)；8，85(d殘基，J＝7，5HzArCONH).
按照實施例19中制備N-〔6-(2-(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯的方法進行操作，所不同的是以0.4g 2(S)-(6-氨基-1-萘甲酰氨基〕-4-甲磺?；∷峒柞樵希玫?.55g 2(S)-〔6-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙氨基)-1-萘甲酰氨基(-4-甲磺?；∷峒柞?，其特征在于-質(zhì)子核磁共振譜 (CD3)2SO d6，δppm)1，40(s，9HOC(CH3)3)；2，20～2，45(mt，2HCH2)；2，50～2，65(mtCH2S)；3，03(s，3HSO2CH3)；2，95～3，40(mt，4HNCH2和CH2SO2)；3，70 3，85(mt，1HCHN)；3，77(s，3HCOOCH3)；4，68(mt，1HCHCOO)；5，92(t寬峰，J＝5 Hz，1HArNH)；6.75(s寬峰，1HH5)；6，90(d，J＝8 Hz，1HNHCOO)；6，94(d寬峰.J＝9 Hz，1HH7)；7，25～7，45(mt，17HSC(C6H5)3-H2和H3)；7，65(d寬峰，J＝7，5 Hz，1HH4)；7，95(d，J＝9 Hz，1HH8)；8，94(d，J＝7，5 Hz，1HArCONH).
按照實施例19中制備N-〔6-(2-(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸的方法進行操作，所不同的是以0.36g 2(S)-〔6-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙氨基)-1-萘甲酰氨基〕-4-甲磺?；∷峒柞樵?，得到0.35g 2(S)-〔6-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙氨基)-1-萘甲酰氨基〕-4-甲磺酰基丁酸，無需進一步提純便可用于后續(xù)步驟。
按照實施例19中制備N-〔6-(2-(R)-氨基-3-巰基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸三氟乙酸鹽的方法進行操作，所不同的是以0.35g 2(S)-〔6-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙氨基)-1-萘甲酰氨基〕-4-甲磺酰基丁酸為原料，得到0.132g 2(S)-〔6-(2(R)-氨基-3-巰基丙氨基)-1-萘甲酰氨基〕-4-甲磺酰基丁酸三氟乙酸鹽，其特征在于-質(zhì)子核磁共振譜 (CD3)2SOd6，δppm)2，10～2，45(mt，2HCH2)；2，90(mt，2HCH2S)；3，04(s，3HSO2CH3)；3，15～3，70(mtCH2SO2和NCH2CHN)；4，60(mt，1HCHCOO)；6，24(mf，1HArNH)；6.94(d，J＝2 Hz，1HH5)；7，08(dd，J＝9和2 Hz，1HH7)；7，35(d寬峰，J＝7，5 Hz，1HH2)；7，42(t，J＝7，5 Hz，1HH3)；7，72(d寬峰，J＝7，5 Hz，1HH4)；8，05(d，J＝9 Hz，1HH8)；8，08(mf，3HNH3+CF3COO-)；8，83(d，J＝7，5 Hz，1HArCONH).
元素分析C19H25N3O5S2，1，6CF3CO2H計算值(％)C＝42，87；H＝4，31；N＝6，76；S＝10，31實測值(％)C＝42，4；H＝4，2；N＝6，9；S＝10，4實施例22按照實施例19中制備N-〔6-(2-(R)-氨基-3-巰基丙氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸三氟乙酸鹽的方法進行操作，所不同的是以0.16g 2(S)-〔6-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫基丙氨基)-1-萘甲酰氨基〕-4-甲磺酰基丁酸甲酯為原料，得到0.035g 2(S)-〔6-(2(R)-氨基-3-巰基丙氨基)-1-萘甲酰氨基〕-4-甲磺?