專利名稱：N-環(huán)己基苯甲酰胺類化合物治療腸疾病的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及N-環(huán)己基苯甲酰胺類化合物的新治療用途。
過敏性腸綜合癥(IBS)的確認(rèn)癥狀為腹部疼痛、無規(guī)律排糞(可與疼痛有關(guān)或無關(guān))并常見腹脹。
由于這多重癥狀，有建議根據(jù)是否存在便秘或腹瀉作用進(jìn)行病理學(xué)分類。
在某些形式的IBS中觀察到的便秘可通過刺激腸運動性，更具體地說是結(jié)腸運動性的藥物進(jìn)行治療。
據(jù)知EP 0507672描述的N-環(huán)己基苯甲酰胺類化合物刺激消化道運動性，因此建議用于恢復(fù)其中便秘占主導(dǎo)的IBS患者的結(jié)腸運送。
在該類疾病的病理學(xué)研究中，據(jù)顯示，主訴腹部疼痛的患者表現(xiàn)出內(nèi)臟敏感性閾值降低(醫(yī)學(xué)/科學(xué)(1994)，10，1107-15)。
該閾值可通過各種藥理活性物質(zhì)提高，例如κ激動劑或某些5-HT3拮抗劑，如格拉司瓊(W094/01095)。據(jù)知后者的化合物還可降低直腸運動性(Aliment.Pharmacol.Ther.(1993)，7，175-80)，并且據(jù)知其它5-HT3拮抗劑，如昂丹司瓊減低結(jié)腸運送(Dig.Dis.Sci.(1990)，35，477-80)。
EP 0507672中描述的N-環(huán)己基苯甲酰胺類化合物與化合物如格拉司瓊相比，對5-HT3受體沒有作用。
本申請公司發(fā)現(xiàn)EP 0507672中描述的某些化合物具有提高內(nèi)臟器官疼痛感覺閾值的特性。
本申請公司還發(fā)現(xiàn)這些化合物在潰瘍性結(jié)腸模型中具有抗炎作用。
這些化合物是通式I的化合物
其中R1是直鏈的、支鏈的或環(huán)化的C1-C5烷基；R2表示氫原子，直鏈的或支鏈的C1-C5烷基、羥基、C1-C5烷氧基或C1-C2羥烷基；R3表示氫原子，或者R2和R3一起表示C1-C5烷基。
存在兩個非對稱中心意味著式I化合物包括四種立體異構(gòu)體。本發(fā)明中使用的化合物具有2R絕對構(gòu)型，優(yōu)選的化合物具有1R，2R絕對構(gòu)型。具有順式相對構(gòu)型的外消旋化合物(它是1R，2R和1S，2S對映體的等摩爾混合物)含有活性異構(gòu)體，因此可用于本發(fā)明。另外，具有反式相對構(gòu)型的外消旋化合物(它是1S，2R和1R，2S對映體的等摩爾混合物)也可用于本發(fā)明。
特別優(yōu)選的混合物是那些相應(yīng)的式I化合物，其中R1是甲基或環(huán)丙甲基，R2是甲基并且R3是氫原子。
式I化合物可采用EP 0507672中描述的合成方法制備，即將相應(yīng)的通式II的苯甲酸與具有所需立體化學(xué)特性的通式III的二胺反應(yīng)。
具有順式相對構(gòu)型的外消旋二胺III可按照EP 0507672描述的合成路線，由(順)-2-(三氟乙酰氨基)環(huán)己烷羧酸制備。
具有1R，2R絕對構(gòu)型的、其中R2＝H并且R3＝CH3的二胺III在EP 0507672中也有記載。
具有1S，2R絕對構(gòu)型的、其中R2＝H并且R3＝CH3的二胺III可由氨基酯IV(它可根據(jù)四面體通訊(1984)，25，2557-2560描述的方法獲得)按照下面的一系列反應(yīng)制備
本發(fā)明的主題是式I化合物或其可藥用鹽用于制備治療內(nèi)臟器官疼痛，尤其是IBS患者的內(nèi)臟器官疼痛的藥物的用途。
本發(fā)明的另一個主題是式I化合物或其可藥用鹽用于制備治療炎性結(jié)腸炎，例如出血性直腸結(jié)腸炎或節(jié)段性回腸炎的藥物的用途。
經(jīng)口服給藥于人的劑量學(xué)是每日約1mg～約200mg。
如下給出的有關(guān)試驗獲得的結(jié)果證明了上述藥理學(xué)性質(zhì)。
