專利名稱：：多氟烷基色氨酸三肽凝血酶抑制劑的制作方法在藥物治療中，例如，急性深度靜脈血栓形成，肺栓塞形成，末端急性動(dòng)脈栓塞形成，心肌梗塞形成，中風(fēng)，心瓣再狹窄和播散型血管內(nèi)凝固，抗凝劑是有用的治療劑。進(jìn)行抗凝劑的預(yù)防性給藥被認(rèn)為可以預(yù)防患有風(fēng)濕性或動(dòng)脈硬化心臟病的患者栓塞復(fù)發(fā)，并預(yù)防外科手術(shù)產(chǎn)生的某些血栓栓塞并發(fā)癥。給予抗凝劑還被用于治療冠狀動(dòng)脈和腦血管疾病。動(dòng)脈血栓形成，特別是在給心肌和腦供血的動(dòng)脈中的血栓是導(dǎo)致死亡的原因。目前用于治療和預(yù)防血栓形成疾病的方法包括抑制凝血酶活性或抑制凝血酶形成，進(jìn)而防止凝血塊的形成。在現(xiàn)有技術(shù)中已知(D)-Phe-Pro-Arg三肽是凝血酶催化部位的抑制劑。美國專利5,391,705描述了既抑制凝血酶又抑制胰蛋白酶的多氟化三肽。此外，PCT專利申請公開WO94/25051描述了凝血酶抑制劑，其中的精氨酸被氨基環(huán)己基部分替代。但是，現(xiàn)有技術(shù)沒有明確說明當(dāng)色氨酸在酶識(shí)別部位的P1位置被精氨酸取代時(shí)，這些三肽將保留抗凝血酶活性。申請人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)色氨酸在已知的五氟乙基取代的三肽的P1位置被精氨酸或精氨酸衍生物取代時(shí)，不僅觀察到抗凝血酶活性，而且得到對其它蛋白酶如胰蛋白高選擇性地抑制凝血酶的抑制劑。這類新化合物可作為有用的替代品或作為已知凝血酶抑制劑的輔助治療藥物而用于血液儲(chǔ)存期間防止血液凝固和防止其它生物樣品在試驗(yàn)和儲(chǔ)存時(shí)凝固。本發(fā)明涉及下式新化合物，其中A是苯基或環(huán)己基；B是下列基團(tuán)X是-CF3，-CF2CF3，-CF2(CH2)tCH3，-CF2(CH2)tCOOR1，-CF2(CH2)tCONHR1，-CF2(CH2)tCH2OR1或-CF2(CH2)vCH＝CH2；R是H或-CH3；R1是H或C1-6烷基；n是0或1；t是整數(shù)2，3或4；v是整數(shù)1，2或3；或其立體異構(gòu)體或混合物，或其水合物或可藥用鹽；以及作為凝血酶抑制劑在治療或預(yù)防冠狀動(dòng)脈和腦血管疾病，深度靜脈血栓形成，肺栓塞形成，中風(fēng)(起因于血栓或栓塞形成)，心肌梗塞形成，不穩(wěn)定或難以治愈的心絞痛，血管形成術(shù)之后的冠狀血栓形成，心瓣再狹窄，以及防止儲(chǔ)存的血液凝固等方面的用途。用于本申請書的a)符號(hào)“”指伸向紙面外面的鍵；b)符號(hào)“”指伸向紙面背面的鍵；c)符號(hào)“”或符號(hào)“(D，L)”指立體化學(xué)結(jié)構(gòu)沒有確定的鍵。術(shù)語“C1-6烷基”指由1-6個(gè)碳原子構(gòu)成的直鏈，支鏈或環(huán)狀飽和烴基，包括甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基，異丁基，仲丁基，叔丁基，正戊基，正己基，環(huán)己基等。術(shù)語“立體異構(gòu)體”一般指僅原子的空間方位有所不同的所有異構(gòu)體，包括鏡像異構(gòu)體(對映體)，幾何(順/反)異構(gòu)體，以及多于一個(gè)手性中心且彼此不成鏡像的化合物的異構(gòu)體(非對映體)。術(shù)語“水合物”指可以二羥基亞甲基形式存在的本發(fā)明化合物的酮。術(shù)語“可藥用鹽”表示可以使用的式(I)或(IA)化合物的任何無毒的有機(jī)或無機(jī)鹽。可以形成適當(dāng)鹽的無機(jī)酸例子包括鹽酸，氫溴酸，硫酸和磷酸，酸金屬鹽，如正磷酸一氫鈉和硫酸氫鉀?？梢孕纬蛇m當(dāng)鹽的有機(jī)酸例子包括一，二或三羧酸。這些酸的實(shí)例包括，例如，乙酸，三氟乙酸，乙醇酸，乳酸，丙酮酸，丙二酸，琥珀酸，戊二酸，富馬酸，蘋果酸，酒石酸，檸檬酸，抗壞血酸，馬來酸，羥基馬來酸，苯甲酸，羥基苯甲酸，苯基乙酸，肉桂酸，水楊酸，2-苯氧基苯甲酸和磺酸如甲磺酸和2-羥基乙磺酸。這些鹽既可以水合物形式也可以基本無水的形式存在。在整個(gè)說明書中使用了下列氨基酸，氨基和羧基末端基團(tuán)的縮寫，如表1所示。表1Gly(或G)-甘氨酸Ala(或A)-丙氨酸Val(或V)-纈氨酸Leu(或L)-亮氨酸Ile(或I)-異亮氨酸Pro(或P)-脯氨酸Phe(或F)-苯丙氨酸Trp(或W)-色氨酸Ser(或S)-絲氨酸Met(或M)-甲硫氨酸Thr(或T)-蘇氨酸Cys(或C)-半胱氨酸Tyr(或Y)-酪氨酸Gln(或Q)-谷氨酰胺Asn(或N)-天冬酰胺Asp(或D)-天冬氨酸Glu(或E)-谷氨酸Lys(或K)-賴氨酸Arg(或R)-精氨酸His(或H)-組氨酸Cha-環(huán)己基丙氨酸Phg-苯基甘氨酸Chg-環(huán)己基甘氨酸Tic-四氫異喹啉羧酸Pip-2-哌啶酸Orn-鳥氨酸Boc-叔丁氧羰基Bzl-芐基Cbz-芐氧羰基Ac-乙酰基Suc-琥珀?；鵓AM-苯基乙酰氨基甲基除了甘氨酸，天然氨基酸都有手性碳原子。除非另有特別說明，優(yōu)選化合物L(fēng)構(gòu)型的光學(xué)活性氨基酸，除非另有說明，優(yōu)選P3部分，如式I中的Phe，Cha，Phg或Chg部分，是D構(gòu)型的化合物。關(guān)于式I和IA化合物，P1-α-氨基酸殘基(色氨酸)可以是D-或L-構(gòu)型，或它們的混合物，P2-α-氨基酸殘基(脯氨酸)優(yōu)選為L-構(gòu)型。類似地，P3部分的α-氨基酸殘基(即苯基丙氨酸，環(huán)己基丙氨酸等)優(yōu)選為D-構(gòu)型，優(yōu)選的殘基是Phe或Cha，最優(yōu)選的取代基是Phe。在式IA化合物中，P3部分(取代基“B”)是被稱作“TIC”或“類TIC”衍生物(表達(dá)“TIC”是從四氫異喹啉羧酸衍生的)。在這種情況下，P3氮原子和P3-α-碳原子形成的雙環(huán)TIC部分有下列結(jié)構(gòu)其中(2a)和(2b)代表1，2，3，4-四氫異喹啉部分，(2’a)和(2’b)代表1，2，3，4-十氫異喹啉部分，(2c)和(2’c)分別代表2，3-二氫-1H-異吲哚基和八氫-1H-異吲哚基部分。為方便起見，這里所說部分也可以指“類TIC修飾”。總之，式(I)和(IA)化合物可以用現(xiàn)有技術(shù)中已知的類似標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)反應(yīng)制備。例如，其中X是-CF2CF3的式(I)化合物可以按路線A所述制備，路線A中所用起始原料，試劑，技術(shù)和方法都是眾所周知的，并且對于本領(lǐng)域任何普通技術(shù)人員是可以理解的。路線A路線A提供了制備其中X是-CF2CF3的式(I)化合物的一般合成方法，其中A和n定義如上，Pg是指適宜的N-保護(hù)基，包括叔丁氧羰基(Boc)，芐氧羰基(Cbz)，叔丁基二甲基甲硅烷基(TBDMS)，叔丁基二苯基甲硅烷基(TBDPS)等等，其中優(yōu)選叔丁氧羰基(Boc)。在路線A步驟a中，保護(hù)的氨基酸酯3被轉(zhuǎn)化成保護(hù)的五氟乙基酮4并形成副產(chǎn)物5。例如，通過保護(hù)的氨基酸酯3與3-6摩爾當(dāng)量五氟乙基鋰(可用類似P.G.Gassman和N.J.O’Reilly，《有機(jī)化學(xué)雜志》(J.Org.Chem.)，52，2481-2490(1987)公開的方法由五氟乙基碘和甲基鋰·溴化鋰復(fù)合物當(dāng)場制備)反應(yīng)。該反應(yīng)通常在適當(dāng)?shù)臒o水溶劑如乙醚，或混合無水溶劑混合物如乙醚-甲苯(9∶1)中進(jìn)行。反應(yīng)在-30--80℃溫度，優(yōu)選-50--65℃進(jìn)行。可用本領(lǐng)域熟知的萃取和蒸發(fā)方法從反應(yīng)物中分離出保護(hù)的五氟乙基酮4?？捎帽绢I(lǐng)域熟知的技術(shù)純化產(chǎn)物，如色譜法和重結(jié)晶法?；蛘撸肕.R.Angelastro，J.P.Burkhart，P.Bey，N.P.Peet，《四面體通訊》(TetrahedronLetters)，33，3265-3268(1992)所述典型方法將保護(hù)的異羥肟鹽類物質(zhì)3轉(zhuǎn)化成保護(hù)的五氟乙基酮4。在路線A步驟b中，在本領(lǐng)域已知的，如T.H.Green的《有機(jī)合成中的保護(hù)基》(ProtectionGroupsinOrganicSynthesis)，JohnWileyandSons，第7章(1981)中所述的條件下，將保護(hù)的五氟乙基酮4的α-胺部分脫保護(hù)，并保留4的氨基酸側(cè)鏈功能團(tuán)的保護(hù)，得到α-胺脫保護(hù)的五氟乙基酮6。例如，可以將雙-Boc-保護(hù)的五氟乙基酮4與適當(dāng)?shù)乃崛琨}酸在適當(dāng)醚溶劑如二噁烷等存在下反應(yīng)，得到α-胺脫保護(hù)的五氟乙基酮6。然后用本領(lǐng)域已知技術(shù)將產(chǎn)物6分離和純化。在路線A步驟c中，采用標(biāo)準(zhǔn)肽偶合技術(shù)將α-胺脫保護(hù)的五氟乙基酮6與下式化合物偶合，其中所有取代基定義如上。例如，在普通肽合成中，通過N-端殘基的α-胺脫保護(hù)和用所述方法通過肽鏈偶合下一個(gè)適當(dāng)N-保護(hù)的氨基酸使肽被加長。重復(fù)脫保護(hù)和偶合過程直到得到所需的系列。該偶合過程可以用組分氨基酸分步或片斷縮合的形式進(jìn)行，也可以結(jié)合兩種方法進(jìn)行，或者用最初由Merrifield，《美國化學(xué)會(huì)志》(J.Am.Chem.Soc.)，1963，85，2149-2154所述的方法進(jìn)行固相肽合成法進(jìn)行，該文獻(xiàn)在此全部引作參考。如果采用固相合成法，C-端羧酸被連接到不溶性載體(通常是聚苯乙烯)上。這些不溶性載體形成一個(gè)可以起穩(wěn)定加長作用但以后又很容易裂解的鍵。這種載體的實(shí)例有氯-或溴甲基樹脂，羥甲基樹脂和氨基甲基樹脂。這些樹脂中很多是商品，并且?guī)в兴腃-端氨基酸。