專利名稱：一氧化氮的供體或者一氧化氮的抑制劑調(diào)節(jié)子宮頸擴張和伸展的用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及應用一氧化氮的供體和/或底物或者一氧化氮的抑制劑調(diào)節(jié)子宮頸的擴張和伸展。
分娩(胎兒從子宮內(nèi)排出體外)需要子宮肌層、子宮平滑肌的收縮，和子宮頸周圍組織的軟化，使子宮頸能夠伸展和擴張到足夠程度以便讓胎兒排出體外。這種軟化被稱為″成熟″。
目前優(yōu)選的使子宮頸成熟的方法是應用前列腺素E2、把它做成一種陰道用凝膠或者片劑或者做成一種放置在子宮中的凝膠。對應用前列腺素E2的一個擔心是有可能過度刺激子宮，這將導致在子宮頸成熟以前，也就是在舒適或者安全的分娩之前，子宮肌層就超強收縮。理想的制劑將能軟化子宮頸、使子宮頸管消失而不引起子宮肌層收縮。這樣隨后的子宮肌層收縮(如果有必要可用小劑量的前列腺素誘導)能在最小阻力的情況下把嬰兒分娩出。有足夠的動物實驗資料表明抗孕激素藥如RU486可以滿足這些要求，但該藥的問題是它有相關的抗糖皮質(zhì)激素的活性，而這種活性對胎兒也許是不利的。
在生物學和醫(yī)學中最令人興奮的近期進展之一是發(fā)現(xiàn)了一氧化氮由內(nèi)皮細胞產(chǎn)生，它參與調(diào)節(jié)血管緊張性、血小板聚集、神經(jīng)傳導和免疫反應(Furchgott and Zawadzki，1980；Moncada，Palmer and Higgs，1991；Ignarro，1991)，一氧化氮是一個重要的肌肉平滑肌舒張介質(zhì)(Montada，Palmer and Higgs，1991)，以前被稱為EDRF(內(nèi)皮衍生舒張因子)(Furchgott and Zawadzki，1980；Moncada，Palmer and Higgs，1991)。
一氧化氮是在至少不同類型的黃素酶(一氧化氮合成酶)的作用下，由L-精氨酸的胍基氮氧化脫氨而合成的(Montada，Palmer and Higgs，1991)。
一氧化氮也可以通過應用不同的一氧化氮供體，如硝普鈉、硝酸甘油、甘油三硝酸酯、SIN-1、單硝酸并山梨醇酯、二硝酸異山梨醇酯等產(chǎn)生。
有實驗表明，L-精氨酸的同系物NG-硝基-L-精氨酸甲基酯(L-NAME)、NG-單乙基-L-精氨酸(LMMA)、N-亞氨基乙基-L-鳥氨酸(L-NIO)、L-單甲基-精氨酸(L-NNMA)、L-NG-甲基精氨酸(L-NMA)、Nw-硝基-L-精氨酸(L-NA)和氨基胍可競爭性地抑制一氧化氮的合成。
非妊娠的豚鼠給予L-NAME處理導致子宮收縮增強。因此，刺激子宮收縮的一氧化氮合成酶的抑制表明一氧化氮的強直性釋放可維持子宮處于一種靜息狀態(tài)。相似地，妊娠的豚鼠給予L-NAME處理可誘導早產(chǎn)。另一方面，大鼠子宮條用L-精氨酸體外處理可抑制它的收縮。這些研究表明由子宮產(chǎn)生的一氧化氮可抑制子宮的收縮以及一氧化氮合成的阻滯可導致妊娠和非妊娠動物肌肉的收縮增強。因此，一氧化氮的底物或者供體在防止子宮的收縮方面具有治療使用價值而一氧化氮的抑制劑在刺激子宮的收縮方面是有效的。
在用恒河猴的初步實驗的基礎上，Jennings等(The Journal ofMaternal Fetal Medicine 2170-175(1993))已提出在妊娠期間一氧化氮在子宮的靜息狀態(tài)中也許是重要的，外源性的一氧化氮在控制早產(chǎn)方面也許是有用的。
