專利名稱：：用于神經(jīng)變性疾病治療的苯甲酰胺類化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明的范圍本發(fā)明涉及苯甲酰胺類化合物、含有這些化合物的藥物組合物、它們的制備方法以及用來治療或預(yù)防神經(jīng)變性疾病。背景資料神經(jīng)變性疾病包括一系列嚴(yán)重衰弱疾病，如帕金森氏病，肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS，“LouGehrig氏病”)，多發(fā)性硬化，亨廷頓氏病，阿爾茨海默病，糖尿病型視網(wǎng)膜病，多重梗塞性癡呆，黃斑變性等等。這些疾病的特點(diǎn)是，隨著患病時(shí)間的推移，病情逐漸且無情地惡化。人們對(duì)于這類疾病的機(jī)理和病因已逐步所有了解，并且提出了各種各樣的治療方法。這類神經(jīng)變性疾病之一，帕金森氏病就是與腦中選擇性區(qū)域內(nèi)非正常的多巴胺耗盡有關(guān)。MarsdenC.D.，在綜述文章“ReviewArticle-Parkinson’sDisease”Lancet(April21，1990)948-952以及Calne.D.B.，在“TreatmentofParkinson’sDisease”NEJM(Sept.30，1993)3291021-1027中，均對(duì)帕金森氏病的認(rèn)識(shí)水平作了新的概括。正如這些綜述所指出的，多巴胺缺乏是帕金森氏病的關(guān)鍵特征，并且對(duì)于帕金森氏患者來說，多巴胺能的黑色紋狀體通道的破壞與多巴胺耗盡現(xiàn)象是并行的。在美國加州地區(qū)的SanJose，少數(shù)服用違禁藥品人群中出現(xiàn)的帕金森氏樣癥狀的迅速發(fā)展，與家庭合成藥物中痕量的毒性雜質(zhì)有關(guān)。在隨后的動(dòng)物模型(包括猴子)研究中發(fā)現(xiàn)，1-甲基-4-苯基-1，2，5，6-四氫吡啶(MPTP)是引起帕金森氏樣癥狀的原因，該物已被違禁藥物使用者發(fā)展利用，正如J.W.Langston等人在“ChronicParkinsonisminHumansDuetoaProductofMeperidine-AnalogSynthesis”Science(Feb.25，1983)219，979-980一文中所報(bào)道的。這些早期的發(fā)現(xiàn)及許多由此引發(fā)的研究促進(jìn)了可靠的帕金森氏病模型的發(fā)展，見于如下報(bào)道Heikkila，R.E.等“DopaminergicNeurotoxicityof1-methyl-4-phenyl-1，2，5，6-TetrabydropyridineinMice”Science(June29，1984)2241451-1453；Burns，R.S.等，“APrimateModelofParkinsonism...”Proc.Natl.Acad.SciUSA(1983)804546-4550；Singer，T.P.等，“BiochemicalEventsintheDevelopmentofParkinsonism…”J.Neurochem.(1987)1-8以及Gerlach，M.等，“MPTPMechanismsofNeurotoxicityandtheImplicationsforParkinson’sDisease”EuropeanJournalofPharmacology(1991)208273-286.這些參考文獻(xiàn)及其它所描述的研究有助于解釋動(dòng)物被給予MPTP后，是如何引起帕金森氏病的運(yùn)動(dòng)原缺乏特征的。這些資料清楚地表明MPTP是帕金森氏樣癥狀的主要原因，這些癥狀在一些服用違禁藥品的人群中有所發(fā)展，并且在其它直接給予MPTP的靈長類動(dòng)物和受試動(dòng)物中，也發(fā)現(xiàn)了相似的運(yùn)動(dòng)原缺乏癥狀。這些資料進(jìn)一步指出在受試對(duì)象中給予MPTP引起多巴胺濃度顯著降低。這些發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致了人們?nèi)ヌ剿鏖_發(fā)能有效治療多巴胺有關(guān)的神經(jīng)變性疾病(例如帕金森氏病)的藥物。在這些嘗試中，受試動(dòng)物被給予一定量的MPTP，足以使之產(chǎn)生嚴(yán)重的多巴胺水平降低。然后再給予受試化合物，觀察其能否阻止受試動(dòng)物體內(nèi)多巴胺的喪失。如果在一定程度上多巴胺水平保持住了，即可認(rèn)為該化合物可以有效地減緩或延遲神經(jīng)變性疾病，如帕金森氏病的進(jìn)程。另一個(gè)尋找能有效治療多巴胺相關(guān)的神經(jīng)變性疾病藥物的嘗試也已展開。在這項(xiàng)研究中，給受試動(dòng)物的紋狀體注射神經(jīng)毒物6-羥基多巴胺。6-羥基多巴胺具有多巴胺耗盡作用，作為此類疾病的模型被廣泛接受。然后給予受試化合物，觀察它們能否阻止或降低受試動(dòng)物體內(nèi)多巴胺的喪失。同樣，如果在一定程度上多巴胺水平保持住了，該化合物即可被認(rèn)為是一個(gè)有效藥劑。線粒體功能與許多神經(jīng)變性疾病如ALS，亨廷頓氏病，阿爾茨海墨病，小腦變性以及衰老本身有關(guān)(Beal，M.F.MitochondrialDystfunctionandQxidativeDamageinNeurodegenerativeDisease，R.G.LandesPublicationsAustin，TX，1995，Page53-61，73-99)。線粒體的損失機(jī)制是MPTP消耗了紋狀體內(nèi)多巴胺的濃度(Mizuno，Y.，Mori，H.，Kondo，T.“PotentialofNeuroprotectiveTherapyinParkinson’sDisease”CNSDrugs(1994)145-46)。因此能夠阻止由MPTP引起的線粒體功能障礙的藥物，也可以用來治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)的疾病，在這類疾病中線粒體功能障礙是根本原因。用于測定藥物治療其它神經(jīng)變性疾病效果的模型也可以獲得。例如，抗阿爾茨海默病化合物的效果可通過細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)獲得。在兩個(gè)這樣的實(shí)驗(yàn)中，化合物的作用效果是通過其對(duì)大鼠體內(nèi)胚胎期的海馬神經(jīng)元/星形細(xì)胞培養(yǎng)過程中由淀粉狀蛋白β(25-35)或谷氨酸誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞損失的阻礙程度來評(píng)價(jià)的。在另一個(gè)實(shí)驗(yàn)中，化合物的作用效果是通過其對(duì)淀粉狀蛋白β(1-40)β褶紙形成的干擾效果來評(píng)價(jià)的。具有這些作用的化合物可考慮作為治療阿爾茨海默病的候選物。其它已知的苯甲酰胺化合物主要是作為化學(xué)合成中間體，或在與本發(fā)明無關(guān)的領(lǐng)域中被使用。結(jié)構(gòu)稍加改變會(huì)帶來療效和毒性的很大變化。在我們的篩選中，絕大多數(shù)苯甲酰胺化合物是無活性的。然而，其它結(jié)構(gòu)上不同的苯甲酰胺類的生物活性有些報(bào)告，這些報(bào)告包括ElTayar等人，“神經(jīng)安定藥與大鼠紋狀體D-1和D-2多巴胺受體的相互作用定量結(jié)構(gòu)-親和性關(guān)系研究”Eur.J.Med.Chem.(1988)23173-182；Monkovic等人“在許多取代的苯甲酰胺中潛在的非多巴胺能胃腸道激酶藥物”Eur.J.Med.Chem.(1989)24；233-240；Banasik等人“聚(ADP-核糖)合成酶和單(ADP-核糖基)轉(zhuǎn)移酶的專一抑制劑”J.Biol.Chem.(1992)2671569-1575；Bishop等人“2，3-二甲氧基-5-(氟烷基)-取代的苯甲酰胺的合成及其作為CNS多巴胺D2受體的高親合配體的體外評(píng)估”，J.Med.Chem(1991)341612-1624；Hógberg等人“潛在的抗神經(jīng)藥物9-類取代的(R)-N-〔芐基-2-吡咯烷基)甲基〕苯甲酰胺的合成和立體選擇多巴胺D-2受體阻斷。與其它側(cè)鏈協(xié)同物的關(guān)系”J.Med.Chem(1991)34948-955；Katopodis等人“肽基甘氨酸α-胺化單氧酶的襯底物和抑制劑”Biochemistry(1990)294541-4548；和Rainnie等“內(nèi)橋膽堿能神經(jīng)元的腺苷抑制對(duì)ECG喚醒的影響”Science(1994)263689-690。