專利名稱：：口服環(huán)孢菌素制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及口服環(huán)孢菌素制劑。背景盡管人們?cè)趪L試通過宿主供體間的組織配型以避免移植排斥反應(yīng)，但在大多數(shù)將供體器官引入宿主體內(nèi)的移植過程中，免疫抑制治療對(duì)于維持供體器官在宿主體內(nèi)的活性仍是重要的。已有多種免疫抑制劑應(yīng)用于移植過程中，包括咪唑硫嘌呤、氨甲喋呤、環(huán)磷酰胺、FK-506、雷怕霉素、皮質(zhì)類固醇。由于環(huán)孢菌素對(duì)T細(xì)胞介導(dǎo)的反應(yīng)具有優(yōu)良的效果，從而使其在免疫抑制治療中的應(yīng)用不斷增加。環(huán)孢菌素是一類由11個(gè)氨基酸組成的環(huán)狀多肽，是TolypocladiuminflatumGams種真菌產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物。已發(fā)現(xiàn)環(huán)孢菌素能夠在細(xì)胞周期的G0和G1期可逆性地抑制免疫競(jìng)爭(zhēng)性淋巴細(xì)胞，尤其是T淋巴細(xì)胞。還發(fā)現(xiàn)環(huán)孢菌素能可逆性的抑制淋巴細(xì)胞活素的生成和釋放。雖然有大量環(huán)孢菌素是已知的，但環(huán)孢菌素A是應(yīng)用最廣泛的。據(jù)報(bào)道使用環(huán)孢菌素A可延長(zhǎng)同種異體移植(包括皮膚、心臟、腎、胰腺、骨髓、小腸和肺移植)的存活期。在同種異體移植中，環(huán)孢菌素A顯示出可抑制體液免疫，并在更大的程度上抑制細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，包括同種異體移植排斥反應(yīng)、遲發(fā)過敏、實(shí)驗(yàn)性的變應(yīng)性腦脊髓炎、弗氏佐劑關(guān)節(jié)炎和移植物抗宿主病。盡管環(huán)孢菌素A的應(yīng)用已獲得了成功，但由于環(huán)孢菌素治療的有益效果是可逆的，一旦環(huán)孢菌素A的給藥發(fā)生中斷就會(huì)發(fā)生移植排斥反應(yīng)，所以移植后的給藥必須是連續(xù)的。盡管已經(jīng)發(fā)展了用于口服和靜脈給藥的環(huán)孢菌素制劑，但優(yōu)選環(huán)孢菌素的口服給藥，因?yàn)榭诜o藥容易且更易為患者所接受。而且，環(huán)孢菌素的靜脈內(nèi)給藥可導(dǎo)致過敏性反應(yīng)，這是一種在口服制劑中沒有觀察到的副作用。已經(jīng)發(fā)展并且上市的口服環(huán)孢菌素制劑包括軟膠囊和溶液劑，它們均以SANDIMMUNE和NEORALTM商標(biāo)名出售。在使用口服環(huán)孢菌素進(jìn)行免疫抑制治療時(shí)，醫(yī)生和制造商均應(yīng)知道許多問題。對(duì)于口服環(huán)孢菌素制劑，由于環(huán)孢菌素不溶于水并且易于在水溶液環(huán)境中生成沉淀，從而使環(huán)孢菌素的生物利用度受到限制。此外，由于環(huán)孢菌素的疏水特性，使口服制劑中環(huán)孢菌素的濃度受到限制。而且，對(duì)于不同批號(hào)的制劑，胃腸道對(duì)環(huán)孢菌素的吸收可能發(fā)生變化，從而在治療時(shí)需連續(xù)監(jiān)測(cè)環(huán)孢菌素的血漿濃度。最后，包裝及貯存穩(wěn)定性也是口服制劑的一個(gè)問題。例如，對(duì)于環(huán)孢菌素的軟膠囊制劑必須使用密封包裝，該包裝因體積大且價(jià)格昂貴而使用不便。此外，由于環(huán)孢菌素可能會(huì)形成結(jié)晶，從而使環(huán)孢菌素制劑在低溫下不穩(wěn)定。因此，所需的口服環(huán)孢菌素制劑應(yīng)注意至少部分上述的問題。理想的口服制劑應(yīng)能促進(jìn)高的生物利用度、含有高濃度的環(huán)孢菌素并能制成硬膠囊的形式。相關(guān)文獻(xiàn)內(nèi)科醫(yī)生手冊(cè)(Physician′sDeskReference)(1994)第2071-2074頁(yè)記載了以SANDIMMUNE商標(biāo)出售的口服環(huán)孢菌素制劑?？诜h(huán)孢菌素制劑還記載于NEORALTM的包裝說明書中，(1995)(Sandoz制藥公司，EastHanover，NewJersey，07936)。記載環(huán)孢菌素及其衍生物的美國(guó)專利包括4220641；4639434；4289851；和4384996。美國(guó)專利5047396記載了一種靜脈內(nèi)給藥的環(huán)孢菌素制劑。