專利名稱：用于治療與膠原蛋白過(guò)量產(chǎn)生有關(guān)的疾病的c－蛋白酶抑制劑的制作方法
本申請(qǐng)涉及和是1996年2月14日申請(qǐng)的，名稱為“用于治療與膠原蛋白過(guò)量產(chǎn)生有關(guān)的疾病的C-蛋白酶抑制劑”的US申請(qǐng)系列號(hào)08/601203的部分繼續(xù)申請(qǐng)，后者是1995年8月8日申請(qǐng)的臨時(shí)US申請(qǐng)系列號(hào)60/002038的部分繼續(xù)申請(qǐng)。1.發(fā)明領(lǐng)域膠原蛋白，與其它物質(zhì)一起，對(duì)于結(jié)締組織的適當(dāng)形成是必需的。因此，膠原蛋白的過(guò)剩或不足產(chǎn)生或異常膠原蛋白(包括不正確加工的膠原蛋白)的產(chǎn)生與許多結(jié)締組織疾病和癥狀有關(guān)。有證據(jù)表明C-蛋白酶是膠原蛋白適當(dāng)成熟的主要關(guān)鍵的酶，因而是用于抑制、控制和/或調(diào)節(jié)膠原蛋白形成的理想目標(biāo)。
本發(fā)明涉及能夠抑制C-蛋白酶活性以調(diào)節(jié)、緩解和/或抑制不正常膠原蛋白形成的有機(jī)分子。更具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及化合物和其藥物組合物用于治療與膠原蛋白不適當(dāng)或不規(guī)則產(chǎn)生有關(guān)的各種疾病的用途。2.發(fā)明背景膠原蛋白結(jié)構(gòu)。目前已識(shí)別出19種類型的膠原蛋白，這些膠原蛋白，包括原纖維膠原蛋白I、II、III型，作為原膠原蛋白前體分子合成，它含有氨基和羧基末端的肽伸展部分。這些稱之為“前區(qū)域”的肽伸展部分分別命名為N-和C-前肽。
前區(qū)域在三股螺旋前體分子從細(xì)胞中分泌以產(chǎn)生成熟三股螺旋膠原蛋白分子時(shí)裂解。在裂解時(shí)，“成熟”膠原蛋白分子能夠例如結(jié)合入高度結(jié)構(gòu)化的膠原蛋白纖維中。參見例如Fessler和Fessler，1978，Annu. Rev. Biochem. 47129-162；Bornstein和Traub，1979，蛋白質(zhì)(eds. Neurath，H.和Hill，R.H.)，Academic Press，紐約，412-632頁(yè)；Kivirikko等，1984，Extracellular Matrix Biochemistry(eds.Piez，K. A.和Reddi，A. H.)，Elsevier Science Publishing Co.，紐約，83-118頁(yè)；Prockop和 Kivirikko，1984，N. Engl. J. Med. 311376-383；Kuhn，1987，膠原蛋白類型的結(jié)構(gòu)和功能(eds. Mayne，R.和Burgeson，R.E.)Academic Press，Inc．奧蘭多，弗羅里達(dá)，1-42頁(yè)。
與膠原蛋白異常產(chǎn)生有關(guān)的疾病。一組危急疾病與膠原蛋白的不適當(dāng)或不規(guī)則產(chǎn)生有關(guān)，其包括病理纖維變性或瘢痕，包括心內(nèi)膜硬化、特發(fā)性間質(zhì)性纖維變性、間質(zhì)性肺纖維變性、肌外膜纖維變性、Symmer’s纖維變性、中樞周纖維變性、肝炎、皮膚纖維瘤、膽汁性肝硬變、酒精性肝硬變、急性肺纖維變性、特發(fā)性肺纖維變性、急性呼吸窘迫綜合癥、腎纖維變性/腎小球性腎炎、腎纖維變性/糖尿病性腎病、硬皮病/全身性硬皮病、硬皮病/局部性硬皮病、瘢痕瘤、瘢痕肥大、嚴(yán)重關(guān)節(jié)粘連/關(guān)節(jié)炎、骨髓纖維變性、角膜瘢痕、膀胱纖維變性、假肥大性肌營(yíng)養(yǎng)障礙、心臟纖維變性、肌纖維變性/視網(wǎng)膜分離、食管狹窄、派爾(payronles)病。其它的纖維變性疾病可由手術(shù)引起或誘發(fā)，包括瘢痕修正/整形手術(shù)、青光眼、白內(nèi)障纖維變性、角膜瘢痕、關(guān)節(jié)粘連、移植物抗宿主疾病、腱手術(shù)、神經(jīng)夾帶、杜普伊特倫攣縮、OB/GYN粘連/纖維變性、骨盆粘連、硬膜外纖維變性、再狹窄。治療這些疾病的一種策略是抑制膠原蛋白的病理性過(guò)量產(chǎn)生。因此，鑒定和分離能控制、抑制和/或調(diào)節(jié)膠原蛋白產(chǎn)生的分子是主要的醫(yī)學(xué)興趣。
膠原蛋白形成和C-蛋白酶之間的相互關(guān)系。近年的資料認(rèn)為，C-蛋白酶是主要關(guān)鍵的酶，它催化例如原纖維膠原蛋白，包括I型、II型和III型膠原蛋白的C-前肽的裂解。參見作為臨時(shí)申請(qǐng)的1995年8月8日申請(qǐng)的US申請(qǐng)系列號(hào)60/002038，及其中的參考文獻(xiàn)。
C-蛋白酶首先在人和鼠纖維細(xì)胞(Goldberg等，1975，細(xì)胞445-50；Kessler和Goldberg，1978，Anal. Biochem. 86463-469)和小雞腱纖維細(xì)胞(Duskin等，1978，Arch. Biochem. Biophys. 185326-332；Leung等，1979，J. Biol. Chem. 254224-232)的組織培養(yǎng)基中發(fā)現(xiàn)。能從I型原膠原蛋白中除去C-端前肽的酸性蛋白酶也已被鑒定。Davidson等，1979，Eur.J.Biochem. 100551。
具有C-蛋白酶活性的部分純化的蛋白酶在1982年從小雞顱蓋中得到。Njieha等，1982，Biochemistry 23757-764。在1985年，從雞胚腱的條件培養(yǎng)基中分離、純化和特征化了小雞C-蛋白酶。Hojima等，1985，J. Biol. Chem. 26015996-16003。隨后由鼠纖維細(xì)胞的組織培養(yǎng)基中提純了鼠C-蛋白酶。Kessler等，1986，Collagen Relat.Res. 6249-266；Kessler和Adar，1989，Eur. J. Biochem. 186115-121。最后，如上述參考的相關(guān)申請(qǐng)和其中公開的參考文獻(xiàn)，鑒定了cDNA編碼的人體C-蛋白酶。
用這些小雞和鼠C-蛋白酶純化形式進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)表明，酶在形成功能膠原蛋白纖維的過(guò)程能起作用。Fertala等，1994，J. Biol. Chem.26911584。
C-蛋白酶抑制劑。由于酶顯示出的對(duì)膠原蛋白產(chǎn)生的重要性，科學(xué)家已鑒定了許多蛋白酶抑制劑。參見例如Hojima等，文獻(xiàn)同上。例如某些金屬螯合劑已被證實(shí)具有C-蛋白酶抑制劑的活性。同樣，胰凝乳蛋白酶抑制劑和胃蛋白酶A被發(fā)現(xiàn)是較強(qiáng)的C-蛋白酶抑制劑。此外，α2-巨球蛋白、ovostatin和牛犢血清顯示至少部分的抑制C-蛋白酶活性。
同樣，二硫蘇糖醇、SDS、伴刀豆球蛋白A、Zn2+、Cu2+和Cd2+被報(bào)導(dǎo)在低濃度下是有抑制能力的。同樣，某些還原劑、某些氨基酸、磷酸鹽和硫酸銨在1-10mM濃度下是有抑制能力的。此外，酶顯示出被堿性氨基酸賴氨酸和精氨酸所抑制。Leung等，文獻(xiàn)同上；Ryhanen等，1982，Arch. Biochem. Biophys.215230-236。最后，人們發(fā)現(xiàn)高濃度氯化鈉或Tris-HCl緩沖液抑制C-蛋白酶活性。例如，據(jù)報(bào)導(dǎo)，使用0.2、0.3和0.5M氯化鈉，C-蛋白酶活性分別降低至在0.15M標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)濃度下觀察到的66、38和25％。在0.2-0.5M濃度下的Tris-HCl緩沖液顯著抑制了活性，Hojima等，文獻(xiàn)同上。與之相反，微生物抑制劑如亮肽素、磷酸美沙酮(phosphoramidon)、抗痛素、bestatin彈性蛋白和苦杏仁球蛋白(amastatin)被認(rèn)為有弱的或沒(méi)有C-蛋白酶活性。
C-蛋白酶活性及其抑制已使用各種試驗(yàn)方法測(cè)定。參見例如Kesslerand Goldberg，1978，Anal. Biochem.86463；Njieha等，1982，生物化學(xué)21757-764。盡管已經(jīng)有了這些試驗(yàn)，但由于人體C-蛋白酶有限的可獲得性，至少仍未進(jìn)行大規(guī)模的潛在C-蛋白酶抑制劑的研究和試驗(yàn)。正如許多出版物中所述，酶難以用常規(guī)生物化學(xué)的方法分離，并且，直至上述參考和相關(guān)的專利申請(qǐng)中的報(bào)導(dǎo)，編碼該酶的cDNA序列是未知的。
開發(fā)抑制C-蛋白酶活性的化合物?？紤]到在膠原蛋白形成和成熟中的重要作用，C-蛋白酶顯示出是治療與膠原蛋白的不適當(dāng)或不規(guī)則產(chǎn)生和成熟有關(guān)的疾病的理想目標(biāo)。然而，到目前為止鑒定的抑制劑都沒(méi)有被證實(shí)對(duì)于治療與膠原蛋白有關(guān)的疾病是有效的或是C-蛋白酶活性的抑制劑。
能特異抑制C-蛋白酶活性以調(diào)節(jié)和調(diào)整異?；虿贿m當(dāng)?shù)哪z原蛋白產(chǎn)生的有效化合物的鑒定因而是合乎需要的，并且是本發(fā)明的目的。3.發(fā)明概述本發(fā)明涉及通過(guò)影響C-蛋白酶活性能夠調(diào)節(jié)、調(diào)整和/或抑制膠原蛋白產(chǎn)生和/或成熟的有機(jī)化合物。本發(fā)明的化合物尤其具有下式a.抑制劑A
或
其中R1選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、鹵代芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基；R2選自H、低級(jí)烷基；R3選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、鹵代芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基；