除了上述方法之外，在下列文獻(xiàn)中也有關(guān)于肽合成的描述，這些文獻(xiàn)在此一并引作參考Stewart和Young，《固相肽合成》(SolidPhasePeptideSynthesis)，第二版，PierceChemicalCo.，Rockford，IL(1984)；Gross，Meienhofer，Udenfriend，Eds.，《肽分析，合成，生物學(xué)》(ThePeptidesAnalysis，Synthesis，Biology)，第1，2，3，5和9卷，AcademicPress，NewYork，1980-1987；Bodanszky，《肽化學(xué)實(shí)踐課本》(PeptideChemistryAPracticalTextbook)，Springer-Verlag，NewYork(1988)；及Bodanszky等人，《肽合成應(yīng)用》(PracticeofPeptideSynthesis)，Springer-Verlag，NewYork(1984)。兩個(gè)氨基酸，氨基酸和肽或兩個(gè)肽片斷之間的偶合可用標(biāo)準(zhǔn)偶合方法進(jìn)行如疊氮化方法，混合的碳-羧酸酐(氯甲酸異丁酯)方法，碳化二亞胺(二環(huán)己基碳化二亞胺，二異丙基碳化二亞胺或水溶性碳化二亞胺)方法，活性酯(對-硝基苯基酯，N-羥基-琥珀亞氨酸酯)方法，Woodward試劑K方法，羰基二咪唑方法，磷試劑如BOP-Cl或氧化還原方法進(jìn)行。這些方法中有些方法(尤其是碳化二亞胺方法)可以通過加入1-羥基苯并三唑被改進(jìn)。這些偶合反應(yīng)可以用溶液(液相)或固相技術(shù)實(shí)現(xiàn)。在偶合反應(yīng)期間組成氨基酸的功能團(tuán)通常必須加以保護(hù)以避免形成不需要的鍵。可用的保護(hù)基列于下列文獻(xiàn)Green，《有機(jī)化學(xué)中的保護(hù)基》(ProtectiveGroupsinOrganicChemstry)，JohnWiley&Sons，NewYork(1981)和，《肽分析，合成，生物學(xué)》(ThePeptidesAnalysis，Synthesis，Biology)，第3卷，AcademicPress，NewYork，1981，所說文獻(xiàn)在此一并引作參考。C-端殘基的α-羧基通常用酯保護(hù)，將該酯裂解可以得到羧酸?？捎玫谋Ｗo(hù)基包括1)烷基酯如甲基和叔丁基酯；2)芳基酯如芐基和取代的芐基酯；或3)可以通過中等強(qiáng)度的堿處理或中度還原方法裂解的酯如三氯乙基和苯甲酰甲基酯。每個(gè)要偶合成更長肽鏈的α-氨基必須被保護(hù)。任何本領(lǐng)域已知的保護(hù)基都可以使用。這些保護(hù)基的實(shí)例包括1)?；?，如甲?；?，三氟乙?；?，鄰苯二甲?；蛯?甲苯磺酰基；2)芳族氨基甲酸酯類，如芐氧羰基(Cbz或Z)和取代的芐氧羰基，1-(對-二苯基)-1-甲基乙氧基-羰基和9-芴基甲氧羰基(Fmoc)；3)脂族氨基甲酸酯類，如叔丁氧羰基(Boc)，乙氧羰基，二異丙基-甲氧羰基和烯丙氧羰基；4)環(huán)烷基氨基甲酸酯類，如環(huán)戊氧羰基和金剛烷氧基羰基；5)烷基類，如三苯基甲基和芐基；6)三烷基甲硅烷，如三甲基甲硅烷；及7)含硫醇類，苯基硫代羰基和二噻(dithia)琥珀酰基。優(yōu)選的α-氨基保護(hù)基是Boc，Cbz或Fmoc，更優(yōu)選Boc。在肽合成中許多適合于保護(hù)的氨基酸衍生物都是商品。新加的氨基酸殘基的α-氨基保護(hù)基在下一個(gè)氨基酸偶合之前被裂解，這些保護(hù)基被裂解的條件如Green，《有機(jī)化學(xué)中的保護(hù)基》(ProtectiveGroupsinOrganicChemstry)，第7章，JohnWiley&Sons，NewYork(1981)所述。如果使用Boc，所選方法是純?nèi)宜?，或在二氯甲烷中，或選擇HCl在二噁烷或乙酸乙酯中。然后，將所得銨鹽在偶合之前或當(dāng)場用堿溶液如緩沖水溶液，或叔胺的二氯甲烷或叔胺的二甲基甲酰胺中和。如果使用Fmoc，所選的試劑是哌啶或取代的哌啶的二甲基甲酰胺，但任何仲胺或堿性水溶液也可以使用。脫保護(hù)反應(yīng)在0℃至室溫進(jìn)行。在用任何上述基團(tuán)制備肽期間任何帶側(cè)鏈功能團(tuán)的氨基酸都必須進(jìn)行保護(hù)。本領(lǐng)域的技術(shù)人員都能理解適于這些側(cè)鏈功能團(tuán)的保護(hù)基的選擇和使用取決于氨基酸和肽中是否存在其它保護(hù)基。這種保護(hù)基的選擇的重要性在于它們必須在脫保護(hù)時(shí)和α-氨基偶合時(shí)不被除去。例如，當(dāng)用Boc作為α-氨基保護(hù)基時(shí)，可用芐基(Bn)醚保護(hù)含有羥基的氨基酸側(cè)鏈如Tyr，Ser或Thr。如果采用固相合成，肽從樹脂上裂解通常與除去保護(hù)基同時(shí)發(fā)生。如果合成中采用Boc保護(hù)方案，從樹脂裂解肽的優(yōu)選方法是在0℃用含有添加劑如二甲硫醚，茴香醚，茴香硫醚或?qū)?甲苯酚的無水HF處理。肽的裂解也可以用其它酸試劑如三氟甲磺酸/三氟乙酸混合物實(shí)現(xiàn)。如果使用Fmoc保護(hù)方案，N-端Fmoc基團(tuán)可用前面所述試劑裂解。從樹脂裂解其它保護(hù)基和肽可用三氟乙酸溶液和多種添加劑如茴香醚等。更具體地，在路線A步驟c中，將結(jié)構(gòu)6a的適當(dāng)保護(hù)的二肽在惰性氣體如氮?dú)庀氯芙庥谶m當(dāng)有機(jī)溶劑。乙酸乙酯是這種偶合反應(yīng)的優(yōu)選溶劑。然后，用1-4當(dāng)量的適當(dāng)?shù)陌诽幚碓撊芤骸＿m當(dāng)?shù)陌返膶?shí)例是有機(jī)叔胺如三-(低級(jí)烷基)胺，例如，三乙胺；或芳族胺如甲基吡啶，可力丁和吡啶。如果使用吡啶，甲基吡啶或可力丁，可大大過量使用它們，并將它們用作反應(yīng)溶劑。特別適合偶合反應(yīng)的是N-甲基嗎啉(NMM)。然后，將溶液冷卻至約-20℃并加入一當(dāng)量氯甲酸異丁酯。將反應(yīng)物攪拌約10-30分鐘并加入1-1.1當(dāng)量α-胺脫保護(hù)五氟乙基丙酮6。在約-20℃攪拌30分鐘至2小時(shí)，然后升至室溫，再攪拌1-3小時(shí)。然后用本領(lǐng)域已知技術(shù)如萃取和快速色譜技術(shù)分離并純化結(jié)構(gòu)7偶合產(chǎn)物。例如，用適當(dāng)有機(jī)溶劑如二氯甲烷稀釋反應(yīng)，用水漂洗，無水硫酸鎂干燥，過濾并真空濃縮。剩余物在硅膠上經(jīng)快速色譜純化，用適當(dāng)洗脫劑如乙酸乙酯/己烷洗脫，得到結(jié)構(gòu)7偶合產(chǎn)物。在路線A步驟d中，偶合產(chǎn)物7上的α-胺保護(hù)基(Pg)和P1氨基酸側(cè)鏈功能團(tuán)上的保護(hù)基(Pg)在本領(lǐng)域已知條件下(如T.W.Green，《有機(jī)化學(xué)中的保護(hù)基》(ProtectiveGroupsinOrganicChemstry)，第7章，1981，JohnWiley&Sons，Inc.所述)被除去，得到脫保護(hù)的肽8。例如，如果偶合產(chǎn)物7上的兩個(gè)Pg都是氨基甲酸叔丁酯(BOC)，可將化合物溶解于三氟乙酸，攪拌幾分鐘后真空濃縮。將剩余物溶解于Et2O并用己烷沉淀，得到脫保護(hù)的三肽8。色氨酸化合物的脫保護(hù)方法是本領(lǐng)域已知的，如Franzen等人，《化學(xué)會(huì)志》(J.Chem.Soc.)，1699-1700(1984)所述。在路線A步驟e中，脫保護(hù)的三肽8經(jīng)過脫羧基化反應(yīng)得到式(I)化合物。例如，將脫保護(hù)的三肽8溶解于適當(dāng)?shù)穆却鸁N溶劑如四氯化碳，二氯乙烷，二氯甲烷，氯仿，1，2，4-三氯苯，并攪拌足夠長時(shí)間如24-72小時(shí)以使脫羧基化反應(yīng)完成。可用本領(lǐng)域已知技術(shù)分離得到產(chǎn)物(I)。進(jìn)而，可用本領(lǐng)域已知的類似方法，如美國專利5,391,705(授權(quán)日1995年2月21日)所述，制備X為X’的本發(fā)明化合物，其中X’是-CF3，-CF2CF3，-CF2(CH2)tCH3，-CF2(CH2)tC(O)NHR，-CF2(CH2)tCH2OR或-CF2(CH2)vCH＝CH2。本質(zhì)上說，式(I)和(IA)氟化烷基三肽的合成依賴于2-苯基-5(4H)-噁唑酮與三氟乙酸，五氟丙酸或二氟戊酸(取決于所要的X’部分)的酸酐或酰鹵的改進(jìn)Dakin-West反應(yīng)，得到所要的被用作關(guān)鍵中間體的多氟烷基酮氨基酸衍生物。然后，經(jīng)過進(jìn)一步反應(yīng)將這些氨基酸類轉(zhuǎn)變成所需的式(I)和(IA)肽。制備X為-CF3，-CF2CF3，-CF2(CH2)tCH3，-CF2(CH2)tC(O)NHR，-CF2(CH2)tCH2OR或-CF2(CH2)vCH＝CH2的本發(fā)明化合物的通用合成方法示于路線B。除非另有說明，在本申請中，在路線B中所用起始原料和試劑都是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的和理解的。路線B路線B(續(xù))路線B(續(xù))路線B提供了制備X’為-CF3，-CF2CF3，-CF2(CH2)tCH3，-CF2(CH2)tC(O)NHR，-CF2(CH2)tCH2OR1或-CF2(CH2)vCH＝CH2的本發(fā)明化合物的通用合成方法。除非另有具體說明，路線B中的所有取代基定義如上。在路線B步驟a中，根據(jù)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的和理解的標(biāo)準(zhǔn)N-保護(hù)技術(shù)將δ-K-色氨酸9的Nα-保護(hù)，得到Nα-K-Nδ-芐氧羰基-色氨酸10，其中K為適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)基，包括芐氧羰基(Cbz)，叔丁基二甲基甲硅烷基(TBDMS)，叔丁基二苯基甲硅烷基(TBDPS)等，其中優(yōu)選芐氧羰基(Cbz)。例如，δ-Cbz-L-色氨酸9是用苯甲酰氯在標(biāo)準(zhǔn)Schotten-Baumann條件下進(jìn)行Nα-保護(hù)的。