專(zhuān)利名稱(chēng)：氨基金剛烷類(lèi)化合物作為免疫調(diào)節(jié)劑的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及氨基金剛烷類(lèi)化合物作為免疫調(diào)節(jié)劑的用途，尤其在調(diào)節(jié)與調(diào)控已活化的中性白細(xì)胞上的用途。
中性白細(xì)胞(白細(xì)胞的一個(gè)亞類(lèi))牽涉到免疫防衛(wèi)和血管系統(tǒng)與邊緣組織中的其它反應(yīng)(Roitt，I.M，Leitfaden der Immunologie，Steinkopf-Verlag Darmstadt，第二版，1984)。
中性白細(xì)胞可以由外源物質(zhì)激活，例如細(xì)胞壁組分(一種市售的產(chǎn)品為″酵母聚糖″)。與此相關(guān)的是，活性氧在所謂的呼吸爆發(fā)作用中形成。


圖1描述了中性白細(xì)胞刺激的簡(jiǎn)化的方案在配體(例如酵母聚糖A)結(jié)合到中性白細(xì)胞膜上的特異性受體上后，三磷酸鳥(niǎo)苷(GTP)被激活，其又轉(zhuǎn)過(guò)來(lái)激活磷脂?；?肌醇-4，5-二磷酸(PIP2)-特異性磷脂酶C(PLC)。PLC催化PIP2對(duì)肌醇-1，4，5-三磷酸(IP3)和二?；视?DG)的水解。IP3刺激從胞內(nèi)庫(kù)釋放Ca2+離子。Ca2+離子與DG一道激活蛋白激酶C(PC)，該酶磷酸化許多蛋白質(zhì)，其中包括以這種方式激活NADPH氧化酶復(fù)合物。NADPH氧化酶又催化以下反應(yīng)其中產(chǎn)生活性氧O2-。
雖然活化的中性白細(xì)胞對(duì)發(fā)揮免疫防衛(wèi)作用來(lái)說(shuō)是重要的，但疾病癥狀(例如急性或慢性炎癥或其它過(guò)敏反應(yīng))可以由尤其是活性氧導(dǎo)致的過(guò)渡反應(yīng)所引起。另一方面，中性白細(xì)胞活性可以低得或不足以對(duì)一般的免疫缺損病(例如愛(ài)滋病)進(jìn)行成功的免疫防衛(wèi)。因此，需要，尤其是從醫(yī)學(xué)的角度需要能夠體內(nèi)和體外影響中性白細(xì)胞的調(diào)控和/或調(diào)節(jié)活性。與此相關(guān)，依據(jù)病癥的不同，應(yīng)該提高或降低中性白細(xì)胞活性，即中性白細(xì)胞活性應(yīng)該是隨意可控制的。
因此，本發(fā)明的目的是使得可以獲得一種中性白細(xì)胞的活性的調(diào)控和/或調(diào)節(jié)劑。
現(xiàn)在已驚人地發(fā)現(xiàn)某些氨基金剛烷類(lèi)化合物對(duì)中性白細(xì)胞的活性有調(diào)控和/或調(diào)節(jié)作用。本發(fā)明涉及這一發(fā)現(xiàn)。對(duì)此而言，中性白細(xì)胞已經(jīng)被其它刺激物激活是決定性的。所說(shuō)的氨基金剛烷自身不顯示出任何對(duì)中性白細(xì)胞的激活作用。
通過(guò)將式(I)的氨基金剛烷類(lèi)化合物用于調(diào)節(jié)已活化的中性白細(xì)胞的活性，上述目的相應(yīng)地得到了解決
其中R1、R2、R3和R4各自分別選自-NR5R6、-NR5R6R7+、氫、具有多達(dá)7元環(huán)的芳基或雜芳基、C1-C20-烷基、C1-C20-鏈烯基和C1-C20-炔基，其中所說(shuō)的烷基、鏈烯基和炔基殘基可以是有支鏈的、無(wú)支鏈的或環(huán)狀的，并且可以是由或未由鹵素、具有多達(dá)7元環(huán)的芳基或雜芳基取代的，前提是殘基R1、R2、R3和R4的至少一個(gè)代表-NR5R6或-NR5R6R7；同時(shí)R5、Rg和R7各自分別選自氫、具有多達(dá)7元環(huán)的芳基或雜芳基、C1-C20-烷基、C1-C20-鏈烯基和C1-C20-炔基，其中所說(shuō)的烷基、鏈烯基和炔基殘基可以是有支鏈的、無(wú)支鏈的或環(huán)狀的，并且可以是由或未由鹵素、具有多達(dá)7元環(huán)的芳基或雜芳基取代的，或者R5和R6與氮原子一道形成具有多達(dá)7元環(huán)的雜環(huán)基團(tuán)。