R4選自芳基、雜芳基、烷基、芳烷基、雜芳烷基、烷基氨基、芳烷基氨基X選自SO2、C＝O；Y選自O(shè)H、HOHN(羥胺)、H2N、烷基氨基；Z是直連鍵、亞甲基、氧、硫、氨基；n是0或1；或b.抑制劑B
其中R1選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基；R2選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基；R3選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基；R4選自H、低級(jí)烷基；
R5選自H、低級(jí)烷基、羧基烷基、(單或二烷基氨基)烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基、alkoy烷基?；榛?；或c.抑制劑C
其中R1選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺酰基或磺?；?烷基；R2選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺酰基或磺?；?烷基；R3選白H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺酰基或磺酰基)烷基；R4選自H、低級(jí)烷基；R5選自H、低級(jí)烷基、羧基烷基、(單或二烷基氨基)烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基、alkoy烷基酰基烷基；或d.抑制劑D
其中R1選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺酰基或磺?；?烷基；R2選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基；R3選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基；R4選自H、低級(jí)烷基；R5選自H、低級(jí)烷基、羧基烷基、(單或二烷基氨基)烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基、alkoy烷基?；榛换騟.抑制劑E
其中R1選自O(shè)H、烷氧基、低級(jí)烷基、烷基氨基、肽；X選自N、C；R2選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基；R3是選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺酰基或磺?；?烷基；R4選自H、低級(jí)烷基；R5選自H、低級(jí)烷基、羧基烷基、(單或二烷基氨基)烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基、alkoy烷基?；榛?。
本發(fā)明還涉及藥物組合物，其含有治療有效量的上述化合物和可藥用的載體或賦形劑。該組合物通過(guò)抑制C-蛋白酶活性可調(diào)節(jié)膠原蛋白的產(chǎn)生和/或成熟。
本發(fā)明還涉及公開的化合物和組合物用于通過(guò)調(diào)節(jié)、抑制和/或調(diào)整C-蛋白酶活性以治療與膠原蛋白的不適當(dāng)或不規(guī)則產(chǎn)生有關(guān)的疾病的用途。
更具體地說(shuō)，本發(fā)明的組合物可包括于治療與膠原蛋白的不適當(dāng)或不規(guī)則的產(chǎn)生有關(guān)的疾病的方法中，所述疾病包括，但不限制于，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、硬皮病、病理纖維變性或瘢痕。4.定義
“C-蛋白酶”應(yīng)是指通過(guò)-Ala↓Asp-Asp-和/或Gly↓Asp-Glu-裂解能夠加工膠原蛋白分子、衍生物或片段或它們的前體的酶。該術(shù)語(yǔ)應(yīng)包括人體C-蛋白酶和它們的具有C-蛋白酶類似活性的衍生物、類似物、片段和變異體。
“可藥用的鹽”指的是保留游離酸的生物有效性和性質(zhì)的鹽，它們可通過(guò)與無(wú)機(jī)或有機(jī)堿，例如氫氧化鈉、氫氧化鎂、氨、三烷基胺、二烷基胺、單烷基胺、二元氨基酸、乙酸鈉、苯甲酸鉀、三乙醇銨等。
“烷基”指的是飽和脂族烴，包括直鏈、支鏈和環(huán)烷基。烷基優(yōu)選含有1-12個(gè)碳原子。它最優(yōu)選是1-7個(gè)碳原子，更優(yōu)選1-4個(gè)碳原子的低級(jí)烷基。典型的烷基基團(tuán)包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、戊基、己基等。烷基可以是被取代的或未取代的。當(dāng)被取代時(shí)，取代基優(yōu)選是羧基、羥基、巰基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、鹵素、烷氧基、烷基氨基。
“芳基”指的是芳香基團(tuán)，它含有至少一個(gè)具有共軛π電子體系的環(huán)，其包括碳環(huán)芳基、雜芳基和聯(lián)芳基，它們都可以任選地被取代。優(yōu)選的芳基是取代或未取代的苯基或吡啶基。優(yōu)選的芳基取代基，優(yōu)選苯基或吡啶基，是鹵素、三鹵甲基、羥基、SH、NO2、胺、硫醚、氰基、烷氧基。5.發(fā)明詳述本發(fā)明涉及通過(guò)抑制C-蛋白酶活性能夠調(diào)整和/或調(diào)節(jié)膠原蛋白形成的化合物。
更具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及這樣的化合物，其作為治療方法抑制C-蛋白酶活性，以治療或控制各種結(jié)締組織疾病，包括纖維變性疾病、關(guān)節(jié)疾病或由手術(shù)或突發(fā)損害導(dǎo)致或引發(fā)的疾病。5.1.化合物本發(fā)明一般涉及具有如下通式的化合物和/或組合物；a.抑制劑A
或
其中R1選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、鹵代芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基；R2選自H、低級(jí)烷基；R3選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、鹵代芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基；R4選自芳基、雜芳基、烷基、芳烷基、雜芳烷基、烷基氨基、芳烷基氨基X選自SO2、C＝O；Y選自O(shè)H、HOHN(羥胺氨基)、H2N、烷基氨基；Z是直連鍵、亞甲基、氧、硫、氨基；n是0或1；或b.抑制劑B
其中R1選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基；R2選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基；R3選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基；R4選自H、低級(jí)烷基；R5選自H、低級(jí)烷基、羧基烷基、(單或二烷基氨基)烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基、alkoy烷基?；榛换騝.抑制劑C
其中R1選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基；R2選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基；R3選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基；R4選自H、低級(jí)烷基的烷基；R5選自H、低級(jí)烷基、羧基烷基、(單或二烷基氨基)烷基、烷基(硫基、亞磺酰基或磺?；?烷基、alkoy烷基?；榛?；或d.抑制劑D
其中R1選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基；R2選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺酰基或磺?；?烷基；R3選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基；R4選自H、低級(jí)烷基；R5是選自H、低級(jí)烷基、羧基烷基、(單或二烷基氨基)烷基、烷基(硫基、亞磺酰基或磺?；?烷基、alkoy烷基?；榛?；或e.抑制劑E
其中R1選自O(shè)H、烷氧基、低級(jí)烷基、烷基氨基、肽；X選自N、C；R2選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺酰基或磺?；?烷基；R3選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基；R4選自H、低級(jí)烷基；R5選自H、低級(jí)烷基、羧基烷基、(單或二烷基氨基)烷基、烷基(硫基、亞磺酰基或磺?；?烷基、alkoy烷基?；榛?br> 在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物可具有下式
和其可藥用的鹽；或
和其可藥用的鹽；或
和其可藥用的鹽；或
和其可藥用的鹽；或
和其可藥用的鹽；或
和其可藥用的鹽；或
和其可藥用的鹽；或
和其可藥用的鹽；或
和其可藥用的鹽；或
和其可藥用的鹽；或
和其可藥用的鹽；或
和其可藥用的鹽；或
和其可藥用的鹽。
本發(fā)明的化學(xué)式可存在互變現(xiàn)象。由于說(shuō)明書中畫出的結(jié)構(gòu)式僅可表示可能的互變形式中的一種，應(yīng)理解本發(fā)明包含了具有通過(guò)抑制C-蛋白酶活性調(diào)整和/或調(diào)節(jié)膠原蛋白的產(chǎn)生和/或成熟的能力的任何互變體形式。此外，應(yīng)理解本發(fā)明包括每種所述化合物的所有可能的立體異構(gòu)體。
除了上述化合物和它們的可藥用的鹽之外，在需要時(shí)，本發(fā)明還涉及具有通過(guò)抑制C-蛋白酶活性抑制、調(diào)整和/或調(diào)節(jié)膠原蛋白的產(chǎn)生和/或成熟的能力的化合物的溶劑化以及未溶劑化形式(例如水合形式)。