具體地說，是將苯甲酰氯的醚如乙醚溶液附帶氫氧化鈉用約0.5-1小時(shí)加到δ-Cbz-L-色氨酸9的氫氧化鈉溶液中，同時(shí)保持溫度在0-約5℃之間。然后，將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢杞?小時(shí)，用醚溶劑如乙醚萃取，并用濃鹽酸溶液酸化至約pH1。加水并將混合物放置約48小時(shí)。收集固體并用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的技術(shù)純化，得到Nα-苯甲?；?Nδ-芐氧羰基-色氨酸10。在路線B步驟b中，Nα-苯甲?；?Nδ-芐氧羰基-色氨酸10被環(huán)化，得到2-苯基-5(4H)-噁唑酮11。例如，將Nα-苯甲?；?Nδ-芐氧羰基-色氨酸10的適當(dāng)有機(jī)溶劑如二氯甲烷的漿液與約0.1-1.0摩爾當(dāng)量的二環(huán)己基碳化二亞胺接觸。然后，將反應(yīng)混合物攪拌約2-5小時(shí)，將所得沉淀的二環(huán)己基脲副產(chǎn)物濾出并用適當(dāng)有機(jī)溶劑如二氯甲烷洗滌。濃縮濾液，用適當(dāng)醚溶劑如乙醚稀釋，可任意重復(fù)該過程。然后用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的技術(shù)如沉淀和結(jié)晶法分離和純化環(huán)化產(chǎn)物2-苯基-5(4H)-噁唑酮11。在路線B步驟c中，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)?；夹g(shù)?；?-苯基-5(4H)-噁唑酮11，得到相應(yīng)的結(jié)構(gòu)12的O-?；衔铩＠?，在約-10℃至約10℃的溫度范圍內(nèi)和惰性氣體，優(yōu)選氮?dú)庵?，將適當(dāng)叔胺如三乙胺加到在適當(dāng)溶劑如四氫呋喃或四氫呋喃/庚烷混合物中的2-苯基-5(4H)-噁唑酮11溶液中。將在適當(dāng)有機(jī)溶劑如庚烷中的適當(dāng)酰鹵或相應(yīng)的酸酐，如α，α-二氟戊酰氯，三氟乙酸酐，五氟丙酸酐等溶液緩慢加到反應(yīng)混合物中，同時(shí)保持反應(yīng)溫度在約-10-10℃。約30-60分鐘后讓反應(yīng)混合物升至室溫并再攪拌約30分鐘。用本領(lǐng)域熟知的萃取技術(shù)如過濾除去三乙胺鹽酸鹽，濃縮濾液，得到相應(yīng)的結(jié)構(gòu)12的O-?；衔?。在路線B步驟d中，相應(yīng)的結(jié)構(gòu)12的O-酰基化合物任意與?；呋瘎┓磻?yīng)，得到相應(yīng)的結(jié)構(gòu)13的C-酰基化合物。例如，將相應(yīng)的結(jié)構(gòu)12的O-?；衔锶芙庥谶m當(dāng)有機(jī)溶劑如四氫呋喃中，并與酰基化催化劑如二烷基氨基吡啶，優(yōu)選4-二甲基氨基吡啶(DMAP)接觸。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢杓s2-4小時(shí)，得到無需進(jìn)一步分離或純化即可使用的結(jié)構(gòu)13的C-?；衔?。在路線B步驟e中，結(jié)構(gòu)13的C-?；衔锱c脫羧基化劑如草酸和琥珀酸等，優(yōu)選草酸進(jìn)行脫羧基化，得到所需的結(jié)構(gòu)14的脫羧基化氟化化合物，為酮和其水合物形式的混合物。例如，將在適當(dāng)有機(jī)溶劑如四氫呋喃中含有1-5摩爾當(dāng)量無水草酸溶液加到路線B步驟d得到的含有結(jié)構(gòu)13的C-?；衔锏姆磻?yīng)混合物中，并保持?jǐn)嚢?6-32小時(shí)。然后，將反應(yīng)混合物濃縮并用適當(dāng)酸如鹽酸處理，乙酸乙酯萃取。分離兩相，有機(jī)相用適當(dāng)堿如碳酸鈉，碳酸氫鈉或氫氧化鈉洗滌，任意用鹽水洗滌，用適當(dāng)干燥劑如硫酸鎂干燥并濃縮。最后，用本領(lǐng)域熟知的技術(shù)如沉淀和結(jié)晶法分離和純化脫羧基化產(chǎn)物14。在路線B步驟f中，結(jié)構(gòu)14的脫羧基化氟化產(chǎn)物與適當(dāng)還原劑接觸，得到結(jié)構(gòu)15的醇。正如本領(lǐng)域所熟知的和理解的，這種還原反應(yīng)得到的衍生物是立體異構(gòu)體的混合物。適當(dāng)?shù)倪€原劑是本領(lǐng)域熟知的，包括但不限于三-叔丁氧基氫化鋁鋰，硼氫化鉀，三-仲丁基硼氫化鋰，硼氫化鋰，硼氫化鈉和三乙基硼氫化鋰，其中優(yōu)選硼氫化鈉。例如，將結(jié)構(gòu)14的脫羧基化氟化產(chǎn)物與摩爾過量的適當(dāng)還原劑反應(yīng)。該反應(yīng)在適當(dāng)溶劑中進(jìn)行。進(jìn)行氫化還原反應(yīng)的適當(dāng)溶劑是本領(lǐng)域已知的，如甲苯，乙醚，甲基叔丁醚，四氫呋喃(THF)和四氫呋喃/乙醇混合物。該反應(yīng)在-78℃至約10℃的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行。還原產(chǎn)物結(jié)構(gòu)15的醇可以通過萃取從反應(yīng)物中分離，然后用本領(lǐng)域已知方法如色譜和重結(jié)晶法純化。在路線B步驟g中，結(jié)構(gòu)15的醇與適當(dāng)脫保護(hù)基如濃鹽酸接觸，并加熱到約100-110℃，得到結(jié)構(gòu)16的脫保護(hù)醇。例如，將結(jié)構(gòu)15的醇的6N鹽酸水溶液加熱回流(約110℃)約15-20小時(shí)。然后，將反應(yīng)混合物冷卻并濾除苯甲酸晶體。用乙醚萃取濾液，然后分離兩相。水相用活性炭處理并加熱，然后過濾，濃縮和干燥，得到結(jié)構(gòu)16的脫保護(hù)醇產(chǎn)物。在需要制備其中X是-CF2(CH2)2CH3的化合物的具體實(shí)例中，用來制備結(jié)構(gòu)12化合物的酸酐或酰鹵反應(yīng)物會(huì)帶有-CF2CH2CH＝CH2部分。因此，結(jié)構(gòu)15的醇也會(huì)帶有-CF2CH2CH＝CH2部分，它可以在脫保護(hù)反應(yīng)之前與亞烷基還原劑反應(yīng)得到結(jié)構(gòu)16的脫保護(hù)醇。適當(dāng)?shù)膩喭榛€原劑包括二甲硼烷，二異烷基甲硼烷，甲硼烷/叔胺復(fù)合物和在氫化催化劑中存在的氫。最優(yōu)選的亞烷基還原劑是在氫化催化劑中存在的氫。氫化催化劑的實(shí)例包括鉑，鈀，銠，釕和鎳。精細(xì)分散的固體或吸附在惰性載體如炭或氧化鋁上的金屬和這些金屬的某些可溶性復(fù)合物都表現(xiàn)出催化活性。例如，將其中X是-CF2CH2CH＝CH2的結(jié)構(gòu)15的醇溶解于適當(dāng)醇如異丙醇和適當(dāng)酸如鹽酸中，然后用亞烷基還原劑如吸附在惰性炭載體上的二氫氧化鈀處理溶液，并在氫氣(40-60psi)中搖動(dòng)約20-30小時(shí)。過濾反應(yīng)混合物并濃縮，得到Nα-苯甲?；?二氟醇，鹽酸鹽。將Nα-苯甲?；?二氟醇，鹽酸鹽與適當(dāng)脫保護(hù)劑如鹽酸反應(yīng)并加熱回流。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫并過濾，用乙醚萃取濾液并分離各相。水相用活性炭處理，加熱，過濾及濃縮，得到結(jié)構(gòu)16的適當(dāng)脫保護(hù)醇。在其中R3是-CF2(CH2)tCH3(t是整數(shù)3或4)的具體實(shí)例中相應(yīng)的烯烴(如-CF2CH2CH＝CH2-CH3或-CF2CH2CH＝CHCH2CH3)會(huì)被還原。為了制備后面那些烯烴，起始原料酰鹵或酸酐可用R.W.Lang等人，《四面體通訊》(TetrahedronLetters)，29，3291(1988)所述方法制備。在路線B步驟h中，根據(jù)上述路線A步驟c中的標(biāo)準(zhǔn)肽偶合技術(shù)，結(jié)構(gòu)16的適當(dāng)脫保護(hù)醇與6a化合物偶合，得到結(jié)構(gòu)17的三肽醇。在路線B步驟i中，結(jié)構(gòu)17的三肽醇與適當(dāng)氧化劑反應(yīng)，得到結(jié)構(gòu)18的N-端保護(hù)的三肽。例如，將結(jié)構(gòu)17的三肽醇與適當(dāng)氧化劑如Dess-Martinperiodinane，鉻酐吡啶復(fù)合物，二鉻酸吡啶鎓，或二甲亞砜復(fù)合物如DMSO-(COCl)2反應(yīng)(Swern條件)，用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟悉和理解的標(biāo)準(zhǔn)氧化技術(shù)得到結(jié)構(gòu)18的N-端保護(hù)的三肽。標(biāo)準(zhǔn)氧化技術(shù)包括如Swern氧化方法，《合成》(Synthesis)，165(1981)；Dess-Martinperiodinane的用途，Dess-Martin，《有機(jī)化學(xué)雜志》(J.Org.Chem.)，48，4155(1983)；以及Johns氧化方法(見美國專利5,391,705)；其中Swern氧化方法是最優(yōu)選的。例如，將約1.5當(dāng)量草酰氯溶解于適當(dāng)無水有機(jī)溶劑如二氯甲烷，并冷卻到約-55℃至約-78℃。向溶液中滴加約3-8當(dāng)量甲基亞砜，保持溫度在約-55℃以下。將1當(dāng)量結(jié)構(gòu)17的三肽醇溶解于適量無水有機(jī)溶劑如二氯甲烷，并在攪拌的同時(shí)慢慢加到反應(yīng)中。添加完成后將反應(yīng)物在約-55℃至約-78℃攪拌約30分鐘，加入過量的適當(dāng)有機(jī)堿如三乙胺或N-甲基嗎啉，并讓反應(yīng)升至室溫。然后，用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的技術(shù)如萃取，沉淀，結(jié)晶和色譜技術(shù)分離和純化氧化產(chǎn)物結(jié)構(gòu)18的N-端保護(hù)的三肽。在路線B步驟j中，根據(jù)路線B步驟g所述方法將結(jié)構(gòu)18的N-端保護(hù)的三肽脫保護(hù)，得到所要的式(I)化合物。在其中X是-CF2(CH2)tCOOR1的具體情況下，可以使用路線C反應(yīng)制備必要的中間體(對應(yīng)于結(jié)構(gòu)16化合物，但其中所要的X部分是-CF2(CH2)tCOOR1)。