Natuzzi等證明一氧化氮合成酶(NOS)在妊娠大鼠子宮內(nèi)的多種結構中具有活性(Biochem.and Biophys.Res.Commun.，194，NO.1，(1993))，因此他們得出結論，NOS存在于妊娠大鼠子宮的多種結構中。分娩時NOS活性降低，這提示在妊娠期間一氧化氮可能有助于子宮有收縮力靜息狀態(tài)的維持。
形態(tài)學研究也已顯示NOS(NADPH-硫鋅酰胺脫氫酶，檢測所有的一氧化氮合成酶的同工酶的一種組織化學方法)和一氧化氮代謝酶如超氧化物岐化酶在子宮中的存在(Papka et al.，Neuroscience Letters 147(1992)；Shiotani et al.，Acta Histochem Cytochem.2657-64(1993))。
現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)妊娠豚鼠在交配后第48～49天(足孕期67+3天)皮下給予L-NAME可出乎預料地導致子宮頸的伸展和擴張減小。
妊娠大鼠分娩時比妊娠18天時子宮頸產(chǎn)生的一氧化氮明顯增加(參數(shù)，體外檢測亞硝酸鹽和硝酸鹽的釋放)。相反在大鼠妊娠的過程中子宮(子宮肌)的一氧化氮的產(chǎn)生卻減少?？乖屑に厮巓napristone增加妊娠大鼠子宮頸中一氧化氮的產(chǎn)生還需進一步證實，但它對子宮(子宮肌層)的一氧化氮的產(chǎn)生具有抑制效應。用相同劑量的onapristone能誘導大鼠的子宮頸成熟。
這些發(fā)現(xiàn)表明●妊娠豚鼠給予一氧化氮的抑制劑例如L-NAME可抑制宮頸成熟但可刺激子宮的收縮；●妊娠子宮(子宮肌層)中一氧化氮的產(chǎn)生(一氧化氮對子宮肌層具有舒張效應)在妊娠過程期間減少，但在正常和抗孕激素劑誘導的分娩期間子宮頸中一氧化氮的產(chǎn)量卻增加；●一氧化氮的抑制劑如L-NAME對子宮的收縮性和子宮頸的不同效應是由于一氧化氮系統(tǒng)的不同作用或者在子宮肌層和子宮頸中存在不同類型的同工酶所致；●一氧化氮系統(tǒng)在子宮頸的控制方面起著重要的作用，在子宮頸的成熟過程期間，一氧化氮的產(chǎn)生增加。
因此，可以作如下結論(a)一氧化氮的供體和/或底物的局部應用可用于誘導子宮頸成熟或者(b)一氧化氮的抑制劑的局部應用可用于防止或者抑制子宮頸成熟，例如用于子宮頸機能不全(宮頸成熟太早)或者早產(chǎn)的治療。
所以，本發(fā)明涉及應用一氧化氮的供體和/或底物或者一氧化氮抑制劑制備調(diào)節(jié)子宮頸的擴張和/或伸展的藥物。
本發(fā)明涉及以下用途(a)應用至少一個一氧化氮的供體制備用于誘導宮頸成熟的局部給藥藥物(例如子宮頸內(nèi)或者陰道內(nèi))或者(b)應用至少一個一氧化氮的抑制劑制備用于抑制宮頸成熟從而治療子宮頸機能不全或者早產(chǎn)的局部給藥藥物(例如子宮頸內(nèi)或者陰道內(nèi))。
與本發(fā)明目的相適合的(a)一氧化氮的供體和/或底物或者(b)一氧化氮的抑制劑是本領域熟練技術人員都知道的具有所需特性的全部化合物。在“相關技術的描述”中提到的化合物是優(yōu)選的。
一氧化氮的供體和/或底物(a)能進一步地和(i)至少一種抗孕激素劑、前列腺素和/或細胞因子聯(lián)合應用。