美國(guó)專利4388307、4970076和4990337記載了口服環(huán)孢菌素制劑的制備。用于口服給藥的硬膠囊藥物制劑的制備記載于美國(guó)專利4822618；4576284；5120710和4894235。發(fā)明概述提供了口服環(huán)孢菌素制劑及其用于免疫抑制治療的方法。在本發(fā)明的制劑中，環(huán)孢菌素存在于可口服的賦性劑中，所述賦性劑含有至少一種2至3個(gè)碳原子的醇溶劑和至少一種非離子表面活性劑。本發(fā)明的制劑還可以另外含有一種或多種助溶劑，其中優(yōu)選的助溶劑是脂肪酸酯和二醇。該環(huán)孢菌素制劑可以硬膠囊的形式進(jìn)行包裝。由于含有聚氧化烯表面活性劑，在將穩(wěn)定的分散體用水溶液介質(zhì)稀釋時(shí)，可生成無定形的生物可利用的環(huán)孢菌素微小顆粒。附圖概述圖1提供了本發(fā)明的多種口服制劑在大鼠體內(nèi)達(dá)到的環(huán)孢菌素峰值濃度(Cmax)，其中的Cmax表示與SANDIMMUNE口服制劑(SO)所達(dá)到的Cmax相比較的相對(duì)值。圖2提供了圖1所示的各制劑達(dá)到Cmax的時(shí)間(Tmax)，其中的Tmax表示與SANDIMMUNE口服制劑(SO)的Tmax相比較的相對(duì)值。圖3提供了圖1所示各制劑的相對(duì)血液濃度-時(shí)間曲線下面積(AUC)，其中的AUC表示與SANDIMMUNE口服制劑(SO)的AUC相比較的相對(duì)值。圖4提供了本發(fā)明的多種口服制劑以及SANDIMMUNE口服液(圖中的“Sand”)在人體內(nèi)達(dá)到的環(huán)孢菌素峰值濃度(Cmax)。圖5提供了圖4所示的各制劑達(dá)到Cmax的時(shí)間(Tmax)。圖6提供了圖4所示各制劑的血液濃度-時(shí)間曲線下面積(AUC)。發(fā)明詳述提供了促進(jìn)生物利用度并可被制成膠囊、特別是硬膠囊形式的口服環(huán)孢菌素制劑。在本發(fā)明的制劑中，環(huán)孢菌素存在于可口服的賦性劑中，所述賦性劑含有至少一種2至3個(gè)碳原子的醇溶劑和至少一種非離子表面活性劑。本發(fā)明的制劑還可以另外含有至少一種助溶劑，其中優(yōu)選的助溶劑包括脂肪酸酯和二醇。本發(fā)明的制劑的各種成分均為可藥用的。除了可提供高的生物利用度外，本發(fā)明的制劑還提供可在各批制劑間重現(xiàn)的環(huán)孢菌素的吸收。本發(fā)明的制劑可用于免疫抑制治療。許多本領(lǐng)域已知的環(huán)孢菌素具有免疫抑制活性并可用本發(fā)明的口服制劑進(jìn)行傳送?？捎帽景l(fā)明的制劑進(jìn)行給藥的環(huán)孢菌素包括環(huán)孢菌素A、環(huán)孢菌素B、環(huán)孢菌素C、環(huán)孢菌素D和環(huán)孢菌素G，及其合成的類似物。參見Merck索引(1989)2759。本發(fā)明的口服制劑特別適用于環(huán)孢菌素A的傳送。當(dāng)用本發(fā)明的制劑進(jìn)行給藥時(shí)，以制劑中賦性劑成分的體積計(jì)，環(huán)孢菌素A的濃度可以從50至150mg/ml，通常為100至150mg/ml。本發(fā)明的制劑的賦性劑成分包括醇溶劑成分，其中的醇溶劑成分含有至少一種并且通常不超過三種不同的醇，更常用不超過兩種不同的醇，其中的醇通常含有2到3個(gè)碳原子和1到2個(gè)羥基，從而在每1.5個(gè)碳原子上不超過1個(gè)羥基。適當(dāng)?shù)拇及ㄒ掖己捅?。制劑中醇溶劑的總量?yīng)為制劑的至少約1％(v/v)，通常為至少約3％(v/v)并可高達(dá)95％(v/v)，但一般在大約5至75％(v/v)之間，通常從大約5至60％(v/v)，更常用從10至60％(v/v)。當(dāng)用乙醇作為制劑中的醇溶劑時(shí)，乙醇的量可以在制劑的5至20％(v/v)的范圍內(nèi)，通常從大約5至15％(v/v)，而在使用丙二醇作為制劑中的醇溶劑時(shí)，制劑中丙二醇的量可以在制劑的大約5至90％(v/v)的范圍內(nèi)，通常從大約5至85％(v/v)，更常用大約10至50％(v/v)?？煽诜x性劑中還含有至少一種非離子聚氧化烯表面活性劑、但通常不超過兩種聚氧化烯非離子表面活性劑。聚氧化烯表面活性劑的親水親油平衡(HLB)應(yīng)從大約5至20，通常從大約8至16。本發(fā)明的制劑所用的聚氧化烯非離子表面活性劑優(yōu)選為聚氧乙烯化合物。優(yōu)選的聚氧乙烯化合物包括乙氧基醇，即聚氧乙烯醇或乙氧基脂肪醇，其中醇的部分及其醚和酯取代基一般為10至18個(gè)、通常為10至14個(gè)碳原子；和聚氧乙烯的脂肪酸偏酯衍生物(通常為單酯)、4至6個(gè)碳原子(通常為6個(gè)碳原子)的多元醇衍生物，其中的多元醇可以是多元醇酐如山梨糖醇酐。