專利名稱：當(dāng)歸多糖、當(dāng)歸內(nèi)酯作為生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑用于治療腫瘤新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從傳統(tǒng)中藥當(dāng)歸分離提取的、主要通過激活體內(nèi)免疫效應(yīng)細(xì)胞和免疫活性分子達(dá)到殺滅癌細(xì)胞的新型抗腫瘤藥及生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑。
目前，在臨床上，腫瘤綜合治療中，化學(xué)治療藥物多屬于細(xì)胞毒類抗癌藥，由于其選擇性差，容易出現(xiàn)免疫功能和骨髓功能抑制等毒副作用，致使患者難以耐受而中斷治療。因此，提高腫瘤患者的機(jī)體免疫功能及對手術(shù)、放療、化療的耐受性，已成為腫瘤治療成敗的關(guān)鍵之一。80年代興起的新型抗腫瘤藥生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑，為腫瘤治療開辟了一條新途徑。生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑除本身具有一定抗癌作用外，主要是通過激活、調(diào)節(jié)和恢復(fù)機(jī)體的抗癌免疫效應(yīng)細(xì)胞和免疫活性分子來殺滅癌細(xì)胞。因此，生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑在腫瘤生物療法中占有不可替代的重要地位，可使腫瘤患者治愈率明顯提高、存活率明顯延長、生活質(zhì)量明顯改善。
1994年，本發(fā)明人曾在“新型免疫佐劑”專利申請(申請?zhí)?4115186·7)中闡明，通過化學(xué)分離、提取與精制，可從當(dāng)歸中獲得當(dāng)歸多糖及當(dāng)歸內(nèi)酯，用作乙肝基因工程疫苗的新型免疫佐劑。
本發(fā)明之目的，是根據(jù)祖國醫(yī)學(xué)有關(guān)祛邪(體內(nèi)抗癌作用)和扶正(增強(qiáng)免疫功能)等理論，將傳統(tǒng)中藥補(bǔ)益藥的補(bǔ)血藥當(dāng)歸中分離提取得到的當(dāng)歸多糖和當(dāng)歸內(nèi)酯作為抗腫瘤藥生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑，用于抗腫瘤治療新用途，以取得臨床腫瘤治療的更佳效果。
本發(fā)明的內(nèi)容與要點(diǎn)是一、當(dāng)歸多糖、當(dāng)歸內(nèi)酯經(jīng)實(shí)驗(yàn)治療證明，具有明顯的體內(nèi)抗癌作用。
1.實(shí)驗(yàn)小鼠移植肉瘤180(S180)瘤株后，第二天，按當(dāng)歸多糖25毫克/公斤，或當(dāng)歸內(nèi)酯12.5毫克/公斤，腹腔給藥，連續(xù)8天，測定實(shí)驗(yàn)組與對照組平均瘤重，結(jié)果表明當(dāng)歸多糖、當(dāng)歸內(nèi)酯實(shí)驗(yàn)組瘤重明顯降低，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理有顯著性差異(P＜0.001)(表1)。
2.實(shí)驗(yàn)小鼠移植S180瘤株后，第二天，按當(dāng)歸多糖25.0毫克/公斤或當(dāng)歸內(nèi)酯12.5毫克/公斤，腹腔給藥，連續(xù)8天，再分別與細(xì)胞毒類抗癌藥環(huán)磷酰胺3.13毫克/公斤合用，分別測定平均瘤重。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)歸多糖或當(dāng)歸內(nèi)酯，均可降低環(huán)磷酰胺有效劑量，明顯提高抑瘤率(表1)。說明當(dāng)歸多糖或當(dāng)歸內(nèi)酯與細(xì)胞毒類抗癌藥環(huán)磷酰胺合用，有協(xié)同作用和增效作用。