抗孕激素劑的例子有onapristone(11β-〔4-(二甲氨基)苯基〕-17α-羥基-17β-(3-羥丙基)-13α-雌甾-4，9-二烯-3-酮)、RU486(11β-4-(二甲氨基)苯基〕-17β-羥基-17α-(1-丙炔基)雌甾-4，9-二烯-3-酮)、(z)-11β-〔4-(二甲氨基)苯基〕-17β-羥基-17α-(3-羥基-1-丙烯基)雌甾-4-烯-3-酮(EP-A0404283)、11β-(4-乙酰苯基)-17β-羥基-17α-(1-丙炔基)雌甾-4，9-二烯-3-酮(EP-A0190759)、4′，5′-二氫-11β-〔4-(二甲氨基)苯基〕-6β-甲基螺環(huán)〔雌甾-4，9-二烯-17β，2′(3′H)-呋喃〕-3-酮、4′，5′-二氫-11β-〔4-(二甲氨基)苯基〕-7β-甲基螺環(huán)〔雌甾-4，9-二烯-17β，2′(3′H)呋喃〕-3-酮、11β-(4-乙酰苯基-19，24-二降-17，23-環(huán)氧-17α-膽汁-4，9，20-三烯-3-酮、(E)-11β-〔4-〔〔(乙酰氧基)亞氨基〕甲基〕苯基〕-17β-甲氧基-17α-(甲氧甲基)雌甾-4，9-二烯-3-酮、(E)-11β-〔4-〔〔〔(乙氧羰基)氧〕亞氨基〕甲基〕苯基〕-17β-甲氧基-17α-(甲氧甲基)雌甾-4，9-二烯-3-酮和熟練技術人員非常了解的其它許多具有競爭性拮抗黃體酮活性的化合物。
例如前列腺素前列磺酮(PGE2)或者前列甲酯可被應用。
細胞因子中最重要的代表性物質(zhì)是白細胞介素-8或者白細胞介素-1β上面列舉的這些化合物不應被認為是排除其它的化合物。
一氧化氮的抑制劑(b)可進一步和(ii)至少一種孕激素和/或環(huán)氧合酶抑制劑(例如COX-1-和COX-2-抑制劑)聯(lián)合應用。
對于孕激素，天然產(chǎn)生的黃體酮為優(yōu)選，但也可應用本領域技術人員知道的可用于口服避孕藥的許多合成的孕激素中的一個或者更多，例如左旋18-甲基炔諾酮、環(huán)丙氯地孕酮、甲地妊娠素、drospirenone、甲烯甲炔諾、3-酮基-甲烯甲炔諾、地諾孕素等。
環(huán)氧合酶抑制劑可以阿司匹林(COX-1和COX-2抑制劑)為例。
COX-2抑制劑的其它例子可見Robert Aslanian，Nicholas I.Carruthers，James J.Kaminski；Cyclooxygenase 2A Novel Targetfor Therapeutic Intervention，EXP.Opin.Invest.Drugs，1994，3(12)，1323-1325中所述，例如化合物Sc-58125(GD Searle)、DuP-697flusolide[6-(2，4-二氟苯氧基)-5-甲磺酰氨基-1-2，3-二氫-1-茚酮〕、Sc-57666(GD Searle)、L-745 337(Merck Frosst)、NS-398(Monsanto)。
一方面(a)本發(fā)明提供了將本發(fā)明中化合物用于分娩和流產(chǎn)。在妊娠的情況下，子宮頸被預先處理。妊娠期間的各種激素使子宮頸發(fā)生變化，然后子宮頸傾向于對其它的刺激物作出有效的應答。
本發(fā)明還進一步提供了將本發(fā)明的(a)中包括的各種化合物用于外科手術和診斷。因此，本發(fā)明的(a)中的化合物能選擇性地和(i)中提到的各種化合物聯(lián)合應用，制備用于以下適應癥的藥物(A)足孕分娩的誘導(正常出生的時間，可與用催產(chǎn)素或者類似的藥物的系列處理聯(lián)合應用)，(B)與病理的懷孕有關的分娩誘導(例如致死的畸形)；(優(yōu)選第二個3個月(中孕)流產(chǎn))，(C)與子宮內(nèi)死胎有關的分娩誘導，(D)流產(chǎn)的誘導(優(yōu)選第一個3個月(早孕)流產(chǎn))(E)早產(chǎn)的誘導，(F)由于子宮頸難產(chǎn)而造成過期分娩的處理，(G)非懷孕婦女或者懷孕婦女的宮頸成熟的誘導以幫助外科手術或診斷過程，和(H)對將進行體外受精的婦女的宮頸成熟的誘導。
