專(zhuān)利名稱(chēng)：玻連蛋白受體拮抗劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及抑制玻連蛋白受體的藥用活性化合物，該化合物用于治療炎癥、癌及心血管疾病如動(dòng)脈粥樣硬化和再狹窄，及以骨吸收為誘因的疾病，例如骨質(zhì)疏松。
本發(fā)明背景整聯(lián)蛋白為細(xì)胞粘附受體的超家族，其為表達(dá)在各種細(xì)胞上的跨膜糖蛋白。這些細(xì)胞表面粘附受體包括gpⅡb/Ⅲa(纖維蛋白原受體)和αvβ3(玻連蛋白受體)。纖維蛋白原受體gpⅡb/Ⅲa在血小板表面表達(dá)，介導(dǎo)血小板的聚集并在出血傷口處形成止血凝塊(philips等，Blood.,1988,71,831)。玻連蛋白受體αvβ3在多種細(xì)胞表達(dá)，包括內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、破骨細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞，因而它具有多種功能。在破骨細(xì)胞膜上表達(dá)的αvβ3受體介導(dǎo)破骨細(xì)胞對(duì)骨基質(zhì)的粘附(骨吸收過(guò)程的關(guān)鍵步驟)(Ross等，J.Biol.Chem.,1987,262,7703)。骨質(zhì)疏松是一種以骨的過(guò)度吸收為特征的疾病。在人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞上表達(dá)的αvβ3受體介導(dǎo)其移行進(jìn)入新血管內(nèi)膜(一種經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈血管成形術(shù)引起的再狹窄的過(guò)程)(Brown等，Cardiovascular Res.,1994,28,1825)。另外，Brooks等(Cell,1994,79,1157)已表明αvβ3拮抗劑可通過(guò)引起血管生成的血管的細(xì)胞程序死亡(apoptosis)而促使腫瘤消退。因而，阻斷玻連蛋白受體的藥物將用于治療諸如骨質(zhì)疏松、再狹窄和癌癥等疾病。
目前已知玻連蛋白受體涉及三種不同的整聯(lián)蛋白，稱(chēng)為αvβ1、αvβ3和αvβ5(Horton等，Int.J.Exp.Pathol.,1990,71,741)。αvβ1連接纖維結(jié)合素和玻連蛋白。αvβ3連接各種配體，包括纖維蛋白、纖維蛋白原、層粘連蛋白、血小板反應(yīng)蛋白、玻連蛋白、von Willebrand氏因子、骨橋蛋白和骨涎液蛋白。αvβ5結(jié)合玻連蛋白。已表明玻連蛋白受體αvβ5受體參與各種類(lèi)型細(xì)胞的細(xì)胞粘附，這類(lèi)細(xì)胞包括微血管內(nèi)皮細(xì)胞(Davis等，J.Cell.Biol.,1993,51,206)，它在血管生成方面的作用已被證實(shí)(Brooks等.，Science,1994,264,569)。這種整聯(lián)蛋白在人傷口肉芽組織的血管上表達(dá)，但不在正常皮膚中表達(dá)。
已知所述玻連蛋白受體結(jié)合到含有三-肽Arg-Gly-Asp(或RGD)基序的骨基質(zhì)蛋白中。Horton等(Exp.Cell Res.1991,195,368)公開(kāi)了含RGD的肽和抗-玻連蛋白受體抗體(23C6)抑制牙質(zhì)的吸收和破骨細(xì)胞所致的細(xì)胞擴(kuò)散。另外，Sato等(J.Cell Biol.1990,111,1713)公開(kāi)了鋸鱗血抑肽(一種含有所述RGD序列的蛇毒肽)在組織培養(yǎng)中為骨吸收的有效抑制劑，并抑制破骨細(xì)胞對(duì)骨的吸附。
目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，某些化合物為αvβ3和αvβ5受體的有效抑制劑。尤其是，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)此類(lèi)化合物是玻連蛋白受體(超過(guò)纖維蛋白原受體)的更有效的抑制劑。
本發(fā)明概述本發(fā)明包括下面將要敘述的式(Ⅰ)化合物，所述化合物具有抑制玻連蛋白受體的藥理學(xué)活性，因而用于治療炎癥、癌及心血管疾病如動(dòng)脈粥樣硬化和再狹窄，及以骨的吸收為誘因的疾病，例如骨質(zhì)疏松。
本發(fā)明也是包含根據(jù)式(Ⅰ)化合物和藥用載體的藥用組合物。
本發(fā)明也是治療由玻連蛋白受體介導(dǎo)的疾病的方法。尤其是，本發(fā)明化合物用于治療動(dòng)脈粥樣硬化、再狹窄，炎癥、癌及骨的吸收為誘因的疾病，例如骨質(zhì)疏松。
本發(fā)明敘述本發(fā)明包括為玻連蛋白受體超過(guò)纖維蛋白原受體的更有效抑制劑的新化合物。所述新化合物包含苯并氮雜_核心，其中含氮取代基存在于苯并氮雜_的芳族六元環(huán)上和含酸性部分的脂族取代基存在于苯并氮雜_的七元環(huán)上。據(jù)認(rèn)為苯并氮雜_環(huán)體系與玻連蛋白有利地相互作用且定位于所述六元環(huán)和七元環(huán)的取代基側(cè)鏈上，以使它們也能與所述受體有利地相互作用。優(yōu)選在苯并氮雜_的七元環(huán)的脂族取代基上的酸性基團(tuán)和苯并氮雜_的芳族六元環(huán)上的含氮取代基上的氮之間存在通過(guò)最短的分子內(nèi)途徑的大約12-14個(gè)插入的共價(jià)鍵。
本發(fā)明包含式(Ⅰ)化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽
其中R1為R7、或A-C0-4烷基、A-C2-4鏈烯基、A-C2-4鏈炔基、A-C3-4氧代鏈烯基、A-C3-4氧代鏈炔基、A-C1-4氨基烷基、A-C3-4氨基鏈烯基、A-C3-4氨基鏈炔基，任選由一個(gè)或多個(gè)R10或R7的任何可能的組合取代；A是H、C3-6環(huán)烷基、Het或Ar；R7為-COR8、-COCR’2R9、-C(S)R8、-S(O)mOR’、-S(O)mNR’R”、-PO(OR’)、-PO(OR’)2、-NO2或四唑基；每個(gè)R8獨(dú)立為-OR’、NR’R”、-NR’SO2R’、-NR’OR’或-OCR’2CO(O)R’；R9為-OR’、-CN、-S(O)rR’、-S(O)mNR’2、-C(O)R’、-C(O)NR’2或-CO2R’；R10為H、鹵代、-OR11、-CN、NR’R11、-NO2、-CF3、-CF3S(O)r、CO2R’、CONR’2、A-C0-6烷基、A-C1-6氧代烷基、A-C2-6鏈烯基、A-C2-6鏈炔基、A-C0-6烷氧基、A-C0-6烷基氨基或A-C0-6烷基-S(O)r-；R11為R’、-C(O)R’、-C(O)NR’2、C(O)OR’、-S(O)mR’或-S(O)mNR’2；R2為
W為-(CHRg)a-U-(CHRg)b-；U不存在或?yàn)镃O、CRg2、C(=CRg2)、S(O)k、O、NRg、CRgORg、CRg(ORk)CRg2、CRg2CRg(ORk)、C(O)CRg2、CRg2C(O)、CONRi、NRiCO、OC(O)、C(O)O、C(S)O、OC(S)、C(S)NRg、NRgC(S)、S(O)2NRg、NRgS(O)2N=N、NRgNRg、NRgCRg2、CRg2NRg、CRg2O、OCRg2、C≡C或CRg=CRg；G為NRe、S或O；Rg為H、C1-6烷基、Het-C0-6烷基、C3-7環(huán)烷基-C0-6烷基或Ar-C0-6烷基；Rk為Rg、C(O)Rg或C(O)ORf；Ri為H、C1-6烷基、Het-C0-6烷基、C3-7環(huán)烷基-C0-6烷基、Ar-C0-6烷基或由1-3個(gè)選自下列的基團(tuán)取代的C1-6烷基鹵素、CN、NRg2、ORg、SRg、CO2Rg和CON(Rg)2；Rf為H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基；Re為H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基、C3-7環(huán)烷基-C0-6烷基或(CH2)kCO2Rg；Rb和Rc獨(dú)立選自H、C1-6烷基、ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基、或C3-6環(huán)烷基-C0-6烷基、鹵素、CF3、ORf、S(O)kRf、CORf、NO2、N(Rf)2、CON(Rf)2、CH2N(Rf)2，或Rb和Rc結(jié)合共同形成5或6元芳族或非芳族碳環(huán)或雜環(huán)，任選由多達(dá)3個(gè)選自下列的取代基取代鹵素、CF3、C1-4烷基、ORf、S(O)kRf、CORf、CO2Rf、OH、NO2、N(Rf)2、CO(NRf)2和CH2N(Rf)2；或亞甲基二氧基；Q1、Q2、Q3和Q4獨(dú)立為N或C-Ry，前提為Q1、Q2、Q3和Q4中不超過(guò)一個(gè)為N；R’為H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基或C3-6環(huán)烷基-C0-6烷基；R”為R’、C(O)R’或-C(O)OR’；R_為H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基、或C3-6環(huán)烷基-C0-6烷基、鹵素、CF3、ORf、S(O)kRf、CORf、NO2、N(Rf)2、CO(NRf)2、CH2(NRf)2；Ry為H、鹵素、-ORg、-SRg、CN、-NRgRk、-NO2、-CF3、CF3S(O)r-、-CO2Rg、-CORg或-CONRg2，或由下列基團(tuán)任選取代的C1-6烷基鹵素、-ORg、-SRg、CN、-NRgR”、-NO2、-CF3、R’S(O)r-、-CO2Rg、-CORg或-CONRg2；a是0、1或2；b是0、1或2；k是0、1或2；m是1或2；r是0、1或2；s是0、1或2；u是0或1；及v是0或1。
本發(fā)明化合物的藥學(xué)上可接受的加成鹽和配合物也包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。在本發(fā)明化合物可以具有一個(gè)或多個(gè)手性中心的情況下，除非特別指明，本發(fā)明包括各種可用常規(guī)技術(shù)合成和拆分的獨(dú)特的非外消旋化合物。在其中化合物具有不飽和碳-碳雙鍵的情況下，順式(Z)和反式(E)兩種異構(gòu)體均在本發(fā)明的范圍內(nèi)。在化合物可以以互變形式如酮-烯醇互變體，例如
和
存在的情況下，每種互變形式，無(wú)論是以平衡態(tài)或是通過(guò)R1適當(dāng)?shù)娜〈鷣?lái)鎖定的形式，都應(yīng)認(rèn)為包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。
式(Ⅰ)化合物抑制玻連蛋白和其它含有RGD的肽與玻連蛋白受體的結(jié)合。抑制破骨細(xì)胞上的玻連蛋白受體可抑制破骨細(xì)胞的骨的吸收，并可用于治療其中骨的吸收與病理學(xué)有關(guān)的疾病，如骨質(zhì)疏松和骨關(guān)節(jié)炎。
另一方面，本發(fā)明為一種刺激骨形成的方法，它包括給予引起骨鈣蛋白釋放增加的化合物。增加骨質(zhì)的產(chǎn)生對(duì)于其中礦物質(zhì)化的骨質(zhì)缺乏或需要骨質(zhì)改造的疾病狀態(tài)，如骨折愈合及預(yù)防骨折是明顯有益的。產(chǎn)生骨(結(jié)構(gòu))質(zhì)丟失的疾病和代謝失調(diào)也可由此種治療中獲益，例如，甲狀旁腺功能亢進(jìn)、paget氏病、惡性高鈣血癥、骨轉(zhuǎn)移產(chǎn)生的溶骨性損害、因固定術(shù)或性激素缺乏引起的骨丟失、Behcet’s病、骨軟化癥、骨肥大和大理石樣骨病都能從給予本發(fā)明化合物而獲得益處。
另外，由于本發(fā)明化合物抑制許多不同類(lèi)型細(xì)胞的玻連蛋白受體，所述化合物將用于治療炎性疾病如類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和牛皮癬，以及心血管疾病如動(dòng)脈粥樣硬化和再狹窄。本發(fā)明的式(Ⅰ)化合物可以用于治療或預(yù)防其它疾病，包括(但不限于)血栓栓塞性疾病、哮喘、過(guò)敏、成人呼吸窘迫癥、移植對(duì)宿主反應(yīng)、器官移植排斥反應(yīng)、膿毒性休克、濕疹、接觸性皮炎、炎性腸道疾病和其它自身免疫性疾病。本發(fā)明化合物對(duì)傷口愈合也是有用的。
本發(fā)明化合物也用于治療(包括預(yù)防)血管生成紊亂。本發(fā)明所用的術(shù)語(yǔ)血管生成紊亂包括異常的新血管生成。在新血管生長(zhǎng)的原因?yàn)?或歸因于)與疾病有關(guān)的病理時(shí)，抑制血管生成將減輕所述疾病的有害的作用。此類(lèi)疾病目標(biāo)的一個(gè)實(shí)例為糖尿病性視網(wǎng)膜病。在需要新血管生長(zhǎng)以支持有害的組織生長(zhǎng)時(shí)，抑制血管生成將減少該組織的血液供應(yīng)并由此引起需要血液供應(yīng)的組織團(tuán)塊的減小。實(shí)例包括腫瘤的生長(zhǎng)，其中新血管生成是一種連續(xù)需要，以使腫瘤生長(zhǎng)并實(shí)現(xiàn)實(shí)體瘤的轉(zhuǎn)移。因而，本發(fā)明化合物抑制腫瘤組織的新血管生成，從而防止腫瘤的轉(zhuǎn)移和腫瘤的生長(zhǎng)。
因此，根據(jù)本發(fā)明的方法，使用本發(fā)明的化合物抑制血管生成可以改善所述疾病的癥狀，并在某些情況下可以治愈所述疾病。
本發(fā)明化合物的另一治療目的是以新血管生成為特征的眼部疾病。此類(lèi)眼部疾病包括角膜新血管生成疾病，如角膜移植、皰疹性角膜炎、梅毒角膜炎、與使用隱性眼睛有關(guān)的翼狀胬肉和新血管角膜翳。其它的眼疾還包括與老年有關(guān)的黃斑變形、假定的(presumed)眼莢膜組織胞漿菌病和新血管性青光眼。
本發(fā)明還提供抑制腫瘤生長(zhǎng)的方法，其包括分階段給予式(Ⅰ)化合物或?qū)⑹?Ⅰ)化合物和抗腫瘤劑(如托泊替堪和順鉑)以物理組合的方式聯(lián)合給予。
至于式(Ⅰ)化合物R2適合為
，其中Q1、Q2和Q3各自為CRy,Q4為CRy或N,u是0，優(yōu)選每個(gè)R’為H,R”為H、C1-6烷基、-C(O)C1-6烷基、-C(O)OC1-6烷基、-C(O)C0-6烷基-Ar或C(O)OC0-6烷基-Ar,W為-CH2-CH2-,Ry為H、鹵素、-ORg、-SRg、CN、-NRgRk、-NO2、-CF3、CF3S(O)r-、-CO2Rg、-CORg、-CONRg2或C1-6烷基?；蛘逺2為
，其中Q1、Q2和Q3各自為CH和u是0，優(yōu)選每個(gè)R’為H,R”為H或C1-4烷基，W為-CH2-CH2-和v是0?；蛘逺2為
，其中G為NH,Rb和Rc各自為H，優(yōu)選W為NRg-(CHRg)b-。
或者R2為
，其中G為NH,Rb和Rc結(jié)合共同形成5或6元芳族或非芳族碳環(huán)或雜環(huán)，任選由多達(dá)3個(gè)選自下列的取代基取代鹵素、CF3、C1-4烷基、ORf、S(O)kRf、CORf、CO2Rf、OH、NO2、N(Rf)2、CO(NRf)2和CH2N(Rf)2；或亞甲基二氧基。優(yōu)選Rb和Rc結(jié)合共同形成6元芳族碳環(huán)或雜環(huán)，且W為-CH2-CH2-。
或者R2為
其中每個(gè)R’為H,R”為H或C1-4烷基，Rg為H或C1-4烷基及s為0、1或2，優(yōu)選W為-CH2-CH2-。
至于式(Ⅰ)化合物R1適合為H,C1-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基、C3-6環(huán)烷基-C0-6烷基、-CH2CF3-、-(CH2)1-2C(O)OR’或-(CH2)2OR’。優(yōu)選R1為H,C1-4烷基、Ph-C0-4烷基、-CH2CF3-、-(CH2)1-2C(O)OR’或-(CH2)2OR’,其中R1為H或C1-4烷基。最優(yōu)選R1為-CH2CF3-。
本發(fā)明的代表性的新化合物為下列化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-8-[3-(4-氨基-2吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-8-[3-(4-甲氧基-2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-8-[3-(2-咪唑基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-8-[3-[2-(1,4,5,6-四氫嘧啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-8-[3-(6-氨基-2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-8-[2-(2-苯并咪唑基)乙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-8-[2-(4-氮雜-2-苯并咪唑基)乙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-8-[2-[6-(甲基氨基)吡啶-2-基]-1-乙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-8-[2-(苯并咪唑-2-基)-1-乙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-8-[3-(4-氨基吡啶-2-基氨基]-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-
四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-3-氧代-8-[3-(嘧啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(R)-8-[3-(4-氨基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-3-氧代-8-[3-[(1,4,5,6-四氫嘧啶-2-基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(S)-8-[3-(4-氨基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-2-甲基-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(甲基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-2-芐基-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-2-(羧甲基)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-2-(4-氨基芐基)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(苯甲?；?氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-8-[3-(2-咪唑啉-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-8-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-1-乙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-8-[3-(4,6-二甲基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-8-[3-(4,5,6,7-四氫-1H-1,3-二氮雜_-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁基乙?；?氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(異丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-3-氧代-8-[3-(4-甲基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(甲基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(R)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(S)-8-[3-(4-甲基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(S)-3-氧代-8-[3-(1,4,5,6-四氫嘧啶-2-基)氨基]-1-丙氧基]-2-[4-(三氟甲基)芐基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(S)-3-氧代-2-(2-苯基乙基)-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-
2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(S)-8-[2-[6-(甲基氨基)吡啶-2-基]-1-乙氧基]-3-氧代-2-(2-苯乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(S)-8-[2-[6-(甲基氨基)吡啶-2-基]-1-乙氧基]-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；和(S)-8-[2-[6-(甲基氨基)吡啶-2-基]-1-乙氧基]-3-氧代-2-[4-(三氟甲基)芐基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸。
本發(fā)明優(yōu)選的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽包括(S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(S)-8-[2-[6-(甲基氨基吡啶-2-基)-1-乙氧基]-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；和(S)-8-[3-(4-甲基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸。
在本發(fā)明化合物可以具有一個(gè)或多個(gè)手性中心的情況下，除非特別指明，本發(fā)明包括可通過(guò)常規(guī)技術(shù)合成和拆分的各種單一的非外消旋化合物。根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選(S)構(gòu)象的式(Ⅰ)化合物。
在化合物具有不飽和碳-碳雙鍵的情況下，順式(Z)和反式(E)兩種異構(gòu)體均在本發(fā)明范圍內(nèi)。在任何一種情況下出現(xiàn)的任何取代基的意義不受它的意義的限制，或在任何其它情況下出現(xiàn)的任何取代基的意義不受其它取代基的意義的限制。
本發(fā)明化合物的藥物前體也包括在本發(fā)明中。藥物前體被認(rèn)為是任何共價(jià)結(jié)合的載體，它在體內(nèi)釋放出活性的根據(jù)式(Ⅰ)的母體藥物。因此，本發(fā)明的另一方面為新的藥物前體，它也是制備式(Ⅰ)化合物，式(Ⅱ)化合物的中間體。所述式(Ⅱ)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽結(jié)構(gòu)如下
其中R1為R7、或A-C0-4烷基、A-C2-4鏈烯基、A-C2-4鏈炔基、A-C3-4氧代鏈烯基、A-C3-4氧代鏈炔基、A-C1-4氨基烷基、A-C3-4氨基鏈烯基、A-C3-4氨基鏈炔基，任選由一個(gè)或多個(gè)R10或R7的任何可能的組合取代；A是H、C3-6環(huán)烷基、Het或Ar；R7為-COR8、-COCR’2R9、-C(S)R8、-S(O)mOR’、-S(O)mNR’R”、-PO(OR’)、-PO(OR’)2、-NO2或四唑基；每個(gè)R8獨(dú)立為-OR’、NR’R”、-NR’SO2R’、-NR’OR’或-OCR’2CO(O)R’；R9為-OR’、-CN、-S(O)rR’、-S(O)mNR’2、-C(O)R’、-C(O)NR’2或-CO2R’；R10為H、鹵代、-OR11、-CN、NR’R11、-NO2、-CF3、-CF3S(O)r、CO2R’、CONR’2、A-C0-6烷基、A-C1-6氧代烷基、A-C2-6鏈烯基、A-C2-6鏈炔基、A-C0-6烷氧基、A-C0-6烷基氨基或A-C0-6烷基-S(O)r-；R11為R’、-C(O)R’、-C(O)NR’2、C(O)OR’、-S(O)mR’或-S(O)mNR’2；R2為
W為-(CHRg)a-U-(CHRg)b-；U不存在或?yàn)镃O、CRg2、C(=CRg2)、S(O)k、O、NRg、CRgORg、CRg(ORk)CRg2、CRg2CRg(ORk)、C(O)CRg2、CRg2C(O)、CONRi、NRiCO、OC(O)、C(O)O、C(S)O、OC(S)、C(S)NRg、NRgC(S)、S(O)2NRg、NRgS(O)2N=N、NRgNRg、NRgCRg2、CRg2NRg、CRg2O、OCRg2、C≡C或CRg=CRg；G為NRe、S或O；Rg為H、C1-6烷基、Het-C0-6烷基、C3-7環(huán)烷基-C0-6烷基或Ar-C0-6烷基；Rk為Rg、C(O)Rg或C(O)ORf；Ri為H、C1-6烷基、Het-C0-6烷基、C3-7環(huán)烷基-C0-6烷基、Ar-C0-6烷基或由1-3個(gè)選自下列的基團(tuán)取代的C1-6烷基鹵素、CN、NRg2、ORg、SRg、CO2Rg和CON(Rg)2；Rf為H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基；Re為H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基、C3-7環(huán)烷基-C0-6烷基或(CH2)kCO2Rg；Rb和Rc獨(dú)立選自H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基、或C3- 6環(huán)烷基-C0-6烷基、鹵素、CF3、ORf、S(O)kRf、CORf、NO2、N(Rf)2、CON(Rf)2、CH2N(Rf)2，或Rb和Rc結(jié)合共同形成5或6元芳族或非芳族碳環(huán)或雜環(huán)，任選由多達(dá)3個(gè)選自下列的取代基取代鹵素、CF3、C1-4烷基、ORf、S(O)kRf、CORf、CO2Rf、OH、NO2、N(Rf)2、CO(NRf)2和CH2N(Rf)2；或亞甲基二氧基；Q1、Q2、Q3和Q4獨(dú)立為N或C-Ry，前提為Q1、Q2、Q3和Q4中不超過(guò)一個(gè)為N；R’為H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基或C3-6環(huán)烷基-C0-6烷基；R”為R’、C(O)R’或-C(O)OR’；R_為H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基、或C3-6環(huán)烷基-C0-6烷基、鹵素、CF3、ORf、S(O)kRf、CORf、NO2、N(Rf)2、CO(NRf)2、CH2N(Rf)2；Ry為H、鹵素、-ORg、-SRg、CN、-NRgRk、-NO2、-CF3、CF3S(O)r-、-CO2Rg、-CORg或-CONRg2，或由下列基團(tuán)任選取代的C1-6烷基鹵素、-ORg、-SRg、CN、-NRgR”、-NO2、-CF3、R’S(O)r-、-CO2Rg、-CORg或-CONRg2；a是0、1或2；b是0、1或2；k是0、1或2；m是1或2；r是0、1或2；s是0、1或2；u是0或1；及v是0或1。
本發(fā)明的代表性的新藥物前體或其藥學(xué)上可接受的鹽如下(±)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯；和(±)-8-[3-(4-氨基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸乙酯。
本發(fā)明的又一方面為新的式(Ⅲ)化合物的中間體或其藥學(xué)上可接受的鹽
其中R1為R7、或A-C0-4烷基、A-C2-4鏈烯基、A-C2-4鏈炔基、A-C3-4氧代鏈烯基、A-C3-4氧代鏈炔基、A-C1-4氨基烷基、A-C3-4氨基鏈烯基、A-C3-4氨基鏈炔基，任選由一個(gè)或多個(gè)R10或R7的任何可能的組合取代；A是H、C3-6環(huán)烷基、Het或Ar；R7為-COR8、-COCR’2R9、-C(S)R8、-S(O)mOR’、-S(O)mNR’R”、-PO(OR’)、-PO(OR’)2、-NO2或四唑基；每個(gè)R8獨(dú)立為-OR’、NR’R”、-NR’SO2R’、-NR’OR’或-OCR’2CO(O)R’；R9為-OR’、-CN、-S(O)rR’、-S(O)mNR’2、-C(O)R’、-C(O)NR’2或-CO2R’；R10為H、鹵代、-OR11、-CN、NR’R11、-NO2、-CF3、-CF3S(O)r、CO2R’、CONR’2、A-C0-6烷基、A-C1-6氧代烷基、A-C2-6鏈烯基、A-C2-6鏈炔基、A-C0-6烷氧基、A-C0-6烷基氨基或A-C0-6烷基-S(O)r-；R11為R’、-C(O)R’、-C(O)NR’2、C(O)OR’、-S(O)mR’或-S(O)mNR’2；W為-(CHRg)a-U-(CHRg)b-；U不存在或?yàn)镃O、CRg2、C(=CRg2)、S(O)k、O、NRg、CRgORg、CRg(ORk)CRg2、CRg2CRg(ORk)、C(O)CRg2、CRg2C(O)、CONRi、NRiCO、OC(O)、C(O)O、C(S)O、OC(S)、C(S)NRg、NRgC(S)、S(O)2NRg、NRgS(O)2N=N、NRgNRg、NRgCRg2、CRg2NRg、CRg2O、OCRg2、C≡C或CRg=CRg；Rg為H、C1-6烷基、Het-C0-6烷基、C3-7環(huán)烷基-C0-6烷基或Ar-C0-6烷基；Rk為Rg、C(O)Rg或C(O)ORf；Ri為H、C1-6烷基、Het-C0-6烷基、C3-7環(huán)烷基-C0-6烷基、Ar-C0-6烷基或由1-3個(gè)選自下列的基團(tuán)取代的C1-6烷基鹵素、CN、NRg2、ORg、SRg、CO2Rg和CON(Rg)2；Rf為H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基；Q1、Q2、Q3和Q4獨(dú)立為N或C-Ry，前提為Q1、Q2、Q3和Q4中不超過(guò)一個(gè)為N；R’為H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基或C3-6環(huán)烷基-C0-6烷基；R”為R’、C(O)R’或-C(O)OR’；Ry為H、鹵素、-ORg、-SRg、CN、-NRgRk、-NO2、-CF3、CF3S(O)r-、-CO2Rg、-CORg或-CONRg2，或由下列基團(tuán)任選取代的C1-6烷基鹵素、-ORg、-SRg、CN、-NRgR”、-NO2、-CF3、R’S(O)r-、-CO2Rg、-CORg或-CONRg2；a是0、1或2；b是0、1或2；m是1或2；和r是0、1或2。
肽和化學(xué)領(lǐng)域中使用的縮略語(yǔ)和符號(hào)在此用來(lái)描述本發(fā)明化合物。一般來(lái)說(shuō)，氨基酸縮略語(yǔ)遵循IUPAC-IUB Joint Commission onBiachemical Nomenclature的命名原則，如在Eur.J.Biochem.,158,9(1984)中所述。
此處所用的C1-4烷基意指任選取代的1-4個(gè)碳原子的烷基，包括甲基、乙基、正-丙基、異丙基、正-丁基、異丁基和叔-丁基。C1-6烷基還包括戊基、正-戊基、異戊基、新戊基和己基及其簡(jiǎn)單的脂肪族異構(gòu)體。C0-4烷基和C0-6還指不需要烷基存在(即存在共價(jià)鍵)。
任何C1-4烷基或C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6鏈炔基或C1-6氧代烷基可任選為基團(tuán)Rx取代，該基團(tuán)可以在任何形成穩(wěn)定結(jié)構(gòu)的碳原子上并可通過(guò)常規(guī)合成技術(shù)獲得。對(duì)于Rx的合適基團(tuán)為C1-4烷基、OR’、SR’、C1-4烷基磺?；1-4烷基sulfoxyl、-CN、N(R’)2、CH2N(R’)2、-NO2、-CF3、-CO2R’-CON(R’)2、-COR’、-NR’C(O)R’、氟、氯、溴、碘或CF3S(O)r-，其中r是0、1或2。
鹵素或鹵代指氟、氯、溴和碘。
此處所用的Ar或芳基指苯基或萘基，或由1-3個(gè)取代基取代的苯基或萘基，所述取代基有，例如，如上對(duì)烷基定義的那些基團(tuán)，尤其是C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷硫基、CF3、NH2、氟、氯、溴或碘。
Het或雜環(huán)指任選取代的5或6元單環(huán)，或含有1-3個(gè)選自氮、氧和硫雜原子的9或10元雙環(huán)，它們是穩(wěn)定的并可通過(guò)常規(guī)化學(xué)合成獲得。示例性的雜環(huán)為苯并呋喃基、苯并咪唑、苯并吡喃、苯并噻吩、呋喃、咪唑、二氫吲哚、嗎琳、哌啶、哌嗪、吡咯、吡咯烷、四氫吡啶、吡啶、噻唑、噻吩、喹啉、異喹啉、以及四氫-或五氫喹啉和異喹啉。Het環(huán)上多達(dá)3個(gè)取代基(如上對(duì)烷基定義的那些基團(tuán))的任何可能的組合可通過(guò)化學(xué)合成獲得，且是穩(wěn)定的，并都在本發(fā)明范圍內(nèi)。
C3-7環(huán)烷基指任選取代的3-7個(gè)碳原子的碳環(huán)體系，其可以含有多至兩個(gè)不飽和的碳-碳雙鍵。常見(jiàn)的C3-7環(huán)烷基為環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)戊烯基、環(huán)己基、環(huán)己烯基和環(huán)庚基。環(huán)烷基環(huán)上多達(dá)3個(gè)取代基(如上對(duì)烷基定義的那些基團(tuán))的任何組合可通過(guò)化學(xué)合成獲得，且是穩(wěn)定的，并都在本發(fā)明范圍內(nèi)。
當(dāng)Rb和Rc結(jié)合共同形成與Rb和Rc連接的環(huán)稠合的5或6元芳族或非芳族碳環(huán)或雜環(huán)，所形成的環(huán)通常將為選自上面對(duì)Het定義的5或6元雜環(huán)，或?yàn)楸交h(huán)、環(huán)己基環(huán)或環(huán)戊基環(huán)。優(yōu)選Rb和Rc為-D1=D2-D3=D4，其中D1-D4獨(dú)立為CH、N或C-Rx，前提為D1-D4中不超過(guò)2個(gè)為氮。最優(yōu)選當(dāng)Rb和Rc結(jié)合在一起時(shí)，它們形成-CH=CH-CH=CH-。
某些基團(tuán)在此用縮寫(xiě)表示。t-Bu指叔丁基，Boc指叔-丁氧基羰基，F(xiàn)moc指芴基甲氧基羰基，Ph指苯基，Cbz指芐氧基羰基，Bn指芐基，Me指甲基，Et指乙基，Ac指乙酰基，Alk指C1-4烷基、Nph指1-或2-萘基和cHex指環(huán)己基。Tet指5-四唑基。
某些試劑在此用縮寫(xiě)表示。DCC指二環(huán)己基碳二亞胺，DMAP指二甲基氨基吡啶。DIEA指二異丙基乙基胺，EDC指1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽。HOBt指1-羥基苯并三唑，THF指四氫呋喃，DIEA指二異丙基乙胺，DEAD指重氮二甲酸二乙酯，PPh3指三苯膦，DIAD指重氮二甲酸二異丙酯，DME指二甲氧基乙烷，DMF指二甲基甲酰胺，NBS指N-溴代琥珀酰亞胺，Pd/C指鈀炭催化劑，PPA指多磷酸，DPPA指二苯基磷酰疊氮化物，BOP指苯并三唑-1-基氧基-三(二甲基氨基)六氟磷酸磷鎓，HF指氫氟酸，TEA指三乙胺，TFA指三氟乙酸，PCC指氯酸鉻吡啶鎓。
一般通過(guò)使式(Ⅳ)化合物與具有任何被保護(hù)的活性功能基團(tuán)的式(Ⅴ)化合物反應(yīng)
其中R1和R2如式(Ⅰ)中所定義，且L1為OH或鹵代，制備式(Ⅰ)化合物；然后除去任何保護(hù)基團(tuán)，并任選形成藥學(xué)上可接受的鹽。
適當(dāng)?shù)?，通過(guò)使式(Ⅳ)化合物與具有任何被保護(hù)的活性功能基團(tuán)的式(Ⅵ)化合物反應(yīng)
其中R1、R’、R”、W、Q1、Q2、Q3和Q4如式(Ⅰ)中所定義，制備式(Ⅰ)化合物；然后除去任何保護(hù)基團(tuán)，并任選形成藥學(xué)上可接受的鹽。
對(duì)于式(Ⅵ)化合物而言，優(yōu)選Q1、Q2、Q3和Q4為CH,W為-CH2-CH2-,R’為H,R”為H、C1-4烷基或-C(O)OC1-4烷基。式(Ⅳ)化合物與式(Ⅵ)化合物之間的反應(yīng)適宜在重氮二甲酸二乙酯和三苯膦存在下，在非質(zhì)子溶劑中進(jìn)行。
或者，通過(guò)使式(Ⅳ)化合物與具有任何被保護(hù)的活性功能基團(tuán)的式(Ⅶ)化合物反應(yīng)
