專利名稱：防止移植排斥的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及提供治療用同種移植物的方法和防止受體對(duì)同種移植物排斥作用的方法。具體地說(shuō)，它涉及用光動(dòng)力治療技術(shù)處理供體組織，以消耗抗原提呈細(xì)胞，并降低其中細(xì)胞的免疫原性。
背景技術(shù)：
同種移植物在宿主中的移植成功取決于這些因素被移植組織上的抗原，它們被受體識(shí)別為異源物質(zhì)并能夠引起排斥反應(yīng)，介導(dǎo)排斥反應(yīng)的受體系統(tǒng)中的細(xì)胞，和改變異源抗原的提呈或細(xì)胞應(yīng)答的反應(yīng)。已知，同種移植物排斥反應(yīng)的一個(gè)重要原因是供體組織中有非實(shí)質(zhì)細(xì)胞存在(過(guò)客白細(xì)胞)。
還已知，主要組織相容性復(fù)合體(MHC)的產(chǎn)物在介導(dǎo)移植物組織對(duì)受體的攻擊中起著重要作用。MHC通常是復(fù)合物，因?yàn)樗鼈儼ㄔS多不同的基因座，各自編碼不同的細(xì)胞表面抗原，還因?yàn)榛蜃哂袕V泛的多態(tài)性。MHC的基因座根據(jù)它們的組織分布，所表達(dá)的抗原結(jié)構(gòu)和它們的功能歸于I類或II類中的一類。I類抗原，存在于所有具核細(xì)胞上，是細(xì)胞毒T(CD8+)淋巴細(xì)胞的主要目標(biāo)。II類抗原不廣泛存在于組織中，是輔助T(CD8+)淋巴細(xì)胞的主要目標(biāo)。
人類MHC即人類白細(xì)胞抗原(HLA)的各個(gè)基因座的多態(tài)性形式已經(jīng)利用抗體和多種用于體外測(cè)試T淋巴細(xì)胞識(shí)別的技術(shù)被認(rèn)識(shí)。由受體對(duì)供體多態(tài)性的識(shí)別所介導(dǎo)的這些反應(yīng)與體內(nèi)發(fā)生的強(qiáng)烈排斥作用有關(guān)。對(duì)移植物排斥的細(xì)胞基礎(chǔ)的體外和體內(nèi)研究發(fā)現(xiàn)，CD4+和CD8+淋巴細(xì)胞參與了排斥反應(yīng)。
至今，在實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ秃歪t(yī)療實(shí)踐中，延長(zhǎng)移植后同種移植物和異種移植物存活期的努力主要注重對(duì)受體免疫器官的抑制。作為其目的，這種治療包括預(yù)防性免疫抑制和/或?qū)σ浦参锱懦獾闹委煛?br> 用于免疫抑制的藥物實(shí)例包括細(xì)胞毒藥物、抗代謝藥、皮質(zhì)類甾醇和抗淋巴細(xì)胞血清。被發(fā)現(xiàn)在預(yù)防性免疫抑制方面特別有效的非特異性免疫抑制劑(硫唑嘌呤、溴隱亭、甲潑尼龍、潑尼松和環(huán)胞多肽A)顯著提高了移植的臨床成功率。腎移植后環(huán)胞多肽A的腎毒性已經(jīng)通過(guò)聯(lián)用潑尼龍，或潑尼龍和硫唑嘌呤之類的甾醇得以降低。此外，已經(jīng)通過(guò)在抗淋巴細(xì)胞球蛋白之后使用環(huán)胞多肽A成功進(jìn)行了腎臟移植。另一種治療方法是在移植前進(jìn)行全淋巴系統(tǒng)照射，然后在移植后進(jìn)行最低的免疫抑制。對(duì)排斥的治療使用了甾醇、2-氨基-6-芳基-5-取代的嘧啶，異源抗淋巴細(xì)胞球蛋白和對(duì)多種白細(xì)胞群的單克隆抗體。
使用免疫抑制藥物的主要并發(fā)癥是感染。此外，系統(tǒng)性免疫抑制伴隨有不良的毒性作用，例如在腎移植后使用環(huán)胞多肽A時(shí)的腎中毒和造血干細(xì)胞水平的下降。免疫抑制藥還可能導(dǎo)致肥胖、愈傷能力差、甾醇性高血糖、甾醇性精神病、白細(xì)胞減少、胃腸道出血、淋巴瘤和高血壓。
由于這些并發(fā)癥，移植免疫學(xué)家已經(jīng)開(kāi)始尋找以抗原特異性方式抑制免疫反應(yīng)的方法，從而只喪失對(duì)供體同種抗原的反應(yīng)。一般通過(guò)改變移植組織或能夠介導(dǎo)排斥反應(yīng)的特異性細(xì)胞的抗原性已經(jīng)做到了這種特異性的免疫抑制。在某些情況中，是否會(huì)引起免疫性或耐受性取決于抗原被提呈給免疫系統(tǒng)的方式。其它抗排斥方法注重于在移植前消除或弱化供體組織中攜帶MHC的過(guò)客白細(xì)胞，即抗原提呈細(xì)胞(APC)。
已報(bào)道的以此為目的的方法包括延長(zhǎng)供體組織的培養(yǎng)時(shí)間(Lafferty等，“器官培養(yǎng)一段時(shí)間后降低了甲狀腺同種移植物的免疫原性”(“Throid AllograftImmunogenicity is Reduced after a period in Organ Culture”)，科學(xué)(Science)，188259(1975))。在兩個(gè)鼠類模型中發(fā)現(xiàn)，移植前通過(guò)同種移植組織在組織培養(yǎng)中生長(zhǎng)來(lái)對(duì)其預(yù)處理，產(chǎn)生了跨越MHC障礙的永久接受性(Lafferty等，移植(Transplantation)，22138-49(1976)；Bowen等，柳葉刀(Lancet)，2586-86(1979))。據(jù)假設(shè)，這種處理消耗了過(guò)客淋巴細(xì)胞，因而沒(méi)有了組織免疫原性所必須的刺激細(xì)胞群。例如，已經(jīng)在如血管移植和腎臟移植中以及有時(shí)在輸血前，進(jìn)行供體-受體HLA的配型。
已經(jīng)有人用生長(zhǎng)因子例如TGF-β處理供體組織(Czarniecki等，1992年8月4日的美國(guó)專利5,135,915)，有時(shí)結(jié)合以延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間(Orton，1993年3月9日的美國(guó)專利5,192,312)。