另一方面(b)本發(fā)明提供了本發(fā)明的這些化合物在需要防止太早宮頸成熟或者子宮頸必須保持剛性的適應癥中的用途。因此，本發(fā)明(b)中的化合物可選擇性地與(ii)提到的各種化合物聯(lián)合應用，制備用于以下適應癥的藥物(I)子宮頸機能不全的治療和(K)有危險的早產(chǎn)的治療原則上，這些化合物可用于婦女和非人的雌性動物。人是這種治療的優(yōu)選群。
一氧化氮的供體和/或底物(a)或者一氧化氮的抑制劑(b)可采用能使藥物到達子宮頸的任何方式給藥，包括直接或者間接的。因此，可以很方便地在陰道內(nèi)或者直接送到子宮頸應用，例如典型的是做成一種凝膠或霜劑。也可以把它注入子宮頸組織或者用一鈍針注入子宮頸管。也可以在羊膜腔外應用，即用一導管在子宮壁和羊膜腔之間應用。
優(yōu)選的制劑是一種凝膠或者霜劑，但可把它制成可軟化的膠囊、脂質(zhì)體或者一種緩釋制劑，或者做成一種水溶液，例如一種生理鹽水或者含蛋白質(zhì)的溶液。這些制劑用本領域中等程度技術人員知道的方法就能配制成。
如果想要聯(lián)合應用在(a)和(i)中提到的化合物，可以把抗孕激素藥配制成全身或者局部給藥的制劑。
前列腺素和細胞因子最好是配制成局部應用的制劑。
如果想要聯(lián)合應用在(b)和(ii)中提到的化合物，可以把(ii)中的化合物配制成局部或者全身應用的制劑。
在(i)和(ii)中的化合物的制劑可以用本技術領域中熟練技術人員知道的方法配制成。
本發(fā)明的(a)中的化合物顯示有誘導宮頸成熟的藥理活性，因此，它們有可能作為一種藥物使用。
本發(fā)明的(b)中的化合物顯示有防止宮頸成熟的藥理活性，因此，它們有可能作為一種藥物使用。
宮頸成熟的測定在實施例1中加以描述。
當硝普鈉和其它的一氧化氮的供體以濃度為大約0.03mM-100mM(1.8μg-6mg/應用)局部給予妊娠豚鼠時，顯示對宮頸成熟有作用。當然，對上面從(A)到(F)中提到的這些適應癥，合適的劑量將依一些因素而變化，例如所選用的本發(fā)明的化合物、宿主、給藥方式和被處理情況的性質(zhì)和嚴重性，但是，一般來說，動物局部使用濃度為0.03～100mM之間時將能獲得滿意的結果，優(yōu)選濃度大約10mM。
本發(fā)明化合物可在子宮頸最后成熟前6小時至48小時給藥。宮頸成熟可以通過應用有催產(chǎn)素活性的化合物誘導分娩的方式進行。本發(fā)明的化合物可以以幾小時或者一天為間隔給予一個或多個劑量。這些化合物可以通過任何常規(guī)途徑給藥，特別是以凝膠，軟膏或者局部注射劑(濃度大約為0.03～100mM)的形式給予。
當硝普鈉和其它的一氧化氮的供體以濃度為大約0.03mM～100mM(1.8μg-6mmg/應用)給予非妊娠的雌性豚鼠時顯示對宮頸成熟有作用。對上面從(G)至(H)中提到的適應癥，合適的劑量將依一些因素而發(fā)生變化，例如所選用的本發(fā)明的化合物、宿主、給藥方式和被處理情況的性質(zhì)和嚴重性。當然，一般來說，當劑量為大約0.03mM-100mM(1.8μg-6mmg/應用)時，在動物上將能獲得滿意的結果，優(yōu)選的濃度為大約10mM。
這些化合物可以在子宮頸最終成熟前24小時或者48小時給予。這些化合物可以以幾小時或者一天為間隔給予一個或者多個劑量。本發(fā)明的這些化合物可以通過任何常規(guī)途徑給予，特別是以凝膠，軟膏或者局部注射劑的形式給予。
典型的一氧化氮-底物和一氧化氮-供體的人用劑量范圍舉例如下L-精氨酸 500mg-10g/天硝普鈉 范圍500-2000μg/kg/天硝酸甘油0.5-10mg/天單硝酸異山梨醇酯10-100mg/天二硝酸異山梨醇酯10-100mg/天其它的一氧化氮-供體或者一氧化氮-底物是以生物等效量應用。
