專利名稱：：血管新生抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及血管新生抑制劑。
背景技術(shù)：
：血管與心臟、淋巴管一起構(gòu)成脈管系統(tǒng)，在維持組織代謝、保持機(jī)體功能的穩(wěn)定性上是不可缺少的。血管的構(gòu)成細(xì)胞是內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞。通常，在已有血管系統(tǒng)中，主要在從小靜脈形成新的毛細(xì)血管網(wǎng)的血管新生中，及在血管內(nèi)皮細(xì)胞剝離后的修復(fù)過程中，可觀察到血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖。近年來，闡明了血管新生與實(shí)體瘤的生長、動脈硬化、慢性風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的血管翳增生、糖尿病性增殖性視網(wǎng)膜病等眼科疾病、尋常牛皮癬等病情密切相關(guān)，正被人們所注目。癌、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、糖尿病性視網(wǎng)膜病等血管新生過程中，細(xì)胞外基質(zhì)被破壞后，內(nèi)皮細(xì)胞游走形成管腔，然后血管平滑肌細(xì)胞在其周圍游走、增殖，結(jié)果形成新的血管，此機(jī)理正逐漸被人們所闡明。已知抑制血管新生的各種化合物有例如，D-青霉胺、肝素、15-deoxyspergualine、eponemycin、AGM-1470、tecogalansodium(DS-4152)、herbimycinA和α-干擾素。這些化合物是與機(jī)體成分有關(guān)的物質(zhì)，或來自天然物質(zhì)，在供給實(shí)際應(yīng)用上存在資源問題。與本發(fā)明化合物類似的抗?jié)兯巌rsogladine馬來酸鹽〔2，4-二氨基-6-(2，5-二氯苯基)-1，3，5-三嗪馬來酸鹽〕抑制血管新生已有報(bào)告(參照FEBS322(2)，155-158(1993))。然而，關(guān)于其一個氨基被烷基、芳烷基、芳基鏈烯基或芳基取代的2-氨基-4-取代氨基-6-(2，5-二氯苯基)-1，3，5-三嗪衍生物的血管新生抑制作用則全然不知。另一方面，本發(fā)明者曾發(fā)現(xiàn)與本發(fā)明有關(guān)的2-氨基-4-取代氨基-6-(2，5-二氯苯基)-1，3，5-三嗪衍生物具有抑制肝炎的作用，作為肝炎治療劑是有用的化合物，已申請專利(國際公開公報(bào)WO96/04914)。發(fā)明的公開本發(fā)明的目的在于提供毒性低、抑制血管新生的優(yōu)異醫(yī)藥品。本發(fā)明者發(fā)現(xiàn)，如下式(I)(式中，R1表示氫、可被取代的烷基、芳烷基、芳基鏈烯基或芳基；R2表示可被取代的烷基、芳烷基、芳基鏈烯基或芳基；或R1和R2與鄰接的N一起，以NR1R2的形式表示4-8元環(huán)狀胺基，此環(huán)狀胺基除了該氮原子外還可含有N、O或S作為環(huán)構(gòu)成原子，并可再被取代)所示的化合物具有優(yōu)異的抑制血管新生作用，同時(shí)毒性也極低，從而完成了本發(fā)明。本發(fā)明涉及以上述式(I)所示化合物或其鹽、或其溶劑合物作為有效成分的血管新生抑制劑。本發(fā)明的特征在于對于具有肝炎抑制作用的2-氨基-4-取代氨基-6-(2，5-二氯苯基)-1，3，5-三嗪衍生物發(fā)現(xiàn)了與該作用完全無關(guān)的抑制血管新生的作用。如后面的試驗(yàn)例所述，本發(fā)明的化合物與irsogladine馬來酸鹽相比，顯示強(qiáng)得多的抑制血管新生作用。下面對本發(fā)明作詳細(xì)說明。