這一類(lèi)型的氨基金剛烷類(lèi)化合物是已知的。就此而言，DE 2219256，DE 2856393，DE2232735，US 3450761或4122193中描述了1-氨基金剛烷。式(I)的化合物的產(chǎn)生一般用已知方法進(jìn)行，例如鹵素金剛烷的烷基化。爾后的進(jìn)一步的鹵化和烷基化產(chǎn)生個(gè)別的二和/或三-取代的金剛烷。EP392059(其所教導(dǎo)的方法清楚地由本文一并參考)涉及氨基金剛烷的產(chǎn)生方法。
氨基金剛烷類(lèi)化合物也已經(jīng)用于藥物目的。就此而言，EP 392059公開(kāi)了采用l-氨基金剛烷類(lèi)化合物治療阿爾茨海默病或由腦部局部缺血引起的人腦細(xì)胞損傷。US 3450761描述了具有抗病毒活性的金剛烷。
中性白細(xì)胞的活性是被提高還是部分地或完全地被抑制取決于所使用的氨基金剛烷類(lèi)化合物的濃度。就此而言，從10-6至10-5M的濃度具有提高活性的作用。約5·10-6M的濃度(一種在體內(nèi)血漿中完全可以達(dá)到的濃度)被證明對(duì)提高中性白細(xì)胞活性尤其有效。相反，活性的抑制由提高的氨基金剛烷濃度引起。適合于這一目的的濃度是10-4到10-3M。
本發(fā)明包括由一個(gè)或多個(gè)氨基基團(tuán)取代的金剛烷類(lèi)化合物，其中單氨基金剛烷是優(yōu)選的。因此，合適的式(I)的化合物是其中R1代表氨基基團(tuán)的那些化合物(例如l-氨基-3-乙基-5，7-二甲基-金剛烷)以及其中R1代表氨基基團(tuán)，并且R3和R4代表氫原子的那些化合物(例如1-氨基-3-環(huán)己基-金剛烷或l-氨基-3-乙基-金剛烷)。
優(yōu)選的金剛烷類(lèi)化合物是l-氨基-3，5-二甲基-金剛烷，l-氨基-3，5-二乙基-金剛烷和N-取代的化合物l-N-甲氨基-3，5-二甲基-金剛烷和化合物l-N-乙氨基-3，5-二甲基-金剛烷。特別優(yōu)選的是被稱(chēng)作memantine(INN，AkatinolMemantine)的1-氨基-3，5-二甲基-金剛烷，Grtelmeyer，R.等在神經(jīng)康復(fù)譜(W.Zuckschwerdt出版社，慕尼黑，1993，50ff)中描述了用memantine治療癡呆綜合征。
如以上所解釋的，按照本發(fā)明的氨基金剛烷類(lèi)化合物僅僅對(duì)預(yù)活化的或者已受特殊的激活物刺激的中性白細(xì)胞具有調(diào)節(jié)作用。
天然物質(zhì)，例如酵母聚糖，N-甲酰基-Met-Leu-Phe(N-FLMP)或A23187(Ca拮抗劑)被稱(chēng)為激活物。如果人們意欲特異地或者更強(qiáng)烈地體外(但也體內(nèi))激活中性白細(xì)胞，則這些物質(zhì)可以被利用。由此，在樣品(例如體液樣品，尤其是血液樣品)中檢測(cè)中性白細(xì)胞是可能的，即使是僅存在極少的中性白細(xì)胞或當(dāng)它們的活性十分弱時(shí)。在此情況下，激活物可以與氨基金剛烷化合物一起存在由激活物刺激的中性白細(xì)胞的活化程度被同時(shí)添加的氨基金剛烷類(lèi)化合物所增強(qiáng)。
應(yīng)用的另一個(gè)領(lǐng)域是在具有各種形式的免疫缺損的患者(尤其是愛(ài)滋病患者)中改善免疫防衛(wèi)。這里，可以施用包含按照本發(fā)明的氨基金剛烷類(lèi)化合物的藥物組合物，所述的化合物可以與也可以不與中性白細(xì)胞激活物組合。此外，在CGD(agranulomatosis)，韋格內(nèi)氏肉芽腫病和/或糖原貯積病中的使用是可能的。
