專利名稱：高能氧抗癌導向合成劑的制作方法
高能氧抗癌導向合成劑，是以二氯三嗪三酮為先導化合物經(jīng)優(yōu)化和改造成雙(1，3-二氯-1，3，5-三嗪-2，4，6-三酮)草酸酯，與過氧化氫以腫瘤配型抗原單克隆抗體或多克隆抗體連接脂質(zhì)體為載體分別導向靶部位反應形成活性氧(本發(fā)明稱高能氧)和具有三嗪三酮和有效氯等化學結(jié)構(gòu)和生物活性物質(zhì)協(xié)同作用的抗癌藥物。本發(fā)明屬于新藥開發(fā)領域。
多年來，被科學所證明的事實是，氧的某些代謝產(chǎn)物及其衍生物的含氧物質(zhì)都是直接或間接由氧轉(zhuǎn)化而成的，由于它們都含有高能級的氧而且具有較活潑的化學反應性。因此這些高能氧有損傷機體的作用，破壞生物基質(zhì)的細胞和組織，光動力療法就是利用其光敏反應產(chǎn)生高能氧來實現(xiàn)治療腫瘤的目的。利用高能氧治療腫瘤的過程，即在中間過程中產(chǎn)生自由基和單線態(tài)氧的過程，除光敏反應法外，還有次氯酸根與過氧化氫混合就可產(chǎn)生高能氧的化學法，及其他方法。
本發(fā)明考慮到國內(nèi)外在化學藥物、免疫導向和光動力作用治療腫瘤方面，從臨床實驗到基礎研究看，無論是腫瘤破壞性的特異性還是治療效果，上述方法仍不理想。針對化學藥物、免疫導向和光動力作用存在的缺陷和尚未克服的障礙，發(fā)明了一種化學法與光敏反應法同時產(chǎn)生高能氧和在一種藥物上具有三嗪三酮及有效氯化學結(jié)構(gòu)和生物活性物質(zhì)協(xié)同作用的抗癌藥物雙(1，3-二氯-1，3，5-三嗪-2，4，6-三酮)草酸酯。
本發(fā)明的目的是第一個目的是，根據(jù)化學結(jié)構(gòu)和與生物活性構(gòu)效關系對先導化合物進行優(yōu)化和改造，設計新的雙(1，3-二氯-1，3，5-三嗪-2，4，6-三酮)草酸酯與過氧化氫反應能同時以化學法和光敏反應法產(chǎn)生高能氧，對腫瘤進行治療并提出前景方案，代替并超越現(xiàn)有的光動力療法診治腫瘤。
第二個目的是，實現(xiàn)一種化學結(jié)構(gòu)的新藥在主要產(chǎn)生抗癌活性物質(zhì)高能氧的同時，還具有三嗪、三酮及有效氯化學結(jié)構(gòu)和生物活性物質(zhì)抗癌協(xié)同作用，增強對腫瘤的殺傷作用和藥效。
第三個目的是，提高藥物的靶向分布性和到達性，采用腫瘤配型抗原單克隆抗體或多克隆抗體連接脂質(zhì)體制成特異趨癌性免疫脂質(zhì)體為藥物載體，實現(xiàn)對腫瘤進行選擇性控制治療。
第四個目的是，本發(fā)明合成劑新藥包括化學藥物治療、免疫治療、光動力作用治療的聯(lián)合治療，目的在于提高對癌細胞殺傷率的同時減少對機體的副作用。
第五個目的是，發(fā)揮高能氧在臨床上的應用，在治療腫瘤的同時，拓展高能氧對細菌、病毒感染及艾滋病的治療，獲得最大的社會效益和經(jīng)濟效益。
(一)高能氧1.高能氧的產(chǎn)生在理論上任何反應中氧分子被還原成水的過程中，不斷吸能產(chǎn)生超氧化合物的自由基 羥自由基(·OH)，過氧化氫(H2O2)，單線態(tài)氧(1O2)等高能氧。
高能氧產(chǎn)生的方法有化學法、光敏反應法和其他方法。其他方法如大氣中有機化合物的光氧化生成煙霧時，氧分子可變成單線態(tài)氧。在體內(nèi)也可通過自由基相互作用，由其他活性氧形式衍生而來。此外一些酶促反應也可產(chǎn)生高能氧，機體粒細胞或巨噬細胞吞噬破壞異物時，可由溶酶體內(nèi)過氧化氫經(jīng)髓過氧化酶(MOP)分解形成高能氧以便氧化破壞異物。