表示為R1、R2的“烷基”可為碳原子數(shù)1-10個的直鏈或支鏈烷基，如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、異戊基、正己基、異己基、正庚基、異庚基、正辛基、異辛基、正壬基、異壬基、正癸基和異癸基。其中較佳的為碳原子數(shù)1-4個的烷基。此烷基也可被選自羥基、烷氧基、氨基、一烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、環(huán)狀胺基、羧基、氨基甲?；⒎佳趸王Ｑ趸囊粋€或相同或不同的2-3個取代基取代。此烷氧基可為直鏈或支鏈的碳原子數(shù)1-4個的基團(tuán)，如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基。一烷基氨基和二烷基氨基的烷基可為碳原子數(shù)為1-4個的直鏈或支鏈烷基，如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基。芳基氨基和芳氧基的芳基可為碳原子數(shù)6-13個的基團(tuán)，如苯基、1-萘基、2-萘基、聯(lián)苯基。其中以苯基為佳。這些芳基也可被一個或者2-3個相同或不同的1-4個碳原子的直鏈或支鏈烷基(如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基)或碳原子數(shù)1-4個的烷氧基(如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基)所取代。作為烷基的取代基的環(huán)狀胺基可為如氮雜環(huán)丁烷-1-基、吡咯烷-1-基、3-吡咯啉-1-基、哌啶子基、六亞甲基亞胺基、八氫吖辛因-1-基、哌嗪-1-基、高哌嗪-1-基、嗎啉代、硫代嗎啉代等飽和或不飽和的環(huán)狀胺基。其中以哌啶子基、哌嗪-1-基、嗎啉代為佳。此環(huán)狀胺基可被碳原子數(shù)7-10個的芳基烷基取代，如芐基、苯乙基、苯丙基、苯丁基、1-萘甲基、2-萘甲基、二苯基甲基。其中以芐基為佳。酰氧基的?；蔀樘荚訑?shù)1-6個的烷?；?如甲?；?、乙?；?、丙?；?、丁?；?、戊?；?、己酰基)、碳原子數(shù)7-10的芳酰基(如苯甲?；?和雜環(huán)羰基(如煙?；?等。其中以苯甲?；鶠榧选１硎緸镽1、R2的“芳烷基”可為碳原子數(shù)7-14個的基團(tuán)，如芐基、苯乙基、苯丙基、苯丁基、1-萘甲基、2-萘甲基、二苯基甲基。其中以芐基為佳。表示為R1、R2的“芳基鏈烯基”可為碳原子數(shù)8-10個的基團(tuán)，如苯乙烯基、肉桂基、4-苯基-2-丁烯基。表示為R1、R2的“芳基”可為碳原子數(shù)6-13個的基團(tuán)，如苯基、1-萘基、2-萘基、聯(lián)苯基。其中以苯基為佳。表示為NR1R2的“環(huán)狀胺基”可為飽和或不飽和的環(huán)狀胺基。如氮雜環(huán)丁烷-1-基、吡咯烷-1-基、3-吡咯啉-1-基、哌啶子基、六亞甲基亞胺基、八氫吖辛因-1-基、哌嗪-1-基、高哌嗪-1-基、嗎啉代、硫代嗎啉代等。此環(huán)狀胺基還可被選自羥基、氧代、羧基、烷基、羥基烷基、芳氧基烷基、氨基烷基、烷基磺基氨基烷基、烷基磺基氨基、烷基磺基芳烷基、烷基磺基、芳基、芳烷基和2-嘧啶基的一個或2-4個相同或不同的取代基所取代。這些取代基中所含的烷基可為碳原子數(shù)1-4個的直鏈或支鏈基團(tuán)，如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基。上述環(huán)狀胺基的取代基中所含的芳基可為碳原子數(shù)6-12個的基團(tuán)，如苯基、1-萘基、2-萘基、聯(lián)苯基等。此芳基還可被一個或2-3個相同或不同的碳原子數(shù)為1-4個的直鏈或支鏈烷基(如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基)或碳原子數(shù)為1-4個的烷氧基(如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基)所取代。