專利名稱：控制釋放可溶性受體的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于從聚合物基質(zhì)中控制釋放可溶性形式的受體的藥物組合物。
背景技術(shù)：
控制釋放系統(tǒng)在一定的時(shí)期內(nèi)，以預(yù)定的速率釋放藥物，所述時(shí)期可以是幾天到幾年。這些系統(tǒng)比常規(guī)的藥物治療法具有優(yōu)點(diǎn)。例如，在攝入或注射標(biāo)準(zhǔn)劑型之后，血液中藥物的水平升高，達(dá)到峰值，然后下降。由于各種藥物具有一定的治療范圍，高于該范圍產(chǎn)生毒性，而低于該范圍沒有效果。波動(dòng)的藥物水平可以導(dǎo)致產(chǎn)生交替的無效和有毒期。相反，控制釋放的制劑通過一次給藥將藥物維持于所需的治療范圍?？刂漆尫畔到y(tǒng)的其它優(yōu)點(diǎn)包括(i)將藥物定位釋放到身體的特定部位，從而降低全身的藥物水平；(ii)保存易被身體快速破壞的藥物(這對(duì)于生物學(xué)敏感分子例如蛋白質(zhì)特別重要)；(iii)減少了對(duì)隨訪治療的需求；(iv)提高了舒適感；(v)改善了依從性。
通過將藥物置于聚合物中可獲得對(duì)藥物釋放的最佳控制。通常聚合物通過擴(kuò)散，化學(xué)反應(yīng)，或溶劑活化而釋放藥物。
最普遍的釋放機(jī)理是擴(kuò)散，從而藥物從其在聚合物系統(tǒng)中的起始位置遷移到聚合物的外表層，然后遷移到身體中。擴(kuò)散可通過儲(chǔ)液囊來實(shí)現(xiàn)，其中藥物核周圍包裹一層聚合物膜，或?qū)⑺幬锖税鼑诨|(zhì)中，其中藥物穿過聚合物系統(tǒng)均一分布。通過化學(xué)反應(yīng)例如降解聚合物或從聚合物骨架中裂解該藥物，也可以將藥物釋放。
上述機(jī)理也可結(jié)合。基于聚合物的特性(例如，擴(kuò)散控制系統(tǒng)的晶格和孔結(jié)構(gòu)，化學(xué)控制系統(tǒng)的鍵的水解不穩(wěn)定性或單體的疏水性)以及系統(tǒng)的設(shè)計(jì)(例如，厚度和形狀)可以控制從聚合物系統(tǒng)的釋放速率。具有不同釋放機(jī)理的系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn)是各個(gè)系統(tǒng)能夠完成不同的目的。
多年來，控制釋放系統(tǒng)僅能緩慢地釋放低分子量的藥物(＜600)。大分子例如蛋白質(zhì)不被認(rèn)為是合適的候選分子，因?yàn)?，多肽被認(rèn)為太大以致于不能穿過聚合物緩慢地?cái)U(kuò)散，即使在該聚合物吸脹之后?；诤蟹蹱畲蠓肿拥墓腆w疏水聚合物的基質(zhì)能夠在100天以上的時(shí)間內(nèi)使幾乎任何大小的分子釋放的發(fā)現(xiàn)，從而可控制釋放各種各樣的蛋白質(zhì)，多糖和多核苷酸。參見，Langer，1990。
至今為止，為了控制釋放而摻入到聚合物中的蛋白質(zhì)和多肽主要是效應(yīng)分子，例如，胰島素，這與控制釋放與人體中產(chǎn)生的效應(yīng)分子結(jié)合和中和的分子的組合物相反。
腫瘤壞死因子α(TNFα)是有潛效的細(xì)胞因子，可激發(fā)廣譜的生物學(xué)應(yīng)答。TNFα對(duì)許多腫瘤細(xì)胞有細(xì)胞毒性，可用于腫瘤的治療。TNFα加強(qiáng)成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)，并且起著組織重建劑的作用，因此適合于傷口愈合。它進(jìn)一步誘導(dǎo)小鼠的移植腫瘤的出血壞死，加強(qiáng)多型核的嗜中性粒細(xì)胞的吞噬和細(xì)胞毒性，并且調(diào)節(jié)許多蛋白質(zhì)的表達(dá)，包括脂蛋白脂酶，大組織相容性復(fù)合物的I型抗原，和細(xì)胞因子，例如白細(xì)胞介素-1和白細(xì)胞介素-6。已經(jīng)證明TNFα具有抗病毒，細(xì)菌和多細(xì)胞特別是細(xì)胞內(nèi)的寄生蟲效應(yīng)。TNFα似乎對(duì)于正常的免疫應(yīng)答是必要的，但是，量大時(shí)，產(chǎn)生急劇的致病作用。由于TNFα是引起與瘤形成疾病和寄生物血癥有關(guān)的消瘦癥(惡病質(zhì))的主要因子，因此將其稱為“惡病質(zhì)素”。由于抗TNFα的抗體能夠保護(hù)受感染的動(dòng)物，因此，TNFα也是一種在革蘭氏陰性膿毒癥中細(xì)胞毒性的主要起作用者。
已經(jīng)證明TNFα與幾種疾病有關(guān)，可列舉的例子包括成人呼吸窘迫癥，肺纖維變性，瘧疾，傳染性肝炎，結(jié)核病，炎性腸疾病，敗血性休克，AIDS，移植物抗宿主反應(yīng)，自體免疫疾病，例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，多發(fā)性硬化和青年型糖尿病，和皮膚延遲型過敏疾病。
由于某些TNFα的作用對(duì)宿主有害，使人注意到引起調(diào)節(jié)TNFα功能的機(jī)理。由兩種不同分子種類的細(xì)胞表面受體(本文中稱為TNF-R)提供對(duì)TNFα的應(yīng)答的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)，而TNFα以高親和力結(jié)合到所述受體上。
在身體的幾乎所有細(xì)胞中表達(dá)細(xì)胞表面各種TNF-R。一旦TNFα與TNF受體結(jié)合，由TNF受體以信號(hào)形式反映出所有TNFα的各種作用，細(xì)胞毒性，促生長(zhǎng)以及其它。這些受體的分子量不同的兩種形式，55千道爾頓和千75道爾頓已經(jīng)被描述了，并且在本文中分別被描述為p55和p75TNF-R。但是，應(yīng)該注意現(xiàn)有的公開文本將這兩種受體也稱作為p60和p80TNF-R。