本發(fā)明的表面活性劑的脂肪酸部分一般為10至18個(gè)碳原子。乙烯氧基的數(shù)量一般在2至30個(gè)之間，通常在大約2至25個(gè)之間。優(yōu)選的表面活性劑為聚氧乙烯(4)十二烷基醚(BRIJ30)和聚氧乙烯(20)單山梨糖醇酐單油酸酯(吐溫80)。本發(fā)明的制劑中含有的非離子表面活性劑的總量應(yīng)為制劑的5至65％，通常從大約5至60％(v/v)。當(dāng)制劑中含有吐溫80時(shí)，其含量范圍通常為制劑的5至60％，更常用從大約10至50％(v/v)。當(dāng)制劑中含有BRIJ30時(shí)，其含量范圍通常為制劑的10至45％，更常用從大約15至40％(v/v)。本發(fā)明的制劑還可以另外含有一種或多種助溶劑，但通常不超過三種不同的助溶劑，更常用不超過兩種不同的助溶劑，適當(dāng)?shù)闹軇┌ㄖ舅狨ズ投迹撝軇┛梢允?00％的脂肪酸酯、100％的二醇或它們的混合物。制劑中含有的助溶劑的總量應(yīng)為制劑的20至80％(v/v)，通常從大約25至75％(v/v)。當(dāng)制劑中含有助溶劑時(shí)，本發(fā)明的制劑中的助溶劑和溶劑的比例應(yīng)從大約1∶1到15∶1，但通常從大約1∶1到13∶1?？稍诒景l(fā)明的制劑中用作助溶劑的脂肪酸酯是其脂肪酸的烴鏈長(zhǎng)度為12至18、通常14至18個(gè)碳原子，并且該脂肪酸酯應(yīng)是低級(jí)醇的單酯。適當(dāng)?shù)闹舅狨ヒ话銘?yīng)含有偶數(shù)的脂肪酸鏈，其中的烴鏈可以是飽和或不飽和的，通常含有不超過兩個(gè)不飽和的位點(diǎn)。優(yōu)選的脂肪酸一般是來自植物或哺乳動(dòng)物，包括棕櫚酸酯、硬脂酸酯、棕櫚油酸酯、亞油酸酯、亞麻酸酯等，尤其是肉豆蔻酸酯和油酸酯。脂肪酸單酯的醇應(yīng)為2至4個(gè)碳原子、通常為2至3個(gè)碳原子、帶或不帶支鏈的低級(jí)醇。特別優(yōu)選的脂肪酸酯是肉豆蔻酸異丙酯和油酸乙酯。當(dāng)含有肉豆蔻酸異丙酯時(shí)，其含量應(yīng)為制劑總量的大約55至75％(v/v)，當(dāng)含有油酸乙酯時(shí)，其含量應(yīng)為制劑總量的大約35至75％(v/v)。通常，脂肪酸酯的含量應(yīng)至少等于(v/v)制劑中表面活性劑的含量并最高可達(dá)其含量的8倍，但一般不超過制劑中表面活性劑的含量的5倍(v/v)。本發(fā)明的制劑中還可含有二醇，該二醇可替代脂肪酸酯助溶劑，也可與其同時(shí)存在?？捎米髦軇┑亩荚谏頊囟认乱话銥橐后w，它包括8至28個(gè)碳原子、通常為16至20個(gè)碳原子的二醇，該二醇可以是聚氧化烯二醇，其中的亞烷基為2至3個(gè)碳原子。用作助溶劑的適當(dāng)?shù)亩伎梢詮拇蠹s200至800道爾頓，通常從大約200至650道爾頓。特別優(yōu)選的二醇包括聚乙二醇，特別是聚乙二醇200(PEG200)、聚乙二醇400(PEG400)、聚乙二醇600(PEG600)等，最優(yōu)選PEG400。作為本發(fā)明的助溶劑時(shí)，這些二醇的含量可以為制劑的大約5至60％(v/v)，通常從5至55％(v/v)。為了形成無定形的微小顆粒，制劑中低級(jí)醇的總量一般應(yīng)在25-60重量％之間，通常在大約30-50重量％之間。烯氧基化合物的總量一般應(yīng)在20-50重量％之間，通常在大約25-40重量％之間。當(dāng)使用聚氧化烯化合物的混合物時(shí)，脂肪酸酯的用量一般應(yīng)在聚氧化烯化合物的大約25-100％之間。在本發(fā)明的制劑中，助溶劑本身可使制劑產(chǎn)生所需的物理特性，例如粘度、穩(wěn)定性等。如需要，該制劑還可另外含有可使制劑產(chǎn)生所需物理特性的添加劑，例如增稠劑、懸浮劑、固化劑等，這些添加劑包括阿拉伯膠、羧甲基纖維素、羥丙基纖維素、卵磷脂、甲基纖維素、高分子量聚乙二醇(例如分子量在大約1000到6000、通常為1000到5000道爾頓之間的聚乙二醇)、聚烯吡酮、藻酸鈉、黃蓍膠等。本發(fā)明的制劑中還可以含有一些可產(chǎn)生各種功能的微量成分，例如酶抑制劑、防腐劑、抗氧劑、抗菌劑、穩(wěn)定劑等。當(dāng)制劑中含有這些增稠劑和其它添加劑時(shí)，其總量一般不超過制劑的5重量％，通常為2重量％，更常用1重量％。本發(fā)明的制劑中還可含有多種本領(lǐng)域已知的賦性劑。本發(fā)明的制劑在很寬的溫度范圍內(nèi)是穩(wěn)定的，其中，穩(wěn)定的意思是指不會(huì)產(chǎn)生該制劑所不包括的物理性質(zhì)，例如環(huán)孢菌素活性成分的結(jié)晶。