芳烷基可為碳原子數(shù)7-14個的基團(tuán)，如芐基、苯乙基、苯丙基、苯丁基、1-萘甲基、2-萘甲基、二苯甲基等。此芳烷基的芳基部分還可被一個或2-3個相同或不同的碳原子數(shù)為1-4個的直鏈或支鏈烷基(如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基)或碳原子數(shù)為1-4個的烷氧基(如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基)所取代。R1、R2可為被一個取代基所取代的碳原子數(shù)為1-4的烷基，其中以羥基取代的烷基為佳，特別好的是羥基乙基。NR1R2可為無取代基的、或被一個或者相同或不同的2個取代基取代的5-6元環(huán)狀胺基，其中以吡咯烷-1-基、哌啶子基或4-嗎啉基為佳，特別好的是吡咯烷-1-基。此環(huán)狀胺基的取代基以羥基或羥基烷基為佳，該羥基烷基以羥基甲基為佳。本發(fā)明化合物(I)可以游離狀態(tài)使用，也可以其藥理學(xué)上允許的鹽，如無機(jī)酸的鹽(如鹽酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽、氫氟酸鹽、氫溴酸鹽)或有機(jī)酸的鹽(如乙酸鹽、酒石酸鹽；乳酸鹽、檸檬酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、琥珀酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、苯磺酸鹽、甲苯磺酸鹽、萘磺酸鹽、樟腦磺酸鹽)之類酸加成鹽的形式加以使用。還可以溶劑合物的形式加以使用。本發(fā)明化合物(I)的溶劑合物可為如水合物和乙醇合物等藥理學(xué)上允許的溶劑合物。本發(fā)明化合物(I)可用例如下面的方法加以制備(參照國際公開公報(bào)WO96/04914)。式中，R1、R2意義同上。X為氯或溴等鹵素。即可在堿存在下、在對反應(yīng)惰性的溶劑中、在0-200℃、較好為25-100℃下，將化合物(II)與胺(III)進(jìn)行反應(yīng)而加以制備。反應(yīng)溶劑可使用乙腈、二甲亞砜、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)等非質(zhì)子極性溶劑，四氫呋喃、二甲氧基乙烷、乙醚、二噁烷等醚類，甲基溶纖劑、乙基溶纖劑等溶纖劑類，二氯甲烷、氯仿等鹵代烴類，苯、甲苯、二甲苯等烴類，或者它們的混合溶劑。堿可使用堿金屬碳酸鹽(如碳酸鉀、碳酸鈉)、堿金屬碳酸氫鹽(如碳酸氫鉀、碳酸氫鈉)、堿金屬氫氧化物(如氫氧化鉀、氫氧化鈉)等無機(jī)堿或三乙胺、哌啶等有機(jī)堿。也可用過量胺(HNR1R2)代替這些堿。反應(yīng)時(shí)間因原料、所用的堿、溶劑的種類而異，但通常以幾分鐘至24小時(shí)為宜。胺(III)的使用量通常對應(yīng)1摩爾(II)為等摩爾以上，以使用1-1.2摩爾為佳。堿的使用量通常對應(yīng)1摩爾(II)為等摩爾以上，以使用1-2摩爾為佳。R1和/或R2為被氨基或羥基在任意位置取代的烷基，或者NR1R2所示的環(huán)狀胺基的任意位置被氨基烷基、羥基烷基或羥基取代的本發(fā)明化合物(Ia)也可用以下所示方法加以制備。式中，X意義同上。R11、R21表示被氨基甲?；?、氰基、烷氧基羰基或氧代基在任意位置取代的烷基，或者NR11R21表示可被氨基甲酰基、氰基、烷氧基羰基或氧代基在任意位置取代的環(huán)狀胺基。R12和/或R22表示在R11、R21的氨基甲?；?、氰基、烷氧基羰基或氧代基對應(yīng)的位置上被氨基或羥基取代的烷基，或者NR12R22為NR11R21的氨基甲酰基、氰基、烷氧基羰基或氧代基對應(yīng)的位置上被氨基烷基、羥基烷基或羥基取代的環(huán)狀胺基。