TNFα的兩種受體不僅以細(xì)胞結(jié)合形式而且以可溶性形式存在，包括從細(xì)胞表面形式蛋白酶裂解衍生得到的完整受體的裂解細(xì)胞外區(qū)域。這些可溶性的TNFα受體(sTNF-Rs)能夠保持結(jié)合TNFα的能力，并且與細(xì)胞表面受體一起競(jìng)爭(zhēng)TNFα，從而阻止了TNFα的活性。因此，sTNF-Rs起著TNFα活性的生理學(xué)減毒作用，保衛(wèi)其抵抗?jié)撛诘挠泻ψ饔?。但是，也已?jīng)有報(bào)道，sTNF-Rs也通過穩(wěn)定其活性，可能是通過阻止其生物活性三聚體結(jié)構(gòu)降解為非活性的單體而影響TNFα的功能(Aderka等人，1992)。因此sTNF-Rs以兩種不同的途徑影響TNFα的活性它們與細(xì)胞表面受體競(jìng)爭(zhēng)TNFα和阻止TNFα的有害作用，或它們起緩沖劑的作用并且穩(wěn)定TNFα的活性。
以前將本文中稱為p55sTNF-R和p75sTNF-R的兩種sTNF-Rs分別命名為TNF結(jié)合蛋白I和II，或TBPI和TBPII(參見例如EP398327，EP412486，和EP433900)。在本申請(qǐng)中我們利用兩種命名p55sTNF-R或TBPI和p75s TNF-R或TBPII；它們分別定義相同的蛋白質(zhì)。
sTNF-Rs以在炎性和非炎性疾病狀態(tài)下顯著增高的濃度組成地存在于血清中。這些蛋白質(zhì)的效果可以不同，但取決于其在TNFα作用位點(diǎn)的濃度，其濃度與TNFα局部濃度的關(guān)系，以及就TNF活性的衰退而言sTNF-Rs和TNFα從TNFα作用位點(diǎn)清除的速率。依據(jù)這些參數(shù)，在不同的情形下，sTNF-Rs以非常不同的方式影響TNFα的功能，或通過抑制TNFα的效果或作為TNFα的載體，或者通過延長(zhǎng)其功能擴(kuò)大TNFα的效果(Aderka等人，1992)。
sTNF-Rs作為抗-TNFα藥物的效果可能受許多不同因子的影響與細(xì)胞表面受體的親和力相比的sTNF-Rs結(jié)合TNFα的親和力，可溶性受體進(jìn)入TNFα作用位點(diǎn)的難易程度，和可溶性受體和它們與TNFα形成的復(fù)合物從TNFα形成位點(diǎn)清除的速率。sTNF-Rs的天然形式可能以最生理相關(guān)的方式起作用。但是，其用途受到的大的限制是它們相當(dāng)快地從血液中清除。已經(jīng)制定了幾種計(jì)劃以改善這些分子，所述例子是所謂的嵌合“免疫吸附”，其中將sTNF-Rs連接到免疫球蛋白分子的Fc部分(由Hoffman La Roche和Immune開發(fā))，和“PEGulated”sTNF-Rs，其中sTNF-Rs通過PEG分子交聯(lián)(由Synergen研制)。兩種途徑導(dǎo)致二價(jià)sTNF-R分子的形成，該分子有較長(zhǎng)的清除時(shí)間，并且能夠更有效地與三價(jià)TNFα分子結(jié)合。但是，它們可能比天然可溶性受體更具免疫原性，并且不會(huì)出現(xiàn)它們與TNFα的復(fù)合物以非常高的效率從循環(huán)中清除。
由于該細(xì)胞因子在身體的某一特定部位的長(zhǎng)期形成而造成了TNFα的許多有害作用。對(duì)于在需要的部位維持治療學(xué)上有效的可溶性受體的濃度，較大預(yù)見性地限定使用可溶性形式的TNF受體以防止所述病理狀態(tài)是困難的。
發(fā)明概述本發(fā)明的目的之一是研制治療學(xué)上使用可溶性形式的受體的新方法，所述治療學(xué)應(yīng)用可影響它們的配體的功能，例如保護(hù)身體免遭它們的配體的有害作用，特別是研制以不變的速率，在較長(zhǎng)的時(shí)間期間允許可溶性受體在身體中局部釋放的系統(tǒng)。這些方法是基于將可溶性受體摻入到生物相容性聚合物中，并將其植入到或注射到所需的身體部位。含有可溶性受體的聚合物的基質(zhì)能夠局部和控制釋放天然形式的可溶性受體。
本發(fā)明包括能夠結(jié)合到其配體并且影響其功能的可溶性受體，所述影響功能的方式是使其配體的毒害作用中和和/或穩(wěn)定或增強(qiáng)其活性。所述可溶性受體的例子是激素的和細(xì)胞因子的可溶性受體，并且在優(yōu)選的實(shí)施方案中，可溶性受體是可溶性的TNFα受體。
因此，本發(fā)明的另一目的是提供了治療學(xué)上使用可溶性TNFα的受體以影響TNFα功能，例如保護(hù)身體抵抗TNFα的有害作用的新方法，所述新方法包括控制釋放系統(tǒng)。
因此本發(fā)明提供了用于控制釋放可溶性受體的藥物組合物，其中所述可溶性受體被摻入到生物相容性聚合體基質(zhì)中。
可用于本發(fā)明組合物中的生物相容性聚合體基質(zhì)的例子包括，但不限于下列生物相容性非降解性聚合物乙烯乙酸乙烯酯共聚物(EVAc)，硅橡膠，多糖例如纖維素，聚酰胺，聚丙烯酸酯，聚乙烯，聚氨酯，聚異丁烯，聚磷腈，和下列生物降解性聚合物聚酯，聚酐，聚原酸酯，聚己內(nèi)酯，假多氨基酸，多肽，明膠，聚乳酸，聚羥基乙酸(polyglycolic acid)，和聚乳酸-羥基乙酸(PLGA)共聚物。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，將可溶性TNFα受體(sTNF-R)摻入到合適的聚合物中，例如聚乙烯乙酸乙烯酯基質(zhì)，或摻入到聚(乳酸-羥基乙酸)微球體中。
本發(fā)明的藥物組合物可含有p55 sTNF-R或p75sTNF-R。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，該組合物含有p55sTNF-R(TBPI)。
