專利名稱：防止各種特質(zhì)在再水化或熔化時聚集的方法以及由此獲得的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及防止各種物質(zhì)在脫水和再水化時以及冷凍和熔化時形成聚集體的方法。本發(fā)明也涉及由此獲得的組合物。
背景技術(shù)：
貯存和加工各種脫水態(tài)或冷凍態(tài)物質(zhì)，對于保持活性、防止形成降解產(chǎn)物以及有助于操作和運輸來說都是必要的。遺憾的是，在再水化或熔化時，有許多的物質(zhì)傾向于聚集，由此降低了這些物質(zhì)的有效濃度并經(jīng)常使它們變得不可使用或形成有害的副產(chǎn)物。
為了防止或消除這種聚集作用試驗過許多的方法。例如，經(jīng)常使用洗滌劑和離液序列高的試劑來阻止溶液中蛋白的聚集。認為這些試劑能防止聚集作用是借助于疏水性的相互作用傳達的，因此聚集作用的防止受到了限制。例如參見Tanford和Reynolds(1976)生化、生物物理會志(Biochim.Biophys.Acta.457133；和Tanford，“憎水效應(TheHydrophobic Effeet)”，2nd Ed.Wiley，N.Y.(1980)。這樣的一些試劑對于物質(zhì)欲配制成治療組合物的應用場合也并不合適，因為它們有可能引起有害的反應。
溶液中的鋁鹽是以高度水含膠態(tài)凝膠的形式存在的，并且在超過其等電離點的任何pH上都攜帶有表面電荷。由于各膠體粒子攜帶同種電荷，所以它們彼此相互推斥而自然形成了穩(wěn)定的膠態(tài)凝膠。當水合層被除去時(例如通過冷凍或干燥)粒子能夠彼此接觸而使表面能導致聚集。
海藻糖，α-D-吡喃(型)葡糖基-α-D-吡喃(型)葡糖苷，是天然存在的非還原性二糖，最初發(fā)現(xiàn)它是保護整體植物細胞免遭干燥的主要原因。已經(jīng)證明海藻糖在防止蛋白病毒和食品在干燥期間的變性上是有效的。U.S.專利4,891,319；5,149,653；5,026,566；Blakeley等人(1990)柳葉刀雜志(Lancet)336854-855；Roser(1991)Trends in食品科學和技術(shù)(Food Sci and Tech)。pp.166-169；Colaco等人(1992)國際生物技術(shù)(Biotechnol.Internat)，pp.345-350；Roser(1991)Biopharm.447-53；和Colaco等人(1992)生物/技術(shù)(Bio/Tech.)101007-1011。
在蛋白純化的領(lǐng)域內(nèi)，對消除或防止例如蛋白在再水化和熔化時的聚集傾向是特別有益的。在生物藥物領(lǐng)域內(nèi)蛋白經(jīng)常被用作治療的進行基礎(chǔ)，因此尤為重要。在能形成蛋白聚集體并注入病人體內(nèi)的情況下，有可能構(gòu)成抗體依附在蛋白上削弱了治療效果。這樣一來，防止各種各樣物質(zhì)特別是那些在藥中有效的物質(zhì)聚集將是有用的。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及減小物質(zhì)在脫水和再水化過程中的聚集作用的方法，該方法包括的步驟有向所述物質(zhì)的溶液或懸浮液添加適量的海藻糖該量足以防止再水化時的聚集作用；和使溶液或懸浮液脫水。本發(fā)明還涉及這樣獲得的組合物。
本發(fā)明是進一步涉及再水化溶液或懸浮液，以便獲得基本上沒有所述物質(zhì)聚集體的組合物。本發(fā)明也涉及這樣所獲得的組合物。