將在任意位置上有氨基甲?；?、氰基、烷氧基羰基或氧代基的對應(yīng)的胺(IIIa)與上面同樣地與化合物(II)反應(yīng)，得到化合物(IV)，將其還原，制得化合物(Ia)。此還原反應(yīng)可用其自身公知的方法，如采用氫化鋁鋰、硼氫化鈉等金屬氫配合物來進(jìn)行。例如，使用氫化鋁鋰0.25-1.0摩爾，將化合物(IV)溶解于2-100倍量乙醚、四氫呋喃、二甲氧基乙烷、二噁烷等醚類溶劑中，于-50～30℃反應(yīng)0.5～10小時(shí)，可制備本發(fā)明化合物(Ia)。在使用硼氫化鈉的情況下，可使用甲醇、乙醇、異丙醇等質(zhì)子性溶劑代替上述醚類溶劑同樣地進(jìn)行反應(yīng)。起始原料(II)可按公知的方法(特開昭51-70781號公報(bào))進(jìn)行制備。(III)和(IIIa)采用市售品，或按常規(guī)方法從市售品進(jìn)行制備。本發(fā)明化合物中含有不對稱碳原子，因此存在旋光異構(gòu)體，本發(fā)明中也包含各旋光異構(gòu)體及其混合物。旋光異構(gòu)體可用自身公知的方法，如采用旋光異構(gòu)體分離用柱，或利用其堿性，用酸(酒石酸、二苯甲酰酒石酸、扁桃酸、10-樟腦磺酸等)使其成鹽，進(jìn)行拆分，從而從其混合物中得到。還可用預(yù)先制成的旋光性化合物(III)或(IIIa)作為原料，進(jìn)行合成而得到。本發(fā)明化合物(I)可按公知的方法形成上述鹽。例如，本發(fā)明化合物(I)的鹽酸鹽可將本發(fā)明化合物(I)溶于鹽酸的醇溶液中而得到。本發(fā)明化合物(I)中具有羧基的化合物可按公知的方法形成鹽。鹽可列舉鈉鹽、鉀鹽等堿金屬鹽和鈣鹽等堿土金屬鹽。例如，本發(fā)明化合物(I)的堿金屬鹽可在具有羧基的本發(fā)明化合物(I)中(較好為在醇溶劑中)加入1當(dāng)量氫氧化鈉或氫氧化鉀等而得到。本發(fā)明化合物(I)的堿土金屬鹽可將按上述方法制得的堿金屬鹽溶于水、甲醇、乙醇或其混合溶劑中，加入1當(dāng)量氯化鈣而得到。本發(fā)明中也包含本發(fā)明化合物(I)或其鹽的溶劑合物(如水合物、乙醇合物)。按照化合物的種類，有時(shí)從對應(yīng)的溶劑或含對應(yīng)的溶劑的適當(dāng)?shù)幕旌先軇┲袑⒈蝗軇┖衔镏亟Y(jié)晶，可得到溶劑合物。例如，有時(shí)可將本發(fā)明化合物(I)從含水的醇中重結(jié)晶而得到水合物。本發(fā)明化合物(I)也可形成多晶型。這種多晶型也包含在本發(fā)明中。這樣制得的本發(fā)明化合物(I)按其自身公知的方法，可以游離堿的形式或酸加成鹽的形式，用諸如濃縮、調(diào)節(jié)pH、再分配、溶劑萃取、結(jié)晶化、分餾、色譜法等進(jìn)行分離精制。作為血管新生抑制劑、動脈硬化治療劑、抗腫瘤劑、卡波濟(jì)肉瘤治療劑、糖尿病性視網(wǎng)膜病治療劑、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療劑的用量，可在對年齡、體重等患者的狀態(tài)、給藥途徑、疾病的性質(zhì)與程度等加以考慮的基礎(chǔ)上進(jìn)行調(diào)整，通常對成人口服給藥時(shí)，本發(fā)明的有效成分的量在每天每人0.1mg～1g的范圍內(nèi)，較佳為每人1mg～100mg的范圍。根據(jù)情況，在此以下有時(shí)也足夠了，而相反，有時(shí)也需要此范圍以上的用量。上述劑量以1天分2-3次給藥為佳。本發(fā)明化合物，可直接地或制成在醫(yī)藥學(xué)上允許的無毒且呈惰性的載體中含有0.1％～99.5％(以0.5％～90％為佳)的醫(yī)藥組合物，給包括人在內(nèi)的哺乳動物投藥。載體可采用一種以上固體、半固體或液體狀的稀釋劑、填充劑及其它處方用的輔助劑。醫(yī)藥組合物以給藥單位形式給藥為佳。