一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物適用于治療疾病，其中需要保護(hù)身體抵抗配體例如TNFα的有害作用。將含有sTNF-Rs的該聚合體基質(zhì)置于所需的身體部位中，從而在體內(nèi)恒定維持sTNF-R并且保持長(zhǎng)時(shí)間。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物可與配體例如TNFα一起使用，以便穩(wěn)定和/或增強(qiáng)TNFα的活性，用于需要TNFα的有利作用的任何情況。該實(shí)施方案的一個(gè)方面，所述組合物包括TNFα/sTNF-R復(fù)合物，通過腫瘤部位給藥，TNFα發(fā)揮有效的局部的抗腫瘤功能并且產(chǎn)生較少的全身的不良作用。在該實(shí)施例的另一方面，含有TNF-α/sTNF-R復(fù)合物的組合物可用于抗病毒，細(xì)菌和寄生物(parasiticidal)，特別是細(xì)胞內(nèi)的多細(xì)胞寄生物的感染和用于傷口治愈。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明包括對(duì)患者進(jìn)行治療，保護(hù)患者免除配體例如TNFα的有害作用，包括給患者施用本發(fā)明的藥物組合物，所述藥物組合物含有控制釋放形式的有效量的合適的可溶性受體例如sTNF-R。
在又一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及癌癥的治療，包括在需要治療的患者的腫瘤部位施用含有TNFα/sTNF-R復(fù)合物的控制釋放形式的本發(fā)明的藥物組合物。
附圖簡(jiǎn)述附

圖1顯示顆粒大小對(duì)TBPI的累積釋放的影響。將三個(gè)大小范圍的TBPI+BSA粉的顆粒以30％的負(fù)載量摻入到乙烯乙酸乙烯酯共聚物(EVAc)基質(zhì)中(i)＜75μm(實(shí)心菱形)；(ii)75-250μm(空心正方形)，和(iii)250-425μm(實(shí)心圓圈)。
附圖2顯示負(fù)載量對(duì)TBPI累積釋放的影響。利用75-250μm大小范圍的顆粒制備具有TBPI+BSA負(fù)載的EVAc基質(zhì)(i)10％負(fù)載量(實(shí)心菱形)；(ii)30％負(fù)載量(空心正方形)，和(iii)50％的負(fù)載量(實(shí)心圓圈)。
附圖3顯示單獨(dú)的可溶性TNFα受體I(TBPI)或與牛血清白蛋白(BSA)一起摻入到下列成份的微球體中的累積的釋放百分?jǐn)?shù)(i)聚乳酸-羥基乙酸(PLGA)75∶25(分別是空心或?qū)嵭牡膱A圈)；(ii)PLGA 50∶50(分別是空心和實(shí)心的正方形)；(ii)聚-L-乳酸(PLLA)(分別是空心和實(shí)心的三角形)。
附圖4a-c顯示用產(chǎn)生TNF的中國倉鼠卵(CHO)細(xì)胞(CHO/TNF)接種的Balb裸鼠用TBPI或用鼠抗-TNF單克隆抗體TNF-1(Ab)治療獲得的體內(nèi)結(jié)果，其中附圖4a圖示用如下藥劑處理后Balb裸鼠的平均組重量(gr)(i)皮下植入EVAc基質(zhì)中的TBPI(實(shí)心圓圈)；(ii)TBPI/PLGA的75∶25的植入劑(空心圓圈)；(iii)用CHO/TNF細(xì)胞接種鼠(Ab一次)后五天，注射一次抗-TNF抗體(實(shí)心正方形)；(iv)用CHO/TNF細(xì)胞接種鼠五天以后和一星期之后(Ab兩次)注射兩次抗-TNF抗體(空心正方形)；和(v)對(duì)照，沒有任何治療(實(shí)心三角形)；附圖4b表示在鼠血清中生物活性TNFα的水平進(jìn)行體內(nèi)評(píng)價(jià)的結(jié)果。在將EVAc基質(zhì)中的TBPI(實(shí)心圓圈)或75∶25的TBPIPLGA(空心圓圈)植入之后或用抗TNFα抗體注射一次(實(shí)心正方形)或兩次(空心正方形)(如在附圖4a所示)，從攜帶產(chǎn)生TNFα的中國倉鼠卵(CHO)細(xì)胞的鼠中收集血清，以及從非治療的鼠中收集血清(實(shí)心三角形)，通過在環(huán)己酰亞胺(25微克/毫升)存在下將其1∶100的稀釋液加入到經(jīng)培養(yǎng)的MHA2細(xì)胞(Hela細(xì)胞的衍生物，將其以3×104細(xì)胞/9mM的濃度播種微孔之后24小時(shí))中保持10小時(shí)，測(cè)定血清中TNFα的生物活性，隨后通過中性紅攝取方法評(píng)估細(xì)胞的存活力(Wallach等人，1984)，和附圖4c表示用如下藥劑處理后的小鼠的生存曲線(i)TBPI/EVAc植入劑(空心正方形)；(ii)TBPI/PLGA75∶25植入劑(實(shí)心圓圈)；(iii)抗-TNF抗體一次(空心三角形)；(iv)抗-TNF抗體兩次(實(shí)心三角形)；和(v)對(duì)照，沒有任何治療(空心圓圈)；附圖5顯示含有TBPI的EVAc基質(zhì)在鼠體的不同部位植入對(duì)TBPI濃度釋放的影響頸(實(shí)心圓圈)，背(空心圓圈)，和胃(實(shí)心正方形)。
附圖6是圖形表示踝關(guān)節(jié)的腫脹(mm)，顯示用含有TBPI的II。
可用于本發(fā)明中的聚合物包括但不限于選自于下列的生物相容性不可降解性聚合物乙烯乙酸乙烯酯共聚物，硅橡膠，多糖例如纖維素，聚酰胺，聚丙烯酸酯，聚乙烯，聚異丁烯，聚氨酯，和聚磷腈，和選自于下列的生物可降解性聚合物聚酯，聚原酸酯，聚己內(nèi)酯，多肽，假聚(氨基酸)，明膠，聚酐，聚-L-乳酸，聚-D-乳酸，聚-D，L-乳酸，聚羥基乙酸，和選自于下列的共聚物聚-L-乳酸-羥基乙酸，聚-D-乳酸-羥基乙酸，聚-D，L-乳酸-羥基乙酸，，聚-L-乳酸-D-乳酸，和聚-L-乳酸-D，L-乳酸。
用于本發(fā)明中優(yōu)選的聚合物是乙烯乙酸乙烯酯共聚物(EVAc)，聚-乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)和聚-L-乳酸(PLLA)。
從商品EVAc，如果必要，在純化之后，例如通過Rhine等人，1980描述的溶劑澆鑄方法，可以制備含有摻入到EVAc基質(zhì)中的sTNF-R的藥物組合物。這些基質(zhì)構(gòu)成了擴(kuò)散控制的系統(tǒng)，所述系統(tǒng)允許蛋白質(zhì)均一分布，可重現(xiàn)的動(dòng)力學(xué)以及在幾星期或幾個(gè)月的期間內(nèi)生物學(xué)活性的sTNF-R的延緩釋放。如果EVAc是生物相容性的并且不可降解的聚合物，那么EVAc基質(zhì)適合于需要或期望藥物釋放延長(zhǎng)的應(yīng)用。