2.高能氧的理化性質(zhì)基態(tài)氧分子吸收能量，使分占兩個軌道的兩個電子集中到一個軌道，而讓原占有一個軌道空著，兩個不成對電子自旋方向相反，其能級比氧分子基態(tài)能級3∑g-O2高，以1Δg表示。如果吸收能量更大時，其能級以1∑g+表示。1∑g+O2的能量較1ΔgO2約高70％，因此其化學性質(zhì)較后者更不穩(wěn)定。1∑g+O2易向1ΔgO2轉(zhuǎn)變，因為1∑g+O2的壽命僅為10-9～10-12秒，而1ΔgO2卻為10-3～10-6秒。按自旋多重性的規(guī)定原則，1ΔgO2或1∑g+O2中電子成相反自旋，其自旋多重性遂都為1，因此1ΔgO2或1∑g+O2都是高能氧的單線態(tài)氧。
在生物體系中，電子轉(zhuǎn)移是一項最基本的變化，而氧就是一個最重要的電子受體。由于得到的電子個數(shù)不同，氧可以轉(zhuǎn)化成不同的高能氧，即超氧化物自由基 過氧化氫(H2O2)，及羥自由基(·OH)。而單線態(tài)氧分子(1O2)，其分子中沒有不成對電子，故具有反磁性，表明它不是自由基。
兩分子高能氧 的互相反應可轉(zhuǎn)變?yōu)閮煞肿友?，釋放能量，發(fā)出可見光，據(jù)此可檢測出高能氧。高能氧的化學性質(zhì)非?；顫?，具有極強的氧化能力，其中以·OH和1O2的氧化能力最強，半衰期也就最短，在一定條件下還具有還原能力， 和H2O2又可生成1O2和OH。1O2的化學性質(zhì)主要表現(xiàn)在和其他分子的反應方式，一種結(jié)果是 將激發(fā)能轉(zhuǎn)移到其他分子，使它們進入激發(fā)狀態(tài)，而本身卻轉(zhuǎn)變?yōu)榛軕B(tài)氧分子，這種現(xiàn)象稱為淬滅；另一種結(jié)果是1O2可與具有＞C＝C＜結(jié)構(gòu)的一些化合物化合，生成內(nèi)過氧化物，引發(fā)光敏化作用電子激發(fā)態(tài)的分子間傳能過程。
3.高能氧的生物效應高能氧在特殊條件下可以誘導產(chǎn)生，在正常情況氧化代謝中更是經(jīng)常形成，對機體有其一定的功用，如代謝貯能、轉(zhuǎn)化排廢和防御消毒作用。本發(fā)明是利用高能氧對組織機體的各種大分子物質(zhì)均有不同程度的破壞作用，對腫瘤和其他疾病進行治療。
1)氧化破壞脂質(zhì)機體及生物膜含有大量不飽和脂肪酸，自由基抽提氫鍵，形成脂自由基，引起連鎖反應，并引發(fā)脂質(zhì)過氧化破壞。
2)損害核酸·OH也可抽提核酸分子中嘧啶或嘌呤環(huán)氮元素上的氫，生成水和另一新的自由基。脂質(zhì)過氧化產(chǎn)生的脂自由基通過擴散進入核或核糖體，造成細胞分裂異常、蛋白質(zhì)和酶的合成異常。
3)破壞碳水化合物核酸分子上的戊糖也可被·OH等抽提氫，形成核糖自由基，如果核酸堿基上也形成自由基，則可致脫氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)交聯(lián)、斷裂。
4)破壞蛋白質(zhì)使蛋白質(zhì)交聯(lián)，破壞了原來的結(jié)構(gòu)，致使蛋白質(zhì)變性，因而影響或喪失原來的功能，導致膜的通透等功能改變。
本發(fā)明所涉及的高能氧主要是單線態(tài)氧(1O2)和羥自由基(·OH)及過氧化氫(H2O2)，在殺傷腫瘤細胞的效應中，高能氧致傷的主要部位決定于所用載體的理化性質(zhì)，即作用于病變組織的部位和細胞部位的分布。單線態(tài)氧的高能氧可氧化色氨酸、蛋氨酸、半胱氨酸與組氨酸，在生物體內(nèi)可氧化多種生物分子，包括脫氧核糖核酸(DNA)許多重要生物分子，也可作用于體內(nèi)光敏物質(zhì)本身，導致氧化損傷，單線態(tài)氧在生物膜中能擴散相當長的距離，故在生物系統(tǒng)中具有特殊意義。1O2這種高能氧也是脂質(zhì)過氧化的引發(fā)劑之一，與其他自由基引發(fā)劑不同，不是通過提氫而是與多聚不飽和脂肪酸(PUFA)直接反應形成脂質(zhì)過氧化物。