；∷峒柞ト宜猁}，其特征在于-質(zhì)子核磁共振譜 (300 MHz，(CD3)2SO d6，δppm)2，25～2，40(mt，2HCH2)；2，91(mt，2HCH2S)；3，04(s，3HSO2CH3)；3，20～3，65(mtCH2SO2和NCH2CHN)；3，77(s，3HCOOCH3)；4，67(mt，1HCHCOO)；6，24(mf，1HArNH)；6.94(d，J＝2 Hz，1HH5)；7，08(dd，J＝9和2Hz，1HH7)；7，35(d寬峰，J＝7，5 Hz，1HH2)；7，42(t，J＝7，5 Hz，1HH3)；7，65(d寬峰J＝7，5 Hz，1HH4)；8，05(d，J＝9 Hz，1HH8)；8，08(mf，3HNH3+CF3COO-)；8，95(d，J＝7，5 Hz，1HArCONH)元素分析C20H27N3O5S2，1，25CF3CO2H計算值(％)C＝45，34；H＝4，78；N＝7，05；S＝10，76實測值(％)C＝44，4；H＝4，4；N＝7，0；S＝10，7實施例23按照實施例17中制備N-〔6-(2-(R)-叔丁氧羰基氨基-3-三苯甲硫丙酰氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯的方法進行操作，所不同的是以0.66g N-〔(6-氨基萘基)-1-羰基〕-L-蛋氨酸甲酯和0.48gN，N’-二叔丁氧羰基胱氨酸為原料，得到0.7g二-{N-〔6-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-硫烷基丙酰氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸二甲酯，無須進一步提純便可用于后續(xù)步驟。
按照實施例17中制備N-〔6-(2(R)-氨基-3-巰基丙酰氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸三氟乙酸鹽的方法進行操作，所不同的是以0.3g二-{N-〔6-(2(R)-叔丁氧羰基氨基-3-硫烷基丙酰氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸}二甲酯為原料，得到0.06g二-{N-〔 6-(2(R)-氨基-3-硫烷基丙酰氨基)萘基-1-羰基〕-L-蛋氨酸}二甲酯三氟乙酸鹽，其特征在于-質(zhì)子核磁共振譜(400 MHz，(CD3)2SO d6，δppm)2，00～2，15(mt，2HCH2)；2，08(s，3HSCH3)；2，62(mt，2H
CH2S)；3，22和3，44(dd和mt，J＝14 et 8 Hz，1HCH2S)；3，72(s，3HCOOCH3)；4，32(mt，1HCHN)；4，67(mt，1HCHCOO)；7，50～7，60(mt，2HH2和H3)；7，68(dd，J＝9和2 Hz，1HH7)；7，97(d寬峰，J＝8，5Hz，1HH4)；8，24(d，J＝9 Hz，1HH8)；8，35(d，J＝2 Hz，1HH5)；8，53(mf，2HNH3+CF3COO-)；8，98(d，J＝8 Hz，1HArCONH)；10，92(s，1HArNHCO)元素分析C40H48N6O8S4，2 CF3CO2H，二水合物計算值(％) C＝46，6；H＝4，75；N＝7，4；S＝11，3實測值(％) C＝46，6；H＝4，5；N＝7，1；S＝11，0可以在下列試驗中證明蛋白質(zhì)Ras的法呢基轉(zhuǎn)移酶和法呢基化作用的抑制活性。
法呢基轉(zhuǎn)移酶的活性是通過被轉(zhuǎn)移的(3H)法呢基的數(shù)量由蛋白質(zhì)P21H-Ras上的(3H)焦磷酸法呢酯〔(3H)FPP〕來確定。最終體積為60μl的標準反應(yīng)混合物的組成如下三羥甲基氨基甲烷-HCl 50mM，MgCl25mM，二硫蘇糖醇5mM，辛基-β-D-吡喃葡糖苷0.2％，P21H-ras 200皮摩爾，，(3H)FPP(61000dpm/皮摩爾)4.5皮摩爾。