典型的一氧化氮的抑制劑的劑量范圍舉例如下L-NAME 1至50mg/kg/天L-NIO1至50mg/kg/天L-NA 1至50mg/kg/天L-MMA1至50mg/kg/天L-NG 1至50mg/kg/天L-NMA1至50mg/kg/天氨基胍 0.1至100mg/kg/天其它的一氧化氮的抑制劑是以生物等效量應用。
RU486的劑量范圍 25-600mg/天，口服。
其它的抗孕激素劑是以生物等效量應用。
前列磺酮劑量范圍100-1000μg/天，肌肉或者靜脈注射。
其它的前列腺素如PGE2是以生物等效量應用。
前列腺素也可以凝膠在子宮頸內(nèi)、以凝膠在陰道內(nèi)或者片劑局部應用。
COX-2抑制劑的劑量范圍0.1-100mg/kg/天IL-8的劑量范圍100ng-500μg/天；IL-1β的劑量范圍100ng-500μg/天。
上面提到的那些化合物以外的其它化合物的生物等效量可以用實施例中公開的對子宮頸引起類似效應的量以及在其它類似的條件下特殊公開的量的測定方法進行測定。
附圖支持本發(fā)明的結果，其說明如下

圖1表示硝普鈉對妊娠豚鼠宮頸成熟的效應。動物按照實施例1中描述的方法進行處理。上圖表示在伸展性測定期間的最初擴張(用毫米表示)；下圖證明了對伸展性(回歸曲線的斜率)的效應。數(shù)據(jù)用箱圖來表示。垂直線表示從最低量到最高量的范圍。箱的高度、水平線和星號分別描述內(nèi)四分范圍、中位數(shù)和平均數(shù)的值。
圖2表示L-NAME對妊娠豚鼠子宮頸的效應。上圖表示在伸展性測定期間的最初擴張(用毫米表示)；下圖證明了對伸展性(回歸曲線的斜率[N/mm])的效應。數(shù)據(jù)用如圖1描述的箱圖表示。
圖3至圖5表示大鼠給予L-NAME(500mg/只)或者與未給予時子宮頸的伸展性。
圖6表示在給予L-NAME治療期間，分娩持續(xù)時間和幼畜出生間隔(幼畜出生之間的時間)的延長。
圖7至圖9表示在正常子宮頸擴張期間
，給予黃體酮
，抗孕激素
和LPS
后的一氧化氮的產(chǎn)量。
實施例1一氧化氮對妊娠豚鼠子宮頸成熟的影響(a)一般部分子宮頸成熟的測定在豚鼠交配后的第44天取出整個子宮頸。伸展性的研究是用改進的DOWNING，S.J.and SHERWOOD，O.D.(1985)Endocrinology 1161215-1220的方法進行的。
分離出的子宮頸被安裝在插入子宮頸管的兩鉤之間。一個鉤固定，向上移動另外一個鉤的同時用1Hz的抽樣率測定張力和移位。首先每個子宮頸被延伸直到張力達到50mN為止。記錄下相關的移位，這個移位將被稱為最初擴張。因此，子宮頸的原始的內(nèi)周是最初擴張的兩倍。
通過移動鉤0.1毫米使子宮頸被延伸，然后把鉤固定，讓子宮頸松馳2分鐘。重復這種操作直到子宮頸破裂或者至少已經(jīng)達到了產(chǎn)生點，即負荷的包膜對時間曲線變成了非線性(參見CONRAD，J.T.and UELAND，K.(1979)Am J Obste Gynecol.13311-13)(b)分析為了測定子宮頸的伸展性，我們研究了張力對伸直率的曲線。這條曲線是由每個延伸階段采用的最大張力和相應的伸直率得到的。它被定義為用最初擴張除移位。曲線線性部分的回歸直線的斜率被用來定量處理對子宮頸伸展性的效應。斜率減小表示子宮頸伸展性增強(成熟效應)。
(c)特殊的部分交配后第42天的妊娠豚鼠(每組動物數(shù)為6)分別在第42天和第43天由子宮頸內(nèi)給予含0.03mM硝普鈉的凝膠200μl(3％的羥基纖維素)，一天2次(上午900和下午300)。交配后第44天測定子宮頸的伸展性(參數(shù)回歸直線的斜率，原始擴張)。
