專利名稱：：肽和用于自身免疫性疾病的含所述肽的治療劑的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及肽或其衍生物。本發(fā)明的肽或其衍生物不僅可以用于抗原非特異性地抑制自身免疫性疾病中的異?？哼M的免疫反應，而且由于具有抗炎作用，它還可用于炎癥的治療。因此，本發(fā)明涉及肽或其衍生物以及含所述肽的藥物領域。
背景技術：
：自身免疫性疾病是由于與自身組織的構成組分反應的抗體或淋巴細胞的連續(xù)產(chǎn)生而引發(fā)的。在自身免疫性疾病中，具體地說，免疫耐受的減低增加了對自身生體成分的免疫反應，這樣引起所產(chǎn)生的自身抗體或自反應性T細胞與其相應自身抗原或細胞之間的反應，由此導致細胞功能失?；蚪M織損傷。目前，已知50或更多種的自身免疫性疾病，而且按照損傷在器官內(nèi)擴展的程度，可以將其分成器官特異性自身免疫性疾病和器官非特異性自身免疫性疾病。前一種疾病的實例包括損傷是因Langerhans胰島中的B細胞選擇性破壞而引起的胰島素依賴性糖尿病、因抗甲狀腺刺激激素受體的抗體而引起甲狀腺功能失常的突眼性甲狀腺腫和橋本病、因抗橫紋肌乙酰膽堿受體的抗體而引起肌肉收縮降低的重癥肌無力，和因抗紅細胞的抗體而引起溶血的自身免疫性溶血性貧血。后一種疾病的實例包括慢性風濕性關節(jié)炎，這一疾病據(jù)認為是因IgG和抗IgG抗體(風濕因子)的凝集則引起全身的骨和軟骨組織產(chǎn)生損害；因抗DNA或其核成分的抗體沉積于腎、關節(jié)及皮膚等處而出現(xiàn)障礙反應的全身性紅斑狼瘡；因淋巴細胞浸潤到唾液或淚腺等處而引起的功能不全癥；以及以一定的頻率并發(fā)間質(zhì)性腎炎等的全身臟器病變的Sjugren綜合癥；在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的白質(zhì)出現(xiàn)散布的脫髓鞘病灶和神經(jīng)質(zhì)增生，并引起全身性運動麻痹、眼病、感覺異常等的多發(fā)性硬化癥?，F(xiàn)有技術為了治療自身免疫性疾病，通常是施用以葡萄糖-甾類制劑、環(huán)孢菌素A或FK506為代表的免疫抑制劑。但用所述制劑進行的治療通常伴有嚴重的副作用，如感染性疾病及藥物本身的腎毒性或致癌性[SadaoKashiwazaki，SogoRinsho，43(9)，1725-1729(1994)]。最近幾年，已經(jīng)在嘗試不用廣譜的免疫抑制劑治療自身免疫性疾病。在與抗原反應后，B細胞識別抗原本身，而T細胞識別在抗原提示細胞表面上的MHC分子與嵌在MHC分子溝中的抗原肽的結合物。MHC分子隨個體的不同而有所差異，具有與特定抗原同性質(zhì)之MHC的人T細胞對該抗原有良好的反應。這就是為什么有些人可以對特定抗原作出反應的原因。另一方面，可以將T-細胞抗原受體(T細胞受體TcR)分成數(shù)個家族。有一種激活T細胞的物質(zhì)，它可以與一種或一些TcR家族結合，將所述物質(zhì)稱為超抗原。與正常免疫反應情況下的那些相比，超抗原可以激活許多T細胞，以致于它可以引起大量的反應，從而引發(fā)疾病。微粒激活T細胞，除抗原的識別外，還需將配對分子(配體)與表面上的粘附分子結合。因此通過阻斷粘附分子，可以抑制T細胞反應，或通過增強表達配對細胞的配體，可以擴增反應。據(jù)報道在T細胞組中，存在抑制免疫反應的T細胞，即所謂抑制T細胞[TadaandTakemori，J.Exp.Med.，Vol.140，239(1974)]。闡述了這些T細胞產(chǎn)生抑制抗原特異性抗體產(chǎn)生的可溶性免疫抑制因子[Tada，etal.，J.Immul.，Vol.111，952(1973)]。報道了可溶性免疫抑制因子與TcR0鏈之間的關系[Dorf，etal.，J.Immunol.，Vol.145，2809-2819(1990)]。作為多發(fā)性硬化癥模型的試驗性腦脊髓炎(EAE)是通過施用堿性髓磷脂蛋白而誘發(fā)的。在EAE中，已知存在在病原性淋巴細胞上特異性表達的T細胞抗原受體(疾病特異性TcR)。因此，已經(jīng)開發(fā)了利用抗疾病-特異性TcR的抗體或TcR肽疫苗的治療方法[Howell，etal.，Science，251，430-432(1991)；Vandenbrk，etal.，Nature，Vol.341，541-544(1989)]。與用免疫抑制劑如葡萄糖-甾類制劑或環(huán)孢菌素A的方法相比，認為這種治療自身免疫性疾病的方法有較嚴重副作用。上述方法只能用于引起疾病的T細胞或抗原被限制在很窄范圍內(nèi)的情況。因此，認為很難用上述方法治療自身免疫性疾病如慢性類風濕性關節(jié)炎，尚未鑒定其抗原而且其中存在許多病原性淋巴細胞。該方法要求確定各種抗原特異性的各抑制T細胞，而且對其TcR進行分析。在目前不可能很容易確定衍生于人的抑制T細胞的情況下，很難用上述TcR作為免疫抑制劑。另一方面，報道了用肽誘導免疫耐受的情況，所述肽具有抗原-衍生的氨基酸序列[Greensteinetal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，Vol.9，7608-7612(1993)]。作為利用TcR肽片段組成免疫抑制劑的方法，公開了用TcRβ鏈衍生的多肽(最少由13個氨基酸殘基組成)治療自身免疫性疾病，特別是慢性類風濕性關節(jié)炎的方法(特表平6-511241)；和施用引起多發(fā)性硬化的病原性T細胞的TcR肽片段以抑制EAE發(fā)作的方法(WO90/11294)。Mohapatra等人已經(jīng)證明由15個氨基酸殘基組成的含CDR3的合成肽(互補性決定區(qū))有免疫抑制作用[J.Immunol.Vol.151，688-689(1993)]，所述CDR3是從抑制T細胞衍生的TcR的特異性抗原決定位點。上述肽片段并不比有抗原特異性的免疫抑制劑好，以致并未解決不能用于治療所有自身免疫性疾病的問題。