其中R1、R’、R”、W、Q1、Q2、Q3和v如式(Ⅰ)中所定義，制備式(Ⅰ)化合物；然后除去任何保護(hù)基團(tuán)，并任選形成藥學(xué)上可接受的鹽。
對(duì)于式(Ⅶ)化合物而言，優(yōu)選Q1、Q2和Q3為CH,W為-CH2-CH2-,v為0,R’為H,R”為H或C1-4烷基。式(Ⅳ)化合物與式(Ⅶ)化合物之間的反應(yīng)適宜在重氮二甲酸二乙酯和三苯膦存在下，在非質(zhì)子溶劑中進(jìn)行。
通過(guò)流程Ⅰ-Ⅶ中所述的通法制備式(Ⅰ)化合物。
流程Ⅰ
a)2-[(3-羥基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物，DEAD,(Ph)3P,DMF；b)環(huán)己烯，10％Pd/C,2-丙醇；c)1.0N氫氧化鋰，THF，水，然后酸化。
使Ⅰ-1化合物(按照Bondinell等(WO93/00095)所述通用方法制備)與2-[(3-羥基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物進(jìn)行Mitsunobu型偶合反應(yīng)(Organic Reactions 1992,42,335-656；Synthesis 1981,1-28)以提供Ⅰ-2。該反應(yīng)受在重氮二甲酸二乙酯和三苯膦之間形成的配合物的介導(dǎo)，并在非質(zhì)子溶劑如THF、二氯甲烷或DMF中進(jìn)行。在轉(zhuǎn)移氫化條件下，在惰性溶劑如甲醇、乙醇或2-丙醇中，用鈀炭催化劑(優(yōu)選在活性炭上的鈀金屬)使Ⅰ-2的吡啶-N-氧化物部分還原為相應(yīng)的吡啶Ⅰ-3。通常在這類(lèi)反應(yīng)中使用環(huán)己烯、1,4-環(huán)己二烯、甲酸和甲酸的鹽，例如甲酸鉀或甲酸銨作為氫轉(zhuǎn)移劑。用含水的堿，例如在THF水溶液中的氫氧化鋰或在含水甲醇或乙醇中的氫氧化鈉水解Ⅰ-3的甲酯，用適當(dāng)?shù)乃崛鏣FA或鹽酸酸化中間體甲酸鹽獲得甲酸Ⅰ-4。或者，如果需要，可以分離該中間體甲酸鹽，或通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法可以制備游離甲酸的甲酸鹽。
通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它方法也可以制備式(Ⅰ)化合物。例如，通過(guò)使式1-流程1化合物的醇基團(tuán)與含有可取代基團(tuán)，例如氯代、溴代或碘代基團(tuán)的R2-化合物反應(yīng)可以形成式(Ⅰ)化合物的醚鍵。其它的醚-形成反應(yīng)也可以采用，并且對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，應(yīng)該是顯而易見(jiàn)的。
流程Ⅱ
a)2-[N-(3-羥基-1-丙基)-N-(叔-丁氧基羰基)氨基]吡啶-N-氧化物，DEAD,(Ph)3P,DMF；b)LiHMDS,4-三氟甲基芐基溴，DMF,c)環(huán)己烯，10％Pd/C,2-丙醇；d)1.0N氫氧化鈉，甲醇；e)HCl/二氧六環(huán)；按照流程1中的詳述方法，使Ⅱ-1化合物(如流程1中所述制備)與2-[N-(3-羥基-1-丙基)-N-(叔-丁氧基羰基)氨基]吡啶-N-氧化物進(jìn)行Mitsunobu型偶合反應(yīng)。在本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的標(biāo)準(zhǔn)烷化條件下，可以使生成的產(chǎn)物Ⅱ-2在2位(苯并氮雜_編號(hào))烷基化。例如，在適當(dāng)?shù)娜軇┲?，通常為T(mén)HF、DMF、DME或它們的混合物，可用堿如氫化鈉、LDA或六甲基二硅疊氮化鋰處理Ⅱ-2，以使酰胺N-H去質(zhì)子化。用適當(dāng)?shù)挠H電子試劑如烷基鹵或芐基鹵處理生成的陰離子類(lèi)可獲得產(chǎn)物，例如Ⅱ-3?？梢匀缌鞒挞裰兴觯瑢ⅱ?3的N-氧化物還原獲得Ⅱ-4,Ⅱ-4可如流程Ⅰ中所述經(jīng)皂化為Ⅱ-5。在Greene(“ProtectiveGroups in Organic Synthsis”(由Wiley-Interscience出版))所述的標(biāo)準(zhǔn)酸化條件下可完成Ⅱ-5的去保護(hù)得到Ⅱ-6。這些條件對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是眾所周知的。或者，通過(guò)交替的次序，例如先將Ⅱ-3的Boc去保護(hù)，接著經(jīng)N-氧化物的還原，最后經(jīng)皂化可以將Ⅱ-3轉(zhuǎn)化為Ⅱ-6。
流程Ⅲ
a)2-[(3-羥基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物，DEAD,(Ph)3P,DMF；b)LiHMDS,CH3I,DMF；c)環(huán)己烯，10％Pd/C,2-丙醇；d)1.0N氫氧化鈉，甲醇，然后酸化。
在本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的標(biāo)準(zhǔn)烷化條件下，可以使Ⅲ-2(如流程Ⅰ所述制備)在2位(苯并氮雜_編號(hào))和在連接吡啶環(huán)的氮原子上同時(shí)烷基化。例如，在適當(dāng)?shù)娜軇┲?，通常為T(mén)HF、DMF、DME或它們的混合物，可用至少2摩爾量的堿如氫化鈉、LDA或六甲基二硅疊氮化鋰處理Ⅲ-2，以進(jìn)行去質(zhì)子化作用。用過(guò)量的適當(dāng)?shù)挠H電子試劑如烷基鹵或芐基鹵處理生成的陰離子類(lèi)可產(chǎn)生雙-烷基化作用，以獲得所述產(chǎn)物，例如Ⅲ-3。按照流程Ⅰ和Ⅱ中所述方法，可以將Ⅲ-3轉(zhuǎn)化為Ⅲ-5。流程Ⅳ
a)環(huán)己烯，10％Pd/C,2-丙醇；b)HCl/二氧六環(huán)；c)叔-丁基乙酰氯，Et3N，二氯甲烷；d)1.0N氫氧化鈉，甲醇，然后酸化。
在本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的標(biāo)準(zhǔn)烷化條件下，可以使Ⅳ-2(如流程Ⅰ-Ⅲ所述方法由Ⅳ-1制備)在連接吡啶環(huán)的氮原子上烷基化。例如，在適當(dāng)?shù)娜軇ǔ槎燃淄橹?，在適當(dāng)?shù)乃崆宄齽?一般為三乙胺、二異丙基乙胺或吡啶)存在下，使Ⅳ-2與酰化劑如叔-丁基乙酰氯反應(yīng)提供Ⅳ-3。已知還有許多氨酰化的方法，并可在標(biāo)準(zhǔn)參考書(shū)如“Compendium in Organic Synthetic Methods”卷Ⅰ～Ⅳ(由Wiley-Interscience出版)中發(fā)現(xiàn)。按照流程Ⅰ-Ⅲ中所述方法使Ⅳ-3皂化以提供Ⅳ-4。
流程Ⅴ
a)3-(4-硝基芐氧基羰基氨基)-1-丙醇，DEAD,(Ph)3P,DMF，二氯甲烷；b)H210％Pd/C，乙醇；c)2-甲基硫代-2-咪唑琳氫碘酸鹽，(i-Pr)2NEt，二甲基乙酰胺，100℃；d)1.0N氫氧化鋰，THF，水，然后酸化。
按照流程1中的所述的Mitsunobu型偶合反應(yīng)方法，使Ⅴ-1化合物(如流程1中所述制備)與3-氨基-1-丙醇的保護(hù)的變體，如3-(叔-丁氧基羰基氨基)-1-丙醇，3-(芐氧基羰基氨基)-1-丙醇或3-(4-硝基芐氧基羰基氨基)-1-丙醇反應(yīng)。使生成的化合物，Ⅴ-2去保護(hù)，提供Ⅴ-3。如本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的，去保護(hù)的條件根據(jù)存在于Ⅴ-2中的官能度和保護(hù)基團(tuán)進(jìn)行選擇。例如，在鈀催化劑(一般為鈀炭或在炭上的氫氧化鈀)存在下，在適合的溶劑(通常為甲醇、乙醇、乙酸乙酯或它們的混合物)中，通過(guò)氫解可除去存在于Ⅴ-2的對(duì)-硝基-Cbz基團(tuán)。如果需要，所述氫解可以在酸例如鹽酸存在下進(jìn)行，得到相應(yīng)的Ⅴ-2的銨鹽。在堿如二異丙基乙胺的存在下，在適合的溶劑如甲醇、乙醇、DMF或二甲基乙酰胺中，使Ⅴ-3與2-甲基硫代-2-咪唑琳氫碘酸鹽反應(yīng)，提供Ⅴ-4。影響有關(guān)轉(zhuǎn)化的類(lèi)似條件在WO95/32710中有描述。如流程Ⅰ所述可實(shí)現(xiàn)獲得Ⅴ-5的皂化。
流程Ⅵ
a)3-(叔-丁氧基羰基氨基)-1-丙醇，DEAD,(Ph)3P,DMF,THF；b)TFA，二氯甲烷；c)2-溴代嘧啶，碳酸氫鈉，乙醇，回流；d)氫氣，Pd/C，鹽酸，甲醇；e)碳酸鉀，水。
在適當(dāng)?shù)娜軇┤缫掖?、DMF或二甲基乙酰胺中，在適當(dāng)?shù)乃崆宄齽?通常為碳酸氫鈉、三乙胺、二異丙基乙胺或吡啶)存在下，使Ⅵ-3(按照流程Ⅴ概述的方法由Ⅵ-1制備)與2-鹵代嘧啶，一般為2-氯代嘧啶或2-溴代嘧啶反應(yīng)提供Ⅵ-4。根據(jù)報(bào)道的影響此種轉(zhuǎn)化的條件(見(jiàn)，例如WO95/32710)，可將Ⅵ-4的嘧啶環(huán)還原為相應(yīng)的1,4,5,6-四氫嘧啶環(huán)。因此，Ⅵ-4可在鈀催化劑(優(yōu)選在活性炭上的鈀)的存在下，在適合的溶劑(如甲醇或乙醇)中經(jīng)受氫化作用。反應(yīng)通常在酸性條件下進(jìn)行；加入無(wú)機(jī)酸如鹽酸通常是優(yōu)選的。用碳酸鉀和水堿化過(guò)濾的反應(yīng)混合物得到Ⅵ-5。
流程Ⅶ
a)氫化鈉，4-(三氟甲基)芐基溴，DMF；b)氫氣，氫氧化鈀/C，甲醇。
在適當(dāng)?shù)膲A，一般為氫化鈉或雙(三甲基硅烷基)氨化鋰的存在下，在非質(zhì)子溶劑中，優(yōu)選為DMF、THF或它們的混合物，使Ⅶ-1(通過(guò)Bondinell等(PCT申請(qǐng)WO93/00095,1993年1月7日公開(kāi))和Bondinell等(PCT申請(qǐng)WO94/14776)所述通用方法制備)與4-(三氟甲基)芐基溴反應(yīng)，提供雙-烷基化的產(chǎn)物Ⅶ-2。通過(guò)氫解可以方便地除去Ⅶ-2的4-(三氟甲基)芐基醚，提供酚Ⅶ-3。氫解芐基醚的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的，并在適當(dāng)?shù)膮⒖紩?shū)，例如在Greene的“Protective Groups in Organec Synthsis”(由Wiley-Interscience出版)中有描述。然后根據(jù)前面流程所述的方法，用Ⅶ-3的酚制備式(Ⅰ)化合物。
此處所用的酰胺偶合試劑指可以用來(lái)形成肽鍵的試劑。通常的偶合方法采用碳二亞胺，活化的酸酐、酯和酰鹵。試劑如EDC、DCC、DPPA、PPA、BOP試劑、HOBt,N-羥基琥珀酰亞胺和草酰氯是常用的。
形成肽鍵的偶合方法通常是本領(lǐng)域所熟知的。通常由Bodansky等在THE PRACTICE OF PEPTIDE SYNTHESIS(Springer-Verlag,Berlin,1984,)，及Ali等在J.Med.Chem.,29,984(1986)和J.Med.Chem.,30,2291(1987)中提出的肽合成方法一般為示范性的技術(shù)，并通過(guò)引用結(jié)合到本文中。
一般地，任選在催化劑如1-羥基苯并三唑(HOBt)和二甲基氨基吡啶(DMAP)的存在下，用適合的碳二亞胺偶合劑如N,N’-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)，使所述胺或苯胺通過(guò)其游離的氨基偶合到適當(dāng)羧酸底物上。其它的方法，例如活化的酯、酸酐或酰鹵的形成，適當(dāng)?shù)乇Ｗo(hù)的酸底物的游離羧基的形成，以及隨后的與適當(dāng)?shù)乇Ｗo(hù)的胺的游離胺的反應(yīng)(任選在堿的存在下進(jìn)行)也是適合的。例如，在堿如N-甲基嗎琳、DMAP或三烷基胺的存在下，在無(wú)水溶劑如二氯甲烷或四氫呋喃(THF)中，用氯代甲酸異丁酯處理保護(hù)的Boc-氨基酸或Cbz-脒基苯甲酸，以形成“活化的酸酐”，隨后再與第二級(jí)保護(hù)的氨基酸或苯胺的游離胺反應(yīng)。
Nestor等在J.Med.Chem.1984,27,320中公開(kāi)了制備其中R2為苯并咪唑的式(Ⅰ)化合物的有用的中間體。制備用作本發(fā)明中間體的苯并咪唑化合物的有代表性的方法對(duì)本領(lǐng)域來(lái)說(shuō)也是常見(jiàn)的，并可在EP-A0381033中發(fā)現(xiàn)。
本發(fā)明化合物的酸加成鹽可按照標(biāo)準(zhǔn)的方法，在適合的溶劑中，由母體化合物和過(guò)量的酸(如鹽酸、氫溴酸、氫氟酸、硫酸、磷酸、乙酸、三氟乙酸、馬來(lái)酸、琥珀酸或甲磺酸)來(lái)制備。某些化合物形成可接受的內(nèi)鹽或兩性離子化合物。通過(guò)用過(guò)量的含有適合的陽(yáng)離子的堿性試劑，如氫氧化物、碳酸鹽或醇鹽，或用合適的有機(jī)胺處理本發(fā)明化合物來(lái)制備陽(yáng)離子鹽。陽(yáng)離子如Li+、Na+、K+、Ca++、Mg++和NH4+均是存在于藥學(xué)上可接受的鹽的陽(yáng)離子的特別的實(shí)例。
本發(fā)明也提供藥用組合物，其包括根據(jù)式(Ⅰ)的化合物和藥學(xué)上可接受的載體。因此，式(Ⅰ)化合物也可以用于制備藥物。如上所述的式(Ⅰ)化合物的藥用組合物可以配制成溶液或凍干粉末，以供胃腸外給藥。粉末在使用前可通過(guò)加入適當(dāng)?shù)南♂寗┗蚱渌帉W(xué)上可接受的載體來(lái)復(fù)制。液體制劑可以是緩沖的、等滲的水溶液。適合的稀釋劑的實(shí)例為常規(guī)等滲生理鹽水溶液、標(biāo)準(zhǔn)5％右旋糖的水溶液，或緩沖的乙酸鈉或乙酸銨溶液。這種制劑特別適用于胃腸外給予，但也可以用于口服給予，或裝在計(jì)量的劑量吸入器或噴霧器中以供吸入。加入賦形劑如聚乙烯吡咯烷酮。明膠、羥基纖維素、阿拉伯膠、聚乙二醇、甘露醇、氯化鈉或檸檬酸鈉可能是需要的。
另外，本發(fā)明化合物也可以為裝膠囊的，片劑的，或制成乳劑或糖漿劑以供口服給予?？梢约尤胨帉W(xué)上可接受的固體或液體載體以增強(qiáng)或穩(wěn)定組合物，或有利于組合物的制備。固體載體包括淀粉、乳糖、硫酸鈣二水合物、石膏粉、硬脂酸鎂或硬脂酸、滑石粉、果膠、阿拉伯膠、瓊脂或明膠。液體載體包括糖漿、花生油、橄欖油、鹽水或水。所述載體也可以包括緩釋材料如一硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯，單獨(dú)或與蠟混合。固體載體的量可有變化，但優(yōu)選每劑量單位在約20mg-約1g之間。藥用制劑按照制藥的常規(guī)技術(shù)制備，制備片劑形式包括(需要時(shí))磨碎、混合、制粒和壓片，制備硬明膠膠囊形式時(shí)包括磨碎?；旌虾吞畛?。當(dāng)使用液體載體時(shí)，所述制劑可以為糖漿劑、酏劑、乳劑或含水或不含水的懸浮液。此種液體制劑可以直接口服或填充到軟明膠膠囊中。
對(duì)于直腸給藥，本發(fā)明化合物也可以與賦形劑如可可脂、甘油、明膠或聚乙二醇混合并模壓成栓劑。
本文描述的化合物為玻連蛋白受體的拮抗劑，用于治療其中主要病理學(xué)與玻連蛋白受體相互作用的配位體或細(xì)胞有關(guān)的疾病。例如，這些化合物用于治療其中骨質(zhì)丟失引起病理的疾病。因此，本化合物用于治療骨質(zhì)疏松、甲狀旁腺機(jī)能亢進(jìn)、Paget氏病、惡性高鈣血癥、骨轉(zhuǎn)移產(chǎn)生的溶骨性損害、因固定術(shù)或性激素缺乏引起的骨丟失。相信本發(fā)明化合物也可用作抗腫瘤劑、抗血管生成劑、消炎藥和抗轉(zhuǎn)移劑，并用于治療動(dòng)脈硬化和再狹窄。
所述化合物可以足以抑制骨的吸收或其它此類(lèi)病癥的藥物濃度口服或胃腸外給藥。含有所述化合物的藥用組合物可以約0.1-約50mg/kg的口服劑量給予，其量應(yīng)與患者的病情一致。優(yōu)選口服劑量應(yīng)為約0.5-約20mg/kg。對(duì)于急性治療，優(yōu)選胃腸外給藥。靜脈輸注在5％的右旋糖漿的水或生理鹽水中的所述肽，或含有適當(dāng)?shù)馁x形劑的類(lèi)似制劑是最有效的，盡管肌內(nèi)大劑量(bolus)注射也是有用的。一般地，胃腸外劑量在約0.01-約100mg/kg，優(yōu)選在0.1-20mg/kg之間。所述化合物在達(dá)到每日總劑量約0.4-約400mg/kg/天的水平時(shí)，可以每日1-4次給予。所述化合物給予的準(zhǔn)確水平和方法可以通過(guò)比較藥物的血液水平和達(dá)到治療效果所需的濃度而很容易確定。
本發(fā)明還提供治療骨質(zhì)疏松或抑制骨質(zhì)丟失的方法，其包括分階段給予式(Ⅰ)化合物或?qū)⑹?Ⅰ)化合物與骨吸收的其它抑制劑如雙膦酸鹽(如阿侖膦酸鈉)、激素替代療法、抗-雌激素劑或降鈣素以物理組合的方式聯(lián)合給予。此外，本發(fā)明提供用本發(fā)明化合物和組成代謝劑，如骨形態(tài)形成蛋白、異丙黃酮進(jìn)行治療的方法，用于預(yù)防骨的丟失和/或增加骨質(zhì)。
另外，本發(fā)明提供抑制腫瘤生長(zhǎng)的方法，其包括分階段給予式(Ⅰ)化合物或?qū)⑹?Ⅰ)化合物與抗腫瘤劑以物理組合的方式聯(lián)合給予。喜樹(shù)堿類(lèi)似物類(lèi)化合物，如托泊替堪、irinotecan和9-氨基喜樹(shù)堿，及鉑配位配合物如順鉑、ormaplatin和tetraplatin是熟知的抗腫瘤劑類(lèi)。喜樹(shù)堿類(lèi)似物類(lèi)化合物在下列專(zhuān)利及文獻(xiàn)中有描述美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5004758、4604463、4473692、4545880、4342776、4513138、4399276，歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)號(hào)0418099和0088642,Wani等，J.Med.Chem.,1986,29,2358,Wani等，J.Med.Chem..,1980,23,554,Wani等，J.Med.Chem..,1987,30,1774和Nitta等，Proc.14thInternational Congr.Chemotherapy.,1985,Anticancer Section 1,28，每篇的全部公開(kāi)均通過(guò)引用結(jié)合到本文中。鉑配位配合物，順鉑，可在Platinol_名下，由Bristol Myers-Squibb Corporation獲得。順鉑的有用的制劑在美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5562925和4310515中有描述，其全部公開(kāi)均通過(guò)引用結(jié)合到本文中。
在抑制腫瘤生長(zhǎng)的方法中，包括分階段給予式(Ⅰ)化合物或?qū)⑹?Ⅰ)化合物和抗腫瘤劑以物理組合的方式聯(lián)合給予，鉑配位配合物如順鉑可以采用緩慢的靜脈輸注給予。優(yōu)選的載體為含有甘露醇的右旋糖/鹽水溶液。鉑配位化合物的劑量方案可以以每個(gè)療程每平米體表面積約1-約500mg(mg/M2)的基礎(chǔ)給予。鉑配位化合物的輸注可以每周給予1-2次，此種治療可以重復(fù)數(shù)周。胃腸外給予喜樹(shù)堿類(lèi)似物類(lèi)化合物時(shí)，通常采用大約連續(xù)5天的療程，每天每平米體表面積約0.1-約300.0mg/M2。對(duì)于托泊替堪來(lái)說(shuō)，最優(yōu)選采用大約連續(xù)5天的療程，每天每平米體表面積約1.0-約2.0mg/M2。優(yōu)選該療程在經(jīng)歷一個(gè)大約7-約28天的間歇期后，再重復(fù)至少1個(gè)療程。
藥用組合物可以用式(Ⅰ)化合物和抗腫瘤劑在同一容器中配制，但優(yōu)選在不同容器中配制。當(dāng)兩種藥物以溶液形式提供時(shí)，它們可以被包含在輸注/注射體系中，以同時(shí)或順序給予。
為了同時(shí)或在不同的時(shí)間方便地給予式(Ⅰ)化合物和抗腫瘤劑，制備了包含單一容器如小盒、小箱或其它容器、單個(gè)玻瓶、小袋、小瓶或其它容器的藥劑盒，其內(nèi)含有如上所述的用于胃腸外給藥的有效量的式(Ⅰ)化合物，以及如上所述的用于胃腸外給藥的有效量的抗腫瘤劑。這種藥劑盒可以含有，例如在分開(kāi)的容器或在同一容器中的兩種藥物，任選為凍干藥塞，及供復(fù)制溶液的容器。作為修改，藥劑盒也可包括在單一容器的兩個(gè)小室中分裝的供復(fù)制的溶液和凍干藥塞，在使用前使之混合。對(duì)于這種安排，所述抗腫瘤劑和本發(fā)明化合物可以分開(kāi)包裝，如在兩個(gè)容器中，或一起被凍干成粉末并在一個(gè)容器中提供。
當(dāng)兩種藥物以溶液形式提供時(shí)，它們可以被包含在輸注/注射體系中，以同時(shí)或順序給予。例如，式(Ⅰ)化合物可以為靜脈注射的形式，或序列輸注袋的形式，所述輸注袋通過(guò)管子與裝有抗腫瘤劑的第二個(gè)輸注袋相連結(jié)。使用此種體系，患者可以接受式(Ⅰ)化合物的初始大劑量-型注射或輸注，接著輸注抗腫瘤劑。可以用幾種生物學(xué)測(cè)定法之一來(lái)測(cè)定所述化合物，以確定產(chǎn)生藥理學(xué)效應(yīng)所需的化合物濃度。
玻連蛋白結(jié)合的抑制[3H]-SK&F-107260與αvβ3的固相結(jié)合用含有1mM氯化鈣、1mM氯化錳、1mM氯化鎂(緩沖液A)和0.05疊氮化鈉的緩沖液T稀釋緩沖液T(含有2mM氯化鈣和1％辛基葡糖苷)中的人胎盤(pán)或血小板αvβ3(1-0.3mg/ml)，然后以每孔0.1ml立即加入到96-孔ELISA板(Corning,New York,NY)。每孔加入0.1-0.2μg αvβ3。將該板于4℃孵育過(guò)夜。在試驗(yàn)的時(shí)候，用緩沖液A洗滌各孔一次，于室溫下在同樣的緩沖液中用0.1ml 3.5％牛血清白蛋白孵育1小時(shí)。孵育后徹底抽出孔中的培養(yǎng)物，用0.2ml緩沖液洗滌2次。
將該化合物溶于100％DMSO中，得到2mM原液，用結(jié)合的緩沖液(15mM Tris-HCl(pH7.4),100mM氯化鈉，1mM氯化鈣、1mM氯化錳、1mM氯化鎂)將原液稀釋至100μM終濃度的化合物。然后將所述溶液稀釋至所需的化合物的終濃度。按一式三份向各孔中加入各種濃度的未標(biāo)記的拮抗劑(0.01-100μM)，接著加入5.0nM的[3H]-SK&F-107260(65-86Ci/mmol)。
將該板于室溫下孵育1小時(shí)。孵育后徹底抽吸各孔中的培養(yǎng)物，用0.2ml冰冷的緩沖液A以逐孔(well-to-well)的方式洗滌1次。用0.1ml1％SDS溶解所述受體，加入3ml Ready Safe，在Beckman LS 6800Liquid Scintillation Counter上通過(guò)液體閃爍計(jì)數(shù)測(cè)定結(jié)合的[3H]-SK&F-107260，有效率40％。在2μM SK&F-107260的存在下，測(cè)定非特異性結(jié)合的[3H]-SK&F-107260，并與小于1％的總放射配體輸入一致。通過(guò)非線(xiàn)性最小二乘曲線(xiàn)擬合方法(由LUNDON-2程序修改而來(lái))測(cè)定IC50(抑制50％[3H]-SK&F-107260結(jié)合的拮抗劑的濃度)。根據(jù)方程Ki=IC50/(1+L/Kd)計(jì)算Ki(拮抗劑的解離常數(shù))，這里L(fēng)和Kd分別為[3H]-SK&F-107260的濃度和解離常數(shù)。
本發(fā)明化合物在約4.0-約0.0003微摩爾(micomolar)的濃度范圍內(nèi)抑制玻連蛋白與SK&F-107260的結(jié)合。
用本領(lǐng)域的標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定方法也對(duì)本發(fā)明化合物進(jìn)行了體內(nèi)和體外骨吸收的測(cè)定，以評(píng)價(jià)對(duì)骨形成的抑制，如在歐洲專(zhuān)利528 587中公開(kāi)的凹痕(pit)形成測(cè)定，該測(cè)定也可用人的破骨細(xì)胞代替大鼠破骨細(xì)胞，以及Wronski等(Cell and materials 1991,sup.1,69-74)所述的卵巢切除大鼠模型來(lái)進(jìn)行。
血管平滑肌細(xì)胞游走測(cè)定使用人或大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞。在Transwell細(xì)胞培養(yǎng)室中用帶有8um孔的聚碳酸酯膜(Costar)監(jiān)測(cè)細(xì)胞的游走。濾器的下表面用玻連蛋白包被。將細(xì)胞以2.5-5.0×106細(xì)胞/ml的濃度懸浮于補(bǔ)充有0.2％牛血清白蛋白的DMEM中，并于20℃用各種濃度的受試化合物預(yù)處理20分鐘。單獨(dú)的溶劑用作對(duì)照。將0.2ml的細(xì)胞懸浮液置于培養(yǎng)室上部的間隔室中。下部的間隔室含有0.6ml補(bǔ)充有0.2％牛血清白蛋白的DMEM。于37℃，在95％空氣/5％二氧化碳的氣體中孵育24小時(shí)。孵育后，輕輕刮去濾器上表面未游走的細(xì)胞。然后用甘露醇固定濾器，用10％吉姆薩染液染色。或者通過(guò)a)對(duì)游走到濾器下部表面的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，或者通過(guò)b)用10％乙酸提取染色細(xì)胞，接著測(cè)定600nM的吸收度來(lái)測(cè)定游走。
甲狀腺甲狀旁腺切除大鼠模型每一試驗(yàn)組由5-6只成年雄性Sprague-Dawley大鼠(250-400g體重)組成。在使用前7天對(duì)大鼠進(jìn)行甲狀腺甲狀旁腺切除術(shù)(由Taconic Farms提供)。所有大鼠每三天接受一次甲狀腺素的替代劑量。收到大鼠時(shí)，在通過(guò)尾靜脈穿刺取血到肝素化的管中后立即對(duì)全血檢測(cè)循環(huán)離子鈣水平。如果離子鈣水平(用Ciba-Corning 634型鈣pH分析儀檢測(cè))小于1.2mM/L，則該鼠包括在內(nèi)。每只大鼠安插有內(nèi)置的靜脈和動(dòng)脈導(dǎo)管，以分別傳遞受試物質(zhì)和取血樣。然后對(duì)大鼠喂飼無(wú)鈣食物和去離子水。測(cè)量基礎(chǔ)鈣水平，使用外部注射泵通過(guò)導(dǎo)管連續(xù)靜脈給予每只大鼠對(duì)照溶媒或人甲狀旁腺激素1-34肽(hPHT1-34，劑量1.25ug/kg/h在鹽水中/0.1％牛血清白蛋白，Bachem,Ca)或hPHT1-34和受試物質(zhì)的混合物。在6-8小時(shí)的輸注期間，以每?jī)尚r(shí)的間隔檢測(cè)每只大鼠的血鈣應(yīng)答。
人破骨細(xì)胞的吸收和粘附測(cè)定采用衍生自破骨細(xì)胞瘤組織的正常人破骨細(xì)胞已經(jīng)開(kāi)發(fā)出凹痕吸收和粘附測(cè)定法并使之標(biāo)準(zhǔn)化。通過(guò)激光共焦顯微鏡測(cè)定破骨細(xì)胞凹痕體積的測(cè)定法1已被開(kāi)發(fā)出來(lái)。也開(kāi)發(fā)出高輸出量篩選的測(cè)定法2，其中膠原片段吸收時(shí)釋放用競(jìng)爭(zhēng)性ELISA測(cè)定。
測(cè)定1(用激光共焦顯微鏡)●從液氮貯存裝置中取出等份人破骨細(xì)胞瘤-衍生的細(xì)胞懸浮液，于37℃快速溫?zé)幔⒔?jīng)離心(1000rpm，于4℃5分鐘)，用RPMI-1640培養(yǎng)基洗滌1次。
●吸出該培養(yǎng)基，用鼠抗-HLA-DR抗體代替，然后用RPMI-1640培養(yǎng)基以1∶3稀釋。將該懸浮液于冰上孵育30分鐘并頻繁攪勻。
●用冷的RPMI-1640洗滌細(xì)胞兩次，接著離心(1000rpm，于4℃5分鐘)，然后將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至無(wú)菌的15ml離心管中。在改進(jìn)的Neubauer計(jì)數(shù)室中對(duì)單核細(xì)胞的數(shù)目進(jìn)行計(jì)數(shù)。
●將包被羊抗-鼠IgG(Dynal,Great Neck,NY)的足量的磁珠(5個(gè)/單核細(xì)胞)從其儲(chǔ)備瓶中取出并置于5ml新鮮培養(yǎng)基(洗去有毒的疊氮化物防腐劑)中。通過(guò)將磁珠固定在磁鐵上除去培養(yǎng)基，并代之以新的培養(yǎng)基。
●將磁珠與細(xì)胞混合，使懸浮液于冰上孵育30分鐘。頻繁攪勻該懸浮液。
●磁珠包被的細(xì)胞被固定在磁鐵上，將其余的細(xì)胞(富含破骨細(xì)胞的部分)傾入無(wú)菌的50ml離心管中。
●將新鮮的培養(yǎng)基加入磁珠包被的細(xì)胞中以除去任何捕獲的破骨細(xì)胞。重復(fù)該洗滌過(guò)程10次。棄去磁珠包被的細(xì)胞。
●用二乙酸熒光素標(biāo)記活細(xì)胞，在計(jì)數(shù)室對(duì)可見(jiàn)的破骨細(xì)胞計(jì)數(shù)。用一次性的大孔塑料巴士德吸量管將樣品加入室中。
●通過(guò)離心使破骨細(xì)胞沉淀，并在補(bǔ)充有10％胎牛血清和1.7g/L碳酸氫鈉的EMEM中將密度調(diào)節(jié)至適當(dāng)?shù)臄?shù)目(破骨細(xì)胞的數(shù)目隨腫瘤的不同而變化)。
●將3ml等份的細(xì)胞懸浮液(每種化合物處理)傾入15ml離心管中。通過(guò)離心使細(xì)胞沉淀。
●向每管加入3ml適宜的化合物處理液(在EMEM培養(yǎng)基中稀釋至50uM)。也包括適宜的溶媒對(duì)照，陽(yáng)性對(duì)照(抗玻連蛋白受體鼠單克隆抗體[87MEM1]稀釋至100ug/ml)和同型對(duì)照(IgG2a稀釋至100ug/ml)。于37℃孵育樣品30分鐘。
●將0.5ml等份的所述細(xì)胞接種到48-孔板中的無(wú)菌牙質(zhì)切片(dentine slices)上并于37℃孵育2小時(shí)。每種處理按一式四份進(jìn)行篩選。
●將所述切片在溫?zé)岬腜BS中經(jīng)6次換液(changes)(在6孔板中，10ml/孔)洗滌并置于含有化合物處理或?qū)φ諛悠返男迈r培養(yǎng)基中。將該樣品于37℃孵育48小時(shí)。
抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)方法(對(duì)破骨細(xì)胞譜系的細(xì)胞的選擇性染色)●將含有粘附的破骨細(xì)胞的骨切片在磷酸鹽緩沖鹽水中洗滌并在2％的戊二醛(在0.2M二甲胂酸鈉)中固定5分鐘。
●然后在水中洗滌它們，并于37℃在TRAP緩沖液(0.5mg/ml萘酚AS-BI磷酸酯溶于N,N-二甲基甲酰胺中，并與含有10mM酒石酸鈉的0.25M檸檬酸鹽緩沖液(pH4.5)混合)中孵育4分鐘。
●在冷水中洗滌后，將該切片浸沒(méi)在含有1mg/ml堅(jiān)牢石榴紅的冷乙酸鹽緩沖液(0.1M,pH6.2)中，并于4℃孵育4分鐘。
●吸出過(guò)量的緩沖液，用水洗后風(fēng)干。
●用亮視野顯微鏡對(duì)TRAP陽(yáng)性破骨細(xì)胞(磚紅色(brick red)/紫色沉淀)計(jì)數(shù)，然后通過(guò)超聲處理從所述牙質(zhì)表面除去。
●凹痕體積用Nikon/Lasertec ILM21W共焦顯微鏡測(cè)定。
測(cè)定2(用ELISA示值讀數(shù)法)富集人破骨細(xì)胞，并如測(cè)定1開(kāi)始的9個(gè)步驟所述制備人破骨細(xì)胞以篩選化合物。為清楚說(shuō)明，這些步驟重復(fù)如下●從液氮貯存裝置中取出等份人破骨細(xì)胞瘤-衍生的細(xì)胞懸浮液，于37℃快速溫?zé)?，通過(guò)在離心(1000rpm，于4℃5分鐘)用RPMI-1640培養(yǎng)基洗滌1次。
●抽出該培養(yǎng)基，用鼠抗-HLA-DR抗體代替，然后用RPMI-1640培養(yǎng)基以1∶3稀釋。將該懸浮液于冰上孵育30分鐘并頻繁攪勻。
●用冷的RPMI-1640洗滌細(xì)胞兩次，接著離心(1000rpm，于4℃5分鐘)，然后將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至無(wú)菌的15ml離心管中。在改進(jìn)的Neubauer計(jì)數(shù)室中對(duì)單核細(xì)胞的數(shù)目進(jìn)行計(jì)數(shù)。
●將包被羊抗-鼠IgG(Dynal,Great Neck,NY)的足量的磁珠(5個(gè)/單核細(xì)胞)從其儲(chǔ)備瓶中取出并置于5ml新鮮培養(yǎng)基(洗去有毒的疊氮化物防腐劑)中。通過(guò)將磁珠固定在磁鐵上除去培養(yǎng)基，并代之以新的培養(yǎng)基。
●將磁珠與細(xì)胞混合，使懸浮液于冰上孵育30分鐘。頻繁攪勻該懸浮液。
●磁珠包被的細(xì)胞被固定在磁鐵上，將其余的細(xì)胞(富含破骨細(xì)胞的部分)傾入無(wú)菌的50ml離心管中。
●將新鮮的培養(yǎng)基加入磁珠包被的細(xì)胞中以除去任何捕獲的破骨細(xì)胞。重復(fù)該洗滌過(guò)程10次。棄去磁珠包被的細(xì)胞。
●用二乙酸熒光素標(biāo)記活細(xì)胞，在計(jì)數(shù)室對(duì)可見(jiàn)的破骨細(xì)胞計(jì)數(shù)。用一次性的大孔徑塑料巴士德吸量管將樣品加入室中。
●通過(guò)離心使破骨細(xì)胞沉淀，并在補(bǔ)充有10％胎牛血清和1.7g/L碳酸氫鈉的EMEM中將密度調(diào)節(jié)至適當(dāng)?shù)臄?shù)目(破骨細(xì)胞的數(shù)目隨腫瘤的不同而變化)。
對(duì)照上面測(cè)定1所述方法，在4個(gè)劑量上篩選所述化合物IC50，如下所述●于37℃，將破骨細(xì)胞制劑與試驗(yàn)化合物(4個(gè)劑量)或?qū)φ瘴镆黄痤A(yù)孵育30分鐘。
●將它們接種到48-孔組織培養(yǎng)板中的牛皮質(zhì)骨切片(dentineslices)上并于37℃再孵育2小時(shí)。
●將所述骨切片用溫?zé)岬牧姿峋彌_鹽水(PBS)經(jīng)6次換液洗滌以除去非-粘附細(xì)胞，然后將其放回到含有新鮮化合物或?qū)φ瘴锏?8孔板各孔中。
●然后將該組織培養(yǎng)板于37℃孵育48小時(shí)。
●將每孔中的上清液吸入到各單獨(dú)的管中并以競(jìng)爭(zhēng)性ELISA篩選，該方法可檢測(cè)在吸收過(guò)程中釋放的Ⅰ型膠原質(zhì)的c-端肽。含有兔抗體的ELISA試劑盒(Osteometer,Denmark)可由市售獲得，該抗體能與存在于Ⅰ型膠原質(zhì)的al-鏈羧基-末端端肽的8-氨基酸序列(Glu-Lys-Ala-His-Asp-Gly-Gly-Arg)進(jìn)行特異性反應(yīng)。這些結(jié)果用與溶媒對(duì)照比較的吸收％抑制率表示。
人破骨細(xì)胞粘附測(cè)定富集人破骨細(xì)胞，并如測(cè)定1開(kāi)始的9個(gè)步驟所述制備人破骨細(xì)胞以篩選化合物。為清楚說(shuō)明，這些步驟重復(fù)如下
●從液氮貯存裝置中取出等份人破骨細(xì)胞瘤-衍生的細(xì)胞懸浮液，于30℃快速溫?zé)?，并?jīng)離心(1000rpm，于4℃5分鐘)在RPMI-1640培養(yǎng)基中洗滌1次。
●吸出該培養(yǎng)基，用鼠抗-HLA-DR抗體代替，然后用RPMI-1640培養(yǎng)基以1∶3稀釋。將該懸浮液于冰上孵育30分鐘并頻繁攪動(dòng)。
●用冷的RPMI-1640洗滌細(xì)胞兩次，接著離心(1000rpm，于4℃5分鐘)，然后將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至無(wú)菌的15ml離心管中。在改進(jìn)的Neubauer計(jì)數(shù)室中對(duì)單核細(xì)胞的數(shù)目進(jìn)行計(jì)數(shù)。
●將包被羊抗-鼠IgG(Dynal,Great Neck,NY)的足量的磁珠(5個(gè)/單核細(xì)胞)從其儲(chǔ)備瓶中取出并置于5ml新鮮培養(yǎng)基(洗去有毒的疊氮化物防腐劑)中。通過(guò)將磁珠固定在磁鐵上除去培養(yǎng)基，并代之以新的培養(yǎng)基。
●將磁珠與細(xì)胞混合，使懸浮液于冰上孵育30分鐘。頻繁攪勻該懸浮液。
●磁珠包被的細(xì)胞被固定在磁鐵上，將其余的細(xì)胞(富含破骨細(xì)胞的部分)傾入無(wú)菌的50ml離心管中。
●將新鮮的培養(yǎng)基加入磁珠包被的細(xì)胞中以除去任何捕獲的破骨細(xì)胞。重復(fù)該洗滌過(guò)程10次。棄去磁珠包被的細(xì)胞。
●用二乙酸熒光素標(biāo)記活細(xì)胞，在計(jì)數(shù)室對(duì)可見(jiàn)的破骨細(xì)胞計(jì)數(shù)。用一次性的大孔徑塑料巴士德吸量管將樣品加入室中。
●通過(guò)離心使破骨細(xì)胞沉淀，并在補(bǔ)充有10％胎牛血清和1.7g/L碳酸氫鈉的EMEM中將密度調(diào)節(jié)至適當(dāng)?shù)臄?shù)目(破骨細(xì)胞的數(shù)目隨腫瘤的不同而變化)。
●將破骨細(xì)胞瘤-衍生的破骨細(xì)胞與化合物(4個(gè)劑量)或?qū)φ瘴镉?7℃預(yù)培養(yǎng)39分鐘。
●然后將細(xì)胞接種到骨橋蛋白包被的玻片(人或鼠骨橋蛋白，2.5ug/ml)上并于37℃培養(yǎng)2小時(shí)。
●通過(guò)在磷酸鹽緩沖鹽水中劇烈洗滌該玻片以除去非粘附細(xì)胞并將玻片上剩余的細(xì)胞用丙酮固定。