可以用UV光來(lái)處理供體組織(Reemtsma等，1990年8月7日的美國(guó)專利4,946,438；和Lau等“通過(guò)紫外光直接照射移植物延長(zhǎng)了大鼠胰島同種移植物的存活期”(“Prolongation of Rat Islet Allograft Survival by Direct Ultraviolet Irradiationof the Graft”，科學(xué)(Science)，223607(1984))，有時(shí)結(jié)合以微囊化作用(Weber等，1993年7月13日的美國(guó)專利5,227,298)。已有其它研究者只使用屏障膜，例如雙層膜，包含非細(xì)胞毒的第一層和1987年9月29日Cochrum的美國(guó)專利4,696,286所述的生物相容性半透性聚合物外層的第二層。
已經(jīng)可用多種物質(zhì)處理供體組織，例如對(duì)皮膚移植物外用環(huán)胞多肽，如1991年2月26日Hewitt等的美國(guó)專利4,996,193中所述，以及用淋巴細(xì)胞分裂抑制素灌注供體腎臟，如1981年10月13日J(rèn)ones等的美國(guó)專利4,294,824所述。在移植到實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物之前，用可的松、沙利度胺或?yàn)趵贵w外處理皮膚移植物，延長(zhǎng)了其存活期。局部使用于皮膚的藥物量通常少于為獲取相同效果而給受體全身性注射所需的藥物量。已有人在移植前用鏈激酶/鏈道酶，受體的RNA和DNA制劑，或戊二醛處理供體皮膚，以降低移植皮膚的免疫原性。
更完善的方法涉及用針對(duì)MHC產(chǎn)物的單克隆抗體和補(bǔ)體處理供體組織(Faustman等，“用直接針對(duì)Ia決定簇的抗體預(yù)處理鼠胰島延長(zhǎng)了該同種移植物的存活期”(“Prolongation of Murine Islet Allograft Survival by Pretreatment of Isletswith Antibody Directly to Ia Determinants”)，美國(guó)科學(xué)院院報(bào)(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)，785156(1981))，或用針對(duì)MHC的抗體免疫復(fù)合物處理供體組織(Shizure.J.A等，“用抗Ia免疫毒素抑制大鼠混合淋巴細(xì)胞泛反應(yīng)性胰島培養(yǎng)物”(“Inhibitionof Rat Mixed Lymphocyte Pancreatic Islet Culture with Anti-Ia Immunotoxin”)，移植(Transplantation)，42660(1986))。利用上述方法獲得的結(jié)果是不恒定的。所以，本領(lǐng)域中需要一種在移植手術(shù)中延長(zhǎng)移植物存活期的方法，它盡可能降低毒性以及使用大劑量免疫抑制劑造成的其它不良作用。
本發(fā)明使用的選擇性破壞APC細(xì)胞的技術(shù)涉及令供體組織與光敏劑接觸，再光照，然后移植。早先，類似的光動(dòng)力方法主要用于破壞例如腫瘤組織等組織，動(dòng)脈粥樣硬化斑，表皮疾病和血液中不需要的病原體(Levy等，1994年2月1日的美國(guó)專利5,283,255；1989年11月28日的美國(guó)專利4,883,790；1990年4月24日的美國(guó)專利4,920,143；1992年3月10日的美國(guó)專利5,095,030和1992年12月15日的美國(guó)專利5,171,749，以上專利的內(nèi)容均在此引用參考)。同時(shí)參見(jiàn)，Dougherty等，1990年6月12日的美國(guó)專利4,932,934；1989年12月26日的美國(guó)專利4,889,129；1991年7月2日的美國(guó)專利5,028,621；1989年12月26日的美國(guó)專利4,889,129；1989年9月12日的美國(guó)專利4,886,168；1992年9月8日的美國(guó)專利5,145,863；1992年9月8日的美國(guó)專利5,145,863和1987年3月10日的美國(guó)專利4,649,151；，以上專利的內(nèi)容均在此引用參考。
例如，Dougherty等的美國(guó)專利4,886,168公開(kāi)了一種商品名為“Photofrin II”的組合物，它是通過(guò)回收血卟啉衍生物中的高聚集分子量部分制得的。作為另一個(gè)具體實(shí)例，Levy等的美國(guó)專利4,883,790公開(kāi)了將名為“單羥基苯并卟啉”的一組相關(guān)化合物用于類似的目的。
此外，許多具有類似結(jié)構(gòu)的光敏劑的使用也已有說(shuō)明。例如參見(jiàn)，(1-羥乙基)次卟啉的衍生物，疏水血卟啉醚和由甲基脫鎂葉綠甲酯一酸制得的化合物(Pandey等1991年3月26日的美國(guó)專利5,002,962)；脫鎂葉綠甲酯一酸軛合物((Pandey等的美國(guó)專利5,314,905)；細(xì)菌葉綠素-a衍生物(Doutherty的美國(guó)專利5,171,741和5,173,504)；單乙烯基醚和雙乙烯基醚交聯(lián)二聚物(Ward的美國(guó)專利4,961,920)；苯并卟啉衍生物(Allison等的美國(guó)專利5,214,036)；二苯并卟啉化合物(Dolphin等的美國(guó)專利5,308,606和5,149,708)；所謂“綠”卟啉，例如單苯卟啉衍生物(Jamieson等的美國(guó)專利5,087,636)；含有環(huán)外雙鍵的卟啉化合物(Chand等的美國(guó)專利5,064,952)；和porfimer sodium組合物(Clauss等的美國(guó)專利5,244,914)。上述專利的公開(kāi)內(nèi)容均在此引用參考。通常，在第一近似法中，上述藥物在光動(dòng)力治療中的使用被認(rèn)為是可以相互替代的。
雖然光動(dòng)力治療主要涉及對(duì)腫瘤細(xì)胞的治療，但也已經(jīng)提出還有其它應(yīng)用。例如，這些光敏藥物可以用在消除動(dòng)脈粥樣硬化斑的治療方案中，可以用于處理血液及其它體液以破壞感染性生物。但是，光動(dòng)力治療還未曾被用于消除供體同種移植組織中的過(guò)客白細(xì)胞。