本發(fā)明進一步涉及減小溶液或懸浮液中物質(zhì)在冷凍(和任選熔化)過程中聚集作用的方法，該方法包括的步驟有向該物質(zhì)的溶液或懸浮液添加足以防止冷凍過程中聚集作用的適量海藻糖；和冷凍溶液或懸浮液。本發(fā)明還涉及這樣獲得的組合物。
本發(fā)明進一步包括冷凍過的溶液或懸浮液熔化的步驟，以便獲得基本上沒有所述物質(zhì)聚集體的組合物。本發(fā)明也涉及這樣獲得的組合物。
各種各樣的物質(zhì)都適合用于本發(fā)明，包括但不限于治療用，預防用和診斷用的物質(zhì)。
當物質(zhì)是紅血細胞時，方法可進一步包括在加海藻糖前固定紅血細胞的步驟。紅血細胞的固定可按任何已知方法，包括但不限于，用醛和戊二醛法進行。
附圖的簡要說明

圖1是描繪每個柱磷酸鋁沉降24小時后百分比高度的條形圖。用符號+和-標明的各柱分別在海藻糖存在和不存在下進行干燥。Tv代表真空干燥，Tfd代表冷凍干燥，Tfz代表冷凍，T4fz代表冷凍熔化四次和Tw代表含水樣品。
圖2是描繪每個柱磷酸鋁沉降5.5小時后百分比高度的條形圖。試驗前，樣品在45℃下貯存1周。略語與圖1中的相同。
圖3是描繪氫氧化鋁沉降24小時后百分比高度的條形圖。按實施例3所述數(shù)字表示序號，d表示真空干燥，w表示含水的對照物，和f表示冷凍。
發(fā)明詳述本發(fā)明包括減小物質(zhì)在脫水和再水化期間聚集作用的方法，該法通過往該物質(zhì)的例如水性溶液或懸浮液中加入足以防止再水化過程中發(fā)生聚集作用的一定量的海藻糖；和使該溶液或懸浮液脫水。
本發(fā)明進一步包括減小例如水性溶液或懸浮液中物質(zhì)在冷凍和熔化期間聚集作用的方法，該法包括的步驟有往所述物質(zhì)的溶液或懸浮液中加入足以防止冷凍和熔化期間發(fā)生聚集作用的一定量的海藻糖；并使該溶液或懸浮液冷凍。
本發(fā)明還涉及為防止或減小聚集作用而含海藻糖的水性組合物，包括冷凍過和脫水過的組合物。
術(shù)語“聚集作用(aggregation)”用于本發(fā)明時表示一種物質(zhì)的兩個或更多的分子的相互作用，從而使它們不再表現(xiàn)為單體而表現(xiàn)為二聚體、三聚體或其它多聚體的形式。與沒有海藻糖的情況下進行脫水和再水化或冷凍和熔化的物質(zhì)相比，減小聚集作用可降低多聚體的濃度。與沒有海藻糖的對照物對比，基本上沒有聚集體的或基本上沒有聚集的物質(zhì)是一種在再水化或熔化時含有減量多聚體型物質(zhì)的物質(zhì)。一般來說，海藻糖可阻止所有多聚體型物質(zhì)的形成。在生長激素的情況下，例如，在脫水或冷凍前海藻糖的加入可導致除二聚體外的所有多聚體的消除。然而，即使二聚體與對照物比較也還是減少了。
在最佳實施方案中，適合用于本發(fā)明的物質(zhì)都具有醫(yī)學用途。這樣的物質(zhì)包括，但不限于治療用物質(zhì)、預防用物質(zhì)和診斷用物質(zhì)。這些物質(zhì)是那些能在脫水/再水化和/或冷凍/熔化時形成多聚體的物質(zhì)。多聚體或聚集體形成的方法對本發(fā)明來說并不重要。
合適的治療用物質(zhì)包括，但不限于任何治療上有效的生物改性物。這種改性物包括，但不限于蛋白質(zhì)和肽，甾類激素、低聚糖類、核酸、多核苷酸和多種小分子。此外，改性物可來源于重組或合成方法制成的天然源，并包括類似物、興奮劑和同系物。當用于本發(fā)明時“蛋白質(zhì)”還可表示肽和多肽。這種蛋白質(zhì)包括，但不限于生長激素、生長因子、胰島素、單克隆抗體、干擾素和介細胞素(interleukins)。優(yōu)選的是，生長激素是人的生長激素。合適的甾類激素包括，但不限于雌激素、孕酮和睪酮。由本文描述的方法制備的治療用物質(zhì)也包括在本發(fā)明中。