表1 當(dāng)歸多糖體內(nèi)抗癌作用以及與環(huán)磷酰胺合用對S180的抑瘤作用平均瘤重±SX組別 劑量(毫克/公斤) (克)抑瘤率(％)對照組(N.S)1.48±0.61實(shí)驗(yàn)組環(huán)磷酰胺3.13 1.10±0.36 25.67*當(dāng)歸多糖 12.50 1.19±0.45 19.6025.00 1.10±0.42 26.02*當(dāng)歸多糖＋環(huán)磷酰胺 12.50＋3.13 0.90±0.42 47.17*▲當(dāng)歸多糖＋環(huán)磷酰胺 25.00＋3.13 0.78±0.18 60.64*▲注*與對照組比較P＜0.001▲與環(huán)磷酰胺組比較P＜0.013.當(dāng)歸多糖的抑瘤作用與同劑量陽性對照藥香菇多糖比較，抗S180作用優(yōu)于香菇多糖(表2)
表2 當(dāng)歸多糖與香菇多糖對S180抑瘤作用之比較平均瘤重±SX組別 (克) 抑瘤率％ P值對照組(N.S) 1.31±0.29當(dāng)歸多糖 0.66±0.21 49.13＜0.01香菇多糖 0.83±0.52 36.59注劑量均為25.0毫克/公斤，均為iP途徑給藥。
4.實(shí)驗(yàn)小鼠移植艾氏實(shí)體瘤(ESC)后，第二天，當(dāng)歸多糖按6，25；12.5；25.0毫克/公斤，或當(dāng)歸內(nèi)酯12.5毫克/公斤，腹腔注射，連續(xù)8天給藥，結(jié)果當(dāng)歸多糖、當(dāng)歸內(nèi)酯實(shí)驗(yàn)組較對照組平均瘤重明顯減輕，測得抑瘤率為34.1～40.8％，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理P均＜0.01。(表3)表3 當(dāng)歸多糖、當(dāng)歸內(nèi)酯腹腔給藥對艾氏實(shí)體瘤(ESC)的抑瘤作用劑量(毫克/公斤) 平均瘤重±SX(克)抑瘤率(％)P值對照組(N.S) 1.79±0.283實(shí)驗(yàn)組當(dāng)歸多糖6.25 1.14±0.428 36.3 ＜0.0112.501.06±0.225 40.8 ＜0.0125.001.18±0.295 34.1 ＜0.01當(dāng)歸內(nèi)酯12.5 0.93±0.244 48.1 ＜0.015.實(shí)驗(yàn)小鼠移植艾氏實(shí)體瘤(ESC)后，第二天，口服當(dāng)歸多糖25.0；50.0毫克/公斤，連續(xù)給藥8天，結(jié)果實(shí)驗(yàn)組平均瘤重明顯減輕，測得抑瘤率為30.2～48.2％。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理P均＜0.01。(表4)表4當(dāng)歸多糖口服給藥對艾氏實(shí)體瘤(ESC)的抑瘤作用平均瘤重±SD劑量(毫克/公斤) (克) 抑瘤率(％)P值對照組(N.S) 1.99±0.412實(shí)驗(yàn)組當(dāng)歸多糖25.0 1.03±0.400 48.2 ＜0.0150.0 1.39±0.348 30.2 ＜0.016.當(dāng)歸多糖與香菇多糖對ESC抗癌作用比較，明顯優(yōu)于陽性對照藥香菇多糖(表5)。
表5 當(dāng)歸多糖與香菇多糖腹腔給藥對ESC抑瘤作用比較平均瘤重SX組別 (克) 抑瘤率(％) P值對照組(N.S) 1.79±0.283當(dāng)歸多糖1.06±0.225 40.8 ＜0.01香菇多精1.42±0.234 20.9注劑量均為12.5毫克/公斤，均為ip途徑給藥。7.當(dāng)歸多糖和當(dāng)歸內(nèi)酯合用，腹腔給藥，對ESC及S180小鼠移植性腫瘤，均有明顯的體內(nèi)抗癌作用(表6、表7)。
表6 當(dāng)歸多糖＋當(dāng)歸內(nèi)酯對艾氏實(shí)體瘤(ESC)的抑瘤作用平均瘤重±SD組別 (克)抑瘤率(％) P值對照組(N.S) 1.91±0.446當(dāng)歸多糖＋當(dāng)歸內(nèi)酯1.18±0.29538.2 ＜0.01表7 當(dāng)歸多糖＋當(dāng)歸內(nèi)酯對肉瘤S180的抑瘤作用平均瘤重±SX組別 (克) 抑瘤率(％) P值對照組(N.S) 1.37±0.21當(dāng)歸多糖＋當(dāng)歸內(nèi)酯0.59±0.22 56.68＜0.01二、當(dāng)歸多糖、當(dāng)歸內(nèi)酯經(jīng)體內(nèi)、體外試驗(yàn)證明，能明顯增強(qiáng)機(jī)體的抗腫瘤免疫功能，對正常實(shí)驗(yàn)動物及免疫功能低下實(shí)驗(yàn)動物的免疫功能，均具有廣泛的免疫調(diào)節(jié)、激活及恢復(fù)作用。