路線C中間體19在D.Ranganathan等人，《化學(xué)研究摘要》(J.Chem.Res.Synop.)，3，78(1983)和D.Ranganathan等人，《有機(jī)化學(xué)雜志》(J.Org.Chem.)，45，1185(1980)中公開。可通過乙酸溴二氟乙酯[見R.H.Abeles和C.P.Govardham，《生物化學(xué)和生物物理學(xué)紀(jì)要》(ArchivesofBiochemistryandBiophysics)，280，137(1990)]與適當(dāng)醛在Reformatsky條件下反應(yīng)生成相應(yīng)的二氟醇來制備反應(yīng)物20。將二氟醇20和結(jié)構(gòu)19的中間體與碳酸鉀在適當(dāng)有機(jī)溶劑如四氫呋喃中，用本領(lǐng)域熟知的技術(shù)和條件縮合，生成結(jié)構(gòu)21的硝基醇中間體。然后，用催化氫化反應(yīng)還原結(jié)構(gòu)21的硝基醇中間體，得到結(jié)構(gòu)22中間體。然后用路線B步驟i和i所述方法處理與結(jié)構(gòu)16結(jié)合的結(jié)構(gòu)22中間體，得到所要的X是-CF2(CH2)tCOOR1的式(I)化合物。或者，用標(biāo)準(zhǔn)的和熟知的方法和技術(shù)，如Sham等人，《生物化學(xué)和生物物理學(xué)研究通訊》(Biochem.andBiophys.Res.Comm.)，175，914(1991)和美國專利5,391,705所述，對結(jié)構(gòu)19和20化合物進(jìn)行甲磺?；?，消去化和氫化作用，得到結(jié)構(gòu)22中間體。如果X是-CF2(CH2)2CH3，制備結(jié)構(gòu)12的O-硝基化合物所需要的中間體12aα，α-二氟戊酰氯可用美國專利5,391,705和路線D所述方法得到。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以很容易得到用于該方法的試劑，起始原料和技術(shù)。路線D在路線D步驟a中，可用本領(lǐng)域熟知的技術(shù)和方法如堿水解方法(美國專利5,391,705，授權(quán)日1995年2月21日)，通過α，α-二氟戊酸乙酯12b的水解制備2，2-二氟-4-戊酸12c。例如，在約-10-10℃將約1.0-1.5摩爾當(dāng)量的適當(dāng)堿如氫氧化鋰加到α，α-二氟戊酸乙酯12b，也已知稱為2，2-二氟-4-戊酸乙酯(美國專利4,847,401，授權(quán)日1989年7月11日)，水溶液中。用2-4小時(shí)時(shí)間讓反應(yīng)混合物升至室溫，然后在約40-55℃加熱2-4小時(shí)。從反應(yīng)混合物中除去乙醇和水，并通過萃取從反應(yīng)物中分離出2，2-二氟-4-戊酸12c，然后用本領(lǐng)域已知方法純化。在路線D步驟b中，將2，2-二氟-4-戊酸12c與適當(dāng)氯化劑反應(yīng)，得到2，2-二氟-4-戊酰氯12a。合適的氯化劑是可以將羥基轉(zhuǎn)化成氯基團(tuán)，并且不會(huì)使起始原料或產(chǎn)物降解的氯化劑。合適的氯化劑包括三氯化磷，亞硫酰氯，草酰氯等。例如，將2，2-二氟-4-戊酸12c與約1.0-1.5摩爾當(dāng)量的適當(dāng)氯化劑反應(yīng)。反應(yīng)在適當(dāng)溶劑如二氯甲烷，甲苯或二甲基甲酰胺中進(jìn)行。反應(yīng)在約20-35℃通常需要進(jìn)行約4-24小時(shí)。產(chǎn)物2，2-二氟-4-戊酰氯12a可以通過部分蒸餾分離，并經(jīng)過本領(lǐng)域已知技術(shù)如色譜法純化。為了制備其中X是-CF2CH3，其余所有取代基定義如上的式(IA)化路線E提供了制備其中X是-CF2CF3，其余的所有取代基定義如上的式(IA)化合物的一般合成方法。在路線E步驟a中，路線A中制備的α-胺脫保護(hù)的五氟乙基酮6與Pg-T-C(O)Pro-OH偶合，其中T是定義如上的類TIC部分并代表(2a)，(2b)，(2c)，(2’a)，(2’b)和(2’c)，形成偶合產(chǎn)物23。類TIC部分公開于美國專利5,391,705(授權(quán)日1995年2月21日)和Shuman等人，《藥物化學(xué)雜志》(J.Med.Chem.)，36，314-319(1993)，所說專利和文獻(xiàn)在此全部引作參考。該偶合反應(yīng)以完全類似于前面路線A步驟c所述的方式進(jìn)行。在路線E步驟b中，在現(xiàn)有技術(shù)已知的條件下如前面路線A步驟d和e所述條件下，偶合產(chǎn)物23被脫保護(hù)或從固相裂解出來，得到式(IA)三肽。為了制備式(IA)化合物，其中所有取代基定義如上，可以使用路線F。路線F提供了制備所有取代基定義如上的式(IA)化合物的方法。在路線F步驟a中，路線B中制備的α-胺脫保護(hù)的醇16與Pg-T-C(O)Pro-OH偶合，其中T是定義如上的類TIC部分并代表(2a)，(2b)，(2c)，(2’a)，(2’b)和(2’c)，形成偶合產(chǎn)物24。該偶合反應(yīng)以完全類似于前面路線A步驟c所述的方式進(jìn)行。在路線F步驟b中，根據(jù)路線B步驟i方法將偶合產(chǎn)物24氧化，得到結(jié)構(gòu)25的N-保護(hù)的三肽。在路線F步驟c中，根據(jù)路線B步驟j方法將結(jié)構(gòu)25的N-保護(hù)的三肽脫保護(hù)，得到所要的式(IA)化合物。N-甲基化的α-氨基酸可以按路線G和Pitzele，B.S.等人，《藥物化學(xué)雜志》(J.Med.Chem.)，37，888-896(1994)(該文獻(xiàn)在此全部引作參考)所述制備。除非另有說明，所有取代基定義如上。試劑和起始原料都是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員容易得到的。路線G在路線G步驟a中，其中W是適當(dāng)α-羧基保護(hù)基如甲酯或固相樹脂的結(jié)構(gòu)26的α-氨基酸與Pg以類似上述路線A步驟c所述方式偶合，得到偶合產(chǎn)物。在路線G步驟b中，在現(xiàn)有技術(shù)已知的條件下，偶合產(chǎn)物被脫保護(hù)或從固相裂解出來，得到結(jié)構(gòu)27的酸。例如，如果W是結(jié)構(gòu)26上的甲基或乙基，將該化合物溶解于有機(jī)溶劑如乙醇，并用約等體積的水處理。攪拌的同時(shí)向該溶液中加入1-2當(dāng)量氫氧化鋰，并攪拌1-6小時(shí)。然后，用本領(lǐng)域已知技術(shù)分離和純化所得酸。例如，真空除去有機(jī)溶劑，剩余的水溶液用稀鹽酸酸化，然后用適當(dāng)有機(jī)溶劑如乙酸乙酯萃取水相。合并的有機(jī)萃取液用無水硫酸鎂干燥，過濾并真空濃縮。剩余物在硅膠上經(jīng)快速色譜純化，用適當(dāng)洗脫劑如甲醇/氯仿洗脫，得到結(jié)構(gòu)27的酸。在路線G步驟c中，酸27被N-甲基化，得到結(jié)構(gòu)28的N-保護(hù)的N-甲基化化合物。例如，將酸27溶解于適當(dāng)有機(jī)溶劑如四氫呋喃，然后冷卻至約0℃，并用過量甲基碘處理。在溶液中加入1-3當(dāng)量氫化鈉，并在0℃攪拌約10分鐘，然后升至室溫并攪拌24-48小時(shí)。用本領(lǐng)域已知技術(shù)如萃取法分離產(chǎn)物。例如，加入稀鹽酸水溶液并用適當(dāng)有機(jī)溶劑如乙酸乙酯萃取反應(yīng)物。合并有機(jī)萃取液，分別用5％硫代硫酸鈉，鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，用硅膠墊過濾，真空濃縮，得到N-保護(hù)的N-甲基化化合物28?；蛘撸捎孟旅媛肪€G步驟d和e所述方法從結(jié)構(gòu)27的酸制備N-保護(hù)的N-甲基化化合物28。在路線G步驟d中，酸27被環(huán)化，得到由結(jié)構(gòu)27a表達(dá)的噁唑烷。例如，將酸27溶解于適當(dāng)有機(jī)溶劑如苯，用過量多甲醛處理。往其中加入約0.2-0.4當(dāng)量對-甲苯甲磺酸，并將反應(yīng)加熱回流約23小時(shí)，同時(shí)用Dean-Stark分水器不斷地除去水。將反應(yīng)冷卻至室溫，用本領(lǐng)域已知技術(shù)分離和純化產(chǎn)物。例如，將冷卻的反應(yīng)物真空濃縮，將剩余物置于適當(dāng)有機(jī)溶劑如乙酸乙酯中，用飽和碳酸氫鈉漂洗，用無水硫酸鎂干燥有機(jī)相，過濾及真空濃縮。剩余物在硅膠上進(jìn)行快速色譜純化，用適當(dāng)洗脫劑如乙酸乙酯/己烷洗脫，得到噁唑烷27a。在路線G步驟e中，在本領(lǐng)域已知的條件下噁唑烷27a被還原，得到N-保護(hù)的N-甲基化化合物28。例如，將噁唑烷27a溶解于適當(dāng)有機(jī)溶劑如氯仿，用過量三氟乙酸處理。在室溫和攪拌條件下向該溶液中加入過量三乙基甲硅烷。將反應(yīng)攪拌1-7小時(shí)，然后真空濃縮，得到N-保護(hù)的N-甲基化化合物28。下列實(shí)施例代表了路線A-G所述的具體合成方法。這些實(shí)施例應(yīng)被理解為僅用來說明而不是要以任何方式限制本發(fā)明范圍。在75MHz記錄13C的NMR譜圖，在282MHz記錄19F的NMR譜圖，在300MHz處記錄1H的NMR譜圖；19FNMR信號(hào)是由CFCl3以ppm報(bào)告的。MS和HRMS數(shù)據(jù)是在70eV記錄的數(shù)據(jù)，用計(jì)算機(jī)計(jì)算的峰與作為HRMS參考的全氟煤油匹配。TLC分析用MerckDC-F254或AnaltechGHLF硅膠板操作，同時(shí)用堿性高錳酸鹽顯色和UV照射?？焖偕V用Merck硅膠60(0.040-0.063mm)進(jìn)行。CF3CF2Li用從RichmondChemicalCompany得到的CF3CF2I按Gassman&O’Reilly，《有機(jī)化學(xué)雜志》(J.Org.Chem.)，52，2481-2490(1987)所述方法產(chǎn)生。色氨酸化合物的脫保護(hù)反應(yīng)可用類似前面Franzen等人，《化學(xué)會(huì)志》(J.Chem.Soc.)