●用抗酒石酸的酸性磷酸酶(TRAP)，一種對(duì)該表型的細(xì)胞的選擇性標(biāo)記(見(jiàn)步驟15-17)，對(duì)破骨細(xì)胞進(jìn)行染色，用亮視野顯微鏡計(jì)數(shù)。結(jié)果用與溶媒對(duì)照比較的粘附％抑制率表示。
細(xì)胞粘附測(cè)定細(xì)胞和細(xì)胞培養(yǎng)從ATCC(分類(lèi)號(hào)CRL 1573)中獲得人胚腎細(xì)胞(HEK293細(xì)胞)。使細(xì)胞在含有Earl’s鹽、10％胎牛血清、1％谷氨酰胺和1％青霉素-鏈霉素的Earl’s最小必需培養(yǎng)基(EMEM)中生長(zhǎng)。
構(gòu)成物和轉(zhuǎn)染通過(guò)平端連接將αv亞基的3.2kb EcoRⅠ-KpnⅠ片段和β3亞基的2.4kb XbaⅠ-XhoⅠ片段插入pCDN載體的EcoRⅠ-EcoRⅤ克隆位點(diǎn)(Aiyar等，1994)，該載體含有CMV啟動(dòng)子和G418選擇標(biāo)記。為了穩(wěn)定表達(dá)，使用Gene Pulser(基因脈沖發(fā)生器)(Hensley等，1994)，將αv+β3構(gòu)成物(每個(gè)亞基20μg DNA)電轉(zhuǎn)化入80×106HEK293細(xì)胞內(nèi)，并置于100mm板(5×105個(gè)細(xì)胞/板)。48小時(shí)后，向該生長(zhǎng)培養(yǎng)基補(bǔ)充450μg/ml基因霉素(G418硫酸鹽，GIBCO-BRL,Bethesda,MD)。在選擇性培養(yǎng)基中維持細(xì)胞直至集落大到足以被測(cè)定。
轉(zhuǎn)染細(xì)胞的免疫化學(xué)分析為了確定HEK293轉(zhuǎn)染子是否表達(dá)玻連蛋白受體，通過(guò)離心，于室溫下用丙酮固定2分鐘并風(fēng)干，將細(xì)胞固定在玻璃顯微鏡載片上。用標(biāo)準(zhǔn)間接免疫熒光法證實(shí)與23C6，即一種對(duì)αvβ3配合物特異性的單克隆抗體的特異的反應(yīng)性。
細(xì)胞粘附研究于4℃用0.1ml人玻連蛋白(0.2μg/ml在RPMI培養(yǎng)基中)預(yù)包被Corning 96-孔ELISA板過(guò)夜。在試驗(yàn)時(shí)，用RPMI培養(yǎng)基洗滌該板一次并于室溫下在RPMI培養(yǎng)基中用3.5％BSA封閉1小時(shí)。將轉(zhuǎn)染293細(xì)胞以0.5×106細(xì)胞/ml的密度懸浮于RPMI培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基補(bǔ)充有20mM Hepes(pH7.4)和0.1％BSA。將0.1ml的細(xì)胞懸浮液加入每孔中，并在存在或不存在各種αvβ3拮抗劑時(shí)，于37℃孵育1小時(shí)。孵育后，加入0.025ml的10％甲醛溶液(pH7.4)并在室溫下將細(xì)胞固定10分鐘。用0.2ml RPMI培養(yǎng)基洗滌該板三次并于室溫下用0.1ml的0.5％甲苯胺藍(lán)對(duì)粘附細(xì)胞染色。通過(guò)大量的去離子水洗滌除去過(guò)量的染色劑。通過(guò)加入含有50mM鹽酸的0.1ml 50％乙醇洗脫已摻入細(xì)胞的甲苯胺藍(lán)。在微滴定板讀板儀(Titertek Multiskan MC,Sterling,VA)上以600nm處光密度對(duì)粘附的細(xì)胞進(jìn)行定量。
固相αvβ5結(jié)合測(cè)定從人胎盤(pán)中純化玻連蛋白受體αvβ5。用50mM Tris-HCl(pH7.5)、100mM氯化鈉、1mM氯化鈣、1mM氯化錳、1mM氯化鎂(緩沖液A)稀釋受體制劑并以每孔0.1ml立即加入到96-孔ELISA板。每孔加入0.1-0.2μg αvβ3。將該板于4℃孵育過(guò)夜。在試驗(yàn)的時(shí)候，用緩沖液A洗滌各孔一次，于室溫下在同樣的緩沖液中用0.1ml 3.5％牛血清白蛋白孵育1小時(shí)。孵育后徹底吸出各孔中的培養(yǎng)物，用0.2ml緩沖液A洗滌2次。
在[3H]-SK&F-107260競(jìng)爭(zhēng)測(cè)定中，向各孔中加入各種濃度的未標(biāo)記拮抗劑(0.001-100μM)，接著加入5.0nM[3H]-SK&F-107260。將該板于室溫下孵育1小時(shí)。孵育后徹底吸出各孔中的培養(yǎng)物，用0.2ml冰冷的緩沖液A以逐孔的方式洗滌1次。用0.1ml 1％SDS使所述受體溶解，加入3ml Ready Safe，在Beckman LS 6800Liquid Scintillation Counter上通過(guò)液體閃爍計(jì)數(shù)測(cè)定結(jié)合的[3H]-SK&F-107260，40％的有效率。在2μM SK&F-107260的存在下，測(cè)定非特異性結(jié)合的[3H]-SK&F-107260，并與小于1％的總放射配體輸入一致。通過(guò)非線(xiàn)性最小二乘曲線(xiàn)擬合方法(由LUNDON-2程序修改而來(lái))確定IC50(抑制50％[3H]-SK&F-107260結(jié)合的拮抗劑濃度)。根據(jù)Cheng和Prusoff方程Ki=IC50/(1+L/Kd)計(jì)算Ki(拮抗劑的解離常數(shù))，這里L(fēng)和Kd分別為[3H]-SK&F-107260的濃度和解離常數(shù)。
RGD介導(dǎo)的GPⅡb-Ⅲa結(jié)合的抑制GPⅡb-Ⅲa的純化于4℃，通過(guò)在3％辛基糖苷、20mM Tris-HCl(pH7.4)、140mM氯化鈉、2mM氯化鈣中輕輕攪拌2小時(shí)，使10單位陳舊的，洗過(guò)的人血小板(得自紅十字會(huì))溶解。于100000g離心溶解產(chǎn)物1小時(shí)。在用20mM Tris-HCl(pH7.4)、100mM氯化鈉、2mM氯化鈣、1％辛基糖苷(緩沖液A)預(yù)平衡的5ml晶狀體凝集素瓊脂糖凝膠4B柱(E.Y.Labs)上將獲得的上清液上柱。孵育2小時(shí)后，用50ml冷的緩沖液A洗滌該柱。用含有10％右旋糖的緩沖液A洗脫凝集素滯留(lectin-retained)的GPⅡb-Ⅲa。全部操作均在4℃進(jìn)行。如SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳所顯示，獲得的GPⅡb-Ⅲa純度大于95％。
GPⅡb-Ⅲa在脂質(zhì)體中的結(jié)合在氮?dú)庀?，使磷脂酰絲氨酸(70％)和磷脂酰膽堿(30％)(Avanti PolarLipids)的混合物在玻璃管壁上干燥。將純化的GPⅡb-Ⅲa稀釋至終濃度0.5mg/ml并按1∶3(w/w)蛋白質(zhì)磷脂的比例混合。再懸浮該混合物并在水浴超聲波儀中經(jīng)超聲處理5分鐘。然后用12000-14000分子量截?cái)嗤肝龉苁乖摶旌衔飳?duì)1000-倍過(guò)量的50nM Tris-HCl(pH7.4)、100nM氯化鈉、2mM氯化鈣(換液兩次)透析過(guò)夜。將含GPⅡb-Ⅲa的脂質(zhì)體于12000g離心15分鐘，并以大約1mg/ml的最終蛋白濃度再懸浮于透析緩沖液中。該脂質(zhì)體于-70℃貯藏直至需要時(shí)取出。
對(duì)GPⅡb-Ⅲa的競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合通過(guò)間接競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合方法，用[3H]-SK&F-107260作為RGD-型配體測(cè)得對(duì)纖維蛋白原受體(GPⅡb-Ⅲa)的結(jié)合。結(jié)合測(cè)定在安裝有(Millipore Corporaution,Bedford,MA)的96-孔過(guò)濾板上，用0.22um親水durapore膜進(jìn)行。于室溫下，用0.2ml的10μg/ml聚賴(lài)氨酸(SigmaChemical Co.,St.Louis,MO.)預(yù)包被各孔1小時(shí)以阻斷非特異性的結(jié)合。向各孔中按一式四份加入各種濃度的未標(biāo)記的苯并氮雜_(0.001-100μM)。將[3H]-SK&F-107260以終濃度4.5nM加入各孔中，接著加入1μg純化的含血小板GPⅡb-Ⅲa的脂質(zhì)體。于室溫下將該混合物孵育1小時(shí)。通過(guò)用微孔過(guò)濾多孔裝置過(guò)濾將GPⅡb-Ⅲa-結(jié)合的[3H]-SK&F-107260與未結(jié)合的分離，然后用冰冷的緩沖液洗滌(2次，每次0.2ml)。在Beckman液體閃爍計(jì)數(shù)器(LS6800型)，在1.5ml ReadySolve(Beckman Instruments,Fullerton,CA)中對(duì)存留在濾器上的結(jié)合放射性進(jìn)行計(jì)數(shù)，有40％的有效率。在2μM未標(biāo)記的SK&F-107260的存在下，測(cè)定非特異性的結(jié)合，并與加入樣品的小于0.14％的總放射性一致。所有的數(shù)據(jù)點(diǎn)均為4份測(cè)得值的平均值。
通過(guò)非線(xiàn)性最小二乘曲線(xiàn)擬合方法分析競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合數(shù)據(jù)。該方法提供所述拮抗劑的IC50(在平衡時(shí)拮抗劑抑制[3H]-SK&F-107260特異性結(jié)合達(dá)50％的的濃度)。IC50與基于Cheng和Prusoff方程的拮抗劑的平衡解離常數(shù)(Ki)有關(guān)Ki=IC50/(1+L/Kd)，這里L(fēng)為用于競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合測(cè)定(4.5nM)的[3H]-SK&F-107260的濃度，而Kd為通過(guò)Scatchard分析在4.5nM處的解離常數(shù)。
本發(fā)明的優(yōu)選化合物對(duì)玻連蛋白受體的親和力與對(duì)纖維蛋白原受體的親和力的比大于10∶1。最優(yōu)選的化合物具有大于100∶1的活性比。
式(Ⅰ)化合物單獨(dú)或與抗腫瘤劑聯(lián)合使用的效果可以用幾種移植性腫瘤的小鼠模型確定。見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利5004758號(hào)和5633016號(hào)對(duì)這些模型的詳細(xì)描述。
下面的實(shí)施例并不意欲以任何方式限制本發(fā)明的范圍，而是說(shuō)明本發(fā)明化合物的如何制備和使用。許多其它的實(shí)施方案對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)應(yīng)是顯而易見(jiàn)的。
實(shí)施例總論于250或400Hz記錄1H核磁共振(NMR)譜。從內(nèi)標(biāo)的四甲基硅烷(TMS)以每百萬(wàn)分的分?jǐn)?shù)(d)向低場(chǎng)記錄化學(xué)位移。NMR數(shù)據(jù)的縮略語(yǔ)如下s=單峰，d=二重峰，t=三重峰，q=四峰，m=多峰，dd=雙二重峰，dt=雙三重峰，app=明顯，br=寬峰，J=指以Hertz測(cè)得的NMR偶合常數(shù)。CDCI3為氘代氯仿，DMSO-d6為六氘代二甲基亞砜，而CD3OD為四氘代甲醇。紅外(IR)譜以發(fā)射型譜記錄，譜帶的位置用波數(shù)的倒數(shù)(inverse wavenumbers,CM-1)記錄。質(zhì)譜由電子噴射(ES)或FAB離子技術(shù)得到。元素分析在在室內(nèi)(in-house)或通過(guò)Quantitative Technologies Inc(Whitehouse,NJ)進(jìn)行。熔點(diǎn)在Thomas-Hoover熔點(diǎn)儀(未校正)上測(cè)定。所有的溫度均用攝氏度報(bào)告。采用Analtech Silica Gel Gf和E.Merck Silica Gel 60 F-254薄層板進(jìn)行薄層層析。在E.Merck Kieselgel 60(230-400目)硅膠上進(jìn)行快速層析和重力層析。在Rainin或Beckman色譜儀上進(jìn)行進(jìn)行分析的或制備性的HPLC。ODS指十八碳基硅烷基衍生的硅膠層析載體(support)。5μApex-ODS指含有由Jones Chromatography,Littleton,Colorado制備的。5μ大小顆粒的十八碳基硅烷基衍生的硅膠層析載體，YMC ODS-AQ_為ODS層析載體，其注冊(cè)商標(biāo)為Co.Ltd.,Kyoto,Japan。PRP-1_為polymeric(苯乙烯-二乙烯苯)層析載體，且注冊(cè)商標(biāo)是Hamilton Co.,Reno,Nevada。Cilite_為由酸-洗的硅藻土組成的助濾劑，且注冊(cè)商標(biāo)是Manville Corp.,Denver,Colorado。
制備1(±)-8-羥基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯的制備a) 4-溴代-3-溴代甲基茴香醚將2-溴代-5-甲氧基甲苯(20g,0.10mol)，N-溴代琥珀酰亞胺(19.6g,0.11mol)，苯甲酰基過(guò)氧化物(1g,4mmol)，二氯甲烷(200ml)的混合物用泛光燈照射18小時(shí)以產(chǎn)生溫和的回流。將該混回物冷至-10℃數(shù)小時(shí)，將溶液與沉淀的琥珀酰亞胺傾離。濃縮溶液，使殘留物從氯仿/己烷中重結(jié)晶得到為淡黃色柱晶的標(biāo)題化合物(19.7g,70％):1H NMR(CDCl3)δ7.45(d,J=8.9Hz,1H),6.99(d,J=3Hz,1H),6.74(dd,J=8.9,3Hz,1H),4.55(s,2H),3.80(s,3H)。b)3-雙(叔-丁氧基羰基)氨基甲基-4-溴代茴香醚于室溫下，在氬氣中將4-溴代-3-溴代甲基茴香醚(24g,86mmol)和二叔-丁基亞氨基二羧酸酯鉀(24g,94mmol)在二甲基甲酰胺中的混合物攪拌18小時(shí)。然后真空濃縮反應(yīng)物，使殘留物在乙酸乙酯和水中分配。用水和鹽水洗滌有機(jī)相，干燥(硫酸鎂)，并濃縮。使殘留物從己烷中重結(jié)晶得到為白色固體的標(biāo)題化合物(15g,42％):1H NMR(CDCl3)δ7.40(d,J=8.6Hz,1H),6.68(m,2H),4.81(s,2H),3.74(s,3H),1.44(s,18H)。c)(±)-3-羰基甲氧基-4-[2-雙(叔-丁氧基羰基)氨基甲基-4-甲氧基苯基]-3-丁酸甲酯將3-雙(叔-丁氧基羰基)氨基甲基-4-溴代茴香醚(15g,36mmol)、衣康酸二甲酯(7.5g,47mmol)、三-鄰-甲苯基膦(1g,3mol)、乙酸鈀(0.4g,2mmol)、二異丙基乙胺(12.8ml,72mmol)和丙腈(150ml)裝入一500ml燒瓶中。向該混合物通入氬氣(幾個(gè)真空抽出/氬氣沖洗周期)，然后在氬氣下加熱至回流1小時(shí)。允許反應(yīng)物冷卻至室溫，然后傾入冰冷的乙酸乙酯(500ml)中。過(guò)濾除去生成的沉淀并濃縮濾液。使殘留物經(jīng)硅膠層析(在己烷中的10％-20％乙酸乙酯)純化得到淡黃色油狀物的標(biāo)題化合物(11.8g,66％):1HNMR(CDCl3)δ7.94(s,1H),7.15(d,J=8.1Hz,1H),6.77(d,J=8.1Hz,1H),6.76(s,1H),4.73(s,2H),3.81(s,3H),3.79(s,3H),3.71(s,3H),3.38(s,2H),1.45(s,18H)。d)(±)-3-羰基甲氧基-4-[2-雙(叔-丁氧基羰基)氨基甲基-4-甲氧基苯基]丁酸甲酯將裝有(±)-3-羰基甲氧基-4-[2-雙(叔-丁氧基羰基)氨基甲基-4-甲氧基苯基]-3-丁酸甲酯(11.8g)、乙酸乙酯(120ml)和10％鈀炭(1g)的壓力容器在45psi氫氣下振搖18小時(shí)。然后過(guò)濾該混合物，濃縮濾液得到為無(wú)色油狀物的標(biāo)題化合物(12g,100％):1H NMR(CDCl3)δ7.00(d,J=8.2Hz,1H),6.71(m,2H),4.81(s,2H),3.75(s,3H),3.66(s,3H),3.63(s,3H),3.05(m,2H),2.73(m,2H),2.42(dd,J=16.0,4.8Hz,1H),1.44(s,18H)。e)(±)-3-羰基甲氧基-4-[2-(氨基甲基)-4-甲氧基苯基]丁酸甲酯于室溫下，在氬氣中將(±)-3-羰基甲氧基-4-[2-雙(叔-丁氧基羰基)氨基甲基-4-甲氧基苯基]丁酸甲酯(12g)的氯仿(100ml)和三氟乙酸(50ml)的溶液攪拌4小時(shí)。然后真空濃縮溶液，得到粘性油狀的標(biāo)題化合物(10g,100％):MS(ES)m/e 296.2(M+H)+。f)(±)-8-甲氧基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯將(±)-3-羰基甲氧基-4-[2-(氨基甲基)-4-甲氧基苯基]丁酸甲酯(10g,24mmol)和三乙胺(17ml,120mmol)的甲苯(100ml)溶液于回流下加熱18小時(shí)。然后真空濃縮反應(yīng)物，使殘留物在乙酸乙酯和水中分配。用乙酸乙酯萃取水層兩次，用鹽水洗滌合并的有機(jī)萃取物，干燥(硫酸鎂)，并濃縮，得到為褐色固體的標(biāo)題化合物(4.8g,76％):MS(ES)m/e 264.2(M+H)+。g)(±)-8-羥基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯于0℃及氬氣下，將無(wú)水氯化鋁(7.6g,57mmol)分次加入(±)-8-甲氧基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯(3.0g,11mmol)和乙基硫醇(ethanethiol)(4.2ml,57mmol)的二氯甲烷(100ml)溶液中。允許生成的混合物溫?zé)嶂潦覝?，并攪拌過(guò)夜，然后濃縮。用冰水研磨殘留物，過(guò)濾收集生成的固體，干燥得到灰白色固體的標(biāo)題化合物(2.64g,91％):MS(ES)m/e 250.2(M+H)+。
制備2(±)-8-羥基-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯的制備a)3-[N-(叔-丁氧基羰基)-N-甲基氨基]甲基-4-溴代茴香醚于室溫下，將40％的含水甲胺(49ml,563mmol)快速加入在THF(280ml)中的4-溴代-3-溴代甲基茴香醚(15.76g,56.29mmol)中。在2.5小時(shí)后，濃縮反應(yīng)物，使殘留物在乙醚(560ml)和1.0N氫氧化鈉(100ml)中分配。分離各層，干燥(硫酸鎂)有機(jī)層，并濃縮得到為黃色油狀物TLC(5％甲醇/三氯甲烷)Rf0.32。
將該油狀物溶于三氯甲烷(280ml)中，加入二碳酸二叔丁酯(1.29g,56.29mmol)。反應(yīng)于RT攪拌45分鐘，然后濃縮。硅膠層析(5％乙酸乙酯/甲苯)得到淡黃色油狀標(biāo)題化合物(16.81g,90％):TLC(5％乙酸乙酯/甲苯)Rf0.43；1H NMR(400,CDCl3)外消旋體的混合物；δ7.42(d,J=8.7Hz,1H),6.65-6.80(m,2H),4.40-4.55(m,2H),3.77(s,3H),2.81-2.97(m,3H),1.37-1.60(m,9H)；MS(ES)m/e 352/354(M+Na)+。b)(±)-3-羰基甲氧基-4-[2-[N-(叔-丁氧基羰基)-N-甲基氨基]甲基-4-甲氧基苯基]-3-丁酸甲酯將在丙腈(75ml)中的3-[N-(叔-丁氧基羰基)-N-甲基氨基]甲基-4-溴代茴香醚(4.95g,15mmol)、衣康酸二甲酯(3.08g,19.5mmol)、乙酸鈀(168mg,0.75mmol)、三-鄰-甲苯基膦(457mg,1.5mol)、二異丙基乙胺(5.2ml,30mmol)的溶液加熱至回流45分鐘，然后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中濃縮。用乙醚(150ml)稀釋殘留物，通過(guò)celite_過(guò)濾該混合物以除去不溶性物質(zhì)。濃縮濾液，從二甲苯中再濃縮殘留物。硅膠層析(梯度洗20％EtOAc/已烷，然后1∶1 EtOAc/已烷)除去膦和基線(xiàn)(Baseline)物質(zhì)；將所有其它具有Rf0.40-0.70的物質(zhì)收集在一起并濃縮留下渾濁的黃色油狀物TLC(30％乙酸乙酯/己烷)Rf0.41(主要產(chǎn)物)。
將該油狀物溶于甲醇(75ml)中，小心加入10％鈀炭。在氫氣(50psi)下振搖該混合物2.5小時(shí)，然后通過(guò)celite_過(guò)濾該混合物以除去催化劑，濃縮濾液，使殘留物再次置于該反應(yīng)條件下。再過(guò)2.5小時(shí)后，通過(guò)celite_過(guò)濾該混合物以除去催化劑，濃縮濾液留下淡黃色油狀物。從三氯甲烷/己烷中再次濃縮，然后經(jīng)硅膠層析(梯度20％乙酸乙酯/己烷，然后1∶1乙酸乙酯/己烷)得到為淡黃色油狀物的標(biāo)題化合物(4.53g,74％):TLC(30％乙酸乙酯/甲苯)Rf0.46；1H NMR(400,CDCl3)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物；δ7.03(d,J=8.2Hz,1H),6.65-6.80(m,2H),4.46(br s,2H),3.77(s,3H),3.64(s,3H),3.63(s,3H),2.62-3.12(m,7H),2.35-2.50(m,1H),1.47(br s,9H)；MS(ES)m/e 432(M+Na)+。c)(±)-3-羰基甲氧基-4-[2-(甲基氨基)甲基-4-甲氧基苯基]丁酸甲酯于0℃將THF(55ml)全部一次性加入(±)-3-羰基甲氧基-4-[2-N-(叔-丁氧基羰基)-N-甲基氨基]甲基-4-甲氧基苯基]丁酸甲酯(4.53g,11.6mmol)的無(wú)水二氯甲烷(55ml)中，使反應(yīng)物溫?zé)嶂潦覝亍?小時(shí)后，濃縮反應(yīng)物，使殘留物從甲苯(2×100ml)中再濃縮留下亮黃色油狀標(biāo)題化合物(11.06mmol，定量)MS(ES)m/e 310(M+H)+。d)(±)-8-甲氧基-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯將(±)-3-羰基甲氧基-4-[2-(甲基氨基)甲基-4-甲氧基苯基]丁酸甲酯(11.06mmol)和二異丙基乙胺(5.8ml,33.18mmol)的甲苯(110ml)溶液回流加熱25小時(shí)，RT攪拌4天，再于回流下另外加熱24小時(shí)。濃縮并硅膠層析(5％甲醇在1∶1乙酸乙酯/三氯甲烷)得到亮黃色固體標(biāo)題化合物(2.88g,94％):TLC(5％MeOH在EtOAc/CHCl3中)Rf0.63；1HNMR(250,CDCl3)δ7.02(d,J=8.4Hz,1H),6.78(dd,J=8.4,2.7Hz,1H),6.63(d,J=2.7Hz,1H),5.29(d,J=16.3Hz,1H),3.50-3.90(m,2H),3.79(s,3H),3.71(s,3H),2.73-3.16(m,3H),3.04(s,3H),2.41(dd,J=16.7,5.4Hz,1H)；MS(ES)m/e 300(M+Na)+,278(M+H)+。e)(±)-8-羥基-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯于0℃及氬氣下，將無(wú)水氯化鋁(1.35g,10.15mmol)全部一次性加入在無(wú)水二氯甲烷(20ml)中的(±)-8-甲氧基-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯(562mg,2.03mmol)和乙基硫醇(0.75ml,10.15mmol)的溶液中。將該混合物溫?zé)嶂潦覝夭嚢?.5小時(shí)，然后再次冷卻至0℃。加入冰冷水(20ml)，強(qiáng)烈攪拌該混合物5分鐘，然后用三氯甲烷提取(3×20ml)。干燥(硫酸鎂)合并的三氯甲烷層并濃縮至留下殘留物。抽吸過(guò)濾水層收集固體沉淀。在1∶1甲醇/三氯甲烷中合并從沉淀和得自三氯甲烷層的殘留物，濃縮該溶液得到灰白色固體。用熱甲醇研磨，使該混合物冷卻至室溫。抽吸過(guò)濾收集固體，用冷的甲醇和乙醚順序洗滌。于40℃高真空干燥得到無(wú)色固體的標(biāo)題化合物(467.9mg,88％):TLC(5％甲醇/三氯甲烷)Rf0.17；1H NMR(250,DMSO-d6)δ9.29(s,1H),6.89(d,J=8.1Hz,1H),6.50-6.70(m,2H),5.16(d,J=16.4Hz,1H),3.84(d,J=16.4Hz,1H),3.60-3.85(m,1H),3.56(s,3H),2.30-3.00(m,4H),2.86(s,3H)；MS(ES)m/e 286(M+Na)+,264(M+H)+。
制備32-[(3-羥基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物的制備a)2-[(3-羥基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物將2-氯代吡啶-N-氧化物(16.6g,0.1mmol)、3-氨基-1-丙醇(15.3ml,0.2mol)、碳酸氫鈉(42g,0.5mol)和叔-戊醇(100ml)加熱至回流。21小時(shí)后，冷卻該反應(yīng)物，用二氯甲烷(300ml)稀釋?zhuān)槲^(guò)濾除去不溶性物質(zhì)。濃縮濾液并從甲苯中再濃縮留下黃色油狀物。硅膠層析(20％甲醇/三氯甲烷)得到黃色固體的標(biāo)題化合物(15.62g,93％):TLC(20％甲醇/三氯甲烷)Rf0.48；1H NMR(250,CDCl3)δ8.07(dd,J=6.6,1.2Hz,1H),7.34(brt,1H),7.10-7.30(m,1H),6.64(dd,J=8.5,1.4Hz,1H),6.40-6.60(m,1H),4.49(br s,1H),3.65-3.90(m,2H),3.35-3.60(m,2H),1.75-2.00(m,2H)；MS(ES)m/e 169(M+H)+。
制備42-[(3-羥基-1-丙基)氨基]-4-硝基吡啶-N-氧化物的制備a)2-[(3-羥基-1-丙基)氨基]-4-硝基吡啶-N-氧化物根據(jù)制備3的方法，但用2-氯代-4-硝基吡啶-N-氧化物(見(jiàn)Jain,P.C.；chatterjee,S.K；Anand,N.Indean Journal of Chemical 1966,403)代替2-氯代吡啶-N-氧化物鹽酸鹽，制備為橙色固體的標(biāo)題化合物MS(ES)m/e 214.2(M+H)+。
制備52-[(3-羥基-1-丙基)氨基]-4-甲氧基吡啶-N-氧化物的制備a)2-[(3-羥基-1-丙基)氨基]-4-甲氧基吡啶-N-氧化物在氬氣下，將2-[(3-羥基-1-丙基)氨基]-4-硝基吡啶-N-氧化物(0.275g,1mmol)和0.5M NaOMe的甲醇(16ml,8mmol)的溶液于回流下加熱3小時(shí)。使該反應(yīng)物冷卻，加入冰醋酸(0.5ml,8mmol)。將該溶液濃縮至干燥，用二氯甲烷研磨殘留物。過(guò)濾除去不溶性物質(zhì)，濃縮濾液。硅膠層析(5-15％甲醇/二氯甲烷)得到無(wú)色油狀物的標(biāo)題化合物(0.23g,90％):MS(ES)m/e 199.0(M+H)+。
制備6(±)-8-羥基-3-氧代-8-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸酯的制備a)3-[N-(叔-丁氧基羰基)-N-(2,2,2-三氟乙基)氨基]甲基-4-溴代茴香醚于室溫下，將2,2,2-三氟乙胺(4.9ml,62.5mmol)快速加入4-溴代-3-溴代甲基茴香醚(7.00g,25mmol)的無(wú)水DMSO(25ml)的溶液中。將該反應(yīng)物溫?zé)嶂?0-35℃。2小時(shí)后，該反應(yīng)用冰冷的0.5N氫氧化鈉(100ml)稀釋?zhuān)靡颐烟崛?3×100ml)。合并的Et2O層用水(2×25ml)和鹽水(25ml)順序洗滌，干燥(硫酸鎂)并濃縮至淡黃色油狀物TLC(甲苯)Rf0.43；將該油狀物溶于在圓底燒瓶?jī)?nèi)的二氯甲烷(48ml)中，加入二碳酸二叔丁酯(10.48g,48.04mmol)。將含有反應(yīng)溶液的燒瓶置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上并于50℃真空旋轉(zhuǎn)16小時(shí)。用己烷(100ml)稀釋生成的殘留物，用少量純凈的固體產(chǎn)物(經(jīng)硅膠層析，用10％乙酸乙酯/己烷作為洗脫劑，由前面的試驗(yàn)獲得)接種該溶液。使該混合物靜置于室溫?cái)?shù)小時(shí)，然后放置冰箱過(guò)夜。通過(guò)抽吸過(guò)濾收集產(chǎn)物，用己烷洗滌。真空干燥得到無(wú)色固體的標(biāo)題化合物。濃縮母液并經(jīng)硅膠層析(10％乙酸乙酯/己烷)獲得另一些標(biāo)題化合物(1.42g；總計(jì)=8.61g,90％):TLC(10％乙酸乙酯/甲苯)Rf0.48；mp86-89℃；1H NMR(250,CDCl3)δ7.44(d,J=9.0Hz,1H),6.64-6.82(m,2H),4.52-4.70(m,2H),3.61-4.00(m,2H),3.77(s,3H),1.22-1.68(m,9H)。b)(±)-3-羰基甲氧基-4-[2-N-(叔-丁氧基羰基)-N-(2,2,2-三氟乙基)氨基]甲基-4-甲氧基苯基]丁酸甲酯將3-[N-(叔-丁氧基羰基)-N-(2,2,2-三氟乙基)氨基]甲基-4-溴代茴香醚(9.17g,23.03mmol)、衣康酸二甲酯(4.73g,29.94mmol)、乙酸鈀(259mg,1.15mmol)、三-鄰-甲苯基膦(701mg,2.30mol)和二異丙基乙胺(8.0ml,46.06mmol)的丙腈(115ml)溶液進(jìn)行脫氧(3×真空抽出/氬氣凈化周期)，然后在氬氣下加熱至回流。2小時(shí)后，濃縮該反應(yīng)物，并從甲苯中再濃縮。硅膠層析(30％乙酸乙酯/己烷，用二氯甲烷裝填樣品)除去膦和基線(xiàn)物質(zhì)；將所有其它具有Rf0.55-0.70的物質(zhì)收集在一起并濃縮留下黃色油狀物。將其溶解于20％乙酸乙酯/己烷(200ml)中并置于室溫1小時(shí)，然后放置冰箱過(guò)夜。過(guò)量該混合物以除去黃色沉淀，濃縮濾液留下9.93g(91％)黃色油狀物TLC(30％乙酸乙酯/己烷)Rf0.55(主要產(chǎn)物)。
將該油狀物溶于乙酸乙酯(100ml)中，加入10％鈀炭(4.44g,4.18mmol)。在氫氣(50psi)下振搖該混合物3.5小時(shí)，然后通過(guò)celite_過(guò)濾該混合物以除去催化劑，濃縮濾液，使殘留物經(jīng)硅膠層析(梯度20％乙酸乙酯/己烷)得到無(wú)色油狀物的標(biāo)題化合物(7.98g，兩個(gè)步驟73％):TLC(20％乙酸乙酯/甲苯)Rf0.35；1H NMR(250,CDCl3)δ7.05(d,J=8.4Hz,1H),6.76(dd,J=8.4,27Hz,1H),6.60-6.72(m,1H),4.50-4.80(m,2H),3.45-3.95(m,2H),3.77(s,3H),3.63(s,6H),2.85-3.09(m,2H),2.58-2.80(m,2H),2.33-2.50(m,1H),1.20-1.70(m,9H)；MS(ES)m/e 500(M+Na)+。c)(±)-3-羰基甲氧基-4-[2-(2,2,2-三氟乙基氨基甲基-4-甲氧基苯基]丁酸甲酯于0℃及氬氣下，將THF(55ml)全部一次性加入(±)-3-羰基甲氧基-4-[2-[N-(叔-丁氧基羰基)-N-(2,2,2-三氟乙基)氨基]甲基-4-甲氧基苯基]丁酸甲酯(7.98g,16.71mmol)的無(wú)水二氯甲烷(42ml)中，使反應(yīng)物溫?zé)嶂潦覝亍?.5小時(shí)后，濃縮反應(yīng)物，使殘留物從二甲苯中再濃縮。于40℃高真空干燥留下黃色固體的標(biāo)題化合物(8.70g，定量)MS(ES)m/e378(M+H)+。d)(±)-8-甲氧基-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯將(±)-3-羰基甲氧基-4-[2-(2,2,2-三氟乙基氨基甲基-4-甲氧基苯基]丁酸甲酯(16.71mmol)、三丙胺(9.5ml,50.13mmol)和二甲苯(170ml)的混合物于回流下加熱。63小時(shí)后，濃縮反應(yīng)物，使殘留物經(jīng)硅膠層析(2∶1乙酸乙酯/己烷，用二氯甲烷裝填)。得到淡黃色固體的標(biāo)題化合物(5.33g，兩步92％):TLC(40％乙酸乙酯/已烷)Rf0.49；1H NMR(250,CDCl3)δ7.04(d,J=8.5Hz,1H),6.80(dd,J=8.5,2.6Hz,1H),6.61(d,J=2.6Hz,1H),5.35(d,J=16.8Hz,1H),3.60-4.30(m,4H),3.79(s,3H),3.71(s,3H),2.81-3.15(m,3H),2.46(dd,J=16.9,5.5Hz,1H):MS(ES)m/e 368(M+Na)+,346(M+H)+。e)(±)-8-羥基-2-甲基3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯的制備于-5～-10℃在氬氣下用30分鐘將BBr3的二氯甲烷(1.0M,60ml,60mmol)溶液滴加到(±)-8-甲氧基-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸酯(5.16g,14.94mmol)的無(wú)水二氯甲烷(60ml)中。加入1小時(shí)后，于-5至-10℃，使反應(yīng)物再次完全冷卻于-10℃，通過(guò)小心滴加甲醇(60ml)使之驟冷。于-10℃-0℃攪拌該反應(yīng)物1小時(shí)，然后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮。先從甲醇(2×)，再?gòu)囊宜嵋阴ブ性俅螡饪s殘留物，然后通過(guò)硅膠墊過(guò)濾(乙酸乙酯洗脫)。濃縮濾液留下黃色固體，用熱己烷研磨該固體。獲得為灰白色固體的標(biāo)題化合物(4.74g,96％):TLC(1∶1乙酸乙酯/己烷)Rf0.40；1H NMR(400,DMSO-d6)δ9.28(s,1H),6.90(d,J=8.3Hz,1H),6.62(dd,J=8.3,2.5Hz,1H),6.57(d,J=2.5Hz,1H),5.27(d,J=16.7Hz,1H),4.22-4.38(m,1H),4.07-4.22(m,1H),4.07(d,J=16.7Hz,1H),3.72-3.83(m,1H),3.58(s,3H),2.94(dd,J=17.0,3.8Hz,1H),2.72(dd,J=16.7,9.1Hz,1H),2.65(dd,J=17.0,14Hz,1H),2.49(dd,J=16.7,5.0Hz,1H，由殘留溶劑的信號(hào)部分掩蔽)；MS(ES)m/e 354(M+Na)+。
制備7(±)-8-羥基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯的對(duì)映體的HPLC分離a)(R)-(+)-8-羥基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯和(S)-(-)-8-羥基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯通過(guò)手性HPLC，使用下列條件Diacel Chiralpak AS_柱(21.2×250mm)、EtOH流動(dòng)相、7ml/min流速、于UV 254mm檢測(cè)、70mg注入，將(±)-8-羥基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯拆分為它的對(duì)映體；(R)-(+)-8-羥基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯的tR=21.5min；(S)-(-)-8-羥基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯的tR=39.1min。
制備8(±)-8-甲氧基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯對(duì)映體的HPLC分離a)(R)-(+)-8-甲氧基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯和(S)-(-)-8-甲氧基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯通過(guò)手性HPLC，使用下列條件Diacel Chiralpak AS_柱(21.2×250mm)、乙腈流動(dòng)相、15ml/min流速、于UV 254mm檢測(cè)、500mg注入，將(±)-8-甲氧基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯拆分為它的對(duì)映體；(R)-(+)-8-甲氧基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯的tR=10.2min；(S)-(-)-8-甲氯基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯的tR=19.0min。