上述化合物可通過(guò)適合于制備化學(xué)上相關(guān)的化合物的任何已知方法制備。合適的方法由如下代表性的實(shí)施例說(shuō)明。所需的起始物料可通過(guò)有機(jī)化學(xué)的標(biāo)準(zhǔn)方法得到。
單個(gè)的化合物作為影響C-蛋白酶活性的藥物的相關(guān)活性和效果可使用已知技術(shù)測(cè)定。化合物優(yōu)選進(jìn)行一系列的篩選以測(cè)定化合物調(diào)節(jié)、調(diào)整和/或抑制膠原蛋白產(chǎn)生和成熟的能力。這些篩選包括生物化學(xué)試驗(yàn)、細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)和動(dòng)物模型。5.2.適應(yīng)癥可使用本發(fā)明的化合物和組合物治療與膠原蛋白的不適當(dāng)或不規(guī)則產(chǎn)生和/或成熟有關(guān)的疾病，其包括關(guān)節(jié)炎疾病、纖維變性疾病和其它結(jié)締組織疾病。
這些疾病或癥狀包括病理纖維變性或瘢痕，包括心內(nèi)膜硬化、特發(fā)性間質(zhì)性纖維變性、間質(zhì)性肺纖維變性、肌外膜纖維變性、Symmer’s纖維變性、中樞周纖維變性、肝炎、皮膚纖維瘤、膽汁性肝硬變、酒精性肝硬變、急性肺纖維變性、特發(fā)性肺纖維變性、急性呼吸窘迫綜合癥、腎纖維變性/腎小球性腎炎、腎纖維變性/糖尿病性腎病、硬皮病/全身性硬皮病、硬皮病/局部性硬皮病、瘢痕瘤、瘢痕肥大、嚴(yán)重關(guān)節(jié)粘連/關(guān)節(jié)炎、骨髓纖維變性、角膜瘢痕、膀胱纖維變性、假肥大性肌營(yíng)養(yǎng)障礙、心臟纖維變性、肌纖維變性/視網(wǎng)膜分離、食管狹窄、派爾病。其它的纖維變性疾病可由手術(shù)引起或誘發(fā)，包括瘢痕修正/整形手術(shù)、青光眼、白內(nèi)障纖維變性、角膜瘢痕、關(guān)節(jié)粘連、移植物抗宿主疾病、腱手術(shù)、神經(jīng)夾帶、杜普伊特倫攣縮、OB/GYN粘連/纖維變性、骨盆粘連、硬膜外纖維變性、再狹窄。其它的纖維變性疾病可通過(guò)化學(xué)治療引發(fā)，其包括例如肺纖維變性等。5.3.藥物制劑和給藥途徑鑒定的化合物可以化合物本身或以其與合適載體或賦形劑混合的藥物組合物形式以治療或改善各種疾病的劑量向患者給藥。治療有效劑量指的是足以改善癥狀的化合物的量。用于本申請(qǐng)化合物的配制和給藥的技術(shù)可以“Remington’s Pharmaceutical Sciences”Mack PublishingCo.，Easton，PA，最新版中找到。5.3.1.給藥途徑合適的給藥途徑可例如包括經(jīng)口、直腸、經(jīng)膜或經(jīng)腸給藥；腸胃外給藥，包括肌內(nèi)、皮下、髓內(nèi)注射，以及鞘內(nèi)、直接心室內(nèi)、靜脈內(nèi)、會(huì)陰內(nèi)、鼻內(nèi)或眼內(nèi)注射。
此外，人們可局部地而不是全身地給藥化合物，例如將化合物直接注射入關(guān)節(jié)內(nèi)或纖維變性組織內(nèi)，通常以儲(chǔ)存或持續(xù)釋放制劑形式。為避免在青光眼手術(shù)后通常留下的瘢痕，化合物可局部地給藥，例如作為滴眼劑。
此外，人們可以目標(biāo)給藥體系向例如關(guān)節(jié)炎或纖維變性組織靶向給藥，例如以涂覆了特定抗體的脂質(zhì)體形式。脂質(zhì)體將到達(dá)目標(biāo)，并由疾患組織選擇性地吸收。5.3.2.組合物/制劑本發(fā)明的藥物組合物可以本身已知的方法制備，例如通過(guò)常規(guī)的混合、溶解、造粒、制糖衣丸、研磨、乳化、包膠囊、夾帶或凍干方法。
因此，用于本發(fā)明的藥物組合物可以常規(guī)方法，使用一種或多種可藥用的載體配制，所述載體含有有助于活性化合物加工成用于治療的制劑的賦形劑和輔劑，合適的制劑取決于所選擇的給藥途徑。
用于注射時(shí)，本發(fā)明的藥物可配制成水溶液，優(yōu)選在生理相容的緩沖液中，例如，Hank’s溶液、Ringer’s溶液或生理鹽水緩沖液。用于經(jīng)膜給藥時(shí)，在制劑中使用適合于有待滲透的屏障的浸透劑，該浸透劑在現(xiàn)有技術(shù)中通常是已知的。
對(duì)于口服給藥，化合物可通過(guò)將活性化合物與現(xiàn)有技術(shù)中已知的可藥用的載體混合容易地配制。該載體能夠?qū)⒈景l(fā)明的化合物配制成片劑、丸劑、糖衣劑、膠囊、液體、凝膠、糖漿、漿劑、懸浮劑等，用于所治療的患者口服。用于口服的藥物制劑可由固體賦形劑得到，選擇性地研磨得到的混合物，和在根據(jù)需要加入合適的輔料后加工顆?；旌衔镆缘玫狡瑒┗蚩芬峦栊尽：线m的賦形劑尤其是填料，例如糖類，例如乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇；纖維素制劑，例如玉米淀粉、小麥淀粉、大米淀粉、土豆淀粉、明膠、黃蓍膠、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)。如果需要，可加入崩解劑，例如交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、阿膠或藻酸或其鹽，例如藻酸鈉。
糖衣丸芯帶有合適的涂層。為此，可使用濃縮的糖溶液，它可選擇性地含有阿拉伯膠、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、聚羧乙烯膠、聚乙二醇和/或二氧化鈦、噴漆溶液和合適的有機(jī)溶劑或溶劑混合物。染料或顏料可加入片劑或糖衣丸涂層中，以識(shí)別或區(qū)分活性化合物劑量的不同組合。
可用于口服的藥物制劑包括由明膠制備的推進(jìn)裝料的膠囊，以及由明膠和增塑劑，例如甘油或山梨醇制備的軟密封膠囊。推進(jìn)裝料的膠囊可含有與填料，例如乳糖、粘合劑，例如淀粉和/或潤(rùn)滑劑，例如滑石或硬脂酸鎂和，選擇性地，穩(wěn)定劑混合的活性成分。在軟膠囊中，活性化合物可溶解或懸浮于合適的液體中，例如脂肪油、液體石蠟或液體聚乙二醇。此外，可加入穩(wěn)定劑。用于口服的所有制劑應(yīng)是適合于如此給藥的劑量形式。
對(duì)于頰部給藥，組合物可采用以常規(guī)方法配制的片劑或錠劑形式。
對(duì)于通過(guò)吸入給藥，本發(fā)明使用的化合物方便地從加壓包裝或噴霧器，使用合適的推進(jìn)劑，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它合適氣體以氣溶膠噴霧形式提供。在加壓氣溶膠情況下，可通過(guò)安裝提供計(jì)量數(shù)量的閥確定劑量單元。用于吸入器或吹入器中的例如明膠的膠囊或藥筒可配制成含有化合物和合適粉末基質(zhì)，例如乳糖或淀粉的粉末混合物。
化合物可配制成通過(guò)注射用于腸胃外給藥，例如通過(guò)單次快速注射或連續(xù)輸注。用于注射的制劑可以單位劑量形式存在，例如在含有加入的防腐劑的安瓶或多劑量容器。組合物可采用在油質(zhì)或含水載體中的懸浮液、溶液或乳液形式，并可含有配制助劑，例如懸浮劑、穩(wěn)定劑和/或分散劑。
用于胃腸外給藥的藥物制劑包括水溶性形式的活性化合物的水溶液。此外，活性化合物的懸浮液可制備成合適的油質(zhì)注射懸浮液。合適的親脂溶劑或賦形劑包括脂肪油，例如芝麻油，或合成脂肪酸酯，例如油酸乙酯或甘油酯，或脂質(zhì)體。含水注射懸浮液可含有增加懸浮液體粘度的物質(zhì)，例如羧甲基纖維素鈉、山梨醇或葡萄糖。懸浮液還可選擇性地含有合適的穩(wěn)定劑或增加化合物溶解性的物質(zhì)以制備高濃度溶液。
此外，活性成分可以是粉末形式，用于在使用前與合適的賦形劑，例如無(wú)菌無(wú)熱原水混合。
化合物還可配制成直腸組合物，例如含有常規(guī)栓劑基質(zhì)，例如可可脂或其它甘油酯的栓劑或保留灌腸劑。
除了上述制劑外，化合物還配制成儲(chǔ)存制劑。該長(zhǎng)作用配制劑可通過(guò)植入(例如皮下或肌內(nèi))或通過(guò)肌內(nèi)注射給藥。因此，例如化合物可使用合適的聚合或疏水物質(zhì)(例如作為在可用的油中的乳液)或離子交換樹脂，或作為微溶衍生物，例如作為微溶鹽配制。
用于本發(fā)明的疏水化合物的可藥用的載體是共溶劑體系，其含有苯甲醇、非極性表面活性劑、水混溶有機(jī)聚合物和水相。共溶劑體系可以是VPD共溶劑體系。VPD是3％w/v苯甲醇、8％w/v非極性表面活性劑吐溫80和65％w/v聚乙二醇300和余量的無(wú)水乙醇的溶液。VPD共溶劑體系(VPD5W)由用5％葡萄糖水溶液1∶1稀釋的VPD組成。共溶液體系充分溶解疏水化合物，并且本身在全身給藥時(shí)產(chǎn)生低的毒性。共溶劑體系的比例自然可考慮不破壞其溶解性和毒性特征改變。此外，共溶劑組分可改變，例如，其它低毒性非極性表面活性劑可用于代替吐溫80；聚乙二醇的份額大小可改變；其它生物相容的聚合物可代替聚乙二醇，例如聚乙烯吡咯烷酮；和其它糖或多糖苷可代替葡萄糖。
此外，可采用適用于疏水藥物化合物的其它給藥體系。脂質(zhì)體和乳液是適用于疏水藥物的給藥賦形劑或載體的已知實(shí)例。某些有機(jī)溶劑，例如二甲基亞砜也可以使用，盡管通常代價(jià)為較大的毒性。此外，化合物可使用緩釋體系給藥，例如含有治療藥物的固體疏水聚合物的半滲透基體。已證實(shí)了各種緩釋材料，是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，根據(jù)其化學(xué)性質(zhì)，緩釋膠囊釋放化合物可持續(xù)數(shù)周至超過(guò)100天。根據(jù)治療試劑的化學(xué)性質(zhì)和生物穩(wěn)定性，可采用適用于蛋白質(zhì)穩(wěn)定的其它策略。
藥物組合物還可含有合適的固體或凝膠相載體或賦形劑。這種載體或賦形劑的實(shí)例包括，們不限制于，碳酸鈣、磷酸鈣、各種糖、纖維素衍生物、明膠和聚合物，例如聚乙二醇。