當(dāng)活性要素借助于通過基質(zhì)中的通道擴(kuò)散而從不可降解的聚合物例如EVAc中釋放時(shí)，通過較高的蛋白質(zhì)負(fù)載量加強(qiáng)擴(kuò)散。因此，在優(yōu)選的實(shí)施方案中，將活性蛋白質(zhì)與不影響對(duì)活性蛋白質(zhì)的生物應(yīng)答的中性蛋白質(zhì)結(jié)合，以便提高總蛋白質(zhì)的負(fù)載量。所述中性蛋白質(zhì)的例子是牛血清白蛋白(雖然對(duì)于人使用來說不是優(yōu)選的)，人白蛋白，肌紅蛋白，血紅蛋白等等。
在本發(fā)明的藥物組合物中，包含摻入到選自于下列的生物可降解聚合物中的sTNF-R聚-L-乳酸，聚羥基乙酸，和其共聚物，商品乳酸和/或羥基乙酸的同聚物或共聚物，所述組合物配制成微球體形式，適合用于植入或注射應(yīng)用。按照Cohen et al所述利用例如改性的溶劑蒸發(fā)方法，利用雙乳化可以制備微球體。當(dāng)這些聚合物是生物可降解時(shí)，植入劑易于被注射，避免使用手術(shù)和在藥物被消耗之后去除裝置?；钚詣┩ㄟ^可控制的和預(yù)定的釋放動(dòng)力學(xué)釋放。該系統(tǒng)允許活性成份在幾星期或幾個(gè)月的期間內(nèi)延緩釋放。
含有sTNF-R的本發(fā)明的藥物組合物可用于中和急性疾病例如敗血性休克，移植物抗宿主反應(yīng)(GVHD)，瘧疾，傳染性肝炎，結(jié)核病，或慢性疾病，例如癌癥相關(guān)的惡病質(zhì)，慢性GVHD，或自體免疫疾病，例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，多發(fā)性硬化和青年型糖尿病，全身紅斑狼瘡和皮膚延遲型過敏疾病中TNFα的有害作用。
本發(fā)明的藥物組合物可以以適合于sTNF-R的控制釋放的方式給藥，例如植入，或局部注射，例如在治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎時(shí)關(guān)節(jié)內(nèi)注射到關(guān)節(jié)腔的關(guān)節(jié)液中，或在治療多發(fā)性硬化時(shí)鞘內(nèi)注射到腦脊髓液中，或以局部用藥劑形式給藥，例如用于治療皮膚疾病的洗劑。用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的組合物可包括其它的消炎劑，和用于治療多發(fā)性硬化的組合物可包括抗多發(fā)性硬化的其它藥劑例如β-干擾素和Copolymer-1(Cop-1)。
將本發(fā)明的含有sTNF-R的組合物設(shè)計(jì)為可以在體內(nèi)釋放足于阻止TNFα的作用的量的sTNF-R。在自體免疫疾病的情況下，將該組合物設(shè)計(jì)成例如釋放的sTNF-R的量足于影響自體免疫疾病的進(jìn)程和嚴(yán)重性以及提高患者的狀態(tài)，導(dǎo)致疾病減弱或緩解。有效量取決于給藥途徑，待治療的疾病和患者的狀態(tài)。在中和TNFα的有害作用方面，考慮到外源性給藥的sTNF-R可以補(bǔ)充內(nèi)源性形成的sTNF-R，采用已知的方法(ELISA，參見Aderka等人，1991)對(duì)患者的血清中或其它合適的體液中p55sTNF-R或p75sTNF-R的水平進(jìn)行測(cè)定，可以幫助建立適合所述患者的劑量。
當(dāng)期望穩(wěn)定TNFα的活性時(shí)，該組合物含有TNFα和sTNF-R的復(fù)合物例如1∶1的比例的復(fù)合物，以便在治療部位給藥。
通過下面的實(shí)施例和附圖以非限制性的方式闡述本發(fā)明。
實(shí)施例材料和方法材料。使用PLGA，50∶50，固有的粘度(iv)為0.51dl/g，和75∶25i.v.為0.48dl/g，以及PLLA(聚-L-乳酸)，i.v.為0.64dl/g(兩者都是從PURAC Biochem BV，Holland購買)。使用乙烯乙酸乙烯酯共聚物(EVAc)，(40％乙酸乙烯酯)(杜邦)，牛血清白蛋白(BSA)(Sigma ChemicalCo，USA)，平均分子量為77000-79000的聚乙烯醇(PVA)，88％羥基化(Aldrich Chemical Co.)和TBPI(p55sTNF-R)(InterPharmLaboratories Ltd.，Israel)。命名為TNF-1的抗TNFα抗體是本發(fā)明人的實(shí)驗(yàn)室之一制備的抗人重組TNFα的鼠單克隆抗體(D.Wallach)。
方法。通過將藥物釋放基質(zhì)置于存在于小瓶中的并且在搖床水浴中攪拌的磷酸緩沖鹽水(PBS，pH7.4)中獲得體外釋放概況。定期地取樣并且通過酶連接的免疫吸附檢測(cè)方法(ELISA)分析TBPI，如由Aderka等人，1991描述的。
按三種模式檢測(cè)聚合物系統(tǒng)的體內(nèi)效率(i)按照Oliff等人，1987描述，用產(chǎn)生TNFα的腫瘤細(xì)胞(CHO/TNF)植入小鼠，顯示嚴(yán)重的惡病質(zhì)，導(dǎo)致死亡。(ii)按照Keffer等人，1991描述，轉(zhuǎn)基因Tg197鼠，定期發(fā)展為關(guān)節(jié)炎。(iii)按照Probert等人，1993描述，轉(zhuǎn)基因Tg211鼠，在T細(xì)胞中表達(dá)人TNFαmRNA并且發(fā)展為顯著的組織變化和致死的消瘦癥。
實(shí)施例1從EVAc基質(zhì)中控制釋放p55sTNF-R/TBPI將乙烯乙酸乙烯酯共聚物(40％乙烯乙酸酯，重量比)溶于二氯甲烷中得到10％溶液(w/v)。將TBPI溶液加入到溶于雙蒸餾水的牛血清白蛋白(BSA)粉中。將該混合物冷凍干燥(24小時(shí)，5μmHg，-70℃，F(xiàn)rceze Dryer，Lab Conco)成粉末。將TBPI+BSA粉末過篩得到＜75，75-250，或250-425μm的顆粒。將單一大小范圍的稱過重量的粉末加入到玻璃管中的15毫升的聚合物溶液中，將該混合物快速地傾倒到水平的Teflon模型的盤的中央(直徑為1cm，厚度為0.5cm)，該盤預(yù)先置于干冰上冷凍5分鐘。在預(yù)冷凍期間，用玻璃盤蓋在該模型上以阻止過量的霜形成。在混合物被傾倒之后，將模型在干冰上保留10分鐘，將混合物冷凍。(在該階段的最后7分鐘將該模型再次覆蓋)用冷的藥刀易于將冷凍的平板撬開，轉(zhuǎn)移到金屬絲網(wǎng)篩，并且在-20℃保持2天。然后將該盤在室溫下，在干燥器中溫和的家用真空器(600mtorr)干燥2天以上。干燥導(dǎo)致該盤收縮至直徑約0.5cm和厚度為0.1-0.2cm。