制備9(S)-(-)-8-甲氧基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯的去甲基化a)(S)-(-)-8-甲氧基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯于-8℃及氬氣下，用30分鐘將在三氯甲烷(160ml)中的(S)-(-)-8-甲氯基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯(15.0g,0.057mol)溶液滴加到三溴化硼(20.53ml,0.217mol)的三氯甲烷(160ml)的溶液中，維持溫度在-5℃和0℃之間。于-8攪拌反應(yīng)混合物30分鐘，然后開(kāi)始滴加甲醇(200ml)，維持溫度在大約0℃。濃縮反應(yīng)混合物得到粘性油狀物，使其從甲醇(100ml)中再濃縮。將該油狀物溶于水/甲醇中，過(guò)濾除去少量的深色固體。用50％氫氧化鈉中和濾液(pH7)，沉淀出白色固體。通過(guò)加入少量的乙酸將懸浮液的pH調(diào)至4.5。收集固體并真空干燥獲得標(biāo)題化合物(9.7g,68％)。產(chǎn)物經(jīng)HPLC測(cè)定手性純度Chiralpak AS_柱(4.6×50mm)、100％乙醇流動(dòng)相、0.5ml/min流速、于UV 215mm檢測(cè)；tR=7.5min(S-對(duì)映體，99％)；tR=4.4min(R-對(duì)映體，1％)。
制備102-[(3-羥基-1-丙基)氨基]-4,6-二甲基吡啶-N-氧化物的制備a)2-[(3-羥基-1-丙基)氨基]-4,6-二甲基吡啶-N-氧化物根據(jù)制備4的方法，但用2-氯代-4,6-二甲基吡啶-N-氧化物(見(jiàn)Brown,E.V.J.Amer.Soc.1957,79,3565)代替2-氯代吡啶-N-氧化物鹽酸鹽，制備為澄清的油狀標(biāo)題化合物MS(ES)m/e 197.2(M+H)+。
制備116-(甲基氨基)-2-吡啶基乙醇的制備a)2-(叔-丁氧基羰基氨基)-6-甲基吡啶于0℃將二碳酸二叔丁酯(9.69,44mmol)加入2-氨基-6-甲基吡啶(4.33g,40mmol)、Et3N(6.2ml,40mmol)和二氯甲烷(50ml)的攪拌溶液中。于室溫?cái)嚢柽^(guò)夜后，真空濃縮反應(yīng)混合物，用水稀釋?zhuān)枚燃淄?2×250ml)萃取。干燥(硫酸鎂)濃縮得到為無(wú)色油狀物的標(biāo)題化合物MS(ES)m/e 209(M+H)+。b)2-[(叔-丁氧基羰基)甲基氨基]-6-甲基吡啶于0℃將2-(叔-丁氧基羰基氨基)-6-甲基吡啶(2.1g,10mmol)的DMF(30ml)的溶液加入NaH(60％分散于礦物油中，0.44g,11mmol)在DMF(20ml)的懸浮液中。于0℃攪拌該反應(yīng)物15分鐘；然后加入甲基碘(1.6g,11mmol)。真空濃縮反應(yīng)混合物，用水稀釋?zhuān)枚燃淄?3×50ml)萃取。干燥(硫酸鎂)濃縮得到為無(wú)色油狀物的標(biāo)題化合物MS(ES)m/e 223(M+H)+。c)6-[(叔-丁氧基羰基)甲基氨基]-2-吡啶乙酸乙酯在THF(30ml)中制備LDA(18mmol)，冷卻至-78℃，加入2-[(叔-丁氧基羰基)甲基氨基]-6-甲基吡啶(2g,9mmol)，形成深紅色溶液。15分鐘后，加入碳酸二乙酯(18ml,15mmol)。于-78℃另外攪拌該burgundy黃色溶液15分鐘，然后用飽和氯化銨溶液使反應(yīng)物驟冷。將該混合物溫?zé)嶂潦覝兀靡宜嵋阴?3×30ml)萃取。用鹽水洗滌合并的有機(jī)層，干燥(硫酸鎂)，過(guò)濾并濃縮。硅膠層析得到為無(wú)色油狀物的標(biāo)題化合物MS(ES)m/e 294(M+H)+。d)6-(甲基氨基)-2-吡啶乙酸乙酯于室溫下，將6-[(叔-丁氧基羰基)甲基氨基]-2-吡啶乙酸乙酯(0.6g,2mmol)和4M鹽酸/二氧六環(huán)(5ml,20mmol)的溶液攪拌過(guò)夜，然后濃縮。從甲苯(3×)中重結(jié)晶得到白色固體的標(biāo)題化合物MS(ES)m/e195(M+H)+。e)6-(甲基氨基)-2-吡啶乙醇向氫化鋁理的THF(1.0M,20ml,20.4mmol)的機(jī)械攪拌的溶液滴加2-(甲基氨基)-2-吡啶乙酸乙酯(0.38g,2mmol)的THF(10ml)的溶液。加入完成后，將反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?℃，用10％氫氧化鈉溶液淬滅之。過(guò)濾除去固體，真空濃縮濾液。將殘留物溶于二氯甲烷中，干燥(硫酸鎂)并濃縮。從甲苯(3×)中重結(jié)晶得到為無(wú)色油狀物的標(biāo)題化合物MS(ES)m/e 153(M+H)+。
制備123-[(叔-丁氧基羰基)氨基]-1-丙醇的制備a)3-[(叔-丁氧基羰基)氨基]-1-丙醇于0℃將二碳酸二叔丁酯(10.91g,50mmol)的二氯甲烷(50ml)的溶液滴加到3-氨基-1-丙醇(11.5ml,150ml)的二氯甲烷(250ml)中。將混濁溶液溫?zé)嶂潦覝夭嚢?小時(shí)，然后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中濃縮。將殘留物溶于水(100ml)中，用乙醚(3×100ml)萃取。干燥(硫酸鎂)并濃縮留下無(wú)色油狀的標(biāo)題化合物1H NMR(250MHz,CDCl3)δ4.80(br s,1H),3.50-3.80(m,2H),3.13-3.42(m,2H),3.03(brt,1H),1.55-1.80(m,2H),1.45(s,9H)；MS(ES)m/e 198(M+Na)+。
制備133-(4-硝基芐氧基羰基氨基)-1-丙醇的制備a)3-(4-硝基芐氧基羰基氨基)-1-丙醇在氬氣中于室溫下，向3-氨基-1-丙醇(0.77g,1.1mmol)和三乙胺(2.85ml,7mmol)的THF(5ml)的溶液中加入4-硝基芐基氯代甲酸酯(2g,1mmol)的THF(20ml)的懸浮液中。于室溫下攪拌生成的混合物過(guò)周末，然后濃縮。硅膠層析(0％-2％甲醇/二氯甲烷)純化殘留物得到淡黃色油狀物的標(biāo)題化合物(0.80g,34％):MS(ES)m/e 254.3(M+H)+。
制備142-[N-(3-羥基-1-丙基)-N-(叔-丁氧基羰基)氨基]吡啶-N-氧化物的制備a)2-[N-(3-羥基-1-丙基)-N-(叔-丁氧基羰基)氨基]吡啶-N-氧化物用二碳酸二叔丁酯(11.4g,55.3mmol)處理2-[(3-羥基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物(18.0g,47.6mmol)的叔丁醇(80ml)溶液。18小時(shí)后，濃縮該溶液并用己烷研磨殘留物。真空干燥生成的固體得到為灰白色固體的標(biāo)題化合物(12.5g,98％):MS(ES)m/e 269.3(M+H)+。
制備15(±)-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基]-N-(叔-丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯的制備a)(±)-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基]-N-(叔-丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯根據(jù)實(shí)施例1(a)的方法，但用2-[N-(3-羥基-1-丙基]-N-(叔-丁氧基羰基)氨基]吡啶-N-氧化物代替2-[(3-羥基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物，制備為淺橙色泡沫狀的標(biāo)題化合物MS(ES)m/e 500.4(M+H)+。
制備162-[(3-羥基-1-丙基]氨基]-4-甲基吡啶-N-氧化物的制備將2-氯代-4-甲基吡啶-N-氧化物(12.1g,0.068mol)(Brown,E.V.J.Amer.Soc.1957,79,3565)、3-氨基-1-丙醇(10.33ml,0.14mol)、碳酸氫鈉(28g,0.34mol)和叔-戊醇(70ml)的混合物加熱至回流。16小時(shí)后，冷卻該反應(yīng)物，用二氯甲烷(300ml)稀釋?zhuān)槲^(guò)濾除去不溶性物質(zhì)。濃縮濾液并從甲苯中再濃縮留下黃色油狀物。從二氯甲烷/乙醚重結(jié)晶得到黃色固體的標(biāo)題化合物(10.87g,88％):TLC(15％甲醇/二氯甲烷)Rf0.44；1H NMR(400,CDCl3)δ7.92(d,J=6.7,1H),7.28(brt,1H),6.43(s,1H),6.33(dd,J=6.6,2.1Hz,1H),3.73(t,J=5.7Hz,2H),3.47(q,H=6.3Hz,2H),2.29(s,3H),1.82-1.88(m,2H)；MS(ES)m/e 183(M+H)+。
制備17通過(guò)(S)-8-羥基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯的烷基化制備(S)-8-羥基-3-氧代-2-[4-(三氟甲基)芐基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯a)(S)-3-氧代-8-[4-(三氟甲基)芐氧基-2-[4-(三氟甲基)芐基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯向(S)-8-羥基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-2-1H-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯(0.31g,1.24mmol)和4-(三氟甲基)芐基溴(0.89g,3.72mmol)的DMF(10ml)溶液中加入氫化鈉(60％懸浮于油中，0.11g,2.75mmol)。于室溫?cái)嚢?小時(shí)后，真空除去原料DMF。使殘留物在飽和碳酸氫鈉和乙酸乙酯之間分配。用乙酸乙酯萃取水相，用飽和氯化鈉洗滌合并的有機(jī)提取物，經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮得到澄清的油狀物(0.90g)。徑向?qū)游?5％丙酮/二氯甲烷，硅膠，6m板)得到為白色泡沫狀的標(biāo)題化合物(0.53g):MS(ES)m/e 566.1(M+H)+。b)(S)-8-羥基-3-氧代-2-[4-(三氟甲基)芐氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯將在甲醇(20ml)中的(S)-3-氧代-8-[4-(三氟甲基)芐氧基-2-[4-(三氟甲基)芐基-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯(0.78g,1.38mmol)和Pearlman’s催化劑(20mg)裝入Parr氫化瓶中。于50psi氫化24小時(shí)后，開(kāi)啟反應(yīng)瓶并通過(guò)過(guò)濾除去催化劑。除去溶劑得到白色泡沫物(0.60g)。徑向?qū)游?5％丙酮/二氯甲烷，硅膠，6m板)得到為白色泡沫的標(biāo)題化合物(0.42g)。1H NMR(250MHz,CDCl3)δ7.50(d,J=8.5Hz,2H),7.23(d,J=8.5Hz,2H),6.90(d,J=7.5Hz,1H),6.67(dd,J=7.5,3.4Hz,1H),6.39(d,J=3.4Hz,1H),5.05(m,2H),4.35(d,J=15.4Hz,1H),3.85(m,1H),3.70(s,3H),3.60(m,1H),2.95(m,4H),2.45(dd,J=17.1,5.1Hz,1H)。
制備18通過(guò)對(duì)映體選擇性合成制備(S)-8-羥基-3-氧代-2-[4-(三氟甲基)芐基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯a)4-溴代-3-溴代甲基茴香醚向在無(wú)水二氯甲烷(500ml)中的4-溴代-3-甲基茴香醚(100g,497mmol)的攪拌溶液加入N-溴代琥珀酰亞胺(97g,545mmol)，接著加入苯甲?；^(guò)氧化物(6g,25mmol)。將裝備有反射器的150瓦泛光燈置于離反應(yīng)瓶大約12英寸處溫和地回流該反應(yīng)物。24小時(shí)后，通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮反應(yīng)物至其體積的一半并放置4小時(shí)。濾除形成的白色沉淀并用少量二氯甲烷洗滌。濃縮濾液至干燥，用己烷研磨剩余的固體并過(guò)濾。真空干燥得到為白色針狀的標(biāo)題化合物(100.25g,72％):GC tR=6.56min(HP 530μm×20m聚甲基硅氧烷柱，He載體流速20ml/min,100℃初始溫度，1min初始時(shí)間，每10℃/min速率，200℃最終溫度，1min最終時(shí)間)1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.44(d,J=10Hz,1H),6.99(d,J=3Hz,1H),6.73(dd,1H),4.55(s,2H),3.80(s,3H)。b)3-[N-(4-三氟甲基芐基)氨基甲基]-4-溴代茴香醚向在無(wú)水DMSO(50ml)中的4-溴代-3-溴代甲基茴香醚(35g,125mmol)和無(wú)水THF(50ml)的攪拌溶液加入4-三氟甲基芐基胺(30g,171mmol)，接著加入三乙胺(18ml,129mmol)。于室溫下攪拌18小時(shí)后濃縮反應(yīng)物，用1N氫氧化鈉(250ml)水溶液稀釋并用乙醚(2×250ml)萃取。用鹽水洗滌合并的有機(jī)層，干燥(硫酸鈉)，濃縮至干。殘留物經(jīng)硅膠快速層析(10-20％乙酸乙酯/三氯甲烷)得到標(biāo)題化合物(34.17g,73％):TLC(20％乙酸乙酯/三氯甲烷)Rf0.63；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.59(d,J=8.2Hz,2H),7.49(d,J=8.2Hz,2H),7.43(d,J=8.6Hz,1H),6.96(d,J=3.1Hz,1H),6.70(dd,1H),3.86(s,2H),3.84(s,2H),3.79(s,3H),1.75(br s,1H)。c)3-[N-(叔丁氧基羰基)-N-(4-三氟甲基芐基)氨基甲基]-4-溴代茴香醚向在無(wú)水THF(100ml)中的3-[N-(4-三氟甲基芐基)氨基甲基]-4-溴代茴香醚(34.17g,91mmol)的攪拌溶液加入二碳酸二叔丁酯(22g,101mmol)，在氬氣下將該反應(yīng)物攪拌18小時(shí)(觀察到大量的氣體發(fā)生)。濃縮并硅膠層析(5-10％乙酸乙酯/己烷)得到為澄清油狀的標(biāo)題化合物(41.09g,95％):TLC(硅膠，20％乙酸乙酯/己烷)Rf0.44；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.57(d,J=8.3Hz,2H),7.40(d,J=8.3Hz,2H),7.39-7.33(m,2H),6.83和6.72(2s,1H),6.71(dd,1H),4.54和4.50(2s,2H),4.43(s,2H),3.75(s,3H),1.47(s,9H)。d)2-[N-(叔丁氧基羰基)-N-(4-三氟甲基芐基)氨基甲基]-4-甲氧基肉桂酸甲酯將3-[N-(叔丁氧基羰基)-N-(4-三氟甲基芐基)氨基甲基]-4-溴代茴香醚(37.08g,78mmol)、丙烯酸甲酯(35ml,390mmol)、乙酸鈀(0.88g,3.9mmol)、三-鄰-甲苯基膦(2.38g,7.8mol)和二異丙基乙胺(31ml,178mmol)的丙腈(200ml)溶液進(jìn)行脫氧合作用(3個(gè)真空抽出/氬氣沖洗周期)，然后在氬氣下加熱至回流(于80℃油浴)。6小時(shí)后，加入乙酸鈀(0.88g,3.9mmol)和三-鄰-甲苯基膦(2.38g,7.8mol)，然后在回流下再攪拌該反應(yīng)液18小時(shí)。將反應(yīng)物濃縮至干，使殘留物溶于1∶1的乙醚/石油醚(300ml)中并放置4小時(shí)。濾除灰色的沉淀，用少量1∶1的乙醚/石油醚(100ml)洗滌。濃縮橙紅色的濾液并經(jīng)硅膠快速層析(15％乙酸乙酯/己烷)純化。使殘留物溶于己烷中，并將混合物靜置數(shù)小時(shí)，然后經(jīng)過(guò)濾除去黃色沉淀。濃縮濾液留下粘稠的黃色油狀的標(biāo)題化合物(34.52g,92％):TLC(硅膠，20％乙酸乙酯/己烷)Rf0.45；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.80(br s,1H),7.57(d,J=8.1Hz,2H),7.53(d,J=8.6Hz,1H),7.29(br s,2H),6.83(dd,1H),6.72(br s,1H),6.23(d,J=15.7Hz,1H),4.58和4.53(2br s,2H),4.46和4.37(2br s,2H),3.80(s,3H),3.77(s,3H),1.49(s,9H)。e)2-[N-(叔丁氧基羰基)-N-(4-三氟甲基芐基)氨基甲基]-4-甲氧基二氫肉桂酸甲酯向10％鈀炭(5g,4.7mmol，用DMF預(yù)濕)加入2-[N-(叔丁氧基羰基)-N-(4-三氟甲基芐基)氨基甲基]-4-甲氧基肉桂酸甲酯(34.52g,72mmol)的甲醇(100ml)溶液。在Parr裝置中氫氣(50psi)中振搖該混合物7小時(shí)，然后通過(guò)celite_墊過(guò)濾以除去催化劑，濃縮濾液得到無(wú)色油狀的標(biāo)題化合物(34.15g,98％):1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.58(d,J=8.1Hz,2H),7.31(br s,2H),7.09(d,J=8.4Hz,1H),6.76(dd,1H),6.66(s,1H),4.47(br s,2H),4.40(br s,2H),3.76(s,3H),3.63(s,3H),2.79(br s,2H),2.47(t,2H),1.48(s,9H)。f)2-[N-(叔丁氧基羰基)-N-(4-三氟甲基芐基)氨基甲基]-4-甲氧基二氫肉桂酸向2-[N-(叔丁氧基羰基)-N-(4-三氟甲基芐基)氨基甲基]-4-甲氧基二氫肉桂酸(34.15g,71mmol)的二氧六環(huán)(150ml)的攪拌溶液加入1N氫氧化鈉(85ml,85mmol)水溶液。于室溫下攪拌混濁的反應(yīng)物4小時(shí)。用1N鹽酸(85ml,85mmol)水溶液中和生成的均勻溶液并用乙酸乙酯(2×250ml)萃取。用鹽水(250ml)洗滌合并的有機(jī)層，干燥(硫酸鎂)并濃縮得到粘稠澄清的油狀標(biāo)題化合物(34.60g,100％):TLC(95∶4∶1三氯甲烷/甲醇/乙酸)Rf0.49；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.58(d,J=8.1Hz,2H),7.30(br s,2H),7.09(d,J=8.4Hz,1H),6.78(dd,1H),6.65(d,J=2.6Hz,1H),4.47(br s,2H),4.42(br s,2H),3.76(s,3H),2.81(br s,2H),2.53(t,2H),1.47(s,9H)。g)(R)-4-芐基-2-噁唑烷酮基(oxazolidinonyl)2-[N-(叔丁氧基羰基)-N-(4-三氟甲基芐基)氨基甲基]-4-甲氧基二氫肉桂酰胺在氬氣下，通過(guò)注射器將氰脲酰氟(4.4ml,48mmol)加入到在無(wú)水二氯甲烷(200ml)的2-[N-(叔丁氧基羰基)-N-(4-三氟甲基芐基)氨基甲基]-4-甲氧基二氫肉桂酸(34.60g,71mmol)和吡啶(6.9ml,85mmol)的攪拌溶液中。于室溫下攪拌反應(yīng)物4小時(shí)。然后將生成的粘稠懸浮液通過(guò)celite_墊過(guò)濾，用少量的無(wú)水二氯甲烷(50ml)洗滌。將澄清的濾液傾入分液漏斗中并用冰冷的水(500ml)洗滌。干燥(硫酸鎂)并濃縮留下粗品酰氟(34.70g,100％)，可無(wú)需進(jìn)一步純化而使用。
于-78℃及氬氣下，通過(guò)注射器將正丁基鋰的己烷(2.5M,30ml,75mmol)加入在無(wú)水THF(300ml)中的(R)-4-芐基-2-噁唑烷酮(13.8g,78mmol)的攪拌溶液中。于-78℃攪拌反應(yīng)物15分鐘，然后通過(guò)注射器加入上面的酰氟(34.70g,71mmol)的無(wú)水THF(100ml)溶液。于-78℃攪拌反應(yīng)物1小時(shí)，然后用飽和氯化銨溶液使之驟冷，用乙酸乙酯(2×200ml)萃取。用鹽水(400ml)洗滌合并的有機(jī)層，干燥(硫酸鎂)，濃縮至干。經(jīng)硅膠快速層析(20％乙酸乙酯/己烷)純化得到為粘稠澄清的油狀標(biāo)題化合物(40.34g,90％):TLC(20％乙酸乙酯/己烷)Rf0.21；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.58(d,J=8.1Hz,2H),7.33-7.26(m,5H),7.16(m,3H),6.77(dd,1H),6.67(d,J=2.5Hz,1H),4.62(m,1H),4.60-4.40(m,4H),4.16(m,2H),3.76(s,3H),3.27(dd,1H),3.21-3.10(m,2H),2.88(brs,2H),2.72(dd,1H),1.48(s,9H)。h)(R)-4-芐基-2-噁唑烷酮基3-[2-[N-(叔丁氧基羰基)-N-(4-三氟甲基芐基)氨基甲基]-4-甲氧基苯基-2(S)-甲氧基羰基甲基丙酰胺于-78℃通過(guò)注射器將雙(三甲基硅烷基)氨化鋰(70ml,1M在THF中，70mmol)的溶液加入到在無(wú)水THF(300ml)的(R)-4-芐基-2-噁唑烷酮基2-[N-(叔丁氧基羰基)-N-(4-三氟甲基芐基)氨基甲基]-4-甲氧基二氫肉桂酰胺(40.30g,64mmol)的攪拌溶液中。30分鐘后，通過(guò)注射器加入溴代乙酸甲酯(30ml,317mmol)。于-78℃再經(jīng)過(guò)30分鐘后，使該反應(yīng)物升溫至-20℃并再攪拌6小時(shí)。用飽和氯化銨溶液使反應(yīng)物驟冷，用乙酸乙酯(2×200ml)萃取。用鹽水(300ml)洗滌合并的有機(jī)層，干燥(硫酸鎂)，濃縮至干。經(jīng)硅膠快速層析(20％乙酸乙酯/己烷)純化得到為白色固體的標(biāo)題化合物(38.62g,86％):HPLC(Altex UltrasphereTM-Si5u,20％乙酸乙酯/己烷)顯示，約20％未烷基化的原料仍存在。粗品反應(yīng)混合物的HPLC給出反應(yīng)物90％的de；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.57(d,J=8.1Hz,2H),7.40-7.11(m,8H),6.71(dd,1H),6.63(d,J=2.7Hz,1H),4.57-4.34(m,6H),4.03(d,J=8.6,1H),3.85(t,1H),3.72(s,3H),3.61(s,3H),3.28(dd,1H),2.90(dd 1H),2.86-2.71(m,2H),2.70(dd,1H),2.44(m,1H),1.48和1.46(2s,9H)。i)(S)-8-甲氧基-3-氧代-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯于0℃，用30分鐘將30％過(guò)氧化氫(18.9ml)和氫氧化鋰·H2O(2.3g,55mmol)的水(62ml)溶液滴加到(R)-4-芐基-2-噁唑烷酮基3-[2-[N-(叔丁氧基羰基)-N-(4-三氟甲基芐基)氨基甲基]-4-甲氧基苯基-2(S)-甲氧基羰基甲基丙酰胺(38.0g,54mmol)的THF(300ml)和水(100ml)的攪拌溶液中。于0℃再攪拌混濁的溶液1小時(shí)。于0℃用亞硫酸鈉(34.3g,272mmol)的水(175ml)溶液緩慢處理生成的均勻溶液，然后用冰冷的濃鹽酸(35ml)的水(150ml)溶液酸化。用乙酸乙酯(2×200ml)萃取該反應(yīng)物，用鹽水(400ml)洗滌合并的有機(jī)層，干燥(硫酸鎂)并濃縮至干。于室溫及攪拌下，用在二氧六環(huán)(400ml)中的4.0M鹽酸處理生成的殘留物(觀察到有氣體緩慢產(chǎn)生)。1小時(shí)后，濃縮反應(yīng)物并從1∶1的三氯甲烷/甲苯(2×)再濃縮，然后將殘留物(37.65g)溶于無(wú)水DMF(400ml)。于0℃及氬氣中，在攪拌下向在Dewar燒瓶中的該溶液加入三乙胺(15.3ml,109mmol)和碳酸氫鈉(22.9g,273mmol)，接著加入二苯基膦?；B氮化物(13ml,60mmol)。于0℃攪拌24小時(shí)后，濃縮反應(yīng)物至干燥。使殘留物溶于乙酸乙酯(400ml)中，順序用水(300ml)和鹽水(300ml)洗滌。干燥(硫酸鎂)，濃縮并經(jīng)硅膠快速層析(35％乙酸乙酯/己烷)得到為澄清粘稠的油狀標(biāo)題化合物(16.87g,74％):TLC(40％乙酸乙酯/己烷)Rf0.50；MS(ES)m/e 422.3(M+H)+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.52(d,J=8.1,2H),7.29(d,J=8.1Hz,2H),7.02(d,J=8.5Hz,1H),7.75(dd,1H),6.36(d,J=2.7Hz,1H),5.18(d,J=16.5Hz,1H),4.96(d,J=15.4Hz,1H),4.48(d,J=15.4Hz,1H),3.87(m,1H),3.74(d,J=16.5Hz,1H),3.73(s,3H),3.71(s,3H),3.08(dd,1H),3.02(dd 1H),2.95(dd,1H),2.48(dd,1H)。j)(S)-8-羥基-3-氧代-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯于-20℃及氬氣下，用30分鐘將三溴化硼的二氯甲烷(1.0M,160ml,160mmol)溶液滴加到(S)-8-甲氧基-3-氧代-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯(16.67g,39.6mmol)的無(wú)水二氯甲烷(150ml)溶液中。于-15℃至-20℃加入1.5小時(shí)后，使反應(yīng)物冷卻至-20℃，通過(guò)小心滴加甲醇(160ml)溶液使之驟冷。于-10℃至0℃再攪拌反應(yīng)物1小時(shí)，然后于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮。從甲醇(2×)中再濃縮殘留物。經(jīng)硅膠快速層析(50-100％乙酸乙酯/己烷)純化得到為白色固體的標(biāo)題化合物(14.87g,92％):[α]D-81.8°(c,1.0，甲醇)；TLC(硅膠，50％乙酸乙酯/己烷)Rf0.54；MS(ES)m/e 408.2(M+H)+；1H NMR(400,CDCl3+2％DMSO-d6)δ7.53(d,J=8.1Hz,2H),7.31(d,J=8.1Hz,2H),6.93(d,J=8.4Hz,1H),6.70(dd,1H),6.41(d,J=2.3Hz,1H),5.16(d,J=16.4Hz,1H),5.01(d,J=15.6Hz,1H),4.39(d,J=15.6Hz,1H),3.84(m,1H),3.73(d,J=16.4Hz,1H),3.71(s,3H),3.01(dd,1H),2.98(m 1H),2.90(dd,1H),2.47(dd,1H)。
制備19(±)-8-甲氧基-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯對(duì)映體的HPLC分離a)(R)-(+)-8-甲氧基-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯和(S)-(-)-8-甲氧基-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯通過(guò)手性HPLC，使用下列條件Diacel Chiralcel OJ_柱(21.2×250mm)、甲醇流動(dòng)相、15ml/min流速、于UV 295mm檢測(cè)、400mg注入，將(±)-8-甲氧基-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯拆分為它的對(duì)映體；(R)-(+)-8-甲氧基-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯的tR=4.9min；(S)-(-)-8-甲氧基-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯的tR=6.6min。
制備20(±)-8-羥基-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯對(duì)映體的HPLC分離a)(R)-(+)-8-羥基-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯和(S)-(-)-8-羥基-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯通過(guò)手性HPLC，使用下列條件Diacel Chiralcel OD_柱(21.2×250mm)、20％乙醇在己烷中的流動(dòng)相、10ml/min流速、于UV 254mm檢測(cè)、100mg注入，將(±)-8-羥基-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯拆分為它的對(duì)映體；(R)-(+)-8-羥基-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯的tR=14.4min；(S)-(-)-8-羥基-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯的tR=18.5min。
制備21通過(guò)對(duì)映體選擇性合成制備(S)-8-羥基-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯a)4-溴代-3-溴代甲基茴香醚向在無(wú)水二氯甲烷(500ml)中的4-溴代-3-甲基茴香醚(100g,497mmol)的攪拌溶液加入N-溴代琥珀酰亞胺(97g,545mmol)，接著加入苯甲酰基過(guò)氧化物(6g,25mmol)。將裝備有反射器的150瓦泛光燈置于離反應(yīng)瓶大約12英寸處溫和地回流該反應(yīng)物。24小時(shí)后，通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮反應(yīng)物至其體積的一半并放置4小時(shí)。濾除形成的白色沉淀并用少量二氯甲烷洗滌。濃縮濾液至干燥，用己烷研磨剩余的固體并過(guò)濾。真空干燥得到為白色針狀的標(biāo)題化合物(100.25g,72％):GC tR=6.56min(HP 530μm×20m聚甲基硅氧烷柱，He載體流速20ml/min,100℃初始溫度，1min初始時(shí)間，每10℃/min速率，200℃最終溫度，1min最終時(shí)間)1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.44(d,J=10Hz,1H),6.99(d,J=3Hz,1H),6.73(dd,1H),4.55(s,2H),3.80(s,3H)。b)3-[N-(2,2,2-三氟乙基)氨基甲基]-4-溴代茴香醚于室溫下，將2,2,2-三氟乙胺(24g,242mmol)快速加入4-溴代-3-溴代甲基茴香醚(33.6g,120mmol)的無(wú)水DMSO(125ml)的攪拌溶液中。使該反應(yīng)物溫?zé)嶂?0-35℃。攪拌18小時(shí)后，用冰冷的1N氫氧化鈉(200ml)水溶液稀釋并用乙醚(2×300ml)萃取。用鹽水(300ml)洗滌合并的有機(jī)層，干燥(硫酸鈉)，濃縮得到為淡黃色油狀的標(biāo)題化合物(41.35g,96％):TLC(甲苯)Rf0.32；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.43(d,J=9Hz,1H),6.97(d,J=3Hz,1H),6.71(dd,1H),3.93(br s,2H),3.80(s,3H),3.18(m,2H),1.86(br s,1H)。c)3-[N-(叔丁氧基羰基)-N-(2,2,2-三氟乙基)氨基甲基]-4-溴代茴香醚向3-[N-(2,2,2-三氟乙基)氨基甲基]-4-溴代茴香醚(41.35g,137mmol)中加入二碳酸二叔丁酯(36g,165mmol，通過(guò)在熱水浴中液化)。用少量二氯甲烷(約20ml)沖洗該反應(yīng)物，并在氬氣下于50℃油浴中攪拌18小時(shí)(觀察到氣體緩慢發(fā)生)。在真空下通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮后，用己烷(100ml)稀釋生成的殘留物，用少量純凈的固體產(chǎn)物(通過(guò)硅膠層析前述的反應(yīng)物，用10％乙酸乙酯/己烷作為洗脫劑獲得)接種該溶液。允許該混合物于室溫下靜置數(shù)小時(shí)，然后放置冰箱過(guò)夜。通過(guò)抽吸過(guò)濾收集產(chǎn)物并用己烷洗滌。真空干燥得到為無(wú)色固體的標(biāo)題化合物(48.54g,88％):TLC(10％乙酸乙酯/甲苯)Rf0.52；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.44(d,J=9Hz,1H),6.75(dd,1H),6.71(s,1H),4.65和4.58(2s,2H),3.90和3.78(2m,2H),3.77(s,3H),1.51和1.42(2s,9H)。d)2-[N-(叔丁氧基羰基)-N-(2,2,2-三氟乙基)氨基甲基]-4-甲氧基肉桂酸甲酯將3-[N-(叔丁氧基羰基)-N-(2,2,2-三氟乙基)氨基甲基]-4-溴代茴香醚(48.19g,121mmol)、丙烯酸甲酯(55ml,605mmol)、乙酸鈀(1.36g,6.1mmol)、三-鄰-甲苯基膦(3.69g,12mol)和二異丙基乙胺(49ml,278mmol)的丙腈(200ml)溶液進(jìn)行脫氧合作用(3個(gè)真空抽出/氬氣沖洗周期)，然后在氬氣下于80℃油浴加熱至回流。6小時(shí)后，加入乙酸鈀(1.36g,6.1mmol)和三-鄰-甲苯基膦(3.69g,12mol)，然后在回流下再攪拌18小時(shí)。將反應(yīng)物濃縮至干，使殘留物溶于1∶1的乙醚/石油醚(300ml)中并放置4小時(shí)。濾除灰色的沉淀，用少量1∶1的乙醚/石油醚(約100ml)洗滌。濃縮橙紅色的濾液并經(jīng)硅膠快速層析(15％乙酸乙酯/己烷)純化。使殘留物溶于己烷中，并將混合物靜置2小時(shí)，然后經(jīng)過(guò)濾除去黃色沉淀。濃縮濾液留下黃色油狀的標(biāo)題化合物(45.85g,94％):TLC(20％乙酸乙酯/己烷)Rf0.50；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.84(d,J=16Hz,1H),7.57(d,J=9Hz,1H),6.86(dd,1H),6.74和6.72(2s,1H),6.26(d,J=16Hz,1H),4.74和4.70(2s,2H),3.83(s,3H),3.79(s,3H),3.80和3.66(2m,2H),1.51和1.45(2s,9H)。e)2-[N-(叔丁氧基羰基)-N-(2,2,2-三氟乙基)氨基甲基]-4-甲氧基二氫肉桂酸甲酯向10％鈀炭(5g,4.7mmol，用DMF預(yù)濕)加入2-[N-(叔-丁氧基羰基)-N-(2,2,2-三氟乙基)氨基]甲基-4-甲氧基肉桂酸甲酯(45.85g,113mmol)的甲醇(100ml)溶液。在Parr裝置中氫氣(50psi)中振搖該混合物6小時(shí)，然后通過(guò)celite_墊過(guò)濾以除去催化劑，濃縮濾液得到無(wú)色油狀的標(biāo)題化合物(43.71g,95％):1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.11(d,J=8Hz,1H),6.78(dd,1H),6.65(s,1H),4.63和4.60(2s,2H),3.84和3.70(2m,2H),3.77(s,3H),3.66(s,3H),2.86(t,2H),2.53(t,2H),1.50和1.44(2s,9H)。f)2-[N-(叔丁氧基羰基)-N-(2,2,2-三氟乙基)氨基甲基]-4-甲氧基二氫肉桂酸向2-[N-(叔丁氧基羰基)-N-(2,2,2-三氟乙基)氨基甲基]-4-甲氧基二氫肉桂酸甲酯(43.71g,108mmol)的二氧六環(huán)(200ml)的攪拌溶液加入1N氫氧化鈉(130ml,130mmol)水溶液。于室溫下攪拌混濁的反應(yīng)物4小時(shí)。用1N鹽酸(130ml,130mmol)中和生成的均勻溶液并用乙酸乙酯(2×250ml)萃取。用鹽水(250ml)洗滌合并的有機(jī)層，干燥(硫酸鎂)并濃縮得到粘稠澄清的油狀標(biāo)題化合物(45.01g,100％):TLC(95∶4∶1三氯甲烷，甲醇，乙酸)Rf0.49。g)(R)-4-芐基-2-噁唑烷酮基2-[N-(叔丁氧基羰基)-N-(2,2,2-三氟乙基)氨基甲基]-4-甲氧基二氫肉桂酰胺在氬氣下，通過(guò)注射器將氰脲酰氟(6.8ml.74mmol)加入到在無(wú)水二氯甲烷(400ml)的2-[N-(叔丁氧基羰基)-N-(2,2,2-三氟乙基)氨基甲基]-4-甲氧基二氫肉桂酸(45.0g,108mmol)和吡啶(10ml,124mmol)的攪拌溶液中。于室溫下攪拌反應(yīng)物4小時(shí)。然后將生成的粘稠懸浮液通過(guò)celite_墊過(guò)濾，用少量的無(wú)水二氯甲烷(50ml)洗滌濾墊。將澄清的濾液傾入分液漏斗中并用冰冷的水(750ml)洗滌。干燥(硫酸鎂)并濃縮留下粗品酰氟(43.32g,100％)，可無(wú)需進(jìn)一步純化而使用。