本發(fā)明的許多C-蛋白酶抑制化合物可作為與可藥用的抗衡離子形成的鹽提供。該可藥用的堿加成鹽是保留了游離酸的生理效果和性質(zhì)的鹽，它們通過(guò)與無(wú)機(jī)或有機(jī)堿，例如氫氧化鈉、氫氧化鎂、氨水、三烷基胺、二烷基胺、單烷基胺、二元氨基酸、乙酸鈉、苯甲酸鉀、三乙醇銨等等反應(yīng)得到。5.3.3.有效劑量適用于本發(fā)明的藥物組合物包括組合物，其含有有效量的活性成分以獲得所需的目的。更具體地說(shuō)，有效量指的是防止所治療的患者現(xiàn)有癥狀的發(fā)展或改善之的有效量。本領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠很好地確定有效量，尤其在參考了本發(fā)明的詳細(xì)描述之后。
對(duì)于任何在本發(fā)明的方法中使用的化合物，治療有效量起初可通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)確定。例如，該劑量可在動(dòng)物模型中確定以獲得循環(huán)濃度范圍，其包括在細(xì)胞培養(yǎng)中測(cè)定的IC50(即，試驗(yàn)化合物獲得C-蛋白酶活性的半數(shù)最大抑制的濃度)。該資料可用于更精確地確定在人體中的使用劑量。
治療有效劑量指的是導(dǎo)致患者癥狀改善或生存延長(zhǎng)的化合物的量。該化合物的毒性和治療效力可通過(guò)在細(xì)胞培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物中的標(biāo)準(zhǔn)藥物實(shí)驗(yàn)確定，例如，用于測(cè)定LD50(總體50％致死的劑量)和ED50(有效治療總體的50％的劑量)。毒性和治療效果之間的劑量比率是治療系數(shù)，它可用LD50與ED50的比率表示。由細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)和動(dòng)物研究得到的數(shù)據(jù)可用于確定人體的劑量范圍。該化合物的劑量?jī)?yōu)選位于循環(huán)濃度范圍內(nèi)，所述濃度包括具有較小或沒(méi)有毒性的ED50。劑量可根據(jù)所采用的劑量形式和所用的給藥途徑改變。確切的制劑、給藥途徑和劑量可由臨床醫(yī)生考慮患者的狀況選擇。參見，例如，F(xiàn)ingl等，1975，“治療的藥理基礎(chǔ)”，第一章，第1頁(yè)。
劑量和間隔可分別調(diào)節(jié)以提供足以保持C-蛋白酶抑制效果的血漿含量或最小有效濃度(MEC)。對(duì)于每種化合物MEC將改變，但可由體外數(shù)據(jù)確定；例如使用本文所述的試驗(yàn)確定C-蛋白酶50-90％抑制所需的濃度。獲得MEC所需的濃度將取決于各自的特征和給藥途徑。然而，HPLC試驗(yàn)或生物試驗(yàn)可用于確定血漿濃度。
劑量間隔也可使用MEC值確定?；衔飸?yīng)使用一定的給藥方案來(lái)給藥，該方案對(duì)于10-90％，優(yōu)選30-90％，最優(yōu)選50-90％的時(shí)間保持血漿濃度高于MEC。
在局部給藥或選擇吸收的情況下，藥物的有效局部濃度可能與血漿濃度無(wú)關(guān)。
當(dāng)然，給藥組合物的量將取決于所治療的受體、受體的體重、疾患的嚴(yán)重性、給藥方式和臨床醫(yī)生的判斷。5.3.4.包裝如果需要，組合物可以在包裝或分發(fā)裝置中存在，它可含有一個(gè)或多個(gè)含有活性成分的單位劑量。包裝可例如包括金屬或塑料箔，例如發(fā)泡藥包裝。包裝或分散發(fā)裝置可附帶用于給藥的裝置。含有配制在可藥用的載體中的本發(fā)明的化合物的組合物還可在合適的容器中制備、放置，貼上治療所示癥狀的標(biāo)記。在標(biāo)記上所示的合適的癥狀可包括治療關(guān)節(jié)炎或任何其它纖維變性疾病。6.實(shí)施例本發(fā)明的化合物可根據(jù)已知的方法合成。如下表示用于合成和測(cè)試本發(fā)明的化合物的優(yōu)選方法。6.1.實(shí)施例1化合物合成6.1.1. N-羥基-2-[[N’-(4-甲氧基苯磺?；?-N’-(4-氯芐基)]氨基]乙酰胺的合成用于合成N-羥基-2-[[N’-(4-甲氧基苯磺?；?-N’-(4-氯芐基)]氨基]乙酰胺(5)(為命名目的，在本說(shuō)明書中具體的化合物可稱為“C#”，其中“#”是阿拉伯?dāng)?shù)字)，也稱為FG047(抑制劑A的實(shí)施例)，的優(yōu)選方法如下
2-[(4-氯芐基)氨基]乙酸乙基酯(3)的合成。在甘氨酸乙酯鹽酸鹽(1)(1.00g，7.16mmol)和4-氯苯甲醛(2)(1.00g，7.16mmol)在甲醇(10ml)的冷卻溶液中加入無(wú)水氯化鋅(75mg，0.55mmol)和NaBCNH3(0.45g，7.16mmol)。在室溫下攪拌18小時(shí)后，用1N鹽酸水溶液(20ml)處理反應(yīng)混合物，再攪拌30分鐘。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮混合物以除去大多數(shù)甲醇溶劑，然后用乙醚(20ml)提取。水層在冰浴中小心地用45％(w/w)KOH水溶液堿化至pH10，用乙酸乙酯(2×50ml)提取。合并的乙酸乙酯有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥，并濃縮。粗產(chǎn)物硅膠色譜法(4/1，己烷/乙酸乙酯)純化得到2-[(4-氯芐基)氨基]乙酸乙基酯(3)油狀物。
2-[[N-(4-甲氧基苯磺?；?-N-(4-氯芐基)]氨基]乙酸乙基酯(4)的合成。將三乙胺(294mg，2.90mmol)滴加至2-[(4-氯芐基)氨基]乙酸乙基酯(3)(600mg，2.64mmol)和對(duì)-甲氧基苯磺酰氯(545mg，2.64mmol)在無(wú)水二氯甲烷(7ml)中的溶液中?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?5小時(shí)，用1N鹽酸(20ml)溶液處理。分離得到的兩相，水層用二氯甲烷提取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥并濃縮。粗產(chǎn)物用硅膠色譜法(3/1-2/1己烷/乙酸乙酯)純化得到2-[[N-(4-甲氧基苯磺?；?-N-(4-氯芐基)]氨基]乙酸乙基酯(4)油狀物。
N-羥基-2-[[N’-(4-甲氧基苯磺?；?-N’-(4-氯芐基)]氨基]乙酰胺(5)的合成。在沸點(diǎn)下分別制備羥基胺鹽酸鹽(171mg，2.46mmol)在甲醇(1.3ml)中的溶液和KOH(207mg，3.69mmol)在甲醇(1.3ml)中的溶液，冷卻至40℃，然后將后者溶液加入前者。在冰浴中冷卻反應(yīng)混合物30分鐘后，過(guò)濾出氯化鉀固體。在濾液中加入乙酯(4)(487mg，1.23mmol)。在室溫下攪拌6小時(shí)后，反應(yīng)混合物用1N鹽酸(20ml)溶液處理，用二氯甲烷提取。有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，濃縮得到粗產(chǎn)物。殘余物在乙醚中研制，收集白色固體得到異羥肟酸(hydroxamate)，即N-羥基-2-[[N’-(4-甲氧基苯磺?；?-N’-(4-氯芐基)]氨基]乙酰胺(5)，也稱作FG-047。
mp124-125℃；MS(ES)(M+H)+385；1H NMR(360MHz，DMSO-d6)δ10.47(s，1H，OH)，8.81(s，1H，NH)7.81-7.08(m，8H，Ph)，4.34(s，2H，CH2CO)，3.85(s，3H，OMe)，3.63(s，2H，CH2Ph).6.1.2. N-羥基-2-[[N’-(4-甲氧基苯磺?；?-N’-(4-氟芐基)]氨基]乙酰胺的合成合成N-羥基-2-[[N’-(4-甲氧基苯磺酰基)-N’-(4-氟芐基)]氨基]乙酰胺(6)，也稱為FG053(抑制劑A的實(shí)施例)的優(yōu)選方法基本上與所述合成N-羥基-2-[[N’-(4-甲氧基苯磺?；?-N’-(4-氯芐基)]氨基]乙酰胺的方法相同，使用起始物料4-氟苯甲醛代替4-氯苯甲醛。參見，6.1.1.部分
MS(ES)(M-1)-367；1HNMR(360MHz，DMSO-d6)δ10.45(s，1H，OH)，8.83(s，1H，NH)，7.81-7.08(m，8H，Ph)，4.33(s，2H，CH2CO)，3.85(s，3H，OMe)，3.62(s，2H，CH2Ph).6.1.3. 異羥肟酸的合成合成異羥肟酸(11)(抑制劑B的實(shí)施例)的優(yōu)選方法如下
用溴乙酸叔丁基酯烷基化丙二酸酯(7)得到四酯(8)。經(jīng)皂化和脫羧反應(yīng)，得到的酸(9)與Glu(OBn)NHMe經(jīng)肽偶合反應(yīng)偶合得到(10)。在隨后的水解、酐形成和NH2OH加成后，(10)可轉(zhuǎn)化為所需的異羥肟酸(11)。6.1.4. N-羧甲基二肽的合成用于合成N-羧甲基二肽(16)，也稱為FG057(抑制劑D的實(shí)施例)的優(yōu)選方法如下
由文獻(xiàn)方法容易地獲得的結(jié)構(gòu)單元(12)和(13)，通過(guò)經(jīng)典的DCC/HOBt方法偶合以78％的收率得到二肽(14)。(14)用在二氯甲烷中的TFA脫保護(hù)，隨后在NMM存在下用溴乙酸芐基酯烷基化形成N-羧甲基二肽(15)，它通過(guò)催化氫化轉(zhuǎn)化為游離酸(16)。
Boc-Glu(OBn)OH和Boc-Asp(OBn)OH使用現(xiàn)有技術(shù)中已知的方法合成。
Boc-Glu(OBn)NHMe(13)的合成將三乙胺(2.0g，20mmol)滴加入Boc-Glu(OBn)OH(6.7g，20mmol)在無(wú)水THF(100ml)中的溶液中。將溶液在氬氣氛下冷卻至-78℃，然后滴加氯甲酸乙酯(2.2g，20mmol)。使反應(yīng)混合物在2小時(shí)內(nèi)溫?zé)嶂?30℃，加入甲胺(22mmol)的40％水溶液，使反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝?。在使反?yīng)再攪拌1小時(shí)后，加入乙醚(50ml)和水(70ml)。分離出有機(jī)層，用1M碳酸氫鈉、10％檸檬酸和飽和氯化鈉溶液洗滌，用硫酸鎂干燥。真空蒸發(fā)溶劑得到白色固體(5.0g，72％收率)。
1H-NMR(200MHz，CDCl3)δ1.38(s，9H，CH3)；1.85-2.59(m，4H，CH2)；2.75(d，3H，NCH3)；4.17(m，1H，CH)；5.08(δ，2H，OCH2)；5.33(bδ，1H，NH)；6.30(bs，1H，NH)；7.31(s，5H，Ph-H).