本發(fā)明的制劑可保持穩(wěn)定的溫度范圍包括低溫，例如冷藏時(shí)所用的溫度，這樣的低溫一般從0到15℃，更常用2到8℃。本發(fā)明的制劑適于以膠囊(例如硬膠囊和軟膠囊)的形式給藥。生產(chǎn)硬膠囊(包括溶液制劑)的方法是本領(lǐng)域已知的，并記載于美國(guó)專利4822618和4576284中，在此引入其公開的內(nèi)容作為參考。通常，本發(fā)明的制劑所用的硬膠囊包括兩部分殼部分和帽部分。殼和帽部分扣在一起形成一個(gè)密封于硬膠囊殼內(nèi)的確定體積的空腔。殼和帽部分可用親水性聚合物如淀粉或明膠制造。在制備硬膠囊時(shí)，可將溶液劑倒入殼內(nèi)，然后將帽扣到殼上使膠囊密封。使用EP116744(在此引入其公開的內(nèi)容作為參考)中所記載的密封材料以確保兩個(gè)部分間的密封，從而防止內(nèi)裝制劑從膠囊中泄漏。為了避免在胃中降解，應(yīng)將含有本發(fā)明的制劑的膠囊用可抑制膠囊在胃的酸性環(huán)境中降解的腸溶包衣進(jìn)行包衣。許多腸溶包衣均是本領(lǐng)域已知的。參見，例如美國(guó)專利5206219，在此引入其公開的內(nèi)容作為參考。在制備該組合物、尤其是可形成微小顆粒的制劑時(shí)，應(yīng)首先將環(huán)孢菌素溶于低級(jí)醇中，該低級(jí)醇中還可含有少量的(一般低于組合物的大約50重量％)聚氧化烯化合物，用來溶解環(huán)孢菌素?？墒褂蒙叩臏囟?，通常在大約60至90℃的范圍內(nèi)。將環(huán)孢菌素溶解后，加入大部分的聚氧化烯化合物并通過加入適當(dāng)?shù)某煞謱⒅苿┲瞥伤璧谋壤Ｍǔ?，環(huán)孢菌素可以1∶1.5-5、更常用1∶2-4的重量比溶于低級(jí)醇(選擇性地含有部分聚氧化烯化合物)中。本發(fā)明的制劑可用于免疫抑制治療。免疫抑制治療應(yīng)用于各種疾病中，包括特發(fā)性腎病綜合征、I型胰島素依賴型糖尿病、白氏綜合征、活動(dòng)性克羅恩氏病、再生障礙性貧血、嚴(yán)重的皮質(zhì)類固醇依賴型哮喘、銀屑病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和其它免疫系統(tǒng)病因的疾病。本發(fā)明的制劑特別適用于移植的情況，包括同種異基因和異種的器官、組織或細(xì)胞移植，在移植時(shí)希望通過免疫抑制來確保維持移植的器官、組織或細(xì)胞在移植后(例如在骨髓移植后)的活性，即預(yù)防移植排斥或預(yù)防移植物抗宿主病。在使用本發(fā)明的制劑對(duì)宿主進(jìn)行免疫抑制治療時(shí)，可依據(jù)所要治療的具體疾病口服給予有效量的環(huán)孢菌素，以在宿主體內(nèi)達(dá)到所需的免疫抑制水平。在移植時(shí)，通常在手術(shù)前給予起始量的環(huán)孢菌素。在供體的器官移植入宿主體內(nèi)后，應(yīng)對(duì)宿主重復(fù)地(即長(zhǎng)期地)給予環(huán)孢菌素以維持免疫抑制。起始劑量應(yīng)在移植前4至12小時(shí)給藥，劑量為10至18mg/kg宿主，通常為10至15mg/kg宿主。手術(shù)后，每日繼續(xù)給予起始劑量并持續(xù)1-3周，通常1-2周。然后將劑量逐漸減少至3至10mg/kg·天、通常3至6mg/kg·天的維持量。將劑量減至維持量的速度為每周3至8％，通常為每周大約5％。通過HPLC、RIA、ELISA或TDx分析測(cè)定最低血液水平并依據(jù)其調(diào)整劑量，使最低血液水平維持在150至250ng/ml的濃度。本發(fā)明的制劑可與其它的藥物聯(lián)合給藥，其中的附加治療是本領(lǐng)域所推薦和已知的。例如，本發(fā)明的制劑可與腎上腺皮質(zhì)類固醇、咪唑硫嘌呤等聯(lián)合給藥。在將供體器官移植入宿主體內(nèi)時(shí)使用本發(fā)明的制劑，可使供體器官在宿主體內(nèi)的壽命延長(zhǎng)，這是由于宿主對(duì)供體器官存在的免疫反應(yīng)受到抑制的結(jié)果。“壽命的延長(zhǎng)”是指與未在移植中應(yīng)用免疫抑制治療的情況相比，供體器官可在更長(zhǎng)的時(shí)期內(nèi)在宿主體內(nèi)維持其活性。因此，壽命的延長(zhǎng)包括將活性維持一段不確定的時(shí)間。只要供體器官在宿主環(huán)境中維持其功能就認(rèn)為其有活性。為了方便使用者，可提供一些工具，工具內(nèi)含有適當(dāng)量的單或多劑量水平的環(huán)孢菌素和助溶劑，即低級(jí)醇和聚氧化烯化合物，例如乙醇和丙二醇中的至少一種，和多山梨醇酯80和聚乙二醇400中的至少一種。提供以下實(shí)施例為了說明而不是進(jìn)行限定。