凝膠用下述方法給予把陰道窺器引入陰道后，用大約100mm長的鈍針把含有或者不含有SNP的纖維素凝膠200μl注入子宮頸管。一部分凝膠沿子宮頸管移動到子宮頸管外口發(fā)揮作用。這種凝膠有以下制劑它包括含3％(w/v)的羥乙基纖維素的于磷酸鹽緩沖生理鹽水中的本發(fā)明的化合物(參見L.HUDSON and F.C.HAY(1980)Practical Immunology，sec.edition)。
對照組給予于磷酸鹽緩沖生理鹽水中的含3％(w/v)羥乙基纖維素的凝膠。
子宮頸的力學特性用上面描述的方法進行測定。這種方法可在等體積條件下對子宮頸的擴張和子宮頸的伸展性進行定量。
(d)結果實施例1的結果表示在圖1中。上圖表示回歸直線的斜率，該斜率是子宮頸的伸展性的參數(shù)。下圖表明了用毫米表示的子宮頸的擴張。
這些結果證明由局部給予一氧化氮的供體硝普鈉(SNP)后能極大地促進妊娠豚鼠的子宮頸成熟。
實施例2硝普鈉對妊娠豚鼠子宮頸形態(tài)學的影響。
在交配后的第42～43天由子宮頸內(nèi)給予含3％羥基纖維素的于磷酸鹽緩沖液0.2ml中的硝普鈉(0.1M)，每天兩次。交配后第44天用形態(tài)學的評價方法測定其效應。對照組動物給予賦形劑。所有用于形態(tài)學評價的子宮頸都是在通過血管灌注原位固定后獲得的。灌注過程是在交配后第50天上午9～10點由肌肉注射戊巴比妥(60mg/ml)1.5ml引起的麻醉狀態(tài)下進行的。把一引流管插入位于腎動脈分支下的腹主動脈中，用pH7.4的二甲胂酸鹽緩沖液灌注60-90秒，然后用2.5％的戊二醛在pH7.4的二甲胂酸鹽緩沖液中在80～100厘米水柱壓力下固定6～10分鐘。切割和清除子宮頸的鄰近組織，然后在4℃下用相同的固定液固定。用緩沖液沖洗后，所需組織用冷的1％OsO4二甲胂酸鹽緩沖液后固定24小時，用一梯度系列的乙醇脫水，用Araldite環(huán)氧樹脂包埋。從每一個樣本上切下橫向半薄觀察切片，厚度為1～2μm，用氨基甲苯藍硼酸鈉染色后用光學顯微鏡進行觀察。這樣使得能夠觀察整個子宮頸，因此提供了子宮頸中各種細胞群的分布全貌。此后，從橫切子宮頸塊上修剪下一些小體積的樣本(1～2mm3)，在Reichert OmU3切片機上用玻璃刀或者鉆石刀切成超薄片，然后安裝在單槽包裹Formavar的銅質(zhì)濾線柵上。用乙酸雙氧鈾和醋酸鉛染色后，用Zeiss EM-10電子顯微鏡在60-80 kW下進行觀察。
電子顯微鏡研究揭示一個明顯的宮頸成熟伴隨著膠原纖維的溶解、基質(zhì)水腫、動脈擴張和巨噬細胞、淋巴細胞和粒細胞的浸潤。同時也存在許多肥大細胞。SNP對形態(tài)學的影響與在足孕正常宮頸成熟期間或者在用抗孕激素劑Onapristone或者細胞因子IL-8治療后觀察到的相類似。
實施例3L-NAME對妊娠豚鼠子宮頸的影響妊娠豚鼠在交配后第48天和第49天皮下給予L-NAME(12.5mg/天/只)，在交配后第50天，即在給藥開始后的第2天測定子宮頸的伸展性和擴張。測定是按照實施例1描述的方法進行。本實施例的結果表示在圖2中。最初擴張和子宮頸的伸展性(斜率增大)與對照組相比都下降。
實施例4L-NAME對妊娠豚鼠分娩的影響在交配后第50天(孕期＝交配后67+2天)皮下植入含有L-NAME(組17毫克；組212.5和組325毫克/只/天)的微型滲透泵。對照組給予賦形劑組3中的全部動物(5/5)和組2中的3只動物(3/5)在給藥的8天之內(nèi)早產(chǎn)(在交配后第65天之前)。