當(dāng)然，中性白細(xì)胞也可以作為有機(jī)體天然免疫應(yīng)答的結(jié)果(由于對(duì)不同免疫原的反應(yīng))被激活，并觸發(fā)因過(guò)度反應(yīng)產(chǎn)生的過(guò)敏反應(yīng)，炎癥以及風(fēng)濕癥狀。這里，中性白細(xì)胞活性可以用適當(dāng)提高的氨基金剛烷濃度來(lái)削弱，同時(shí)患者可以得到緩解。內(nèi)部和外部炎癥疾病(例如在膝蓋，臀部或頜上的)以及自身免疫病可以特別地用包含氨基金剛烷的藥物有效地治療。應(yīng)用的另一個(gè)領(lǐng)域是在寄生蟲(chóng)病(例如利什曼屬病)的治療中。
在這種情況下，醫(yī)生經(jīng)過(guò)判斷，通過(guò)選擇合適的劑量和給藥形式，可以保證調(diào)節(jié)與調(diào)控中性白細(xì)胞活性的氨基金剛烷類(lèi)化合物的適當(dāng)濃度。取決于應(yīng)用的領(lǐng)域，腸胃外形式(例如靜脈內(nèi)或口服給藥形式)在這里是可能的；持續(xù)作用形式也是合適的。本發(fā)明也包括按照本發(fā)明的氨基金剛烷化合物與藥學(xué)上可接受的鹽(尤其是酸加成鹽)的組合物；例如，鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、醋酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽或者與富馬酸、馬來(lái)酸、檸檬酸或磷酸的加成化合物是這里將提到的。該藥物組合物還可以含有中性白細(xì)胞激活物，這取決于疾病的種類(lèi)。通常的藥學(xué)上可接受的載體和佐劑用于制劑中。
下列實(shí)施例借助特殊的化合物memantine說(shuō)明氨基金剛烷衍生物的活性提高或抑制作用的依賴(lài)性。
實(shí)施例測(cè)定原理通過(guò)化學(xué)發(fā)光測(cè)定法進(jìn)行在各種memantine濃度下的刺激的中性白細(xì)胞的活性的測(cè)定?；罨闹行园准?xì)胞在呼吸爆發(fā)作用中形成活性氧，其以十分弱的化學(xué)發(fā)光(所謂的低水平或超弱化學(xué)發(fā)光)是可檢測(cè)的。為了提高光子產(chǎn)率，加入敏化劑魯米諾(指示劑依賴(lài)性化學(xué)發(fā)光)。魯米諾是一種環(huán)酰肼，其能經(jīng)活性氧氧化成重氮醌。通過(guò)過(guò)氧化氫陰離子的親核進(jìn)攻，這一重氮醌進(jìn)一步轉(zhuǎn)化成為α-羥基氫過(guò)氧化物，在光照射下其分解成aminophtalate。反應(yīng)批中性白細(xì)胞106i.A.
PBS-緩沖液(pH 7.4)至250ml魯米諾80mMmemantine 可變濃度刺激劑酵母聚糖 2.5毫克/毫升或PMA 1mM或A23187 20mM或N-FLMP 10mMPBS＝磷酸緩沖鹽水類(lèi)似的反應(yīng)批可以用其他金剛烷類(lèi)化合物產(chǎn)生。測(cè)定采用十分靈敏的低噪音光電倍增管進(jìn)行測(cè)定，該光電倍增管把在光陰極上的光子轉(zhuǎn)化成為初生電子，然后多倍放大它們成為電脈沖信號(hào)。
用刺激劑起始反應(yīng)，并且在沒(méi)有溫育的40分鐘時(shí)間(＝80個(gè)循環(huán))下測(cè)定。結(jié)果采用由天然的刺激劑激活的中性白細(xì)胞(酵母聚糖A；a 23187；N-甲?；?Met-Leu-Phe)，用10-6M memantine可以額外地增加RLU-堿比(baserate)(RLU＝相對(duì)光單位)(酵母聚糖A約90％；A 23187約60％；N-FMLP約78％的堿刺激作用)[圖2-4]。這表明提高的呼吸爆發(fā)作用和提高的吞噬活性。用毒性佛波醇-Mystrate-乙酸酯刺激不發(fā)生這一反應(yīng)(約-20％的堿刺激作用)[圖5]。相反，memantine幾乎完全抑制所有刺激劑的堿刺激作用(在10-3濃度下)。