其它含苯甲酰胺的藥物組合物及它們?cè)谥委熁蚍乐股窠?jīng)變性疾病的用途披露在美國專利US5,472,983中。發(fā)明陳述現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)苯甲酰胺類藥物組合物具有對(duì)抗神經(jīng)變性疾病的活性。這些組合物包括一或多個(gè)作為活性成分的，具有式I的乙酰氨基苯甲酰胺，氨基苯甲酰胺或硝基苯甲酰胺化合物和藥物學(xué)可接受的載體。在通式I中，R’為飽和的3-5個(gè)碳原子的烷基，每個(gè)R為獨(dú)立的-NH-CO-CH3，-NO2或NH2，且n為1或2，條件是1)當(dāng)n為1，且R為環(huán)上4-位-NO2時(shí)，R’不是叔丁基，異丁基，或丙基；2)當(dāng)n為1，且R為環(huán)上2-位-NO2時(shí)，R’不是異丁基或丙基；且3)當(dāng)n為2，且R’為叔丁基，兩個(gè)R為-NO2時(shí)，R基團(tuán)不能位于環(huán)上的3和5位；載體較可取的是口服型載體，但也可以是注射型載體。這些藥物組合物可以呈散裝狀態(tài)，但一般是呈單位劑型狀態(tài)。在優(yōu)選實(shí)施方案中，藥物組合物包括一或多個(gè)作為活性劑的具式II的乙酰氨基苯甲酰胺化合物。該組合物所表現(xiàn)出的對(duì)抗帕金森氏病的活性以它們阻止由MPTP誘導(dǎo)和6-羥基多巴胺誘導(dǎo)的多巴胺水平下降能力來衡量。在通式II中，R’為直鏈，支鏈或環(huán)狀的3-5個(gè)碳原子的飽和烷基，且n為1或2。在該組合物中所采用的某些苯甲酰胺化合物為已知化合物，而其它的為新化合物。作為中間體的這些新化合物以及其它新的硝基苯甲酰胺和氨基苯甲酰胺用于制備活性物質(zhì)構(gòu)成了本發(fā)明的另一方面。通式II的那些乙酰氨基苯甲酰胺，其中R’為直鏈，支鏈或環(huán)狀的飽和的3-5個(gè)碳原子的烷基，且n為1或2，但條件為，當(dāng)n為1，且R’為正丁基或正丙基時(shí)，乙酰氨基不能在環(huán)的2位；當(dāng)n為1時(shí)，乙酰氨基不能在環(huán)的3位；當(dāng)n為2時(shí)，乙酰氨基不能在環(huán)的3和5位上，作為化合物構(gòu)成了本發(fā)明的另一方面。下列硝基-和氨基苯甲酰胺作為化合物，為本發(fā)明的一個(gè)方面N-叔戊基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1033)，N-1，2-二甲丙基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1085)，N-正丁基-3-硝基苯甲酰胺(CPI1135)，N-正戊基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1140)，N-2-甲基丁基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1146)，N-正丁基-3，5-二硝基苯甲酰胺(CPI1147)，N-甲基環(huán)丙基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1164)，N-正丁基-2-硝基苯甲酰胺(CPI1173)，N-正戊基-2-硝基苯甲酰胺(CPI1174)，及N-甲基環(huán)丙基-4-氨基苯甲酰胺(CPI1240)。(本文通篇使用的“CPI…”數(shù)為內(nèi)部鑒別數(shù)碼，為簡化數(shù)據(jù)的表達(dá)，在本發(fā)明說明書的實(shí)施例中，采用了該內(nèi)部鑒別數(shù)碼。)本發(fā)明的另一方面是提供了治療患有神經(jīng)變性疾病，特別是與多巴胺有聯(lián)系的神經(jīng)變性疾病的方法。該方法包括給予病人對(duì)神經(jīng)變性疾病有效劑量的一或多個(gè)所述的藥物組合物。本發(fā)明的另一方面是提供了治療患有進(jìn)行性中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能喪失癥狀病人的方法。該方法包括給患有中樞神經(jīng)功能喪失癥狀病人服用有效劑量的一或多個(gè)所述藥物組合物。本發(fā)明最重要的部分是提供了一種治療患有與帕金森氏病有關(guān)的進(jìn)行性中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能喪失癥狀病人的方法。該方法包括給患有進(jìn)行性中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能喪失癥狀的病人服用(較可取的是口服)有效劑量的一或多種所述藥物組合物。另一方面，本發(fā)明提供了一種治療患有因線粒體功能失調(diào)而引起的進(jìn)行性中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能喪失癥狀病人的方法。該方法包括給患有進(jìn)行性中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能喪失病癥的病人服用有效劑量的一或多種所述的藥物組合物。進(jìn)一步地，本發(fā)明還提供了制備式I和II化合物的方法。該方法一般包括將3-5個(gè)碳原子的烷基胺與單或二硝基苯甲酰進(jìn)行縮合，該硝基構(gòu)型相應(yīng)于最終化合物中的硝基，胺或乙酰胺取代構(gòu)型，任意地還原硝基，并任意地與乙酰鹵反應(yīng)，將氨基苯甲酰胺轉(zhuǎn)變?yōu)橐阴０被郊柞０?。本發(fā)明的詳細(xì)描述苯甲酰胺類化合物本發(fā)明采用了一些乙酰氨基苯甲酰胺類、氨基苯甲酰胺類以及硝基苯甲酰胺類化合物作為活性藥劑。乙酰氨基苯甲酰胺的結(jié)構(gòu)由式I(當(dāng)R為乙酰氨基基團(tuán)時(shí))和式II表示。在這些式子中，R為含3-5個(gè)碳原子的飽和烷基，n為1或2。乙酰氨基基團(tuán)(或數(shù)個(gè)基團(tuán))可存在于環(huán)的任何部位。優(yōu)選的例子是當(dāng)n為1時(shí)，乙酰氨基基團(tuán)位于環(huán)的2，3，4位上，當(dāng)n為2時(shí)，乙酰氨基基團(tuán)位于環(huán)的2和3，2和4，2和5，2和6，3和4，或3和5位上。關(guān)于烷基取代物R’，其中R’為α-碳(即與環(huán)上氮原子相連的碳)上沒有氫原子的烷基的化合物是較可取的。較好的R’的例子有叔丁基及叔戊基。特別引人注意的式I乙酰氨基苯甲酰胺化合物有N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺(CPI1189)N-異丙基-4-乙酰氨基苯甲酰胺(CPI1232)N-叔戊基-4-乙酰氨基苯甲酰胺(CPI1233)N-叔丁基-3-乙酰氨基苯甲酰胺(CPI1234)以及N-甲基環(huán)丙基-4-乙酰氨基苯甲酰胺(CPI1241)。N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺(CPI1189)是最可取的乙酰氨基苯甲酰胺。在乙酰苯甲酰胺化合物家族中有許多新的化合物。特別值得提及的是式I(當(dāng)R為乙酰氨基時(shí))及式II的乙酰氨基苯甲酰胺，其中n為1或2且R’為含3-5碳的飽和烷基，條件是當(dāng)n為1時(shí)，R’為正丁基或正丙基，乙酰氨基基團(tuán)不在環(huán)的2位上；當(dāng)n為1時(shí)，乙酰氨基基團(tuán)不在環(huán)的3位上；當(dāng)n為2時(shí)，乙酰氨基基團(tuán)不在環(huán)的3和5位上。再一次說明，上述作為活性劑列出的5個(gè)乙酰氨基苯甲酰胺化合物是較好的新化合物，其中CPI1189最好。用作為活性劑的氨基苯甲酰胺及硝基苯甲酰胺通過式I作了描述，其中R為氨基或硝基。在這些式子中，R’為含3-5碳原子的飽和烷基，n為1或2，其取代基及它們的位置與乙酰氨基苯甲酰氨的優(yōu)選原則相同，此外進(jìn)一步的條件是1)當(dāng)n為1，R為處于環(huán)上4位的-NO2，R’不是叔丁基，異丁基或丙基；2)當(dāng)n為1時(shí)，R為處于環(huán)上2位的-NO2，R’不是異丁基或丙基；且3)當(dāng)n為2，且R’為叔丁基，且兩個(gè)R為-NO2時(shí)，R基團(tuán)不在環(huán)的3和5位上。特別引人注意的，作為活性劑的氨基苯甲酰胺和硝基苯甲?