本發(fā)明的醫(yī)藥組合物可經(jīng)口給藥、組織內(nèi)給藥、局部給藥(經(jīng)皮給藥等)或直腸內(nèi)給藥。以適合于這些給藥方法的劑型投藥則勿須多言。例如特別好的是經(jīng)口給藥。經(jīng)口給藥可用固體或液體狀的劑量單位，如末劑、散劑、片劑、糖衣劑、膠囊劑、顆粒劑、懸浮劑、溶液劑、糖漿劑、滴劑、舌下含片等劑型進(jìn)行給藥。末劑是將本發(fā)明化合物磨成適當(dāng)?shù)募?xì)度而制成。散劑是將本發(fā)明化合物磨成適當(dāng)?shù)募?xì)度，然后與同樣細(xì)度的醫(yī)藥用載體(如淀粉、甘露糖醇之類可食性碳水化合物等)混合而制成。根據(jù)需要，也可混入矯味劑、防腐劑、分散劑、著色劑、香料等物質(zhì)。膠囊劑是將如上所述制成粉末狀的末劑和散劑或如片劑部分所述的顆?；奈镔|(zhì)填充到如明膠膠囊之類膠囊外殼中而制成。也可將潤滑劑和助流劑等，如膠態(tài)二氧化硅、滑石粉、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、固體聚乙二醇等混合到粉末狀物質(zhì)中，然后在膠囊中進(jìn)行填充操作。若添加崩解劑和加溶劑等，如羧甲基纖維素、羧甲基纖維素鈣、低取代度羥丙基纖維素、croscarmellosesodium、羧甲基淀粉鈉、碳酸鈣、碳酸鈉，可改善膠囊攝取時(shí)的藥效。將本發(fā)明化合物的細(xì)粉末分散懸浮于植物油、聚乙二醇、甘油、表面活性劑中，用明膠薄膜包裹，也可制成軟膠囊劑。加賦形劑制成粉末混合物，進(jìn)行顆?；蛟煸?，然后加入崩解劑或潤滑劑，再壓片，可制成片劑。粉末混合物可將適當(dāng)?shù)胤勰┗奈镔|(zhì)與上述稀釋劑和基質(zhì)等混合，必要時(shí)也可合用粘合劑(如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇)、緩溶劑(如石蠟)、再吸收劑(如季鹽)和吸附劑(如膨潤土、高嶺土、磷酸二鈣)。粉末混合物可先以糖漿、淀粉糊、阿拉伯樹膠、纖維素溶液或高分子物質(zhì)溶液等粘合劑濕潤，攪拌混合，將其干燥、粉碎、制成顆粒。代替這樣將粉末顆?；?，也可先用壓片機(jī)壓片，然后將所得的不完整形狀的渣塊粉碎，制成顆粒。這樣制成的顆粒添加硬脂酸、硬脂酸鹽、滑石粉、礦油等作為潤滑劑，可防止相互粘連。然后將這樣潤滑化的混合物壓片。這樣制成的素片上可包上薄膜或糖衣。本發(fā)明化合物也可不經(jīng)上述顆粒化或造渣的工序，而與流動性的惰性載體混合后直接壓片。還可應(yīng)用紫膠密封膜形成的透明或半途明的保護(hù)膜、糖等高分子材料的膜及蠟形成的拋光膜。其它經(jīng)口給藥劑型如溶液、糖漿、酏劑也可以制成含一定量藥物的劑量單位形式。糖漿是本發(fā)明化合物溶于適當(dāng)?shù)南阄端芤憾瞥?，而酏劑是用無毒醇性載體而制成。懇浮劑是將本發(fā)明化合物分散于無毒載體中而配制成的。根據(jù)需要，也可添加助溶劑、乳化劑(如乙氧基化異硬脂醇類、聚氧乙烯山梨醇酯類)、防腐劑、矯味劑(如薄荷油、糖精)等。如有需要，經(jīng)口給藥的劑量單位也可微囊化。該制劑還可包衣，或包埋在高分子、蠟等之中，而導(dǎo)致作用時(shí)間延長和持續(xù)釋放。組織內(nèi)給藥可采用皮下、肌肉或靜脈注射用液體劑量單位的形式，如用溶液和懸浮液的形式來進(jìn)行。這些制劑系將本發(fā)明化合物以一定量懸浮于或溶于適合于注射目的的無毒液狀載體(如水性或油性溶劑)中，然后將該懸浮液或溶液滅菌而制成。為使注射液等滲，也可添加無毒的鹽或鹽溶液。還可合并使用穩(wěn)定劑、防腐劑、乳化劑等。采用將本發(fā)明化合物溶于或懸浮于在水中可溶或不溶性的低熔點(diǎn)固體如聚乙二醇、可可脂、半合成油脂(如WitepsolTM)、高級酯類(如棕櫚酸肉豆蔻酯)及其混合物中而制成的栓劑可進(jìn)行直腸給藥。本發(fā)明化合物的毒性如下所述，非常低。本發(fā)明化合物的血管新生抑制作用如試驗(yàn)例1所述，可通過體外管腔形成試驗(yàn)加以確認(rèn)。