本發(fā)明的特殊優(yōu)點(diǎn)之一在于，不同于給生物體使用光敏藥物的治療方法，供體組織可以在實(shí)際移植之前在體外接受最為合適的處理。由此，基本消除了有關(guān)確保例如對(duì)生物體內(nèi)與靶細(xì)胞締合的軛合物的適當(dāng)光照水平的問(wèn)題。
而且，本發(fā)明方法使得移植物在合適的宿主中具有免疫穩(wěn)定性，具有生物功能，而且可以在移植前進(jìn)行保存。所以，本發(fā)明使得建立一個(gè)用于短期保存的光動(dòng)力處理過(guò)的移植物庫(kù)成為可能。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種盡可能降低動(dòng)物受試者中移植排斥作用的方法。在移植前，含有抗原提呈細(xì)胞(APC)的供體組織與某種光敏劑接觸，并接受光敏劑吸收波長(zhǎng)的光照，光照時(shí)間足以耗盡APC。這一處理并不殺死角質(zhì)化細(xì)胞但可能改變其I類和/或II類抗原的表達(dá)以及其分泌的細(xì)胞因子，由此降低了皮膚本身的免疫原性。
在一種實(shí)施方式中，光敏劑是軛合物形式，其中包含加強(qiáng)光敏劑與靶APC之間相互作用的靶特異性組份。用光敏劑吸收的適當(dāng)波長(zhǎng)照射移植物時(shí)，光敏藥物介導(dǎo)APC的破壞。


圖1顯示本發(fā)明中特別用作光敏劑的BPD化合物的結(jié)構(gòu)。
本發(fā)明的實(shí)施方式根據(jù)本發(fā)明，供體組織在移植前與光敏劑接觸?！肮w組織”包括來(lái)自供體而不是受體的含有APC的任意類型的可移植組織。本發(fā)明使用的供體組織可以是許多組織中的任意一種，例如軟組織如新生兒的羊膜，骨髓，造血前體細(xì)胞、膠原蛋白和刺激軟骨生長(zhǎng)的骨蛋白；器官如皮膚，心臟，肝，脾，胰，甲狀腺葉、肺、腎、管狀器官(例如腸道，血管，或食道)；以及心瓣膜之類的器官部分和胰島細(xì)胞或肝細(xì)胞之類的分離細(xì)胞或分離細(xì)胞簇。
管狀器官可用于置換損傷的食道，血管或膽管。皮膚移植物不僅用于燒傷，也可用作受損腸道的修復(fù)或閉合某些缺陷，例如膈疝。在特別好的實(shí)施方式中，供體組織是皮膚組織或胰島細(xì)胞。
“移植物”在此指用于移植到受體內(nèi)的來(lái)自供體的生物材料。“移植”及其相關(guān)的不同說(shuō)法指將移植物植入受體內(nèi)，不論移植是同種同源(供體與受體的基因相同)、同種異源(供體和受體是不同基因的生物，但屬于同一種)或異種(供體和受體是不同種的)的。所以，在一個(gè)典型方案中，宿主是人，移植物是來(lái)自具有相同或不同基因起源的人的同基因移植物。在另一個(gè)方案中，移植物來(lái)自與受體不同的種，包括種系相差較遠(yuǎn)的動(dòng)物，例如將狒狒的心臟移植到人宿主中。
供體組織可取自各種來(lái)源，不論是來(lái)自尸體或活的供體。合適供體的實(shí)例包括實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物之類的動(dòng)物活體，例如狗、錨、大鼠、小鼠、沙土鼠、天竺鼠、母牛、靈長(zhǎng)目動(dòng)物或人。較好的供體是包括人在內(nèi)的哺乳動(dòng)物。
人供體最好是有血緣關(guān)系的自愿供體，體格檢查正常，具有相同的ABO主血型，因?yàn)榭缭街餮驼系K會(huì)影響同種移植物的存活。但是，例如將O型供體的腎臟移植給A、B或AB型的受體也是可能的。
“同種移植物”指起源于或衍生自與受體同種的供體的細(xì)胞或組織。較好的是，供體與受體同種。
“受體”在此指任意相容的移植宿主?！跋嗳荨敝杆拗骺梢越邮芄w的移植物。潛在可用的受體實(shí)例包括動(dòng)物，較好的是哺乳動(dòng)物，例如牲畜如馬、母牛或羊；家養(yǎng)寵物如狗或錨；實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物如小鼠、大鼠、沙土鼠或天竺鼠；或靈長(zhǎng)目動(dòng)物，如人。最好的是以人為受體。如果移植物的供體和受體都是人，它們最好是HLA II類抗原相互匹配的，由此提高組織相容性。
光敏劑通常，適用于傳統(tǒng)光動(dòng)力治療的大量化合物中任意一種都適用于本發(fā)明。正如本領(lǐng)域一般技術(shù)人員眾所周知的，已知光敏劑中主要的一類是卟啉相關(guān)化合物。正如前文部分詳細(xì)說(shuō)明中所述，這些藥物包括血卟啉衍生物；血卟啉衍生物中的高分子量組份，商品名為PhotofinII光敏組合物，及其中的有效組份；各種合成的卟啉衍生物，例如單苯并卟啉，又稱苯并卟啉衍生物或BPD；綠卟啉；以及許多其它多環(huán)化合物，它們被認(rèn)為能在照射時(shí)產(chǎn)生單態(tài)氧而引起組織損傷。在前文所述的專利和在此引用的公開(kāi)文獻(xiàn)中已全面地說(shuō)明了制備合適的光敏劑的方法。較好的是以BPD為光敏劑。
原則上，任何光敏劑的關(guān)鍵特征在于用光敏劑可吸收波長(zhǎng)的光照射時(shí)，其在所在細(xì)胞上表現(xiàn)細(xì)胞毒作用的自然傾向性。雖然，在很多例子中，細(xì)胞毒被認(rèn)為是因?yàn)樵谡丈鋾r(shí)產(chǎn)生了單態(tài)氧，但確切的作用模式對(duì)本發(fā)明而言并不重要。
正如前述Dougherty等的專利中較為詳細(xì)的說(shuō)明，有效光敏劑典型性地有許多其它關(guān)聯(lián)特性。一般光敏劑其對(duì)實(shí)施本發(fā)明來(lái)說(shuō)特別重要的特性包括，在沒(méi)有光化學(xué)作用時(shí)，它對(duì)細(xì)胞相對(duì)地沒(méi)有毒性，以及在沒(méi)有特定細(xì)胞與光敏劑之間的靶特異性反應(yīng)時(shí)，它可以從組織中方便地被清除。
本發(fā)明的光敏劑宜具有350nm至1200nm波長(zhǎng)之間的吸收光譜，該光譜可根據(jù)要求的透射度利用已知方法進(jìn)行調(diào)整，約400至900，最好是約600至800。