本發(fā)明綜述本發(fā)明的一個目的是克服傳統(tǒng)方法的上述缺陷，由此提供自身免疫性疾病的治療劑，所述治療劑有抗原非特異性免疫抑制作用，而且因此可用于治療尚未鑒定出抗原的自身免疫性疾病。本發(fā)明的另一目的是提供自身免疫性疾病的治療劑，可用所述治療劑治療伴有炎癥的自身免疫性疾病。本發(fā)明的另一目的是提供與傳統(tǒng)方法中所用的肽相比分子量較低的肽，從而所述肽可以以低成本制備并且其副作用如因頻繁施用而引起的抗原性顯著降低。對源自蛋白質(zhì)如抑制T細胞衍生之TcR的CDR3的蛋白質(zhì)或肽片段的氨基酸序列與自身免疫性疾病治療劑之間的相互關系進行了廣泛的研究，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)存在一些抗原非特異性IgG產(chǎn)生的，具有抑制活性的肽。發(fā)現(xiàn)在各體內(nèi)試驗中，由9個氨基酸殘基組成的肽(示于序列表中的SequenceIDNo.1)不僅抑制抗-卵清蛋白(OvalbuminOVA)抗體的產(chǎn)生，而且抑制-抗匙孔戚血藍蛋白(KeyholeLympetHemocyaninKLH)抗體的產(chǎn)生，本發(fā)明人因此完成了本發(fā)明。附帶提一句，OVA和KLH是用作免疫原的典型抗原(ImmunologyDictionary，1993，tokyoKagakuDojin，pp101和130)?？傊?，抑制T細胞衍生的TcR與各抗原一一對應。另一方面本發(fā)明的肽抑制抗不同抗原如OVA和KLH之抗體的產(chǎn)生，因此具有抗原非特異性免疫抑制活性。本發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)由9個氨基酸殘基組成的肽(示于序列表中的SequenceIDNo.1)抑制試驗性變應性腦脊髓炎(EAE)(多發(fā)性硬化模型)的發(fā)作，所述多發(fā)性硬化是T細胞引起的自身免疫性疾病中的一種。另外，令人驚奇的是，他們發(fā)現(xiàn)由9個氨基酸殘基組成的肽(在序列表中表示為SeqenceIDNo.1)抑制角叉菜膠誘導的爪水腫模型中的水腫，因此具有抗炎活性。本發(fā)明肽具有通過抑制T細胞活性以及抗炎的免疫抑制特性。努力開發(fā)具有較小抗原性并且易合成的低分子量肽的結果是，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)在各體內(nèi)試驗中，由8個氨基酸殘基組成的肽(在序列表中表示為SeqenceIDNo.2)不僅抑制抗OVA抗體的產(chǎn)生，而且也抑制抗KLH的產(chǎn)生。本發(fā)明人通過丙氨酸取代方法[GeysenH.M.etal.，J.Immunol.Methods，102，259-274(1987)]還發(fā)現(xiàn)在一些具有特定的氨基酸序列的肽中具有抗原非特異性抑制IgG產(chǎn)生活性。在各體內(nèi)試驗中，發(fā)現(xiàn)具有通用氨基酸序列的肽不僅抑制抗卵清蛋白(OVA)抗體的產(chǎn)生，而且抑制抗匙孔戚血藍蛋白(KLH)抗體的產(chǎn)生，從而完成了本發(fā)明。因此，本發(fā)明涉及具有下列通式所代表之氨基酸序列的肽或其衍生物，含所述肽的藥物組合物；和用其治療疾病的方法。Ala-Xaa1-Leu-Xaa2-Phe-Xaa3-Xaa4-Xaa5-(Xaa6)n(其中Xaa1和Xaa4各自獨立地代表可具有可以用羥基、氨基或胍基取代的烷基或雜烷基側鏈的氨基酸殘基；Xaa2和Xaa6各自獨立地代表可具有可以用羥基取代的烷基或雜烷基側鏈的氨基酸殘基；Xaa3和Xaa5各自獨立地代表可含有疏水側鏈的氨基酸殘基；和n表示1或0)。圖1是肽(I)色譜圖。按照本發(fā)明得到的肽(I)純度為100％。圖2是肽(II)色譜圖。按照本發(fā)明得到的肽(II)純度為99.6％。圖3是肽(III)色譜圖。按照本發(fā)明得到的肽(III)純度為98.8％。圖4是肽(IV)色譜圖。按照本發(fā)明得到的肽(IV)純度為97.2％。圖5是肽(V)色譜圖。按照本發(fā)明得到的肽(V)純度為98.5％。圖6是肽(VI)色譜圖。按照本發(fā)明得到的肽(VI)純度為98.4％。圖7是肽(VII)色譜圖。按照本發(fā)明得到的肽(VII)純度為97.9％。圖8是肽(VIII)色譜圖。按照本發(fā)明得到的肽(VIII)純度為98.1％。圖9是肽(IX)色譜圖。按照本發(fā)明得到的肽(IX)純度為97.5％。圖10是肽(X)色譜圖。按照本發(fā)明得到的肽(X)純度為98.2％。圖11是肽(XI)色譜圖。按照本發(fā)明得到的肽(I)純度為97.6％。圖12是肽(XII)色譜圖。按照本發(fā)明得到的肽(XII)純度為97.5％。圖13是肽(XIII)色譜圖。按照本發(fā)明得到的肽(XIII)純度為98.2％。圖14是肽(XIV)色譜圖。按照本發(fā)明得到的肽(I)純度為98.6％。圖15是肽(XV)色譜圖。按照本發(fā)明得到的肽(XV)純度為100％。本發(fā)明的公開本發(fā)明涉及具有下列通式所代表之氨基酸序列的肽及其衍生物，Ala-Xaa1-Leu-Xaa2-Phe-Xaa3-Xaa4-Xaa5-(Xaa6)n(其中Xaa1和Xaa4各自獨立地代表可具有可以用羥基，氨基或胍基取代的烷基或雜烷基側鏈的氨基酸殘基；Xaa2和Xaa6各自獨立地代表可具有可以用羥基取代的烷基或雜烷基側鏈的氨基酸殘基；Xaa3和Xaa5各自獨立地代表可含有疏水側鏈的氨基酸殘基；和n表示1或0Xaa1和Xaa4各自獨立地代表可具有可以用羥基、氨基或胍基取代的烷基或雜烷基側鏈的氨基酸殘基。實例可以包括Lys，Arg，His和Ala。Xaa2和Xaa6各自獨立地代表可具有可以用羥基取代的烷基或雜烷基側鏈的氨基酸殘基。實例可以是Thr和Ala。Xaa3和Xaa5各自獨立地代表可含有疏水側鏈的氨基酸殘基。實例可包括Gly和Ala。