于-78℃及氬氣下，通過(guò)注射器將正丁基鋰的己烷(2.5M,113mmol)溶液加入在無(wú)水THF(400ml)中的(R)-4-芐基-2-噁唑烷酮(21g,119mmol)的攪拌溶液中。于-78℃攪拌反應(yīng)物15分鐘，然后通過(guò)注射器加入上面的酰氟(43.32g,108mmol)的無(wú)水THF(100ml)溶液。于-78℃攪拌反應(yīng)物1小時(shí)，然后用飽和氯化銨溶液使之驟冷，用乙酸乙酯(2×250ml)萃取。用鹽水(500ml)洗滌合并的有機(jī)層，干燥(硫酸鎂)，濃縮至干。經(jīng)硅膠快速層析(20％乙酸乙酯/己烷)純化得到為粘稠澄清的油狀標(biāo)題化合物(52.27g,91％):TLC(硅膠，20％乙酸乙酯/己烷)Rf0.24；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.34-7.26(m,3H),7.19-7.16(m,3H),6.78(dd,1H),6.67(s,1H),4.68-4.63(m,3H),4.21-4.11(m,2H),3.87和3.74(2m,2H),3.77(s,3H),3.28(dd,1H),3.17(m,2H),2.93(m,2H),2.75(dd,1H),1.50和1.45(2s,9H)。h)(R)-4-芐基-2-噁唑烷酮基3-[2-[N-(叔丁氧基羰基)-N-(2,2,2-三氟乙基)氨基甲基]-4-甲氧基苯基-2(S)-甲氧基羰基甲基丙酰胺于-78℃通過(guò)注射器將雙(三甲基硅烷基)氨化鋰(115ml,1M在THF中，115mmol)的溶液加入到在無(wú)水THF(300ml)的(R)-4-芐基-2-噁唑烷酮基2-[N-(叔丁氧基羰基)-N-(2,2,2-三氟乙基)氨基甲基]-4-甲氧基二氫肉桂酰胺(55.2g,100mmol)的攪拌溶液中。30分鐘后，通過(guò)注射器加入溴代乙酸甲酯(47ml,497mmol)。于-78℃再經(jīng)過(guò)30分鐘后，使該反應(yīng)物升溫至-20℃并再攪拌6小時(shí)。用飽和氯化銨溶液(400ml)使反應(yīng)物驟冷，用乙酸乙酯(2×250ml)萃取。用鹽水(400ml)洗滌合并的有機(jī)層，干燥(硫酸鎂)，濃縮至干。經(jīng)硅膠快速層析(20％乙酸乙酯/己烷)純化得到為白色固體的標(biāo)題化合物(52.44g,75％):HPLC(AltexUltrasphereTM-Si 5u,20％乙酸乙酯/己烷)顯示，約6-7％未烷基化的原料仍存在。粗品反應(yīng)混合物的HPLC給出反應(yīng)物86％的de；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.35-7.13(m,6H),6.73(dd,1H),6.64(s,1H),4.69-4.53(m,4H),4.04(d,1H),3.87(t,1H),3.85-3.72(m,2H),3.75(s,3H),3.64(s,3H),3.31(dd,1H),2.95(dd 1H),2.92-2.71(m,2H),2.71(dd,1H),2.50(m,1H),1.50和1.47(2br s,9H)。i)(S)-8-甲氧基-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯于0℃，用30分鐘將30％過(guò)氧化氫(26ml)和氫氧化鋰·H2O(3.2g,75mmol)的水(85ml)溶液滴加到(R)-4-芐基-2-噁唑烷酮基3-[2-[N-(叔丁氧基羰基)-N-(2,2,2-三氟乙基)氨基甲基]-4-甲氧基苯基]-2(S)-甲氧基羰基甲基丙酰胺(52.40g,75mmol)的THF(300ml)和水(100ml)的攪拌溶液中。于0℃再攪拌混濁的溶液1小時(shí)。于0℃用亞硫酸鈉(46g,365mmol)的水(240ml)溶液緩慢處理生成的均勻溶液，然后用冰冷的濃鹽酸(45ml)的水(200ml)溶液酸化。用乙酸乙酯(2×300ml)萃取該反應(yīng)物，用鹽水(600ml)洗滌合并的有機(jī)層，干燥(硫酸鎂)并濃縮至干。于室溫及攪拌下，用在二氧六環(huán)(500ml)中的4.0M鹽酸處理生成的殘留物(觀察到有氣體緩慢產(chǎn)生)。1小時(shí)后，濃縮反應(yīng)物并從1∶1的三氯甲烷/甲苯(2×)再濃縮，然后將殘留物(48.89g)溶于無(wú)水DMF(500ml)。于0℃及氬氣中，在攪拌下向在Dewar燒瓶中的該溶液加入三乙胺(21ml,150mmol)和碳酸氫鈉(31.5g,375mmol)，接著加入二苯基膦?；B氮化物(18ml,83.5mmol)。于0℃攪拌24小時(shí)后，濃縮反應(yīng)物至干燥。使殘留物溶于乙酸乙酯(500ml)中，順序用水(400ml)和鹽水(400ml)洗滌。干燥(硫酸鎂)，濃縮并經(jīng)硅膠快速層析(30％乙酸乙酯/己烷)得到為澄清粘稠的油狀標(biāo)題化合物(21.81g,84％):[α]D-132.6°(c,1.0，甲醇)，TLC(40％乙酸乙酯/己烷)Rf0.56；手性HPLC(Chiracel OD,20％乙醇/己烷)k’=2.05；得自具有k’=1.86(未檢測(cè)出)的外消旋體標(biāo)準(zhǔn)品的相對(duì)對(duì)映體；MS(ES)m/e 346.2(M+H)+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.03(d,J=8.5Hz,1H),6.79(dd,1H),6.61(d,J=2.6Hz,1H),5.35(d,J=16.7Hz,1H),4.17(m,1H),4.0(m,1H),3.99(d,J=16.7Hz,1H),3.84(m,1H),3.79(s,3H),3.71(s,3H),3.01(m,2H),2.91(dd,1H),2.47(dd,1H)。C16H18F3NO4的分析計(jì)算值C,55.65；H,5.25；N,4.06。實(shí)測(cè)值C,55.62；H,5.27；N,4.04。j)(S)-8-羥基-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯于-20℃及氬氣下，用30分鐘將三溴化硼的二氯甲烷(1.0M,250ml,250mmol)滴加到(S)-8-甲氧基-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯(21.5g,62.3mmol)的無(wú)水二氯甲烷(230ml)溶液中。加入1.5小時(shí)后，于-15℃至-20℃使反應(yīng)物冷卻至-20℃，通過(guò)小心滴加甲醇(250ml)溶液使之驟冷。于-10℃至0℃再攪拌反應(yīng)物1小時(shí)，然后于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮。從甲醇(2×)中再濃縮殘留物。經(jīng)硅膠快速層析(50％乙酸乙酯/己烷)純化得到為白色固體的標(biāo)題化合物(19.38g,94％):[α]D-130.5°(c1.0，甲醇)；TLC(硅膠，40％乙酸乙酯/己烷)Rf0.40；MS(ES)m/e 332.1(M+H)+；1H NMR(400,CDCl3+2％DMSO-d6)δ6.92(d,J=8.3Hz,1H),6.71(dd,1H),6.58(d,J=2.5Hz,1H),5.29(d,J=16.7Hz,1H),4.21-3.98(m,2H),3.96(d,J=16.7Hz,1H),3.82(m,1H),3.68(s,3H),2.98(dd,1H),2.94(dd,1H),2.83(dd,1H),2.46(dd,1H)。C15H16F3NO4的分析計(jì)算值C,54.38；H,4.87；N,4.23。實(shí)測(cè)值C,54.40；H,4.96；N,4.22。
制備22通過(guò)對(duì)映體選擇性合成制備(S)-8-羥基-3-氧代-2-(2-苯基乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯a)3-[N-(叔-丁氧基羰基)-N-(2-苯基乙基)氨基]甲基-4-溴代茴香醚于室溫下，將2-苯乙胺(19.0ml,150.0mmol)全部一次性加入在干燥THF(200ml)中的4-溴代-3-溴代甲基茴香醚(14.0g,50.0mmol)中。在18小時(shí)后，濃縮混合物，使殘留物溶于2M氫氧化鈉(300ml)中，用CH2Cl2(3×200ml)萃取。經(jīng)硫酸鎂干燥合并的二氯甲烷層，粗產(chǎn)物通過(guò)硅膠塞過(guò)濾，用50％乙酸乙酯/己烷作為洗脫劑。減壓濃縮濾液得到黃色油狀物MS(ES)m/e 320(M+H)+。
將上述黃色油狀物溶于無(wú)水THF(200ml)中，于室溫下，一次性加入二碳酸二叔丁酯(13.0g,60.0mmol)。1小時(shí)后濃縮濾液。硅膠快速層析(10％乙酸乙酯/己烷)得到灰白色固體標(biāo)題化合物(20.8g，自4-溴代-3-溴代甲基茴香醚的100％):1H NMR(250MHz,CDCl3)δ7.51-7.10(m,6H),6.85-6.60(m,2H),4.52-4.33(m,2H),3.71(s,3H),3.52-3.31(m,2H),2.92-2.73(m,2H),1.61-1.33(m,9H)。b)4-[2-N-(叔-丁氧基羰基)-N-(2-苯基乙基)氨基]甲基-4-甲氧基苯基]丙酸將在丙腈(250ml)中的3-[N-(叔-丁氧基羰基)-N-(2-苯基乙基)氨基]甲基-4-溴代茴香醚(20.0g,48.0mmol)、丙烯酸芐酯(23.0g,144mmol)、乙酸鈀(540mg,2.40mmol)、三-鄰-甲苯基膦(1.46g,4.80mol)和二異丙基乙胺(17.0ml,96.0mmol)的溶液進(jìn)行脫氧合作用(3個(gè)真空抽出/氬氣沖洗周期)，然后在氬氣下加熱至回流，48小時(shí)后使該反應(yīng)物冷卻至室溫，通過(guò)celite_墊過(guò)濾，并濃縮，硅膠快速層析(10％乙酸乙酯/己烷)得到黃色油狀物，使其溶解于10％乙酸乙酯/己烷(100ml)中，并于4℃放置72小時(shí)。通過(guò)過(guò)濾除去黃色沉淀，然后濃縮溶液得到淡黃色油狀物(14.98g,62％):1H NMR(250MHz,CDCl3)δ8.00-7.85(m,1H),7.61-7.01(m,11H),6.85-6.76(m,2H),6.75-6.67(m,1H),6.32(m,1H),5.22(s,2H),4.60-4.41(m,2H),3.75(s,3H),3.52-3.20(m,2H),2.93-2.71(m,2H),1.55-1.33(m,9H)。
于0℃將上面所獲油狀物溶于甲醇(150ml)中，加入10％鈀炭(6.40g,6.00mmol)。將該混合物溫?zé)嶂潦覝兀跉錃?50psi)下振搖7小時(shí)，然后通過(guò)celite_墊過(guò)濾以除去催化劑，減壓濃縮濾液得到為黃色粘稠的油狀標(biāo)題化合物(10.35g,83％):1H NMR(250MHz,CDCl3)δ7.35-7.02(m,6H),6.85-6.76(m,2H),6.75-6.73(m,1H),6.69-6.68(m,1H),4.42-4.25(m,2H),3.73(s,3H),3.44-3.25(m,2H),2.92-2.73(m,4H),2.59-2.50(m,2H),1.60-1.33(m,9H)。c)(R)-1,1-二甲基乙基[[5-甲氧基-2-[3-氧代-3-[2-氧代-4-(苯基甲基)-3-噁唑烷酮基]丙基]苯基]甲基](2-苯基乙基]氨基甲酸酯于室溫下，向4-[2-N-(叔-丁氧基羰基)-N-(2-苯基乙基)氨基]甲基-4-甲氧基苯基]丙酸(10.35g,25.0mmol)的二氯甲烷(125ml)溶液加入吡啶(2.4ml,30.0mmol)，然后加入氰脲酰氟(1.4ml,15.0mmol)。2小時(shí)后，通過(guò)celite_墊過(guò)濾該混合物，用水(100ml)和鹽水(100ml)順序洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，并濃縮。
于-78℃，將正丁基鋰(11.0ml,2.5M在己烷中的溶液，27.5mmol)加入在無(wú)水THF(125ml)中的(R)-4-芐基-2-噁唑烷酮(5.30g,30mmol)的溶液中。15分鐘后，用5分鐘滴加上述的酰氟的無(wú)水THF(25ml)溶液。1小時(shí)后，將該混合物傾入300ml水中并用乙酸乙酯(3×200ml)萃取。用硫酸鎂干燥合并的乙酸乙酯層并濃縮。硅膠快速層析(30％乙酸乙酯/己烷)得到粘稠的油狀標(biāo)題化合物(12.12g,85％):1H NMR(250MHz,CDCl3)δ7.41-7.12(m,11H),6.65(m,1H),6.60(m,1H),4.70-4.62(m,1H),4.50-4.35(m,2H),4.21-4.10(m,2H),3.71(s,3H),3.50-2.61(m,10H),1.55-1.41(m,9H)。d)[R-(R*,S*)]-β-[[4-甲氧基-2-[[[(1,1-二甲基乙氧基)羰基](2-苯基乙基]氨基]甲基]苯基]甲基]-γ-氧代-4-(苯基甲基)-3-噁唑烷丁酸甲酯于-78℃，將雙(三甲基硅烷基)氨化鋰(22.0ml,1M在THF中，22.0mmol)加入到在無(wú)水THF(100ml)的(R)-1,1-二甲基乙基[[5-甲氧基-2-[3-氧代-3-[2-氧代-4-(苯基甲基)-3-噁唑烷酮基]丙基]苯基]甲基](2-苯基乙基]氨基甲酸酯(12.12g,21.0mmol)的溶液中。15分鐘后，加入溴代乙酸甲酯(9.9ml,105mmol)，然后使該混合物升溫至-20℃。3小時(shí)后，將該混合物傾入200ml水中，用乙酸乙酯(3×500ml)萃取。用硫酸鎂干燥合并的乙酸乙酯層并濃縮。經(jīng)硅膠快速層析(25％乙酸乙酯/己烷)得到9.91g分別為標(biāo)題化合物和(R)-1,1-二甲基乙基[[5-甲氧基-2-[3-氧代-3-[2-氧代-4-(苯基甲基)-3-噁唑烷酮基]丙基]苯基]甲基](2-苯基乙基]氨基甲酸酯的3∶2的混合物(HPLC,20％乙酸乙酯/己烷)。該混合物無(wú)需進(jìn)一步純化而使用MS(ES)m/e 667(M+Na)+。e)(S)-8-甲氧基-3-氧代-2-(2-苯基乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯于0℃，用10分鐘將氫氧化鋰一水合物(646mg,15.4mmol)和過(guò)氧化氫(5.2ml,30％在水中，46.2mmol)的水(25ml)溶液加入[R-(R*,S*)]-β-[[4-甲氧基-2-[[[(1,1-二甲基乙氧基)羰基](2-苯基乙基]氨基]甲基]苯基]甲基]-γ-氧代-4-(苯基甲基)-3-噁唑烷丁酸甲酯(9.91g,15.4mmol)的THF(75ml)的溶液中。1.5小時(shí)后，加入亞硫酸鈉(9.7g,77mmol)的水(100ml)溶液。用2M鹽酸(35ml)使該混合物酸化至pH4，用乙酸乙酯(3×200ml)萃取，用硫酸鎂干燥合并的乙酸乙酯層并濃縮。使生成的殘留物溶解于二氧六環(huán)(75ml)中的4.0M鹽酸中。45分鐘后，濃縮該反應(yīng)物并從甲苯(200ml)再濃縮。
使上述的殘留物溶于無(wú)水DMF(75ml)。于室溫下，向該溶液加入碳酸氫鈉(6.50g,770mmol)和三乙胺(4.3ml,30.8mmol)。將該混合物冷卻至0℃，加入二苯基膦?；B氮化物(5ml,23.1mmol)。16小時(shí)后濃縮該混合物，使生成的糊狀物溶于乙酸乙酯(500ml)中，用水(2×300ml)洗滌。經(jīng)硫酸鎂干燥，并濃縮。硅膠快速層析(40％乙酸乙酯/己烷)得到為澄清油狀物的標(biāo)題化合物(2.61g,33％得自[R-(R*,S*)]-β-[[4-甲氧基-2-[[[(1,1-二甲基乙氧基)羰基](2-苯基乙基]氨基]甲基]苯基]甲基]-γ-氧代-4-(苯基甲基)-3-噁唑烷丁酸甲酯)MS(ES)m/e 390(M+Na)+。f)(S)-8-羥基-3-氧代-2-(2-苯基乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯于-20℃，將三溴化硼(21.3ml,1M在二氯甲烷中，21.3mmol)加入(S)-8-甲氨基-3-氧代-2-(2-苯基乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯(2.61g,7.1mmol)的無(wú)水二氯甲烷(40ml)溶液中。45分鐘后，用甲醇(200ml)使該混合物驟冷并濃縮。通過(guò)硅膠塞過(guò)濾殘留物，用50％乙酸乙酯/己烷作為洗脫劑。使生成的橙色固體從甲醇/水中重結(jié)晶得到為灰白色固體的標(biāo)題化合物(2.16g,81％):MS(ES)m/e 376(M+Na)+。
實(shí)施例1(±)-8-[3-(2-吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸的制備a)(±)-8-[3-(2-(N-氧代吡啶基)氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯于室溫、氬氣中，將2-[(3-羥基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物(1.4g,8mmol)的無(wú)水DMF(8ml)溶液滴加到(±)-8-羥基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯(1.7g,7mmol)、三苯膦(2.76g,11mmol)和偶氮二甲酸二乙酯(2.33ml,14mmol)的無(wú)水DMF(4ml)和無(wú)水THF(10ml)的溶液中。攪拌生成的溶液18小時(shí)，然后真空濃縮。硅膠層析(2％-10％甲醇/二氯甲烷)得到標(biāo)題化合物(1.2g):MS(ES)m/e400.2(M+H)+。還回收未反應(yīng)的(±)-8-羥基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯(0.4g)。b)(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸乙酯將(±)-8-[3-(2-氧代吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯(1.2g,3mmol)、1.2g 10％鈀炭(1.2g)、環(huán)己烷(3ml,15mmol)和乙醇(20ml)的混合物于回流下加熱18小時(shí)。過(guò)濾該混合物并濃縮濾液。殘留物經(jīng)硅膠層析(2％-5％甲醇/二氯甲烷)純化得到為白色泡沫物的標(biāo)題化合物(0.72g,64％):MS(ES)m/e 398.2(M+H)+。c)(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸于室溫下，將(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸乙酯(0.7g,2mmol)、氫氧化鋰一水合物(0.12g,3mmol)、5ml THF(5ml)、水(5ml)和甲醇(2ml)的混合物攪拌18小時(shí)并濃縮。使殘留物在乙酸乙酯和水中分配，分離各層。用3N鹽酸小心使水相pH調(diào)至4，允許靜置。過(guò)濾收集生成的晶體并干燥得到為褐色固體的標(biāo)題化合物(0.4g,65％):MS m/e 370.4(M+H)+。C20H23N3O4·0.25H2O的分析計(jì)算值C,64.25；H,6.34；N,11.24。實(shí)測(cè)值C,64.02；H,6.37；N,11.20。
實(shí)施例2(±)-8-[3-(4-氨基-2吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸的制備a)(±)-8-[3-[2-(4-硝基-N-氧代吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯根據(jù)實(shí)施例1(a)的方法，但用2-[(3-羥基-1-丙基)氨基]-4-硝基吡啶-N-氧化物代替2-[(3-羥基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物，制備為橙色泡沫物的標(biāo)題化合物MS(ES)m/e 445.2(M+H)+。b)(±)-8-[3-[(4-氨基-2-吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯根據(jù)實(shí)施例1(b)的方法，但用(±)-8-[3-[2-(4-硝基-N-氧代吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-[2-(N-氧代吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯，制備為白色泡沫物的標(biāo)題化合物MS(ES)m/e399.3(M+H)+。c)(±)-8-[3-[(4-氨基-2-吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸根據(jù)實(shí)施例1(c)的方法，但用(±)-8-[3-[(4-氨基-2-吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸乙酯，制備為白色固體的標(biāo)題化合物MS(ES)m/e 385.4(M+H)+。C20H24N4O4·1.25H2O的分析計(jì)算值C,59.03；H,6.56；N,13.76。實(shí)測(cè)值C,58.80；H,6.49；N,13.62。
實(shí)施例3(±)-8-[3-[(4-甲氧基-2-吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸的制備a)(±)-8-[3-[2-(4-甲氧基-N-氧代吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯根據(jù)實(shí)施例1(a)的方法，但用2-[(3-羥基-1-丙基)氨基]-4-甲氧基吡啶-N-氧化物代替2-[(3-羥基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物，制備為無(wú)色油狀的標(biāo)題化合物MS(ES)m/e 430.3(M+H)+。b)(±)-8-[3-[(4-甲氧基-2-吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯根據(jù)實(shí)施例1(b)的方法，但用(±)-8-[3-[2-(4-甲氧基-N-氧代吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-[2-(N-氧代吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯，制備為淡黃色油狀的標(biāo)題化合物MS(ES)m/e 414.4(M+H)+。c)(±)-8-[3-[(4-甲氧基-2-吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸根據(jù)實(shí)施例1(c)的方法，但用(±)-8-[3-[(4-甲氧基-2-吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸乙酯，制備為灰白色固體的標(biāo)題化合物MS(ES)m/e 400.3(M+H)+。C21H25N3O5·0.75H2O的分析計(jì)算值C,61.08；H,6.47；N,10.18。實(shí)測(cè)值C,61.15；H,6.20；N,10.12。
實(shí)施例4(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸的制備a)(±)-8-[3-(2-(N-氧代吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯于室溫下，將2-[(3-羥基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物(253.3mg,1.5mmol)和偶氮二甲酸二乙酯(0.24ml,1.5mmol)的無(wú)水DMF(7.5ml)溶液緩慢滴加到(±)-8-羥基-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯(197.5mg,0.75mmol)和三苯膦(413.1g,1.58mmol)的無(wú)水DMF(7.5ml)的溶液中。加入需要15分鐘，為溫和的放熱反應(yīng)。2小時(shí)后，濃縮反應(yīng)物并從二甲苯再濃縮殘留物。硅膠層析(2∶2∶1乙酸乙酯/三氯甲烷/甲醇)得到Rf0.48(TLC在2∶2∶1乙酸乙酯/三氯甲烷/甲醇中)的物質(zhì)，為混濁，幾乎無(wú)色的油狀物。該物質(zhì)經(jīng)硅膠再層析(無(wú)水乙醇)獲得為灰白色泡沫狀的標(biāo)題化合物(243.9mg,79％):TLC(無(wú)水乙醇)Rf0.33；1H NMR(250,CDCl3)δ8.12(app.dd,1H),7.10-7.23(m,1H),6.90-7.10(m,2H),6.78(dd,J=8.4,2.6Hz,1H),6.45-6.72(m,3H),5.28(d,J=16.3Hz,1H),3.95-4.25(m,2H),3.60-3.90(m,1H),3.76(d,J=16.3Hz,1H),3.71(s,3H),3.51(q,J=6.4Hz,2H),2.73-3.15(m,3H),3.04(s,3H),2.41(dd,J=16.7,5.4Hz,1H),2.05-2.28(m,2H),MS(ES)m/e 414(M+H)+。
b)(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯將(±)-8-[3-[2-(N-氧代吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯(243.9mg,0.59mmol)、環(huán)己烯(0.60ml,59mmol)和10％鈀炭(63g,0.06mmol)在2-丙醇(6ml)中的混合物于回流下加熱。21.5小時(shí)后，使該反應(yīng)物冷卻至室溫，通過(guò)celite_過(guò)濾。濃縮濾液，殘留物從甲苯中再濃縮。硅膠層析(5％甲醇在1∶1的乙酸乙酯/氯仿中)純化得到無(wú)色油狀的標(biāo)題化合物(212.8mg,91％):TLC(5％甲醇在1∶1的乙酸乙酯/氯仿中)Rf0.39；1H NMR(250,CDCl3)δ8.03-8.13(m,1H),7.35-7.48(m,1H),7.00(d,J=8.4Hz,1H),6.77(dd,J=8.4,2.5Hz,1H),6.63(d,J=2.5Hz,1H),6.52-6.62(m,1H),6.40(d,J=8.5Hz,1H),5.27(d,J=16.3Hz,1H),4.62-4.82(m,1H),3.95-4.20(m,2H),3.60-3.90(m,2H),3.71(s,3H),3.50(q,J=6.3Hz,2H),2.75-3.15(m,3H),3.03(s,3H),2.40(dd,J=16.7,5.3Hz,1H),2.00-2.22(m,2H),MS(ES)m/e 398(M+H)+。c)(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸于室溫下，將1.0N氫氧化鋰(0.80ml,0.80mmol)加入在THF(2.6ml)和水(1.8ml)中的(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯(207.5mg,0.52mmol)的溶液中。起初混濁的溶液在1分鐘內(nèi)變得均一。18小時(shí)后，用TFA(0.12ml,1.56mmol)酸化該反應(yīng)物并濃縮。ODS層析(含有1％TFA的20％乙腈/水)、濃縮并凍干得到為淡黃色吸濕固體的標(biāo)題化合物(252.4g,83％):HPLC(PRP-1_，含有1％TFA的20％乙腈/水)K’=2.4；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.83-7.93(m,1H),7.76-7.83(m,1H),7.00-7.11(m,2H),6.83-6.91(m,1H),6.80(dd,J=8.4,2.6Hz,1H),6.76(d,J=2.6Hz,1H),5.30(d,J=16.5Hz,1H),4.05-4.18(m,2H),3.94(d,J=16.5Hz,1H),3.77-3.90(m,1H),3.57(t,J=6.8Hz,2H),3.03(dd,J=17.0,4.2Hz,1H),2.99(s,3H),2.83(dd,J=17.0,9.1Hz,1H),2.72(dd,J=17.0,13.5Hz,1H),2.44(dd,J=17.0,4.7Hz,1H),2.11-2.23(m,2H),MS(ES)m/e384(M+H)+·C21H25N3O4·1.5CF3CO2H·1.5H2O的分析計(jì)算值C,49.57；H,5.11；N,7.23。實(shí)測(cè)值C,49.65；H,4.95；N,7.15。
實(shí)施例5(±)-8-[3-(2-咪唑基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸的制備通常按照實(shí)施例1-4中詳述的方法制備標(biāo)題化合物。
實(shí)施例6(±)-8-[3-[2-(1,4,5,6-四氫嘧啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸的制備a)(±)-8-[3-(叔丁氧基羰基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯于室溫在氬氣下，將3-[(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙醇(0.14g,0.8mmol)和偶氮二甲酸二乙酯(0.13ml,0.8mmol)的無(wú)水DMF(2ml)溶液滴加到(±)-8-羥基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯(0.10g,0.4mmol)和三苯膦(0.21g,0.8mmol)的無(wú)水DMF(1.4ml)和無(wú)水THF(2ml)的溶液中。攪拌生成的溶液18小時(shí)，然后真空濃縮。硅膠層析(1％-3％甲醇/二氯甲烷)得到標(biāo)題化合物(0.11g):MS(ES)m/e 407.3(M+H)+。b)(±)-8-(3-氨基-1-丙氧基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯，三氟乙酸鹽于0℃、氬氣中，將(±)-8-[3-(叔丁氧基羰基氨基)-1-芐氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯(0.70g)的二氯甲烷(7ml)和TFA(2ml)的溶液攪拌1小時(shí)，然后濃縮得到為無(wú)色玻璃狀的標(biāo)題化合物(0.75g,100％):MS(ES)m/e 321.4(M+H)+。c)(±)-8-[3-(嘧啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯將(±)-8-(3-氨基-1-丙氧基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯的三氟乙酸鹽(0.75g,2mmol)、2-溴代嘧啶(0.5g,3mmol)、碳酸氫鈉(1.4g,17ml)和乙醇(10ml)的混合物加熱至回流。24小時(shí)后，過(guò)濾該混合物，用甲醇洗滌不溶性物質(zhì)。合并濾液和洗液并濃縮，殘留物經(jīng)硅膠層析(1％-6％甲醇/二氯甲烷)得到白色泡沫狀的標(biāo)題化合物(0.54g,82％):MS(ES)m/e 385.5(M+H)+。d)(±)-8-[3-[(1,4,5,6-四氫嘧啶-2-基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸在氫氣囊鼓氣下，攪拌(±)-8-[3-(嘧啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯(0.36g,0.94mmol)、在二氧六環(huán)(0.25ml,1mmol)中的4.0M鹽酸、10％鈀炭(0.24g,0.24mmol)和甲醇(5ml)的混合物。18小時(shí)后，過(guò)濾該混合物并濃縮濾液，使殘留物在乙酸乙酯和碳酸鉀的水溶液之間分配。沉淀固體，過(guò)濾收集并干燥得到為白色固體的標(biāo)題化合物MSm/e 375.4(M+H)+。C19H26N4O4·2.5H2O的分析計(jì)算值C,54.40；H,7.45；N,13.35。實(shí)測(cè)值C,54.68；H,7.12；N,13.39。
實(shí)施例7(±)-8-[2-[6-(氨基-2-吡啶氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_4-乙酸的制備通常按照實(shí)施例1-4中詳述的方法制備標(biāo)題化合物。
實(shí)施例8(±)-8-[2-[6-(甲基氨基)吡啶基]乙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸a)(±)-8-[2-[6-(甲基氨基)吡啶-2-基]-1-乙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯根據(jù)實(shí)施例1(a)的方法，但用6-(甲基氨基)-2-吡啶基乙醇代替2-[(3-羥基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物，制備為白色泡沫狀的標(biāo)題化合物MS(ES)m/e 384(M+H)+。b)(±)-8-[2-[6-(甲基氨基)吡啶-2-基]-1-乙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸根據(jù)實(shí)施例1(c)的方法，但用(±)-8-[2-[6-(甲基氨基)吡啶-2-基]-1-乙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-[2-吡啶基氨基-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-2-苯并氮雜_-4-乙酸乙酯，制備為白色固體的標(biāo)題化合物MS(ES)m/e 370(M+H)+。
實(shí)施例9(±)-8-[2-(2-苯并咪唑基)乙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸的制備a)(±)-8-[2-(苯并咪唑-2-基)-1-乙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯根據(jù)實(shí)施例1(a)的方法，但用(2-苯并咪唑-2-基)-1-乙醇代替2-[(3-羥基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物，制備為灰白色固體的標(biāo)題化合物MS(ES)m/e 394.4(M+H)+,416.3(M+Na)+。b)(±)-8-[2-(苯并咪唑-2-基)-1-乙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸根據(jù)實(shí)施例1(c)的方法，但用(±)-8-[2-(苯并咪唑-2-基)-1-乙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸乙酯，制備為白色粉末的標(biāo)題化合物MS(ES)m/e 380.4(M+H)+,402.3(M+Na)+。
實(shí)施例10(±)-8-[2-(4-氮雜-2-苯并咪唑基)-乙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸的制備通常按照實(shí)施例9中詳述的方法制備標(biāo)題化合物。