實(shí)施例根據(jù)本發(fā)明制備了多種口服環(huán)孢菌素制劑。然后在大鼠和人中觀察所制備的制劑中環(huán)孢菌素的生物利用度。I、口服環(huán)孢菌素制劑制備了下述口服環(huán)孢菌素A制劑。在各例中，將100mgCsA、指定量的表面活性劑、指定量的乙醇或丙二醇加入到體積為1.0ml的瓶中，并加入適當(dāng)體積的脂肪酸酯和/或二醇使最終體積達(dá)到1.0ml。制劑組成19EtOH0.1ml(10％)Tween80300mg(0.278ml)IM適量至1.0ml＜(0.622ml)(531mg)20EtOH0.05ml(5％)Brij30350mg(0.368ml)IM適量至1.0ml＜(0.582ml)(496mg)21PG0.05ml(5％)Brij30350mg(0.368ml)IM適量至1.0ml＜(0.582ml)(496mg)22EtOH0.1ml(10％)Tween80300mg(0.278ml)EO適量至1.0ml＜(0.622ml)(541mg)23EtOH0.05ml(5％)Brij30350mg(0.368ml)EO適量至1.0ml＜(0.582ml)(506mg)24PG0.05ml(5％)Bri30350mg(0.368ml)EO適量至1.0ml＜(0.582ml)(506mg)33EtOH0.1ml(10％)Brij30150mg(0.158mg)IM適量至1.0ml＜(0.742ml)(633mg)34EtOH0.1ml(10％)Brij30150mg(0.158ml)EO適量至1.0ml＜(0.742ml)(646mg)35EtOH0.1ml(10％)Tween80500mg(0.463ml)PG適量至1.0ml＜(0.437ml)(453mg)36EtOH0.1ml(10％)Tween80300mg(0.278ml)PG100mg(0.097ml)EO適量至1.0ml＜(0.525ml)(465mg)37EtOH0.1ml(10％)Tween80300mg(0.278ml)PEG400100mg(0.088ml)EO適量至1.0ml＜(0.534ml)(464mg)38EtOH0.1ml(10％)Brij30300mg(0.316ml)PG100mg(0.097ml)EO適量至1.0ml＜(0.487ml)(424mg)39EtOH0.1ml(10％)Brij30300mg(0.316ml)PG200mg(0.193ml)EO適量至1.0ml＜(0.391ml)(340mg)</table></tables><tablesid="table2"num="002"><tablewidth="775">制劑組成40PG300mg(290ml)Brij30300mg(0.316ml)EO適量至1.0ml＜(0.394ml)(343mg)41EtOH0.05ml(5％)Brij30150mg(0.158ml)Tween80100mg(0.098ml)EO適量至1.0.ml＜(0.649ml)(565mg)42PG0.05ml(5％)Brij30150mg(0.158ml)Tween80100mg(0.093ml)EO適量至1.0.ml＜(0.649ml)(565mg)43EtOH0.10ml(10％)Tween80400mg(0.371ml)PG適量至1.0ml(0.529ml)44EtOH0.10ml(10％)Tween80400mg(0.371ml)PEG400適量至100ml＜(0.529ml)(601mg)45EtOH0.10mlTween80300mg(0.278ml)PG大約250mg(0.243ml)PEG100大約250mg(0.220ml)46EtOH0.10ml(10％)Tween80100mg(0.093ml)PG適量至1.0ml(0.807ml)48EtOH0.10mlTween80200mg(0.186ml)PG大約250mg(0.243ml)PEG400大約250mg(0.220ml)49EtOH0.10ml(10％)Tween80600mg(0.558ml)PG適量至1ml(0.342ml)50EtOH0.10ml(10％)Tween80300mg(0.278ml)PG適量至1.0ml(0.622ml)51EtOH0.10ml(10％)Tween80200mg(0.186ml)PG適量至1.0ml(0.714ml)52EtOH0.05ml(5％)Tween80400mg(0.371ml)PG適量至1.0ml(0.579ml)</table></tables>PG＝丙二醇；EtOH＝乙醇Brij30＝聚氧乙烯(4)十二烷基醚Tween80＝聚氧乙烯(20)一山梨糖醇酐單油酸酯IO＝肉豆蔻酸異丙酯EO＝油酸乙酯II、制劑19-24和33-42的體內(nèi)生物利用度的研究對(duì)制劑19-24和33-42中環(huán)孢菌素的生物利用度進(jìn)行如下研究。