；衔镉蠳-異丙基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1026)，N-叔丁基-3-硝基苯甲酰胺(CPI1034)，N-叔丁基-2-硝基苯甲酰胺(CPI1035)，N-正丁基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1045)，N-正丙基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1047)，N-叔丁基-3，5-二硝基苯甲酰胺(CPI1049)，N-1-甲基丙基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1084)，N-叔丁基-4-氨基苯甲酰胺(CPI1160)，及N-叔丁基-3-氨基苯甲酰胺(CPI1248)。這些是氨基苯甲酰胺及硝基苯甲酰胺化合物家族中的新化合物，另外還有一些新穎化合物可作為這些物質(zhì)及上述乙酰氨基苯甲酰胺化合物的中間體。更加獨(dú)特的新的氨基苯甲酰胺及硝基苯甲酰胺化合物有N-叔戊基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1033)，N-1，2-二甲基丙基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1085)，N-正丁基-3-硝基苯甲酰胺(CPI1135)，N-正戊基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1140)，N-2-甲基丁基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1146)，N-正丁基-3，5-二硝基苯甲酰胺(CPI1147)，N-甲基環(huán)丙基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1164)，N-正丁基-2-硝基苯甲酰胺(CPI1173)，N-正戊基-2-硝基苯甲酰胺(CPI1174)，及N-甲基環(huán)丙基-4-氨基苯甲酰胺(CPI1240)。當(dāng)苯甲酰胺化合物含有氨基基團(tuán)時(shí)，例如CPI1240，胺的功能作用可以其本身或鹽的形式存在。在這類鹽中，氨基被質(zhì)子化為陽離子形式，與藥學(xué)上可接受的陰離子，如Cl-、Br-，I-，OH-，NO3-，磺酸鹽，甲磺酸鹽，乙酸鹽，酒石酸鹽，草酸鹽，琥珀酸鹽或棕櫚酸鹽相結(jié)合。當(dāng)涉及這些氨基苯甲酰胺化合物時(shí)，應(yīng)理解為這些鹽類也包括在其中。美國專利US5,472,983上公開了幾種有用的治療神經(jīng)變性疾病的苯甲酰胺化合物，它們的作用機(jī)制是對(duì)帕金森氏病的MPTP小鼠模型具有保護(hù)作用。本發(fā)明中的化合物N-叔丁基-4-乙酰氨基(CPI1189)是這些苯甲酰胺化合物之一(N-叔丁基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1020))的體內(nèi)生物轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，后者在口服給予CPI1020的小鼠和大鼠血中可以被發(fā)現(xiàn)。該化合物看來是通過將環(huán)上的硝基(CPI1020)還原成氨基基團(tuán)(CPI1160)后，再通過對(duì)氨基的乙酰化作用形成的。本發(fā)明化合物，如CPI1189在保護(hù)由MPTP進(jìn)行皮下處理后誘發(fā)小鼠紋狀體多巴胺的降低方面比CPI1020更強(qiáng)(大約10倍左右)。基于它們分子結(jié)構(gòu)上的相似物，如含乙酰氨基功能團(tuán)的乙酰氨基酚，它們應(yīng)比CPI1020更為安全，因?yàn)樗鼈儾粫?huì)在體內(nèi)代謝產(chǎn)生含羥胺(很可能是Ames陽性)的代謝性，也不可能引起具有影響心血管和/或厭食作用的氨基代謝產(chǎn)物。藥物組合物上述式I和II苯甲酰胺化合物可以配成適合口服或其它合適給藥途徑(如經(jīng)注射非腸道給藥或靜脈給藥)的藥物組合物。采用化合物N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺(CPI1189)，N-叔丁基-3-乙酰氨基苯甲酰胺(CPI1234)，N-叔戊基-4-乙酰氨基苯甲酰胺(CPI1233)，N-叔丁基-4-氨基苯甲酰胺(CPI1160)，N-叔丁基-3-硝基苯甲酰胺(CPI1034)以及N-叔丁基-3-氨基苯甲酰胺(CPI1248)的藥物組合物是較可取的，其中基于CPI1189的組合物是迄今為止最可取的。用于口服給藥的組合物可取自散裝液體溶液或懸浮液或散裝粉末。通常，為了獲得準(zhǔn)確的劑量，提供單位劑量形式的組合物。典型的單位劑型包括有預(yù)填充的，預(yù)測定的安瓿或液體組合物注射針劑或丸劑，片劑，膠囊或類似的固體組合物。在這些組合物中，苯甲酰胺化合物通常為一個(gè)小組分(0.1～50％重量比或較好的是約1-40％重量比)，其余為各種賦形劑或載體，形成所需劑型。液體劑型可包括帶有緩沖劑懸浮及分散劑，著色劑，香味劑等的合適的水或非水載體。固體劑型可以包括下列任意具有相似特性的組分或化合物粘合劑，如微晶纖維素，黃著膠或明膠；賦形劑，如淀粉或乳糖；崩解劑，如藻酸，淀粉羥乙酸鈉(Primojel)或玉米淀粉；潤滑劑，如硬脂酸鎂；增滑劑，如膠體二氧化硅，甜味劑，如蔗糖或糖精；或香味劑，如薄荷，水楊酸甲酯或橙香劑。對(duì)于注射用組合物，通常是基于本領(lǐng)域中熟知的可注射的無菌生理鹽水或磷酸鹽緩沖的生理鹽水或其它可注射用載體。在此，苯甲酰胺仍為典型的小組份，通常約為0.05～10％(重量比)，其余是可注射的載體等等。液體物質(zhì)可以是溶液或懸浮液。上述用于口服或注射給藥的組合物僅僅是代表性的，其它物質(zhì)以及加工過程等在專著Remington’spharmaceuticalsciences，17thedition1985，MackPublishingCompany，Easton，Pennsylvania的第8部分上有所闡述，該書被列入?yún)⒖嘉墨I(xiàn)。本發(fā)明化合物還可以緩釋劑型或緩釋藥物供給系統(tǒng)的形式給藥。具有代表性的緩釋物質(zhì)可在Remington’spharmaceuticalsciences專著的編入材料中找到。處理癥狀及治療方案用含有苯甲酰胺的藥物組合物治療的病癥，可以歸類為神經(jīng)變性疾病。這些疾病是以對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的長期低度應(yīng)答和中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能逐步喪失為特征的。這些疾病包括帕金森氏病，肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS，“LouGehrig疾病)，多重硬化，亨廷頓氏病，阿爾茨海默病，糖尿病型視網(wǎng)膜病，多重梗塞性癡呆，肌肉變性等等。其中的每種疾病均是以功能逐步喪失為特征的。當(dāng)口服或靜脈內(nèi)注射給予含苯甲酰胺的本發(fā)明藥物組合物時(shí)，即可以延緩并甚至在某種程度上有可能逆轉(zhuǎn)這種功能的喪失。治療這些疾病的注射劑量水平為約0.1mg/kg/小時(shí)-至少10mg/kg/小時(shí)，通常為1-120小時(shí)，較好的是24-96小時(shí)。也可以大丸藥的形式給藥以獲得足夠穩(wěn)定的劑量水平，通常為0.1mg/kg-10mg/kg或更多。對(duì)于40-80kg的患者(人類)來說，最大的總劑量不應(yīng)超過2g/天。對(duì)于這類神經(jīng)變性疾病來說，治療方案通常要持續(xù)數(shù)月或數(shù)年，因此口服給藥對(duì)于患者來說較為方便和容易接受。對(duì)于口服給藥，一般每天1-5次，特別是每天2-4次，典型的是每日3次是具有代表性的治療方案。采用這些給藥方式，每次給藥提供1-20mg/kg苯甲酰胺，優(yōu)選每次提供1-10mg/kg苯甲酰胺，更優(yōu)選每次提供1-5mg/kg苯甲酰胺。當(dāng)然，苯甲酰胺化合物可作為唯一的活性藥劑單獨(dú)給藥，也可以與其它藥劑包括其它活性苯甲酰胺化合物聯(lián)合給藥?；衔锏闹苽浞椒ū景l(fā)明中的苯甲酰胺化合物可采用通常可獲得的起始原料及容易進(jìn)行的反應(yīng)來制備。一條具有代表性的制備反應(yīng)路線(其用叔丁基胺來說明，也可以采用任何烷基胺)包括下列反應(yīng)其中X為鹵素，如I，Br，F(xiàn)或Cl。在步驟(A)中，形成了N-叔丁基硝基苯甲酰胺(III)。此反應(yīng)應(yīng)在10℃以下進(jìn)行。步驟(A)產(chǎn)生了苯甲酰胺III，即本發(fā)明化合物，其中R為-NO2。在步驟(B)中，單或雙硝基苯甲酰胺III中的硝基被還原。