這個研究表明L-NAME是通過子宮收縮的激活引起豚鼠早產(chǎn)。當然，在給予L-NAME的動物上也可觀察到持續(xù)數(shù)小時的過期分娩。這種現(xiàn)象是宮頸成熟不足的間接指征，這在交配后第50天通過利用子宮頸的伸展性測定進行的一個單獨的實驗中得到了證明(圖2)。
實施例5L-NAME對大鼠分娩的影響基于如實施例4描述的一個類似實驗的圖6顯示在給予妊娠大鼠L-NAME(50毫克/天)期間，分娩的持續(xù)時間和幼畜出生的間隔，即單個幼畜出生之間的時間明顯延長。這清楚地表明一氧化氮的抑制劑可防止大鼠宮頸成熟。
實施例6大鼠在正常子宮頸擴張期間以及給予黃體酮、抗孕激素劑和LPS后一氧化氮的產(chǎn)生。
(a)方法以體外測定的子宮頸和子宮組織中總的亞硝酸鹽的累積表示的一氧化氮產(chǎn)生活性是用Yallampalli C，Garfield RE，Byam-Smith M(1993)Nitric oxide inhibits uterine contractility during pregnancy but notduring delivery，Endocrinology 1331899-1902中描述的方法評估的。簡言之，從分娩的大鼠(妊娠22天至23天)，給予Onapristone的大鼠(在交配后第18天皮下給予10毫克)和在交配后第18至21天給予賦形劑的大鼠(對照)中獲得的小片子宮頸或者子宮組織在含有或者不含有L-NAME的最低基本培養(yǎng)基中37℃孵育24小時。培養(yǎng)基中總的亞硝酸鹽的含量用Griess試劑測定。
(b)結果子宮(子宮肌層)組織中亞硝酸鹽的產(chǎn)生從分娩動物獲得的子宮樣品中的亞硝酸鹽的產(chǎn)生與從妊娠18天的動物獲得的相比極大地降低(Yallampalli et al.Loc，cit)。
子宮頸組織中亞硝酸鹽的產(chǎn)生(圖7)從分娩大鼠獲得的子宮頸中的一氧化氮的產(chǎn)生與在妊娠大鼠交配后第18至22天測定的相比顯著增加。
Onapristone對子宮頸中一氧化氮產(chǎn)生的影響(圖8)在交配后第19天測定的一氧化氮的產(chǎn)量與對照組動物相比顯著增加到自發(fā)分娩動物中可見的水平。
實施例7用一氧化氮的供體進行宮頸成熟的前誘導一位懷孕的婦女(大約30歲，50-80公斤)，在其懷孕的第38周由于先兆子癇而被分類為需要誘導分娩，由子宮頸內(nèi)給予濃度為0.01～0.1mM的硝普鈉凝膠，一天2次，以期獲得宮頸成熟。第二天用催產(chǎn)素靜脈輸注進行分娩誘導。
實施例8通過局部應用L-NAME治療子宮頸機能不全一位懷孕的婦女(大約30歲，50-80公斤)，在其懷孕的第26周顯示子宮頸機能不全(子宮頸的擴張、子宮頸的軟化)，由子宮頸內(nèi)或者陰道內(nèi)給予濃度為0.1～50毫克/毫升的L-NAME凝膠，一天2至3個劑量，直到子宮頸機能不全的癥狀改善為止。
權利要求
1.應用一氧化氮的供體和/或底物或者一氧化氮的抑制劑制備用于調(diào)節(jié)子宮頸的擴張和/或伸展的藥物。
2.按照權利要求1，應用(a)至少一種一氧化氮供體和/或底物制備用于誘導宮頸成熟的由子宮頸內(nèi)或者陰道內(nèi)局部給予的藥物，或者(b)至少一種一氧化氮抑制劑制備用于抑制宮頸成熟治療子宮頸機能不全或者早產(chǎn)由子宮頸內(nèi)或者陰道內(nèi)局部給予的藥物。
3.權利要求2(a)與至少一種抗孕激素劑、前列腺素和/或細胞因子聯(lián)合應用。
4.權利要求2(b)與至少一種孕激素和/或環(huán)氧合酶抑制劑(COX-1和COX-2抑制劑)的聯(lián)合應用。
5.權利要求2或3用于誘導足孕分娩的用途。