Boc-Asp(OBn)-Glu(OBn)NHMe(14)的合成在叔丁氧羰基氨基酯(13)(700mg，2mmol)在10ml二氯甲烷中的溶液中加入1.5mlTFA，反應(yīng)混合物在室溫下在氬氣氛下攪拌1小時(shí)。真空蒸發(fā)過(guò)量的酸，殘余物用乙醚處理數(shù)次，減壓濃縮，得到無(wú)色油狀物，其無(wú)需進(jìn)一步提純。加入在二氯甲烷(10ml)中的TFA鹽、Boc-Asp(OBn)OH(466ml，2mmol)、HOBt(170mg，2mmol)和NMM(202mg，2mmol)，反應(yīng)物在室溫和氬氣氛下攪拌過(guò)夜。過(guò)濾除去二環(huán)己基脲，減壓濃縮濾液。殘余物用乙酸乙酯(30ml)稀釋，再次過(guò)濾，用1M碳酸氫鈉、10％檸檬酸和飽和氯化鈉溶液洗滌。有機(jī)層用硫酸鎂干燥，真空濃縮得到白色固體，收率78％(867mg)。
1H-NMR(200MHz，CDCl3)δ1.41(s，9H，CH3)；1.85-3.05(m，9H，3CH2，NCH3)；4.40(m，2H，CH)；5.01(m，4H，OCH2)；5.53(d，1H，NH)；6.48(bs，1H，NH)；7.15-7.38(m，10H，Ph-H).
N-羧甲基二肽(15)的合成向Boc-Asp(OBn)-Glu(OBn)NHMe(14)(555mg，1mmol)在10ml二氯甲烷的溶液中加入1mlTHF，反應(yīng)混合物在室溫下在氬氣氛中攪拌1小時(shí)。真空蒸發(fā)過(guò)量的酸，殘余物用乙醚處理幾次，減壓濃縮，得到無(wú)色油狀物，將其溶解在無(wú)水THF(20ml)中。在該溶液中加入NMM(101mg，1mmol)和溴乙酸芐基酯(230mg，1mmol)，反應(yīng)混合物在室溫下在氬氣氛中攪拌過(guò)夜。減壓濃縮反應(yīng)混合物，殘余物用乙酸乙酯(20ml)稀釋，用1M碳酸氫鈉、10％檸檬酸和飽和氯化鈉溶液洗滌。有機(jī)層用硫酸鎂干燥，然后濃縮得到無(wú)色油狀物，將其經(jīng)快速硅膠色譜法(乙酸乙酯/甲醇10∶1)純化得到(15)(410mg)白色固體，收率88％。
1H-NMR(200MHz，CDCl3)δ1.83-2.95(m，9H，3CH2，NCH3)；3.30-3.60(m，4H，CH & N CH2)；4.39(m，2H，CH)；5.05(m，6H，OCH2)；6.64(bs，1H，NH)；7.29-(m，15H，Ph-H)8.02(bs，-1H，NH)；13C-NMR(60MHz，CDCl3)；δ26.17，27.24，30.59，36.57(3CH2，NCH3)；49.59(NCH2)；52.54，59.07(2CH)；66.46，66.71，66.86(3OCH.)；128.17，128.26，128.34，128.55，128.80，135.27，135.44，135.79(Ph-C)；171.25，171.34，172.01，172.61，173.05(5C＝O).
N-羧甲基-Asp-Glu-NMe(16)的合成向芐基保護(hù)的N-羧甲基二肽(15)(68mg，0.113mg)在甲醇(5ml)的溶液中逐批加入Pd/C粉末(50mg)?；旌衔镌跉錃鈿夥?氣袋壓力)下在室溫?cái)嚢?0小時(shí)。通過(guò)硅藻土墊過(guò)濾催化劑，用甲醇沖洗。濃縮濾液，粗固體在-20℃下由乙酸乙酯/甲醇重結(jié)晶，得到產(chǎn)物N-羧甲基-Asp-Glu-NMe(16)(23mg，0.065mmol)白色固體，收率58％。
mp147-149℃；NMR(360MHz，DMSO-d6)δ8.19(d，J＝8.5Hz1H)，7.72(m，1H)，4.20(m，1H)，3.45-3.20(m，4H)，2.63-2.44(m，5H)，2.20(m，2H)，1.93(m，1H)，1.72(m，1H).6.1.5.巰基化合物的合成合成巰基化合物(22)，也稱為FG-O74(抑制劑C的實(shí)施例)的優(yōu)選方法如下
用溴乙酸叔丁基酯在氫化鈉存在下烷基化磷酸二乙基酯(17)，以90％的收率得到膦酸酯(18)。使用碳酸鉀作為堿，(18)與甲醛進(jìn)行Horner-Emmons反應(yīng)形成不飽和酯(19)。(19)用LiOH進(jìn)行皂化，然后進(jìn)行硫代乙酸的Michael加成得到酸(20)。(20)與Glu(OBn)NHMe采用DCC/HOBt方法偶合，通過(guò)快速色譜法得到非對(duì)映體混合物的二肽(21)。(21)用在二氯甲烷中的TFA脫保護(hù)得到單酸(22)。
1-乙基-2-二乙基膦酰基琥珀酸4-叔丁基酯(18)的合成向氫化鈉(0.48g，20mmol)在無(wú)水THF(80ml)中的懸浮液中滴加磷?；宜崛一?4.48g，20mmol)在THF(20ml)中的溶液，3小時(shí)后在室溫下加入在THF(20ml)中的溴乙酸叔丁基酯。將得到的懸浮液在室溫下攪拌3小時(shí)，加入水(50ml)，反應(yīng)混合物用1M鹽酸酸化到pH3。在加入乙醚(70ml)后，分離出有機(jī)層，用飽和氯化鈉溶液洗滌，用硫酸鎂干燥，真空蒸發(fā)溶劑得到無(wú)色油狀物，收率90％。
1-乙基-2-亞甲基-琥珀酸4-叔丁基酯(19)的合成將化合物(18)(5.4g，16mmol)、碳酸鉀(6.9g，50mmol)和甲醛(3.2g，100mmol)的30％水溶液的混合物回流3小時(shí)。冷卻后，混合物用己烷提取，有機(jī)層用水和鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥。在過(guò)濾和真空蒸發(fā)后，得到油質(zhì)殘余物，收率80％(2.7g)。
1H-NMR(200MHz，CDCl3)δ1.29(t，j＝7Hz，3H，CH2)；1.43(s，9H，CH3)；3.24(s，2H，CH2；4.20(q，J＝Hz，2H，OCH2)；5.63，6.28(s，2H，＝CH2).
2-乙酰基硫基甲基-琥珀酸4-叔丁基酯(20)將不飽和酯(19)(2.3g，11mmol)溶解于THF(50ml)中，在0℃加入0.2MLiOH(264mg，11mmol)水溶液。使混合物溫?zé)嶂潦覝?，再攪?小時(shí)。蒸發(fā)有機(jī)溶劑，水層用乙醚(30ml)提取。水層用1M鹽酸酸化至pH3，用乙酸乙酯提取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥。在過(guò)濾和蒸發(fā)溶劑后，得到酸，白色固體，60％收率。
1H-NMR(200MHz，CDCl3)；δ1.44(s，9H，CH3)，3.26(s，2H，CH2)；5.78，6.42(s，2H，＝CH2)10.01(bs，1H，COOH).
將酸(1.0g，5.4mmol)溶解于氯仿中，加入硫代乙酸(1.45g，19mmol)?；旌衔镌?0℃攪拌49小時(shí)，真空蒸發(fā)溶劑，以定量收率得到化合物(20)，為無(wú)色油狀物。
1H-NMR(200MHz，CDCl3)；δ1.44(s，9H，CH3)；2.34(s，3H，CH3)；2.45-2.75(m，2H，CH2；2.96-3.33(m，3H，CH2，CH)；9.74(bs，1H，COOH).
3-乙?；蚣谆?4-氧代-5-氮雜-6-(R)-甲基氨基甲?；?8-芐氧基羰基-辛酸4-叔丁基酯(21)在叔丁氧基羰基氨基酯(13)(700mg，2mmol)在10ml二氯甲烷中的溶液中加入1mlTFA，反應(yīng)混合物在室溫下在氬氣氛下攪拌1小時(shí)。真空蒸發(fā)過(guò)量的酸，殘余物用乙醚(15ml)處理數(shù)次，減壓濃縮，得到無(wú)色油狀物，其無(wú)需進(jìn)一步提純。將TFA鹽、酸(20)(525mg，2mmol)、HOBt(170mg，2mmol)和NMM(202mg，2mmol)溶解在二氯甲烷(40ml)中，加入DCC(412mg，2mmol)的CH2Cl2(10ml)溶液，反應(yīng)物在室溫和氬氣氛下攪拌過(guò)夜。過(guò)濾除去二環(huán)己基脲沉淀，減壓濃縮濾液。殘余物用乙酸乙酯(30ml)稀釋，再次過(guò)濾，用1M碳酸氫鈉、10％檸檬酸和飽和氯化鈉溶液洗滌。有機(jī)層用硫酸鎂干燥，真空濃縮得到(21)無(wú)色油狀物，將其用硅膠色譜法純化，使用乙酸乙酯作洗脫劑，得到72％的收率(710mg)，為非對(duì)映體的混合物。1H-NMR(200MHz，CDCl3)；δ1.36，1.39(2s，9H，CH3)；1.87-3.2(m，14H，4CH3，CH3，NCH3)；4.40(m，2H，CH)；5.08，5.11(2s，2H，OCH2)；6.43，6.76，7.07(bs，-2H，NH)；6.76(2d，1H，NH)；7.31(m，15H，Ph-H).