I-有關(guān)5-HT3受體的活性1)有關(guān)受體的親和性化合物的5-HT3受體親和性按照《生化和藥理學(xué)》(1990)，40(7)，1541-1550描述的方法，使用NG 108-15細(xì)胞的膜制品并用氚標(biāo)記的BRL43694作為特異性配體進(jìn)行測定。
式I化合物顯示出低5-HT3受體親和性，即大于1微摩爾。相比之下，昂丹司瓊的Ki是16nM。
2)Bezold-Jarisch反射按照J(rèn).Pharm.& Exp.Therp.(1989)，248，197-201描述的方法，通過測定它們抑制由血清素誘發(fā)的心動過緩在體內(nèi)評價產(chǎn)物的5-HT3拮抗劑活性。
在達(dá)1mg/kg(i.v.)的劑量下，沒有一種式I化合物拮抗心動過緩。相比之下，昂丹司瓊拮抗心動過緩的IC50約為0.003mg/kg(i.v.)。
II-內(nèi)臟敏感性第一種模型在于觀察由施加于預(yù)先刺激的粘膜的直腸擴(kuò)張引起的大鼠腹部痙攣。痙攣的次數(shù)與所經(jīng)歷的疼痛強(qiáng)度成比例。在Neurogastroenterol.and Mot.(1994)，6，140中記載了一種類似的模型，表明降低人疼痛感覺的物質(zhì)也減少痙攣的次數(shù)(在大鼠中觀察)。
方法對重180g的雄性Sprague-Dawley大鼠禁食12小時。在氟烷輕微麻醉下，引入直腸內(nèi)探針(距肛門5cm)并注入1.5ml 1％的稀乙酸。該酸立即經(jīng)肛門流出。酸的短暫接觸可刺激粘膜(直腸結(jié)腸炎模型)。刺激后1小時30分鐘后，在氟烷輕微麻醉下，將安裝在聚亞胺酯導(dǎo)管(內(nèi)徑1cm)上的一個小乳膠球(空時直徑2mm，長1cm)引入直腸(距肛門5cm)。該導(dǎo)管用粘性膠布粘附在尾底部并用一玻璃管保護(hù)。強(qiáng)行飼喂給予試驗化合物，然后放在蓋有絲網(wǎng)的結(jié)晶盤中。為進(jìn)行擴(kuò)張，使玻璃管和導(dǎo)管的游離端都通過絲網(wǎng)。
刺激后2小時30分鐘進(jìn)行擴(kuò)張。將小乳膠球用1.5ml蒸餾水?dāng)U張(結(jié)腸內(nèi)壓力平均為60mmHg)。維持?jǐn)U張10分鐘，該期間計數(shù)腹部痙攣次數(shù)。然后吸出蒸餾水使小球收縮。
結(jié)果以五只大鼠受擴(kuò)張期間10分鐘觀察到的痙攣平均次數(shù)表示。
*在p＜0.05時與安慰劑有明顯差異(Dunett檢驗)。
III-抗炎活性通過結(jié)腸內(nèi)滴注三硝基苯磺酸在大鼠誘發(fā)潰瘍性結(jié)腸炎的模型已有記載，例如參見Gut(1992)，33，1498-1503。
對于這類結(jié)腸炎發(fā)展的有益療效，一方面可通過動物的全面性健康(例如體重改變)來評價，另一方面可通過在實驗結(jié)束時的結(jié)腸組織學(xué)研究進(jìn)行評價。
方法將自前一天開始禁食的雄性Sprague-Dawley大鼠(140-150g)在麻醉下(isoflurane)用1ml 50mg/ml三硝基苯磺酸(TNB)水溶液刺激深部結(jié)腸(距肛門7cm)粘膜。在第二天，將大鼠隨機(jī)分成兩個相同的組(n＝7)，然后在早晨和傍晚通過強(qiáng)行飼喂接受治療(安慰劑或產(chǎn)物)。產(chǎn)物以1mg/kg劑量(口服)給予，每日兩次。
結(jié)腸接受刺激后，接受10天飼喂治療。自D5到D10每日早晨稱重動物。在D9天使動物禁食并在D10天處死動物。取出結(jié)腸并進(jìn)行肉眼觀察，然后進(jìn)行組織學(xué)鑒定。結(jié)果以信息方式給出了使用化合物6獲得的結(jié)果。體重變化
*在p＜0.05時與安慰劑有顯著差異(Dunett檢驗)。結(jié)腸的肉眼觀察分析將結(jié)腸的肉眼觀察定為如下等級標(biāo)準(zhǔn)程度0沒有刺激痕跡1粘膜有輕微血管擴(kuò)張2粘膜血管擴(kuò)張并有粘連3粘膜出血和硬化并有粘連4粘膜潰瘍和出血并有粘連。
下表匯總了結(jié)果，所示為表現(xiàn)為各種程度的動物數(shù)