1.對單核巨噬細(xì)胞(MφS)系統(tǒng)免疫功能的影響1)BALB/C小鼠18—22克，雌雄各半，當(dāng)歸多糖25毫克/公斤，或當(dāng)歸內(nèi)酯12.5毫克/公斤，腹腔給藥5天后，取腹腔MφS，用51鉻同位素標(biāo)記法，分別測得MφS的吞噬作用，實(shí)驗(yàn)組明顯增強(qiáng)(P＜0.01)；對液體中性紅的吞飲作用，實(shí)驗(yàn)組也明顯增強(qiáng)(P＜0.01)(表8)。
表8 當(dāng)歸多糖、當(dāng)歸內(nèi)酯對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞飲作用的影響組別OD值(OD570nm) P值對照組(鹽水) 0.073實(shí)驗(yàn)組當(dāng)歸多糖 0.134＜0.01當(dāng)歸內(nèi)酯 0.140＜0.012)碳粒廓清試驗(yàn)，分別給昆明小鼠(18～25克，雌雄各半)腹腔注射當(dāng)歸多糖或當(dāng)歸內(nèi)酯，尾靜脈注入印度墨水0.1ml，測MφS校正廓清指數(shù)(吞噬系數(shù)α)，較對照組明顯增加(P＜0.05和P＜0.01)，表明廓清速度明顯加快(表9)。
表9 當(dāng)歸多糖或當(dāng)歸內(nèi)酯對小鼠單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)碳粒廓清的作用組別 劑量(毫克/公斤) 吞噬系數(shù)(α)P值對照組(N.S)5.4101±0.3479實(shí)驗(yàn)當(dāng)歸多糖 506.3084±0.6809＜0.05當(dāng)歸內(nèi)酯 257.0309±0.7983＜0.012.天然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)功能檢測用免疫功能損傷小鼠模型，分別給藥后，分離脾細(xì)胞，分別采用兩種靶細(xì)胞L929及K562，用MTT法(堿性染料)，570nm波長測吸收值，計(jì)算NK細(xì)胞的殺傷率，實(shí)驗(yàn)組均明顯增強(qiáng)(表10)。
表10 當(dāng)歸多糖、當(dāng)歸內(nèi)酯對小鼠天然殺傷細(xì)胞(NK)活性的影響靶細(xì)胞殺傷率％組 別 L929K562對照組(鹽水)11.933.8實(shí)驗(yàn)組當(dāng)歸多糖 24.743.9當(dāng)歸內(nèi)酯 26.647.13.淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)(T細(xì)胞試驗(yàn))1)體外實(shí)驗(yàn)當(dāng)歸多糖濃度為500微克/毫升時，能明顯增強(qiáng)淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化(P＜0.01)。當(dāng)歸多糖與脂多糖(LPS)合用，對淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化(淋巴細(xì)胞增殖)有協(xié)同作用。(表11)表11 當(dāng)歸多糖對淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響組別OD值(OD570nm) P值對照組 0.34±0.06實(shí)驗(yàn)組當(dāng)歸多糖500微克/毫升 0.56±0.11 ＜0.01脂多糖(對照)(LPS)0.64±0.07當(dāng)歸多糖＋脂多糖 1.02±0.09 ＜0.01當(dāng)歸內(nèi)酯濃度為25微克/毫升，分別與刀豆蛋白(conA)和脂多糖(LPS)合用，均可促進(jìn)淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化作用。(表12)
表12 當(dāng)歸內(nèi)酯對淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響組別 OD值(OD570nm) P值對照組 0.32±0.08實(shí)驗(yàn)組當(dāng)歸內(nèi)酯(25微克/毫升) 0.30±0.06conA對照 0.95±0.04當(dāng)歸內(nèi)酯＋conA1.35±0.06 ＜0.05LPS對照 0.54±0.07當(dāng)歸內(nèi)酯＋LPS 0.68±0.02 ＜0.052)體內(nèi)試驗(yàn)經(jīng)X線照射致免疫功能低下的Balb/c小鼠，用正常Ballb/c小鼠作對照，當(dāng)歸多糖按25.0毫克/公斤或當(dāng)歸內(nèi)酯按12.5毫克/公斤為實(shí)驗(yàn)組，分別設(shè)加LPS，及加ConA對照組，測定cpm值并計(jì)算刺激指數(shù)，結(jié)果當(dāng)歸多糖或當(dāng)歸內(nèi)酯分別與LPS、ConA合用，均可明顯刺激、恢復(fù)免疫功能低下小鼠的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化(P值均＜0.01)(表13)。