，1699-1700(1984)所述方法進(jìn)行。本文所用術(shù)語有以下涵義”g”代表克；”mmol”代表毫摩爾；”mL”代表毫升；”bp”代表沸點(diǎn)；”mp”代表熔點(diǎn)；”℃”代表攝氏度；”mmHg”代表毫米汞柱；”μL”代表微升；”μg”代表微克；及”μM”代表微摩爾。實(shí)施例11H-吲哚-1-羧酸，3-[2-[[(1，1-二甲氧基)羰基]氨基]-4，4，5，5，5-五氟-3-氧戊基]-，1，1-二甲基乙酯，(S)-，(C)和氨基甲酸，[3，3，4，4，4-五氟-1-(1H-吲哚-3-基甲基)-2-氧丁基]-，1，1-二甲基乙酯，(S)-(D)的制備路線A步驟a；氮?dú)庀孪蚶鋮s到-60℃(內(nèi)部溫度計(jì))并攪拌的Boc-Trp(Boc)-OCH3(Franzen等人，《化學(xué)會(huì)志》(J.Chem.Soc.)，1699-1700，1984)(7.15g，17.08mmol)的無水Et2O(60mL)溶液中加入濃CF3CF2I(6.85mL，58.09mmol)。以保持反應(yīng)內(nèi)部溫度在-52--62℃之間的速率加入MeLi·LiBr(37.6mL1.5M的Et2O溶液，56.36mmol)。添加完畢后在-52--62℃攪拌反應(yīng)混合物1小時(shí)。以保持反應(yīng)內(nèi)部溫度在-55℃以下的速率加入異丙醇(4.31mL，56.3mmol)淬滅反應(yīng)。允許反應(yīng)混合物溫度升至-35℃，然后將反應(yīng)混合物倒入10％KHSO4(100mL)水溶液。分離各相，有機(jī)相用10％KHSO4(50mL)水溶液和鹽水(25ml)洗滌，MgSO4干燥，過濾并濃縮，得到粗產(chǎn)物C和D?？焖偕V(7.5×19cm硅膠柱)純化，梯度洗脫(15-25％EtOAc的己烷)，得到C(5.43g，63％)為黃色泡沫和D(1.50g，22％)為淺黃色固體。化合物CTLCRf0.37(25∶75EtOAc∶己烷)；1HNMR(CDCl3，3天，只有酮，主要的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)δ8.14(brd，1H，J＝7.9Hz，H7)，7.50(ddd，1H，J＝0.8，1.1，7.8Hz，H4)，7.42(brs，1H，H2)，7.35(ddd，J＝1.3，7.4，8.4Hz，H6)，7.27(dt，J＝1.0，7.8Hz，H5)，5.15-5.05(m，1H，CH)，4.99(brd，1H，J＝7.6Hz，NH)，3.36(dd，1H，4.7，15.0Hz，1/2CH2)，3.04(dd，1H，J＝7.5，15.0Hz，1/2CH2)，1.67(s，9H，Nin-Boc)，1.38(s，9H，Boc)；19FNMR(CDCl3，3天，只有酮，主要的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)δ-82.06(s，CF3)，-120.85和-122.48(prd，J＝297Hz，CF2)；MS(CI，NH3)m/z(相對強(qiáng)度)524(100，M+NH4+)，507(3，M+)，468(30)，412(17)，230(32)，130(54).分析(C23H27F5N2O5·0.34H2O)C，H，N.化合物Dmp＝135-141℃；TLCRf0.15(25∶75EtOAc∶己烷)；1HNMR(DMSO-d6+D2O，只存在水合物類)δ7.44-7.50(m，1H)，7.32-7.26(m，1H)，7.06-6.90(m，3H)，4.15-4.08(m，0.3H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體A的CH)，3.98-3.91(m，0.7H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體B的CH)，3.16(dd，0.3H，J＝1.8，14.2Hz，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體A的1/2CH2)，3.12(dd，0.7H，J＝1.6，14.5Hz，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體B的1/2CH2)，2.75(dd，0.7H，J＝11.7，14.6Hz，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體A的1/2CH2)，1.10(s，6.3H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體B的Boc)，0.67(s，2.7H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體A的Boc)；19FNMR(DMSO-d6+D2O，只存在水合物類)δ-77.54(s，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體B的CF3)，-77.63(s，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體A的CF3)，-121.46和-123.59(prd，J＝276Hz，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體B的CF2)，-121.46和-123.35(prd，J＝276Hz，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體A的CF2)；MS(CI，NH3)m/z(相對強(qiáng)度)424(37，M+NH4+)，368(100)，130(40)；分析.(C18H19F5N2O3·0.34H2O)C，H，N.實(shí)施例21H-吲哚-1-羧酸，3-(2-氨基-4，4，5，5，5-五氟-3-氧戊基)-，1，1-二甲基乙酯，一鹽酸鹽，(S)-的制備路線A步驟b；氮?dú)庀孪驍嚢璧膶?shí)施例1得到的化合物C(1.04g，2.00mmol)的二噁烷(2.4mL)溶液中慢慢加入4.0N氯化氫的二噁烷(5.0mL)。1小時(shí)后吸濾所得懸浮液并用Et2O(3×10mL)洗滌收集的固體。高真空下用KOH粒干燥乳白色固體，得到195mg(22％)標(biāo)題化合物為酮和水合物的混合物(比例為2∶3)。由于標(biāo)題化合物的不穩(wěn)定性，須將標(biāo)題化合物立即用于下一步。合并及稀釋上面所得濾液，冷凍后得到額外的標(biāo)題化合物(571mg，64％)。1HNMR(CDCl3)δ8.79(brs)，7.99(brd，1H，J＝6.6Hz)，7.88-7.66(m)，7.51(d，0.4H，J＝7.4Hz，酮的Ar-H)，7.41(d，0.6H，J＝7.4Hz，水合物的Ar-H)，7.28-7.12(m，2H)，6.48(brs，水合物OH)，5.10-4.96(m，0.4H，酮的CH)，3.75-3.93(m，0.6H，水合物的CH)，3.63-3.10(m，2H，CH2)，1.55(s，9H，Boc)；19FNMR(CDCl3)δ-79.48(s，水合物的CF3)，-81.77(s，酮的CF3)，-119.56和-122.40(prd，J＝297Hz，酮的CF2)，-123.38(brs，水合物的CF2)；MS(CI，NH3)m/z(相對強(qiáng)度)424(21，M+NH4+)，407(42，MH+)，387(100).實(shí)施例3L-脯氨酰胺(Prolinamide)，N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-N-甲基-D-苯丙氨?；?N-[1-[[1-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-1H-吲哚-3-基]甲基]-3，3，4，4，4-五氟-2-氧丁基]-，(S)-的制備路線A步驟c；氮?dú)庀孪蚶鋮s到-18℃并攪拌的N-Boc-N-甲基-D-Phe-L-Pro-OH(Veber等人，PCT專利申請公開WO94/25051，公開于1994年11月10日)(0.15g，0.41mmol)的EtOAc(3mL)溶液中加入N-甲基嗎啉(45μL，0.41mmol)，接著加入氯甲酸異丁酯(53μL，0.41mmol)。15分鐘后再加入N-甲基嗎啉(45μL，0.41mmol)，接著加入實(shí)施例2的產(chǎn)物(0.18g，0.41mmol)。在-15--20℃攪拌反應(yīng)混合物4小時(shí)，用EtOAc(50mL)稀釋，用10％檸檬酸水溶液(2×25mL)，半飽和NaHCO3水溶液(2×15mL)和鹽水(25mL)洗滌。用MgSO4干燥后過濾并濃縮，得到粗產(chǎn)物。經(jīng)快速色譜(2.5×12cm硅膠柱)純化，EtOAc-己烷(45∶55)洗脫后，得到標(biāo)題化合物(0.16g，52％，酮和水合物的混合物)為淺黃色泡沫。TLCRf0.34(45∶55EtOAc∶己烷)；19FNMR(CDCl3)δ-79.27(s，水合物的CF3)，-82.09(s，酮的CF3)，-122.81和-124.74(prd，J＝275Hz，水合物的CF2)，-121.75至-121.90(m，酮的CF2)，酮∶水合物≈2∶3；MS(CI，NH3)m/z(相對強(qiáng)度)782(30，M+NH4+)，765(45，MH+)，205(92)，122(100)；HRMSC38H46F5N4O7(MH+)計(jì)算值765.3287，實(shí)測值765.3281.實(shí)施例4L-脯氨酰胺，N-甲基-D-苯丙氨?；?N-[1-[(1-羧基-1H-吲哚-3-基)甲基]-3，3，4，4，4-五氟-2-氧丁基]-，(S)-，單(三氟乙酸鹽)的制備路線A步驟d；氮?dú)庀孪驅(qū)嵤├?的產(chǎn)物(150mg，0.2mmol)中加入CF3CO2H(2mL)，并將所得溶液攪拌3分鐘。除去溶劑，將剩余物溶解于Et2O(3mL)，邊攪拌邊慢慢加入己烷(20mL)。在氮?dú)庀挛鼮V，得到標(biāo)題化合物(117mg，82％)為乳白色固體。該標(biāo)題化合物對脫羧基化反應(yīng)不穩(wěn)定。