在對(duì)照實(shí)驗(yàn)中可以看出，memantine本身既沒(méi)有化學(xué)發(fā)光也不淬滅化學(xué)發(fā)光未示出。活化調(diào)節(jié)的特異性按照本發(fā)明的氨基金剛烷類(lèi)化合物的調(diào)節(jié)作用是對(duì)中性白細(xì)胞高度特異性的。這樣，氨基金剛烷類(lèi)化合物不表現(xiàn)出對(duì)活化的白細(xì)胞的去調(diào)節(jié)作用的任何作用。圖6顯示ACC(1-氨基環(huán)丙烷-l-羧酸)本身不與相對(duì)高濃度的memantine反應(yīng)。ACC是特異性髓過(guò)氧化物酶的指示劑，由白細(xì)胞的脫粒作用釋放，并且在胞外空間中形成破壞性次氯酸鹽。在乙烯(其可以由氣相色譜檢測(cè))形成下髓過(guò)氧化物酶特異性地與ACC反應(yīng)。于是，乙烯的形成量代表白細(xì)胞活性的間接測(cè)量值。
相對(duì)而言，呼吸爆發(fā)作用的指示劑與由呼吸爆發(fā)作用而產(chǎn)生的氧自由基(超氧化物，OH-基團(tuán)和過(guò)氧化氫)被memantine激活。在體內(nèi)容易獲得的10-7M濃度下已顯示了這一點(diǎn)。通過(guò)加入Fe3+(其通過(guò)Haber-Weiβ反應(yīng)使反應(yīng)平衡從超氧化物和過(guò)氧化氫移至OH基團(tuán)的方向)可以使活化作用可視化。這一類(lèi)型的氧種類(lèi)的一種靈敏指示劑是KMB(a-酮基-g-甲基硫代丁酸酯)，其中其在氧化條件下分解成乙烯，并且可以容易地被檢測(cè)[圖7]。
作為對(duì)照，圖8顯示KMB-反應(yīng)(但不是ACC-反應(yīng))首先由加入＞5×10-4M的Fe3+所刺激。Fe3+單獨(dú)無(wú)影響。
權(quán)利要求
1.具有式(I)的氨基金剛烷類(lèi)化合物在調(diào)節(jié)已活化的中性白細(xì)胞活性上的用途
其中R1、R2、R3和R4各自分別選自-NR5R6、-NR5R6R7+、氫、具有多達(dá)7元環(huán)的芳基或雜芳基、C1-C20-烷基、C1-C20-鏈烯基和C1-C20-炔基，其中所說(shuō)的烷基、鏈烯基和炔基殘基可以是有支鏈的、無(wú)支鏈的或環(huán)狀的，并且可以是由或未由鹵素、具有多達(dá)7元環(huán)的芳基或雜芳基取代的，前提是殘基R1、R2、R3和R4的至少一個(gè)代表-NR5R6或-NR5R6R7；同時(shí)R5、R6和R7各自分別選自氫、具有多達(dá)7元環(huán)的芳基或雜芳基、C1-C20-烷基、C1-C20-鏈烯基和C1-C20-炔基，其中所說(shuō)的烷基、鏈烯基和炔基殘基可以是有支鏈的、無(wú)支鏈的或環(huán)狀的，并且可以是由或未由鹵素、具有多達(dá)7元環(huán)的芳基或雜芳基取代的，或者R5和R6與氮原子一道形成具有多達(dá)7元環(huán)的雜環(huán)基團(tuán)。
2.按照權(quán)利要求1的用途，其中式(I)的氨基金剛烷類(lèi)化合物選自l-氨基-3-乙基-5，7-二甲基-金剛烷，l-氨基-3-環(huán)己基-金剛烷，l-氨基-3-乙基-金剛烷，l-氨基-3，5-二甲基-金剛烷，l-氨基-3，5-二乙基-金剛烷，l-N-甲氨基-3，5-二甲基-金剛烷，l-N-乙氨基-3，5-二甲基-金剛烷。
3.按照權(quán)利要求1或2的用途，其中中性白細(xì)胞的活性由濃度從10-6至10-5的式(I)的氨基金剛烷類(lèi)化合物提高。