為計(jì)算生物利用度，測(cè)量了如下藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)(a)環(huán)孢菌素的峰值血液濃度(Cmax)；(b)達(dá)到Cmax所需的時(shí)間(Tmax)；和血液濃度-時(shí)間曲線下的面積(AUC)。為了進(jìn)行比較，除制劑19-24和33-42外，還在類似的條件下觀察了SANDIMMUNE口服液(SO)中環(huán)孢菌素的生物利用度。對(duì)于上述各制劑，將重量為250-350克的CsA-naiveSpragueDawley大鼠用顆粒狀的標(biāo)準(zhǔn)食物(Agway3000，GranvilleMill，Greensboro，NC)和任意的水喂養(yǎng)。在實(shí)驗(yàn)前一天，在輕度乙醚麻醉下將硅橡膠套管插入右側(cè)頸靜脈和右側(cè)股動(dòng)脈。饑餓過夜后，通過管飼法進(jìn)行環(huán)孢菌素的給藥。給藥后，從頸靜脈收集200μl血樣到含有0.3mg冷凍干燥的NaEDTA的0.5ml聚丙烯微量離心管中并旋渦振蕩10秒鐘。給予口服制劑的動(dòng)物的取樣時(shí)間為給藥后的0、0.5、1、2、4、8、12、24、36、48和72小時(shí)。通過熒光偏振免疫分析(FPI)(TDx，Abbot實(shí)驗(yàn)室)測(cè)定全血中的CsA，包括其代謝物。概括地講，將150μl全血樣品定量轉(zhuǎn)移到1.5ml的微量離心管中。將細(xì)胞溶漲并用50μl含有表面活性劑的溶解試劑溶解。然后用300μl乙腈使蛋白質(zhì)沉淀。離心后，將上清液在TDx自動(dòng)分析儀上按照Abbot診斷學(xué)所推薦的方法進(jìn)行FPI分析。由于TDx分析最初是用于人血的，所以對(duì)推薦的方法進(jìn)行了如下改進(jìn)。將已知量的CsA加入到用EDTA處理過的大鼠血中以制備一系列已知CsA濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。當(dāng)預(yù)計(jì)樣品中的CsA濃度大于1.0μg/ml時(shí)，將血樣在pH7.0的0.1M磷酸鹽緩沖液中稀釋10倍。對(duì)于稀釋的樣品，用一系列含有已知量的CsA的標(biāo)準(zhǔn)溶液(以體積計(jì)，含有10％的大鼠血液和90％的磷酸鹽緩沖液)作出另一條校準(zhǔn)曲線。藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)從零室(non-compartmental)分析得到。通過觀察各大鼠的大致的時(shí)量曲線來評(píng)估峰值濃度(Cmax)以及達(dá)到峰值濃度的時(shí)間(Tmax)。根據(jù)線性梯形方法計(jì)算出從時(shí)間0點(diǎn)到最后數(shù)據(jù)點(diǎn)之間的血液濃度-時(shí)間曲線下面積(AUC)(AUC0→t)。血液濃度-時(shí)間曲線的尾部下的殘余面積(AUCt→∞)用最終觀察到的濃度(C*)和時(shí)量曲線的末端消除相的一級(jí)速率常數(shù)(λz)的比例來估算。速率常數(shù)(λz)通過明顯為log-線性的時(shí)量曲線末端相(即最后的3到5個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)，依據(jù)所分析的曲線決定)的濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)的log-線性回歸進(jìn)行測(cè)定?？偟腁UC(AUC0→∞)為(AUC0→t)和(AUCt→∞)的加和。將各制劑得到的結(jié)果與SO得到的結(jié)果相比較并列于圖1-3中。結(jié)果表明，本發(fā)明的大部分制劑具有較高的AUC值，說明本發(fā)明的大部分制劑的環(huán)孢菌素的生物利用度大于SANDIMMUNE口服液(SO)。III、制劑35、43-46和48-52在人體內(nèi)的生物利用度用48名年齡在19和55歲之間、體重與理想體重的偏差不超過20％的健康男性的作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。進(jìn)行單劑量、禁食、隨機(jī)、雙盲、三向交叉實(shí)驗(yàn)。將48名受試者隨機(jī)分成6組，每組8人。每一組均在三個(gè)不同的時(shí)期通過上述制劑或SANDIMMUNE口服液(SO)接受300mg單劑量的環(huán)孢菌素，各時(shí)期間相隔7天的藥物洗凈期。