將聚合物釋放系統(tǒng)浸于PBS介質(zhì)中。在每個(gè)盤中制備EVAc基質(zhì)的直徑0.5cm和厚度1-2cm的含有22.35μg的TBPI的盤用于體內(nèi)試驗(yàn)。對(duì)于體外試驗(yàn)，該盤含有4.47，13.41，或22.35μg TBPI(10％，30％和50％負(fù)載量)。采用ELISA方法，測(cè)定TBPI與時(shí)間的函數(shù)關(guān)系，檢測(cè)TBPI的釋放(Aderka等人，1991)。
附圖1和2顯示藥物顆粒大小和負(fù)載量對(duì)從EVAc基質(zhì)釋放的動(dòng)力學(xué)的影響。顆粒大小顯著影響藥物釋放速率。顆粒大小的增加導(dǎo)致釋放速率的提高(附圖1)。藥物負(fù)載量的提高均一地提高藥物釋放速率(附圖2)。不僅釋放的總藥物量增加，而且釋放速率提高。
藥物顆粒大小和負(fù)載量顯著影響大分子聚合物釋放系統(tǒng)的釋放動(dòng)力學(xué)。因?yàn)榇蠓肿犹笠灾掠诓荒艽┻^聚合膜擴(kuò)散，通過基質(zhì)中的通道擴(kuò)散可能出現(xiàn)持續(xù)的釋放。在澆鑄期間大分子的摻入可引入這樣的通道，通過該通道可擴(kuò)散溶解的藥物。顆粒直徑的增加所引起釋放速率的提高，可能是由于在聚合物基質(zhì)中孔的大通道的形成。類似地，提高的負(fù)載量可提供較簡(jiǎn)單的途徑(較低的彎曲)和用于擴(kuò)散的較大的孔徑，兩者都有利于水和PBS移動(dòng)到基質(zhì)，而蛋白質(zhì)從基質(zhì)中排出。
實(shí)施例2從PLGA和PLLA微球體中控制釋放p55sTNF-R(TBPI)如Cohen等人，1991描述，利用雙乳化以及修飾的溶劑蒸發(fā)方法，制備聚(乳酸-羥基乙酸)(PLGA)，聚-L-乳酸(PLLA)微球體。簡(jiǎn)單地說，將TBPI溶液或TBPI和BSA粉末(按照上述實(shí)施例1描述制備)溶解于雙蒸餾水中，傾倒到溶解于二氯甲烷中的PLGA或PLLA中。利用超聲波檢測(cè)該混合物30秒(VC-250型，Sonic& MaterialsInc.)，形成第一惰性乳液(W1/0)。利用磁棒劇烈攪拌混合。將該乳液傾到2毫升的用二氯甲烷飽和的含水1％聚乙烯醇(PVA)以形成第二乳液((W1/0)W2)。將得到的雙重乳化液傾到200毫升的0.1％PVA并且在室溫下連續(xù)攪拌3小時(shí)，直到大多數(shù)的二氯甲烷被蒸發(fā)，留下固體的微球體。通過離心收集微球體(1000g，10分鐘)，利用100微米的孔徑的篩過篩，并且冷凍干燥成粉末(16小時(shí)，F(xiàn)reeze Dryer，Lab Conco)。除非另有說明，否則研究工作是用比例為75∶25和50∶50(L/G)的PLGA和PLLA完成的。
將聚合物釋放系統(tǒng)浸于PBS介質(zhì)中。在每個(gè)試驗(yàn)中評(píng)估含有18.2微克的TBPI的0.04克PLGA或PLLA微球體，采用ELISA方法，檢測(cè)TBPI釋放與時(shí)間的函數(shù)關(guān)系。EVAc(黑柱)，單獨(dú)的EAVc(灰色柱)植入治療的或未治療(對(duì)照)(白色柱)的轉(zhuǎn)基因Tg197關(guān)節(jié)炎鼠子代的不同發(fā)育階段的關(guān)節(jié)炎的進(jìn)展。
附圖7是圖形表示的踝關(guān)節(jié)的腫脹(mm)，顯示用抗-TNFα抗體每星期一次持續(xù)整個(gè)試驗(yàn)期(65天)(黑柱)和一星期一次持續(xù)兩星期(灰色柱)治療的和未治療(對(duì)照)(白色柱)的轉(zhuǎn)基因Tg197關(guān)節(jié)炎鼠子代的不同發(fā)育階段的關(guān)節(jié)炎的進(jìn)展。
附圖8圖形表示在T細(xì)胞中表達(dá)人TNFαmRNA的轉(zhuǎn)基因Tg211鼠的平均組重量(gr)，所述鼠用含有TBPI的EVAc(實(shí)心圓圈)，單獨(dú)的EAVc(空心圓圈)植入治療或未治療(對(duì)照)(實(shí)心正方形)。
附圖9圖形表示用抗-TNFα抗體每星期一次持續(xù)整個(gè)試驗(yàn)期(50天)(實(shí)心三角形)和一星期一次持續(xù)兩星期(空心三角形)治療的和未治療(對(duì)照)(實(shí)心正方形)的轉(zhuǎn)基因Tg211鼠的平均組重量(gr)。
附圖10表示用含有TBPI的EVAc(實(shí)心圓圈)，單獨(dú)的EAVc(空心圓圈)移植治療的或未治療(對(duì)照)(實(shí)心正方形)的轉(zhuǎn)基因Tg211鼠的生存曲線。
附圖11表示用抗-TNFα抗體每星期一次持續(xù)整個(gè)試驗(yàn)期(65天)(實(shí)心圓圈)和一星期一次持續(xù)兩星期(空心圓圈)治療的和未治療(對(duì)照)(實(shí)心正方形)的轉(zhuǎn)基因Tg211鼠的生存曲線。
優(yōu)選的實(shí)施方案的詳述本發(fā)明提供可溶性受體的控制釋放，所述受體能夠結(jié)合到配體上并且影響其配體的活性，例如中和具有害作用的配體或穩(wěn)定/增強(qiáng)配體的活性。所述可溶性受體的例子是細(xì)胞因子例如TNFα，IFN-γ，IL-2，IL-6等的可溶性受體。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物包括從天然源例如人尿獲得的sTNF-Rs(Engelmann等人，1989；Engelmann等人，1990；Olson等人，1990，Loetscher等人，1990)，和利用重組技術(shù)(EP433900；Nophar等人，1900；Schall等人，1990；和Loetscher等人，1990)并然后如文獻(xiàn)例如EP308378和EP398327中所述進(jìn)一步純化所得的sTNF-Rs。