(二)高能氧抗癌導向合成劑的作用機制1.作用機制
本發(fā)明根據(jù)化學結(jié)構(gòu)和生物活性構(gòu)效關系將1，3-二氯-1，3，5-三嗪-2，4，6-三酮(或1，3，5-三氯-1，3，5-三嗪-2，4，6-三酮)(I)作為先導化合物，優(yōu)化和改造先導化合物的化學結(jié)構(gòu)和生物活性酯化成雙(1，3-二氯-1，3，5-三嗪-2，4，6-三酮)草酸酯(II)，以腫瘤配型抗原單克隆抗體或多克隆抗體連接脂質(zhì)體制成特異趨癌性免疫脂質(zhì)體為載體，將雙(1，3-二氯-1，3，5-三嗪-2，4，6-三酮)草酸酯(II)和過氧化氫(III)分別導向靶部位并在靶部位反應，生成中間產(chǎn)物過氧草酸脂(IV)和二氯三嗪三酮(I)；二氯三嗪三酮(I)遇水生成次氯酸(VI)與過氧化氫(III)反應化學法生成單線態(tài)氧(IX)的高能氧；過氧草酸酯(IV)與過氧化氫(III)反應形成過氧草酸酯化學發(fā)光體系，1，2-二噁二酮(X)放出光子(XIV)，與酮類光敏劑三酮引發(fā)光敏反應產(chǎn)生單線態(tài)氧(IX)的高能氧；中間產(chǎn)物1，3-二氯-1，3，5-三嗪-2，4，6-三酮(I)中還有親癌和抗癌作用的三嗪化學結(jié)構(gòu)組分，在靶部位形成由次氯酸(VI)與過氧化氫(III)化學法和由過氧草酸酯(IV)與過氧化氫(III)形成的化學發(fā)光體系與三酮為光敏劑引發(fā)的光敏反應法產(chǎn)生的以高能氧為主，三嗪和有效氯組分對腫瘤細胞和組織進行選擇性殺傷協(xié)同作用，可治療機體任何部位的惡性腫瘤，還可用于對細菌、病毒感染和艾滋病的治療。 下面根據(jù)化學結(jié)構(gòu)和生物活性的構(gòu)效關系，以雙(1，3-二氯-1，3，5-三嗪-2，4，6-三酮)草酸脂為例，進一步說明高能氧抗癌導向合成劑治療作用機理。
2.高能氧抗癌作用機制主要的高能氧產(chǎn)物之一的單線態(tài)氧壽命短致以微秒計，從產(chǎn)生到滅活的擴散距離不到0.1微米，但對細胞而言，亞細胞結(jié)構(gòu)在高能氧作用下功能影響是難以避免的，蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和核酸都容易受到損傷。高能氧改變了脂肪鏈的運動性質(zhì)和旋轉(zhuǎn)活化能，使脂類分子空間排列發(fā)生變化，損害了膜結(jié)構(gòu)的完整性，導致細胞損傷和死亡，不是單純損傷某一細胞器或細胞代謝中的某一環(huán)節(jié)，而是對細胞生物活性和腫瘤組織脈管系統(tǒng)綜合影響的結(jié)果。
1)化學法產(chǎn)生單線態(tài)氧雙二氯三嗪三酮草酸酯(II)與過氧化氫(III)反應后，二氯三嗪三酮(I)遇水(V)產(chǎn)生次氯酸根(VI)。次氯酸是非常弱的酸，它離解為離子時，較碳酸弱到約十倍，它是氯的含氧酸中最強的氧化劑，所有的次氯酸鹽均溶于水，它的水溶液由于水解反應而呈堿性。次氯酸根(VI)與過氧化氫(III)混合，就可產(chǎn)生相等于次氯酸根(OCl-)含量的單線態(tài)氧(IX)。次氯酸是強氧化 劑，不但在酸性溶液中如此，即便在弱堿性溶液中亦如此，遇還原劑被還原成氯化物，事實上次氯酸被還原的實質(zhì)為OCl-離子合有一個帶正電荷一價Cl+離子，故當Cl+離子得到兩個電子，即轉(zhuǎn)為帶負電荷的一價Cl-離子，，因此，不同的還原劑與次氯酸鹽反應時，一般可按下列離子方程式表示。