合適的預防用物質(zhì)包括，但不限于鋁基的佐劑如氫氧化鋁和磷酸鋁，它們都被用于疫苗的制劑中。含有例如預防用物質(zhì)的組合物進一步包括在本發(fā)明中。優(yōu)選組合物包括含有按本發(fā)明描述的方法制備的氫氧化鋁或磷酸鋁的疫苗。合適的疫苗包括，但不限于復合疫苗，如白喉、破傷風、百日咳(DTP)或DTP/鈍化的脊髓灰質(zhì)炎疫苗(IPV)。合適的診斷用物質(zhì)包括，但不限于膠態(tài)金、聚苯乙烯乳膠、固定紅細胞和單克隆抗體。通過本發(fā)明描述的方法制備出的診斷用物質(zhì)和組合物也包括在本發(fā)明中。
完成脫水步驟可通過任何現(xiàn)有技術(shù)中已知的方法，包括但不限于凍干法、室溫條件下干燥或低蒸汽壓下干燥。當在低蒸汽壓下干燥時，干燥進行的溫度優(yōu)選低于物質(zhì)發(fā)生降解時的溫度。
完成冷凍步驟可通過現(xiàn)有技術(shù)中已知的任何方法，包括但不限于浸沒于液氮中，放進處于-4℃--80℃的冷凍器、干冰和醇冷凍浴中。樣品應保持在適合保持冷凍態(tài)的溫度下。使冷凍的樣品熔化可通過現(xiàn)有技術(shù)中已知的任何方法，例如在室溫或提高溫度下。如果熔化是在提高溫度下發(fā)生，溫度應當?shù)陀谀茉谖镔|(zhì)中引起變性或其它化學變化的溫度。最佳冷凍和熔化溫度可憑實驗確定。這樣一種確定是在本技術(shù)領(lǐng)域內(nèi)一般技術(shù)人員的常識范圍內(nèi)。
一旦物質(zhì)完成了脫水或冷凍，該物質(zhì)即可在長時期內(nèi)進行貯藏。脫過水的物質(zhì)可在室溫下穩(wěn)定地貯藏，盡管它們也可在任何低于能引起變性或其它化學變化的溫度下進行保存。本發(fā)明進一步包括脫過水的樣品再水化以便獲得基本上沒有聚集體物質(zhì)的溶液和懸浮液。再水化除了加入任意量的水或緩沖液以外，還可至少加入足以恢復原來溶液或懸浮液的緩沖液組成的適量的水。
當物質(zhì)包括紅血細胞時，該方法可進一步包括在加海藻糖之前固定紅血細胞。進行固定步驟可通過現(xiàn)有技術(shù)中已知的任何方法，包括但不限于戊二醛法。在最佳實施方案中，細胞是被固定的。
本發(fā)明方法最好存在足以防止或減小物質(zhì)在再水化或熔化時聚集的一定量海藻糖。這樣一種確定是可憑經(jīng)驗進行的，并且也是在所屬技術(shù)領(lǐng)域內(nèi)一般技術(shù)人員的常識范圍內(nèi)。優(yōu)選地，加入的海藻糖量要能獲得約1％-50％(w/v)的終濃度。更優(yōu)選的是，加入的海藻糖量要能獲得約5％-25％(w/v)的終濃度。
海藻糖可從各種供應者那里得到。優(yōu)選使用的海藻糖等級是ANALAR試劑，分子生物學或藥用級。在藥物組合物的情況下，海藻糖優(yōu)選滿足由食品及藥物管理局(FDA)規(guī)定的產(chǎn)品制造實施(GMP)標準。
本發(fā)明還包括由再水化或熔化之前和之后的方法獲得的產(chǎn)物。在一個實施方案中，本發(fā)明包括含有一種物質(zhì)和足以防止該物質(zhì)在熔化時聚集的一定量的海藻糖的冷凍組合物。在另一實施方案中，本發(fā)明包括含有一種物質(zhì)和足以防止該物質(zhì)在再水化時聚集的一定量海藻糖的脫水組合物。本發(fā)明還包括分別在熔化或再水化之后的組合物。