本文中所用的術語“烷基”指可以是直鏈或支鏈的、包括一級、二級和三級飽和的C1-15，優(yōu)選C1-10烷基。本文所用的術語“雜烷基”指上述C1-15，優(yōu)選C1-10“烷基”中至少一個碳原子已經(jīng)被相同數(shù)量的雜原子如硫(S)或氧(O)[通常是硫酯或硫醚的形式]取代的基團。n表示1或0。在本發(fā)明的肽衍生物中，所有或部分氨基酸可以是D型的，具有活性氫的功能基團可以被適宜的保護基團所取代或C-末端羧基可以是羧基衍生物的形式如酰胺或酯。對用于取代肽中氨基或羧基的保護基沒有限制，但是，乙酰基(Ac)或叔-丁氧羰基(tBoc)是優(yōu)選的。就C末端的羧基衍生物而言，酰胺是優(yōu)選的。轉(zhuǎn)變成肽衍生物可以使穩(wěn)定性得到提高。更具體地說，本發(fā)明涉及具有下列氨基酸序列的肽或其衍生物。Ala-Xaa1-Leu-Xaa2-Phe-Xaa3-Xaa4-Xaa5-(Xaa6)n(其中Xaa1和Xaa4各自獨立地代表Lys，Arg，His或Ala；Xaa2和Xaa6各自獨立地代表Thr或Ala；Xaa3和Xaa5各自獨立地代表Gly或Ala；n表示1或0，)更具體地說，本發(fā)明涉及具有選自下列氨基酸序列的肽或其衍生物，Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Gly-ThrAla-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-GlyAla-Ala-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-GlyAla-Lys-Leu-Ala-Phe-Gly-Lys-GlyAla-Lys-Leu-Thr-Phe-Ala-Lys-GlyAla-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Ala-Gly，和Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Ala。再具體地說，本發(fā)明涉及肽或其衍生物，它們選自由下列式(I)到(XII)所代表的肽和其衍生物Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Gly-Thr(I)DAla-DLys-DLeu-DThr-DPhe-Gly-DLys-Gly-DThr(II)Ac-Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Gly-Thr(III)tBoc-Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Gly-Thr(IV)Ac-DAla-DLys-DLeu-DThr-DPhe-Gly-DLys-Gly-DThr(V)Ac-DAla-DLys-DLeu-DThr-DPhe-Gly-DLys-Gly-DThr-NH2(VI)Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Gly(VII)Ala-Ala-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Gly(VIII)Ala-Lys-Leu-Ala-Phe-Gly-Lys-Gly(IX)Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Ala-Lys-Gly(X)Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Ala-Gly(XI)Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Ala(XII)(其中D表示D型，Ac代表乙?；?，tBoc代表叔丁羰基)對于制備具有由下列通式所代表的氨基酸序列之肽或其衍生物的方法沒有限制Ala-Xaa1-Leu-Xaa2-Phe-Xaa3-Xaa4-Xaa5-(Xaa6)n(其中Xaa1和Xaa4各自獨立地代表可具有可以用羥基、氨基或胍基取代的烷基或雜烷基側鏈的氨基酸殘基；Xaa2和Xaa6各自獨立地代表可具有可以用羥基取代的烷基或雜烷基側鏈的氨基酸殘基；Xaa3和Xaa5各自獨立地代表可含有疏水側鏈的氨基酸殘基；和n表示1或0)例如按照常用固相肽合成法(Fmoc)，通過肽合成儀合成肽，然后用反相HPLC柱純化。也可以用肽合成儀合成肽(II)到(XII)，可以按需要將其進行化學轉(zhuǎn)變。優(yōu)選本發(fā)明肽具有可溶的物理化學特性。因此本發(fā)明肽的分子量低所以甚至在頻繁施用后，副作用，如抗原性的發(fā)生也會顯著降低，而且其毒性也很低。本發(fā)明還涉及含具有下列通式所代表之氨基酸序列的肽或其衍生物的藥物組合物Ala-Xaa1-Leu-Xaa2-Phe-Xaa3-Xaa4-Xaa5-(Xaa6)n(其中Xaa1和Xaa4各自獨立地代表可具有可以用羥基、氨基或胍基取代的烷基或雜烷基側鏈的氨基酸殘基；Xaa2和Xaa6各自獨立地代表可具有可以用羥基取代的烷基或雜烷基側鏈的氨基酸殘基；Xaa3和Xaa5各自獨立地代表可含有疏水側鏈的氨基酸殘基；和n表示1或0)，或含所述肽或其衍生物以及可藥用載體的藥物組合物。更具體地說，本發(fā)明涉及具有下列通式所代表之氨基酸序列的肽或其衍生物。