表13 當(dāng)歸多糖或當(dāng)歸內(nèi)酯體內(nèi)試驗(yàn)對免疫功能損傷小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響組別加LPS 加ConAcpmSI p cpm SIp對照組(生理鹽水、正常小鼠)4068±80.3 10.0 23553±1048252.9免疫功能損傷小鼠 483±370 1.2 338±208 0.8當(dāng)歸多精 8765±963 14.7＜0.01 7435±1021 16.7 ＜0.01當(dāng)歸內(nèi)酯10009±658 18.2＜0.01 7284±2434 13.3 ＜0.01
4．細(xì)胞因子活性測定1)干擾素(IFN)的活性檢測按照國際通用干擾素細(xì)胞致病效應(yīng)(CPE)抑制微量測定法進(jìn)行檢測，用Poly IC作為陽性對照藥。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，當(dāng)歸多糖、當(dāng)歸內(nèi)酯體內(nèi)、體外試驗(yàn)，均有誘生干擾素的作用。(表14)表14 當(dāng)歸多糖、當(dāng)歸內(nèi)酯對BALB/C小鼠干擾素(IFN)的誘生作用給藥 樣品 劑量 給藥后(小時)途徑 (毫克/公斤)IFN 單位/毫升2 6 18腹腔 當(dāng)歸多糖 500725.5±735.2 819.7±211.3 ＞638.7±412.812.5934.1±984.9 1008.7±1245.6＞767.4±509.03.1988.1±1185.3 354.3±292.2 580.8±514.2陽性對照 5.0 4071.0±5844.9(Poly IC)對照組 559.4±311.4(鹽水)腹腔當(dāng)歸內(nèi)酯100.092.3±16.2 323.1±44.6 79.6±51.525.0 267.8±256.8385.0±301.168.3±43.216.3 161.4±115.2135.5±101.8 312.9±383.6陽性對照 5.0 10056.4±2720.0(poly IC)對照組 175.2±139.5(鹽水)
2)白細(xì)胞介素2(IL—2)誘生作用的檢測采用國際通用的3H—TdR摻入法及CTLL2 IL—2依賴細(xì)胞株，檢測IL—2活性。用γIL—2為陽性對照藥，結(jié)果證明，當(dāng)歸多糖、當(dāng)歸內(nèi)酯均可一定程度促進(jìn)CTLL2細(xì)胞的增殖，即均有誘生IL—2的作用。(表15)表15 當(dāng)歸多糖/當(dāng)歸內(nèi)酯對CTLL—2(IL—2細(xì)胞依賴株)增殖作用的影響樣品 濃度(微克/毫升) Cpm±SD 增加倍數(shù)當(dāng)歸多糖/當(dāng)歸內(nèi)酯15.7/31/3 478.0±31.4 2.47.9/15.7 2058.0±279.7 10.23.9/7.8 825.0±97.3 4.1當(dāng)歸多糖/當(dāng)歸內(nèi)酯7.9/15.735302.2±1724.8174.8＋ConA 2微克IL—2(對照) 5微克/毫升7321.0±417.9 36.2CTLL—2(對照) 202.0±27.13)對腫瘤壞死因子(TNF)誘生作用的影響用Ballb/c小鼠，雌性，18—22克，當(dāng)歸多糖按25毫克/公斤或當(dāng)歸內(nèi)酯按12.5毫克/公斤，腹腔給藥，連續(xù)7天，用L929為靶細(xì)胞，MTT法，于570nm波長，酶標(biāo)儀測OD值，計(jì)算殺傷率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)歸多糖或當(dāng)歸內(nèi)酯，對L929靶細(xì)胞的殺傷率較對照組明顯提高，表明二者均有誘生TNF的作用，為TFN誘生劑(表16)。