采用最小二乘檢驗法進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)計算，將程度1和2類的(使用安慰劑治療的為0，使用產(chǎn)物治療的為5)與程度3和4類的(使用安慰劑治療的為6，使用產(chǎn)物治療的為2)進(jìn)行比較。
組織學(xué)分析使用甲醛將結(jié)腸切片固定并包封在石蠟塊中。制備5μm切片，用礬紫-署紅染色并按照下述等級標(biāo)準(zhǔn)通過光學(xué)鏡檢進(jìn)行評價程度0沒有炎癥細(xì)胞1有少量炎癥細(xì)胞2大量炎癥細(xì)胞3隨結(jié)腸層厚度增加出現(xiàn)更大量的炎癥細(xì)胞，但不伴有結(jié)構(gòu)變形4隨結(jié)腸層厚度增加出現(xiàn)更大量的炎癥細(xì)胞并且伴有結(jié)構(gòu)變形(喪失了直腸的結(jié)構(gòu)外觀)。
結(jié)腸有三層，分粘膜層、粘膜下層和肌肉層，依前述標(biāo)準(zhǔn)將各層劃分等級。
將每只動物各層亞結(jié)構(gòu)的等級數(shù)之和定義為考慮到炎癥細(xì)胞的遷入和結(jié)構(gòu)變形的指數(shù)。<
采用最小二乘檢驗法進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)計算，將合并指數(shù)0-5的組(使用安慰劑治療的為0，使用產(chǎn)物治療的為5)與合并指數(shù)6-12的組(使用安慰劑治療的為6，使用產(chǎn)物治療的為2)進(jìn)行比較。使用安慰劑治療的動物炎癥明顯嚴(yán)重于使用化合物6治療的。
在該模型中，使用化合物6治療與使用安慰劑治療相比，在體重和結(jié)腸的損傷外觀上表現(xiàn)出明顯的改善，這種改善作用與炎癥細(xì)胞的遷入減少有關(guān)。
下面給出式I化合物的制備實施例。
化合物3將4-氨基-5-氯-2-甲氧基苯甲酸(2.92g)和N，N-羰基二咪唑(2.35g)溶于80ml THF。在室溫攪拌1小時后，往該反應(yīng)混合物中加入2-(4-羥基哌啶子基甲基)環(huán)己胺(B.p.160℃/0.5mm Hg)(3.45g)。攪拌20小時后，蒸除溶劑并將殘余物溶于水中并酸化到pH5。水相用乙酸乙酯萃取，堿化到pH10，然后再次用乙酸乙酯萃取。有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥，過濾，然后真空蒸發(fā)。將所得殘余物用鹽酸的乙醚溶液處理，將如此得到的鹽酸鹽用水結(jié)晶，然后過濾收集。熔點145-216℃(分解)；IR(C＝O)1635cm-1(KBr)。
化合物8按照上述方法，由4-氨基-5-氯-2-(環(huán)戊基氧)苯甲酸和(1R，2R)-2-(4-甲基哌啶子基甲基)環(huán)己胺制備化合物8。該堿用硅膠層析純化(洗脫劑CH2Cl2/CH3CO2C2H5/CH3OH；80/15/5)，然后用水結(jié)晶。熔點173-175℃；IR(C＝O)1634cm-1(CHCl3)[α]D＝-52.6°(c＝1，CH3OH).T＝20℃。
化合物9按照相同的方法，由4-氨基-5-氯-2-(環(huán)丙基甲氧基)苯甲酸和(1S，2R)-2-(4-甲基哌啶子基甲基)環(huán)己胺制備化合物9。將獲得的苯甲酰胺以堿的形式用硅膠層析純化(洗脫劑CH2Cl2/CH3CO2C2H5/CH3OH；80/15/5)，然后用乙醚結(jié)晶。熔點145-147℃；IR(C＝O)1635cm-1(CHCl3)[α]D＝+68.1°(c＝1，CH3OH).T＝20℃。
(1S，2S)-2-三氟乙酰氨基-4-環(huán)己烯羧酸(V)將氨基酯IV(6.4g)用三氟乙酸酐(17.6ml)處理5天。真空蒸發(fā)該反應(yīng)混合物并將殘余物溶于5％碳酸氫鈉水溶液中。水相用乙酸乙酯萃取，酸化，然后用乙酸乙酯再萃取。有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥，然后真空蒸發(fā)溶劑，獲得2.4g產(chǎn)物V。[IR(C＝O)＝1705cm-1(KBr)].