Ala-Xaa1-Leu-Xaa2-Phe-Xaa3-Xaa4-Xaa5-(Xaa6)n(其中Xaa1和Xaa4各自獨立地代表Lys，Arg，His或Ala；Xaa2和Xaa6各自獨立地代表Thr或Ala；Xaa3和Xaa5各自獨立地代表Gly或Ala；n表示1或0，)，更具體地說，本發(fā)明涉及含具有選自下列氨基酸序列之肽或其衍生物的藥物組合物Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Gly-ThrAla-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-GlyAla-Ala-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-GlyAla-Lys-Leu-Ala-Phe-Gly-Lys-GlyAla-Lys-Leu-Thr-Phe-Ala-Lys-GlyAla-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Ala-Gly，和Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Ala或含所述肽或其衍生物和可藥用載體的藥物組合物。進一步說，本發(fā)明涉及含肽或其衍生物的藥物組合物，所述肽或其衍生物選自由下列式(I)到(XII)所代表的肽和其衍生物Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Gly-Thr(I)DAla-DLys-DLeu-DThr-DPhe-Gly-DLys-Gly-DThr(II)Ac-Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Gly-Thr(III)tBoc-Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Gly-Thr(IV)Ac-DAla-DLys-DLeu-DThr-DPhe-Gly-DLys-Gly-DThr(V)Ac-DAla-DLys-DLeu-DThr-DPhe-Gly-DLys-Gly-DThr-NH2(VI)Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Gly(VII)Ala-Ala-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Gly(VIII)Ala-Lys-Leu-Ala-Phe-Gly-Lys-Gly(IX)Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Ala-Lys-Gly(X)Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Ala-Gly(XI)Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Ala(XII)(其中D表示D型，Ac代表乙?；?，tBoc代表叔丁氧羰基)；或含所述肽或其衍生物和可藥用載體的藥物組合物。在用于本發(fā)明藥物組合物的肽衍生物中，所有或部分氨基酸是D型的，具有活性氫的功能基團可以被適宜的保護基團所取代或C-末端羧基可以是羧基衍生物的形式如酰胺或酯。對用于取代肽中氨基或羧基的保護基沒有限制，但是，乙?；?Ac)或叔-丁氧羰基(tBoc)是優(yōu)選的。就C末端的羧基衍生物而言，酰胺是優(yōu)選的。轉(zhuǎn)變成肽衍生物可以使穩(wěn)定性得到提高。上述本發(fā)明的藥物組合物特別適用于治療自身免疫性疾病。因此，本發(fā)明提供了用于治療自身免疫性疾病的藥物組合物。用于治療自身免疫性疾病的本發(fā)明組合物的特征在于其抗原非特異性。本發(fā)明的肽或其衍生物抑制T細胞的活性，因此，發(fā)明還涉及用于治療下列疾病中的一種或多種的藥物組合物多發(fā)性硬化癥、慢性類風濕性關節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、Sjugren綜合征、突眼性甲狀腺腫、橋本病和自身免疫性溶血貧血。本發(fā)明的上述藥物組合物還可用于預防和治療與器官移植有關的排異反應。因此，本發(fā)明提供了用于預防和治療與器官移植有關的排異反應的藥物組合物。此外，本發(fā)明的上述藥物組合物具有抗炎作用，因此，可用作抗炎劑。因此，本發(fā)明提供了用于治療炎癥的藥物組合物。本發(fā)明還涉及治療自身免疫性疾病的方法，所述方法包括施用藥物有效量的上述肽或其衍生物。本發(fā)明還涉及治療一種或多種下列疾病的方法所述方法包括施用藥物有效量的上述肽或其衍生物。本發(fā)明還涉及與器官移植有關的排異反應的預防和治療方法，所述方法包括施用藥物有效量的上述肽或其衍生物。本發(fā)明還涉及治療炎癥的方法，所述方法包括施用藥物有效量的上述肽或其衍生物。本發(fā)明也涉及將上述肽或其衍生物用于制備治療自身免疫性疾病之藥物組合物的用途。本發(fā)明還涉及上述肽或其衍生物用于制備治療下列一種或多種疾病之藥物組合物的用途多發(fā)性硬化癥、慢性類風濕性關節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、Sjugren綜合征、突眼性甲狀腺腫、橋本病和自身免疫性溶血貧血。本發(fā)明還涉及上述肽或其衍生物用于制備與器官移植相關之排異反應的藥物組合物的用途。本發(fā)明還涉及上述肽或其衍生物用于制備治療炎癥之藥物組合物的用途。盡管本發(fā)明肽的臨床劑量可隨給藥方法、年齡、體重或各患者的條件等而變化，但一般是每天每成人0.05-500mg，優(yōu)選0.1-100mg。就給藥方法而言，可以利用靜脈內(nèi)注射。除常規(guī)的靜脈內(nèi)注射外，也可以進行輸注。就注射制劑而言，可將本發(fā)明肽或其衍生物例如配制成注射用粉劑。在這種情況下，通過將選自下列的一種或一種以上適宜的水溶性賦形劑加到粉末制劑中，用水溶解所得的混合物，將所得溶液按份注射在小瓶或安瓿中，凍干，然后密封就可以得到注射制劑，所述水溶性賦形劑選自甘露糖醇、蔗糖、乳糖、麥芽糖、葡萄糖、果糖等。還可以通過鼻或肺全身施用作為細顆粒氣溶膠制劑的粉末制劑。此外，在加入適宜的賦形劑等后，可以口服施用粉末制劑。在本發(fā)明中，用ELISA方法研究小鼠中抗OVA抗體產(chǎn)生和抗KLH抗體產(chǎn)生的抑制作用。與未給藥組相比，本發(fā)明肽對抗OVA抗體的產(chǎn)生表現(xiàn)出很顯著的高抑制活性。