這里一般采用還原劑(如水合肼)及合適的催化劑(如多相的鉑，氫氧化氧化鐵，存在于載體上的Pd/Ni催化劑，或者氫氣加上催化劑)。步驟(B)產(chǎn)生了苯甲酰胺IV，即本發(fā)明化合物，其中R為NH2。在步驟(C)中，通過與酰鹵如乙酰氯進(jìn)行反應(yīng)，氨基苯甲酰胺IV轉(zhuǎn)化成乙酰氨基苯甲酰胺V。此反應(yīng)在有弱堿存在下，并低于室溫，如-20℃至+20℃條件下進(jìn)行。由此產(chǎn)生本發(fā)明化合物，其中R為乙酰氨基。也可以采用其它合成路線來制備本發(fā)明化合物。以CPI1189作為代表性化合物，下文中給出了可變更的合成路線的例子。采用這些合成方法可使用合適的起始原料，如2-或3-氨基或硝基芐腈，或2，3-，2，4-，2，5-，2，6-，3，4-或3，5-二氨基或二硝基芐腈，以及合適的醇(變更路線1)或相似取代的甲苯化合物及合適的烷基胺(變更路線3)可以制備其它化合物。變更路線1此路線從4-氨基芐腈(A)?；?B)開始，采用的是標(biāo)準(zhǔn)方法。在4-乙酰氨基芐腈(B)的存在下對(duì)叔丁醇進(jìn)行酸水解，為CPI1189提供了一個(gè)可行的合成途徑。變更路線2采用標(biāo)準(zhǔn)的方法，對(duì)廉價(jià)的起始物PABA(C)進(jìn)行酰化，提供了一個(gè)廉價(jià)的制備4-乙酰氨基苯甲酸(D)的方法。用標(biāo)準(zhǔn)方法將(D)轉(zhuǎn)化成酰氯(E)(例如SOCl2)，隨后用已經(jīng)有所描述的標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行酰氨化，從而從廉價(jià)的原料中得到CPI1189。變更路線3另一個(gè)制備本發(fā)明化合物的方法是采用標(biāo)準(zhǔn)方法，使對(duì)甲苯胺(F)進(jìn)行酰化反應(yīng)生成4-乙酰氨基甲苯(G)。用常規(guī)的氧化劑(如KMnO4)可使合成中間體(G)轉(zhuǎn)化為4-乙酰氨基苯甲酸(D)，隨后用變更路線2所述方法轉(zhuǎn)化為CPI1189。實(shí)施例下列實(shí)施例將進(jìn)一步說明本發(fā)明。它們將提供幾個(gè)較好的具體實(shí)施例，但不能把它認(rèn)作為限制本發(fā)明的范圍，所附的權(quán)利要求部分將加以闡明。實(shí)施例1-19說明了乙酰氨基苯甲酰胺以及硝基-及氨基苯甲酰胺的制備，它們是本發(fā)明組合物中所采用的苯甲酰胺化合物以及所用方法的代表。實(shí)施例20-24說明以這些化合物為基礎(chǔ)的藥物組合物的制備。然后，給出了說明本發(fā)明組合物活性的生物試驗(yàn)結(jié)果。實(shí)施例1N-叔丁基-4-氨基苯甲酰胺的制備(CPI1160)將叔丁胺(14.6g，0.200mol)置于乙酸乙酯中(150ml，其純化過程如下5％Na2CO3溶液洗滌，飽和NaCl溶液洗滌，無水MgSO4干燥，經(jīng)槽紋濾紙過濾)，用冰浴冷卻至5℃。將溶于純乙酸乙酯(75ml)的4-硝基苯甲酰氯(18.6g，0.100mol)滴加入其中，加入速度以保持其溫度低于10℃為宜。苯甲酰氯溶液加入完畢后移去冰浴，溶液攪拌4小時(shí)。混合物經(jīng)Buchner(布氏)漏斗過濾，濾液用5％HCl洗三次，飽和NaCl溶液洗一次，無水Na2SO4干燥，槽紋濾紙過濾，蒸除溶劑留下白色結(jié)晶產(chǎn)品。產(chǎn)品于45℃下24mm汞柱的真空爐中干燥14小時(shí)。此過程得到17.13gN-叔丁基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1020)(77％的產(chǎn)率)，mp162-163℃。質(zhì)子核磁共振(89.55MHz，CDCl3)的吸收顯示如下8.257ppm(d，8.8Hz，2H；3，5-芳基H)；7.878ppm(d，8.8Hz，2H；2，6-芳基H)；6.097ppm(bs，1H；N-H)；1.500ppm(s，9H；叔丁基H)。55℃下，將Pd/C(5％，75mg)加入CPI-1020(5g，22.5mmol)的95％乙醇溶液中。在30分鐘內(nèi)滴加水合肼(1.2ml)的95％乙醇溶液(10ml)，然后再加入Pd/C(75mg)?；旌衔锘亓?小時(shí)，加入水合肼(0.5g)的95％乙醇(5ml)溶液，混合物再回流1小時(shí)。布氏漏斗過濾，減壓蒸除部分溶劑，用CH2Cl2提取。合并的提取物用MgSO4干燥，蒸除溶劑，得3.90gN-叔丁基-4-氨基苯甲酰胺(CPI1160)(90％產(chǎn)率)，熔點(diǎn)125-127℃，90MHz質(zhì)子NMR(CDCl3)的吸收顯示如下7.290(2H，d，8.8Hz；2.6芳基H)；6.368ppm(2H，d，8.8Hz；3.5芳基H)；5.45ppm(1H，bs；NHC＝0)；3.727ppm(2H，bs；芳基NH2)；1.186ppm(9H，S；叔丁基H)。實(shí)施例2N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺(CPI1189)3℃下，將乙酰氨(0.45g，5.7mmol)的乙酸乙酯(25ml)溶液滴加到CPI-1160(1.0g，5.2mmol)及三乙胺(0.58g，5.7mmol)的乙酸乙酯溶液中，加入速度以保持其溫度低于10℃為宜。使反應(yīng)物的溫度升至室溫，攪拌1小時(shí)，5％HCl洗滌。用丙酮重結(jié)晶得1.08gN-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺(CPI1189)(89％產(chǎn)率)，熔點(diǎn)119-121℃。90MHz質(zhì)子NMR(DMSO-d6)吸收顯示如下9..726ppm(1H，bs，N-H)；7.715ppm(4H，dd，4.4Hz；芳H)；7.295ppm(1H，bs；NH)；2.844ppm(3H，s；CH3CO)；1.448ppm(9H，s；叔丁基H)。實(shí)施例3N-叔丁基-3-硝基苯甲酰胺(CPI1034)，N-叔丁基-3-氨基苯甲酰胺(CPI1248)及N-叔丁基-3-乙酰氨基苯甲酰胺(CPI1234)的制備用3-硝基苯甲酰氯代替4-硝基苯甲酰氯，按照實(shí)施例1中的酰胺化過程進(jìn)行反應(yīng)，得N-叔丁基-3-硝基苯甲酰胺(CPI1034)，產(chǎn)率92％，m.p.123～125℃。質(zhì)子NMR(CDCl3)吸收顯示如下8.517ppm(2-芳基H，S，1H)；8.337ppm(4-芳基H，d，8.8Hz，1H)；8.121ppm(6-芳基H，d，6.4Hz，1H)；7.618ppm(5-芳基H，m，1H)；6.032ppm(N-H，bs，1H)；1.484ppm(叔丁基H，S，9H)。氧化鐵(III)氫氧化物催化的水合肼還原反應(yīng)生成了N-叔丁基-3氨基苯甲酰胺(CPI1248)，產(chǎn)率為53％，m.p118-120℃。質(zhì)子NMR(CDCl3)吸收顯示如下7.088ppm(4-6芳H，m，3H)；6.794ppm(2-芳H，S，1H)；5.902ppm(N-H，bs，1H)；3.145ppm(芳基N-H，bs，2H)；1.458ppm(叔丁基H，S，9H)按照實(shí)施例2對(duì)CPI1248進(jìn)行乙酰化反應(yīng)，得N-叔丁基-3-乙酰氨基苯甲酰胺(CPI1234)，產(chǎn)率75％，m.p.194-195℃。質(zhì)子NMR(CDCl3)吸收顯示如下7.778ppm(4-6-芳H，m.3H)；7.392ppm(2-芳H，S，1H)；6.08ppm(N-H，bs，1H)；2.174ppm(乙酰基CH3，S，9H)；1.500ppm(叔丁基H，S，9H)。實(shí)施例4制備N-叔丁基-2-硝基苯甲酰胺(CPI1035)和N叔-丁基-2-乙酰氨基苯甲酰胺重復(fù)實(shí)施例3的方法，在酰胺化步驟時(shí)采用2-硝基苯甲酰氯，得到N-叔丁基-2-硝基苯甲酰胺(CPI1035)。采用肼還原硝基苯甲酰胺，得到N-叔丁基-2-氨基苯甲酰胺。?；被郊柞０罚玫絅-叔丁基-2-乙酰氨基苯甲酰胺。實(shí)施例5制備N-異丙基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1026)和N-異丙基-4-乙酰氨基苯甲酰胺(CPI1232)重復(fù)實(shí)施例3的方法，在酰胺化步驟時(shí)采用4-硝基苯甲酰氯和異丙胺，得到N-異丙基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1026)。采用肼還原硝基苯甲酰胺，得到N-異-丙基4-氨基苯甲酰胺。?；被郊柞０罚玫絅-異丙基-4-乙酰氨基苯甲酰胺(CPI1232)。