受試化合物采用以下化合物2-氨基-4-[N，N-二(2-羥基乙基)氨基]-6-(2，5-二氯苯基)-1，3，5-三嗪(化合物1)；2-氨基-4-(2，5-二氯苯基)-6-(3-羥基甲基-1-吡咯烷基)-1，3，5-三嗪鹽酸鹽(化合物2)；2-氨基-4-(2，5-二氯苯基)-6-〔(2S，4R)-2-羥基甲基-4-羥基-1-吡咯烷基〕-1，3，5-三嗪鹽酸鹽(化合物3)。試驗(yàn)例1管腔形成試驗(yàn)在不含酚紅的M-199培養(yǎng)基中加入10％FCS(胎牛血清)，用ECV-304作為細(xì)胞，EHS肉瘤提取物(MatrigelBectonDickinson(MA)公司制)作為凝膠基質(zhì)。在24孔板(Corning258201)的中央2行各分注Matrigel300μl，在離心機(jī)上旋轉(zhuǎn)(2,000rpm，30分鐘，37℃)進(jìn)行凝膠化(厚凝膠法培養(yǎng))。分別加入凝膠用培養(yǎng)基1ml，24小時(shí)后，更換培養(yǎng)基，按103個/孔接種細(xì)胞。24小時(shí)后，加入受試藥物(1,000倍濃度的二甲亞砜溶液)。培養(yǎng)1周后，用乙醇固定，用溴化乙錠(溴化3，8-二氨基-5-乙基-6-苯基菲啶鎓)將核染色，在熒光顯微鏡下觀察。受試藥物采用化合物1、2和3與對照化合物馬來酸irsogladine。無處理的對照組的ECV-304細(xì)胞呈放射狀游走增殖，形成棒狀的管腔，再分支，迅速形成網(wǎng)眼，形成的網(wǎng)眼互相結(jié)合，形成巨大的網(wǎng)絡(luò)。以培養(yǎng)開始后第2天的集落的形狀為指標(biāo)，觀察受試藥物對管腔形成的作用。其結(jié)果，化合物1在10-5摩爾時(shí)完全抑制分枝的形成，化合物2在10-6摩爾、化合物3在10-7摩爾和10-6摩爾時(shí)完全抑制網(wǎng)眼的形成。而對照化合物僅僅在10-5摩爾時(shí)才抑制網(wǎng)眼的形成。從這些結(jié)果表明，本發(fā)明化合物與對照化合物相比，具有強(qiáng)得多的血管新生抑制作用。而且，這時(shí)集落的大小，無處理組比處理組明顯地大。受試藥物對凝膠上集落形狀的影響見表1。表1對凝膠上集落形狀的影響</tables>再過3天后觀察形態(tài)，結(jié)果，無處理組管腔的網(wǎng)絡(luò)形成，而處理組的管腔停止于獨(dú)立的、局部的網(wǎng)眼，顯示管腔形成受抑制。結(jié)果見表2。關(guān)于表中灶(細(xì)胞增殖灶)的形態(tài)，以網(wǎng)眼的數(shù)目為基準(zhǔn)對管腔連結(jié)成網(wǎng)眼狀的程度進(jìn)行評估。+++表示形成的管腔遍布整個集落；++表示形成的管腔呈網(wǎng)眼狀；+表示有管腔形成；-表示管腔形成受抑制。表2對管腔形成的抑制作用</tables>化合物2和3從10-6M起、化合物1從10-5M起即抑制管腔形成。本發(fā)明化合物的血管新生抑制作用的機(jī)理目前尚不清楚。試驗(yàn)例2對體重增加的作用對6周齡的SD系雄性大鼠(一組5只)連日經(jīng)口給與化合物1，探討對體重增加的作用。結(jié)果，化合物1即便以1000mg/kg連續(xù)投與對體重增加也無影響。試驗(yàn)例3急性毒性(小鼠)對禁食的6周齡雄性小鼠(BALB/c)經(jīng)口投與受試化合物1g/kg或500mg/kg，觀察以后1周內(nèi)的死亡率。受試化合物以0.5％甲基纖維素水溶液懸浮，按500、1,000mg/20ml/kg的用量投與。結(jié)果，化合物1在投與1g/kg時(shí)無死亡例。急性毒性(大鼠)使用雌雄性大鼠(SD系，280-360g)，一組5只。從前一日(16-18小時(shí)前)起禁食，然后用胃管強(qiáng)制性經(jīng)口投與1g/kg化合物1，觀察以后一周的死亡率。