如本文所述，術(shù)語“sTNF-Rs”，“p55sTNF-R”，“p75sTNF＝R”，是指天然來源的或通過重組技術(shù)獲得的所有sTNF-Rs，包括但不限于在EP308378和EP398327中描述的TNF結(jié)合蛋白質(zhì)I和附圖3顯示從不同的PLGA共聚物(50∶50或75∶25)或PLLA微球體中TBPI的累積釋放百分?jǐn)?shù)。在2200小時(shí)之后可以看到，摻入到微球體中的TBPI只有10％被釋放。在該圖中也證明了當(dāng)TBPI與BSA一起加入(TBP+BSA)時(shí)聚合物的TBPI的累積的釋放百分?jǐn)?shù)(實(shí)心圓圈，正方形和三角形)高于當(dāng)沒有BSA而僅加入TBPI時(shí)從樣品釋放的量(空心圓圈，正方形和三角形)。
實(shí)施例3在用CHO/TNFα細(xì)胞接種后的小鼠體內(nèi)，從聚合物基質(zhì)中釋放的TBPI保持其生物活性對(duì)于下面的TNFα的慢性有害作用，在本實(shí)施中使用公知的用于TNFα的惡病質(zhì)效應(yīng)的動(dòng)物模型，即按照Oliff等人，1987描述，用產(chǎn)生TNFα的腫瘤細(xì)胞(CHO/TNFα)植入的balb裸鼠。
給balb裸鼠皮下接種CHO/TNFα細(xì)胞(Korn等人，1988)，以便得到惡病質(zhì)。利用該細(xì)胞系的新鮮的胰蛋白胨化的懸浮液以1×107細(xì)胞/毫升(1毫升/鼠)接種。利用塑料的3cc注射器的23號(hào)針進(jìn)行注射。將細(xì)胞皮下注射到背，頸或腹區(qū)，通過尾部取血每周采集幾次血清樣品。根據(jù)血液中TBPI和TNFα的水平，重量的降低以及死亡情況，對(duì)在用CHO/TNFα細(xì)胞接種五天之后植入的聚合物系統(tǒng)的性能進(jìn)行評(píng)估。
在所述小鼠已經(jīng)接種了產(chǎn)生TNFα的CHO細(xì)胞以獲得惡病質(zhì)的五天后，將上述實(shí)施例1和2的聚合物基質(zhì)植入或注射到balb裸鼠，根據(jù)血液中TBPI和TNFα的水平，對(duì)聚合物系統(tǒng)的性能進(jìn)行評(píng)估(ELISA)。檢測(cè)的參數(shù)是(1)TBPI的生物學(xué)活性與時(shí)間的函數(shù)關(guān)系；(2)將TBPI治療與用抗人TNFα的小鼠抗體(在發(fā)明人的實(shí)驗(yàn)室制備并且命名為TNF-1)注射一次(用CHO/TNFα細(xì)胞接種小鼠五天之后，標(biāo)記為Ab-一次)或以互相一星期的間隔注射兩次(CHO/TNFα細(xì)胞接種五天之后，以及一星期之后，標(biāo)記為Ab-兩次)治療進(jìn)行比較；(3)根據(jù)小鼠平均組重量和小鼠死亡率評(píng)價(jià)惡病質(zhì)的進(jìn)展；(4)移植的部位(頸，背或胃的皮下)。
TNFα可能引起惡病質(zhì)，并且能夠誘導(dǎo)攜帶腫瘤的動(dòng)物的重量逐漸損失。在植入了產(chǎn)生TNFα的腫瘤細(xì)胞的小鼠中檢查基質(zhì)的體內(nèi)效果。以高水平組成型產(chǎn)生TNFα的1×107CHO/TNFα細(xì)胞注射的小鼠顯示嚴(yán)重的惡病質(zhì)并且重量損失，導(dǎo)致死亡。另外，植入了含有TBPI的聚合物的基質(zhì)的小鼠其體重增加，而沒有死亡，表明基質(zhì)釋放的TBPI提供了持久的抗TNFα的效果。
為了對(duì)攜帶腫瘤的小鼠中TBPI生物學(xué)活性進(jìn)行評(píng)估，在不同的時(shí)間點(diǎn)收集血清樣品并且通過測(cè)定其對(duì)MHA2細(xì)胞(對(duì)TNFα敏感的HcLa細(xì)胞的衍生物)的細(xì)胞毒性而對(duì)其中的TNFα的生物學(xué)活性進(jìn)行評(píng)估。如附圖4b所述，接種含有TBPI的基質(zhì)導(dǎo)致血清的TNFα生物學(xué)活性延長(zhǎng)和顯著降低，表明基質(zhì)釋放的TBPI強(qiáng)烈地抑制TNFα與MHA2細(xì)胞的細(xì)胞表面TNFα受體的結(jié)合。
為了進(jìn)行比較，用抗TNFα的抗體注射小鼠一次(用CHO/TNFα細(xì)胞接種小鼠五天之后，標(biāo)記為Ab-一次)或以一星期的間隔注射小鼠兩次(CHO/TNFα細(xì)胞接種五天之后，以及一星期之后，標(biāo)記為Ab-兩次)。如附圖4a所示，抗體僅在注射之后幾天影響鼠的重量(小鼠保持其體重)，然后它們發(fā)展為進(jìn)展性的消瘦，而當(dāng)摻入到聚合物中時(shí)TBPI在體內(nèi)長(zhǎng)期存在。
在抗體注射的小鼠的血清中TNFα的生物活性情況表明注射的抗TNFα的抗體(TNF-1)的效果持續(xù)時(shí)間短，如在附圖4b。
在附圖4c中可以看到，用允許TBPI控制和定位釋放的聚合物系統(tǒng)治療的小鼠生存了50天以上，這與用TNF-1抗體治療的小鼠不同，當(dāng)停止注射抗體時(shí)后者不能生存并且發(fā)展為惡病質(zhì)。
這些結(jié)果表明基于聚合物控制釋放的TBPI的治療阻止了消瘦癥的發(fā)展，并且優(yōu)選的是注射抗TNFα的抗體，因?yàn)樗挥妹啃瞧谧⑸?，并提供了抵抗TNFα的持久的保護(hù)作用。而且由于是天然分子，可溶性的TNFα受體更適用于延長(zhǎng)使用。抗TNFα的抗體遲早將產(chǎn)生抗它們的抗體，這將阻止它們的作用，因此不適用于延長(zhǎng)使用。對(duì)于人或人性化的抗體這也是正確的，將會(huì)產(chǎn)生抑制其功能的抗個(gè)體基因型抗體。
從植入到小鼠的頸背，背部或胃部的EVAc基質(zhì)釋放TBPI的動(dòng)力學(xué)與基質(zhì)植入部位的函數(shù)關(guān)系沒有顯著的差異(附圖5)。在整個(gè)釋放期間TBPI的釋放動(dòng)力學(xué)保持不變。