1HNMR(CDCl3，僅有NCH3信號(hào))δ2.44(s，3H，NCH3)；19FNMR(CDCl3)δ-82.11(s，酮的CF3)，-121.60to-122.91(m，酮的CF2)；MS(FAB，MNBA)m/z(相對強(qiáng)度)609.2(MH+，46)，565.2(MH-CO2+，81)，448.2(6)，404.2(38)，134.1(100).實(shí)施例5L-脯氨酰胺，N-甲基-D-苯丙氨?；?N-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1H-吲哚-3-基甲基)-2-氧丁基]-，單(三氟乙酸鹽)的制備路線A步驟e；將實(shí)施例4的產(chǎn)物(82mg，0.1mmol)溶解于CHCl3，并攪拌48小時(shí)。除去溶劑，將剩余物溶解于CH2Cl2-己烷，然后濃縮，得到標(biāo)題化合物(76mg，100％，DLL和DLD非對映體的1∶1混合物)為淺黃色固體。TLCRf0.66(5∶95Et3N∶CH3CN)；TLCRf0.12(5∶95Et3N∶EtOAc)；1HNMR(CDCl3)δ9.69(s，0.5H，DLL非對映體的Nin-H.)，9.26(s，0.5H，DLD非對映體的Nin-H.)，8.18(brd，0.5H，J＝6.4Hz，DLD非對映體.)，7.61-7.02(m)，5.11(dd，0.5H，J＝5.8，11.8Hz，DLD非對映體的Trp的CH.)，5.04(dt，0.5H，J＝3.6，10.9Hz，DLL非對映體的Trp的CH.)，4.54(dd，0.5H，J＝2.0，7.7Hz，DLD非對映體的Pro的CH.)，4.42(dd，0.5H，J＝1.9，7.8Hz，DLL非對映體的Pro的CH.)，4.03(dd，0.5H，J＝4.2，11.2Hz，DLD非對映體的Phe的CH.)，3.97(dd，0.5H，J＝4.4，11.3Hz，DLL非對映體的Phe的CH.)，3.5-2.9(m)，2.23(s，1.5H，DLD非對映體的NCH3.)，2.10-1.90(m)，1.93(s，1.5H，DLL非對映體的NCH3.)，1.70-1.65(m)，1.50-1.22(m)；19FNMR(CDCl3)δ-82.11(s，DLL非對映體的CF3.)，-82.34(s，DLD非對映體的CF3.)，-120.22和-123.54(prd，J＝294Hz，DLD非對映體的CF2.)，-121.92(s，DLL非對映體的CF2.)，DLD∶DLL＝1∶1；MS(CI，NH3)m/z(相對強(qiáng)度)565(MH+，100)，547(39)，436(15)，276(12)，259(8)；HRMSC28H30F5N4O3(MH+)計(jì)算值565.2238，實(shí)測值565.2253.實(shí)施例62-吡咯烷甲酰胺，N-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1H-吲哚-3-基甲基)-2-氧丁基]-1-[(1，2，3，4-四氫-3-異喹啉基)羰基]-，-[2S-[1(S*)，2R*]]-，單(三氟乙酸鹽)的制備a)Boc-D-3-Tiq-Pro-TrP(Boc)-CF2CF3的制備路線E步驟a；氮?dú)庀聦⒗鋮s到-18℃并攪拌的Boc-D-3-Tiq-Pro-OH(Neises等人，美國專利5,391,705，授權(quán)于1995年2月21日)(0.15g，0.41mmol)的EtOAc(3mL)溶液與N-甲基嗎啉(45μL，0.41mmol)接觸，接著加入氯甲酸異丁酯(53μL，0.41mmol)，然后用類似于實(shí)施例3所述方式與實(shí)施例2的產(chǎn)物(0.18g，0.41mmol)偶合，得到標(biāo)題化合物。b)D-3-Tiq-Pro-Trp(COOH)-CF2CF3，單(三氟乙酸鹽)的制備路線E步驟b；采用類似實(shí)施例4所述方法用CF3CO2H(2mL)，Et2O(3mL)和己烷(20mL)將實(shí)施例6(a)的產(chǎn)物(150mg，0.2mmol)脫保護(hù)，得到標(biāo)題化合物。c)2-吡咯烷甲酰胺，N-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1H-吲哚-3-基甲基)-2-氧丁基]-1-[(1，2，3，4-四氫-3-異喹啉基)羰基]-，-[2S-[1(S*)，2R*]]-，單(三氟乙酸鹽)的制備路線A步驟e；采用類似實(shí)施例5所述方法用CHCl3(2mL)和CH2Cl2-己烷將實(shí)施例6(b)的產(chǎn)物(82mg，0.1mmol)脫羧基化，得到標(biāo)題化合物。實(shí)施例72-吡咯烷甲酰胺，N-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1H-吲哚-3-基甲基)-2-氧丁基]-1-[(1，2，3，4-四氫-1-異喹啉基)羰基]-，-[2S-[1(S*)，2R*]]-，單(三氟乙酸鹽)的制備a)Boc-D-1-Tiq-Pro-Trp(Boc)-CF2CF3的制備路線E步驟a；氮?dú)庀聦⒗鋮s到-18℃并攪拌的Boc-D-3-Tiq-Pro-OH(Neises等人，美國專利5,391,705，授權(quán)于1995年2月21日)(0.15g，0.41mmol)的EtOAc(3mL)溶液與N-甲基嗎啉(45μL，0.41mmol)接觸，接著加入氯甲酸異丁酯(53μL，0.41mmol)，然后用類似于實(shí)施例3所述方式與實(shí)施例2的產(chǎn)物(0.18g，0.41mmol)偶合，得到標(biāo)題化合物。b)D-1-Tiq-Pro-Trp(COOH)-CF2CF3，單(三氟乙酸鹽)的制備路線E步驟b；采用類似實(shí)施例4所述方法用CF3CO2H(2mL)，Et2O(3mL)和己烷(20mL)將實(shí)施例7(a)的產(chǎn)物(150mg，0.2mmol)脫保護(hù)，得到標(biāo)題化合物。c)2-吡咯烷甲酰胺，N-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1H-吲哚-3-基甲基)-2-氧丁基]-1-[(1，2，3，4-四氫-1-異喹啉基)羰基]-，-[2S-[1(S*)，2R*]]-，單(三氟乙酸鹽)的制備路線A步驟e；采用類似實(shí)施例5所述方法用CHCl3(2mL)和CH2Cl2-己烷將實(shí)施例7(b)的產(chǎn)物(82mg，0.1mmol)脫羧基化，得到標(biāo)題化合物。實(shí)施例8L-脯氨酰胺，3-環(huán)己基-N-甲基-D-丙氨酰-N-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1H-吲哚-3-基甲基)-2-氧丁基]-，單(三氟乙酸鹽)的制備a)N-Boc-N-甲基-D-Cha-OH的制備路線G步驟c；將Boc-D-Cha-OH(10.8g，40mmol)溶解于THF(200mL)，并將溶液冷卻到0℃。用1小時(shí)時(shí)間分批加入氫化鈉(4.8g，120mmol，分散于油中占60％)，然后攪拌20分鐘。加入甲基碘(19.7mL，316mmol)，將反應(yīng)在0℃攪拌3小時(shí)，在室溫?cái)嚢柽^夜。將反應(yīng)重新冷卻到0℃并慢慢加水(100mL)。濃縮除去THF，用乙醚(2×150mL)洗滌混合物。用6NHCl將水相酸化至約pH3，然后用乙酸乙酯(4×100mL)萃取。合并有機(jī)萃取液，先后用5％硫代硫酸鈉(100mL)和鹽水(100mL)洗滌，硫酸鎂干燥，真空濃縮，得到標(biāo)題化合物。b)N-Boc-N-甲基-D-Cha-Pro-OCH3的制備路線A步驟c；將HCl·Pro-OCH3(0.33g，2.0mmol)溶解于DMF(20mL)，并將溶液冷卻到0℃。加入三乙胺(0.31mL，2.2mmol)并攪拌10分鐘。之后，加入實(shí)施例8(a)(2.0mmol，溶解于100mLTHF)，接著加入HOBt·1H2O(0.27g，2.0mmol)。將反應(yīng)在0℃攪拌3小時(shí)，在室溫?cái)嚢柽^夜。真空濃縮反應(yīng)物，將剩余物放入1NHCl(100mL)，然后用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。合并有機(jī)萃取液，先后用飽和碳酸氫鈉(100mL)和鹽水(100mL)漂洗，經(jīng)過硅膠短墊后真空濃縮。剩余物經(jīng)快速色譜純化，得到標(biāo)題化合物。c)N-Boc-N-甲基-D-Cha-Pro-OH的制備路線G步驟b；將實(shí)施例8(b)的產(chǎn)物(4.0g，10.2mmol)溶解于THF(100mL)和水(50mL)。加入氫氧化鋰一水合物(900mg，21.5mmol)，并將反應(yīng)在室溫?cái)嚢柽^夜。濃縮除去THF，然后用乙醚(2×100mL)洗滌混合物，并用6NHCl將水相酸化至約pH3。用乙酸乙酯(3×100mL)萃取酸化的水相。合并有機(jī)萃取液，用無水硫酸鎂干燥，真空濃縮濾液，得到標(biāo)題羧酸。d)N-Boc-N-甲基-D-Cha-L-Pro-Trp(Boc)-CF2CF3的制備路線A步驟c；氮?dú)庀聦⒗鋮s到-18℃并攪拌的實(shí)施例8(c)的產(chǎn)物(0.16g，0.41mmol)的EtOAc(3mL)溶液與N-甲基嗎啉(45μL，0.41mmol)接觸，接著加入氯甲酸異丁酯(53μL，0.41mmol)，然后用類似于實(shí)施例3所述方式與實(shí)施例2的產(chǎn)物(0.18g，0.41mmol)偶合，得到標(biāo)題化合物。e)N-甲基-D-Cha-L-Pro-Trp(COOH)-CF2CF3，單(三氟乙酸鹽)的制備路線A步驟d；采用類似實(shí)施例4所述方法用CF3CO2H(2mL)，Et2O(3mL)和己烷(20mL)將實(shí)施例8(d)的產(chǎn)物(154mg，2.0mmol)脫保護(hù)，得到標(biāo)題化合物。f)L-脯氨酰胺，3-環(huán)己基-N-甲基-D-丙氨酰-N-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1H-吲哚-3-基甲基)-2-氧丁基]-，單(三氟乙酸鹽)的制備路線A步驟e；采用類似實(shí)施例5所述方法用CHCl3(2mL)和CH2Cl2-己烷將實(shí)施例8(e)的產(chǎn)物(73mg，0.1mmol)脫羧基化，得到標(biāo)題化合物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明為需要的患者提供了抑制凝血酶或治療或預(yù)防凝血酶癥狀的方法，包括給他們使用治療有效量的式(I)或(IA)化合物。