其結(jié)果，無死亡例。本發(fā)明化合物的毒性非常低。實(shí)施本發(fā)明的最佳狀態(tài)以下揭示本發(fā)明的制造例和實(shí)施例(制劑例)，對本發(fā)明作更詳細(xì)的說明，但本發(fā)明并不限于這些制造例和實(shí)施例。制造例12-氨基-4-[N，N-二(2-羥基乙基)氨基]-6-(2，5-二氯苯基)-1，3，5-三嗪(化合物1)在二乙醇胺9.2g、N，N-二甲基甲酰胺200ml、無水碳酸鉀15g的混合液中，于室溫下邊攪拌邊加入2-氨基-4-氯-6-(2，5-二氯苯基)-1，3，5-三嗪20g，室溫?cái)嚢?小時(shí)。于攪拌下在反應(yīng)液中加入水2升，攪拌1小時(shí)，將析出的結(jié)晶濾出、水洗、干燥，得到白色結(jié)晶24g。將其從甲醇中重結(jié)晶，濾取結(jié)晶，干燥，得到目的化合物白色結(jié)晶21g。熔點(diǎn)199-200℃元素分析值(C13H15Cl5N5O2)計(jì)算值(％)C45.36H4.39N20.35測定值(％)C45.58H4.33N20.46制造例22-氨基-4-(2，5-二氯苯基)-6-(3-羥基甲基-1-吡咯烷基)-1，3，5-三嗪鹽酸鹽(化合物2)用3-羥基甲基吡咯烷代替二乙醇胺，與制造例1同樣地進(jìn)行反應(yīng)，將所得的化合物溶于甲醇中，于冷卻下在其中加入20％HCl/甲醇，將溶劑濃縮至約1/10，濾取析出的結(jié)晶，得到目的化合物，為白色結(jié)晶。熔點(diǎn)241-243℃元素分析值(C14H15Cl2N5O·HCl)計(jì)算值(％)C44.64H4.28N18.59測定值(％)C44.47H4.34N18.68制造例32-氨基-4-(2，5-二氯苯基)-6-〔(2S，4R)-2-羥基甲基-4-羥基-1-吡咯烷基〕-1，3，5-三嗪(化合物3)用(2S，4R)-4-羥基-2-羥基甲基吡咯烷代替二乙醇胺，與制造例1同樣地進(jìn)行操作，得到目的化合物，為白色粉末。元素分析值(C14H15Cl2N5O2·1/2EtOH·1/2H2O)計(jì)算值(％)C46.40H4.93N18.04測定值(％)C46.36H4.80N18.24H-NMR(CDCl3)δ1.7～2.0(1H，m)，2.1～2.25(1H，m)，2.67(1H，bs)，3.4～3.85(3H，m)，3.95～4.25(1H，m)，4.35～4.55(2H，m)，5.53(2H，d，J＝11Hz)，7.25～7.4(2H，m)，7.65(1H，d，J=19Hz).制造例42-氨基-4-(2，5-二氯苯基)-6-〔(2S，4R)-2-羥基甲基-4-羥基-1-吡咯烷基〕-1，3，5-三嗪(化合物3，另一方法)(工序1)用反-4-羥基-L-脯氨酸甲酯代替二乙醇胺，與制造例1同樣地操作，得到2-氨基-4-(2，5-二氯苯基)-6-〔(2S，4R)-2-甲氧羰基-4-羥基-1-吡咯烷基〕-1，3，5-三嗪白色粉末。(工序2)將氫化鋁鋰20.9g和四氫呋喃1000ml在冰冷卻下進(jìn)行攪拌，在0～5℃緩緩滴加工序1所得化合物100g的四氫呋喃300ml溶液，在同樣溫度下反應(yīng)3小時(shí)。將過剩的氫化鋁鋰分解，濾去不溶物，濾液濃縮。將殘留物溶于乙酸乙酯，水洗、干燥、濃縮，得到白色固體物質(zhì)。將其在乙酸乙酯中重結(jié)晶，濾取、干燥，得到目的化合物白色結(jié)晶74.7g。熔點(diǎn)171-173℃元素分析值(C14H15Cl2N5O2)計(jì)算值(％)C47.21H4.24N19.66測定值(％)C47.19H4.32N19.55〔α〕20D=-67.80°(MeOH，c=1.053)制劑例1取2g化合物1，與乳糖70g、玉米淀粉30g混合均勻，在其中加入16％羥丙基纖維素溶液25ml，攪拌造粒。將其干燥后，整粒，加入硬脂酸鎂2g、滑石粉2g，混合，用旋轉(zhuǎn)式壓片機(jī)壓片，制成片劑。