甚至與由源自CDR3的15個氨基酸殘基組成的肽片段相比，本發(fā)明的肽也有很高的抗體產(chǎn)生抑制活性。與未給藥組相比，本發(fā)明肽對抗KLH抗體的產(chǎn)生表現(xiàn)出很高的抑制活性。另外，在小鼠中還檢測了抑制實驗性腦脊髓炎(EAE)發(fā)作的作用。與未給藥組相比，本發(fā)明肽對于EAE發(fā)作有顯著的抑制作用。此外，在角叉菜膠誘導的爪水腫模型中，檢測了本發(fā)明肽的抑制作用，表明與未給藥組相比，有很高的水腫抑制作用。迄今為止，尚未有報道說明衍生于TcRα鏈J區(qū)并可以人工合成的低分子量肽具有抗原非特異性免疫抑制作用。本發(fā)明的肽或其衍生物可用作自身免疫性疾病的治療劑，特別是用于治療下列一種或多種疾病多發(fā)性硬化、慢性類風濕性關節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、Sjugren綜合征、突眼性甲狀腺腫、橋本病和自身免疫性溶血貧血。它還具有抗炎作用，因此可用作自身免疫性疾病中伴有炎癥的那些疾病，如慢性類風濕性關節(jié)炎的治療劑。另外，本發(fā)明的肽具有抗體產(chǎn)生抑制作用，因此，可用作其中涉及IgE的速發(fā)型變態(tài)反應，如花粉病、特應性皮炎、哮喘、過敏性休克或枯草熱或藥物過敏的治療劑。下列將借助實施例更詳細地描述本發(fā)明，但在本發(fā)明中應牢記本發(fā)明不限于所述實施例或受所述實施例的限制。實施例1肽的合成肽(I)的合成用固相方法(Fmoc)，利用肽合成儀(“430A型”，AppliedBiosystemsInc.)合成肽(I)。將具有用9-芴基甲基氧羰基(Fmoc)保護的N-末端的氨基酸通過下文描述的方法結合在對羥基甲基苯氧基甲基聚苯乙烯(HMP)樹脂上。首先，在室溫，用20％哌啶/N-甲基吡咯烷酮(NMP)將樹脂上的氨基酸去保護，然后用NMP和50％二氯甲烷(DCM)/甲醇洗滌兩次。洗滌后，加入用50％鄰苯并三唑-1-基-N，N，N，N-四甲基脲-六氟-磷酸鹽(HBTU)/DCM稀釋的肽，在室溫經(jīng)60-120分鐘完成結合反應。重復上述步驟以結合所有的氨基酸。完成反應后，用50％HBTU/DCM除去N-末端Fmoc基團，然后用95％三氟乙酸(TFA)從樹脂中回收游離肽。用5％乙酸溶液稀釋所回收的肽，然后用反相HPLC純化。肽(II)、(III)、(IV)、(V)和(VI)的合成用固相方法(tBoc)，利用肽合成儀(“Beckman990c”)合成肽(II)、(III)、(IV)、(V)和(VI)。用下文所述的方法，將具有用叔丁基氧羰基(tBoc)保護的氨基酸結合在樹脂上。附帶說，用苯基乙酰氨基甲基(Pam)樹脂合成以羧基為C-末端的肽，用4-甲基二苯甲基胺(MBHA)樹脂合成以酰胺基為C-末端的肽。首先，室溫下用50％TFA/DCM將樹脂上的氨基酸去保護，然后用異丙醇、DIPEA和DCM分別洗滌兩次。然后加入用50％DMF/DCM稀釋的肽，室溫經(jīng)60-120分鐘完成結合反應。重復上述步驟，完成所有氨基酸的結合反應。利用HF法(J.M.Stewartetal.，PierceChemicalCo.，Rockford，Illinois，1984)從樹脂上回收游離肽，用5％乙酸溶液稀釋所得游離肽，然后用反相HPLC法純化，以得到肽(IV)。用50％TFA/DCM除去N-末端的tBoc基團，用HF法從樹脂上回收游離肽，用5％乙酸溶液稀釋，然后用反相HPLC法純化以得到肽(II)。用20％乙酸酐將乙?；?Ac)加到N-末端，用HF法從樹脂上回收游離肽，用5％乙酸溶液稀釋，然后用反相HPLC法純化以得到肽(III)、(V)和(VI)。檢測由此合成的肽的純度通過反相HPLC法，用C-18柱(VydacCorp.)確定由此合成的各肽的純度。用5％-25％乙腈/純化水的線性梯度為移動相，通過測量在215nm的吸收值來檢測洗脫峰。圖1是肽(I)色譜圖。按照本發(fā)明得到的肽(I)純度為100％。圖2是肽(II)色譜圖。按照本發(fā)明得到的肽(II)純度為99.6％。圖3是肽(III)色譜圖。按照本發(fā)明得到的肽(III)純度為98.8％。圖4是肽(IV)色譜圖。按照本發(fā)明得到的肽(IV)純度為97.2％。圖5是肽(V)色譜圖。按照本發(fā)明得到的肽(V)純度為98.5％。圖6是肽(VI)色譜圖。按照本發(fā)明得到的肽(VI)純度為98.4％。實施例2測量小鼠中肽(I)對抗OVA抗體產(chǎn)生的抑制作用在施用抗原前5天和3天，將各100g由9個氨基酸殘基組成的(在本發(fā)明序列表中的SeqenceIDNo.1)肽和由15個氨基酸組成的衍生于克隆17.2TcR(由上述Mohapatra等報道的)的合成肽溶解在200l生理鹽水中，，將由此得到的各溶液皮下施用給9周齡的Balb/c小鼠。作為對照，使用施用了相同量生理鹽水的非給藥組。在200l生理鹽水中，溶解100gOVA(SigmaChemicalCo.)，然后皮下給藥。在施用抗原后21天收集血液，用下列方法測量抗體滴定度。用磷酸鹽緩沖液(PBS)將OVA稀釋到10g/ml，在96孔微滴定板中每孔注入50μl溶液。在4℃過夜完成包被。然后用含0.05％吐溫-20(T-PBS)的PBS將微滴定板洗滌3次。將含0.5％酪蛋白的200μlTris緩沖生理鹽水加到各孔中，然后將微滴定板在室溫保溫1小時。然后用T-PBS將微滴定板洗滌3次。用含0.5％酪蛋白的TBS稀釋從小鼠收集的血液的血清，稀釋倍數(shù)為200倍，將50μl稀釋的血清加到各孔中，然后將平板放置1小時(一級反應)。在完成一級反應后，用T-PBS將微滴定板洗滌3次。將50μl用含0.5％酪蛋白的TBS稀釋4000倍的抗小鼠IgG過氧化物酶標記的抗體(TAGOCo.)加到各孔中，然后在室溫反應1小時(二級反應)。完成二級反應后，再將平板洗滌3次。將50μl基質(zhì)液/顯色劑(色原底物BehringwerkeAG)加到各孔中，然后在室溫反應30分鐘。