通過添加約5ng由THP1細胞培養(yǎng)物提純得到的人體法呢基轉(zhuǎn)移酶來引發(fā)反應(yīng)。在有96個1cm3孔的微量滴定平皿(TiterPlate，Beckman)上于37℃培養(yǎng)20分鐘后，通過添加0.4cm30.1％處于甲醇之中的0℃SDS來終止反應(yīng)。隨后加入30％處于甲醇之中的三氯乙酸(TCA)。將平皿放置于冰中1小時。用過濾裝置(Combi Cell Harvester，Spatron)在玻璃纖維膜(FiltermatPharmacia)上回收沉淀物并用6％處于蒸餾水中的三氯乙酸進行清洗。用微波爐干燥這些膜，隨后用通過在熱空氣中熔融形成的閃爍體(MeltilexPharmacia)進行浸漬，最后在β-Plate(LKB)計數(shù)器中計數(shù)(cpm)。每一試驗重復(fù)3次。
活性單元被定義為在20分鐘內(nèi)在P21H-Ras上有1皮摩爾(3H)FPP被轉(zhuǎn)移。
通過將在有或無抑制劑存在的條件下進行的試驗經(jīng)過空白扣除之后進行對比得到抑制百分比，IC50為由9種不同濃度采用Enzfitter或Grafit軟件得到的抑制效果測量值。
可以下列方式確定細胞活性細胞系為THAC系(被活性Ha-Ras轉(zhuǎn)染的細胞CCL39，K.Sennuen等人，EMBOJ.，7(1)161-168(1988))。這些細胞在含DMEM介質(zhì)、5％胎牛血清，1％ G418的直徑為6cm的培替培養(yǎng)皿中被接種。
培養(yǎng)24小時之后，改變培養(yǎng)介質(zhì)(采用或不采用血清)，將所研究的化合物在有或無DTT存在條件下以二甲基甲酰胺(DMF)溶液的形式加入其中(DMF的最終濃度為0.5％，0.1mMDTT)。于37℃培養(yǎng)24小時后，在1cm3裂解緩沖液(三羥甲基氨基甲烷HCl20mM，三硝基甲苯X1141％，MgCl25mM，DTT7mM，NaCl150mM，pH＝7.4)中裂解細胞。在10分鐘內(nèi)以4000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速通過離心分離澄清裂解物。用三硝基甲苯(Triton)X114進行萃取能夠?qū)⒎峄鞍識as與非法尼基化蛋白Ras相互分離〔 C.BORDIER，J.Biol.Chem.256(4)，1604-1607(1981)〕。憎水性更強的法尼基化蛋白Ras存在于去污劑相中，而非法尼基化蛋白Ras存在于水相中。在用于在14％聚丙烯酰胺凝膠上進行電泳和沉積的變性緩沖劑中通過于95℃加熱將樣品變性。當(dāng)著色劑到達凝膠下部時，凝膠的蛋白質(zhì)在PVDF隔膜上被轉(zhuǎn)移。借助蛋白質(zhì)印跡法提取蛋白質(zhì)Ras用特異性的抗Ras(pan-Ras Ab3，OncogeneScience)單克隆抗體隨后用125I標記蛋白質(zhì)A培養(yǎng)膜。經(jīng)過自動射線照相術(shù)，識別分割譜帶并用γ計數(shù)器計數(shù)。與法尼基化Ras和非法尼基化Ras對應(yīng)的譜帶的放射活性可以確定蛋白質(zhì)Ras的法尼基化作用的抑制活性。
結(jié)果如表1所示。
表1化合物抑制活性IC50對細胞(THAC)的抑制作用(％)實施例148實施例35，6實施例569實施例8100實施例970實施例1021實施例191，8 31～50μM實施例2080 50～10μM實施例214mM新型化合物I呈無毒性和藥物可接受的鹽的形式。這些無毒鹽包括與無機酸(鹽酸、硫酸、氫溴酸、磷酸、硝酸)或與有機酸(乙酸、三氟乙酸、丙酸、琥珀酸、馬來酸、羥基馬來酸、苯甲酸、富馬酸、甲磺酸或草酸)或與無機堿(氫氧化鉀、氫氧化鋰、碳酸鈉、石灰)或有機堿(叔胺如三乙胺、哌啶、芐胺)根據(jù)化合物I中R1和R2的性質(zhì)形成的鹽。
本發(fā)明還涉及含有至少一種與一種或多種惰性或生理活性且藥物可接受稀釋劑或助劑締合的化合物I的藥物組合物。
這些組合物可以口服、非腸胃或直腸方式給藥。
口服組合物包括片劑、丸劑、粉劑或粒劑。其中本發(fā)明活性化合物與一種或多種惰性稀釋劑如蔗糖、乳糖或淀粉混合。其中還可以含有除了稀釋劑以外的其它物質(zhì)如潤滑劑例如硬脂酸鎂。
作為口服液體組合物，可以選用藥物可接受的乳液、溶液、懸液液、糖漿、含有惰性稀釋劑如水或石蠟油的酏劑。其中還可以含有除了稀釋劑以外的其它物質(zhì)例如潤濕劑、甜味劑或芳香劑。