術(shù)語“凝血酶癥狀”指以血栓或栓塞形成為特征的疾病或癥狀，包括但不限于冠狀動(dòng)脈和腦血管疾病，深度靜脈血栓，肺栓塞形成，中風(fēng)(起因于血栓或栓塞形成)，心肌梗塞形成，不穩(wěn)定或難以治愈的心絞痛，血管形成術(shù)之后的冠狀血栓形成，心瓣再狹窄等。在這一領(lǐng)域的有經(jīng)驗(yàn)人員很容易知道需要凝血酶抑制劑和/或抗凝劑治療的情況。特別被優(yōu)選用于治療凝血酶癥狀的式(I)和(IA)化合物包括下面表5和6中公開的那些化合物。治療凝血酶癥狀最優(yōu)選的化合物是L-脯氨酰胺，N-甲基-D-苯丙氨酰基-N-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1H-吲哚-3-基甲基)-2-氧丁基]-，單(三氟乙酸鹽)。這里所用術(shù)語“患者”指溫血?jiǎng)游锶绮溉閯?dòng)物，可以理解，豚鼠，狗，貓，大鼠，小鼠，馬，牛，羊和人類都是屬于該術(shù)語范圍的哺乳動(dòng)物的代表。術(shù)語“治療有效量”指給患者進(jìn)行有效的持續(xù)灌注或單或多劑量給藥的量，以縮小血栓或栓塞的尺寸，或降低凝血酶癥狀造成危害的程度，與沒有治療預(yù)期達(dá)到的結(jié)果比較，改善了疾病和/或延緩或預(yù)防疾病的發(fā)展。術(shù)語“治療有效量”并不是指必須消除或治愈疾病。在確定治療有效量或劑量時(shí)診斷者要考慮一系列因素，包括但不限于哺乳動(dòng)物的種類；身體大小，年齡和健康狀況；所涉及的疾病種類；疾病所涉及的程度或嚴(yán)重程度；各患者的反應(yīng)；所給藥的具體化合物；給藥方式；給藥制劑的生物利用度特性；所選擇的劑量方案；所用的輔助治療方法；及其它相關(guān)情況。式(I)或(IA)化合物的治療有效量預(yù)計(jì)在約25毫克每公斤體重每天(mg/kg/day)到約200mg/kg/day范圍內(nèi)變化。優(yōu)選的量預(yù)計(jì)約為40-70mg/kg/day。對于靜脈注射，以勻速灌注時(shí)的最優(yōu)選劑量約為0.1-20mg/kg/分鐘。本發(fā)明化合物是凝血酶的選擇性抑制劑。相信，本發(fā)明化合物是通過抑制凝血酶表現(xiàn)藥理學(xué)效果，因此延緩或防止凝血酶癥狀。所說癥狀包括冠狀動(dòng)脈和腦血管疾病，深度靜脈血栓形成，肺栓塞形成，中風(fēng)(起因于血栓或栓塞形成)，心肌梗塞形成，不穩(wěn)定或難以治愈的心絞痛，血管形成術(shù)之后的冠狀血栓形成，心瓣再狹窄等。但是，應(yīng)該理解，任何具體理論或建議性機(jī)理都不能限制本發(fā)明對其在最終實(shí)際應(yīng)用中有效性的解釋。在對患有上述病癥的患者進(jìn)行有效治療時(shí)，式(I)化合物可以各種能使有效量的化合物發(fā)揮其生物利用度的形式或方式給藥，包括口服和非腸道途徑。例如，式(I)化合物可以口服，皮下，肌肉內(nèi)，靜脈內(nèi)，透皮，鼻內(nèi)，直腸，局部等方式給藥。一般優(yōu)選口服或靜脈內(nèi)給藥。制劑領(lǐng)域普通技術(shù)人員都可以根據(jù)針對所要治療的病癥所選擇的化合物的特性，疾病的階段和其它相關(guān)因素很容易地選擇合適的給藥形式和方式。Remington’sPharmaceuticalSciences，18thEdition，MackPublishingCo.(1990)。本發(fā)明化合物可以獨(dú)自或與可藥用載體或賦形劑結(jié)合構(gòu)成藥物組合物形式給藥，所用載體或賦形劑的比例和性質(zhì)取決于所用化合物的溶解性和化學(xué)性質(zhì)，所選擇的給藥途徑和標(biāo)準(zhǔn)藥物實(shí)踐。有效量的本發(fā)明化合物也可以它們的可藥用鹽形式制劑和給藥，例如，酸加成鹽。為了穩(wěn)定常采用結(jié)晶形式，以增加其溶解性等。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了含有一種或多種式(I)或(IA)化合物或與一種或多種惰性載體混合形成的組合物。這些組合物被用作，例如，測定標(biāo)準(zhǔn)，集裝箱運(yùn)輸，或無論是需要抑制血液凝固如在儲(chǔ)存整個(gè)血液時(shí)防止凝固，或在試驗(yàn)或儲(chǔ)存時(shí)防止其它生物樣品的凝固的常用物質(zhì)。因此，這些凝血酶抑制劑可加到或用到含有或懷疑含有凝血酶并需要抑制血液凝固的任何介質(zhì)中，例如，當(dāng)哺乳動(dòng)物的血液與下列物質(zhì)接觸時(shí)需要用到血管移植物，斯坦特印模，整形外科修復(fù)替代物，心臟修復(fù)替代物和體外循環(huán)系統(tǒng)。式(I)或(IA)化合物抗凝劑的用量是維持血液為液體狀態(tài)的量。式(I)或(IA)化合物抗凝劑的用量一般約為45-1000μM，優(yōu)選的式(I)或(IA)化合物抗凝劑的用量約為90-300μM。惰性載體可以是不降解并且不與式(I)或(IA)化合物發(fā)生共價(jià)反應(yīng)的任何物質(zhì)。合適的惰性載體的實(shí)例有水；水性緩沖液，如通常用于高效液相色譜(HPLC)分析的緩沖液；有機(jī)溶劑，如乙腈，乙酸乙酯，己烷等；以及可藥用載體或賦形劑。更具體地，本發(fā)明提供了含有治療有效量的一種或多種式(I)或(IA)化合物或與其混合的一種或多種可藥用載體或賦形劑的組合物。這些藥物組合物是用藥物領(lǐng)域熟知的方法制備的。載體或賦形劑可以是固體，半固體或液體材料，它們被用作活性成分的載基或介質(zhì)。合適的載體或賦形劑是本領(lǐng)域熟知的。藥物組合物可被用于口服，非腸道或表面給藥，并可以片劑，膠囊劑，栓劑，溶液，懸浮液等形式給藥。本發(fā)明化合物可以口服給藥，例如，與惰性稀釋劑或可食用載體一起給藥。它們可以被封裝在明膠膠囊中或被壓縮成片劑。為了進(jìn)行口服給藥，本化合物可與賦形劑混合并以片劑，錠劑，囊劑，酏劑，懸浮劑，糖漿，糯米紙囊劑，咀嚼膠等形式給藥。這些制劑至少含有4％作為活性成分的本發(fā)明化合物，但也可以根據(jù)具體情況變化，一般占單位重量的4-70％。組合物中本化合物的量是要得到合適劑量的量。本發(fā)明優(yōu)選的組合物和制劑是口服劑量單位形式含有5.0-300毫克本發(fā)明化合物。片劑，丸劑，囊劑，錠劑等也可以含有一種或多種下列輔劑粘合劑如微晶纖維素，黃蓍膠或明膠；賦形劑如淀粉或乳糖；崩解劑如藻酸，預(yù)凝膠淀粉(Primogel)，玉米淀粉等；潤滑劑如硬脂酸鎂或Sterotex；滑動(dòng)劑(glidant)如膠態(tài)二氧化硅；及甜味劑如蔗糖或糖精，或調(diào)味劑如薄荷，水楊酸甲酯或柑橘調(diào)味劑。如果劑量單位形式是膠囊劑，除了含有上述成分之外，它還可以含有液體載體如聚乙二醇或油酸。其它劑量單位形式可以含有可以改善劑量單位物理形式的其它各種物質(zhì)，例如，包衣物質(zhì)。因此，片劑或丸劑可以被糖，紫膠或其它腸衣劑包裹。糖漿除了含有本化合物之外，還可以含有作為甜味劑的蔗糖，以及某些防腐劑，染色劑，色素和味素。用于制備這些各種組合物的材料應(yīng)該是藥物純的，并且使用的量是無毒的。為了進(jìn)行非腸道治療給藥，本發(fā)明化合物可以被制成溶液或懸浮液。這些制劑應(yīng)該至少含有0.1％本發(fā)明化合物，但也可以在約0.1-50％重量范圍變化。在這種組合物中本化合物的量是能得到合適劑量的量。本發(fā)明優(yōu)選的組合物和制劑是非腸道劑量單位形式含有5.0-100毫克本發(fā)明化合物的制劑。本發(fā)明式(I)或(IA)化合物也可以局部給藥。如果采用這種方式，載體中可以含有適當(dāng)溶液，軟膏或膠體。該膠體可以包括下列一種或多種物質(zhì)軟石脂，羊毛脂，聚乙二醇，蜂蠟，礦物油，稀釋劑如水和醇，以及乳化劑和穩(wěn)定劑。局部制劑可以含有式(I)或(IA)化合物或其可藥用鹽的濃度約為0.1-10％w/v(每單位體積的重量)。溶液或懸浮液中可以包含一種或多種下列輔劑滅菌稀釋劑如注射水，鹽水溶液，不揮發(fā)性油，聚乙二醇，甘油，丙二醇或其它合成溶劑；抗菌劑如芐醇或?qū)Ρ郊姿?paraben)甲酯；抗氧化劑如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑如亞乙基二胺四乙酸；緩沖劑如乙酸鹽，檸檬酸鹽或磷酸鹽類物質(zhì)，和用來調(diào)節(jié)毒性的化學(xué)劑如氯化鈉或葡萄糖。這些非腸道制劑可以被封裝在玻璃或塑料制成的安瓿，一次性注射器或多劑量小瓶中。體外抑制測定本發(fā)明化合物對其它絲氨酸蛋白酶如胰蛋白酶是高選擇性凝血酶抑制劑。例如，可根據(jù)Tuppy等人，Hoppe-Seyler’sZ.Physiol.Chem.，329，p.278(1962)所述方法，用分光光度測定法測定式(I)和(IA)化合物的凝血酶抑制活性，其中，通過測量在405nm(ε＝10800M-1cm-1)吸收的增加測定對-硝基苯胺的釋放。從SigmaChemicalCo.購進(jìn)的凝血酶得自人血漿，其活性用NIH為單位表示。一小瓶內(nèi)含有290單位(具體活性＝每mg蛋白質(zhì)3000單位)冷凍粉末，使用時(shí)用1mL水重組。底物是十二烷基肌氨酸鈉-脯氨酸-精氨酸-對-硝基酰苯胺發(fā)色肽(KM＝0.9mM)，緩沖劑是0.1MTris，pH7.4(最終體積為1mL)。測定在約30℃溫度進(jìn)行，每次測定需要0.029NIH單位酶。快速抑制劑的動(dòng)力學(xué)特性用Dixon圖描述，而慢-和/或緊密結(jié)合抑制劑特性用Williams和Morrison提出的數(shù)據(jù)分析技術(shù)測定。抑制劑的時(shí)間動(dòng)力學(xué)特性用Kitz&Wilson圖(KitzR.和WilsonI.B.，《(生物化學(xué)雜志》(J.Biol.Chem.)，237，3245-3249(1962))描述。式(I)和(IA)化合物對胰蛋白酶的抑制活性，可根據(jù)上述Tuppy等人，Hoppe-Seyler’sZ.Physiol.Chem.，329，p.278(1962)所述方法，用分光光度測定法測定。從SigmaChemicalCo.購進(jìn)的胰蛋白酶得自豬胰腺，其活性用Sigma單位表示。