反應完成后，加入0.5N稀硫酸以終止反應，然后用比色計(“BEP-II”，BehringwerkeAG/德國產(chǎn)品)測量在450nm的吸收值，以650nm的吸收值為對照。結果列于表1。表1在小鼠中，本發(fā)明肽(I)對抗OVA抗體產(chǎn)生的抑制作用</tables>從上述結果可以發(fā)現(xiàn)，與非給藥組相比，在分別施用了衍生于克隆17.2的肽15和本發(fā)明肽(I)的小鼠中，抗體產(chǎn)生受到顯著抑制。附帶說，每組有8只小鼠。實施例3在小鼠中測量肽(I)-(VI)對抗KLH抗體產(chǎn)生的抑制作用在施用抗原前5天和3天，將各100ug由9個氨基酸殘基組成的(在本發(fā)明序列表中的SeqenceIDNo.1)肽(I)-(VI)溶解在200ul生理鹽水中，將由此得到的各溶液皮下施用給9周齡的Balb/c小鼠。作為對照，使用施用了相同量生理鹽水的非給藥組。在200ul生理鹽水中，溶解25ugKLH作為抗原，然后皮下施用所得的溶液。在施用抗原后21天收集血液，用下列方法測量抗體滴定度。用磷酸緩沖鹽(PBS)將KLH稀釋到10ug/ml，在96孔微滴定板中加入50ul溶液，然后將平板在4℃過夜。用含0.05％吐溫-20的PBS(T-PBS)將微滴定板洗滌3次后，將200ul含0.5％酪蛋白的Tris緩沖生理鹽水分別加到各孔中，然后將微滴定板在室溫保溫1小時。然后用T-PBS將微滴定板洗滌3次，將50ul用含0.5％酪蛋白的TBS稀釋200倍的小鼠血清加到各孔中，然后反應1小時(一級反應)。用T-PBS將所述微滴定板洗滌3次，向其中加入50μl用含0.5％酪蛋白的TBS稀釋4000倍的抗小鼠IgG過氧化物酶標記的抗體(TAGOCo.)。然后在室溫反應1小時(二級反應)。完成二級反應后，再將平板洗滌3次。將50ul基質(zhì)液/顯色劑(色原底物BehringwerkeAG)加到各孔中，然后在室溫反應30分鐘。反應完成后，加入0.5N稀硫酸以終止反應，然后用比色計(“BEP-II”，BehringwerkeAG/德國產(chǎn)品)測量在450nm的吸收值，以650nm的吸收值為對照。結果列于表2。表2本發(fā)明肽對抗KLH抗體產(chǎn)生的抑制作用</tables>從上述結果可以發(fā)現(xiàn)，與施用了生理鹽水的非給藥組相比，在分別施用了肽(I)到肽(VI)的小鼠中，抗體產(chǎn)生受到顯著抑制。附帶說，每組有8只小鼠。從實施例2和3的結果可以理解，本發(fā)明的肽具有抗原非特異性免疫抑制作用。實施例4肽(I)對EAE模型小鼠的發(fā)作抑制作用使用豚鼠脊髓勻漿物作為抗原。用PBS將豚鼠脊髓勻漿物稀釋到6.6mg/ml，然后加入等量的弗氏完全佐劑。用超聲裝置使所得的混合物形成乳液。以300ul的總量將所得乳液施用到外側皮下的兩個區(qū)。在施用抗原前5天和3天，和在一周5天，連續(xù)施用抗原4周后，將溶解在100ul生理鹽水中的肽(I)溶液皮下施用于14周齡的SJL小鼠。附帶說，為提高發(fā)作比率，在施用抗原那天和施用抗原后2天，靜脈內(nèi)施用作為增強劑的400ug/100ul百日咳毒素(PTX)。在一級抗原施用后的14-28天，觀察發(fā)作的情況。以下列標準[Pettinelli，C.B.，F(xiàn)ritz，D.E.，andMcFarlin，D.E.J.Immunol.，129，No.3，1024-1028(1982)]為基礎記錄發(fā)作情況。在表3中，列出了施用一級抗原后22天、25天和28天，各施用組的平均值+標準偏差(SD)。附帶說，各組由8只小鼠組成，用Steel的兩尾方法進行統(tǒng)計學分析。評分0沒有異常評分1后腿輕微麻痹，同時尾無力評分2后腿中度麻痹，同時尾無力評分3后腿全部麻痹評分4前腿輕微麻痹，同時后腿全部麻痹評分5所有腿均麻痹評分6因麻痹而死亡結果列在表3中。表3本發(fā)明肽(I)對EAE模型小鼠的發(fā)作抑制作用(平均±SD)</tables>由結果可知，施用本發(fā)明的合成肽(I)可以抑制EAE的發(fā)作。特別是，在5ug/體重組中，與施用生理鹽水的組相比，在25天和28天抑制的發(fā)作有5％的顯著差異。在施用25ug/體重組中，與施用生理鹽水的組相比，從22天開始，抑制的發(fā)作有5％的顯著差異。此外，在25天之后抑制的發(fā)作有1％的顯著差異。從實施例4中發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的肽對于治療多發(fā)性硬化癥也是有效的。實施例5肽(I)對大鼠角叉菜膠誘導的爪水腫模型的抑制作用將λ-角叉菜膠(PICNIN-A、逗子化學研究所制)加到生理鹽水中達到1w/v％的終濃度，在沸水浴中加熱以便完全溶解角叉菜膠。然后將所得的溶液置于室溫。試驗前，通過在沸水浴中加熱而完全溶解所述溶液，并將其在約60℃的水浴中放置直到施用。此后，將50μl本發(fā)明的肽(I)或生理鹽水(非給藥組)皮下施用于Splague-Dawley大鼠(6周齡，雄性)，將50ul1％角叉菜膠溶液施用于相同的位點。在施用角叉菜膠后，每隔1小時用大鼠用足容積測定裝置(BMInstrumentCo.的產(chǎn)品)測量爪體積，連續(xù)測5個小時。附帶說，每組有10只小鼠，用Dunnet雙尾法進行統(tǒng)計學分析。結果列于表4中。表4本發(fā)明肽(I)對水腫的抑制作用(％)</tables>由結果可知，在施用角叉菜膠后1小時，通過施用本發(fā)明的肽(I)就可以抑制水腫的發(fā)作。在10ug/位點組中，在施用角叉菜膠后2小時和其后，抑制的水腫發(fā)作就有5％的顯著差異，而且在施用角叉菜膠后5小時，觀察到抑制水腫發(fā)作的傾向。從上述結果看出，本發(fā)明的肽有抗炎作用。此外，本發(fā)明人為了找到有效的低分子量肽而完成了下列試驗。實施例6肽的合成通過肽合成儀(“430A型”，ABICo.)，用與實施例相似的方法合成并純化肽(VII)，(VIII)，(IX)，(X)，(XI)，(XII)，(XIII)，(XIV)和(XV)。Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Gly(VII)Ala-Ala-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Gly(VIII)Ala-Lys-Leu-Ala-Phe-Gly-Lys-Gly(IX)Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Ala-Lys-Gly(X)Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Ala-Gly(XI)Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Ala(XII)Ala-Lys-Ala-Thr-Phe-Gly-Lys-Gly(XIII)Ala-Lys-Leu-Thr-Ala-Gly-Lys-Gly(XIV)Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Gly(XV)檢測由此合成的肽的純度。用與實施例1相似的方法檢測各肽的純度。圖7是肽(VII)色譜圖。按照本發(fā)明得到的肽(VII)純度為97.9％。圖8是肽(VIII)色譜圖。按照本發(fā)明得到的肽(VIII)純度為98.1％。圖9是肽(IX)色譜圖。按照本發(fā)明得到的肽(IX)純度為97.5％。圖10是肽(X)色譜圖。按照本發(fā)明得到的肽(X)純度為98.2％。圖11是肽(XI)色譜圖。按照本發(fā)明得到的肽(I)純度為97.6％。圖12是肽(XII)色譜圖。按照本發(fā)明得到的肽(XII)純度為97.5％。圖13是肽(XIII)色譜圖。按照本發(fā)明得到的肽(XIII)純度為98.2％。圖14是肽(XIV)色譜圖。按照本發(fā)明得到的肽(I)純度為98.6％。圖15是肽(XV)色譜圖。按照本發(fā)明得到的肽(XV)純度為100％。實施例7測量小鼠中肽(I)，(VII)-(XV)對抗KLH抗體產(chǎn)生的抑制作用用與實施例3相似的方法，研究小鼠中肽(I)，(VII)-(XV)對抗KLH抗體產(chǎn)生的抑制作用。結果列于表5。表5</tables>與非給藥組和施用肽(I)的組相比，在施用肽(VII)、(IX)、(X)或(XI)的小鼠中，抗體產(chǎn)生受到顯著抑制。另一方面，與施用肽(I)的組相比，在施用肽(VIII)、(XII)、(XIII)、(XIV)或(XV)的小鼠中，抗體產(chǎn)生未受到抑制。附帶說，各組有8只小鼠。從上述結果看出，發(fā)現(xiàn)抑制抗體產(chǎn)生的最小肽是由序列表中SequenceIDNo.2所示的8個氨基酸殘基組成的。實施例8肽(I)、(VII)～(XIV)對小鼠中抗OVA抗體產(chǎn)生的抑制作用；顯示抑制作用的最小肽單位和必需氨基酸的鑒定用與實施例2相似的方法，測量小鼠中肽(I)、(VII)～(XIV)對抗OVA抗體產(chǎn)生的抑制作用。結果列于表6。表6與非給藥組和施用肽(I)的組相比，施用了肽(VII)、(IX)或(XI)的小鼠的抗體產(chǎn)生受到明顯抑制。另一方面，與施用肽(I)的組相比，施用了肽(XIII)或(XIV)的小鼠的抗體產(chǎn)生未受到抑制。附帶說，每組有8只小鼠。從實施例7和8可以看出，對抗原非特異性抗體產(chǎn)生有抑制作用的肽在其氨基酸序列第一、第三和第五位分別具有Ala、Leu和Phe，才能達到抑制抗體產(chǎn)生的目的。序列表SEQIDNo.1(i)序列特征(A)序列長度9(B)序列類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸結構線性(ii)分子類型蛋白質(zhì)(iii)來源無(A)生物名稱無(B)菌株名稱無(iv)特征肽(I)(v)序列描述SEQIDNO1AlaLysLeuThrPheGlyLysGlyThrSEQIDNO2(i)序列特征(A)序列長度8(B)序列類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸結構線性(ii)分子類型蛋白質(zhì)(iii)來源無(A)生物名稱無(B)菌株名稱無(iv)特征肽(I)(v)序列描述SEQIDNO2AlaLysLeuThrPheGlyLysGlySEQIDNO3(i)序列特征(A)序列長度8(B)序列類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸結構線性(ii)分子類型蛋白質(zhì)(iii)來源無(A)生物名稱無(B)菌株名稱無(iv)特征肽(I)(v)序列描述SEQIDNO3AlaAlaLeuThrPheGlyLysGlySEQIDNO4(i)序列特征(A)序列長度8(B)序列類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸結構線性(ii)分子類型蛋白質(zhì)(iii)來源無(A)生物名稱無(B)菌株名稱無(iv)特征肽(I)(v)序列描述SEQIDNO4AlaLysLeuAlaPheGlyLysGlySEQIDNO5(i)序列特征(A)序列長度8(B)序列類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸結構線性(ii)分子類型蛋白質(zhì)(iii)來源無(A)生物名稱無(B)菌株名稱無(iv)特征肽(I)(v)序列描述SEQIDNO5AlaLysLeuThrPheAlaLysGlySEQIDNO6(i)序列特征(A)序列長度8(B)序列類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸結構線性(ii)分子類型蛋白質(zhì)(iii)來源無(A)生物名稱無(B)菌株名稱無(iv)特征肽(I)(v)序列描述SEQIDNO6AlaLysLeuThrPheGlyAlaGlySEQIDNO7(i)序列特征(A)序列長度8(B)序列類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸結構線性(ii)分子類型蛋白質(zhì)(iii)來源無(A)生物名稱無(B)菌株名稱無(iv)特征肽(I)(v)序列描述SEQIDNO7AlaLysLeuThrPheGlyLysAla權利要求1.