用于非腸胃給藥的本發(fā)明組合物可以是含水或非水無菌溶液、懸浮液或乳液。作為溶劑或賦形劑，可以采用丙二醇、聚乙二醇、植物油、尤其是橄欖油或可注射有機酯如油酸乙酯。其中還可以含有助劑，尤其是潤濕劑、乳化劑和分散劑、可以采用多種方法例如借助細菌過濾器向組合物中加入殺菌劑或通過加熱來進行滅菌步驟。這些組合物還可被制成在使用時能夠被溶于無菌水中或其他可注射無菌介質(zhì)中的無菌固體組合物。
適用于直腸給藥的組合物為除了活性化合物以外還含有賦形劑如可可油的栓劑。
本發(fā)明組合物特別適用于治療人體不同器官的癌癥。
人體治療劑量取決于所期望的療效、療程和治療客體的自身因素。
一般地，人體腹膜內(nèi)給藥劑量包括在0.1-20mg/kg/天。
下列實施例描述本發(fā)明組合物。
實施例將實施例1得到的化合物200mg溶于100cm3生理鹽水之中。將所形成的溶液以無菌方式分配于10cm3安瓿瓶中。
以一次性注射或灌注的方式施用這些安瓿給藥。
權(quán)利要求
1.通式I所示的新型化合物在通式(I)中，R1代表通式Y(jié)-S-A1-所示基團，其中Y代表氫原子，或氨基酸的其余部分或脂肪酸的殘基或烷基或烷氧羰基或其中R4代表C1-4烷基、視需要而定被苯基或下列通式所示基團取代的基團R4-S- 式中A1、X1、R1′、R2、R2′與R如下定義，A1代表直鏈或支鏈C1-4亞烷基，在基團＞C(X1)(Y1)的α位可視需要而定被下列基團取代氨基，直鏈或支鏈C1-6烷基氨基，其中每一烷基部分均為C1 -6烷基的直鏈或支鏈二烷基氨基，直鏈或支鏈C1-6鏈烷酰氨基或其中烷基部分為直鏈或支鏈C1-6烷基的烷氧羰基氨基，X1和Y1分別代表氫原子或者二者連同與其結(jié)合的碳原子共同形成基團＞C＝O，R1′代表氫原子或甲基，R2代表可視具體情況而定被羥基、C1-4烷氧基、巰基、C1-4烷硫基、C1-4烷基亞磺?；駽1-4烷基磺?；〈腃1-6直鏈或支鏈烷基、鏈烯基或炔基，當(dāng)R2代表被羥基取代的烷基時，R2可以與α位羧基形成內(nèi)酯，R2′代表氫原子或甲基，R代表氫原子或可被下列基團取代的C1-6烷基C1-4烷氧基、C1-4烷基硫、C1-4烷基亞磺酰、C1-4烷基磺酰、苯基、苯氧基、苯硫基、苯基亞磺酰、苯磺酰、C1-4烷基氨基、其中每一個烷基均含1-4個碳原子的二烷基氨基，或者可被一個或多個選自氫原子和烷基、烷氧基、烷硫基或鏈烷?；脑踊蚧鶊F取代的苯基，條件是基團 處于萘核的5或6位。
2.按照權(quán)利要求1的新型化合物，其中R1代表式Y(jié)-S-A1-所示基團，其中Y代表氫原子或賴氨酸或含多達20個碳原子的脂肪酸的其余部分，A1代表可被氨基或C1-4烷基氨基取代的亞乙基或亞丙基，X1和Y1各自代表氫原子或者連同與其相結(jié)合的碳原子共同形成基團＞C＝O，R1′代表氫原子或甲基，R2代表可被羥基、甲氧基、巰基、甲硫基、甲基亞磺?；蚣谆酋；〈腃1-4烷基，R2′代表氫原子或甲基，R代表氫原子或可被烷氧基取代的C1-4烷基，或苯基。
3.按照權(quán)利要求1的新型化合物，其中R1代表式Y(jié)-S-A1-所示基團，其中Y代表氫原子，A1代表可被氨基取代的亞乙基或亞丙基，X1和Y1分別代表氫原子或連同與其結(jié)合的碳原子共同形成基團＞C＝O，R1′代表氫原子，R2代表可被羥基、甲氧基、巰基或甲硫基取代的甲基、乙基、丙基或丁基，R2′代表氫原子，R2代表氫原子或C1-4烷基。
4.按照權(quán)利要求1的新型化合物，其中R1代表2-巰基乙基或1-氨基-2-巰基乙基，X1和Y1分別代表氫原子或連同與其結(jié)合的碳原子共同形成基團＞C＝O，R1′代表氫原子，R2代表正丁基或2-甲硫基乙基，R2′代表氫原子，R代表氫原子或甲基。
5.藥物組合物，其特征在于含有足夠數(shù)量與一種或多種藥物可接受的惰性或生理活性稀釋劑或助劑結(jié)合使用的權(quán)利要求1-4中任一項的化合物。
全文摘要
通式I所示的新型化合物式(I)中，R
文檔編號A61K31/195GK1150419SQ9519351
公開日1997年5月21日 申請日期1995年6月7日 優(yōu)先權(quán)日1994年6月10日
發(fā)明者B·岜多恩, C·布勒斯, A·考默科, J-D·吉東 申請人:羅納-布朗克羅萊爾股份有限公司