本發(fā)明光敏劑的劑量確定方式參照較好的臨床實(shí)踐，兼顧了移植和待治療疾病的特性、供體的種類、受體個(gè)體的治療情況、供體組織或受體機(jī)體中是否有其它藥物存在，以及醫(yī)生所知的其它因素。用于與移植物接觸的光敏劑治療有效量，即能夠有效降低移植物的免疫原性，是使其與受體相容而不被排斥的量。此目的的一般有效量在約0.1至約10μg/ml之間，較好的是約0.1至約2.0μg/ml之間，最好的是約0.25至約1.0μg/ml之間。
光敏劑可以與一種或多種免疫抑制劑混合以加強(qiáng)對(duì)移植物的免疫抑制作用。這些其它藥物的有效量取決于制劑中光敏劑的含量、移植的類型、移植的起因、藥物輸送位置、給藥方式、給藥療程、或前述其它因素，以及醫(yī)生已知的其它因素。
通常，在環(huán)境溫度及合適的pH下，具有要求純度的光敏劑與一種或多種經(jīng)生理學(xué)認(rèn)可的載體，即在所用的劑量和濃度對(duì)受體無(wú)毒的載體混合，由此配制光敏劑。制劑的pH主要取決于具體的用途和光敏劑濃度，但適宜范圍一般均為約3至約8。
較好地，將光敏劑保持于中性pH(例如約6.5至約7.5)，以防止出現(xiàn)于接近生理pH值時(shí)它與所在容器的粘附，由此確保光敏劑的活化。所以，含有pH6.5的平衡鹽緩沖液，但不含胎牛血清(FBS)的電解質(zhì)溶液制劑是理想的實(shí)施方式。去除FBS是因?yàn)樗袝?huì)激化同種移植物反應(yīng)的抗原性組份。如果光敏劑與被處理移植物所在的容器粘附，可以加入一定量合適的非抗原性組份，例如人血清白蛋白，該劑量不會(huì)干擾光敏劑向被處理移植物的擴(kuò)散及與之粘附。
如果光敏劑制劑是外用的，例如，如果是在移植前涂在皮膚移植物上，最好使用凝膠之類的粘性溶液，而不是非粘性溶液。凝膠可如此制備，例如將光敏劑溶液與膠凝劑混合，膠粘劑如多糖，最好是水溶性多糖，如透明質(zhì)酸、淀粉和甲基纖維素、羥乙基纖維素和羧甲基纖維素之類的纖維素衍生物。凝膠制劑中有多糖存在時(shí)，其含量通常為凝膠重量的約1-90％，1-20％更好。此用途的其它合適多糖的實(shí)例，以及多糖溶解度的測(cè)定可參見(jiàn)1988年5月11日的EP267,015，其內(nèi)容在此引用參考。
如果被處理的移植物要做任意時(shí)間的保存，光敏劑最好配制在或加入到全氟化物乳液(作為血液的替代物)中以使高濃度的氧能夠到達(dá)移植物。這樣的乳液包含用表面活性劑乳化在水中的全氟萘烷和/或全氟丙胺。選擇合適的全氟化物，使其對(duì)受體的毒性最小。
合適的表面活性劑包括poloxamer表面活性劑，這代表了一系列氧乙烯和氧丙烯的嵌段共聚物分子，它們單獨(dú)存在或與卵磷脂之類的磷脂混合。另一個(gè)向GreenGross購(gòu)得的乳劑實(shí)例是Fluosol-DA20％，其中含有用poloxamer表面活性劑Pluronic F-68乳化的全氟萘烷和全氟丙胺。在Bollands等，藥物藥理學(xué)雜志(J.Pharm.Pharmacol.)，39，1021-1024(1987)中對(duì)全氟化物乳劑及其對(duì)哺乳動(dòng)物的作用有更詳細(xì)的說(shuō)明，其內(nèi)容在此引用參考。
用于治療性給藥的光敏劑制劑最好是無(wú)菌的。可以通過(guò)用(0.2微米)的膜過(guò)濾來(lái)方便地進(jìn)行滅菌。一經(jīng)配制和滅菌后，光敏劑可能對(duì)氧化變性不穩(wěn)定。但是，例如，含有BPD的凍干制劑是適于保存的。
尋靶系統(tǒng)將光敏劑與靶特異性制劑結(jié)合加強(qiáng)了這些光敏劑對(duì)供體引發(fā)移植物抗宿主反應(yīng)能力的破壞。具體地說(shuō)，光敏劑可以與以下物質(zhì)結(jié)合(1)直接且特異性地以供體組織中抗原提呈細(xì)胞(APC)為目標(biāo)的部分；(2)特異性地以標(biāo)記APC供軛合物尋靶的中間體為目標(biāo)的部分；(3)針對(duì)移植物抗宿主情況的T細(xì)胞。在各種情況中，一旦供體組織通過(guò)與軛合物的相互作用而改性后，就可用前文所述的方法對(duì)其進(jìn)行照射，以基本耗盡供體組織中的APC集群。
本發(fā)明提供了用于定向?qū)ふ彝N移植供體組織中APC的特異性含光敏劑的軛合物，以及用一般光動(dòng)力療法(PDT)破壞供體組織中APC的方法。用于該方法的一種制劑主要包含光敏劑和將“引導(dǎo)劑”與光敏劑連接的系統(tǒng)。另一種制劑包含APC尋靶系統(tǒng)和與APC尋靶系統(tǒng)的引導(dǎo)劑結(jié)合的光敏劑。對(duì)于兩種制劑，向APC輸送光敏藥物的最終目的是相同的。
可以利用多種不同的靶特異性試劑來(lái)接近作為目標(biāo)的APC，其中包括對(duì)MHC糖蛋白產(chǎn)物具有免疫特異性的部分和在這些細(xì)胞上有受體的淋巴因子。典型的是，對(duì)于與MHC糖蛋白的反應(yīng)來(lái)說(shuō)，可以使用由這些糖蛋白引發(fā)產(chǎn)生的多克隆抗體或單克隆抗體。
以常規(guī)方法制備多克隆抗體，例如給合適的動(dòng)物注射所需抗體的抗原，評(píng)價(jià)抗該抗原的血清中抗體水平，在效價(jià)較高時(shí)制備抗血清。單克隆抗體也可以用常規(guī)方法來(lái)制備，例如Koehler和Milstein的方法，自然(Nature)，第256卷，pp.495-497(1975)，“分泌預(yù)定特異性抗體的融合細(xì)胞的連續(xù)培養(yǎng)”(“Continuous Cultureof Fused Cells Secreting Antibody of Predefined Specificity”)和歐洲免疫雜志(European Jounal of Immunol)，第6卷，pp.511-519(1976)，“通過(guò)細(xì)胞融合誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性抗體的組織培養(yǎng)物和腫瘤系”(“Derivation of Specific Antibody-ProducingTissue Culture and Tumor Lines by Cell Fusion”)，其中利用例如取自免疫過(guò)的動(dòng)物的外周血淋巴細(xì)胞或脾細(xì)胞，通過(guò)病毒感染、與骨髓瘤融合，或其它傳統(tǒng)方法使細(xì)胞無(wú)限增殖化，利用分離的集落就所需抗體的生成進(jìn)行篩選。