3-巰甲基-4-氧代-5-氮雜-6-(R)-甲基氨基甲?；?8-羰基-辛酸(22)(FG 074)的合成在叔丁氧基羰基氨基酯21(495mg，1mmol)在15ml二氯甲烷中的溶液中加入TFA(1.5ml)，反應(yīng)混合物在室溫下在氬氣氛下攪拌1小時(shí)。真空蒸發(fā)溶劑和過(guò)量的酸，殘余物用乙醚(10ml)處理數(shù)次，減壓濃縮，得到無(wú)色油狀物，其用硅膠色譜法(乙酸乙酯/甲醇10∶1，含有1％乙酸)提純得到中間體的白色固體，收率84％(370mg)。
在室溫下在中間體(30mg，0.07mmol)在1ml(1.5/1)甲醇/水中的溶液中加入LiOH.H2O(12mg，0.27mmol)。在室溫下攪拌3小時(shí)后，反應(yīng)混合物用0.5ml1N鹽酸水溶液處理，用乙酸乙酯(2×10ml)提取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，濃縮得到硫化合物22，為膠狀固體(19mg，0.06mmol)收率86％。
MS(ES)(M+H)+307
6.1.6. 2-[[N-(4-甲氧基苯磺?；?-N-(4-氯芐基)]氨基]乙酸的合成合成2-[[N-(4-甲氧基苯磺?；?-N-(4-氯芐基)]氨基]乙酸(23)，也稱為GF046，(抑制劑A的實(shí)施例)的優(yōu)選方法如下
2-[[N-(4-甲氧基苯磺?；?-N-(4-氯芐基)]氨基]乙酸(23)的合成在乙酯(4)(300mg，0.75mmol)在1.5∶1甲醇/水(4ml)中的懸浮混合物中加入氫氧化鋰/水。在室溫下攪拌5小時(shí)后，混合物用1N鹽酸(20ml)處理，用二氯甲烷(2×20ml)提取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，并濃縮。粗固體從熱的乙醚中重結(jié)晶得到(23)白色固體。
mp139.5-140℃；1H NMR(360MHz，DMSO-d6)δ7.79-7.08(m，4H，Ph)，4.37(s，2H，CH2)，3.85(s，3H，OCH3)，3.83(s，2H，CH2)6.1.7. N-羥基-2-[[N’-(4-甲氧基苯磺酰基)-N’-(羧甲基)]氨基]乙酰胺的合成合成N-羥基-2-[[N’-(4-甲氧基苯磺?；?-N’-(羧甲基)]氨基]乙酰胺(30)，也稱為GF055，(抑制劑A的實(shí)施例)的優(yōu)選合成方法如下
2-[[N-(4-甲氧基苯磺?；?]氨基]乙酸乙酯(26)的合成向甘氨酸乙酯鹽酸鹽(24)(3.0g，21.5mmol)和4-甲氧基苯磺?；?25)(4.4g，21.3mmol)在無(wú)水二氯甲烷(60ml)中的混合物中加入三乙胺(4.79g，47.3mmol)。在室溫下攪拌15小時(shí)后，反應(yīng)混合物用1N鹽酸(120ml)處理，用二氯甲烷(2×100ml)提取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，并濃縮。粗固體從熱的乙酸乙酯/己烷中重結(jié)晶得到磺酰胺(26)白色固體。
2-[[N-(4-甲氧基苯基磺?；?-N-叔丁氧基羰基甲基]氨基]乙酸乙酯(27)的合成在冰浴中向氫化鈉(分散在礦物油中，60％)(162mg，4.03mmol)在無(wú)水THF(10ml)中的漿狀物中加入磺酰胺(26)(1.0g，3.66mmol)，然后加入溴乙酸叔丁基乙酯(785mg，4.03mmol)混合物在0℃下劇烈攪拌30分鐘，然后在室溫下攪拌15小時(shí)。在冰浴中冷卻反應(yīng)混合物后，將其用水(25ml)處理，用乙醚(2×25ml)提取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥并濃縮。殘余物用硅膠色譜法(2∶1己烷∶乙酸乙酯)純化，得到(27)無(wú)色漿狀物。
N-羥基-2-[[N’-(4-甲氧基苯磺?；?-N’-(叔丁氧基羰基甲基)]氨基]乙酰胺(28)的合成在沸點(diǎn)下分別制備羥基胺鹽酸鹽(377mg，5.43mmol)在甲醇(2.7ml)中的溶液和KOH(456mg，8.13mmol)在甲醇(2.7ml)中的溶液，冷卻至40℃，然后將后者溶液加入前者。在冰浴中冷卻30分鐘后，過(guò)濾出氯化鉀固體。在濾液中加入乙酯(27)(1.05g，2.71mmol)。在室溫下攪拌6小時(shí)后，反應(yīng)混合物用1N鹽酸溶液中和至pH4，在二氯甲烷(60ml)和水(20ml)之間分配。分離得到的兩相，水層用二氯甲烷(60ml)提取，合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，并濃縮。殘余物用硅膠色譜法(11∶1二氯甲烷∶甲醇)純化得到酯異羥肟酸(28)，也稱為GF-058，白色同體。
N-羥基-2-[[N’-(4-甲氧基苯磺?；?-N’-(羧甲基)]氨基]乙酰胺(29)的合成將叔丁基酯異羥肟酸(28)(520mg，mmol)在35％三氟乙酸/二氯甲烷(9ml)中的溶液在0℃攪拌10分鐘，然后在室溫下攪拌1.5小時(shí)。濃縮混合物并真空干燥。殘余物在乙酸乙酯中研制，收集固體，從乙酸乙酯/甲醇/己烷中重結(jié)晶得到酸異羥肟酸(29)白色固體。
mp160-161℃；MS(ES)(M+H)+319；1H NMR(360MHz，DMSO-d6)δ12.08(brs，1H，CO2H)，10.69(s，1H，OH)，8.96(s，1H，NH)，7.76(d，J＝8.7Hz，2H，Ph)，7.09(d，J＝8.7Hz，2H，Ph)，4.01(s，2H，CH2)，3.84(s，3H，OMe)，3.83(s，2H，CH2).6.1.8. N-(4-甲氧基苯磺酰基)-L-脯氨酸異羥肟酸的合成合成N-(4-甲氧基苯磺?；?-L-脯氨酸異羥肟酸，也稱為FG054，(抑制劑A的實(shí)施例)的優(yōu)選方法如下
N-(4-甲氧基苯磺?；?-L-脯氨酸甲酯(32)的合成向L-脯氨酸甲酯鹽酸鹽(30)(1.00g，6.03mmol)和4-甲氧基苯磺酰基氯(31)(1.19g，5.75mmol)在無(wú)水二氯甲烷(17ml)中的溶液中加入三乙胺(1.22g，12.06mmol)。在室溫下攪拌15小時(shí)后，反應(yīng)混合物用1N鹽酸(30ml)水溶液處理，用乙酸乙酯(2×100ml)提取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，濃縮得到(32)。該產(chǎn)物無(wú)需進(jìn)一步純化直接用于下一反應(yīng)。
N-(4-甲氧基苯磺?；?-L-脯氨酸異羥肟酸的合成(33)在沸點(diǎn)下分別制備羥胺鹽酸鹽(465mg，6.68mmol)在甲醇(3.4ml)中的溶液和KOH(561mg，10.0mmol)在甲醇(3.4ml)中的溶液，冷卻至40℃，然后將后者溶液加入前者。在冰浴中冷卻30分鐘后，過(guò)濾出氯化鉀固體。在濾液中加入乙酯(32)(1.0g，3.34mmol)。在室溫下攪拌15小時(shí)后，反應(yīng)混合物用1N鹽酸(40ml)溶液處理，用二氯甲烷/甲醇(10∶1)提取。有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，并濃縮得到粗產(chǎn)物。粗產(chǎn)物由熱甲醇/乙酸乙酯中重結(jié)晶得到異羥肟酸(33)固體。
6.1.9. N-羥基-2-[[N’-(4-甲氧基苯磺酰基)-N’-(4-三氟甲基芐基)]氨基]乙酰胺的合成合成N-羥基-2-[[N’-(4-甲氧基苯磺?；?-N’-(4-三氟甲基芐基)]氨基]乙酰胺(34)，也稱為FG066(抑制劑A的實(shí)施例)的優(yōu)選方法基本上與所述合成N-羥基-2-[[N’-(4-甲氧基苯磺酰基)-N’-(4-氯芐基)]氨基]乙酰胺的方法相同，但使用起始物料4-三氟甲基苯甲醛代替4-氯苯甲醛。參見，6.1.1.部分
1HNMR(360MHz，DMSO-d6)δ10.50(s，1H，OH)，8.83(s，1H，NH)，7.81-7.08(m，8H，Ph)，4.45(s，2H，CH2CO)，3.86(s，3H，OMe)，3.67(s，2H，CH2Ph).
6.1.10. N-羥基-2-[[N’-(4-甲氧基苯磺?；?-N’-(4-甲氧基芐基)]氨基]乙酰胺的合成合成N-羥基-2-[[N’-(4-甲氧基苯基磺?；?-N’-(4-甲氧基芐基)]氨基]乙酰胺(35)，也稱為FG067(抑制劑A的實(shí)施例)的優(yōu)選方法基本上與所述合成N-羥基-2-[[N’-(4-甲氧基苯磺酰基)-N-(4-氯芐基)]氨基]乙酰胺的方法相同，但使用起始物料4-甲氧基苯甲醛代替4-氯苯甲醛。參見，6.1.1.部分1HNMR(360MHz，DMSO-d6)δ10.42(s，1H，OH)，8.79(s，1H，NH)7.81-6.86(m，8H，Ph)，4.29(s，2H，CH2CO)，3.85(s，3H，OMe)，3.73(s，3H，OMe)，3.28(s，2H，CH2Ph).