6.權利要求2或3用于誘導與病理的妊娠有關的分娩的用途。
7.權利要求2或3用于誘導與子宮內(nèi)死胎有關的分娩的用途。
8.權利要求2或3用于誘導流產(chǎn)的用途。
9.權利要求2或3用于誘導早產(chǎn)的用途。
10.權利要求2或3用于過期分娩處理的用途。
11.權利要求2或3用于誘導非妊娠雌性或者妊娠雌性的宮頸成熟以協(xié)助外科手術或者診斷過程的用途。
12.權利要求2或3用于將進行體外受精處理的雌性的宮頸成熟的誘導的用途。
13.權利要求2或4用于治療子宮頸機能不全的用途。
14.權利要求2或4用于治療有危險的早產(chǎn)的用途。
15.權利要求2，用L-精氨酸、硝普鈉、硝酸甘油、甘油三硝酸酯、SIN-1、單硝酸異山梨醇酯、二硝酸異山梨醇酯中的至少一個作為一氧化氮的底物和/或供體。
16.按照權利要求2，用NG-硝基-L-精氨酸甲基酯(L-NAME)、NG-單乙基-L-精氨酸(L-MMA)、N-亞氨基乙基-鳥氨酸(L-NIO)、L-單甲基-L-精氨酸(L-NNMA)、L-NG-甲基精氨酸(L-NMA)、Nw-硝基-L-精氨酸和氨基胍中的至少一個作為一氧化氮的抑制劑。
17.按照權利要求3，用Onapristone(11β-[4-(二甲氨基)苯基]-17α-羥基-17β-(3-羥丙基)-13α-雌甾-4，9-二烯-3-酮)、RU486(11β-[4-二甲氨基)苯基]-17β-羥基-17α-(1-丙炔基)雌甾-4， 9-二烯-3-酮)、(Z)-11β-[4-(二甲氨基)苯基)]-17β-羥基-17α-(3-羥基-1-丙烯基)雌甾-4-烯-3-酮(EP-A0404283)、11β-(4-乙酰苯基)-17β-羥基-17α-(1-丙炔基)雌甾-4，9-二烯-3-酮(EP-A0190759)、4’-5’-二氫-11β-[4-(二甲氨基)苯基]-6β-甲基螺環(huán)[雌甾-4，9-二烯-17β，2’(3’H)-呋喃]-3-酮、4’，5’-二氫-11β-[4-(二甲氨基)苯基]-7β-甲基螺環(huán)[雌甾-4，9-二烯-17β，2’(3’H)-呋喃]-3-酮、11β-(4-乙酰苯基)-19，24-二降-17，23-橋氧-17α-膽汁-4，9，20-三烯-3-酮、(E)-11β-[4-[[(乙?；趸?亞氨基]甲基]苯基]-17β-甲氧基-17α-(甲氧甲基)雌甾-4，9-二烯-3-酮、(E)-11β-〔4-〔〔〔(乙酯基)氧〕亞氨基〕甲基〕苯基〕-17β-甲氧基-17a-(甲氧甲基)雌甾-4，9-二烯-3-酮中的至少一個作為抗孕激素劑。
18.按照權利要求3，用PGE2或者前列甲酯作為前列腺素。
19.按照權利要求3，用白細胞介素-8或者白細胞介素-1β作為細胞因子。
20.按照權利要求4，用黃體酮作為一個孕激素。
21.按照權利要求4，用阿司匹林作為環(huán)氧合酶的抑制劑。
22.按照權利要求4，用Flusolide作為COX-2的抑制劑。
全文摘要
本發(fā)明描述了應用一氧化氮的供體和/或底物或者一氧化氮的抑制劑調(diào)節(jié)子宮頸的擴張和伸展。可以應用(a)至少一個一氧化氮供體和/或底物制備用于誘導宮頸成熟的由子宮頸內(nèi)或者陰道內(nèi)局部給予的藥物或者(b)至少一個一氧化氮抑制劑制備用于治療子宮頸機能不全或者早產(chǎn)的由子宮頸內(nèi)或者陰道內(nèi)局部給予的藥物。
文檔編號A61K31/565GK1182366SQ96193433
公開日1998年5月20日 申請日期1996年3月14日 優(yōu)先權日1995年3月14日
發(fā)明者K·奇瓦利茨, R·E·加菲爾德 申請人:舍林股份公司, 德克薩斯州立大學董事會