表16 當(dāng)歸多糖、當(dāng)歸內(nèi)酯對腫瘤壞死因子(TNF)的誘生作用組 別 對L929細(xì)胞殺作率(％)對照組(鹽水) 2.1當(dāng)歸多糖 23.7當(dāng)歸內(nèi)酯 24.75．其它細(xì)胞免疫測定指標(biāo)細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞(CTL)活性測試，采用CTL能殺傷分泌抗SRBC抗體的靶細(xì)胞MX—87，使形成空斑數(shù)減少的分法，檢測CTL活性。當(dāng)歸多糖25毫克/公斤，小鼠腹腔連續(xù)給藥7天，或當(dāng)歸內(nèi)酯12.5毫克/公斤，小鼠腹腔分別連續(xù)給7天后，測CTL殺傷率，結(jié)果表明，當(dāng)歸多糖、當(dāng)歸內(nèi)酯均可提高CTL對靶細(xì)胞的殺傷率。(表17)表17 當(dāng)歸多糖、當(dāng)歸內(nèi)酯對小鼠細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞(CTL)活性的影響組 別 CTL對靶細(xì)胞殺傷率(％)MX—87對照組(鹽水)40.1實(shí)驗(yàn)組當(dāng)歸多糖 56.1當(dāng)歸內(nèi)酯 65.6本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和積極效果在于當(dāng)歸多糖、當(dāng)歸內(nèi)酯均系由傳統(tǒng)中藥補(bǔ)益藥當(dāng)歸中分離、提取的藥用有效部位，與目前已批準(zhǔn)臨床使用的同類生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑如香菇多糖相比，當(dāng)歸多糖的體內(nèi)抗癌作用優(yōu)于香菇多糖，且成本初步核算較香菇多糖低。當(dāng)歸多糖和/或當(dāng)歸內(nèi)酯能明顯增強(qiáng)機(jī)體的抗腫瘤功能，包括對殺傷癌細(xì)胞的免疫效應(yīng)細(xì)胞如CTL、NK、活化的Mφ等，有明顯的激活作用；對抗腫瘤的細(xì)胞因子如IFN、IL—2、TNF等有明顯的誘生作用。毒性很低(見發(fā)明專利，申請?zhí)?4115186·7)，當(dāng)歸多糖與細(xì)胞毒類抗癌藥環(huán)磷酰胺合用，能明顯降低環(huán)磷酰胺的有效劑量，表明當(dāng)歸多糖對環(huán)酰胺等細(xì)胞毒類抗癌藥有增效作用和協(xié)同作用。當(dāng)歸來源豐富，制備流程合理(見發(fā)明專利申請?zhí)?4115186·7)，無生產(chǎn)過程中的環(huán)境污染問題，完全符合衛(wèi)生部藥政管理局1993年7月頒布的《新藥臨床前研究指導(dǎo)原則匯編》中，抗腫瘤藥，生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)和要求，是抗腫瘤藥物中的新型生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑。
權(quán)利要求
1.當(dāng)歸多糖、當(dāng)歸內(nèi)酯作為生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑用于治療腫瘤新用途，其特征是它對實(shí)驗(yàn)動物具有明顯的體內(nèi)抗癌作用，激活CTL、NK、活化的Mφ等免疫效應(yīng)細(xì)胞；能增強(qiáng)或恢復(fù)機(jī)體的抗腫瘤免疫功能；誘生抗腫瘤細(xì)胞因子IFN、IL—2、TNF等，對正常動物及免疫功能低下動物具有廣泛的免疫調(diào)節(jié)、激活及恢復(fù)作用。
2.按照權(quán)利要求1所述的當(dāng)歸多糖、當(dāng)歸內(nèi)酯作為生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑用于治療腫瘤新用途，其特征是實(shí)驗(yàn)小鼠移植肉瘤180(S180)瘤株后，當(dāng)歸多糖、當(dāng)歸內(nèi)酯連續(xù)腹腔給藥，測得當(dāng)歸多糖、當(dāng)歸內(nèi)酯實(shí)驗(yàn)組比對照組平均瘤重明顯減輕，有明顯的體內(nèi)抗癌作用。