本發(fā)明也包括海藻糖作為聚集作用減弱劑或阻止劑的用途，特別適用于物質(zhì)存在于一種(如含水的)組合物中如那種物質(zhì)的溶液或懸浮液。
有意思的是，發(fā)現(xiàn)海藻糖防止聚集作用的有效量不能直接從海藻糖防止干燥損失的有效量推斷出來。例如，美國專利4,891,319中介紹的工藝表明海藻糖在蛋白質(zhì)溶液中的量低至1％w/v就能阻止蛋白質(zhì)如因子VIII的干燥損失。本發(fā)明介紹的實施例表明大于30％w/v的海藻糖對于完全防止氫氧化鋁的聚集是必須的，而15％w/v的海藻糖對于防止蛋白質(zhì)的聚集是必須的。
下列實施例是用來說明，而不是限制本發(fā)明。
實施例實施例1用海藻糖防止粒子懸浮液的聚集作用為了確定海藻糖是否能防止粒子懸浮液的聚集作用，研究兩個實施例，膠態(tài)金和聚苯乙烯乳膠。膠態(tài)金是由Babraham實驗室得到的，而聚苯乙烯乳膠是由Sigma化學公司購買的聚苯乙烯的粒子懸浮液。
膠態(tài)金是按照Frens(1993)自然雜志(Nature)24120描述的方法制成的。來自96孔微量滴定板中的每孔50μl體積內(nèi)有0.2％Au的濃懸浮液已經(jīng)過干燥其中或加10％w/v海藻糖或不加海藻糖，隨后在37℃下的干燥箱內(nèi)保存一周后進行再水化。在再水化時，在有海藻糖的情況下經(jīng)過干燥的物料按顯微檢驗的測定可得到均勻的膠態(tài)金懸浮液。沒有海藻糖干燥過的物料呈現(xiàn)出不能被細分成均勻懸浮液的顯微聚集體。
采用聚苯乙烯乳膠，進行類似的實驗。由Sigma化學公司產(chǎn)品種類號LB-8獲得乳膠，是平均直徑0.8微米的聚苯乙烯。在從供應者獲得的濃度上使用而且在不加任何的海藻糖和加10％w/v海藻糖下再次干燥，海藻糖在干燥前溶解在溶液中的。干燥后大約1周才使兩種樣品再水化然后在37℃下于干燥箱中貯存。沒有海藻糖的干燥物料令人生厭地聚集成為非常大的塊狀體。在海藻糖存在下干燥過的物料經(jīng)再懸浮成為極均勻的、單一粒子的懸浮液。
因此，干燥前海藻糖的加入使粒子懸浮液與沒有加海藻糖的對照物對比顯著降低了再水化時的聚集量。
實施例2海藻糖-干燥對紅血細胞聚集作用的影響實驗用抗凝血劑CPD(102mM檸檬酸三鈉，1.08mM磷酸鈉和11mM右旋糖)把鼠RBC洗三遍，經(jīng)棉花毛過濾再于1％甲醛中或0.5％戊二醛中固定。固定在室溫下進行1小時。固定后的細胞用CPD洗三遍，再懸浮于10％的海藻糖和0.12mM疊氮化鈉(NaN3)中，或再懸浮于CPD中。最終的細胞濃度為25％w/v。
在甲醛中固定的細胞洗滌時溶胞而不能被進一步處理。
未固定的細胞凝集在海藻糖內(nèi)并且需要在進一步處理前加入1/5體積的磷酸鹽-緩沖的生理鹽水。
然后把在10％海藻糖和0.12mM NaN3中或在CPD中的100μl細胞或在Nunc板上或在載片上進行干燥再用顯微法檢驗聚集體。結(jié)果沒有海藻糖干燥過的未固定細胞完全胞溶而采用海藻糖干燥的未固定細胞，即使血影細胞呈現(xiàn)平園形的形態(tài)，還顯示出95-99％的胞溶。
未加海藻糖干燥過的固定細胞顯示出細胞嚴重的宏觀聚集作用。加入海藻糖干燥過的固定細胞再懸浮后成為只有少量微聚集體的極均勻單一細胞懸浮液。這些微聚集體似乎是在較高海藻糖濃度下才形成的，因而看來不是與濃度相關(guān)。
實施例3氫氧化鋁和磷酸鋁的聚集作用沉降測定按照下列方法測定海藻糖在防止預防佐劑中的聚集作用是否成功。