(1S，2S)-1-三氟乙酰氨基-2-(4-甲基哌啶子基)羰基-4-環(huán)己烯(VI)將前述步驟中獲得的產(chǎn)物(0.2g)(無需純化即可使用)和羰基二咪唑(0.137g)溶于THF(5ml)。攪拌2小時30分鐘后，加入4-甲基哌啶(0.084g)，將該反應(yīng)混合物放置24小時。減壓蒸發(fā)溶劑，將殘余物溶于二氯甲烷中。有機(jī)相用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并真空蒸發(fā)。殘余物在石油醚中結(jié)晶，獲得100mg預(yù)期產(chǎn)物。熔點169-170℃；IR(C＝O)1721，1623cm-1(CHCl3)[α]D＝-9.9°(c＝1，CH3OH).T＝20℃。
(1S，2S)-1-氨基-2-(4-甲基哌啶子基)羰基-4-環(huán)己烯(VII)將前述步驟中獲得的產(chǎn)物(1.3g)溶于乙醇(30ml)，然后用氫氧化鈉的水溶液(0.33g的10ml水溶液)回流處理7小時。用1N鹽酸中和該反應(yīng)混合物后，真空蒸除溶劑。殘余物溶于2N鹽酸中，水相用乙酸乙酯萃取，用2N氫氧化鈉堿化到pH10，再用乙酸乙酯萃取。有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥并真空蒸發(fā)。獲得油狀形式的產(chǎn)物(0.63g)，該產(chǎn)物無需純化即可進(jìn)一步使用。
(1S，2R)-2-(4-甲基哌啶子基羰基)環(huán)己胺(VIII)在10％Pd/C(50mg)和3N鹽酸(0.85ml)存在下，將環(huán)己烯VI(0.57g)溶于甲醇(50ml)。將該反應(yīng)混合物在低氫氣壓下攪拌20小時。過濾除去催化劑并真空蒸除溶劑。將殘余物溶于飽和碳酸鉀溶液中，水相用乙酸乙酯萃取。有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥，然后真空蒸發(fā)獲得油狀形式的還原衍生物VIII(0.46g)。D＝+82.9°(c＝1，CH3OH).T＝20℃IR(C＝O)1616cm-1(CHCl3).
(1S，2R)-2-(4-甲基哌啶子基甲基)-4-環(huán)己胺(IX)將酰胺衍生物VIII(0.42g)溶于10ml甲苯，然后在-60℃用二異丁基氫化鋁(9.4ml的1M甲苯溶液)處理8小時。加入2N鹽酸水解該反應(yīng)混合物。將水相與甲苯分離，用氯仿洗滌，加入2N氫氧化鈉使其呈堿性，然后用氯仿萃取。有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥并真空蒸發(fā)，獲得二胺(0.25g)。D＝-12.1°(c＝1，CH3OH).T＝20℃.
權(quán)利要求
1.式I化合物和包括這些化合物的外消旋物及它們可藥用鹽用于制備治療內(nèi)臟器官疼痛的藥物的用途
其中R1是直鏈的、支鏈的或環(huán)化的C1-C5烷基；R2表示氫原子，直鏈的或支鏈的C1-C5烷基，羥基，C1-C5烷氧基或C1-C2羥烷基；R3表示氫原子，或者R2和R3一起表示C1-C5烷基，這些化合物是2R構(gòu)型的。
2.式I的化合物和包括這些化合物的外消旋物及它們可藥用鹽用于制備治療炎性結(jié)腸炎的藥物的用途
其中R1是直鏈的、支鏈的或環(huán)化的C1-C5烷基；R2表示氫原子，直鏈的或支鏈的C1-C5烷基，羥基，C1-C5烷氧基或C1-C2羥烷基；R3表示氫原子，或者R2和R3一起表示C1-C5烷基，這些化合物是2R構(gòu)型的。
3.權(quán)利要求1或2的用途，其中使用的式I化合物是1R，2R構(gòu)型的。
4.權(quán)利要求1-3任一項的用途，其中使用的式I化合物中，R1為甲基或環(huán)丙甲基，R2是甲基并且R3是氫原子。
全文摘要
本發(fā)明涉及式Ⅰ化合物和包括這些化合物的外消旋物及它們可藥用鹽用于制備治療內(nèi)臟器官疼痛的藥物的用途:其中R
文檔編號A61K31/435GK1188410SQ9619496
公開日1998年7月22日 申請日期1996年6月21日 優(yōu)先權(quán)日1996年6月21日
發(fā)明者T·布斯索, H·切里斯蒂納基, A·萊納德 申請人:杰克羅寨實驗室