酸性溶液，隨反應的發(fā)生伴有633nm弱的暗紅色的化學發(fā)光。
在水溶液中，含氧酸的氧化能力完全是由酸分子提供的而不是由酸根離子提供的，這就是含氧酸氧化能力的氧分子理論基礎。
2)光敏反應產(chǎn)生單線態(tài)氧雙二氯三嗪三酮草酸酯(II)與過氧化氫(III)反應生成中間產(chǎn)物過氧草酸酯(IV)和1，2-二噁二酮(X)將化學能轉(zhuǎn)移給輻射受體熒光(F)(XI)受激發(fā)(F*)(XII)，其退激至基態(tài)時放出光子(hv)(XIV)。光能使具有光引發(fā)劑的酮類物質(zhì)三酮光敏劑受激(XV)，其三線態(tài)能量比所有核堿基的三線態(tài)能量都大，所以酮類光敏劑的光敏化反應有一313nm波長的吸收峰，可以引起胸腺嘧啶反-反異構(gòu)型的二聚體，還可引起脫氧核糖核酸(DNA)單鏈的斷裂等。
高能氧的單線態(tài)氧的產(chǎn)生方法很多，本發(fā)明所涉及的是化學法和光敏反應法兩種，因此本發(fā)明選用和設定的先導化合物的藥物化學結(jié)構(gòu)要含有遇水可產(chǎn)生次氯酸的物質(zhì)，并且與過氧化氫反應能化學法產(chǎn)生活性強的單線態(tài)氧，還需含有化學發(fā)光體系草酸酯，酮類光敏劑的三酮光引發(fā)劑的化學結(jié)構(gòu)，與過氧化氫反應能以光敏反應生成單線態(tài)氧。具有上述化學結(jié)構(gòu)和生物活性的先導化合物可以是1，3-二氯-1，3，5-三嗪-2，4，6-三酮，也可以是1，3，5-二氯-1，3，5-三嗪-2，4，6-三酮等，經(jīng)優(yōu)化和改造酯化成雙(1，3-二氯-1，3，5-三嗪-2，4，6-三酮)草酸酯。
3.三嗪的抗癌作用本發(fā)明的先導化合物的化學結(jié)構(gòu)還有1，3，5-三嗪，而三嗪類化合物具有抗腫瘤作用已廣泛應用于臨床，其療效已被證明。三嗪類具有明顯的疏水性，對腫瘤細胞有一定的親和力，對合成劑進入癌細胞增加了生物活性，是直接作用于脫氧核糖核酸的抗腫瘤藥物。
4.有效氯物理和化學作用先導化合物二氯三嗪三酮鈉鹽為白色粉末，有氯氣味，含有效氯60～64％，在25℃時，水中溶解25％，在水中產(chǎn)生次氯酸。氯離子可以引起純物理性質(zhì)的變化，由于脂溶性、表面張力等物理性質(zhì)的改變使生物活性發(fā)生變化；同時可以引起化學反應性能的變化，還可引起物理性質(zhì)和化學反應性同時改變。
有效氯的物理和化學性質(zhì)可直接對腫瘤細胞和組織殺傷，對腫瘤病灶伴有的細菌或病毒感染也有較強的殺滅作用。
5.過氧化氫(H2O2)過氧化氫也是高能氧之一，化學性質(zhì)不穩(wěn)定，在化學上常作為弱氧化劑，它可氧化某些有機化合物，并可直接使少數(shù)酶失去活性，是草酸酯化學發(fā)光體系的催化劑。
1)氧化還原性，H2O2中氧處于中間氧化態(tài)，因此它既具有氧化性又具有還原性，氧化能力與介質(zhì)的酸堿性有關，在酸性介質(zhì)中
在堿性介質(zhì)中
應用H2O2氧化還原劑的好處是不引入其它雜質(zhì)。
2)弱酸性，H2O2的酸性比水稍強，能與堿生成過氧化物。
3)過氧化氫在一定條件下和超氧化物陰離子 還具有還原能力，可生成1O2和·OH。