具有下列氨基酸序列的肽或其衍生物，Ala-Xaa1-Leu-Xaa2-Phe-Xaa3-Xaa4-Xaa5-(Xaa6)n(其中Xaa1和Xaa4各自獨立地代表可具有可以用羥基、氨基或胍基取代的烷基或雜烷基側鏈的氨基酸殘基；Xaa2和Xaa6各自獨立地代表可具有可以用羥基取代的烷基或雜烷基側鏈的氨基酸殘基；Xaa3和Xaa5各自獨立地代表可含有疏水側鏈的氨基酸殘基；和n表示1或0。2.根據(jù)權利要求1的肽或其衍生物，其中n表示1或0；其中Xaa1和Xaa4各自獨立地代表Lys，Art，His或Ala；Xaa2和Xaa6各自獨立地代表Thr或Ala；Xaa3和Xaa5各自獨立地代表Gly或Ala。3.根據(jù)權利要求1或2的肽或其衍生物，它具有選自下列的氨基酸序列Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Gly-ThrAla-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-GlyAla-Ala-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-GlyAla-Lys-Leu-Ala-Phe-Gly-Lys-GlyAla-Lys-Leu-Thr-Phe-Ala-Lys-GlyAla-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Ala-Gly，和Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Ala。4.根據(jù)權利要求1-3任一項的肽或其衍生物，其中所述氨基酸的部分或全部是D型。5.根據(jù)權利要求1-4任一項的肽或其衍生物，其中用保護基取代N-末端的氨基。6.根據(jù)權利要求5的肽或其衍生物，其中在N-末端的氨基保護基是乙?；蚴宥⊙豸驶?。7.根據(jù)權利要求1-6任一項的肽或其衍生物，其中C-末端羧基是羧基衍生物。8.根據(jù)權利要求7的肽或其衍生物，其中C-末端的羧基的羧基衍生物是酰胺基。9.根據(jù)權利要求1-8任一項的肽或其衍生物，是選自由下列式(I)-(XII)表示的肽或其衍生物，Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Gly-Thr(I)DAla-DLys-DLeu-DThr-DPhe-Gly-DLys-Gly-DThr(II)Ac-Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Gly-Thr(III)tBoc-Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Gly-Thr(IV)Ac-DAla-DLys-DLeu-DThr-DPhe-Gly-DLys-Gly-DThr(V)Ac-DAla-DLys-DLeu-DThr-DPhe-Gly-DLys-Gly-DThr-NH2(VI)Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Gly(VII)Ala-Ala-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Gly(VIII)Ala-Lys-Leu-Ala-Phe-Gly-Lys-Gly(IX)Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Ala-Lys-Gly(X)Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Ala-Gly(XI)Ala-Lys-Leu-Thr-Phe-Gly-Lys-Ala(XII)其中D表示D型，Ac表示乙?；?，tBoc代表叔丁氧羰基。10.含有權利要求1-9中任一項記載的肽或其衍生物中的一種或多種的藥物組合物。11.用于治療自身免疫性疾病的藥物組合物，它含有權利要求1-10中的任一項記載的肽或其衍生物。12.根據(jù)權利要求11記載的治療自身免疫性疾病的藥物組合物在制備治療下列一種或多種疾病的藥物中的應用多發(fā)性硬化癥、慢性類風濕性關節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、Sjugren綜合征、突眼性甲狀腺腫、橋本病和自身免疫性溶血貧血。13.根據(jù)權利要求10或11的藥物組合物在制備預防和治療與器官移植有關的排異反應的藥物中的應用。14.根據(jù)權利要求10的藥物組合物在制備治療炎癥的藥物中的應用。全文摘要本發(fā)明涉及具有下列氨基酸序列的肽或其衍生物及它們的修飾物,Ala－Xaa1－Leu－Xaa2－Phe－Xaa3－Xaa4－Xaa5－(Xaa6)n其中Xaa1和Xaa4各自獨立地代表可具有可以用羥基、氨基或胍基取代的烷基或雜烷基側鏈的氨基酸殘基;Xaa2和Xaa6各自獨立地代表可具有可以用羥基取代的烷基或雜烷基側鏈的氨基酸殘基;Xaa3和Xaa5各自獨立地代表可含有疏水側鏈的氨基酸殘基;和n表示1或0;本發(fā)明的肽或其衍生物可作為用于預防和治療自身免疫性疾病、與器官移植有關的排異反應、炎癥等的藥物組合物。文檔編號A61P29/00GK1183784SQ96193769公開日1998年6月3日申請日期1996年4月3日優(yōu)先權日1995年4月7日發(fā)明者山形伸行,尾形研二,我妻雅子,高梨均申請人:赫徹斯特藥品和化學品公司