4.按照權(quán)利要求1或2的用途，其中中性白細(xì)胞的活性由濃度從10-4至10-2的式(I)的氨基金剛烷類(lèi)化合物降低。
5.按照權(quán)利要求1-4之任一的用途，其是在體外調(diào)節(jié)中性白細(xì)胞活性上的用途。
6.按照權(quán)利要求3的用途，其是在治療CGD(agranulomatosis)、韋格內(nèi)氏肉芽腫病和/或免疫缺損病，尤其是愛(ài)滋病上的用途。
7.按照權(quán)利要求4的用途，其是在治療慢性或急性炎癥，過(guò)敏反應(yīng)，自身免疫病以及寄生蟲(chóng)病，尤其是利什曼屬病上的用途。
8.具有式(I)的氨基金剛烷類(lèi)化合物在生產(chǎn)用于調(diào)節(jié)已活化的中性白細(xì)胞活性之藥物上的用途
其中R1、R2、R3和R4各自分別選自-NR5R6、-NR5R6R7+、氫、具有多達(dá)7元環(huán)的芳基或雜芳基、C1-C20-烷基、C1-C20-鏈烯基和C1-C20-炔基，其中所說(shuō)的烷基、鏈烯基和炔基殘基可以是有支鏈的、無(wú)支鏈的或環(huán)狀的，并且可以是由或未由鹵素、具有多達(dá)7元環(huán)的芳基或雜芳基取代的，前提是殘基R1、R2、R3和R4的至少一個(gè)代表-NR5R6或-NR5R6R7；同時(shí)R5、Rg和R7各自分別選自氫、具有多達(dá)7元環(huán)的芳基或雜芳基、C1-C20-烷基、C1-C20-鏈烯基和C1-C20-炔基，其中所說(shuō)的烷基、鏈烯基和炔基殘基可以是有支鏈的、無(wú)支鏈的或環(huán)狀的，并且可以是由或未由鹵素、具有多達(dá)7元環(huán)的芳基或雜芳基取代的，或者R5和R6與氮原子一道形成具有多達(dá)7元環(huán)的雜環(huán)基團(tuán)。
9.按照權(quán)利要求8的用途，其中所說(shuō)的藥物還含有中性白細(xì)胞的激活物。
10.具有式(I)的氨基金剛烷類(lèi)化合物在與激活物一道體內(nèi)或體外增強(qiáng)，特異性活化中性白細(xì)胞上的用途
其中R1、R2、R3和R4各自分別選自-NR5R6、-NR5R6R7+、氫、具有多達(dá)7元環(huán)的芳基或雜芳基、C1-C20-烷基、C1-C20-鏈烯基和C1-C20-炔基，其中所說(shuō)的烷基、鏈烯基和炔基殘基可以是有支鏈的、無(wú)支鏈的或環(huán)狀的，并且可以是由或未由鹵素、具有多達(dá)7元環(huán)的芳基或雜芳基取代的，前提是殘基R1、R2、R3和R4的至少一個(gè)代表-NR5R6或-NR5R6R7；同時(shí)R5、Rg和R7各自分別選自氫、具有多達(dá)7元環(huán)的芳基或雜芳基、C1-C20-烷基、C1-C20-鏈烯基和C1-C20-炔基，其中所說(shuō)的烷基、鏈烯基和炔基殘基可以是有支鏈的、無(wú)支鏈的或環(huán)狀的，并且可以是由或未由鹵素、具有多達(dá)7元環(huán)的芳基或雜芳基取代的，或者R5和R6與氮原子一道形成具有多達(dá)7元環(huán)的雜環(huán)基團(tuán)。
11.按照權(quán)利要求10的用途，其是在檢測(cè)樣品中中性白細(xì)胞的方法上的用途。
12.按照權(quán)利要求9或10的用途，其中所說(shuō)的激活物選自酵母聚糖，N-甲酰基-Met-Leu-Phe和A 23187。
全文摘要
氨基金剛烷類(lèi)化合物可以用于體內(nèi)或體外調(diào)控和/或調(diào)節(jié)事先活化的中性白細(xì)胞的活性。由此,低的濃度范圍起到提高活性的作用,而較高的濃度范圍起到降低活性的作用。
文檔編號(hào)A61P33/02GK1198669SQ96197347
公開(kāi)日1998年11月11日 申請(qǐng)日期1996年8月21日 優(yōu)先權(quán)日1995年8月25日
發(fā)明者E·F·艾爾斯特內(nèi) 申請(qǐng)人:莫茨股份公司