H2O2+O2.-→O21+OH.]]>6.藥物靶向傳遞機制將現(xiàn)有藥物包封在脂質(zhì)體內(nèi)或在其分子上連接一種適當?shù)妮d體，由載體把藥物導向靶部位，并在靶部位經(jīng)酶促反應釋放出藥物，發(fā)揮治療作用。該藥吸收、分布不是取決于藥物本身，而是取決于所用載體的理化性質(zhì)，選擇性轉(zhuǎn)運到特定的靶細胞上。
高能氧抗癌導向合成劑的載體，是一種由兩種趨癌性具有協(xié)同導向作用的藥物靶向傳遞系統(tǒng)，是在脂質(zhì)體上摻入或連接趨癌物質(zhì)，可以是腫瘤配型抗原單克隆抗體或多克隆抗體連接脂質(zhì)體，也可以用聚合物如聚賴氨酸(PLL)連接脂質(zhì)體為抗癌藥物靶向傳遞的載體，修飾脂質(zhì)體表面達到提高導向協(xié)同作用。
1)腫瘤配型抗原單克隆抗體或多克隆抗體藥物轉(zhuǎn)釋載體腫瘤抗原包括特異性抗原和相關抗原兩種，迄至今日在人體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的腫瘤抗原均屬于腫瘤相關抗原，其中有的是癌胚共同抗原，有的是異位抗原，是其他器官在正常情況下也存在的抗原。因此，用分析腫瘤抗原分子中的特異成分和分析腫瘤細胞抗原的變化類型，制備和純化專一地由腫瘤細胞分泌的對腫瘤更具有特異性的抗原，并制備腫瘤配型抗原單克隆抗體，在此基礎上制備腫瘤配型抗原多克隆抗體，可提高對腫瘤的親和力與導向能力。因此，將腫瘤配型抗原純化便可不用腫瘤細胞的產(chǎn)物制出腫瘤配型抗原多克隆抗體?？朔[瘤相關抗原單克隆抗體存在的特異性不強、出現(xiàn)交叉反應和親和力弱等缺點，尤其是避免出現(xiàn)抗抗體的免疫副作用，對腫瘤的診治應用更有實用價值。
抗體對配型抗原有高度的識別能力和特異性結(jié)合，因而將抗體作為載體與藥物相連結(jié)，應顯示很強的靶位特異性和選擇性。把藥物轉(zhuǎn)釋到有表面抗原的細胞和組織處，從而減少藥物向非靶部位的分布和結(jié)合降低藥物的毒副作用。本發(fā)明先導化合物的水解物對組織稍有刺激性，當與腫瘤細胞的抗體經(jīng)化學結(jié)合生成抗體-藥物偶合物，由于抗體具有表面抗原的導向，提高了藥物趨癌性能力和殺傷癌細胞的選擇性，因而減少了對正常組織的損傷。
2)聚L-賴氨酸藥物轉(zhuǎn)釋載體聚L-賴氨酸是荷陽電的水溶性均聚物，對癌細胞有親和力，被內(nèi)吞攝取，易被胰蛋白酶降解，并具有抗菌和抗病毒活性，作為選擇性藥物栽體能提供二級和三級靶向，即能在特異組織部位或預定的細胞內(nèi)釋放藥物。又因改變了蛋白結(jié)合各種細胞特異性的相互反應，故也能改變在各種組織中藥物分布，可改變藥物的藥劑相、藥效相和藥動相。
3)脂質(zhì)體制備方法制備脂質(zhì)體方法很多，本發(fā)明采用冷凍干燥法，也可用乳化法。為了保證藥物避免有機溶媒的毒副作用，首選采用冷凍干燥法，使藥物和趨癌性物質(zhì)避免熱敏失活，還可進一步采用重建型脂質(zhì)體可進一步避免易水解藥物的水解。將類脂高度分散在水溶液中，冷凍干燥，然后再分散到含藥的水性介質(zhì)中，形成特異趨癌性脂質(zhì)體。
(三)高能氧抗癌導向合成劑的制備1.新藥名稱中文名高能氧英文名High Energy Oxygen，HEO分子式及分子量C8H2Cl4N6O8＝452結(jié)構(gòu)式 化學名雙(1，3-二氯-1，3，5-三嗪-2，4，6-三酮)草酸酯英文化學名Bis(1，3-Dichloro-1，3，5-triazine-2，4，6-trione)oxalate。