胰蛋白酶源的具體活性是每mg蛋白質(zhì)15900Sigma單位，其中1單位被定義為經(jīng)過苯甲酰-精氨酸-乙酯水解(pH7.6，25℃)酶在253nm的吸收每分鐘增加0.001的量。底物是苯甲酰-精氨酸-對-硝基酰苯胺肽(KM＝1.7mM)，緩沖劑是0.05MTris，0.05MCaCl2，pH7.8(最終體積為1mL)。測定在約30℃溫度進(jìn)行，每次測定需要8Sigma單位酶?？焖僖种苿┑膭?dòng)力學(xué)特性用Dixon圖描述，而慢-和/或緊密結(jié)合抑制劑特性用Williams和Morrison提出的數(shù)據(jù)分析技術(shù)測定。抑制劑的時(shí)間動(dòng)力學(xué)特性用Kitz&Wilson圖描述。表2匯總了所選本發(fā)明化合物對凝血酶相對于胰蛋白酶的選擇性抑制能力。其中所用“TFA”指三氟乙酸。表2</tables>抗凝血活性的測定實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用于研究的動(dòng)物是購于HarlanSpragueDawley，Inc.(Indianapolis，IN46229)的雄性Sprague-Dawley鼠(200-450克)。凝血測定活化的部分血栓形成時(shí)間(aPTT)的測定采用試劑和DadeDiagnostics，Inc.(Aguada，PuertoRico00602)的方法進(jìn)行。全部凝結(jié)時(shí)間用MLA-Electra750，MLA，Inc.(Pleasantville，NY10570)測量。加倍凝結(jié)時(shí)間(ID2)所需的濃度用直線(簡單的線性)回歸計(jì)算。表3說明了所選本發(fā)明化合物的抗凝血活性。表3</tables>鼠血漿中活化的部分血栓形成時(shí)間(aPTT)的體內(nèi)測量在給動(dòng)物注射了TFA·HNMe-D-Phe-L-Pro-D，L-Trp-CF2CF3之后幾個(gè)時(shí)間段對鼠血漿的活化的部分血栓形成時(shí)間(aPTT)進(jìn)行測量。用于研究的動(dòng)物是購于HarlanSpragueDawley，Inc.(Indianapolis，IN46229)的雄性Sprague-Dawley鼠(200-450克)。采用靜脈注射5mg/kg，靜脈注射10mg/kg，和靜脈注射30mg/kg劑量的結(jié)果列于表4。表4TFA·HNMe-D-Phe-L-Pro-D，L-Trp-CF2CF3對鼠aPTT的作用(n＝2)劑量(mg/kg)途徑*aPTT@(秒)給藥之后的時(shí)間(min.)0min.5min.15min.30min.60min.5i.v.21.219.022.718.617.610i.v.18.817.418.015.712.630i.p.19.220.819.219.418.7*i.v.＝靜脈內(nèi)；i.p.＝腹膜內(nèi)。@aPTT＝活化的部分血栓形成時(shí)間。特別令人感興趣的本發(fā)明優(yōu)選化合物(I和IA)是表5和6中具體指出的那些化合物。表5中公開的是優(yōu)選的式I化合物。表5式I化合物RAnX-CH3苯基1-CF3-CH3苯基0-CF3-CH3環(huán)己基1-CF3-CH3環(huán)己基0-CF3-H苯基1-CF3-H苯基0-CF3-H環(huán)己基1-CF3-H環(huán)己基0-CF3-CH3苯基1-CF2CF3-CH3苯基0-CF2CF3-CH3環(huán)己基1-CF2CF3-CH3環(huán)己基0-CF2CF3-H苯基1-CF2CF3-H苯基0-CF2CF3-H環(huán)己基1-CF2CF3-H環(huán)己基0-CF2CF3-CH3苯基1-CF2(CH2)2CH3-CH3苯基0-CF2(CH2)2CH3-CH3環(huán)己基1-CF2(CH2)2CH3-CH3環(huán)己基0-CF2(CH2)2CH3-H苯基1-CF2(CH2)2CH3-H苯基0-CF2(CH2)2CH3-H環(huán)己基1-CF2(CH2)2CH3-H環(huán)己基0-CF2(CH2)2CH3-CH3苯基1-CF2(CH2)3CH3-CH3苯基0-CF2(CH2)3CH3-CH3環(huán)己基1-CF2(CH2)3CH3-CH3環(huán)己基1-CF2(CH2)4CH3-CH3苯基1-CF2(CH2)2COOCH3-CH3環(huán)己基1-CF2(CH2)4COOCH3-H苯基1-CF2(CH2)2COOEt-CH3苯基1-CF2(CH2)2COOEt-CH3苯基1-CF2(CH2)2CONHCH3-CH3環(huán)己基1-CF2(CH2)4CONHCH3-H苯基0-CF2(CH2)2CONHCH3-CH3苯基1-CF2(CH2)2CH2OCH3-H苯基0-CF2(CH2)2CH2OCH3-H苯基1-CF2(CH2)2CH2OCH3-CH3苯基1-CF2(CH2)4CH2OCH3-CH3環(huán)己基1-CF2(CH2)4CH2OCH3-CH3苯基1-CF2(CH2)1CH＝CH2-H苯基0-CF2(CH2)1CH＝CH2-H苯基1-CF2(CH2)1CH＝CH2-CH3環(huán)己基1-CF2(CH2)1CH＝CH2類似地，表6公開了優(yōu)選的式IA化合物。表6式IA化合物BX-CFe-CF2CF3-CF2(CH2)2CH3-CF2(CH2)4CH3-CF2(CH2)2COOCH3-CF2(CH2)2COOEt-CF2(CH2)2CONHCH3-CF2(CH2)2CH2OCH3-CF2(CH2)1CH＝CH2-CF3-CF2CF3-CF2(CH2)2CH3-CF2(CH2)4CH3-CF2(CH2)2COOCH3-CF2(CH2)2COOEt-CF2(CH2)2CONHCH3-CF2(CH2)2CH2OCH3-CF2(CH2)1CH＝CH2-CF3-CF2CF3-CF2(CH2)2CH3-CF2(CH2)2COOCH3-CF2(CH2)2COOEt-CF2(CH2)2CONHCH3-CF2(CH2)2CH2OCH3-CF2(CH2)1CH＝CH2-CF2CF3-CF2(CH2)2CH3-CF2(CH2)2COOCH3-CF2(CH2)2CONHCH3-CF2(CH2)2CH2OCH3-CF2(CH2)1CH＝CH2-CF3-CF2CF3-CF2(CH2)2CH3-CF2(CH2)2COOCH3-CF2(CH2)2CONHCH3-CF2(CH2)2CH2OCH3-CF3-CF2CF3-CF2(CH2)2CH3-CF2(CH2)2COOCH3-CF2(CH2)2CONHCH3-CF2(CH2)2CH2OCH3盡管本發(fā)明已經(jīng)用具體實(shí)例加以說明，但仍應(yīng)該理解它可以被進(jìn)一步改進(jìn)。本申請將包括任何變化，用途，或遵循本發(fā)明一般原理并且包括背離本公開但屬于本發(fā)明領(lǐng)域已知或常規(guī)應(yīng)用，并且同樣適用于前面所說的基本特征，而且包括在所附權(quán)利要求書范圍內(nèi)。權(quán)利要求1.式(I)或(IA)化合物或其立體異構(gòu)體或混合物，或其水合物或可藥用鹽，其中A是苯基或環(huán)己基；B是下列基團(tuán)X是-CF3，-CF2CF3，-CF2(CH2)tCH3，-CF2(CH2)tCOOR1，-CF2(CH2)tCONHR1，-CF2(CH2)tCH2OR1或-CF2(CH2)vCH＝CH2；R是H或-CH3；R1是H或C1-6烷基；n是0或1；t是整數(shù)2，3或4；v是整數(shù)1，2或3。2.權(quán)利要求1的化合物，其中X選自-CF3，-CF2CF3，-CF2(CH2)2CH3，-CF2(CH2)2CO2CH2CH3，-CF2(CH2)2CONHCH3和-CF2(CH2)4CONHCH3。3.具有式I結(jié)構(gòu)的權(quán)利要求2化合物，其中A是苯基，n是1及R是-CH3。4.具有式I結(jié)構(gòu)的權(quán)利要求2化合物，其中A是環(huán)己基及n是1。5.具有式IA結(jié)構(gòu)的權(quán)利要求1化合物，其中X選自-CF3，-CF2CF3，-CF2(CH2)2CH3，-CF2(CH2)2CO2CH2CH3，-CF2(CH2)2CONHCH3和-CF2(CH2)4CONHCH3。6.具有式IA結(jié)構(gòu)的權(quán)利要求5化合物，其中B是7.具有式IA結(jié)構(gòu)的權(quán)利要求5化合物，其中B是8.權(quán)利要求3的化合物，其中X是-CF2(CH2)2CH3。9.權(quán)利要求4的化合物，其中X是-CF2(CH2)2CH3。10.權(quán)利要求5的化合物，其中X是-CF2(CH2)2CH3。11.權(quán)利要求3的化合物，其中X是-CF2CF3。12.權(quán)利要求4的化合物，其中X是-CF2CF3。13.權(quán)利要求5的化合物，其中X是-CF2CF3。14.權(quán)利要求1的化合物，其中化合物是L-脯氨酰胺，N-甲基-D-苯丙氨?；?N-[3，3，4，4，4-五氟-1-(1H-吲哚-3-基甲基)-2-氧丁基]-，單(三氟乙酸鹽)。15.含有權(quán)利要求1的化合物和載體的組合物。16.含有權(quán)利要求1的化合物和可藥用載體的藥物組合物。17.一種對需要抑制凝血酶的患者抑制凝血酶的方法，所說方法包括給所說患者使用治療有效量的權(quán)利要求1的化合物。18.一種治療患有凝血酶類病癥患者的方法，所說方法包括給所說患者使用治療有效量的權(quán)利要求1的化合物。19.根據(jù)權(quán)利要求12的方法，其中所說凝血酶類病癥是深度靜脈血栓形成。20.根據(jù)權(quán)利要求12的方法，其中所說凝血酶類病癥是血管形成術(shù)之后的冠狀血栓形成。21.一種抑制血液中凝血酶的方法，包括在血液中添加權(quán)利要求7的組合物。22.一種抑制血液中血栓形成的方法，包括在血液中添加權(quán)利要求7的組合物。全文摘要本發(fā)明涉及多氟烷基色氨酸三肽以及含有它們的組合物。該化合物是具有抗凝作用的高選擇性凝血酶抑制劑,可用于治療凝血酶類的疾病,以及防止血液和血液產(chǎn)品儲(chǔ)存時(shí)凝固。文檔編號(hào)A61K38/55GK1198748SQ96197386公開日1998年11月11日申請日期1996年9月6日優(yōu)先權(quán)日1995年10月2日發(fā)明者J·A·馬利凱爾,J·P·伯克哈特,R·J·布羅斯瑪,N·P·皮特申請人:赫徹斯特馬里恩魯斯公司