把磷酸鋁和氫氧化鋁稀釋5倍至0.6％w/v的終濃度并使其在1ml玻璃移液管中沉降。在各個時間間隔上直到24小時測量沉降柱的高度。注意到當達到穩(wěn)態(tài)時(約5小時)沉降柱的％高度不低于30％。
使樣品在真空下干燥，在-20℃下冷凍再于室溫下熔化。結(jié)果試驗1磷酸鋁在有或沒有15％海藻糖的情況下對比不同形式的干燥和貯藏。就4種循環(huán)(T4fz)而言有真空干燥(Tv)、冷凍干燥(Tfd)、冷凍(Tfz)和冷凍熔化。貯存于4℃下的濕對照物(Tw)也可進行試驗。
然后使每個玻璃小瓶的200μl樣品干燥再于當天和在45℃下貯存一周后進行沉降的測定。所獲結(jié)果列于圖1和2中。
試驗2以列于表1的濃度的海藻糖滴定來測定氫氧化鋁和血紅素速凝劑(haemaccel，降解的明膠)的聚集作用。樣品含有1.5％的氫氧化鋁和2％的血紅素速凝劑。只比較真空干燥(d)和冷凍(f)。濕對照物(w)含有海藻糖和血紅素速凝劑但不經(jīng)過干燥或冷凍。各序號含有(d)、(f)和(w)樣品。所用濃度列于表1而所得到的結(jié)果列于圖3。
表1序號最終海藻糖％血紅素速凝劑％1 7.5 -2 15 -3 30 -4 15 25 - -結(jié)論a)15％的海藻糖能防止磷酸鋁和氫氧化鋁中冷凍引起的聚集作用。
b)7.5％的海藻糖不足以防止干燥過程中的聚集作用。
c)觀察了2％的血紅素速凝劑沒有附加效應。
在沒有海藻糖的情況下干燥并再水化的氫氧化鋁，發(fā)現(xiàn)聚集成為沉降迅速的大塊狀體，并很快產(chǎn)生很小的凝膠柱。濃度在15％以上的海藻糖能防止這種聚集作用，因而使再水化的物料能形成高度類似于新鮮的、未脫水物料的凝膠柱。這種沉降形式說明水合的、非聚集分子具有很大的水合作用外殼體積而相互分離導致它們沉降緩慢。
實施例4海藻糖對生物分子聚集作用的影響蛋白質(zhì)配方可經(jīng)過許多歷程包括脫酰氨基、氧化和聚集作用，人生長激素(hGH)降解的主要過程而進行改性。脫酰氨基和氧化作用總起來說被認為是化學降解。到目前為止幾乎沒有這些化學降解產(chǎn)物對生物效能的任何影響數(shù)據(jù)。Pearlman和Bewly(1993)InWang和Pearlmaneds.蛋白質(zhì)和肽藥物的穩(wěn)定性和特征(Stability and Characterization ofProtein and Peptide Drugs)，pp.1-58，Plenum Press，New York。
聚集作用是影響hGH和其它作為生物藥劑使用的蛋白質(zhì)配方的主要問題，并且可能降低生物效能。作為共價的和非共價相互作用的結(jié)果溶解的或不溶解的聚集體都可以形成。各種應力如加熱、冷凍或攪拌都可能引起聚集作用。當可見的不溶聚集體反映腸胃外產(chǎn)物不可使用時，主要問題是受驗者體內(nèi)誘導了不受歡迎的免疫反應(Pearlman andBewley，1993)。這一點對于蛋白質(zhì)配方如腸胃外并以多次劑量給藥的hGH來說是特別有害的。
為了確定海藻糖是否影響蛋白質(zhì)的聚集作用要完成下列實驗。把來自用H3PO4調(diào)節(jié)至pH7.4的含15％海藻糖、5mM Na2HPO4-2H2O的200μl hGH(5mg)樣品(配方A)進行干燥。制備兩種對照物樣品干燥來自200μl磷酸鈉緩沖液pH7.4的5mg hGH(配方B)；和干燥來自200μl磷酸鈉緩沖液pH7.4、5mg甘氨酸、25mg甘露糖醇的5mg hGH(配方C)。這些配方均要在30毫乇的壓力和40℃擱置溫度下的真空干燥器內(nèi)干燥20小時。隨后將其在真空下用橡膠塞和卷邊鋁封密封在標準的藥物血清小瓶中。