2.制備工藝、技術路線1)先導化合物根據(jù)化學結(jié)構(gòu)和生物活性的關系，即構(gòu)效關系選用一種藥物具有遇水后產(chǎn)生次氯酸，并且有三嗪三酮和含氯化學結(jié)構(gòu)的1，3-二氯-1，3，5-三嗪-2，4，6-三酮為先導化合物，也可以是1，3，5-三氯-1，3，5-三嗪-2，4，6-三酮為先導化合物，對先導化合物的化學結(jié)構(gòu)和生物活性進行優(yōu)化和改造，和草酰氯為原料，在堿性有機溶劑中進行酯化反應，經(jīng)分離純化后制得雙(1，3-二氯-1，3，5-三嗪-2，4，6-三酮)草酸酯。考慮到化學性質(zhì)的穩(wěn)定性，首選1，3-二氯-1，3，5-三嗪-2，4，6-三酮鈉鹽，由于性質(zhì)穩(wěn)定，一般室溫下保存半年以上，遇水產(chǎn)生次氯酸和有效氯，與過氧化氫混合反應可化學法產(chǎn)生高能氧的單線態(tài)氧。酯化制成雙二氯三嗪三酮草酸酯不僅提高了化學穩(wěn)定性，與過氧化氫反應生成中間產(chǎn)物過氧草酸酯和1，2-二噁二酮化學發(fā)光體系，與光敏劑三酮啟動光動力作用產(chǎn)生高能氧的單線態(tài)氧，1，3-二氯遇水生成有效氯，對細菌、病毒及腫瘤細胞有較強的殺傷作用。
2)雙(1，3-二氯-1，3，5-三嗪-2，4，6-三酮)草酸酯的制備化學反應式如下 反應步驟取1，3-二氯-1，3，5-三嗪-2，4，6-三酮鈉鹽(0.02mol)于100mL雙口燒瓶內(nèi)，加入苯50mL，加熱蒸餾出10mL苯后，將反應液冷至10℃，再加入新鮮蒸餾的三乙胺(Et3N)在相轉(zhuǎn)移催化下，緩慢滴加草酰氯(0.011mL)，邊攪拌邊滴加完畢后，把反應混合液溫熱至25℃，繼續(xù)酯化反應22小時，減壓除溶劑，留下淺黃色固體，加入石油醚20mL，攪拌15分鐘，得白色固體，過濾，分別用上述溶劑洗沉淀物，真空干燥，得白色晶體雙(1，3-二氯-1，3，5-三嗪-2，4，6-三酮)草酸酯粗品，經(jīng)苯或醋酸乙酯重結(jié)晶純化處理，得純品為白色粉末結(jié)晶。
3)靶向載體的制備脂質(zhì)體對靶細胞分子水平上的識別能力，取決于其表面所連接識別分子的結(jié)合特異性。采用腫瘤配型抗原單克隆抗體或多克隆抗體修飾脂質(zhì)體表面，與對特定抗原陽性的細胞具有選擇性和親和性的配體形成特異趨癌性免疫脂質(zhì)體，此時抗體作為導向裝置，將含有藥物的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)釋到含有配型表面抗原的腫瘤細胞處，釋放出藥物，因而提高了向靶部位分布和結(jié)合的特異性，以達到專一性并殺傷靶細胞。
可采用交聯(lián)法將配型抗原單克隆抗體結(jié)合到脂質(zhì)體表面。用重建冷凍干燥法，將乙醇液與磷酸鹽緩沖溶液混合并制成空白特異趨癌性免疫脂質(zhì)體，滅菌，超聲破碎，加入藥物和凍結(jié)保護劑，冷凍干燥即得。
(1)雙二氯三嗪三酮草酸酯特異趨癌性免疫脂質(zhì)體制備取蛋磷脂偶聯(lián)配型抗原單克隆抗體2.5克分散在0.067摩爾/升等滲磷酸鹽緩沖溶液(pH＝7)中，超聲處理，加適量甘露醇混勻，在真空下冷凍干燥，隨即用12.5毫克雙二氯三嗪三酮草酸酯的上述緩沖液進行分散，即得到雙二氯三嗪三酮草酸酯特異趨癌性免疫脂質(zhì)體混懸液。
(2)二氯三嗪三酮特異趨癌性免疫脂質(zhì)體制備取蛋磷脂偶聯(lián)配型抗原單克隆抗體2.5克分散在0.067mol/L等滲磷酸鹽緩沖溶液(pH＝7)中，超聲處理，加適量甘露醇混勻，在真空下冷凍干燥，隨即用12.5毫克1，3-二氯-1，3，5-三嗪-2，4.6-三酮的上述緩沖液進行分散，即得到二氯三嗪三酮特異趨癌性免疫脂質(zhì)體混懸液。