實(shí)施例6制備N-叔戊基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1033)和N-叔戊基-4-乙酰氨基苯甲酰胺(CPI1233)重復(fù)實(shí)施例3的方法，在酰胺化步驟時(shí)采用4-硝基苯甲酰氯和叔戊胺，得到N-叔戊基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1033)。采用肼還原硝基苯甲酰胺，得到N-叔戊基-4-氨基苯甲酰胺。?；被郊柞０罚玫絅-叔戊基-4-乙酰氨基苯甲酰胺(CPI1233)。實(shí)施例7制備N-異丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺重復(fù)實(shí)施例3的方法，在酰胺化步驟時(shí)采用4-硝基苯甲酰氯和異丁胺，得到N-異丁基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1044)。采用肼還原硝基苯甲酰胺，得到N-異-丁基-4-氨基苯甲酰胺。?；被郊柞０罚玫絅-異丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺。實(shí)施例8制備N-正丁基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1045)和N-正丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺重復(fù)實(shí)施例3的方法，在酰胺化步驟時(shí)采用4-硝基苯甲酰氯和正丁胺，得到N-正丁基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1045)。采用肼還原硝基苯甲酰胺，得到N-正丁基-4-氨基苯甲酰胺。?；被郊柞０?，得到N-正丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺。實(shí)施例9制備N-正丙基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1047)和N-正-丙基-4-乙酰氨基苯甲酰胺重復(fù)實(shí)施例3的方法，在酰胺化步驟時(shí)采用4-硝基苯甲酰氯和正丙胺，得到N-正丙基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1047)。采用肼還原硝基苯甲酰胺，得到N-正丙基-4-氨基苯甲酰胺。?；被郊柞０?，得到N-正丙基-4-乙酰氨基苯甲酰胺。實(shí)施例10制備N-1，2-二甲基丙基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1085)和N-1，2-二甲基丙基-4-乙酰氨基苯甲酰胺重復(fù)實(shí)施例3的方法，在酰胺化步驟時(shí)采用4-硝基苯甲酰氯和1，2-二甲基丙基胺，得到N-1，2-二甲基丙基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1085)。采用肼還原硝基苯甲酰胺，得到N-1，2-二甲基丙基-氨基苯甲酰胺。酰化氨基苯甲酰胺，得到N-1，2-二甲基丙基-4-乙酰氨基苯甲酰胺。實(shí)施例11制備N-正戊基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1140)和N-正-戊基-4-乙酰氨基苯甲酰胺重復(fù)實(shí)施例3的方法，在酰胺化步驟時(shí)采用4-硝基苯甲酰氯和正戊胺，得到N-正戊基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1140)。采用肼還原硝基苯甲酰胺，得到N-正戊基-4-氨基苯甲酰胺。酰化氨基苯甲酰胺，得到N-正戊基-4-乙酰氨基苯甲酰胺。實(shí)施例12制備N-2-甲基丁基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1146)和N-2-甲基丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺重復(fù)實(shí)施例3的方法，在酰胺化步驟時(shí)采用4-硝基苯甲酰氯和2-甲丁基胺，得到N-2-甲基丁基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1146)。采用肼還原硝基苯甲酰胺，得到N-2-甲基丁基-4-氨基苯甲酰胺。酰化氨基苯甲酰胺，得到N-2-甲基丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺。實(shí)施例13制備N-正戊基-2-硝基苯甲酰胺(CPI1174)和N-正-戊基-2-乙酰氨基苯甲酰胺重復(fù)實(shí)施例3的方法，在酰胺化步驟時(shí)采用2-硝基苯甲酰氯和正戊胺，得到N-正戊基-2-硝基苯甲酰胺(CPI1174)。采用肼還原硝基苯甲酰胺，得到N-正戊基-2-氨基苯甲酰胺。?；被郊柞０?，得到N-正戊基-2-乙酰氨基苯甲酰胺。實(shí)施例14制備N-叔丁基-2，3-二乙酰氨基苯甲酰胺重復(fù)實(shí)施例3的方法，在酰胺化步驟時(shí)采用2，3-二硝基苯甲酰氯，得到N-叔-丁基-2，3-二硝基苯甲酰胺。采用肼還原硝基苯甲酰胺，得到N-叔丁基-2，3-二氨基苯甲酰胺。?；被郊柞０?，得到N-叔丁基-2，3-二乙酰氨基苯甲酰胺。實(shí)施例15制備N-叔戊基-2，4-二乙酰氨基苯甲酰胺重復(fù)實(shí)施例3的方法，在酰胺化步驟時(shí)采用2，4-二硝基苯甲酰氯和叔戊胺，得到N-叔戊基-2，4-二硝基苯甲酰胺。采用肼還原硝基苯甲酰胺，得到N-叔戊基-2，4-二氨基苯甲酰胺。酰化氨基苯甲酰胺，得到N-叔戊基-2，4-二乙酰氨基苯甲酰胺。實(shí)施例16制備N-叔丁基-2，5-二乙酰氨基苯甲酰胺重復(fù)實(shí)施例3的方法，在酰胺化步驟時(shí)采用2，5-二硝基苯甲酰氯，得到N-叔丁基-2，5-二硝基苯甲酰胺。采用肼還原硝基苯甲酰胺，得到N-叔丁基-2，5-二氨基苯甲酰胺。?；被郊柞０?，得到N-叔丁基-2，5-二乙酰氨基苯甲酰胺。實(shí)施例17制備N-叔丁基-2，6-二乙酰氨基苯甲酰胺重復(fù)實(shí)施例3的方法，在酰胺化步驟時(shí)，采用2，6-二硝基苯甲酰氯，得到N-叔丁基-2，6-二硝基苯甲酰胺。采用肼還原硝基苯甲酰胺，得到N-叔丁基-2，6-二氨基苯甲酰胺。?；被郊柞０?，得到N-叔丁基-2，6-二乙酰氨基苯甲酰胺。實(shí)施例18制備N-叔丁基-3，4-二乙酰氨基苯甲酰胺重復(fù)實(shí)施例3的方法，在酰胺化步驟時(shí)采用3，4-二硝基苯甲酰氯，得到N-叔丁基-3，4-二硝基苯甲酰胺。采用肼還原硝基苯甲酰胺，得到N-叔丁基-3，4-二氨基苯甲酰胺。?；被郊柞０?，得到N-叔丁基-3，4-二乙酰氨基苯甲酰胺。實(shí)施例19制備N-叔丁基-3，5-二乙酰氨基苯甲酰胺重復(fù)實(shí)施例3的方法，在酰胺化步驟時(shí)采用3，5-二硝基苯甲酰氯，得到N-叔丁基-3，5-二硝基苯甲酰胺。采用肼還原硝基苯甲酰胺，得到N-叔丁基-3，5-二氨基苯甲酰胺。?；被郊柞０?，得到N-叔丁基-3，5-二乙酰氨基苯甲酰胺。藥物組合物的制備實(shí)施例20將實(shí)施例1化合物以干粉末狀與干燥的明膠粘合劑以大約1∶2(重量比)的比例混合。加入少量的硬脂酸鎂作潤滑劑。此混合物用壓片機(jī)制成240～270mg的片子(含80-90mg活性苯甲酰胺)。如果以每日一次，每日二次或每日三次的治療方案給予與多巴胺有關(guān)的神經(jīng)變性患者此種藥片，將減緩疾病的發(fā)展。實(shí)施例21將實(shí)施例2化合物以干粉末狀與淀粉稀釋劑以大約1∶1(重量比)的比例混合。將混合物填充入250mg膠囊(含125mg活性苯甲酰胺)中。如果以每日一次，每日二次或每日三次的治療方案給予與多巴胺有關(guān)的神經(jīng)變性患者此種膠囊，將減緩疾病的發(fā)展。實(shí)施例22將實(shí)施例3化合物懸浮于甜味芳香水合介質(zhì)中至濃度大約為50mg/ml。如果以每日一次，每日兩次，每日三次，每次5ml的劑量給予與多巴胺有關(guān)的神經(jīng)變性患者此種藥物，將減緩病程的發(fā)展。實(shí)施例23將實(shí)施例4化合物以干粉末狀與干燥的明膠粘合劑以大約1∶2(重量比)的比例混合，加入少量硬脂酸鎂作潤滑劑。用壓片機(jī)將混合物制成450-900mg的藥片(含150-300mg活性苯甲酰胺)。如果以每日一次，每日二次或每日三次的治療方案給予與多巴胺有關(guān)的神經(jīng)變性患者此種藥片，將減緩病程的發(fā)展。實(shí)施例24將實(shí)施例14化合物溶于一個(gè)緩沖的無菌生理鹽水可注射的水性介質(zhì)中至濃度約5mg/ml。