受試者需要在服藥前10小時(shí)及服藥后4小時(shí)禁食。除服藥前1小時(shí)至服藥后2小時(shí)的期間外，在實(shí)驗(yàn)期間可隨意飲水。服藥前，抽取15ml血樣。給藥時(shí)，將3ml制劑(300mg)與200ml巧克力奶混合并口服。在t＝0、0.5、1、1.5、2、3、4、6、8、10、12、16、20和24小時(shí)抽取10ml血樣。實(shí)驗(yàn)后再抽取15ml血樣。用TDx(Abbott診斷學(xué)，N.Chicago，IL)根據(jù)廠家的說明書分析全血樣品中環(huán)孢菌素A的濃度。用標(biāo)準(zhǔn)的方法得到零室藥物動(dòng)力學(xué)。從濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)估算出全血濃度的最大值(Cmax)及其出現(xiàn)的時(shí)間(Tmax)。用線性梯形規(guī)則計(jì)算出直至靈敏度極限(25ng/ml)以上的最終血液濃度的血液濃度-時(shí)間曲線下面積(AUC)并將其外推至無窮。將觀察到的各制劑的Cmax、Tmax和AUC值進(jìn)行平均。各制劑的平均值列于圖4-6。結(jié)果表明，在相同的條件下，各實(shí)驗(yàn)制劑出現(xiàn)Cmax比SANDIMMUNE口服液(SO)至少快兩倍。此外，在相同的條件下，觀察到的各實(shí)驗(yàn)制劑的AUC比SANDIMMUNE口服液(SO)所觀察到的至少大2000nghr/ml?；谶@些結(jié)果，制劑35、43-46和48-52提供了比SANDIMMUNE口服液(SO)更高的生物利用度。制備制劑，用于在水溶液介質(zhì)中稀釋時(shí)形成無定形微小顆粒。IV、微小顆粒制劑A、將5g環(huán)孢菌素A加入到5ml乙醇中。將混合物攪拌至環(huán)孢菌素A完全溶解。向得到的溶液中加入25g多山梨醇酯80并用1，2-丙二醇將體積加到50ml。將混合物在室溫下充分?jǐn)嚢柚敝列纬删鶆蛉芤?。B、將5g環(huán)孢菌素A加入到5ml乙醇中。將混合物攪拌至環(huán)孢菌素A完全溶解。向得到的溶液中加入15g多山梨醇酯80并用1，2-丙二醇和聚乙二醇400的混合物將體積加到50ml。將混合物在室溫下充分?jǐn)嚢?，直至形成均勻溶液。C、將1ml實(shí)施例1中得到的溶液用玻璃注射器加入到50ml水中，形成用于人口服給藥的濃縮乳劑或微乳劑。加入溶液后迅速溶解并形成細(xì)小顆粒的白色懸浮液，該懸浮液為具有藍(lán)色反光的膠態(tài)懸浮液(丁達(dá)爾效應(yīng))。以26000g離心5小時(shí)后，將沉積物用水洗滌，然后以26000g離心24小時(shí)。在同樣條件下將洗滌和離心過程重復(fù)兩次。干燥后，測(cè)定粉末的X射線圖。固體完全為無定形狀。將沉積物用掃描電子顯微鏡檢測(cè)。沉積物由直徑在200至400nm之間的無定形球形微小顆粒組成，存在一些聚集體。D、將2ml實(shí)施例1中得到的溶液加入到100ml水中，并在稀釋后的10分鐘和1小時(shí)用衍射/散射激光顆粒計(jì)(MalvernSB.OD)對(duì)膠態(tài)懸浮液進(jìn)行檢測(cè)。1小時(shí)后，觀察到兩種顆粒群一種含有70％重量的環(huán)孢菌素A，平均直徑為300nm；第二種含有30％重量的環(huán)孢菌素A，平均直徑為20μm，可能由微小顆粒的聚集體組成。E、將1ml實(shí)施例1中得到的溶液加入到50ml水中并將膠態(tài)懸浮液攪拌10分鐘。然后將懸浮液加入到200ml人造胃酸液中并在37℃溫?zé)?。用衍?散射激光顆粒計(jì)(MalvernSB.OD)檢測(cè)該均勻的膠態(tài)懸浮液。懸浮液完全由平均直徑為600nm的微小顆粒組成。F、將1ml實(shí)施例1中得到的溶液直接加入到200ml人造胃酸液中。將該均勻的懸浮液在37℃溫?zé)岵⒀杆儆醚苌?散射激光顆粒計(jì)(MalvernSB.OD)進(jìn)行檢測(cè)。懸浮液完全由平均直徑為350nm的微小顆粒組成。上述結(jié)果和討論表明，提供了具有高的生物利用度的新型環(huán)孢菌素制劑。本發(fā)明的制劑可以含有高濃度的環(huán)孢菌素并能在寬的溫度范圍內(nèi)保持穩(wěn)定，包括冷藏時(shí)常用的低溫。本發(fā)明的制劑可以以膠囊(包括硬膠囊)的形式傳送，易于貯藏和使用。本制劑還提供無定形的微小顆粒，它可提高環(huán)孢菌素的生物利用度。本說明書中所引用的所有出版物及專利申請(qǐng)均引入本文作為參考。