(3)過氧化氫特異趨癌性脂質(zhì)體制備取蛋磷脂偶聯(lián)配型抗原單克隆抗體或多克隆抗體2.5克分散在0.067mol/L等滲磷酸鹽緩沖溶液(pH＝7)中，超聲處理，加適量甘露醇混勻，在真空下冷凍干燥，隨即用12.5毫克過氧化氫的上述緩沖液進行分散，即得到過氧化氫特異趨癌性免疫脂質(zhì)體混懸液。
高能氧抗癌導向合成劑的優(yōu)點是1.本發(fā)明與光動力學療法診治腫瘤相比較其優(yōu)點是，無需用無法進入體內(nèi)多數(shù)病變部位的昂貴的、笨重的體外激光裝置和有明顯毒副作用的光敏劑的光敏反應法產(chǎn)生高能氧取而代之的是用化學法在體內(nèi)靶部位產(chǎn)生高能氧治療腫瘤，實現(xiàn)了用簡便、安全、高效、經(jīng)濟的化學法產(chǎn)生高能氧抗癌的新方案。
2.本發(fā)明與發(fā)明人最近發(fā)明的創(chuàng)新光動力療法的“導向微型抗癌光彈”(公開號CN1119518A)相比較其優(yōu)點是，不僅在體內(nèi)靶部位由化學發(fā)光體系產(chǎn)生光敏反應的高能氧，同時還產(chǎn)生化學反應的高能氧，增加高能氧的產(chǎn)率，提高對腫瘤的殺傷效力。
3.本發(fā)明與化學藥物療法治療腫瘤相比較其優(yōu)點是，具有高能氧、三嗪類、三酮類和有效氯多種化學結(jié)構(gòu)和生物活性為一體的合成劑，是含有多種抗癌協(xié)同作用的新藥，實現(xiàn)了化療、免疫治療、光動力作用治療的聯(lián)合治療。
4.本發(fā)明與靶向藥物傳遞系統(tǒng)的治療腫瘤“導彈”相比較其優(yōu)點是，以腫瘤配型抗原單克隆抗體連接脂質(zhì)體為藥物載體，具有脂質(zhì)體與配型抗原單克隆抗體協(xié)同導向作用，對配型抗原的靶細胞有特異性結(jié)合，提高了導向靶部位的命中率和分布率。
5.本發(fā)明與臨床抗癌藥物相比較的優(yōu)點是，除用于腫瘤治療外，還對細菌、病毒有較強的殺滅作用，還可用于病毒、細菌感染及艾滋病等疑難病癥的治療。
6.本發(fā)明的優(yōu)點還在于，在合成工藝、技術線路上不采用產(chǎn)生有毒副作用的有機溶劑，優(yōu)化和改造臨床證明有效的化學結(jié)構(gòu)和生物活性的先導化合物，提供高效、安全、經(jīng)濟的廣譜新藥，獲取重大的社會效益和經(jīng)濟效益。
權利要求
1.一種根據(jù)化學結(jié)構(gòu)和生物活性構(gòu)效關系作為先導化合物的1，3-二氯-1，3，5-三嗪-2，4，6-三酮(I)與過氧化氫可產(chǎn)生活性氧的高能氧抗癌導向合成劑的發(fā)明特征是，優(yōu)化和改造先導化合物二氯三嗪三酮的化學結(jié)構(gòu)和生物活性酯化成雙(1，3-二氯-1，3，5-三嗪-2，4，6-三酮)草酸酯(II)，以腫瘤配型抗原單克隆抗體或多克隆抗體連接脂質(zhì)體制成特異趨癌性免疫脂質(zhì)體為載體，將雙(1，3-二氯-1，3，5-三嗪-2，4，6-三酮)草酸酯和過氧化氫分別制成特異趨癌性免疫脂質(zhì)體并導向同一靶部位，在靶部位反應生成中間產(chǎn)物過氧草酸酯和二氯三嗪三酮；二氯三嗪三酮遇水產(chǎn)生次氯酸與過氧化氫反應化學法生成高能氧和有效氯，過氧草酸酯與過氧化氫反應形成草酸酯和1，2-二噁二酮化學發(fā)光體系，與酮類光敏劑三酮引發(fā)光動力作用產(chǎn)生化學發(fā)光光敏反應的高能氧，在二氯三嗪三酮化合物中還有三嗪化學結(jié)構(gòu)具有親癌和抗癌生物活性物質(zhì)，在靶部位形成由化學法和光敏反應法產(chǎn)生的高能氧為主及三嗪和有效氯生物活性物質(zhì)對腫瘤細胞和組織進行選擇性殺傷的協(xié)同作用，可治療機體任何部位的惡性腫瘤，還可用于對細菌、病毒感染及艾滋病等疑難病癥的治療。