6.1.11. N-羥基-2-[[N’-(4-苯磺酰基)-N’-(4-氯芐基)]氨基]乙酰胺的合成合成N-羥基-2-[[N’-(4-苯磺?；?-N’-(4-氯芐基)]氨基]乙酰胺(36)，也稱為FG-080(抑制劑A的實(shí)施例)的優(yōu)選方法基本上與所述合成N-羥基-2-[[N’-(4-甲氧基苯磺?；?-N’-(4-氯芐基)]氨基]乙酰胺的方法相同，但使用起始物料苯磺酰基氯代替4-甲氧基苯磺?；?。參見上述6.1.1.部分。
MS(ES)(M+H)+355
36(FG-080)6.1.12. N-羥基-2-[[N’-(4-甲氧基苯磺?；?-N’-(芐基)]氨基]乙酰胺的合成合成N-羥基-2-[[N’-(4-甲氧基苯磺?；?-N’-(芐基)]氨基]乙酰胺(37)，也稱為FG-061(抑制劑A的實(shí)施例)的優(yōu)選方法基本上與所述合成N-羥基-2-[[N’-(4-甲氧基苯磺酰基)-N’-(羧甲基)]氨基]乙酰胺的方法相同，但使用起始物料芐基溴代替溴乙酸叔丁基酯。參見上述6.1.7.部分。
MS(ES)(M-H)-349
37(FG-061)6.1.13. N-(4-甲氧基苯磺?；?-β-芐基-(L)-天冬氨酸的合成合成N-(4-甲氧基苯磺?；?-β-芐基-(L)-天冬氨酸(42)，也稱為FG084，(抑制劑A的實(shí)施例)的優(yōu)選方法如下FG084(抑制劑A)的合成
N-(4-甲氧基苯磺酰基)-β-芐基-(L)-天冬氨酸(40)。在室溫下，向β-芐基-(L)-天冬氨酸鹽酸鹽(38)(2.00g，8.96mmol)和對(duì)甲氧基苯磺?；?39)(1.76g，8.53mmol)在無(wú)水二氯甲烷中的溶液中加入三乙胺(1.81g，17.91mmol)。攪拌15小時(shí)后，反應(yīng)混合物用1N鹽酸(60ml)處理，用乙酸乙酯(3×50ml)提取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，濃縮得到N-(4-甲氧基苯磺酰基)-β-芐基-(L)-天冬氨酸(3.14g，7.99mmol，94％收率)，膠狀產(chǎn)物。
N-芐氧基-N’-(4-甲氧基苯基磺?；?-β-芐基-(L)-天冬酰胺(41)。在室溫下，向N-(4-甲氧基苯磺?；?-β-芐基-(L)-天冬氨酸(300mg，0.76mmol)和O-芐基羥胺/鹽酸在(7/3)THF/DMF(10ml)的無(wú)水溶液中的混合物中加入N-羥基苯并三唑(HOBT)(103mg，0.76mmol)、N-乙基嗎啉(204mg，1.68mmol)和二異丙基碳化二亞胺(106mg，0.84mmol)。在攪拌一周末(2.5)后，反應(yīng)混合物用(1/1)己烷/乙酸乙酯(40ml)稀釋，依次用1N鹽酸(2×20ml)、飽和碳酸氫鈉水溶液(2×20ml)和鹽水洗滌。有機(jī)層用硫酸鎂干燥并濃縮。殘余物經(jīng)硅膠快速色譜法((1/1)乙酸乙酯/己烷)純化得到N-芐氧基-N’-(4-甲氧基苯磺?；?-β-芐基-(L)-天冬酰胺(114mg，0.22mmol，30％收率)，白色固體。mp128-129℃；MS(ES)(M+S)+499N-羥基-N’-(4-甲氧基苯磺酰基)-(L)-天冬酰胺(42)。將N-芐氧基-N’-(4-甲氧基苯磺?；?-β-芐基-(L)-天冬酰胺(102mg，0.20mmol)和10％Pd/C(43mg)在甲醇(7ml)中的混合物在氫氣氣氛(氣袋壓力)下劇烈攪拌20小時(shí)。用硅藻土墊過(guò)濾去催化劑，濃縮濾液。殘余物由水中凍干，得到N-羥基-N’-(4-甲氧基苯磺?；?-(L)-天冬酰胺(50mg，0.16mmol，77％收率)，吸濕飛揚(yáng)性粉末。
1H NMR(360MHz，DMSO-d6)δ10.60(s，1H)，8.78(s，1H)，7.87(d，J＝8.2Hz，1H)，3.93(m，1H)，3.82(s，3H)，2.50(m，1H)，2.21(dd，J＝16.0，6.5Hz，1H).6.2.實(shí)施例2C-蛋白酶活性試驗(yàn)6.2.1. 用于測(cè)定抑制劑的C-蛋白酶活性和IC50的體外試驗(yàn)如下試驗(yàn)可用于測(cè)定本發(fā)明不同化合物對(duì)C-蛋白酶活性的活性水平和效果。
將約125μg放射標(biāo)記的(14C)原膠原蛋白加入總體積為10μl的在0.1M Tris鹽酸、0.1M氯化鈉、0.02％Brij-35和5mM氯化鈣溶液中的小雞C-蛋白酶中。使反應(yīng)在35℃進(jìn)行15分鐘，用半體積的3x終止/負(fù)荷緩沖液(30mM EDTA、30％甘油、6％SDS、0.006％溴酚藍(lán))終止。然后將試樣加熱至100℃4分鐘，使用6％聚丙烯酰胺膠通過(guò)SDS-PAGE(Novex)分辨。通過(guò)放射自顯影檢測(cè)蛋白質(zhì)譜帶。酶活性的量基于相應(yīng)于未裂解的原膠原蛋白譜帶的消失。
抑制劑的IC50可通過(guò)畫出％活性對(duì)抑制劑濃度的曲線，并估算產(chǎn)生50％活性的抑制劑濃度。
試驗(yàn)的抑制劑的IC50值示于表I中。
表I各鑒定的C-蛋白酶抑制劑的IC50抑制劑 Generic組 IC50FG-047 A 50μMFG-061 A 100μMFG-053 A 100μMFG-0521A 125μMFG-066 A 150μMFG-067 A 150μMFG-086(cbz-Pro-Leu-Gly-異羥肟酸2) A 200μMFG-087(Ac-PYYG-異羥肟酸) A 335μMFG-088(放射酰胺素3)A 350μMFG-054 A 400μMFG-057 A1500μMFG-0584A2100μMFG-055 A2600μMFG-0515A ＞＞ 100μMFG-046 A ＞＞ 1000μM1 商業(yè)上由Peptides International得到(IHN-3850-PI)2 商業(yè)上由Sigma得到(C-8537)3 商業(yè)上由Sigma得到(A-6671)4 中間體化合物(28)，參見6.1.7部分5 商業(yè)上由Peptides International得到(ISN-3835-PI)6.2.2. 用于測(cè)定抑制劑C-蛋白酶活性和IC50的體外ELISA試驗(yàn)抑制劑的IC50值還可以通過(guò)過(guò)濾ELISA試驗(yàn)測(cè)定。在該試驗(yàn)中，約25ng未標(biāo)記的人體原膠原蛋白I用C-蛋白酶如6.2.1部分培養(yǎng)1小時(shí)。通過(guò)加入40μl沉淀緩沖液(0.5X反應(yīng)緩沖液、0.1mg/ml小雞膠原蛋白H、10μg/mlBAS、7.5mM EDTA)終止反應(yīng)。加入25μl75％乙醇，混合反應(yīng)混合物，在冰上培養(yǎng)1小時(shí)以沉淀原膠原蛋白。，使用Milliporemultiscreen真空閥，通過(guò)Millipore multiscreen-HV 0.45μm親水板過(guò)濾，由沉淀的膠原蛋白中分離溶解的c-前肽。除去20μl的濾液，通過(guò)使用Takara Biomedicals的原膠原蛋白I型C-肽(PIP)EIA試劑盒測(cè)定裂解的C-前肽的量。
為抑制hBMP-1，將約20ng放射標(biāo)記的(125I)人體原膠原蛋白I加入在總體積10μl的反應(yīng)溶液中的1-2μl 5倍濃縮的重組hBMP-1細(xì)胞培養(yǎng)基(Kessler等，(1996)科學(xué)271360)中。使反應(yīng)在35℃進(jìn)行1小時(shí)，隨后用半體積3x終止/負(fù)荷緩沖液終止，如上所述用SDS-PAGE進(jìn)行分析。
抑制劑的IC50可通過(guò)畫出％活性對(duì)抑制劑濃度的曲線，并估算產(chǎn)生50％活性的抑制劑濃度。IC50值示于表II中。
表II由ELISA測(cè)定的各鑒定的C-蛋白酶抑制劑的IC50抑制劑Generic組 IC50ELISAFG-061A 12μMFG-047A 13μMFG-053A 22μMFG-067A 37μMFG-066A 48μM6.2.3.用于測(cè)定抑制劑C-蛋白酶活性和IC50的組織培養(yǎng)試驗(yàn)抑制劑的體內(nèi)C-蛋白酶活性和IC50值可在組織培養(yǎng)試驗(yàn)中通過(guò)測(cè)定在用化合物處理前后在條件培養(yǎng)基中原膠原蛋白和成熟膠原蛋白的產(chǎn)生而測(cè)定。膠原蛋白和原膠原蛋白的比例將直接與前體向成熟膠原蛋白產(chǎn)物的細(xì)胞轉(zhuǎn)化有關(guān)，其表示C-蛋白酶活性。
此外，可測(cè)定C-前肽/細(xì)胞的培養(yǎng)基含量，并且比較未處理的細(xì)胞和抑制劑處理的細(xì)胞。6.3.用于測(cè)定抑制劑C-蛋白酶活性和效果的動(dòng)物模型在現(xiàn)有技術(shù)中模擬與不規(guī)則或不適當(dāng)膠原蛋白產(chǎn)生有關(guān)的臨床疾病的若干動(dòng)物模型是已知的，可用于測(cè)定本發(fā)明的化合物的體內(nèi)效果。這些物質(zhì)模型包括大鼠創(chuàng)傷室(chamber)模型(Schilling等，1959，外科46702-210)、雄二醇刺激的子宮擴(kuò)張模型(Mandell等，1982，生物化學(xué)雜志2575268-5273)和誘導(dǎo)的血管生成模型(Matrigel)(Passaniti等，1992，實(shí)驗(yàn)研究67519-528)。其它動(dòng)物模型包括臨床疾病模型，如肝纖維變性模型(Tsukamoto等，1990，肝病研討會(huì)1056-65；Kock-Weser，1952，實(shí)驗(yàn)研究1324-331；Marrione，1949，美國(guó)病理雜志25273-285；Tams，1957，美國(guó)病理雜志3313-27；Wahl等，1986，實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志163884-902)、肺纖維變性模型(Kelly等，1980，實(shí)驗(yàn)臨床醫(yī)學(xué)雜志96954-964)、動(dòng)脈再狹窄模型(Jackson，1994，Trends of Cardiovascular Medicine4122-130；Clowes等，1983，實(shí)驗(yàn)研究49327-333)、腎纖維變性模型(Yamamoto等，1987，Kidney International32514-525)、腱恢復(fù)模型(Fanklin等，1986，實(shí)驗(yàn)和臨床醫(yī)學(xué)雜志108103-108)、腫瘤生長(zhǎng)模型(kiohs等，1985，JNCL75353-359)、trabeculectomy模型(Lahery等，1989，眼病理學(xué)研究5155-179)和腹粘連模型(Williams等，1992，外科研究雜志5265-70)。6.4. 實(shí)施例4細(xì)胞毒性測(cè)定研究潛在抑制劑的細(xì)胞毒性以測(cè)定它們是否對(duì)細(xì)胞生存或繁殖有影響。這些試驗(yàn)包括使用快速繁殖期或靜止期細(xì)胞。接種已知數(shù)目的細(xì)胞，并以增加的時(shí)間暴露于潛在抑制劑的濃度范圍。通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)或染色法(例如結(jié)晶紫)測(cè)定細(xì)胞數(shù)目。