如果以每日一次，每日二次或每日三次，每次50ml的劑量給予與多巴胺有關(guān)的神經(jīng)變性如帕金森氏病患者此種藥物，將減緩病程的發(fā)展。值得說明的是，任何式I化合物可被用來制作任意上述配方，并且任意上述配方可以任意上述方式給藥用來治療這里所描述的任意的神經(jīng)變性疾病。帕金森氏病篩選方法多巴胺耗盡研究(MPTP模型)在MPTP之前30分鐘，用載體(1％甲基纖維素)或藥物(P.O.)對(duì)C57BL/6J小鼠進(jìn)行預(yù)處理。將MPTP溶于等滲生理鹽水(0.9％)，并經(jīng)皮下給予動(dòng)物，其劑量為15mg游離堿/kg體重，以產(chǎn)生紋狀體多巴胺的降低至約0.5毫微摩爾/mg蛋白。小鼠組(每組n＝8-10)分別接受載體加生理鹽水，載體加MPTP或藥物加MPTP處理。接受MPTP72小時(shí)后，通過斬首處死小鼠并切除紋狀體。將此組織于0.4N高氯酸中均漿、離心，上清液用高壓液相色譜/電化學(xué)檢測(HPLC/ED)分析多巴胺水平。在收集和分析這段時(shí)間中，上清液貯存于-90℃的冰箱中。將藥物與甲基纖維素混合并在水中均化以用于給藥。對(duì)于CPI1160，CPI1189及CPI1234，劑量范圍為10～50mg/kg，對(duì)于CPI1020而言劑量范圍為50～100mg/kg。具有代表性的實(shí)驗(yàn)結(jié)果列于表1和表2。表1中的結(jié)果表明本發(fā)明中的組份，如所舉CPI1160，CPI1189及CPI1234加入MPTP后，可以有效地防止多巴胺耗盡。表1在15mg/kgMPTP模型下，30mg/kgCPI1189，1160及1234的效果</tables>基于比較的目的，對(duì)一個(gè)十分相近的苯甲酰胺化合物CPI1020進(jìn)行了同樣的實(shí)驗(yàn)。結(jié)果列于表2。在50mg/kg劑量下，對(duì)由MPTP引起的神經(jīng)中毒作用，CPI1189顯示出完全的保護(hù)作用(105％控制)而CPI1020不如此有效(56％控制)。表2在15mg/kgMPTP模型下、50mg/kgCPI1189和CPI1020效果的比較</tables>*甲基纖維素控制對(duì)本發(fā)明中的其它物質(zhì)重復(fù)此試驗(yàn)過程，結(jié)果列于表3，其顯示其它苯甲酰胺化合物亦顯示保護(hù)性質(zhì)表3苯甲酰胺化合物在MPTP多巴胺耗盡試驗(yàn)中的保護(hù)效果長期保護(hù)效果試驗(yàn)為了測定本發(fā)明化合物對(duì)多巴胺耗盡的長期效果還進(jìn)行了基它試驗(yàn)。使用上述的常規(guī)實(shí)驗(yàn)方法，用載體或受試化合物及MPTP對(duì)C57BL/6J小鼠進(jìn)行預(yù)處理，給藥后，3或14天斬首處死。結(jié)果列于表4。表4CPI-1189在MPTP模型中的效果在給藥斬首處死后一定時(shí)間內(nèi)對(duì)紋狀體多巴胺濃度的作用此結(jié)果顯示無論對(duì)給予MPTP并被于3天后或14天后處死的動(dòng)物體內(nèi)由MPTP誘導(dǎo)的多巴胺耗盡現(xiàn)象，CPI-1189均有保護(hù)作用。此結(jié)果提示CPI-1189的保護(hù)作用是由于其神經(jīng)保護(hù)作用，而不是基于多巴胺代謝的轉(zhuǎn)移作用。多巴胺耗盡研究(6-羥基多巴胺模型)試驗(yàn)的目的是為了評(píng)價(jià)CPI-1189對(duì)由于6-羥基多巴胺誘發(fā)損害的保護(hù)作用。在帕金森氏病研究中這是一個(gè)被廣泛接受的模型，其中的6-羥基多巴胺被認(rèn)為可通過誘導(dǎo)氧化作用增強(qiáng)，從而產(chǎn)生其毒性作用。自1960年起，6-羥基多巴胺就已被作為神經(jīng)毒物而廣泛應(yīng)用。由于6-羥基多巴胺最初對(duì)兒茶酚胺神經(jīng)元的作用，它主要被用于帕金森氏病的實(shí)驗(yàn)研究中。由于該化合物僅給予黑色紋狀體系統(tǒng)單方面的損害，故其被廣泛應(yīng)用。用此毒物處理過的動(dòng)物所顯示出來的生化和行為改變，可從藥理學(xué)的角度進(jìn)行測定和研究，從而評(píng)價(jià)損害的嚴(yán)重程度并測定潛在的治療干預(yù)效果。測定了CPI-1189對(duì)由6-羥基多巴胺誘導(dǎo)的黑色紋狀體系統(tǒng)損害的保護(hù)作用的劑量反應(yīng)。黑色紋狀體系統(tǒng)損害程度以紋狀體多巴胺水平來表示。使用馴化的、55-120天大的雄性的Spraguedawley大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。在實(shí)驗(yàn)當(dāng)日的早晨，將6-羥基多巴胺(研究生化藥品公司)溶于0.9％NaCl溶液中，其含有0.1mg/ml抗壞血酸。在處理的當(dāng)日早晨，將磨碎的CPI-1189(粒徑≤106μ)于1％的甲基纖維素溶液中制成懸浮液。用3.0”×18容量插管針頭，經(jīng)口服給予動(dòng)物CPI-1189，劑量體積為0.0005ml/g。使動(dòng)物麻醉，并經(jīng)外科手段將6-羥基多巴胺或生理鹽水往內(nèi)紋狀體(僅右側(cè))注射。給予6-羥基多巴胺一周后將動(dòng)物處死。處死后立即取出紋狀體組織，并用雙辛可寧酸分析，借助HPLC/EC分析蛋白含量，結(jié)果列于表5。表5.受試一側(cè)占對(duì)照一側(cè)的百分比，僅右側(cè)紋狀體被注射了6-羥基多巴胺</tables>以上結(jié)果顯示，CPI-1189可以保護(hù)由6-羥基多巴胺誘導(dǎo)的多巴胺耗盡。阿爾茨海默病活性實(shí)驗(yàn)苯甲酰胺對(duì)于Aβ(1-40)β褶紙形成的作用通過硫代核黃素T熒光光譜測定溶液中淀粉樣蛋白的聚集?，F(xiàn)已有若干種方法用來評(píng)價(jià)作為阿爾茨海默病治療藥物的化合物的活性。其中的一種方法是基于這樣一種觀察結(jié)果，即阿爾茨海默病患者具有不同尋常水平的淀粉樣蛋白聚集作用。硫代核黃素T(ThT)迅速地與β褶紙?zhí)貏e是合成Aβ(1-40)的聚集纖絲偶聯(lián)，并在440nm處產(chǎn)生一個(gè)新的最大激發(fā)，同時(shí)增強(qiáng)了490nm處的發(fā)射。根據(jù)這一原理，凡是能夠延緩或逆轉(zhuǎn)上述偶聯(lián)形成的化合物均具有治療作用。實(shí)驗(yàn)于96孔平皿中進(jìn)行，熒光改變用熒光平皿讀數(shù)器-CytoFluorII來測定評(píng)價(jià)。簡單說來，在每個(gè)孔中等分95μl溶于PBS(pH6.0)的ThT(3μM)，2μl溶于0.05％甲基纖維素的PBS(pH6.0)溶液中的NRT(10μM)以及3μl溶于dH2O的Aβ(1-40)(3μg)。當(dāng)加入Aβ(1-40)時(shí)開始熒光測定并持續(xù)4小時(shí)，此時(shí)聚集作用達(dá)到了一個(gè)平臺(tái)。β-褶紙形成的保護(hù)百分比可由存在受試化合物和缺乏受試化合物條件下聚集所產(chǎn)生的相應(yīng)的熒光單位差異計(jì)算而得。結(jié)果列于表6表6.阿爾茨海默氏篩選中苯甲酰胺活性</tables>苯甲酰胺對(duì)淀粉樣蛋白β(25-35)或谷氨酸誘導(dǎo)的大鼠體內(nèi)胚胎期的海馬神經(jīng)元/星形細(xì)胞培養(yǎng)中神經(jīng)元細(xì)胞損失的保護(hù)作用另一個(gè)阿爾茨海默活性實(shí)驗(yàn)被實(shí)施。懷孕18天的胚胎期SpragueDawley大鼠的海馬被切除并通過研磨分離以備初級(jí)的神經(jīng)元/星形細(xì)胞培養(yǎng)。細(xì)胞(3×105)被植于35mm聚-D-賴氨酸覆蓋的平皿上，其含有靠10％乳牛血清供給的Eagle最少量必需介質(zhì)。3-5小時(shí)后，除去原有的介質(zhì)，用1ml新鮮介質(zhì)代替。培養(yǎng)條件保持在37℃，5％CO2/95％空氣濕度。對(duì)于Aβ(25-35)誘導(dǎo)的神經(jīng)元毒性實(shí)驗(yàn)，將溶于dH2O中的30μMAβ(25-35)加到細(xì)胞(7DIV)中，條件是有或者無100μM溶于1％甲基纖維素中的苯甲酰胺存在下，保持96小時(shí)。對(duì)于谷氨酸誘導(dǎo)的神經(jīng)元毒性實(shí)驗(yàn)，在有或無苯甲酰胺存在下，將30μM谷氨酸加到細(xì)胞(9DIV)中，保持48小時(shí)。