3.按照權(quán)利要求1所述的，當(dāng)歸多糖、當(dāng)歸內(nèi)酯作為生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑用于治療腫瘤新用途，其特征是當(dāng)歸多糖與環(huán)磷酰胺合用，腹腔給藥，測平均瘤重，證明當(dāng)歸多糖能明顯降低細(xì)胞毒類抗癌藥環(huán)磷酰胺的有效劑量，明顯提高抑瘤率，對環(huán)磷酰胺細(xì)胞毒類抗癌藥有協(xié)同作用和增效作用。
4.按照權(quán)利要求1所述的當(dāng)歸多糖、當(dāng)歸內(nèi)酯作為生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑用于治療腫瘤新用途，其特征是在同樣劑量和同樣腹腔給藥途徑進(jìn)行試驗(yàn)，當(dāng)歸多糖對小鼠移植性肉瘤180(S180)的抑瘤作用優(yōu)于香菇多糖。
5.按照權(quán)利要求1所述的當(dāng)歸多糖、當(dāng)歸內(nèi)酯作為生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑用于治療腫瘤新用途，其特征是實(shí)驗(yàn)小鼠移植艾氏實(shí)體瘤(ESC)后，當(dāng)歸多糖、當(dāng)歸內(nèi)酯連續(xù)腹腔給藥，實(shí)驗(yàn)組較對照組平均瘤重明顯減輕，有明顯的體內(nèi)抗癌作用。
6.按照權(quán)利要求1所述的當(dāng)歸多糖、當(dāng)歸內(nèi)酯作為生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑用于治療腫瘤新用途，其特征是實(shí)驗(yàn)小鼠移植艾氏實(shí)體瘤(ESC)后，當(dāng)歸多糖連續(xù)口服給藥，實(shí)驗(yàn)組較對照組平均瘤重明顯減輕，有明顯的體內(nèi)抗癌作用。
7.按照權(quán)利要求1所述的當(dāng)歸多糖、當(dāng)歸內(nèi)酯作為生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑用于治療腫瘤新用途，其特征是在相同劑量和相同腹腔給藥途徑進(jìn)行試驗(yàn)，測得當(dāng)歸多精對ESC抗癌作用，明顯優(yōu)于陽性對照藥香菇多糖。
8.按照權(quán)利要求1所述的當(dāng)歸多糖、當(dāng)歸內(nèi)酯作為生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑用于治療腫瘤新用途，其特征是當(dāng)歸多糖和當(dāng)歸內(nèi)酯合用，腹腔給藥，對ESC和S180小鼠移植性腫瘤，均有明顯體內(nèi)抗癌作用。
9.按照權(quán)利要求1所述的當(dāng)歸多糖、當(dāng)歸內(nèi)酯作為生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑用于治療腫瘤的新用途，其特征是它們對單核巨噬細(xì)胞(Mφs)系統(tǒng)免疫功能有明顯促進(jìn)作用用當(dāng)歸多糖、當(dāng)歸內(nèi)酯腹腔給藥，取腹腔Mφs，分別測得Mφs的吞噬作用及對液體的吞飲作用均有明顯增強(qiáng)。碳粒廓清試驗(yàn)分別給小鼠，腹腔注射當(dāng)歸多糖和當(dāng)歸內(nèi)酯(實(shí)驗(yàn)組)，尾靜脈注入印度墨水，分別測得Mφs吞噬系數(shù)α，表明實(shí)驗(yàn)組碳粒廓清速度較對照組明顯增快。
10.按照權(quán)利要求1所述的當(dāng)歸多糖、當(dāng)歸內(nèi)酯作為生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑用于治療腫瘤新用途，其特征是用免疫功能損傷小鼠連續(xù)給藥后，分離脾細(xì)胞，分別采用兩種靶細(xì)胞L929及K562，用MTT法，計(jì)算NK細(xì)胞殺傷率，測得當(dāng)歸多糖、當(dāng)歸內(nèi)酯均能增強(qiáng)和恢復(fù)NK細(xì)胞活性。
11.按照權(quán)利要求1所述的當(dāng)歸多糖、當(dāng)歸內(nèi)酯作為生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑用于治療腫瘤新用途，其特征是體外實(shí)驗(yàn)當(dāng)歸多糖，能明顯增強(qiáng)淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化，當(dāng)歸多糖與脂多糖(LPS)合用，對淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化有協(xié)同作用。