實(shí)施例11(±)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸的制備a)(±)-3-氧代-8-[3-(1-氧代吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯于室溫下，用3-4分鐘將2-[(3-羥基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物(252.3mg,1.5mmol)和偶氮二甲酸二乙酯(0.24ml,1.5mmol)的無(wú)水DMF(7.5ml)溶液緩慢滴加到(±)-8-羥基-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯(248.5mg,0.75mmol)和三苯膦(413.1g,1.58mmol)的無(wú)水DMF(7.5ml)的溶液中。17小時(shí)后，濃縮反應(yīng)物并從二甲苯/氯仿中再濃縮殘留物。硅膠層析(梯度乙酸乙酯(500ml)，然后5％甲醇/氯仿)獲得為灰白色泡沫狀的標(biāo)題化合物(253.6mg,70％):1H NMR(250,CDCl3)δ8.11(dd,J=6.4,1.4Hz,1H),7.10-7.23(m,1H),6.93-7.10(m,2H),6.81(dd,J=8.4,2.6Hz,1H),6.45-6.70(m,3H),5.34(d,J=16.7Hz,1H),3.75-4.30(m,6H),3.71(s,3H),3.51(q,J=6.4Hz,2H),2.80-3.15(m,3H),2.46(dd,J=16.8,5.5Hz,1H),2.07-2.28(m,2H),MS(ES)m/e 482.2(M+H)+。b)(±)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯將(±)-3-氧代-8-[3-(1-氧代吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯(253.6mg,0.53mmol)、環(huán)己烯(0.54ml,5.3mmol)和鈀黑(11.3g,0.11mmol)和異丙醇(5.3ml)的混合物于回流下加熱。半小時(shí)后，加入10％鈀炭(28.2mg,0.03mmol)，14.5小時(shí)后，加入鈀黑(11.3mg,0.11mmol)和環(huán)己烯(0.27ml,2.65mmol)。加入48小時(shí)后，通過(guò)celite_熱過(guò)濾該反應(yīng)物，用熱的1∶1的甲醇/氯仿洗滌濾墊。濃縮并從二甲苯中再濃縮濾液留下黃色油狀物。硅膠層析(5％甲醇在1∶1的乙酸乙酯/氯仿中)得到淡黃色油狀的標(biāo)題化合物(194.0mg,79％):TLC(5％甲醇在1∶1的乙酸乙酯/氯仿中)Rf0.53；1H NMR(250,CDCl3)δ8.08(dd,J=5.0,1.0Hz,1H),7.37-7.48(m,1H),7.02(d,J=8.4Hz,1H),6.79(dd,J=8.4,2.5Hz,1H),6.63(d,J=2.5Hz,1H),6.52-6.62(m,1H),6.40(d,J=8.4Hz,1H),5.34(d,J=16.6Hz,1H),4.60-4.80(m,1H),3.75-4.30(m,6H),3.71(s,3H),3.50(q,J=6.4Hz,2H),2.80-3.15(m,3H),2.46(dd,J=16.8,5.4Hz,1H),2.00-2.25(m,2H),MS(ES)m/e 466(M+H)+。c)(±)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸于室溫下，將1.0N氫氧化鋰(0.44ml,0.44mmol)加入在THF(1.7ml)和水(1.3ml)中的(±)-8-[3-(2-吡啶氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯(159.5mg,0.34mmol)的溶液中。該黃色的混濁反應(yīng)液在10分鐘內(nèi)變得均一。24小時(shí)后，濃縮該反應(yīng)物至干燥，使殘留物溶于水(4ml)中。過(guò)濾溶液，然后小心用1.0當(dāng)量鹽酸中和(pH≈7)。收集沉淀，用大量的水洗滌，于40-45℃高真空干燥提供灰白色固體的標(biāo)題化合物(130.0g,83％):HPLC(PRP-1_，含有0.1％TFA的25％乙腈/水)K’=3.1；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.91-8.00(m,1H),7.28-7.40(m,1H),7.02(d,J=9.2Hz,1H),6.76-6.87(m,2H),6.51-6.60(m,1H),6.39-6.50(m,2H),5.30(d,J=16.6Hz,1H),4.10-4.30(m,3H),4.02(t,J=6.3Hz,1H),3.70-3.82(m,1H),3.20-3.45(m,2H，由殘留溶劑的信號(hào)部分掩蔽)，2.99(dd,1H),2.59-2.74(m,2H),2.39(dd,J=16.9,4.8Hz,1H),1.90-2.03(m,2H)；MS(ES)m/e 452(M+H)+。C22H24F3N3O4·0.5H2O的分析計(jì)算值C,57.39；H,5.47；N,9.13。實(shí)測(cè)值C,57.39；H,5.18；N,9.00。
實(shí)施例12(±)-8-[3-(4.6-二甲基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸的制備a)(±)-8-[3-(4.6-二甲基-1-氧代吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯根據(jù)實(shí)施例1(a)的方法，但用2-[(3-羥基-1-丙基)氨基]-4.6-二甲基吡啶-N-氧化物代替2-[(3-羥基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物，制備為白色泡沫狀的標(biāo)題化合物MS(ES)m/e 442.3(M+Na)+。b)(±)-8-[3-(4.6-二甲基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯根據(jù)實(shí)施例1(b)的方法，但用(±)-8-[3-(4.6-二甲基-1-氧代-吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-[2-(N-氧代吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯，制備為淡黃色固體的標(biāo)題化合物MS(ES)m/e 426.3(M+H)+。c)(±)-8-[3-(4.6-二甲基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸根據(jù)實(shí)施例1(c)的方法，但用(±)-8-[3-(4.6-二甲基吡啶-2-基)氨基]-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸乙酯，制備為白色固體的標(biāo)題化合物MS(ES)m/e412.2(M+H)+。C23H29N3O4·0.5HCl·0.25H2O的分析計(jì)算值C,63.62；H,6.96；N,9.68。實(shí)測(cè)值C,63.62；H,6.96；N,9.69。
實(shí)施例13(±)-8-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-1-乙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸的制備a)(±)-8-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-1-乙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯根據(jù)實(shí)施例1(a)的方法，但用2-(2-氨基噻唑-4-基)乙醇(WO95/32710)代替2-[(3-羥基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物，制備為白色泡沫狀的標(biāo)題化合物MS(ES)m/e 390(M+H)+。b)(±)-8-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-1-乙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸根據(jù)實(shí)施例1(c)的方法，但用(±)-8-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-1-乙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-[2-吡啶基氨基-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸乙酯，制備為白色固體的標(biāo)題化合物MS(ES)m/e 376(M+H)+。C18H21N3O4S·1.3CF3CO2H·0.36H2O的分析計(jì)算值C,46.62；H,4.38；N,7.93。實(shí)測(cè)值C,46.45；H,4.57；N,8.27。
實(shí)施例14(±)-8-[3-(4-氨基吡啶-2-基氨基]-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸a)(±)-8-[3-(4-硝基-1-氧代吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯根據(jù)實(shí)施例1(a)的方法，但用2-[(3-羥基-1-丙基)氨基]-4-硝基吡啶-N-氧化物代替2-[(3-羥基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物且用(±)-8-羥基-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-羥基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯，制備標(biāo)題化合物MS(ES)m/e 459(M+H)+。b)(±)-8-[3-(4-氨基吡啶-2-基氨基]-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯根據(jù)實(shí)施例1(b)的方法，但用(±)-8-[3-(4-硝基-1-氧代吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-(4-硝基-N-氧代吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯，制備為白色泡沫狀的標(biāo)題化合物MS(ES)m/e 413(M+H)+。c)(±)-8-[3-(4-氨基吡啶-2-基氨基]-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸根據(jù)實(shí)施例1(c)的方法，但用(±)-8-[3-(4-氨基吡啶-2-基氨基]-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸乙酯，制備為白色固體的標(biāo)題化合物MS(ES)m/e 399(M+H)+。C21H26N4O4·1.5CF3CO2H·0.125H2O的分析計(jì)算值C,50.62；H,4.91；N,9.83。實(shí)測(cè)值C,50.63；H,5.26；N,9.90。
實(shí)施例15(±)-8-[3-(嘧啶-2-基氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸的制備于室溫下，將(±)-8-[3-(嘧啶-2-基氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯(0.071g,0.18mmol)和氫氧化鋰一水合物(0.009g,2mmol)的THF(5ml)和水(2ml)混合物攪拌18小時(shí)，然后濃縮。使殘留物溶于水中，用3N鹽酸將水相pH調(diào)至4。過(guò)濾收集生成的固體并干燥得到為白色固體的標(biāo)題化合物(0.05g,73％):MS m/e371.4(M+H)+。C19H22N4O4·0.5H2O的分析計(jì)算值C,60.15；H,6.11；N,14.77。實(shí)測(cè)值C,60.14；H,6.06；N,14.71。
實(shí)施例16(R)-8-[3-[(4-氨基-2-吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸的制備a)(±)-8-[3-[2-(4-硝基-1-氧代吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯根據(jù)實(shí)施例1(a)的方法，但用2-[(3-羥基-1-丙基)氨基]-4-硝基吡啶-N-氧化物代替2-[(3-羥基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物，制備為橙色泡沫狀的標(biāo)題化合物MS(ES)m/e 445.3(M+H)+。b)(R)-8-[3-[(4-氨基-2-吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯根據(jù)實(shí)施例1(b)的方法，但用(R)-8-[3-[2-(4-氨基-N-氧代吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-[2-(N-氧代吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯，制備為白色泡沫狀的標(biāo)題化合物MS(ES)m/e 399.4(M+H)+。c)(R)-8-[3-[(4-氨基-2-吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸根據(jù)實(shí)施例1(c)的方法，但用(R)-8-[3-[(4-氨基-2-吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸乙酯，制備為灰白色固體的標(biāo)題化合物[2]D23+74.97°(C1.45，甲醇)；MS(ES)m/e 385.4(M+H)+。C20H24N4O4·HCl·1.5H2O的分析計(jì)算值C,53.63；H,6.30；N,12.50。實(shí)測(cè)值C,53.87；H,6.13；N,12.42。
實(shí)施例17(S)-8-[3-[(4-氨基-2-吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸的制備a)(S)-8-[3-[2-(4-硝基-N-氧代吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯根據(jù)實(shí)施例1(a)的方法，但用2-[(3-羥基-1-丙基)氨基]-4-硝基吡啶-N-氧化物代替2-[(3-羥基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物，制備為橙色泡沫物的標(biāo)題化合物MS(ES)m/e 445.3(M+H)+。b)(S)-8-[3-[(4-氨基-2-吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯根據(jù)實(shí)施例1(b)的方法，但用(S)-8-[3-[2-(4-氨基-N-氧代吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-[2-(N-氧代吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯，制備為白色泡沫物的標(biāo)題化合物MS(ES)m/e 399.4(M+H)+。c)(S)-8-[3-[(4-氨基-2-吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸根據(jù)實(shí)施例1(c)的方法，但用(S)-8-[3-[(4-氨基-2-吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸乙酯，制備為白色固體的標(biāo)題化合物[α]D23-77.5°(C 1.45，甲醇)；MS(ES)m/e 385.4(M+H)+。C20H24N4O4·1.125H2O的分析計(jì)算值C,59.36；H,6.54；N,13.84。實(shí)測(cè)值C,59.31；H,6.74；N,13.73。
實(shí)施例18(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸乙酯的制備a)(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸乙酯將(±)-8-[3-[(4-氨基-2-吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸(0.27g,0.7mmol)和在二氧六環(huán)(0.2ml,8mmol)中的4M鹽酸的乙醇(10ml)溶液加熱至回流。72小時(shí)后，濃縮反應(yīng)物，使殘留物在乙酸乙酯和碳酸鉀水溶液之間分配。用鹽水洗滌有機(jī)相，干燥(硫酸鎂)并濃縮。將殘留物溶于甲苯(5ml)和三乙胺(0.35ml,2.5mmol)，加熱生成的溶液至回流。18小時(shí)后，真空濃縮該反應(yīng)物得到為褐色泡沫狀的標(biāo)題化合物(0.20g,69％):MS(ES)m/e 413.4(M+H)+。C22H28N4O4·0.25H2O的分析計(jì)算值C,63.37；H,6.89；N,13.44。實(shí)測(cè)值C,63.32；H,7.17；N,13.05。
實(shí)施例19(±)-8-[3-(2-咪唑啉-2-基)氨基]-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸的制備a)(±)-8-[3-(4-硝基芐氧基羰基氨基)-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯根據(jù)實(shí)施例1(a)的方法，但用3-(4-硝基芐氧基羰基氨基)-1-丙醇代替2-[(3-羥基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物且用(±)-8-羥基-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-羥基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯，制備為無(wú)色油狀的標(biāo)題化合物MS(ES)m/e 500.3(M+H)+。b)(±)-8-[3-氨基-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯于室溫下，在氫氣囊鼓氣時(shí)，攪拌(±)-8-[3-(4-硝基芐氧基羰基氨基)-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯(1.4g,3mmol)、10％鈀炭(0.55g,0.6mmol)和乙醇(20ml)的混合物。18小時(shí)后，過(guò)濾該混合物并濃縮濾液得到為褐色固體的標(biāo)題化合物(0.89g,99％):MS(ES)m/e 321.4(M+H)+。c)(±)-8-[3-(2-咪唑啉-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯在氬氣下，將(±)-8-[3-氨基-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯(0.3g,1mmol)、2-甲基硫代咪唑琳(0.46g,2mmol)、二異丙基乙胺(0.42ml,2mmol)和二甲基乙酰胺(3ml)的混合物加熱至100℃。2小時(shí)后，真空濃縮反應(yīng)物，使殘留物在氯仿和水之間分配。干燥(硫酸鎂)有機(jī)相并濃縮。使殘留物經(jīng)制備性HPLC純化得到為黃色油狀的標(biāo)題化合物(0.24g,51％):MS(ES)m/e 389.4(M+H)+。d)(±)-8-[3-(2-咪唑啉-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸根據(jù)實(shí)施例1(c)的方法皂化(±)-8-[3-(2-咪唑啉-2-基)氨基]-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯。經(jīng)制備性HPLC純化得到為白色固體的標(biāo)題化合物MS(ES)m/e 375.4(M+H)+。C21H26N4O4·1.96CF3CO2H的分析計(jì)算值C,46.08；H,4.73；N,9.39。實(shí)測(cè)值C,46.37；H,4.53；N,9.01。
制備20(±)-8-[3-(4,5,6,7-四氫-1H-2-二氮雜_-2-基)氨基]-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸的制備a)(±)-8-[3-[(2-二氮雜_-2-基)氨基]-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯根據(jù)實(shí)施例19(c)的方法，但用2-甲基硫代-1,3-二氮雜_代替2-甲基硫代咪唑琳，制備標(biāo)題化合物MS(ES)m/e 417.4(M+H)+。b)(±)-8-[3-[(2-二氮雜_-2-基)氨基]-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸根據(jù)實(shí)施例19(d)的方法，但用(±)-8-[3-[(2-二氮雜_-2-基)氨基]-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-(2-咪唑啉-2-基)氨基]-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯制備標(biāo)題化合物MS(ES)m/e 403.4(M+H)+。
實(shí)施例21(±)-3-氧代-8-[3-(4-甲基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸的制備a)(±)-3-氧代-8-[3-(4-甲基-1-氧代吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯根據(jù)實(shí)施例1(a)的方法，但用2-[(3-羥基-1-丙基)氨基]-4-甲基吡啶-N-氧化物代替2-[(3-羥基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物，并用(±)-3-氧代-8-羥基-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-羥基(±)-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯，制備標(biāo)題化合物MS(ES)m/e 496.3(M+H)+。b)(±)-3-氧代-8-[3-(4-甲基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯根據(jù)實(shí)施例1(b)的方法，但用(±)-3-氧代-8-[3-(4-甲基-1-氧代吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-[2-(N-氧代吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯，制備標(biāo)題化合物MS(ES)m/e 480.2(M+H)+。c)(±)-3-氧代-8-[3-(4-甲基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸根據(jù)實(shí)施例1(c)的方法，但用(±)-3-氧代-8-[3-(4-甲基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸乙酯，制備為灰白色固體的標(biāo)題化合物MS(ES)m/e 466.2(M+H)+。C23H26F3N3O4·0.5H2O的分析計(jì)算值C,58.22；H,5.74；N,8.86。實(shí)測(cè)值C,58.54；H,5.58；N,8.64。
實(shí)施例22(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸的制備a)(±)-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯根據(jù)實(shí)施例1(b)的方法，但用(±)-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-[2-(N-氧代吡啶)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯，制備為白色泡沫狀的標(biāo)題化合物MS(ES)m/e 484.4(M+H)+。b)(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸根據(jù)實(shí)施例1(c)的方法，但用(±)-8-[3-[N-(吡啶-2-基)N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-lH-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸乙酯，制備為白色粉末的標(biāo)題化合物MS(ES)m/e470.4(M+H)+。C25H30NaN3O6·3.25H2O的分析計(jì)算值C,54.59；H,6.69；N,7.64。實(shí)測(cè)值C,54.47；H,6.32；N,7.95。
實(shí)施例23(±)-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸的制備a)(±)-8-[3-[N-(1-氧代嘧啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸根據(jù)實(shí)施例1(c)的方法，但用(±)-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸乙酯，制備為白色粉末的標(biāo)題化合物1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.6-8.3(m,8H),3.7-4.6(m,3H),3.3-3.6(m,5H),1.8-3.0(m,5H),1.6(s,6H),1.3(s,3H)；MS(ES)m/e 486.4(M+H)+。
實(shí)施例24(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸的制備a)(±)-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯將(±)-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯(0.4g,0.8mmol)的DMF(5ml)冷卻至-20℃(四氯甲烷/干冰浴)，滴加(TMS)2NLi(1.0M的THF溶液，0.9ml,0.9mmol)。10分鐘后，加入4-三氟甲基芐基溴(0.211g,0.88mmol)的DMF(0.5ml)的溶液。于-20℃及氬氣下，攪拌該溶液10分鐘，然后于室溫下攪拌18小時(shí)。濃縮溶液，使殘留物溶于乙酸乙酯中并用5％碳酸氫鈉(2×)、水(1×)、5％檸檬酸(2×)、水(1×)和鹽水(1×)順序洗滌。干燥(硫酸鎂)乙酸乙酯層并濃縮得到標(biāo)題化合物(0.42g,80％):MS(ES)m/e 658.3(M+H)+。b)(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯根據(jù)實(shí)施例1(b)的方法，但用(±)-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-[2-(N-氧代吡啶)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-2-苯并氮雜_-4-乙酸乙酯，制備為澄清油狀的標(biāo)題化合物(0.321g,78％):MS(ES)m/e 642.3(M+H)+。c)(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯根據(jù)實(shí)施例1(c)的方法，但用(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-[2-吡啶基氨基-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸乙酯，制備為灰白色固體的標(biāo)題化合物MS(ES)m/e 628.4(M+H)+。C33H36F3N3O6·0.5H2O的分析計(jì)算值C,62.25；H,5.86；N,6.60。實(shí)測(cè)值C,62.01；H,5.92；N,6.81。
實(shí)施例25(±)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸的制備a)(±)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸于室溫下，用4M鹽酸的二氧六環(huán)(3ml)液處理(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸(0.158g,0.25mmol)1小時(shí)，然后濃縮溶液。ODS層析(梯度含有0.1％TFA的5-60％乙腈/水1小時(shí))，濃縮并凍干得到標(biāo)題化合物(0.117g,82％):MS(ES)m/e 528.4(M+H)+。C28H28N3O4·1CF3CO2H·1.5H2O的分析計(jì)算值C,53.89；H,4.82；N,6.28。實(shí)測(cè)值C,53.55；H,4.55；N,6.04。
實(shí)施例26(±)-2-甲基-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(甲基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸的制備a)(±)-8-[3-[2-(N-氧代吡啶基)-N-(甲基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯于氬氣下，將(±)-8-[3-[2-(N-氧代吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯(1.5g,3.8mmol)的DMF(10ml)冷卻至-20℃，滴加(TMS)2NLi(1.0M的THF溶液，8ml,8mmol)。于-20℃攪拌該反應(yīng)物30分鐘，然后加入碘代甲烷(0.5ml,7.6mmol).于室溫下攪拌該溶液18小時(shí)，然后濃縮。硅膠層析(10％甲醇/二氯甲烷)得到標(biāo)題化合物(1g,62％):MS(ES)m/e 428.4(M+H)+。b)(±)-2-甲基-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(甲基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯根據(jù)實(shí)施例1(b)的方法，但用(±)-8-[3-[2-(N-氧代吡啶基-N-(甲基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-甲基-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-[2-吡啶氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-2-苯并氮雜_-4-乙酸乙酯，制備標(biāo)題化合物(0.7g,73％):MS(ES)m/e 412.4(M+H)+。c)(±)-2-甲基-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(甲基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯根據(jù)實(shí)施例1(c)的方法，但用(±)-2-甲基-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(甲基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸乙酯，制備粗品標(biāo)題化合物經(jīng)ODS層析(含有0.1％TFA的5-60％乙腈/水1小時(shí))，濃縮并凍干得到標(biāo)題化合物MS(ES)m/e 398.4(M+H)+。C22H27N3O4·1.5CF3CO2H·0.25H2O的分析計(jì)算值C,52.40；H,5.10；N,7.33。實(shí)測(cè)值C,52.09；H,5.26；N,7.20。
實(shí)施例27(±)-2-芐基-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸的制備a)(±)-2-芐基-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯根據(jù)實(shí)施例24(a)的方法，但用芐基溴代替4-三氟甲基芐基溴，制備標(biāo)題化合物(0.105g,20％):MS(ES)m/e 590.4(M+H)+。b)(±)-2-芐基-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯根據(jù)實(shí)施例24(b)的方法，但用(±)-2-芐基-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯，制備標(biāo)題化合物(0.045g,44％):MS(ES)m/e574.4(M+H)+。c)(±)-2-芐基-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸根據(jù)實(shí)施例1(c)的方法，但用(±)-2-芐基-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸乙酯，制備標(biāo)題化合物(0.044g,定量)MS(ES)m/e 560.3(M+H)+。d)(±)-2-芐基-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸根據(jù)實(shí)施例25(a)的方法，但用(±)-2-芐基-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸代替(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸，制備標(biāo)題化合物(0.014g,40％):MS(ES)m/e 460.4(M+H)+。C27H29N3O4·CF3CO2H·2H2O的分析計(jì)算值C,57.14；H,5.62；N,6.89。實(shí)測(cè)值C,57.44；H,5.32；N,6.87。
實(shí)施例28(±)-2-(羧甲基)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸的制備a)(±)-2-(叔丁氧基羰基甲基)-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯根據(jù)實(shí)施例24(a)的方法，但用溴代乙酸叔丁酯代替4-三氟甲基芐基溴，制備標(biāo)題化合物(1.0g,80％):MS(ES)m/e 614.4(M+H)+。b)(±)-2-(叔丁氧基羰基甲基)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯根據(jù)實(shí)施例24(b)的方法，但用(±)-2-(叔丁氧基羰基甲基)-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代-吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-3-氧代-8-[3-(N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯，制備標(biāo)題化合物(0.72g,77％):MS(ES)m/e 598.4(M+H)+。c)(±)-2-(羧甲基)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯根據(jù)實(shí)施例25(a)的方法，但用(±)-2-(叔丁氧基羰基甲基)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基])-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸，制備標(biāo)題化合物(0.57g,定量)MS(ES)m/e 442.3(M+H)+。d)(±)-2-(羧甲基)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸根據(jù)實(shí)施例1(c)的方法，但用(±)-2-(羧甲基)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸乙酯，制備標(biāo)題化合物(0.30g,56％):MS(ES)m/e 428.4(M+H)+。C22H25N3O6·2H2O的分析計(jì)算值C,57.01；H,6.31；N,9.07。實(shí)測(cè)值C,57.27；H,6.24；N,8.86。