神經(jīng)元的生存性用處理48小時(shí)或96小時(shí)后形態(tài)學(xué)上存活的神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)目，與處理前的神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)目的百分比來表示，上述細(xì)胞均位于相同的預(yù)標(biāo)記培養(yǎng)區(qū)域內(nèi)(三個(gè)區(qū)域/培養(yǎng)，n＝6)。結(jié)果列于表7，結(jié)果用平均值±SEM來表示，并與對(duì)照組進(jìn)行比較。表7.神經(jīng)元細(xì)胞損失篩選中苯甲酰胺活性權(quán)利要求1.含下列通式的苯甲酰胺化合物和藥用載體的藥物組合物其中R’是飽和的3至5個(gè)碳原子的烷基，每個(gè)R是獨(dú)立的-NO2或-NH2或NHCOCO3，且n是1或2，條件是1)當(dāng)n是1且R是在環(huán)上4位上的-NO2時(shí)，R’不是叔丁基，異丁基，或丙基；2)當(dāng)n是1且R是在環(huán)上2位上的-NO2時(shí)，R’不是異丁基，或丙基；3)當(dāng)n是2且R’是叔丁基及兩個(gè)R是NO2時(shí)，R基團(tuán)不能位于環(huán)上的3和5位。2.權(quán)利要求1中的藥物組合物，其中的苯甲酰胺化合物是具有下列通式的乙酰氨基苯甲酰胺化合物其中，R’是飽和的3至5個(gè)碳原子的烷基，且n是1或2。3.權(quán)利要求2中的藥物組合物，其中n是1。4.權(quán)利要求3中的藥物組合物，其中R’是叔丁基。5.權(quán)利要求3中的藥物組合物，其中R’是叔戊基。6.權(quán)利要求3中的藥物組合物，其中的苯甲酰胺化合物是N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺(CPI1189)。7.權(quán)利要求3中的藥物組合物，其中的苯甲酰胺化合物是N-異丙基-4-乙酰氨基苯甲酰胺(CPI1232)。8.權(quán)利要求3中的藥物組合物，其中的苯甲酰胺化合物是N-叔戊基-4-乙酰氨基苯甲酰胺(CPI1233)。9.權(quán)利要求3中的藥物組合物，其中的苯甲酰胺化合物是N-叔丁基-3-乙酰氨基苯甲酰胺(CPI1234)。10.權(quán)利要求3中的藥物組合物，其中的苯甲酰胺化合物是N-甲基環(huán)丙基-4-乙酰氨基苯甲酰胺(CPI1241)。11.權(quán)利要求1中的藥物組合物，其中R’是飽和的3至5個(gè)碳原子的烷基，每個(gè)R是獨(dú)立的-NO2或-NH2，且n是1或2，條件是1)當(dāng)n是1且R是在環(huán)上4位上的-NO2時(shí)，R’不是叔丁基，異丁基，或丙基；2)當(dāng)n是1且R是在環(huán)上2位上的-NO2時(shí)，R’不是異丁基，或丙基；3)當(dāng)n是2且R’是叔丁基及兩個(gè)R是NO2時(shí)，R基團(tuán)不能位于環(huán)上的3和5位。12.權(quán)利要求11中的藥物組合物，其中R是-NH2。13.權(quán)利要求11中的藥物組合物，其中R是-NO2。14.權(quán)利要求11中的藥物組合物，其中的苯甲酰胺化合物是N-異丙基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1026)。15.權(quán)利要求11中的藥物組合物，其中的苯甲酰胺化合物是N-叔丁基-3-硝基苯甲酰胺(CPI1034)。16.權(quán)利要求11中的藥物組合物，其中的苯甲酰胺化合物是N-叔丁基-2-硝基苯甲酰胺(CPI1035)。17.權(quán)利要求11中的藥物組合物，其中的苯甲酰胺化合物是N-正丁基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1045)。18.權(quán)利要求11中的藥物組合物，其中的苯甲酰胺化合物是N-正丙基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1047)。19.權(quán)利要求11中的藥物組合物，其中的苯甲酰胺化合物是N-叔丁基-3，5-二硝基苯甲酰胺(CPI1049)。20.權(quán)利要求11中的藥物組合物，其中的苯甲酰胺化合物是N-1-甲基丙基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1084)。21.權(quán)利要求11中的藥物組合物，其中的苯甲酰胺化合物是N-叔丁基-4-氨基苯甲酰胺(CPI1160)。22.權(quán)利要求11中的藥物組合物，其中的苯甲酰胺化合物是N-叔丁基-3-氨基苯甲酰胺(CPI1248)。23.權(quán)利要求1中的藥物組合物，其中的載體是口服型載體。24.權(quán)利要求1中的藥物組合物，其中的載體是注射型載體。25.具有下列通式的乙酰氨基苯甲酰胺化合物其中R’是飽和的3至5個(gè)碳原子的烷基，且n是1或2，條件是當(dāng)n是1且R’是正丁基或正丙基時(shí)，乙酰氨基不能在環(huán)的2位上；當(dāng)n是1時(shí)，乙酰氨基不能在環(huán)的3位上；當(dāng)n是2時(shí)，乙酰氨基不能在環(huán)的3和5位上。26.N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺(CPI1189)27.N-異丙基-4-乙酰氨基苯甲酰胺(CPI1232)28.N-叔戊基-4-乙酰氨基苯甲酰胺(CPI1233)29.N-叔丁基-3-乙酰氨基苯甲酰胺(CPI1234)30.N-甲基環(huán)丙基-4-乙酰氨基苯甲酰胺(CPI1241)31.選自下列化合物的硝基或氨基苯甲酰胺化合物N-叔戊基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1033)，N-1，2-二甲基丙基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1085)，N-正-丁基-3-硝基苯甲酰胺(CPI1135)，N-正-戊基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1140)，N-2-甲基丁基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1146)，N-正-丁基-3，5-二硝基苯甲酰胺(CPI1147)，N-甲基環(huán)丙基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1164)，N-正-丁基-2-硝基苯甲酰胺(CPI1173)，N-正-戊基-2-硝基苯甲酰胺(CPI1174)，及N-甲基環(huán)丙基-4-氨基苯甲酰胺(CPI1240)。32.N-叔戊基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1033)。33.N-1，2-二甲基丙基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1085)。34.N-正-丁基-3-硝基苯甲酰胺(CPI1135)。35.N-正-戊基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1140)。36.N-2-甲基丁基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1146)。37.N-正-丁基-3，5-二硝基苯甲酰胺(CPI1147)。38.N-甲基環(huán)丙基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1164)。39.N-正-丁基-2-硝基苯甲酰胺(CPI1173)。40.N-正-戊基-2-硝基苯甲酰胺(CPI1174)。41.N-甲基環(huán)丙基-4-氨基苯甲酰胺(CPI1240)。42.治療患有神經(jīng)變性癥狀病人的方法，該方法包括給所述病人服用治療神經(jīng)變性癥狀有效量的權(quán)利要求1-24中的藥物組合物。43.權(quán)利要求42中的方法，其中的神經(jīng)變性癥狀與進(jìn)行性喪失中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能有關(guān)。44.權(quán)利要求42中的方法，其中的神經(jīng)變性癥狀是與多巴胺相關(guān)的神經(jīng)變性癥狀。45.權(quán)利要求44中的方法，其中的與多巴胺相關(guān)的神經(jīng)變性癥狀是帕金森氏病。46.權(quán)利要求42中的方法，其中的神經(jīng)變性癥狀是阿爾茨海默病。47.權(quán)利要求42中的方法，其中的神經(jīng)變性癥狀與由于線粒體機(jī)能失調(diào)而引起的進(jìn)行性喪失中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能有關(guān)。