2.根據(jù)權利要求1所述的高能氧抗癌導向合成劑其特征在于，所述的先導化合物1，3-二氯-1，3，5-三嗪-2，4，6-三酮也可以是1，3，5-三氯-1，3，5-三嗪-2，4，6-三酮，和草酰氯酯化成雙(1，3-二氯-1，3，5-三嗪-2，4，6-三酮)單酸酯與過氧化氫反應生成的中間產(chǎn)物包括被還原成先導化合物的1，3-二氯-1，3，5-三嗪-2，4，6-三酮，遇水產(chǎn)生次氯酸與過氧化氫作用可化學法生成單線態(tài)氧，實現(xiàn)化學法產(chǎn)生高能氧治療腫瘤。
3.根據(jù)權利要求1所述的高能氧抗癌導向合成劑其特征在于，所述的化學法產(chǎn)生高能氧，也可將先導化合物1，3-二氯-1，3，5-三嗪-2，4，6-三酮以腫瘤配型抗原單克隆抗體連接脂質(zhì)體為載體導向靶部位與過氧化氫反應，減少工藝步驟并避免摻入有機溶劑殘留物的毒副作用，實現(xiàn)簡捷技術路線化學法產(chǎn)生高能氧治療腫瘤。
4.根據(jù)權利要求1所述的高能氧抗癌導向合成劑其特征在于，所述的中間產(chǎn)物過氧草酸酯與過氧化氫形成的發(fā)光體系，與在同一苯環(huán)上具有酮類光敏劑化學結(jié)構(gòu)的三酮引發(fā)光敏反應進行分子間傳能產(chǎn)生單線態(tài)的高能氧，產(chǎn)生殺傷腫瘤復加作用的化學法和光敏反應法的高能氧。
5.根據(jù)權利要求1所述的高能氧抗癌導向合成劑其特征在于，所述的中間產(chǎn)物二氯三嗪三酮具有三嗪化學結(jié)構(gòu)的抗癌活性，三酮化學結(jié)構(gòu)的光敏劑生物活性，及水溶液中含有效氯，對腫瘤細胞、細菌、病毒有較強的殺滅作用，發(fā)揮與高能氧的協(xié)同作用，實現(xiàn)化療、免疫治療、光動力作用治療的聯(lián)合治療。
6.根據(jù)權利要求1所述的高能氧抗癌導向合成劑其特征在于，所述的過氧化氫是合成劑的氧化劑或還原劑，是化學法和光敏反應法產(chǎn)生高能氧及三嗪、有效氯抗癌作用的催化劑和啟動劑。
7.根據(jù)權利要求1所述的高能氧抗癌導向合成劑其特征在于，所述的導向載體是腫瘤配型抗原單克隆抗體或多克隆抗體，連接脂質(zhì)體制成特異趨癌性免疫脂質(zhì)體，連接脂質(zhì)體可采用交聯(lián)法。
8.根據(jù)權利要求1所述的高能氧抗癌導向合成劑其特征在于，所述的藥物特異趨癌性免疫脂質(zhì)體的制備方法，采用冷凍干燥法也可用減少有機溶煤影響的乳化法實施以超聲為主的微乳液。
9.根據(jù)權利要求1所述的高能氧抗癌導向合成劑其特征在于，所述的高能氧、三嗪、有效氯協(xié)同作用，除治療腫瘤外，通過改換連接脂質(zhì)體的修飾脂質(zhì)體表面的靶向傳遞物質(zhì)，還可制成細菌、病毒和艾滋病抗原單克隆抗體特異免疫脂質(zhì)體，治療細菌、病毒感染及艾滋病等疑難病癥。
全文摘要
高能氧抗癌導向合成劑，是以二氯三嗪三酮(I)為先導化合物經(jīng)優(yōu)化和改造成雙(1，3-二氯-1，3，5-三嗪-2，4，6-三酮)草酸酯(II)，與過氧化氫以腫瘤配型抗原單克隆抗體連接脂質(zhì)體為載體分別導向靶部位，并反應形成由次氯酸根與過氧化氫反應的化學法和由化學發(fā)光引發(fā)的光敏反應法產(chǎn)生高能氧，與具有三嗪和有效氯生物活性物質(zhì)對腫瘤細胞和組織進行選擇性殺傷協(xié)同作用，可治療惡性腫瘤，還可用于細菌、病毒感染和艾滋病的治療。
文檔編號A61K39/395GK1148493SQ9610905
公開日1997年4月30日 申請日期1996年8月6日 優(yōu)先權日1996年8月6日
發(fā)明者董國臣 申請人:董國臣