貯存在40℃的干燥恒溫箱中以后，用去離子水使樣品再水化然后用反相和大小排阻高效液相色譜分析，以便按照Pikal等人(1991)在Pharm.Res.8427-436上描述的方法分別測定化學降解和聚集作用。這些結(jié)果被列于表2中。
隨后再次分析配方A并與主要按Pikal等人(1991)說明的常規(guī)凍干的等效配方(配方D)進行比較。這些結(jié)果表示在表3中。結(jié)果把在40℃下4周的加速老化方案用于評定穩(wěn)定性和聚集作用。含海藻糖的配方在這些條件下表現(xiàn)非常好。未觀察到化學降解而且檢測到的有限聚集作用只局限于二聚體的配方(表2，行1-4)上。沒有高分子量的聚集體是很重要的事實。
配制了兩種hGH對照物，一種沒有穩(wěn)定的賦形劑(B)而另一種含有甘氨酸和甘露糖醇，它與市售配方(C)相類似(表2，行5-6)。這些配方具有顯著的化學降解作用和聚集體形成缺點，聚集體是二聚體和較高分子量的。對于甘氨酸甘露糖醇配方的重要性可與以前在凍干類似配方方面的研究結(jié)果(表3，行7，Pikal等人，1991)相比較。當配方A的穩(wěn)定性與凍干等效物(配方D)的穩(wěn)定性比較時，就40℃的穩(wěn)定性而言未觀察到區(qū)別(表3，行1-6)。在表2和3中，化學降解作用是用由脫酰氨基的蛋白質(zhì)表示的曲線下面積測量的。
因此含海藻糖的hGH配方，無論在40℃下干燥或凍干，都被證明對以前的配方有顯著的改進。
表2hGH穩(wěn)定作用和聚集作用數(shù)據(jù)一覽表(部分1)％ ％ ％聚集作用聚集作用行 配方處理化學降解作用二聚體 高分子量1 A預干燥 3.1 0.4 0.0032 A后干燥 3.3 0.6 0.063 A2周，40℃3.5 0.9 0.024 A4周，40℃3.4 1.1 0.0025 B4周，40℃11.1 6.9 2.16 C4周，40℃8.2 2.2 0.8
表2hGH穩(wěn)定作用和聚集作用數(shù)據(jù)一覽表(部分2)行 配方 處理 ％化學降解作用 ％聚集作用1A一開始 4.150.662A2周，40℃ 4.160.923A4周，40℃ 4.251.044D一開始 4.050.715D2周，40℃ 4.090.866D4周，40℃ 4.170.927E4周，40℃ 8.2 3.0為了清楚和理解本發(fā)明，盡管前述發(fā)明在某個細節(jié)上通過舉例說明和實施例進行了描述，但予以實施的某些變更和改進對于所屬技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員來說將是明了的。此外，說明書和實施例不應被解釋成對本發(fā)明的限制，發(fā)明由附帶的權(quán)利要求書予以描述。
權(quán)利要求
1.一種減小或防止物質(zhì)在脫水和再水化過程中聚集作用的方法，該方法包括往所述物質(zhì)的溶液或懸浮液中加入足以防止或減小再水化時聚集作用的一定量海藻糖；和使所述溶液或懸浮液脫水。
2.按照權(quán)利要求1的方法，進一步包括使所述物質(zhì)再水化，以獲得基本上以未聚集形態(tài)的物質(zhì)的溶液或懸浮液。
3.一種減小或防止溶液或懸浮液中的物質(zhì)在冷凍過程中聚集作用的方法，該方法包括往所述物質(zhì)的所述溶液或懸浮液加入足以減小或防止冷凍過程中聚集作用的一定量海藻糖；和使所述溶液或懸浮液冷凍。
4.按權(quán)利要求3的方法，進一步包括使所述溶液或懸浮液熔化，以獲得基本上以未聚集形態(tài)的所述物質(zhì)的溶液或懸浮液。