48.權(quán)利要求42中的方法，其中所述的服用是指口服。49.權(quán)利要求42中的方法，其中所述的服用是指非腸道給藥。50.權(quán)利要求49中的方法，其中所述的服用是指靜脈輸液。51.制備具有下列通式的苯甲酰胺的方法。其中，R’是飽和的3至5個(gè)碳原子的烷基且n是1或2，該方法包括a)將3至5個(gè)碳原子的飽和的烷胺與下列通式的硝基苯甲酰鹵進(jìn)行縮合，其中n是1或2，且X是鹵素，如碘，溴，氟或氯，得到式III化合物，b)將(III)中的NO2還原為NH2；然后c)將NH2?；癁镹HCOCH3。52.制備具有下列通式的硝基苯甲酰胺的方法其中，R’是飽和的3至5個(gè)碳原子的烷基且n是1或2，該方法包括將3至5個(gè)碳原子的飽和的烷胺與下列通式的硝基苯甲酰鹵進(jìn)行縮合，其中n是1或2，且X是鹵素，如碘，溴，氟或氯，得到下式化合物53.制備具有下列通式的氨基苯甲酰胺的方法。其中，R’是3至5個(gè)碳原子的飽和的烷基且n是1或2該方法包括a)將3至5個(gè)碳原子的飽和的烷胺與下列通式的硝基苯甲酰鹵進(jìn)行縮合，其中n是1或2，且X是鹵素，如碘，溴，氟或氯，得到下式化合物；然后b)將NO2還原為NH2。54.用于治療目的的具有下列通式的苯甲酰胺化合物其中R’是飽和的3至5個(gè)碳原子的烷基，每個(gè)R是獨(dú)立的-NO2或-NH2或NHCOCH3，且n是1或2，條件是1)當(dāng)n是1且R是在環(huán)上4位上的-NO2時(shí)，R’不是叔丁基，異丁基，或丙基；2)當(dāng)n是1且R是在環(huán)上2位上的-NO2時(shí)，R’不是異丁基，或丙基；3)當(dāng)n是2且R’是叔丁基及兩個(gè)R是NO2時(shí)，R基團(tuán)不能位于環(huán)上的3和5位。55.權(quán)利要求54中的化合物，其中的治療是指治療神經(jīng)變性癥狀。56.權(quán)利要求55中的化合物，其中的神經(jīng)變性癥狀是帕金森氏病。57.權(quán)利要求55中的化合物，其中的神經(jīng)變性癥狀是帕金森氏病。58.應(yīng)用具有下列通式的苯甲酰胺化合物來制備具有治療用途的藥劑其中R’是飽和的3至5個(gè)碳原子的烷基，每個(gè)R是獨(dú)立的-NO2或-NH2或NHCOCH3，且n是1或2，條件是1)當(dāng)n是1且R是在環(huán)上4位上的-NO2時(shí)，R’不是叔丁基，異丁基，或丙基；2)當(dāng)n是1且R是在環(huán)上2位上的-NO2時(shí)，R’不是異丁基，或丙基；3)當(dāng)n是2且R’是叔丁基及兩個(gè)R是NO2時(shí)，R基團(tuán)不能位于環(huán)上的3和5位。59.權(quán)利要求58中的應(yīng)用，其中的治療是指治療神經(jīng)變性癥狀。60.權(quán)利要求59中的應(yīng)用，其中的神經(jīng)變性癥狀是帕金森氏病。61.權(quán)利要求59中的應(yīng)用，其中的神經(jīng)變性癥狀是阿爾茨海默病。62.用于治療目的的具有下列通式的苯甲酰胺化合物其中R’是飽和的3至5個(gè)碳原子的烷基，且n是1或2。63.權(quán)利要求62中的化合物，其中的治療是指治療神經(jīng)變性癥狀。64.權(quán)利要求63中的化合物，其中的神經(jīng)變性癥狀是帕金森氏病。65.權(quán)利要求63中的化合物，其中的神經(jīng)變性癥狀是阿爾茨海默病。66.應(yīng)用具有下列通式的苯甲酰胺化合物來制備具有治療用途的藥劑，其中R，是飽和的3至5個(gè)碳原子的烷基，且n是1或2。67.權(quán)利要求66中的應(yīng)用，其中的治療是指治療神經(jīng)變性癥狀。68.權(quán)利要求67中的應(yīng)用，其中的神經(jīng)變性癥狀是帕金森氏病。69.權(quán)利要求67中的應(yīng)用，其中的神經(jīng)變性癥狀是阿爾茨海默病。70.用于治療目的的權(quán)利要求25中的乙酰氨基苯甲酰胺化合物。71.權(quán)利要求70中的化合物，其中的治療是指治療神經(jīng)變性癥狀。72.權(quán)利要求71中的化合物，其中的神經(jīng)變性癥狀是帕金森氏病。73.權(quán)利要求71中的化合物，其中的神經(jīng)變性癥狀是阿爾茨海默病。74.應(yīng)用權(quán)利要求25中的乙酰氨基苯甲酰胺化合物來制備具有治療用途的藥劑。75.權(quán)利要求74中的應(yīng)用，其中的治療是指治療神經(jīng)變性癥狀。76.權(quán)利要求72中的應(yīng)用，其中的神經(jīng)變性癥狀是帕金森氏病。77.權(quán)利要求72中的應(yīng)用，其中的神經(jīng)變性癥狀是阿爾茨海默病。78.用于治療目的N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺(CPI1189)。79.用于治療神經(jīng)變性癥狀的N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺(CPI1189)。80.用于治療帕金森氏病的N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺(CPI1189)。81.用于治療阿爾茨海默病的N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺(CPI1189)。82.應(yīng)用N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺(CPI1189)來制備具有治療用途的藥劑。83.權(quán)利要求82中的應(yīng)用，其中的治療是指治療神經(jīng)變性癥狀。84.權(quán)利要求83中的應(yīng)用，其中的神經(jīng)變性癥狀是帕金森氏病。85.權(quán)利要求83中的應(yīng)用，其中的神經(jīng)變性癥狀是阿爾茨海默病。86.用于治療目的的選自下列的化合物N-異丙基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1026)，N-叔丁基-3-硝基苯甲酰胺(CPI1034)，N-叔丁基-2-硝基苯甲酰胺(CPI1035)，N-正-丁基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1045)，N-正-丙基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1047)，N-叔丁基-3，5-二硝基苯甲酰胺(CPI1049)，N-1-甲基丙基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1084)，N-叔丁基-4-氨基苯甲酰胺(CPI1160)和N-叔丁基-3-氨基苯甲酰胺(CPI1248)。87.權(quán)利要求86中的化合物，其中的治療是指治療神經(jīng)變性癥狀。88.權(quán)利要求86中的化合物，其中的神經(jīng)變性癥狀是帕金森氏病。89.權(quán)利要求86中的化合物，其中的神經(jīng)變性癥狀是阿爾茨海默病。90.應(yīng)用選自下列的化合物來制備具有治療用途的藥劑N-異丙基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1026)，N-叔丁基-3-硝基苯甲酰胺(CPI1034)，N-叔丁基-2-硝基苯甲酰胺(CPI1035)，N-正-丁基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1045)，N-正-丙基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1047)，N-叔丁基-3，5-二硝基苯甲酰胺(CPI1049)，N-1-甲基丙基-4-硝基苯甲酰胺(CPI1084)，N-叔丁基-4氨基苯甲酰胺(CPI1160)和N-叔丁基-3-氨基苯甲酰胺(CPI1248)。91.權(quán)利要求90中的應(yīng)用，其中的治療是指治療神經(jīng)變性癥狀。92.權(quán)利要求91中的應(yīng)用，其中的神經(jīng)變性癥狀是帕金森氏病。全文摘要本發(fā)明披露了含式Ⅰ化合物作為活性成分的藥物組合物,其中R’為飽和的3—5個(gè)碳原子的烷基,每個(gè)R獨(dú)立為－NO文檔編號(hào)A61P25/00GK1182416SQ96193000公開日1998年5月20日申請(qǐng)日期1996年4月3日優(yōu)先權(quán)日1995年4月3日發(fā)明者W·D·福里特,W·A·加蘭德,A·L·威爾科克斯,R·E·帕勞爾申請(qǐng)人:桑道藥品有限公司