12.按照權(quán)利要求1所述的當(dāng)歸多糖、當(dāng)歸內(nèi)酯作為生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑作用治療腫瘤新用途，其特征是體內(nèi)試驗(yàn)，當(dāng)歸多糖、當(dāng)歸內(nèi)酯分別與LPS或ConA合用，連續(xù)腹腔給藥。均可明顯增強(qiáng)或恢復(fù)免疫功能損傷小鼠的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化(淋巴細(xì)胞增殖)。
13.按照權(quán)利要求1所述的當(dāng)歸多糖、當(dāng)歸內(nèi)酯作為生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑用于治療腫瘤新用途，其特征是采用國際通用的干擾素(IFN)細(xì)胞致病效應(yīng)(CPE)抑制微量測定法，用Ply IC作為陽性對照藥進(jìn)行體內(nèi)外試驗(yàn)表明，當(dāng)歸多糖、當(dāng)歸內(nèi)酯均有誘生干擾素的作用。
14.按照權(quán)利要求1所述的當(dāng)歸多糖、當(dāng)歸內(nèi)酯作為生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑用于治療腫瘤新用途，其特征是采用國際通用的3H—TdR摻入法及CTLL2 IL—2依賴細(xì)胞株，以γIL—2為陽性對照藥進(jìn)行試驗(yàn)，證明當(dāng)歸多糖、當(dāng)歸內(nèi)酯均有誘生白細(xì)胞介素2的作用。
15.按照權(quán)利要求1所述的當(dāng)歸多糖、當(dāng)歸內(nèi)酯作為生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑用于治療腫瘤新用途，其特征是當(dāng)歸多糖、當(dāng)歸內(nèi)酯連續(xù)腹腔給藥，用L929為靶細(xì)胞MTT法測定對靶細(xì)胞的殺傷率，表明，當(dāng)歸多糖、當(dāng)歸內(nèi)酯均可誘生TNF，為TNF誘生劑。
16.按照權(quán)利要求1所述的當(dāng)歸多糖、當(dāng)歸內(nèi)酯作為生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑用于治療腫瘤新用途，其特征是用當(dāng)歸多糖、當(dāng)歸內(nèi)酯測定細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞(CTL)的活性，表明，當(dāng)歸多糖、當(dāng)歸內(nèi)酯均能提高對分泌抗SRBC抗體的靶細(xì)胞MX—87的殺傷作用，二者均可誘導(dǎo)、增強(qiáng)CTL活性。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從傳統(tǒng)中藥當(dāng)歸分離提取的當(dāng)歸多糖、當(dāng)歸內(nèi)酯,主要通過激活體內(nèi)免疫效應(yīng)細(xì)胞和免疫活性分子來殺滅癌細(xì)胞的新型抗腫瘤藥生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑,當(dāng)歸多糖、當(dāng)歸內(nèi)酯分別經(jīng)腹腔注射或口服給藥或二者合用,對實(shí)驗(yàn)小鼠移植性腫瘤,體內(nèi)、體外試驗(yàn)均有肯定的抗癌作用,對正常動物或免疫功能低下動物如荷瘤動物的免疫功能,包括免疫效應(yīng)細(xì)胞和免疫活性分子有明顯的誘導(dǎo)、增強(qiáng)及恢復(fù)作用,與細(xì)胞毒類抗癌藥(如環(huán)磷酰胺)合用,有增效和協(xié)同作用。
文檔編號A61K31/365GK1222356SQ9710416
公開日1999年7月14日 申請日期1997年4月24日 優(yōu)先權(quán)日1997年4月24日
發(fā)明者柳鐘勛, 左增艷, 郭淑玲, 李健蕊, 馮景奇, 張慧芳, 蔣景儀, 林晨, 王秀琴, 張雪艷 申請人:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所