5.按任何上述權(quán)利要求所述的方法，其中所述物質(zhì)是治療用、預防用或診斷用物質(zhì)。
6.按權(quán)利要求5的方法，其中所述物質(zhì)是治療用物質(zhì)并且是生物應答改性物。
7.按權(quán)利要求6的方法，其中生物改性物是蛋白質(zhì)、肽、甾類激素、低聚糖、核酸、多核苷酸或小分子。
8.按權(quán)利要求7的方法，其中蛋白質(zhì)是生長激素、生長因子、胰島素、單克隆抗體、介白細胞素(interleukin)或干擾素。
9.按權(quán)利要求8的方法，其中所述物質(zhì)是人生長激素。
10.按權(quán)利要求7的方法，其中甾類激素是雌激素、孕酮或睪酮。
11.按權(quán)利要求5的方法，其中所述物質(zhì)是預防用物質(zhì)并且是鋁基的佐劑。
12.按權(quán)利要求11的方法，進一步包括往疫苗中加入佐劑。
13.按權(quán)利要求12的方法，其中疫苗是白喉/破傷風/百日咳(DTP)或白喉/破傷風/百日咳/鈍化的脊髓灰質(zhì)炎疫苗(DTP/IPV)。
14.按權(quán)利要求13的方法，其中所述疫苗是DTP或IPV。
15.按上述任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述物質(zhì)是診斷用物質(zhì)并且是膠態(tài)金、聚苯乙烯乳膠、固定的紅細胞或單克隆抗體。
16.按上述任一權(quán)利要求所述的方法，其中加入一定量的所述海藻糖，以獲得1％-50％(w/v)的終濃度。
17.按上述任一權(quán)利要求所述的方法，其中加入一定量的所述海藻糖，以獲得5％-25％(w/v)的終濃度。
18.按權(quán)利要求15-17中的任一所述的方法，其中所述物質(zhì)是紅血細胞，并且該方法進一步包括在加入海藻糖以前固定紅血細胞。
19.按權(quán)利要求18的方法，其中是用戊二醛固定的。
20.按權(quán)利要求1、2或5到19中的任一所述的方法，其中脫水是通過凍干、在室溫下干燥或在低蒸汽壓下干燥發(fā)生的。
21.按權(quán)利要求20的方法，其中低蒸汽壓下的干燥是在室溫下或在提高到室溫以上但低于物質(zhì)發(fā)生降解或化學變化的溫度下發(fā)生的。
22.按照上述任一權(quán)利要求的方法所獲得的一種組合物。
23.一種水性組合物，含有一種物質(zhì)和足以減小或防止所述物質(zhì)在冷凍和熔化或脫水和再水化時顯著聚集的一定量的海藻糖。
24.一種冷凍組合物，包含一種物質(zhì)和足以減小或防止所述物質(zhì)在熔化時顯著聚集的一定量的海藻糖。
25.一種脫水組合物，含有一種物質(zhì)和足以減小或防止所述物質(zhì)在再水化時聚集作用的一定量的海藻糖。
26.按照權(quán)利要求23-25中任一所述的組合物，該組合物是治療用、預防用或診斷用的組合物。
27.海藻糖在減小或防止一種物質(zhì)在其溶液或懸浮液中冷凍和熔化或脫水和再水化時的聚集作用的應用。
全文摘要
公開了減小或防止各種物質(zhì)(例如膠體、紅血細胞、藥物)在冷凍/熔化或脫水/再水化過程中聚集作用的方法，因此在冷凍或脫水之前往所述物質(zhì)的溶液或懸浮液中加入海藻糖。
文檔編號A61K47/26GK1156967SQ9519443
公開日1997年8月13日 申請日期1995年6月2日 優(yōu)先權(quán)日1994年6月2日
發(fā)明者B·J·羅澤, C·科拉科, J·坎平加, C·史密思 申請人:廓德倫特控股劍橋有限公司