除抗體之外，也可以使用合適的免疫活性片段，例如Fab、Fab’，或F(ab)2片段。適用于形成尋靶機(jī)制的許多抗體在本領(lǐng)域中已經(jīng)可以得到。例如，E.L.Morgan等在Scand.J.Immunol.第10卷，pp.395-402(1970)，“放射性標(biāo)記的人IgG與Fc片段與鼠脾細(xì)胞結(jié)合作用的比較”(“Comparison of the Binding ofRadiolabelled Human IgG and Fc Fragments to Murine Spleen Cells”)和Hans P.Kocher等在免疫學(xué)雜志(The Journal of Immunol)，第122卷，第4期，pp.1190-1195(1979)，“IgD和IgE1的CH1區(qū)和VL區(qū)的胰蛋白酶降解”(“TrypticDegradation of the CH1 and VL Regions of IgD and IgE1”)中說(shuō)明了使用免疫活性片段代替完全抗體。
除免疫活性之外，還可以利用以APC細(xì)胞表面的受體為目標(biāo)的受體的配體，例如以受體與配體間的結(jié)構(gòu)或電荷互補(bǔ)性，來(lái)進(jìn)行尋靶。本文中，“受體的配體”指任何特異性地與APC細(xì)胞表面受體結(jié)合的天然或合成的物質(zhì)。這些受體的配體包括淋巴因子例如IL2。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施例，光敏劑與針對(duì)某中間體的靶特異性試劑結(jié)合，該中間體又是對(duì)APC特異性的。例如，以提呈Ia的大鼠細(xì)胞為例，可將小鼠的抗大鼠Ia抗體用作中間體。此時(shí)，光敏劑與抗小鼠抗體偶合而成的軛合物以用小鼠抗體標(biāo)記的細(xì)胞為目標(biāo)，其方式與含有抗大鼠Ia抗體的軛合物的尋靶方式完全相同。
結(jié)合方法尋靶系統(tǒng)可以利用本領(lǐng)域眾所周知的和前文Levy等的專利中舉例說(shuō)明的常規(guī)方法和接頭技術(shù)直接與光敏劑結(jié)合。對(duì)于Ig之類的蛋白質(zhì)和其它多肽，可利用例如脫水劑如碳化二亞胺，在光敏劑和靶特異性組份中間形成一個(gè)直接共價(jià)鍵。當(dāng)然，也可以通過(guò)使用能與兩者的活性組份共價(jià)結(jié)合的雙官能接頭化合物來(lái)連接軛合物的活性部分。
本領(lǐng)域已知的、適用于結(jié)合兩種化合物部分的有效技術(shù)都屬于本發(fā)明的范圍之內(nèi)。應(yīng)將接頭部分廣義地理解為一個(gè)共價(jià)鍵，或本領(lǐng)域中可以得到的接頭部分或可以利用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)由它們衍生而得到的。
或者，可以通過(guò)添加特異性試劑來(lái)介導(dǎo)尋靶作用。例如，如下文所述，可將針對(duì)APC特異性抗體的第二抗體直接與光敏劑連接，可將MHC糖蛋白尋靶劑用作免疫軛合物與靶細(xì)胞之間的橋梁。
治療方案根據(jù)本發(fā)明，APC的消除或功能弱化，或其它皮膚細(xì)胞例如角質(zhì)化細(xì)胞的調(diào)節(jié)，是以一種相對(duì)直接的方式引發(fā)的，即將供體組織直接與光敏劑接觸，光敏劑可以是軛合物形式，接觸的條件能夠在光敏劑(或含光敏劑的軛合物的靶特異性組份)與靶APC之間形成牢固締合，同時(shí)將供體組織中的光敏劑濃度降至最低。
該接觸適當(dāng)包括將組合物涂在移植物的一側(cè)或多側(cè)表面，或用本發(fā)明的光敏劑培養(yǎng)或灌注器官移植物。處理一般進(jìn)行至少1分鐘，約1分鐘至72小時(shí)較好，約2分鐘至約24小時(shí)更好。接觸時(shí)間取決于以下因素制劑中光敏劑的濃度，待處理的移植物，制劑的具體類型。可利用任意合適的方法進(jìn)行灌注。例如，可利用配有壓力調(diào)節(jié)器、提供恒定壓力或灌流并在泵和器官之間呈溢流狀態(tài)的設(shè)備來(lái)灌注器官?；蛘?，可將器官封閉在高壓艙中，利用泵將灌注液從儲(chǔ)器中抽出并送至艙中，可以將使用后的灌注液通過(guò)閥門(mén)返回至儲(chǔ)器中。
對(duì)于皮膚移植物，可將制劑涂在或噴灑在移植皮膚的下表面，由此在供體皮膚的下表面和受體組織之間形成一層光敏劑。但較好的是將整個(gè)皮膚移植物浸漬在光敏劑組合物中。
接觸步驟可以在較寬的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行，只需避免高得足以使移植物變性或產(chǎn)生其它不良影響的溫度和低得足以降低細(xì)胞對(duì)光敏劑吸收的溫度。較好的是，接觸步驟在約5℃至40℃進(jìn)行，約15℃至37℃更好，最好是在環(huán)境溫度下進(jìn)行。
在使光敏劑適當(dāng)分布以確保其與靶APC適當(dāng)締合后，對(duì)如此處理過(guò)的供體組織進(jìn)行光照，所用的光包含光敏劑的吸收波長(zhǎng)，由此激活光敏劑的細(xì)胞毒性。當(dāng)然，這樣的光照完全是光動(dòng)力療法中的常規(guī)操作。在例如前述Dougherty等的專利中說(shuō)明了用于此目的的典型方法和設(shè)備。
移植物在與光敏劑接觸并接受光照后，可保存長(zhǎng)至約24-48小時(shí)。但還是以立即用于移植過(guò)程為佳。如前所述，可在制劑中使用血液替代物(例如全氟化物乳液)，或如1985年4月9日公開(kāi)的JP60061501中所述，用含有冷的等滲劑和抗凝劑的光敏劑制劑灌注移植物，然后用甘油灌注，如此可在冷凍移植物時(shí)使細(xì)胞損傷最小，由此來(lái)延長(zhǎng)保存期。此外，可在將器官降溫至凍點(diǎn)時(shí)使用不同的包括制劑的液體來(lái)保存移植物，以此半永久性地保存器官而不發(fā)生細(xì)胞壞死。