實(shí)施例29(±)-2-(4-氨基芐基)-3-氧代-8-[3-吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸a)(±)-2-(4-硝基芐基)-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯根據(jù)實(shí)施例24(a)的方法，但用硝基芐基溴代替4-三氟甲基芐基溴，制備標(biāo)題化合物(0.284g,69％):MS(ES)m/e 635.3(M+H)+。b)(±)-2-(4-氨基芐基)-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯根據(jù)實(shí)施例24(b)的方法，但用(±)-2-(4-硝基芐基)-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯，制備標(biāo)題化合物(0.104g,40％):MS(ES)m/e 589.3(M+H)+。c)(±)-2-(4-氨基芐基)-3-氧代-8-[3-(N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸根據(jù)實(shí)施例1(c)的方法，但用(±)-2-(4-氨基芐基)-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-(2-吡啶氨基-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸乙酯，制備標(biāo)題化合物(0.08g,79％):MS(ES)m/e 575.4(M+H)+。d)(±)-2-(4-氨基芐基)-3-氧代-8-[3-吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸根據(jù)實(shí)施例25(a)的方法，但用(±)-2-(4-氨基芐基)-3-氧代-8-[3-(N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸代替(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸，制備標(biāo)題化合物(0.029g,44％):MS(ES)m/e 475.4(M+H)+。C27H30N4O4·2CF3CO2H·1.5H2O的分析計(jì)算值C,51.03；H,4.83；N,7.68。實(shí)測(cè)值C,50.92；H,4.78；N,7.64。
實(shí)施例30
(±)-3-氧代-8-[3-(N-(吡啶-2-基)-N-(苯甲?；?氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸的制備a)(±)-3-氧代-8-[3-(1-氧代-吡啶-2-基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯根據(jù)實(shí)施例25(a)的方法，但用(±)-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸，制備標(biāo)題化合物(1.9g,90％):MS(ES)m/e 558.3(M+H)+。b)(±)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯根據(jù)實(shí)施例24(b)的方法，但用(±)-3-氧代-8-[3-(1-氧代-吡啶-2-基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-3-氧代-8-[3-(N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯，制備標(biāo)題化合物(0.40g,88％):MS(ES)m/e 542.3(M+H)+。c)(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(苯甲?；?氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯將苯甲酰氯(0.094ml,0.8mmol)滴加到(±)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯(0.4g,0.74mmol)和二異丙基乙胺(0.5ml,2.9mmol)的二氯甲烷(10ml)的溶液中。18小時(shí)后，濃縮溶液，使殘留物經(jīng)硅膠層析(1∶1乙酸乙酯/己烷)純化得到標(biāo)題化合物(0.293g,61％):MS(ES)m/e 646.2(M+H)+。d)(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(苯甲?；?氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸根據(jù)實(shí)施例1(c)的方法，但用(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(苯甲?；?氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-(2-吡啶氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸乙酯，制備粗品標(biāo)題化合物。ODS層析(梯度含有0.1％TFA的10-80％乙腈/水1小時(shí))純化，濃縮并凍干得到標(biāo)題化合物(0.025g,10％):MS(ES)m/e 632.4(M+H)+。C35H32F3N3O5·0.85CF3CO2H的分析計(jì)算值C,60.50；H,4.54；N,5.74。實(shí)測(cè)值C,60.22；H,4.35；N,5.77。
實(shí)施例31(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁基乙?；?氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸的制備a)(±)-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁基乙酰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯用草酰氯(1ml,11.4mmol)，接著用DMF(0.0005ml,0.06mmol)處理乙酸酯叔丁(0.228g,1.2mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液。于室溫下攪拌該反應(yīng)物1.5小時(shí)，然后濃縮。使殘留物溶于CH2Cl2(5ml)中并滴加到(±)-3-氧代-8-[3-(1-氧代吡啶-2-基)氨基-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯(0.35g,0.6mmol)和Et3N(0.5ml,2.4mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液中。18小時(shí)后，用水(1×)、5％碳酸氫鈉(2×)、水(1×)、5％檸檬酸(2×)、水(1×)和飽和鹽水(1×)順序洗滌。濃縮有機(jī)層得到標(biāo)題化合物(0.4g,97％):MS(ES)m/e 656.4(M+H)+。b)(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁基乙酰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯根據(jù)實(shí)施例24(b)的方法，但用(±)-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁基乙?；?氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-3-氧代-8-[3-(N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯，制備標(biāo)題化合物(0.22g,56％):MS(ES)m/e 642.3(M+H)+。c)(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁基乙?；?氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸根據(jù)實(shí)施例1(c)的方法，但用(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁基乙?；?氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-(2-吡啶氨基-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸乙酯，制備粗品標(biāo)題化合物。ODS層析(梯度含有0.1％TFA的10-80％乙腈/水1小時(shí))，濃縮并凍干得到標(biāo)題化合物(0.022g,10％):MS(ES)m/e 626.4(M+H)+。C34H38F3N3O5·1H2O的分析計(jì)算值C,63.44；H,6.26；N,6.53。實(shí)測(cè)值C,63.24；H,5.96；N,6.39。
實(shí)施例32(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(異丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸的制備a)(±)-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(異丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯根據(jù)實(shí)施例30(c)的方法，但用氯代甲酸異丁酯代替苯甲酰氯，制備標(biāo)題化合物(0.47g,80％):MS(ES)m/e 658.3(M+H)+。b)(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(異丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯根據(jù)實(shí)施例24(b)的方法，但用(±)-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(異丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-3-氧代-8-[3-(N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯，制備標(biāo)題化合物(0.4g,63％):MS(ES)m/e 642.3(M+H)+。c)(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(異丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸根據(jù)實(shí)施例1(c)的方法，但用(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(異丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-(2-吡啶氨基-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸乙酯，制備粗品標(biāo)題化合物。ODS層析(梯度含有0.1％TFA的10-80％乙腈/水1小時(shí))，濃縮并凍干得到標(biāo)題化合物(0.008g,20％):MS(ES)m/e 628.3(M+H)+。C33H36F3N3O6·0.25CF3CO2H·0.5H2O的分析計(jì)算值C,60.49；H,5.64；N,6.32。實(shí)測(cè)值C,60.78；H,5.50；N,6.28。
實(shí)施例33(S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸的制備a)(S)-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯根據(jù)實(shí)施例1(a)的方法，但用(S)-8-羥基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-羥基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯，制備標(biāo)題化合物(3.0g,83％):MS(ES)m/e500.3(M+H)+。b)(S)-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯根據(jù)實(shí)施例24(a)的方法，但用(s)-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-3-氧代-8-[3-(N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯，制備標(biāo)題化合物(2.3g,72％):MS(ES)m/e 658.2(M+H)+。c)(S)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯根據(jù)實(shí)施例24(b)的方法，但用(S)-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯，制備標(biāo)題化合物(1.1g,50％):MS(ES)m/e 642.1(M+H)+。d)(S)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸根據(jù)實(shí)施例24(c)的方法，但用(S)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯，制備標(biāo)題化合物(0.8g,60％):MS(ES)m/e 628.1(M+H)+。e)(S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸根據(jù)實(shí)施例25(a)的方法，但用(S)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸代替(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸，制備粗品標(biāo)題化合物。經(jīng)ODS層析(含有0.1％TFA的30％乙腈/水1小時(shí))，濃縮并凍干得到標(biāo)題化合物(0.657g,72％):[α]D-42°(c1.0，甲醇)；MS(ES)m/e 528.1(M+H)+。C28H28F3N3O4·2CF3CO2H·3.75H2O的分析計(jì)算值C,46.69；H,4.59；N,5.10。實(shí)測(cè)值C,46.47；H,4.58；N,5.48。
實(shí)施例34(±)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯的制備a)(±)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯根據(jù)實(shí)施例1(b)的方法，但用異丙醇代替乙醇，制備標(biāo)題化合物(0.35g,76％):MS(ES)m/e 384.4(M+H)+。
實(shí)施例35(S)-3-氧代-8-[3-(1,4,5,6-四氫吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-[4-(三氟甲基)芐基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸的制備a)(S)-8-[3-(4-硝基芐氧基羰基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯于0℃，將3-(4-硝基芐氧基羰基氨基)-1-丙醇(0.13g,0.51mmol)和偶氮二甲酸二乙酯(0.08ml,0.50ml)的溶液滴加到(S)-8-羥基-3-氧代-2-[4-(三氟甲基)芐基]2,3,4,5-四氫-1 H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯(0.14g,0.34mmol)和三苯膦(0.13g,0.50mmol)的二氯甲烷(2ml)的溶液中。加入完畢后，移去冷浴并于室溫下攪拌該反應(yīng)物。18小時(shí)后，除去溶劑，通過(guò)硅膠快速層析(100％氯仿至5％甲醇/氯仿)分離該產(chǎn)物得到為澄清油狀的標(biāo)題化合物(0.12g):1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.18(d,J=8.2Hz,2H),7.65(m,1H),7.50(m,5H),7.40(d,J=8.2Hz,1H),7.03(d,J=9.8Hz,1H),6.70(m,1H),6.30(s,1H),5.23(m,3H),4.95(d,J=16.4Hz,1H),4.50(d,J=16.4Hz,1H),3.95(m,3H),3.78(s,3H),3.70(m,1H),3.45(m,2H),3.15-2.90(m,3H),2.50(dd,J=19.2,5.5Hz,1H),1.95(m,2H)。b)(S)-8-(3-氨基-1-丙氧基)-3-氧代-2-[4-(三氟甲基)芐基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯將10％鈀炭(20mg)加入(S)-8-[3-(4-硝基芐氧基羰基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2-[4-(三氟甲基)芐基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯(0.12g,0.19mmol)的甲醇(2ml)中。用氫氣沖洗反應(yīng)容器，然后安裝一個(gè)氫氣充氣囊。4.5小時(shí)后，排出氫氣，通過(guò)celite_過(guò)濾除去催化劑。除去溶劑得到為淡黃色殘留物的標(biāo)題化合物(0.09)。該物質(zhì)可不經(jīng)進(jìn)一步純化而使用。MS(ES)m/e 465.3(M+H)+。c)(S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-[4-(三氟甲基)芐基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯將(S)-8-(3-氨基-1-丙氧基)-3-氧代-2-[4-(三氟甲基)芐基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯(0.09g,0.19mmol)、2-溴代嘧啶(0.09g,0.57mmol)和二異丙基乙胺(0.17ml,0.98mmol)的DMF(2ml)的溶液于80℃加熱18小時(shí)。使該反應(yīng)物冷卻至室溫，濃縮溶液得到黃色殘留物。經(jīng)硅膠快速層析(2％甲醇/乙酸乙酯)得到澄清油狀的標(biāo)題化合物(42mg):MS(ES)m/e 543.1(M+H)+。d)(S)-3-氧代-8-[3-(3,4,5,6-四氫嘧啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-[4-(三氟甲基)芐基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯將(S)-3-氧代-8-[3-(嘧啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-[4-(三氟甲基)芐基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯(42mg,0.08mmol)、冰醋酸(2ml)、濃鹽酸(0.2ml)和10％鈀炭(10mg)加入Parr氫氣裝置中。在氫氣(40psi)中振搖該混合物5小時(shí)，然后排出氫氣，通過(guò)celite_過(guò)濾除去催化劑。蒸發(fā)溶劑得到為黑色殘留物的標(biāo)題化合物(52mg)。該物質(zhì)可不經(jīng)進(jìn)一步純化而使用。MS(ES)m/e 547.2(M+H)+。e)(S)-3-氧代-8-[3-(3,4,5,6-四氫嘧啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-[4-(三氟甲基)芐基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸將1.0N氫氧化鈉(0.25ml,0.25mmol)加入在乙醇(1ml)中的粗品(S)-3-氧代-8-[3-(3,4,5,6-四氫嘧啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-[4-(三氟甲基)芐基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯(得自實(shí)施例35d)中。在室溫?cái)嚢?.5小時(shí)后，加入1N鹽酸(0.25ml,0.25mmol)使反應(yīng)物驟冷。除去溶劑得到淡黃色固體。經(jīng)制備性反相HPLC(Hamilton PRP-1_，含有1％TFA的30％乙腈/水)得到為白色粉末的標(biāo)題化合物(18.1mg),MS(ES)m/e 533.3(M+H)+。C27H31N4F3O4·2H2O·2CF3CO2H的分析計(jì)算值C,46.74；H,4.68；N,7.03。實(shí)測(cè)值C,46.34；H,4.31；N,6.82。
實(shí)施例36(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(甲基)氨基]-1-丙氧基]-2-[4-(三氟甲基)芐基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸的制備a)(±)-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(甲基氨基)]-1-丙氧基]-2-[4-(三氟甲基)芐基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯根據(jù)實(shí)施例25(a)的方法，但用(±)-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸，制備所述鹽酸鹽。通過(guò)在乙酸乙酯和5％碳酸氫鈉之間分配使該物質(zhì)轉(zhuǎn)化為所述游離堿。分離EtOAc層，并濃縮得到標(biāo)題化合物(4.1g,100％):MS(ES)m/e 558.3(M+H)+。b)(±)-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代-吡啶-2-基)-N-(甲基氨基)]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯根據(jù)實(shí)施例26(a)的方法，但用(±)-3-氧代-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(甲基氨基)]-1-丙氧基]-2-[4-(三氟甲基)芐基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-[2-(N-氧代吡啶)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯，制備標(biāo)題化合物(3.0g,94％):MS(ES)m/e 572.3(M+H)+。c)(±)-3-氧代-8-[3-(N-(吡啶-2-基)-N-(甲基)氨基)-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯根據(jù)實(shí)施例4(b)的方法，但用(±)-3-氧代-8-[3-(N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(甲基)氨基)-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-[2-(N-氧代吡啶)氨基]-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯，制備標(biāo)題化合物(0.32g,60％):MS(ES)m/e 556.2(M+H)+。d)(±)-3-氧代-8-[3-(N-(吡啶-2-基)-N-(甲基)氨基)-1-丙氧基]-2-[4-(三氟甲基)芐基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸根據(jù)實(shí)施例4(c)的方法，但用(±)-3-氧代-8-[3(N-(吡啶-2-基)-N-(甲基)氨基)-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(±)-8-[3-(2-吡啶氨基)-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯，制備標(biāo)題化合物(0.02g,15％):MS(ES)m/e 542.1(M+H)+。C29H30N3O4F3·CF3CO2H·H2O的分析計(jì)算值C,55.28；H,4.94；N,6.24。實(shí)測(cè)值C,55.45；H,4.68；N,6.14。
實(shí)施例37(S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸的制備a)(S)-3-氧代-8-[3-(1-氧代吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯于室溫、氬氣中，將2-(3-羥基丙基氨基)吡啶-N-氧化物(11.6g,69mmol)和三苯膦(18.0g,69mmol)加入(S)-8-羥基-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯(19g,57.4mmol)的無(wú)水THF(400ml)和無(wú)水DMF(200ml)的攪拌溶液中。在所有的固體完全溶解(約30分鐘)后，在冰浴上使該反應(yīng)物冷卻至0℃，通過(guò)注射器加入偶氮二甲酸二異丙酯(14.3ml,69mmol)。將該反應(yīng)物緩慢溫?zé)嶂潦覝夭嚢?8小時(shí)。濃縮并經(jīng)硅膠快速層析(8∶2∶1氯仿/乙酸乙酯/乙醇)純化得到為泡沫的固體標(biāo)題化合物(20.83g,75％)。通過(guò)回收上述反應(yīng)的原料的再循環(huán)得到另外5.73g產(chǎn)物，這樣共獲得26.56g(96％)的標(biāo)題化合物MS(ES)m/e 482.2(M+H)+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.09(dd,J=6.5,1.3Hz 1H),7.29(t,1H),7.18(t,1H),7.02(d,J=9.2Hz,1H),6.84-6.79(m,3H),6.59(t,1H),5.32(d,J=16.5Hz,1H),4.28-4.14(m,2H),4.16(d,J=16.5Hz,1H),4.02(t,2H),3.84(m,1H),3.58(s,3H),3.40(dd,2H),3.01(dd,1H),2.73(dd,1H),2.70(dd,1H),2.52(dd,1H),2.02(ddd,2H)。b)(S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯向(S)-3-氧代-8-[3-(1-氧代吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯(26.56g,55mmol)的異丙醇(500ml)的攪拌溶液中加入活化的10％鈀炭(8g,7.5mmol，在氬氣下，丙醇中小心預(yù)濕)和環(huán)己烯(55.7ml,550mmol)。然后在氬氣下，在設(shè)定90℃的油浴中使該反應(yīng)物加熱至回流。6小時(shí)后，加入額外量的10％鈀(在活性碳上)(8g,7.5mmol，在氬氣下，丙醇中小心預(yù)溫)和環(huán)已烯(55.5ml,550mmol)。在加入18小時(shí)后，使反應(yīng)物通過(guò)celite_熱過(guò)濾，用1∶1甲醇/氯仿(400ml)洗滌濾墊。真空濃縮濾液，使殘留物經(jīng)硅膠快速層析(95∶5氯仿/甲醇)純化得到為白色粘性泡沫的標(biāo)題化合物(19.50g,76％):TLC(硅膠，5％甲醇在三氯甲烷中)Rf0.52；MS(ES)m/e 466.3(M+H)+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.94(dd,1H),7.34(t,1H),7.02(d,J=9.2Hz,1H),6.81(m,2H),6.54(t,1H),6.46(m,2H),5.31(d,J=16.5Hz,1H),4.23-4.13(m,2H),4.17(d,J=16.5Hz,1H),4.02(t,2H),3.82(m,1H),3.58(s,3H),3.36(m,2H),3.01(dd,1H),2.72(dd,1H),2.68(dd,1H),2.50(dd,1H),1.96(ddd,2H)。c)(S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸將1N的氫氧化鈉(75ml,75mmol)水溶液加入(S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯(19.50g,42mmol)的二氧六環(huán)(150ml)的攪拌溶液中。于室溫下攪拌混濁的反應(yīng)物2小時(shí)，然后用1N鹽酸(75ml,75mmol)中和生成的均勻溶液。通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮該溶液至幾近干以沉淀出產(chǎn)物。傾出上清液并將剩下的膠狀固體再溶于甲醇中。然后通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)再濃縮澄清的溶液。用少量的水研磨剩余的固體，過(guò)濾并減壓干燥得到白色粉末狀的標(biāo)題化合物(16.38g,86％)。HPLC(Hamilton PRP-1_，含有0.1％TFA的25％乙腈/水)K’=3.1；[α]D-112.3°(c,1.0，甲醇)；MS(ES)m/e 452.3(M+H)+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.95(dd,1H),7.34(dt,1H),7.02(d,J=9.2Hz,1H),6.81(m,2H),6.58(t,1H),6.47(m,2H),5.30(d,J=16.5Hz,1H),4.27-4.13(m,2H),4.15(d,J=16.5Hz,1H),4.02(t,1H),3.78(m,1H),3.37(m,2H),3.00(dd,1H),2.69(dd,1H),2.65(dd,1H),2.41(dd,1H),1.96(ddd,2H)。C22H24F3N3O4的分析計(jì)算值C,58.53；H,5.36；N,9.31。實(shí)測(cè)值C,58.37；H,5.42；N,9.20。
實(shí)施例38(R)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸的制備a)(R)-3-氧代-8-[3-(1-氧代吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯于室溫下，將2-[(3-羥基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物(0.33g,2mmol)和偶氮二甲酸二乙酯(0.3ml,2mmol)無(wú)水DMF(10mmol)緩慢滴加到(R)-8-羥基-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯(0.3g,1mmol)和三苯膦(0.485g,26mmol)的無(wú)水二氯甲烷(10ml)的溶液中。17小時(shí)后，濃縮反應(yīng)物。硅膠層析(梯度0.5％-5％甲醇/乙酸乙酯)得到為無(wú)色油狀的標(biāo)題化合物(0.35g,80％):MS(ES)m/e482.3(M+H)+；b)(R)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯在氬氣下，將(R)-3-氧代-8-[3-(1-氧代吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯(0.35g,0.7mmol)、環(huán)己烯(0.75ml,7mmol)、10％鈀炭(88g,0.07mmol)和異丙醇(9ml)的混合物加熱至回流。18小時(shí)后，加入10％鈀炭(36g,0.03mmol)和環(huán)己烯(0.75ml,7mmol)。36小時(shí)后，使反應(yīng)物通過(guò)celite_熱過(guò)濾，用熱的乙酸乙酯洗滌濾墊。濃縮留下黃色油狀物。硅膠層析(1％-5％甲醇在二氯甲烷中)得到為無(wú)色油狀的標(biāo)題化合物(0.26g,77％):MS(ES)m/e 466.2(M+H)+。c)(R)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸于室溫下，將氫氧化鋰一水合物(25mg,0.6mmol)加入(R)-8-[3-(2-吡啶-基氨基)-3-氧代-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯(0.25g,0.54mmol)的THF(5ml)和水(2ml)的溶液中。18小時(shí)后，濃縮反應(yīng)物至干，使殘留物溶于水(4ml)中。用3.0N鹽酸小心使水相調(diào)至pH約4。收集沉淀物并于40-45℃高真空干燥得到為灰白色固體的標(biāo)題化合物(0.15g,62％):MS(ES)m/e 452.1(M+H)+。C22H24F3N3O4·0.5H2O的分析計(jì)算值C,57.38；H,5.47；N,9.12。實(shí)測(cè)值C,57.72；H,5.24；N,8.92。
實(shí)施例39(S)-8-[3-(4-甲基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸的制備a)(S)-8-[3-(4-甲基-1-氧代吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯于室溫下，用3-4分鐘將2-[(3-羥基-1-丙基)氨基]-4-甲基吡啶-N-氧化物(0.60g,3.6mmol)和偶氮二甲酸二乙酯(0.6ml,3.6mmol)的無(wú)水二氯甲烷(12mmol)緩慢滴加到(S)-8-羥基-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯(0.60g,1.8mmol)和三苯膦(0.95g,3.6mmol)的無(wú)水二氯甲烷(6ml)的溶液中。17小時(shí)后，濃縮反應(yīng)物。硅膠層析(梯度1％-5％甲醇/CH2Cl2)得到為無(wú)色泡沫狀的標(biāo)題化合物(0.45g,49％):MS(ES)m/e 496.3(M+H)+；b)(S)-8-[3-(4-甲基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯在氬氣下，將(S)-8-[3-(4-甲基-1-氧代吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯(0.45g,0.9mmol)、環(huán)己烯(0.93ml,9mmol)、10％鈀炭(0.2g,0.18mmol)和異丙醇(9ml)的混合物加熱至回流。18小時(shí)后，加入10％鈀炭(0.2g,0.18mmol)和環(huán)己烯(0.27ml,2.65mmol)。36小時(shí)后，使反應(yīng)物通過(guò)celite_熱過(guò)濾，用熱的乙酸乙酯洗滌濾墊。濃縮留下黃色油狀物。硅膠層析(1％-3％甲醇在二氯甲烷中)得到為白色泡沫狀的標(biāo)題化合物(0.32g,74％):MS(ES)m/e 480.2(M+H)+。c)(S)-8-[3-(4-甲基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸于室溫下，將氫氧化鋰一水合物(33mg,0.79mmol)加入(S)-8-[3-(4-甲基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯(0.32g,0.67mmol)的THF(5ml)和水(2ml)的溶液中。18小時(shí)后，濃縮反應(yīng)物至干，使殘留物溶于水(4ml)中。用乙酸乙酯萃取該溶液，然后用3.0N鹽酸小心使水相調(diào)至pH約5。收集沉淀物并于40-45℃高真空干燥得到為灰白色固體的標(biāo)題化合物(0.22g,71％):MS(ES)m/e 466.1(M+H)+。C23H26F3N3O4的分析計(jì)算值C,59.35；H,5.63；N,9.03。實(shí)測(cè)值C,58.97；H,5.55；N,8.73。
實(shí)施例40(S)-8-[2-[6-(甲基氨基)吡啶-2-基]-1-乙氧基]-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸的制備a)(S)-8-[2-[6-(甲基氨基)吡啶-2-基]-1-乙氧基]-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯根據(jù)實(shí)施例37(a)的方法，但用6-(甲基氨基)-2-吡啶乙醇代替2-[(3-羥基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物，并用(S)-8-羥基-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸酯代替(R)-8-羥基-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸酯，制備為無(wú)色油狀的標(biāo)題化合物MS(ES)m/e 466.2(M+H)+。b)(S)-8-[2-[6-(甲基氨基)吡啶-2-基]-1-乙氧基]-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸根據(jù)實(shí)施例37(c)的方法，但用(S)-8-[2-[6-(甲基氨基)吡啶-2-基]-1-乙氧基]-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯代替(R)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯，制備白色固體的標(biāo)題化合物MS(ES)m/e 452.2(M+H)+。C22H24F3N3O4·0.7H2O的分析計(jì)算值C,56.94；H,5.52；N,9.05。實(shí)測(cè)值C,56.80；H,5.19；N,8.85。