處方1片110mg中化合物12mg乳糖70mg玉米淀粉30mg羥丙基纖維素4mg硬脂酸鎂2mg滑石粉2mg制劑例2取4mg化合物1，與乳糖996mg混合均勻，制成散劑。產(chǎn)業(yè)上利用的可能性如上所述，本發(fā)明化合物與對照化合物相比，具有好得多的血管新生抑制作用，而且是毒性低、安全性好的化合物，因此對于包括人在內(nèi)的哺乳動物，在動脈硬化、腫瘤、卡波濟(jì)肉瘤、糖尿病性視網(wǎng)膜病、慢性風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等的治療和預(yù)防上是有用的。權(quán)利要求1.下式(I)所示化合物或其鹽或它們的溶劑合物為有效成分的血管新生抑制劑式中，R1表示氫、可被取代的烷基、芳烷基、芳基鏈烯基或芳基；R2表示可被取代的烷基、芳烷基、芳基鏈烯基或芳基；或R1和R2與鄰接的N一起，以NR1R2的形式表示4-8元環(huán)狀胺基，此環(huán)狀胺基除了該氮原子外還可含有N、O或S作為環(huán)構(gòu)成原子，并可再被取代。2.如權(quán)利要求1所述的血管新生抑制劑，其中R1表示(1)氫，(2)可被選自羥基、烷氧基、氨基、一烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、4-8元環(huán)狀胺基、羧基、氨基甲?；?、芳氧基、酰氧基的取代基取代的烷基，(3)芳烷基，(4)芳基鏈烯基或(5)芳基；R2表示(1)可被選自羥基、烷氧基、氨基、一烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、4-8元環(huán)狀胺基、羧基、氨基甲?；⒎佳趸?、酰氧基的取代基取代的烷基，(2)芳烷基，(3)芳基鏈烯基或(4)芳基。3.如權(quán)利要求1所述的血管新生抑制劑，其中NR1R2為可被選自羥基、氧代、羧基、烷基、羥基烷基、芳氧基烷基、氨基烷基、烷基磺酰胺基烷基、烷基磺酰胺基、烷基磺酰芳烷基、烷基磺酰基、芳基、芳烷基和2-嘧啶基的取代基取代的4-8元環(huán)狀胺基。4.如權(quán)利要求1所述的血管新生抑制劑，其中R1、R2表示相同或不同的羥基烷基或NR1R2為可被取代的吡咯烷-1-基、哌啶子基或嗎啉代。5.如權(quán)利要求1所述的血管新生抑制劑，其中NR1R2為可被選自羥基、羥基烷基、氧代、烷基、氨基或氨基烷基取代的吡咯烷-1-基。6.如權(quán)利要求1所述的血管新生抑制劑，以選自2-氨基-4-〔N，N-二(2-羥基乙基)氨基〕-6-(2，5-二氯苯基)-1，3，5-三嗪、2-氨基-4-(2，5-二氯苯基)-6-(3-羥基甲基-1-吡咯烷基)-1，3，5-三嗪鹽酸鹽及2-氨基-4-(2，5-二氯苯基)-6-〔(2S，4R)-2-羥基甲基-4-羥基-1-吡咯烷基〕-1，3，5-三嗪的化合物為有效成分。7.血管新生的抑制方法，其特征在于將權(quán)利要求1-6所述的化合物的有效量投與人或動物。8.權(quán)利要求1-6所述化合物在制備血管新生抑制劑組合物上的應(yīng)用。9.以權(quán)利要求1-6所述化合物為有效成分的動脈硬化治療劑。10.以權(quán)利要求1-6所述化合物為有效成分的抗腫瘤劑。11.以權(quán)利要求1-6所述化合物為有效成分的卡波濟(jì)肉瘤治療劑。12.以權(quán)利要求1-6所述化合物為有效成分的糖尿病性視網(wǎng)膜病治療劑。13.以權(quán)利要求1-6所述化合物為有效成分的慢性風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療劑。全文摘要本發(fā)明涉及如通式(Ⅰ)所示化合物或其鹽或它們的溶劑合物為有效成分的血管新生抑制劑式中,R文檔編號A61K31/53GK1181702SQ96193328公開日1998年5月13日申請日期1996年4月19日優(yōu)先權(quán)日1995年4月20日發(fā)明者上田房雄,加藤文敬申請人:日本新藥株式會社