在移植前，最好通過(guò)例如將其浸在生理鹽水中，或利用適用于此目的的其它方法洗盡移植物中的光敏劑組合物。而且，在移植前，可用PDT處理過(guò)的外周血單核細(xì)胞對(duì)受體進(jìn)行一次或多次供體特異性輸血，以幫助移植物的存活。另一種方法是在移植手術(shù)前對(duì)受體進(jìn)行全淋巴系統(tǒng)照射?？梢赃M(jìn)行其它任何有利于特定移植受體的移植前處理方法，將其作為本發(fā)明方法的組成部分。
有時(shí)，要求通過(guò)例如使用合適的氨基酸或聚合物，或連接以生理學(xué)認(rèn)可的帶電官能團(tuán)來(lái)改性移植物表面以提供正電或負(fù)電基團(tuán)。例如，帶負(fù)電的表面適宜于血管以減少血液凝結(jié)。在有些環(huán)境中還要求為表面提供以表面疏水性或親水性基團(tuán)，例如苯丙氨酸、絲氨酸或賴氨酸。對(duì)這類表面改性作用特別有效的一種免疫抑制劑是戊二醛。
移植過(guò)程本身取決于具體的被治療的疾病，病人的狀態(tài)等條件。在任何具體情況中醫(yī)護(hù)人員都將知道采取合適的方法。也可以在術(shù)后關(guān)鍵期(前3個(gè)月)利用各種合適的方法例如放射性核素靜脈血管成像，對(duì)移植進(jìn)行系統(tǒng)的監(jiān)測(cè)。移植后，經(jīng)常使用合適的免疫抑制劑進(jìn)行免疫抑制療法來(lái)確保移植物的存活。
作為本發(fā)明方法的補(bǔ)充或聯(lián)用治療，可同時(shí)系統(tǒng)性地對(duì)供體、體外供體組織或受體，局部或全身性地使用相同劑量或減量的免疫抑制劑?！懊庖咭种苿痹诖酥敢种苹蛘诒我浦参镆浦菜拗鞯拿庖呦到y(tǒng)的物質(zhì)，包括抑制細(xì)胞因子產(chǎn)生、負(fù)調(diào)節(jié)或抑制自身抗原表達(dá)，或遮蔽HMC抗原的物質(zhì)。
這類藥物的實(shí)例包括2-氨基-6-芳基-5-取代的嘧啶、硫唑嘌呤或環(huán)磷酰胺、溴隱亭、戊二醛、HMC抗原的抗獨(dú)特型抗體、環(huán)胞多肽A、一種或多種甾醇，較好的是皮質(zhì)類甾醇或糖皮質(zhì)類甾醇，例如潑尼松，甲潑尼龍和地塞米松；抗γ干擾素抗體；抗α腫瘤壞死因子抗體；抗β腫瘤壞死因子抗體；抗白細(xì)胞介素-2抗體；抗細(xì)胞因子受體抗體，例如抗IL-2受體抗體；異源抗淋巴細(xì)胞球蛋白；泛T抗體，最好是OKT-3單克隆抗體；CD4的抗體；鏈激酶、鏈道酶；宿主的RNA或DNA。
考慮上述情況而確定的有效量是防止發(fā)生受體對(duì)移植物排斥的免疫反應(yīng)的最小量，但盡可能必須獲得較長(zhǎng)的移植物存活期。這樣的量最好低于對(duì)受體有毒或會(huì)顯著增加受體易感染性的量。本發(fā)明要求的免疫抑制劑量一般低于未預(yù)處理過(guò)的移植物的通常需要量，而且取決于移植時(shí)的各種情況和使用的免疫抑制劑的類型。
作為具體實(shí)例，當(dāng)免疫抑制劑環(huán)胞多肽A的總治療有效量進(jìn)行非腸道給藥時(shí)的單位劑量與目前常規(guī)免疫抑制治療中使用的約5至15mg/kg/天環(huán)胞多肽A比較，在約每天0.1至20mg/kg病人體重之間。至于腎移植，未對(duì)移植物進(jìn)行光動(dòng)力預(yù)處理時(shí)的常用方法是在短時(shí)間內(nèi)使用大劑量糖皮質(zhì)類甾醇，例如每天使用數(shù)克甲潑尼龍，持續(xù)3至5天，然后使用20至100mg潑尼松。進(jìn)行了本發(fā)明的預(yù)處理后，使用劑量將顯著降低。
如前所述，這些免疫抑制劑的建議用量取決于大量治療方面的考慮。選擇合適劑量和給藥程序的關(guān)鍵因素是欲獲得的效果，即移植物的長(zhǎng)存活期。例如，在治療可能由抗體介導(dǎo)的移植物損傷引起的過(guò)激移植物排斥反應(yīng)的早期，或在以移植物功能突然下降為特征的后期，可使用較高的劑量。
使用某種免疫抑制劑時(shí)，可以利用各種合適的方式給藥，其中包括非腸道給藥、需要局部免疫抑制治療時(shí)的損害部位內(nèi)使用。非腸道內(nèi)輸注包括肌內(nèi)注射、靜脈注射、關(guān)節(jié)內(nèi)注射，腹膜內(nèi)注射，或皮下注射。此外，使用某種免疫抑制劑時(shí)，它必須適合通過(guò)遞減劑量的脈沖輸注給藥，或連續(xù)輸注。
以下實(shí)施例是對(duì)本發(fā)明的說(shuō)明而非限制。
實(shí)施例1BPD-Ra-MIq軛合物的制備在暗環(huán)境中，將圖1所示的光敏劑BPD-MA在磷酸鹽緩沖液中稀釋成1mg/ml至200pg/ml，然后與已知量的大鼠抗小鼠Ig(RaMIg)混合，該抗體由Cedar Lane實(shí)驗(yàn)室提供，或通過(guò)用小鼠的免疫球蛋白免疫大鼠，然后用免疫吸附柱色譜純化來(lái)制備。混合物在室溫下在暗環(huán)境中孵育1小時(shí)，用可透過(guò)分子量低于12至14kd的分子的膜，用4℃的PBS 3升通宵透析形成的軛合物。利用標(biāo)記過(guò)的BPD-MA的模型研究顯示，滯留軛合物的BPD∶Ab之比為10-20。然后將透析截留物冷凍干燥保存在暗環(huán)境中。
實(shí)施例2用軛合物處理同種移植物如下從大鼠中分離供體胰島組織雄性SD大鼠(200-250g)經(jīng)腹膜內(nèi)注射烏拉坦(100mg/kg)進(jìn)行麻醉，通過(guò)中線剖腹術(shù)，利用雙側(cè)氣胸誘導(dǎo)心呼吸停止。在主膽管的近端插入套管，封閉其進(jìn)入十二指腸位置的遠(yuǎn)端。用冷的(4℃)0.42mg(650U)/ml膠原酶溶液(XI型，SigmaChemicals)退行性擴(kuò)張胰腺。原位膠原酶擴(kuò)張后，進(jìn)行全胰腺切除。
腺體在37℃的水浴中消化22分鐘。通過(guò)無(wú)菌硅化移液管研磨分散消化后的腺體。粗組織漿狀物經(jīng)200微米的過(guò)濾網(wǎng)過(guò)濾去除未消化的膽管、血管和淋巴結(jié)，然后進(jìn)行比重分別為1.065和1.031的兩個(gè)單層構(gòu)成的不連續(xù)葡聚糖梯度離心。從單層界面吸取密度較低的胰島組織，洗滌，然后通過(guò)在解剖顯微鏡下手工挑選來(lái)進(jìn)一步純化。使用此技術(shù)，從每個(gè)胰腺可收獲300至400個(gè)功能及形態(tài)都完好的胰島。