盡管為了清楚理解的目的而通過說明和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的描述，但根據(jù)本發(fā)明所講述的內(nèi)容，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以很明顯地看出，可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行某些改變和修正而不超出所附權(quán)利要求書的范圍。權(quán)利要求1.一種環(huán)孢菌素制劑，含有環(huán)孢菌素；至少一種2至3個(gè)碳原子的醇溶劑；和至少一種非離子聚氧化烯表面活性劑，其中所述表面活性劑選自聚氧乙烯醇和4至6個(gè)碳原子的乙氧基化多元醇的脂肪酸單酯。2.根據(jù)權(quán)利要求1的環(huán)孢菌素制劑，其中所述環(huán)孢菌素制劑另外含有至少一種助溶劑，所述助溶劑選自低級(jí)醇和14至18個(gè)碳原子的脂肪酸形成的單酯和8至28個(gè)碳原子的二醇。3.根據(jù)權(quán)利要求1的環(huán)孢菌素制劑，其中所述醇溶劑為所述環(huán)孢菌素制劑的大約5至75％(v/v)，所述的至少一種非離子聚氧化烯表面活性劑為所述環(huán)孢菌素制劑的大約5至65％(v/v)，所述的至少一種助溶劑為所述環(huán)孢菌素制劑的大約20至80％(v/v)。4.一種環(huán)孢菌素制劑，含有環(huán)孢菌素A；至少一種選自乙醇和丙二醇的醇溶劑，其中所述醇溶劑為所述環(huán)孢菌素制劑的大約5至75％(v/v)；至少一種非離子聚氧乙烯表面活性劑，其中所述表面活性劑選自聚氧乙烯醇和乙氧基化山梨糖醇酐的單酯，為所述環(huán)孢菌素制劑的大約5至65％(v/v)；和至少一種助溶劑，其中至少一種所述助溶劑是2-4個(gè)碳原子的低級(jí)醇和14至18個(gè)碳原子的脂肪酸形成的酯，其中所述助溶劑為所述環(huán)孢菌素制劑的大約20至80％(v/v)。5.根據(jù)權(quán)利要求4的制劑，其中所述非離子表面活性劑選自聚氧乙烯(4)十二烷基醚和聚氧乙烯(20)單山梨糖醇酐單油酸酯，所述脂肪酸酯選自肉豆蔻酸異丙酯和油酸乙酯，并且所述環(huán)孢菌素制劑含有兩種助溶劑，其中的一種助溶劑是8至28個(gè)碳原子的二醇。6.一種口服環(huán)孢菌素制劑，含有濃度在50至150mg/ml之間的環(huán)孢菌素A；由乙醇和丙二醇組成的醇溶劑成分，其中所述醇溶劑成分為所述環(huán)孢菌素制劑的大約5至75％(v/v)；和為所述環(huán)孢菌素制劑的大約10至50％(v/v)的乙氧基化山梨糖醇酐的單酯。7.根據(jù)權(quán)利要求6的環(huán)孢菌素制劑，其中所述乙醇為所述環(huán)孢菌素制劑的大約5至20％(v/v)。8.根據(jù)權(quán)利要求6的環(huán)孢菌素制劑，其中所述丙二醇為所述環(huán)孢菌素制劑的大約10至50％(v/v)。9.一種硬膠囊環(huán)孢菌素制劑，由含有權(quán)利要求1的口服環(huán)孢菌素制劑的硬膠囊組成。10.環(huán)孢菌素微小顆粒的水溶液分散劑，其中，分散劑中至少有50％重量的環(huán)孢菌素為小于約1μm的顆粒，所述環(huán)孢菌素為無定形的。11.根據(jù)權(quán)利要求10的分散劑，含有少量低級(jí)醇和至少一種聚氧乙烯表面活性劑。12.根據(jù)權(quán)利要求10的分散劑，其中所述低級(jí)醇是乙醇和丙二醇中的至少一種，所述聚氧乙烯化合物為多山梨醇酯80。13.一種藥具，含有環(huán)孢菌素、乙醇和丙二醇中的至少一種和多山梨醇酯80和聚乙二醇400中的至少一種。14.制備權(quán)利要求10的環(huán)孢菌素顆粒水溶液分散劑的方法，所述方法包括將乙醇和丙二醇中的至少一種和環(huán)孢菌素混合形成溶液；和將所述溶液與聚氧乙烯表面活性劑混合以形成第二種溶液，該溶液在用水稀釋時(shí)形成所述環(huán)孢菌素的無定形微小顆粒。全文摘要提供了改進(jìn)的口服環(huán)孢菌素制劑，所述制劑具有高的生物利用度并能以硬膠囊或微小顆粒的形式給藥。在本發(fā)明的制劑中，環(huán)孢菌素通過可口服的賦性劑傳送，所述賦性劑含有至少一種2至3個(gè)碳原子的醇溶劑和至少一種非離子表面活性劑。本發(fā)明的制劑還可另外含有至少一種助溶劑，其中優(yōu)選的助溶劑包括脂肪酸和二醇。本發(fā)明的制劑可用于免疫抑制治療。文檔編號(hào)A61K9/08GK1164828SQ96190962公開日1997年11月12日申請(qǐng)日期1996年7月31日優(yōu)先權(quán)日1995年8月25日發(fā)明者穆·J·趙,拉爾斯·E·萊維,菲利普·J·普萊蒂,羅貝爾·弗洛什,克里斯蒂昂·梅爾申請(qǐng)人:桑格斯塔特醫(yī)藥公司,查珀?duì)栂柋笨_來納大學(xué)