實(shí)施例4在轉(zhuǎn)基因的Tg197小鼠中從聚合物基質(zhì)釋放的TBPI保留其體內(nèi)生物學(xué)活性根據(jù)踝關(guān)節(jié)腫脹水平，對(duì)轉(zhuǎn)基因的Tg197小鼠中實(shí)施例1制備的EVAc基質(zhì)(出生后14天通過基本手術(shù)皮下植入)的性能進(jìn)行評(píng)估。在約4-6周齡時(shí)出現(xiàn)病癥，為踝關(guān)節(jié)腫脹。在9-10周齡時(shí)進(jìn)一步的踝關(guān)節(jié)腫脹和后腿運(yùn)動(dòng)損傷發(fā)展為后腿完全失去運(yùn)動(dòng)功能。而且在這些小鼠中重量的逐步損失是共同的特征。但是用含有TBPI的EVAc基質(zhì)治療這些關(guān)節(jié)炎小鼠完全阻止了踝關(guān)節(jié)腫脹(附圖6)。而且，被治療的動(dòng)物正常地發(fā)育，甚至在10周齡時(shí)沒有顯示關(guān)節(jié)炎跡象或重量的損失。
為了進(jìn)行比較，在出生后14天用TNF-1抗體每周注射小鼠一次，持續(xù)整個(gè)治療期(65天)或一星期注射小鼠一次，共兩周。如附圖7所示，僅當(dāng)每周注射一次維持整個(gè)試驗(yàn)期間時(shí)抗體影響腫脹(黑色柱)。每周注射的小鼠顯示發(fā)育正常并且甚至在10周齡時(shí)沒有顯示關(guān)節(jié)炎跡象或重量的損失，而在這些小鼠中運(yùn)動(dòng)的損傷是共同的可見的特征。但是，一星期注射小鼠一次，共兩周的小鼠發(fā)展為踝關(guān)節(jié)腫脹和在9-10用齡時(shí)后腿運(yùn)動(dòng)損傷發(fā)展為后腿完全失去運(yùn)動(dòng)功能，逐漸重量損失。
這些結(jié)果表明基于聚合物控制釋放的TBPI的治療完全阻止了小鼠關(guān)節(jié)炎的發(fā)展，并且優(yōu)選的是注射抗hTNFα的抗體，因?yàn)樗峁┝说挚筎NFα持久保護(hù)作用并無需每星期注射。
實(shí)施例5在轉(zhuǎn)基因的Tg211小鼠中從聚合物基質(zhì)釋放的TBPI保留其體內(nèi)生物學(xué)活性在T細(xì)胞中表達(dá)人TNF mRNA的轉(zhuǎn)基因Tg211小鼠發(fā)展為明顯的組織學(xué)變化以及致死的消瘦癥。根據(jù)重量的降低和死亡率對(duì)出生14天后植入的含有TBPI的聚合物系統(tǒng)的性能進(jìn)行評(píng)估。每周對(duì)動(dòng)物逐個(gè)稱重幾次。通過基本手術(shù)將EVAc基質(zhì)皮下植入。
如附圖8和10所示，未治療的小鼠(對(duì)照組實(shí)心正方形)發(fā)展為嚴(yán)重的進(jìn)展性重量損失，導(dǎo)致死亡，而植入了含有TBPI的EVAc基質(zhì)的小鼠(實(shí)心圓圈)，增加了體重和在整個(gè)試驗(yàn)期間存活。
為了進(jìn)行比較，小鼠在出生后14天用TNF-1抗體每周注射一次，持續(xù)整個(gè)治療期或一星期注射一次，共兩周。如附圖9所示，以抗TNFα的抗體給藥完全阻止了消瘦癥的發(fā)展，如果從出生開始每周給藥。但是，如果僅每周給藥一次，共給藥兩周，這些抗體是不起作用的，小鼠發(fā)展為消瘦癥，導(dǎo)致死亡，如附圖11所示。
這些結(jié)果表明基于聚合物控制釋放的TBPI的治療完全阻止了小鼠消瘦癥的發(fā)展，并且優(yōu)選的是注射抗hTNFα的抗體。
體內(nèi)結(jié)果顯示釋放的TBPI保留了其生物學(xué)活性，如平均組重量變化所證明(附圖4a)和對(duì)TNFα敏感的MHA2活細(xì)胞的高百分?jǐn)?shù)所證明(附圖4b)。
本文中公開的所有參考文獻(xiàn)包括雜志文章或摘要，公開的或?qū)?yīng)的美國或外國專利申請(qǐng)，授權(quán)的美國或外國專利，或其它任何參考文獻(xiàn)整個(gè)引入作為參考，包括所記載的參考文獻(xiàn)中的數(shù)據(jù)，表，圖和正文。另外，在本文中記載的參考文獻(xiàn)中記載的文獻(xiàn)的所有內(nèi)容也全部引入本文作為參考。
對(duì)已知的方法步驟，常規(guī)的方法步驟，已知的方法或常規(guī)的方法的引用不是以任何方式承認(rèn)在相關(guān)領(lǐng)域內(nèi)公開，教導(dǎo)或暗示了本發(fā)明的任何方面，說明書或?qū)嵤┓桨浮?br> 前面的特定實(shí)施方案的描述已經(jīng)充分顯示本發(fā)明的一般特性，以致于通過應(yīng)用本領(lǐng)域內(nèi)技術(shù)人員的知識(shí)(包括參考文獻(xiàn)中記載的內(nèi)容)容易修飾和/或適用于各種應(yīng)用例如特定的實(shí)施方案，不需要過度的實(shí)驗(yàn)，不會(huì)脫離本發(fā)明的一般概念。因此，基于本文提供的教導(dǎo)和指導(dǎo)，所述的適應(yīng)和修改包括在本文公開的實(shí)施方案的等同物的含義和范圍內(nèi)。應(yīng)該明白，本文中的短語或術(shù)語是為了描述的目的，不是為了限制，因此根據(jù)本文提供的教導(dǎo)和指導(dǎo)，結(jié)合本領(lǐng)域內(nèi)技術(shù)人員的知識(shí)，本領(lǐng)域內(nèi)技術(shù)人員可以理解本發(fā)明說明書的術(shù)語或短語。
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權(quán)利要求