胰島在補(bǔ)充了25％牛血清、15mM HEPES緩沖液和1％strepfungizone的HamF-12培養(yǎng)基中體外培養(yǎng)1天。培養(yǎng)后的胰島先用0.2mg/ml購(gòu)自SeraLab的小鼠抗大鼠Ia單克隆抗體(OX-6)在/C培養(yǎng)數(shù)小時(shí)。OX-6對(duì)II類MHC產(chǎn)物具有免疫特異性。
將OX-6處理過(guò)的胰島分成幾份，分別與以下物質(zhì)在20℃避光培養(yǎng)2小時(shí)(1)BPD∶lAb之比為6.5的Ra-MIgG-BPD軛合物；(2)BPD∶lAb之比為20的上述軛合物；(3)BPD∶lAb之比為6.5的BPD與非相關(guān)抗體GA-7sIgG軛合物；(4)單獨(dú)的BPD；和(5)單獨(dú)的培養(yǎng)基。然后，培養(yǎng)混合物接受能量為10J/cm2，波長(zhǎng)為400至800nm的光照。然后對(duì)照射后的培養(yǎng)物進(jìn)行組織學(xué)檢測(cè)，并檢測(cè)其中APC的消耗。
實(shí)施例3供體組織的鑒定在組織學(xué)研究中，將用BPD∶lAb之比為6.5的軛合物處理過(guò)的75至100個(gè)胰島移植到作為受體的同基因SD大鼠和同種異基因WF大鼠的腎上腺下方。在同基因和同種異基因的兩種受體中，移植均獲得成功。具體地說(shuō)，在同基因和同種異基因移植中，觀察到了伴有淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)的移植物完全取代，但沒(méi)有可鑒定的內(nèi)分泌組織。
在APC消耗研究中，胰島先用OX-6抗體免疫染色。如此處理后的細(xì)胞再用FITC標(biāo)記的山羊抗小鼠Ig(Jackson實(shí)驗(yàn)室)二次染色，然后進(jìn)行熒光顯微鏡檢。在用軛合物處理過(guò)的制劑中，沒(méi)有看見(jiàn)可鑒定的MHC II類細(xì)胞。但是，在對(duì)照中(非相關(guān)抗體軛合物、單獨(dú)的BPD和單獨(dú)的培養(yǎng)基)，由于FITC標(biāo)記的第二抗體標(biāo)記了APC并發(fā)出綠色的熒光，熒光顯微鏡檢由此檢測(cè)出這些細(xì)胞的存在。
皮膚同種移植物排斥的防止為了確定代表最小排斥作用的基線，按照標(biāo)準(zhǔn)方法(Billingham等，“哺乳動(dòng)物中游離皮膚移植技術(shù)”(“The technique of free Skin grafting in Mammals”)，實(shí)驗(yàn)生物學(xué)雜志(J.Exp.Biol.)，28383-99(1951))，如下對(duì)9個(gè)BALB/c小鼠進(jìn)行同基因移植(供體動(dòng)物與受體動(dòng)物相同)將移植鼠軀干皮膚剔須脫毛。然后腹膜內(nèi)注射20T1鹽酸氯胺酮，10T1賽拉嗪和70T1 PBS混合物麻醉小鼠，然后仔細(xì)地切取完整厚度的皮膚(1cm×1cm)，留下適當(dāng)?shù)囊浦泊?，注意保持肉膜完整?br> 然后，將自身皮膚移植物重新放置在移植位置，并通過(guò)在移植物與移植床界面滴以4滴Vetbond組織粘合劑固定到位。用石油凝膠涂覆的紗布海綿向下按壓移植物，然后用Vetrap繃帶將移植物和海綿原位固定，繞軀干包扎，形成一個(gè)“軀體?！?。
就長(zhǎng)期存活即超過(guò)120天同基因移植物獲得成功的鼠超過(guò)90％。如果移植物壞死達(dá)至少80％，則認(rèn)為發(fā)生完全移植物排斥。移植物存活期表示為平均存活期±標(biāo)準(zhǔn)偏差。
使用相同的上述方法，同時(shí)進(jìn)行了C57BL/6小鼠(供體，H-2b)和BALB/c小鼠(受體，H-2d)之間的同種異基因皮膚移植作為對(duì)照，但取自供體鼠的皮膚移植物被用到不同的受體鼠的移植床。簡(jiǎn)而言之，將供體鼠的軀干皮膚剔須脫毛，然后獲取完整的皮膚移植物(1cm×1cm)。受體鼠剔毛后腹膜內(nèi)注射20T1鹽酸氯胺酮，10T1賽拉嗪和70T1 PBS混合物進(jìn)行麻醉。仔細(xì)地切去軀干皮膚(1cm×1cm)，注意保持肉膜完整，如此制備受體的移植床。將移植物放到同種異基因的移植位置上，用Vetbond組織粘合劑，石油凝膠涂覆的紗布海綿和Vetrap繃帶原位固定成“軀體?！?。平均存活期為11.1天(標(biāo)準(zhǔn)偏差1.9)。
根據(jù)本發(fā)明的方法，移植在受體上的皮膚樣本先在體外與光敏劑BPD的1.0Tg/ml溶液接觸1小時(shí)。然后將皮膚在沒(méi)有胎牛血清(“FBS”)的電解質(zhì)溶液中懸浮30分鐘，并用發(fā)光二極管(“LED”)發(fā)出的紅光照射(在690±10nm處，10J/cm2)。光處理后，如上所述將光照后的皮膚移植給受體鼠。從移植后第8天起，監(jiān)測(cè)動(dòng)物的排斥反應(yīng)。同種移植物的存活期延長(zhǎng)至18.5天(標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.1)。
為了方便比較，將上述結(jié)果列于表1。
表1移植類型 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù) 平均存活期(標(biāo)準(zhǔn)偏差)同種同基因移植9 不確定同種異基因移植16 11.1天(1.9)用預(yù)處理過(guò)的供體皮6 18.5天(2.1)膚進(jìn)行的同種異基因移植以上結(jié)果顯示，對(duì)移植組織進(jìn)行光動(dòng)力處理的免疫調(diào)節(jié)作用顯著延長(zhǎng)了移植物的存活期。
改變光敏劑BPD的濃度(0.25至1.0Tg/ml)，根據(jù)本發(fā)明重復(fù)以上實(shí)驗(yàn)，將同種異基因移植與標(biāo)準(zhǔn)的、對(duì)照同種異基因移植相比較。結(jié)果歸納在表2中。