細(xì)胞毒性作為細(xì)胞生存和細(xì)胞繁殖的函數(shù)評(píng)價(jià)。細(xì)胞生存包括使用靜止期細(xì)胞，并通過(guò)細(xì)胞數(shù)目(計(jì)數(shù)或染色法)進(jìn)行測(cè)定。細(xì)胞數(shù)目的降低表示細(xì)胞損失，因此，對(duì)細(xì)胞生存有影響。細(xì)胞繁殖包括使用快速繁殖期細(xì)胞，也由細(xì)胞數(shù)目測(cè)定。此時(shí)，相對(duì)于未處理的細(xì)胞數(shù)目的降低表示對(duì)細(xì)胞繁殖有影響。
本發(fā)明并不限制于實(shí)施方案說(shuō)明的范圍，實(shí)施方案用于本發(fā)明單一方面的說(shuō)明，功能相當(dāng)?shù)娜魏位衔锖退鼈兊氖褂梅椒ㄔ诒景l(fā)明的范圍內(nèi)。事實(shí)上，除了上述之外，由如下描述和附圖
，本發(fā)明的各種改性對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見的。這種改性也在所附權(quán)利要求書的范圍內(nèi)。
所有列出的參考文獻(xiàn)其全文列為本文參考文獻(xiàn)。
權(quán)利要求
1.具有C-蛋白酶抑制效果的化合物和其可藥用的鹽，所述化合物具有選自如下的結(jié)構(gòu)式
或
其中R1選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、鹵代芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基；R2選自H、低級(jí)烷基；R3選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、鹵代芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基；R4選自芳基、雜芳基、烷基、芳烷基、雜芳烷基、烷基氨基、芳烷基氨基X選自SO2、C＝O；Y選自O(shè)H、HOHN(羥胺)、H2N、烷基氨基；Z是直連鍵、亞甲基、氧、硫、氨基；n是0或1。
2.具有C-蛋白酶抑制效果的化合物和其可藥用的鹽，所述化合物具有選自如下的結(jié)構(gòu)式
其中R1選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基；R2選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基；R3選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺酰基或磺?；?烷基；R4選自H、低級(jí)烷基；和R5選自H、低級(jí)烷基、羧基烷基、(單或二烷基氨基)烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基、alkoy烷基?；榛?。
3.具有C-蛋白酶抑制效果的化合物和其可藥用的鹽，所述化合物具有選自如下的結(jié)構(gòu)式
其中R1選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基；R2選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基；R3選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺酰基或磺?；?烷基；R4選自H、低級(jí)烷基；和R5選自H、低級(jí)烷基、羧基烷基、(單或二烷基氨基)烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基、alkoy烷基酰基烷基。
4.具有C-蛋白酶抑制效果的化合物和其可藥用的鹽，所述化合物具有選自如下的結(jié)構(gòu)式
其中R1選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基；R2選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基；R3選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺酰基或磺?；?烷基；R4選白H、低級(jí)烷基；R5選自H、低級(jí)烷基、羧基烷基、(單或二烷基氨基)烷基、烷基(硫基、亞磺酰基或磺?；?烷基、alkoy烷基?；榛?br> 5.具有C-蛋白酶抑制效果的化合物和其可藥用的鹽，所述化合物具有選自如下的結(jié)構(gòu)式
其中R1選自O(shè)H、烷氧基、低級(jí)烷基、烷基氨基、肽；X選自N、C；R2選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基；R3選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基；R4選自H、低級(jí)烷基；R5選自H、低級(jí)烷基、羧基烷基、(單或二烷基氨基)烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基、alkoy烷基?；榛?br> 6.權(quán)利要求1的化合物和其可藥用的鹽，其中上述化合物具有下式
7.權(quán)利要求1的化合物和其可藥用的鹽，其中上述化合物具有下式
8.權(quán)利要求1的化合物和其可藥用的鹽，其中上述化合物具有下式
9.權(quán)利要求1的化合物和其可藥用的鹽，其中上述化合物具有下式
10.權(quán)利要求1的化合物和其可藥用的鹽，其中上述化合物具有下式
11.權(quán)利要求1的化合物和其可藥用的鹽，其中上述化合物具有下式
12.權(quán)利要求1的化合物和其可藥用的鹽，其中上述化合物具有下式
13.權(quán)利要求1的化合物和其可藥用的鹽，其中上述化合物具有下式
14.權(quán)利要求1的化合物和其可藥用的鹽，其中上述化合物具有下式
15.權(quán)利要求1的化合物和其可藥用的鹽，其中上述化合物具有下式
16.權(quán)利要求1的化合物和其可藥用的鹽，其中上述化合物具有下式
17.權(quán)利要求3的化合物和其可藥用的鹽，其中上述化合物具有下式
18.權(quán)利要求3的化合物和其可藥用的鹽，其中上述化合物具有下式
19.藥物組合物，其含有選自如下的化合物
或
其中R1選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、鹵代芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基；R2選自H、低級(jí)烷基；R3選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、鹵代芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺酰基或磺?；?烷基；R4選自芳基、雜芳基、烷基、芳烷基、雜芳烷基、烷基氨基、芳烷基氨基；X選自SO2、C＝O；Y選自O(shè)H、HOHN(羥胺)、H2N、烷基氨基的基團(tuán)；Z是直連鍵、亞甲基、氧、硫、氨基；n是0或1；和可藥用的載體或賦形劑；或
其中R1選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基；R2選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基；R3選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基；R4選自H、低級(jí)烷基；和R5選自H、低級(jí)烷基、羧基烷基、(單或二烷基氨基)烷基、烷基(硫基、亞磺酰基或磺?；?烷基、alkoy烷基酰基烷基；和可藥用的載體或賦形劑；或
其中R1選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基；R2選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基；R3選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基；R4選自H、低級(jí)烷基；和R5選自H、低級(jí)烷基、羧基烷基、(單或二烷基氨基)烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基、alkoy烷基?；榛缓涂伤幱玫妮d體或賦形劑；或
其中R1選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基；R2選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺酰基或磺?；?烷基；R3選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基；R4選自H、低級(jí)烷基；R5選自H、低級(jí)烷基、羧基烷基、(單或二烷基氨基)烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基、alkoy烷基酰基烷基；和可藥用的載體或賦形劑；或
其中R1選自O(shè)H、烷氧基、低級(jí)烷基、烷基氨基、肽；X選自N、C；R2選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基；R3選自H、低級(jí)烷基、單或多鹵代烷基、羧基烷基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、聯(lián)芳基、聯(lián)芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巰基烷基、(氨基、單或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基；R4選自H、低級(jí)烷基；R5選自H、低級(jí)烷基、羧基烷基、(單或二烷基氨基)烷基、烷基(硫基、亞磺?；蚧酋；?烷基、alkoy烷基?；榛缓涂伤幱玫妮d體或賦形劑。
20.藥物組合物，其含有選自如下的化合物
和可藥用的載體或賦形劑；或
和可藥用的載體或賦形劑；或
和可藥用的載體或賦形劑；或
和可藥用的載體或賦形劑；或
和可藥用的載體或賦形劑；或
和可藥用的載體或賦形劑；或
和可藥用的載體或賦形劑；或
和可藥用的載體或賦形劑；或
和可藥用的載體或賦形劑；或
和可藥用的載體或賦形劑；或
和可藥用的載體或賦形劑；或
和可藥用的載體或賦形劑；或
和可藥用的載體或賦形劑。
21.治療與膠原蛋白的不適當(dāng)或不規(guī)則產(chǎn)生有關(guān)的疾病的方法，其包括施用有效量的權(quán)利要求20的組合物。
22.治療與膠原蛋白的不適當(dāng)或不規(guī)則產(chǎn)生有關(guān)的疾病的方法，其包括施用有效量的權(quán)利要求21的組合物。
23.權(quán)利要求22的方法，其中纖維變性疾病選自肝硬變和關(guān)節(jié)炎。
24.權(quán)利要求23的方法，其中纖維變性疾病選自肝硬變和關(guān)節(jié)炎。
全文摘要
本發(fā)明涉及能夠抑制C－蛋白酶活性以調(diào)整、調(diào)節(jié)和/或抑制不正常膠原蛋白產(chǎn)生的新用途。
文檔編號(hào)A61P13/00GK1198096SQ96197271
公開日1998年11月4日 申請(qǐng)日期1996年8月8日 優(yōu)先權(quán)日1995年8月8日
發(fā)明者M·布倫內(nèi)爾, W·B·何 申請(qǐng)人:菲布洛根有限公司