1.一種藥物組合物，用于控制能夠與配體結(jié)合的可溶性受體的釋放，從而影響配體的功能，該組合物包括一種生物相容性聚合物材料，在其中摻入了所述可溶性受體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中所述的聚合物材料是選自于下列的生物可溶性非降解性聚合物乙烯乙酸乙烯酯共聚物(EVAc)，硅橡膠，多糖，聚酰胺，聚丙烯酸酯，聚乙烯，聚氨酯，聚異丁烯，聚磷腈。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中所述的聚合物材料是選自于下列的生物可降解聚合物聚酯，聚酐，聚原酸酯，聚己內(nèi)酯，假多氨基酸，多肽，明膠，聚乳酸，聚羥基乙酸，和聚(乳酸-羥基乙酸)共聚物(PLGA)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中所述的可溶性受體是一種激素或細(xì)胞因子的可溶性受體。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物組合物，其中所述的可溶性受體是可溶性形式的TNFα受體。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其中所述的可溶性受體是溶性形式的TNFα受體。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其中聚合物是聚乙烯乙酸乙烯酯。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的藥物組合物，其中所述的可溶性受體是可溶性形式的TNFα受體。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的藥物組合物，其中聚合物是聚(乳酸-羥基乙酸)。
10.根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其中可溶性TNFα受體是可溶性p55 TNFα受體(p55sTNF-R)。
11.根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其中可溶性TNFα受體是可溶性p75 TNFα受體(p75sTNF-R)。
12.根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物組合物，用于治療需要中和TNFα的有害作用的疾病。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的藥物組合物，用于治療敗血性休克。
14.根據(jù)權(quán)利要求12所述的藥物組合物，用于治療癌相關(guān)性惡病質(zhì)。
15.根據(jù)權(quán)利要求12所述的藥物組合物，用于治療自體免疫性疾病。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的藥物組合物，用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的藥物組合物，進(jìn)一步包括抗炎劑。
18.根據(jù)權(quán)利要求15所述的藥物組合物，用于治療多發(fā)性硬化。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的藥物組合物，包括用于治療多發(fā)性硬化的另外的藥劑例如β-干擾素或Copolymer-1。
20.根據(jù)權(quán)利要求15所述的藥物組合物，用于治療全身性紅斑狼瘡。
21.根據(jù)權(quán)利要求12所述的藥物組合物，用于治療移植物抗宿主反應(yīng)。
22.根據(jù)權(quán)利要求12所述的藥物組合物，用于治療皮膚延遲型過敏疾病。
23.根據(jù)權(quán)利要求7所述的藥物組合物，它是植入劑形式。
24.根據(jù)權(quán)利要求9所述的藥物組合物，它是植入劑形式。
25.根據(jù)權(quán)利要求9所述的藥物組合物，它是注射液形式。
26.根據(jù)權(quán)利要求23至25中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，用于局部注射到關(guān)節(jié)液中，用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中的關(guān)節(jié)炎。
27.根據(jù)權(quán)利要求23至25中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，用于鞘內(nèi)注射到腦脊髓液中，用于治療多發(fā)性硬化。
28.根據(jù)權(quán)利要求22所述的藥物組合物，用于局部應(yīng)用。
29.根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物組合物，進(jìn)一步包括TNFα。
30.根據(jù)權(quán)利要求29所述的藥物組合物，用于增強(qiáng)TNFα的有利作用。
31.根據(jù)權(quán)利要求30所述的藥物組合物，用于治療腫瘤。
32.根據(jù)權(quán)利要求30所述的藥物組合物，用于治療病毒，細(xì)菌和多細(xì)胞寄生物感染。
33.根據(jù)權(quán)利要求30所述的藥物組合物，用于傷口愈合。
34.用于治療其中需要中和TNFα的有害作用的疾病的方法，包括施用能夠釋放有效量的所述TNFα受體可溶形式的權(quán)利要求5所述的控釋藥物組合物。
35.根據(jù)權(quán)利要求34所述的方法，其中所述疾病選自敗血性休克，癌癥相關(guān)性惡病質(zhì)，自體免疫疾病，移植物抗宿主反應(yīng)，皮膚延遲型過敏疾病。
36.根據(jù)權(quán)利要求34所述的方法，其中所述給藥步驟包括植入所述控釋藥物組合物。
37.治療其中需要增強(qiáng)TNFα的有利作用的疾病的方法，包括施用能夠釋放有效量的所述TNFα受體可溶形式和TNFα的權(quán)利要求5所述的控釋藥物組合物。
全文摘要
一種控制釋放藥物組合物,含有已經(jīng)摻入到可溶性受體中的生物相容性聚合物,優(yōu)選的是聚乙烯乙酸乙烯酯或多聚(乳酸－羥基乙酸),所述載體能夠結(jié)合到配體上,從而使配體發(fā)揮功能。該可溶性受體優(yōu)選的是可溶性形式的TNFα受體。所述組合物可用于治療其中需要中和有害作用的疾病。
文檔編號(hào)A61P31/04GK1182369SQ96193437
公開日1998年5月20日 申請(qǐng)日期1996年3月1日 優(yōu)先權(quán)日1995年3月1日
發(fā)明者D·瓦拉赫, J·科斯特, 艾利爾茲 申請(qǐng)人:耶達(dá)研究及發(fā)展有限公司, 賓-古里安尼格夫大學(xué)研究及發(fā)展部