表2移植類型(實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù))光敏劑及光照劑量平均存活期(標(biāo)準(zhǔn)偏差)同種異基因移植對(duì)照(10)0 7.5天(0.84)用預(yù)處理過(guò)的供體皮膚進(jìn)行 1.0Tg/ml BPD，11.0天(0.0)的同種異基因移植(5) 10J/cm2LED用預(yù)處理過(guò)的供體皮膚進(jìn)行 0.5Tg/ml BPD，14.3天(1.5)的同種異基因移植(5) 10J/cm2LED單獨(dú)將光敏劑增至2倍似乎并不顯著延長(zhǎng)移植物的存活期，所以假設(shè)對(duì)移植組織進(jìn)行的光動(dòng)力處理的免疫調(diào)節(jié)作用可能依賴于對(duì)皮膚中細(xì)胞群的選擇性作用，而并不一定是由于已知的光動(dòng)力療法的細(xì)胞毒作用。
實(shí)施例5移植皮膚的組織學(xué)檢驗(yàn)為了檢驗(yàn)在引起存活期延長(zhǎng)的條件下用光動(dòng)力療法處理皮膚移植物的作用，如上所述獲取皮膚樣本并進(jìn)行處理，所不同的是使用不同的光敏劑濃度范圍，即0.25或0.50Tg/ml的BPD。部分組織單獨(dú)培養(yǎng)在沒(méi)有光敏劑的培養(yǎng)基中作為對(duì)照。全部組織樣本都培養(yǎng)24小時(shí)以上，然后取代表性的數(shù)量接受光照。光照為能量為10J/cm2的紅光。
然后將全部樣本放在福爾馬林中，進(jìn)行組織學(xué)檢驗(yàn)。單獨(dú)培養(yǎng)在電解質(zhì)溶液中的組織(對(duì)照樣本)或培養(yǎng)在0.50Tg/ml BPD中的樣本，沒(méi)有接受光照，表現(xiàn)為正常。但是，用0.25或0.50Tg/ml的BPD處理，并接著用紅光處理過(guò)的樣本表現(xiàn)出以下變化細(xì)胞核增大，核周液泡化，上皮細(xì)胞的嗜曙紅性下降，細(xì)胞質(zhì)體積增大，和上皮表面角質(zhì)化細(xì)胞間空隙增大。根據(jù)這些組織學(xué)發(fā)現(xiàn)假設(shè)，本發(fā)明的光動(dòng)力處理引起一定程度的細(xì)胞損傷而不是細(xì)胞死亡。這一預(yù)料之外的非細(xì)胞毒作用機(jī)制是尚未為人所知的。
顯然，對(duì)本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，可以對(duì)公開(kāi)的主題進(jìn)行修改和/或改變，均在后文本發(fā)明的權(quán)利要求范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.降低對(duì)含有抗原提呈細(xì)胞(APC)供體組織的同種移植物排斥作用的方法，包括a.將供體組織與光敏劑接觸以獲得改性供體組織；b.對(duì)所述的改性供體組織進(jìn)行所述光敏劑可吸收波長(zhǎng)的足夠時(shí)間光照，以消耗供體組織中的APC；和c.將所述的消耗了APC的供體組織移植到受體組織中。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中的供體組織是皮膚組織或胰島。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的光敏劑是BPD。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述光的至少部分波長(zhǎng)在電磁波譜的可見(jiàn)光部分。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述光敏劑是溶液形式的，濃度為0.25至1.0μg/ml。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的光照步驟b中，所述的改性供體組織被懸浮在電解質(zhì)溶液中。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述光照過(guò)程b中的光劑量約為10J/cm2。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述光敏劑的形式是包含靶特異性組份的軛合物。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中所述的靶特異性藥劑包含與APC特異性結(jié)合的藥劑。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中所述的靶特異性藥劑是抗體、抗體片段，或APC表面上受體的配體。
11.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中所述的靶特異性藥劑包含與特異性結(jié)合APC的標(biāo)記結(jié)合的藥劑。
12.具有降低的同種移植物排斥易感性的供體組織，它是根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法制備的。
13.組合物，其中包含含抗原提呈細(xì)胞(APC)的供體組織，該組織與含有光敏劑的軛合物混合。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的組合物，其中所述的軛合物還包含能夠定向于供體組織中APC的靶特異性藥劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及降低對(duì)同種移植物的排斥反應(yīng)的方法,這些同種移植物包含含有抗原提呈細(xì)胞(APC)的供體組織,該方法包括:a)在供體組織中加入光敏劑,制得改性供體組織;b)用光敏劑吸收波長(zhǎng)的光照射改性供體組織足夠長(zhǎng)的時(shí)間以消耗其中的APC;和c)將消耗了APC的供體組織移植到受體組織中。通過(guò)對(duì)供體組織進(jìn)行光動(dòng)力治療,移植物,尤其是同種皮膚移植物的存活期顯著延長(zhǎng)。光敏劑也可以是含有靶特異性基團(tuán)的軛合物的一部分。
文檔編號(hào)A61P37/06GK1192157SQ96191452
公開(kāi)日1998年9月2日 申請(qǐng)日期1996年1月12日 優(yōu)先權(quán)日1995年1月13日
發(fā)明者M·O·K·奧博奇, J·利維 申請(qǐng)人:夸德拉邏輯技術(shù)股份有限公司, 不列顛哥倫比亞省大學(xué)