實(shí)施例41(S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2-苯基乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸的制備a)(S)-3-氧代-8-[3-(1-氧代吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2-苯基乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯于室溫下，將2-[(3-羥基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物(336mg,2.0mmol)和偶氮二甲酸二乙酯(0.3ml,2.0mmol)的無(wú)水DMF(10ml)溶液加到(S)-8-羥基-3-氧代-2-(2-苯基乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯(350mg,1.0mmol)和三苯膦(525mg,2.0mmol)的無(wú)水DMF(10ml)的溶液中。24小時(shí)后，濃縮該混合物。硅膠快速層析(梯度乙酸乙酯500ml)，然后5％甲醇/氯仿)得到為橙色泡沫狀的標(biāo)題化合物(288mg,57％):MS(ES)m/e 504(M+H)+。b)(S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2-苯基乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯在氬氣下，將(S)-3-氧代-8-[3-(1-氧代吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2-苯基乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯(288mg,0.57mmol)、環(huán)己烯(0.6ml,5.8mmol)和10％鈀炭(62g,0.58mmol)在2-丙醇(6ml)中的混合物加熱至回流。31小時(shí)后，使該反應(yīng)物通過(guò)celite_墊過(guò)濾，然后用熱得到1∶1甲醇/氯仿洗滌濾墊，濃縮濾液。硅膠快速層析(5％甲醇/氯仿中)后，經(jīng)第二次硅膠快速層析(50％THF/環(huán)己烷)得到灰白色泡沫狀的標(biāo)題化合物(133mg,48％):MS(ES)m/e 488(M+H)+。c)(S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2-苯基乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸于0℃，將1.0N氫氧化鋰(0.3ml,0.3mmol)加入在THF(1.5ml)和水(1.2ml)中的(S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2-苯基乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯(133mg,0.27mmol)的溶液中。使該混合物溫?zé)嶂潦覝?8小時(shí)。用乙醚(2×5ml)洗滌該反應(yīng)物，然后在中度真空下除去殘留的有機(jī)溶劑。使水層通過(guò)0.45μm Acrodisk濾膜，然后于0℃用在水中的10％鹽酸小心酸化至pH6。收集沉淀物，用水洗滌，于50℃真空干燥得到為白色固體的標(biāo)題化合物(62mg,48％):MS(ES)m/e 474(M+H)+。C28H31N3O4·0.75H2O的分析計(jì)算值C,69.05；H,6.75；N,8.63。實(shí)測(cè)值C,69.05；H,6.66；N,8.55。
實(shí)施例42(S)-8-[2-[6-(甲基氨基吡啶-2-基)乙氧基]-3-氧代-2-(2-苯乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸的制備a)(S)-8-[2-[6-(甲基氨基吡啶-2-基)乙氧基]-3-氧代-2-(2-苯乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯于0℃，將偶氮二甲酸二異丙酯(0.3ml,1.5mmol)加入(S)-8-羥基-3-氧代-2-(2-苯乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸酯(350mg,1.0mmol)、6-(甲基氨基)-2-吡啶乙醇(228mg,1.5mmol)和三苯膦(393mg,1.5mmol)的無(wú)水THF(10ml)溶液中。使該混合物溫?zé)嶂潦覝?2小時(shí)，然后濃縮。硅膠快速層析(50％乙酸乙酯/己烷中)，接著經(jīng)第二次硅膠快速層析(25％乙酸乙酯/己烷)得到白色泡沫狀的標(biāo)題化合物(250mg,51％):MS(ES)m/e 488(M+H)+。b)(S)-8-[2-[6-(甲基氨基吡啶-2-基)乙氧基]-3-氧代-2-(2-苯乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸在室溫下，將1.0 N氫氧化鋰(0.62ml,0.62mmol)加入在THF(2.5ml)和水(1.9ml)中的(S)-8-[2-[6-(甲基氨基)吡啶-2-基]乙氧基]-3-氧代-2-(2-苯乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯(250mg,0.51mmol)的溶液中，然后于室溫下攪拌18小時(shí)。用乙醚(2×5ml)洗滌該混合物，然后在中度真空下除去殘留的有機(jī)溶劑。使水層通過(guò)0.45μm Acrodisk濾膜，然后于0℃用在水中的10％鹽酸小心酸化至pH6。收集沉淀物，用水洗滌，于50℃真空干燥得到為白色固體的標(biāo)題化合物(134mg,55％):MS(ES)m/e 474(M+H)+。C28H31N3O4·0.75H2O的分析計(jì)算值C,69.05；H,6.73；N,8.63。實(shí)測(cè)值C,69.23；H,6.59；N,8.55。
實(shí)施例43(S)-8-[2-[6-(甲基氨基吡啶-2-基)-1-乙氧基]-3-氧代-2-[4-(三氟甲基)芐基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸的制備a)(S)-8-[2-[6-(甲基氨基)吡啶-2-基]-1-乙氧基]-3-氧代-2-[4-(三氟甲基)芐基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯將6-(甲基氨基)-2-吡啶乙醇(0.13g,0.88mmol)和偶氮二甲酸二乙酯(0.14ml,0.89mmol)在CH2Cl2(2ml)中的溶液加入(S)-8-羥基-3-氧代-2-{4-(三氟甲基)芐基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯(0.18g,0.44mmol)和三苯膦(0.23g,0.88mmol)的二氯甲烷(2ml)溶液中。在室溫2天后，減壓除去溶劑，徑向硅膠層析(6mm板，5％甲醇/氯仿)得到為澄清油狀物(0.63g)，它含有所述標(biāo)題化合物和未反應(yīng)的(S)-8-羥基-3-氧代-2-[4-(三氟甲基)芐基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯的混合物。該物質(zhì)經(jīng)徑向硅膠層析(6mm板，50％乙酸乙酯/己烷中)進(jìn)一步純化得到澄清油狀的標(biāo)題化合物(0.12g):MS(ES)m/e 542.3(M+H)+。b)(S)-8-[2-[6-(甲基氨基吡啶-2-基)-1-乙氧基]-3-氧代-2-[4-(三氟甲基)芐基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸將1N氫氧化納(0.50ml)加入在乙醇(2ml)中的(S)-8-[2-[6-(甲基氨基)吡啶-2-基]-1-乙氧基]-3-氧代-2-[4-(三氟甲基)芐基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯(0.12g,0.22mmol)的溶液中。于室溫3.5小時(shí)后，減壓除去大量的溶劑得到白色殘留物，將其溶解于水中并用1N鹽酸中和至pH為7。收集生成的沉淀物，減壓干燥得到為白色固體的標(biāo)題化合物(28.1mg):[α]D-74.0°(c 0.05，乙醇)；MS(ES)m/e 528.3(M+H)+。C28H28F3N3O4·0.5H2O的分析計(jì)算值C,62.68；H,5.45；N,7.83。實(shí)測(cè)值C,62.60；H,5.35；N,7.66。
實(shí)施例44胃腸外劑量單位組合物含有20mg實(shí)施例1的化合物作為無(wú)菌干燥粉末制劑可如制備將20mg該化合物溶于15ml蒸餾水中。在無(wú)菌條件下將該溶液過(guò)濾到25ml多劑量的安瓿中并凍干。通過(guò)加入20ml 5％右旋糖的水溶液(D5W)可將該粉末重新制成為供靜脈內(nèi)或肌內(nèi)注射用的制劑。劑量取決于注射的體積。隨后通過(guò)加入這種劑量單位的計(jì)量體積可稀釋成另一種注射用的D5W體積，或者可以將計(jì)量劑量加入另一種機(jī)械容器以分散所述藥物，如在用于滴注或其它注射-輸液體系的輸注瓶或袋中。
實(shí)施例45口服劑量單位組合物通過(guò)將50mg的實(shí)施例的1化合物與75mg乳酸和5mg硬脂酸鎂混合并磨碎來(lái)制備口服用的膠囊。生成的粉末過(guò)篩并裝入硬明膠膠囊中。
實(shí)施例46口服劑量單位組合物通過(guò)將20mg蔗糖、150mg硫酸鈣二水合物和50mg的實(shí)施例的1化合物與10％的明膠溶液混合并磨碎來(lái)制備口服用的片劑。濕顆粒過(guò)篩、干燥、并與10mg淀粉、5mg滑石粉和3mg硬脂酸混合，再壓制成片子。
以上描述全面公開(kāi)了如何制備和使用本發(fā)明。然而，本發(fā)明并不受上述具體方案的限制，對(duì)其所作的所有修改均在其后的權(quán)利要求的范圍內(nèi)。在此引用的各種參考的雜志，專(zhuān)利及其它出版物包括了本領(lǐng)域的發(fā)展現(xiàn)狀并通過(guò)引用全部結(jié)合到本文中。
權(quán)利要求
1．式(Ⅰ)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽
其中R1為R7、或A-C0-4烷基、A-C2-4鏈烯基、A-C2-4鏈炔基、A-C3-4氧代鏈烯基、A-C3-4氧代鏈炔基、A-C1-4氨基烷基、A-C3-4氨基鏈烯基、A-C3-4氨基鏈炔基，任選由一個(gè)或多個(gè)R10或R7的任何可能的組合取代；A是H、C3-6環(huán)烷基、Het或Ar；R7為-COR8、-COCR’2R9、-C(S)R8、-S(O)mOR’、-S(O)mNR’R”、-PO(OR’)、-PO(OR’)2、-NO2或四唑基；每個(gè)R8獨(dú)立為-OR’、NR’R”、-NR’SO2R’、-NR’OR’或-OCR’2CO(O)R’；R9為-OR’、-CN、-S(O)rR’、-S(O)mNR’2、-C(O)R’、-C(O)NR’2或-CO2R’；R10為H、鹵代、-OR11、-CN、NR’R11、-NO2、-CF3、-CF3S(O)r、CO2R’、CONR’2、A-C0-6烷基、A-C1-6氧代烷基、A-C2-6鏈烯基、A-C2-6鏈炔基、A-C0-6烷氧基、A-C0-6烷基氨基或A-C0-6烷基-S(O)r-；R11為R’、-C(O)R’、-C(O)NR’2、C(O)OR’、-S(O)mR’或-S(O)mNR’2；R2為
W為-(CHRg)a-U-(CHRg)b-；U不存在或?yàn)镃O、CRg2、C(=CRg2)、S(O)k、O、NRg、CRgORg、CRg(ORk)CRg2、CRg2CRg(ORk)、C(O)CRg2、CRg2C(O)、CONRi、NRiCO、OC(O)、C(O)O、C(S)O、OC(S)、C(S)NRg、NRgC(S)、S(O)2NRg、NRgS(O)2N=N、NRgNRg、NRgCRg2、CRg2NRg、CRg2O、OCRg2、C≡C或CRg=CRg；G為NRe、S或O；Rg為H、C1-6烷基、Het-C0-6烷基、C3-7環(huán)烷基-C0-6烷基或Ar-C0-6烷基；Rk為Rg、C(O)Rg或C(O)ORf；Ri為H、C1-6烷基、Het-C0-6烷基、C3-7環(huán)烷基-C0-6烷基、Ar-C0-6烷基或由1-3個(gè)選自下列的基團(tuán)取代的C1-6烷基鹵素、CN、NRg2、ORg、SRg、CO2Rg和CON(Rg)2；Rf為H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基；Re為H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基、C3-7環(huán)烷基-C0-6烷基或(CH2)kCO2Rg；Rb和Rc獨(dú)立選自H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基、或C3-6環(huán)烷基-C0-6烷基、鹵素、CF3、ORf、S(O)kRf、CORf、NO2、N(Rf)2、CO(NRf)2、CH2N(Rf)2，或Rb和Rc結(jié)合共同形成5或6元芳族或非芳族碳環(huán)或雜環(huán)，任選由多達(dá)3個(gè)選自下列的取代基取代鹵素、CF3、C1-4烷基、ORfS(O)kRf、CORf、CO2Rf、OH、NO2、N(Rf)2、CO(NRf)2和CH2N(Rf)2；或亞甲基二氧基；Q1、Q2、Q3和Q4獨(dú)立為N或C-Ry，前提為Q1、Q2、Q3和Q4中不超過(guò)一個(gè)為N；R’為H、C1-6烷基-Ar-C0-6烷基或C3-6環(huán)烷基-C0-6烷基；R”為R’、C(O)R’或-C(O)OR’；R_為H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基、或C3-6環(huán)烷基-C0-6烷基、鹵素、CF3、ORf、S(O)kRf、CORf、NO2、N(Rf)2、CO(NRf)2、CH2N(Rf)2；Ry為H、鹵素、-ORg、-SRg、CN、-NRgRk、-NO2、-CF3、CF3S(O)r-、-CO2Rg、-CORg或-CONRg2，或由下列基團(tuán)任選取代的C1-6烷基鹵素、-ORg、-SRg、CN、-NRgR”、-NO2、-CF3、R’S(O)r-、-CO2Rg、-CORg或-CONRg2；a是0、1或2；b是0、1或2；k是0、1或2；m是1或2；r是0、1或2；s是0、1或2；u是0或1；及v是0或1。
2．權(quán)利要求1的化合物，其中R2為
，其中Q1、Q2和Q3各自為CRy,Q4為CRy或N和u是0。
3．權(quán)利要求2的化合物，其中每個(gè)R’為H,R”為H、C1-6烷基、-C(O)C1-6烷基、-C(O)OC1-6烷基、-C(O)C0-6烷基-Ar或C(O)OC0-6烷基-Ar,W為-CH2-CH2-,Ry為H、鹵素、-ORg、-SRg、CN、-NRgRk、-NO2、-CF3、CF3S(O)r-、-CO2Rg、-CORg或-CONRg2或C1-6烷基。
4．權(quán)利要求1的化合物，其中R2為
，其中Q1、Q2和Q3各自為CH和u是0。
5．權(quán)利要求4的化合物，其中每個(gè)R’為H,R”為H或C1-4烷基，v是0和W為-CH2-CH2-。
6．權(quán)利要求1的化合物，其中R2為
，其中G為NH,Rb和Rc各自為H。
7．權(quán)利要求6的化合物，其中W為NRg-(CHRg)b-。
8．權(quán)利要求1的化合物，其中R2為
，其中G為NH,Rb和Rc結(jié)合共同形成5或6元芳族或非芳族碳環(huán)或雜環(huán)，任選由多達(dá)3個(gè)選自下列的取代基取代鹵素、CF3、C1-4烷基、ORf、S(O)kRf、CORf、CO2Rf、OH、NO2、N(Rf)2、CO(NRf)2和CH2N(Rf)2；或亞甲基二氧基。
9．權(quán)利要求8的化合物，其中Rb和Rc結(jié)合共同形成6元芳族碳環(huán)。
10．權(quán)利要求9的化合物，其中W為-CH2-CH2-。
11．權(quán)利要求8的化合物，其中Rb和Rc結(jié)合共同形成6元芳族雜環(huán)。
12．權(quán)利要求11的化合物，其中W為-CH2-CH2-。
13．權(quán)利要求1的化合物，其中R2為
，其中每個(gè)R’為H,R”為H或C1-4烷基，Rg為H或C1-4烷基及s為0、1或2。
14．權(quán)利要求13的化合物，其中W為-CH2-CH2-。
15．權(quán)利要求1的化合物，其中R1為H,C1-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基、C3-6環(huán)烷基-C0-6烷基、-CH2CF3-、-(CH2)1-2C(O)OR’或-(CH2)2OR’，其中R’為H或C1-4烷基。
16．權(quán)利要求15的化合物，其中R1為H,C1-4烷基、Ph-C0-4烷基、-CH2CF3-、-(CH2)1-2C(O)OR’或-(CH2)2OR’，其中R1為H或C1-4烷基。
17．權(quán)利要求16的化合物，其中R1為-CH2CF3。
18．權(quán)利要求1的化合物為下列化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-8-[3-(4-氨基-2吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-8-[3-(4-甲氧基-2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-8-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-8-[3-(2-咪唑基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-8-[3-[2-(1,4,5,6-四氫嘧啶基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-8-[3-(6-氨基-2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-8-[2-(2-苯并咪唑基)乙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-8-[2-(4-氮雜-2-苯并咪唑基)乙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-8-[2-[6-(甲基氨基)吡啶-2-基]-1-乙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-8-[2-(苯并咪唑-2-基)-1-乙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-8-[3-(4-氨基吡啶-2-基氨基]-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-3-氧代-8-[3-(嘧啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(R)-8-[3-(4-氨基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-3-氧代-8-[3-[(1,4,5,6-四氫嘧啶-2-基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(S)-8-[3-(4-氨基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-8-[3-[N-(1-氧代吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-2-甲基-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(甲基)氨基]-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-2-芐基-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-2-(羧甲基)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-2-(4-氨基芐基)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(苯甲?；?氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-8-[3-(2-咪唑啉-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-8-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-1-乙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-8-[3-(4,6-二甲基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-8-[3-(4,5,6,7-四氫-1H-1,3-二氮雜_-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(叔丁基乙?；?氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(異丁氧基羰基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-3-氧代-8-[3-(4-甲基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(±)-3-氧代-8-[3-[N-(吡啶-2-基)-N-(甲基)氨基]-1-丙氧基]-2-(4-三氟甲基芐基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(R)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(S)-8-[3-(4-甲基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(S)-3-氧代-8-[3-(1,4,5,6-四氫嘧啶-2-基)氨基]-1-丙氧基]-2-[4-(三氟甲基)芐基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(S)-3-氧代-2-(2-苯基乙基)-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(S)-8-[2-[6-(甲基氨基)吡啶-2-基]-1-乙氧基]-3-氧代-2-(2-苯乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；(S)-8-[2-[6-(甲基氨基)吡啶-2-基]-1-乙氧基]-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸；和(S)-8-[2-[6-(甲基氨基)吡啶-2-基]-1-乙氧基]-3-氧代-2-[4-(三氟甲基)芐基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸。
19．權(quán)利要求1的化合物為(S)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸或其藥學(xué)上可接受的鹽。
20．權(quán)利要求1的化合物為(S)-8-[2-[6-(甲基氨基吡啶-2-基)-1-乙氧基]-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸或其藥學(xué)上可接受的鹽。
21．權(quán)利要求1的化合物為(S)-8-[3-(4-甲基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2-(2,2,2-三氟乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸或其藥學(xué)上可接受的鹽。
22．包括權(quán)利要求1的化合物和藥學(xué)上可接受的載體的藥用組合物。
23包括權(quán)利要求1的化合物、抗腫瘤劑和藥學(xué)上可接受的載體的藥用組合物。
24．權(quán)利要求23的藥用組合物，其中抗腫瘤劑為托泊替堪。
25．權(quán)利要求23的藥用組合物，其中抗腫瘤劑為順鉑。
26．包括權(quán)利要求1的化合物、骨吸收的抑制劑和藥學(xué)上可接受的載體的藥用組合物。
27．治療對(duì)αvβ3受體的拮抗有效的疾病狀態(tài)的方法，其包括給予需要此治療的受試者權(quán)利要求1的化合物。
28．治療對(duì)αvβ5受體的拮抗有效的疾病狀態(tài)的方法，其包括給予需要此治療的受試者權(quán)利要求1的化合物。
29．治療骨質(zhì)疏松的方法，其包括給予需要此治療的受試者權(quán)利要求1的化合物。
30．抑制血管生成的方法，其包括給予需要此治療的受試者權(quán)利要求1的化合物。
31．抑制腫瘤生長(zhǎng)或腫瘤轉(zhuǎn)移的方法，其包括給予需要此治療的受試者權(quán)利要求1的化合物。
32．治療動(dòng)脈粥樣硬化或再狹窄的方法，其包括給予需要此治療的受試者權(quán)利要求1的化合物。
33．治療炎癥的方法，其包括給予需要此治療的受試者權(quán)利要求1的化合物。
34．抑制腫瘤生長(zhǎng)的方法，其包括分階段給予或以物理組合的方式聯(lián)合給予式(Ⅰ)化合物和抗腫瘤劑。
35．權(quán)利要求34的方法，其中抗腫瘤劑為托泊替堪。
36．權(quán)利要求34的方法，其中抗腫瘤劑為順鉑。
37．治療骨質(zhì)疏松或抑制骨丟失的方法，其包括分階段給予或以物理組合的方式聯(lián)合給予式(Ⅰ)化合物和骨吸收抑制劑。
38．式(Ⅱ)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽
其中R1為R7、或A-C0-4烷基、A-C2-4鏈烯基、A-C2-4鏈炔基、A-C3-4氧代鏈烯基、A-C3-4氧代鏈炔基、A-C1-4氨基烷基、A-C3-4氨基鏈烯基、A-C3-4氨基鏈炔基，任選由一個(gè)或多個(gè)R10或R7的任何可能的組合取代；A是H、C3-6環(huán)烷基、Het或Ar；R7為-COR8、-COCR’2R9、-C(S)R8、-S(O)mOR’、-S(O)mNR’R”、-PO(OR’)、-PO(OR’)2、-NO2或四唑基；每個(gè)R8獨(dú)立為-OR’、NR’R”、-NR’SO2R’、-NR’OR’或-OCR’2CO(O)R’；R9為-OR’、-CN、-S(O)rR’、-S(O)mNR’2、-C(O)R’、-C(O)NR’2或-CO2R’；R10為H、鹵代、-OR11、-CN、NR’R11、-NO2、-CF3、-CF3S(O)r、CO2R’、CONR’2、A-C0-6烷基、A-C1-6氧代烷基、A-C2-6鏈烯基、A-C2-6鏈炔基、A-C0-6烷氧基、A-C0-6烷基氨基或A-C0-6烷基-S(O)r-；R11為R’、-C(O)R’、-C(O)NR’2、C(O)OR’、-S(O)mR’或-S(O)mNR’2；R2為
W為-(CHRg)a-U-(CHRg)b-；U不存在或?yàn)镃O、CRg2、C(=CRg2)、S(O)k、O、NRg、CRgORg、CRg(ORk)CRg2、CRg2CRg(ORk)、C(O)CRg2、CRg2C(O)、CONRi、NRiCO、OC(O)、C(O)O、C(S)O、OC(S)、C(S)NRg、NRgC(S)、S(O)2NRg、NRgS(O)2N=N、NRgNRg、NRgCRg2、CRg2NRg、CRg2O、OCRg2、C≡C或CRg=CRg；G為NRe、S或O；Rg為H、C1-6烷基、Het-C0-6烷基、C3-7環(huán)烷基-C0-6烷基或Ar-C0-6烷基；Rk為Rg、C(O)Rg或C(O)ORf；Ri為H、C1-6烷基、Het-C0-6烷基、C3-7環(huán)烷基-C0-6烷基、Ar-C0-6烷基或由1-3個(gè)選自下列的基團(tuán)取代的C1-6烷基鹵素、CN、NRg2、ORg、SRg、CO2Rg和CON(Rg)2；Rf為H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基；Re為H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基、C3-7環(huán)烷基-C0-6烷基或(CH2)kCO2Rg；Rb和Rc獨(dú)立選自H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基、或C3-6環(huán)烷基-C0-6烷基、鹵素、CF3、ORf、S(O)kRf、CORf、NO2、N(Rf)2、CO(NRf)2、CH2N(Rf)2，或Rb和Rc結(jié)合共同形成5或6元芳族或非芳族碳環(huán)或雜環(huán)，任選由多達(dá)3個(gè)選自下列的取代基取代鹵素、CF3、C1-4烷基、ORf、S(O)kRf、CORf、CO2Rf、OH、NO2、N(Rf)2、CO(NRf)2和CH2N(Rf)2；或亞甲基二氧基；Q1、Q2、Q3和Q4獨(dú)立為N或C-Ry，前提為Q1、Q2、Q3和Q4中不超過(guò)一個(gè)為N；R’為H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基或C3-6環(huán)烷基-C0-6烷基；R”為R’、C(O)R’或-C(O)OR’；R_為H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基、或C3-6環(huán)烷基-C0-6烷基、鹵素、CF3、ORf、S(O)kRf、CORf、NO2、N(Rf)2、CO(NRf)2、CH2N(Rf)2；Ry為H、鹵素、-ORg、-SRg、CN、-NRgRk、-NO2、-CF3、CF3S(O)r-、-CO2Rg、-CORg或-CONRg2，或由下列基團(tuán)任選取代的C1-6烷基鹵素、-ORg、-SRg、CN、-NRgR”、-NO2、-CF3、R’S(O)r-、-CO2Rg、-CORg或-CONRg2；a是0、1或2；b是0、1或2；k是0、1或2；m是1或2；r是0、1或2；s是0、1或2；u是0或1；及v是0或1。
39．權(quán)利要求38的化合物為(±)-3-氧代-8-[3-(吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯；或(±)-8-[3-(4-氨基吡啶-2-基氨基)-1-丙氧基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸乙酯；或其藥學(xué)上可接受的鹽。
40．式(Ⅲ)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽
其中R1為R7、或A-C0-4烷基、A-C2-4鏈烯基、A-C2-4鏈炔基、A-C3-4氧代鏈烯基、A-C3-4氧代鏈炔基、A-C1-4氨基烷基、A-C3-4氨基鏈烯基、A-C3-4氨基鏈炔基，任選由一個(gè)或多個(gè)R10或R7的任何可能的組合取代；A是H、C3-6環(huán)烷基、Het或Ar；R7為-COR8、-COCR’2R9、-C(S)R8、-S(O)mOR’、-S(O)mNR’R”、-PO(OR’)、-PO(OR’)2、-NO2或四唑基；每個(gè)R8獨(dú)立為-OR’、NR’R”、-NR’SO2R’、-NR’OR’或-OCR’2CO(O)R’；R9為-OR’、-CN、-S(O)rR’、-S(O)mNR’2、-C(O)R’、-C(O)NR’2或-CO2R’；R10為H、鹵素、-OR11、-CN、NR’R11、-NO2、-CF3、-CF3S(O)r、CO2R’、CONR’2、A-C0-6烷基、A-C1-6氧代烷基、A-C2-6鏈烯基、A-C2-6鏈炔基、A-C0-6烷氧基、A-C0-6烷基氨基或A-C0-6烷基-S(O)r-；R11為R’、-C(O)R’、-C(O)NR’2、C(O)OR’、-S(O)mR’或-S(O)mNR’2；W為-(CHRg)a-U-(CHRg)b-；U不存在或?yàn)镃O、CRg2、C(=CRg2)、S(O)k、O、NRg、CRgORg、CRg(ORk)CRg2、CRg2CRg(ORk)、C(O)CRg2、CRg2C(O)、CONRi2、NRiCO、OC(O)、C(O)O、C(S)O、OC(S)、C(S)NRg、NRgC(S)、S(O)2NRg、NRgS(O)2N=N、NRgNRg、NRgCRg2、CRg2NRg、CRg2O、OCRg2、C≡C或CRg=CRg；Rg為H、C1-6烷基、Het-C0-6烷基、C3-7環(huán)烷基-C0-6烷基或Ar-C0-6烷基；Rk為Rg、C(O)Rg或C(O)ORf；Ri為H、C1-6烷基、Het-C0-6烷基、C3-7環(huán)烷基-C0-6烷基、Ar-C0-6烷基或由1-3個(gè)選自下列的基團(tuán)取代的C1-6烷基鹵素、CN、NRg2、ORg、SRg、CO2Rg和CON(Rg)2；Rf為H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基；Q1、Q2、Q3和Q4獨(dú)立為N或C-Ry，前提為Q1、Q2、Q3和Q4中不超過(guò)一個(gè)為N；R’為H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基或C3-6環(huán)烷基-C0-6烷基；R”為R’、C(O)R’或-C(O)OR’；Ry為H、鹵素、-ORg、-SRg、CN、-NRgRk、-NO2、-CF3、CF3S(O)r-、-CO2Rg、-CORg或-CONRg2，或由下列基團(tuán)任選取代的C1-6烷基鹵素、-ORg、-SRg、CN、-NRgR”、-NO2、-CF3、R’S(O)r-、-CO2Rg、-CORg或-CONRg2；a是0、1或2；b是0、1或2；m是1或2；r是0、1或2。
41．制備權(quán)利要求1的式(Ⅰ)化合物的方法，該方法包括使式(Ⅳ)化合物與具有任何保護(hù)的活性功能基團(tuán)的式(Ⅴ)化合物反應(yīng)
其中R1和R2如式(Ⅰ)中所定義，且L1為OH或鹵代；其后除去任何保護(hù)基團(tuán)，并任選形成藥學(xué)上可接受的鹽。
42．制備權(quán)利要求1的式(Ⅰ)化合物的方法，該方法包括使式(Ⅳ)化合物與具有任何被保護(hù)的活性功能基團(tuán)的式(Ⅵ)化合物反應(yīng)
其中R1、R’、R”、W、Q1、Q2、Q3和Q4如式(Ⅰ)中所定義；然后除去任何保護(hù)基團(tuán)，并任選形成藥學(xué)上可接受的鹽。
43．制備權(quán)利要求1的式(Ⅰ)化合物的方法，該方法包括使式(Ⅳ)化合物與具有任何被保護(hù)的活性功能基團(tuán)的式(Ⅶ)化合物反應(yīng)
其中R1、R’、R”、W、Q1、Q2、Q3和v如式(Ⅰ)中所定義；然后除去任何保護(hù)基團(tuán)，并任選形成藥學(xué)上可接受的鹽。
44．權(quán)利要求1-21任一項(xiàng)的化合物用作藥物。
45．權(quán)利要求1的式(Ⅰ)化合物在生產(chǎn)治療對(duì)αvβ3受體的拮抗有效的疾病的藥物中的用途。
46．權(quán)利要求1的式(Ⅰ)化合物在生產(chǎn)治療對(duì)αvβ5受體的拮抗有效的疾病的藥物中的用途。
47．權(quán)利要求1的式(Ⅰ)化合物在生產(chǎn)治療骨質(zhì)疏松的藥物中的用途。
48．權(quán)利要求1的式(Ⅰ)化合物在生產(chǎn)抑制血管生成的藥物中的用途。
49．權(quán)利要求1的式(Ⅰ)化合物在生產(chǎn)抑制腫瘤生長(zhǎng)和腫瘤轉(zhuǎn)移的藥物中的用途。
50．權(quán)利要求1的式(Ⅰ)化合物在生產(chǎn)治療動(dòng)脈粥樣硬化和再狹窄的方法。
51．權(quán)利要求1的式(Ⅰ)化合物在生產(chǎn)治療炎癥的藥物中的用途。
52．權(quán)利要求1的式(Ⅰ)化合物和抗腫瘤劑在生產(chǎn)以物理組合的方式聯(lián)合給予或分階段給予的抑制腫瘤生長(zhǎng)的藥物中的用途。
53．權(quán)利要求52的用途，其中所述抗腫瘤劑為托泊替堪。
54．權(quán)利要求52的用途，其中所述抗腫瘤劑為順鉑。
55．權(quán)利要求1的式(Ⅰ)化合物和骨吸收抑制劑在生產(chǎn)以物理組合的方式聯(lián)合給予或分階段給予的治療骨質(zhì)疏松的藥物中的用途。
全文摘要
公開(kāi)了具有苯并二氮雜核心結(jié)構(gòu)的化合物，它為玻連蛋白受體抑制劑，用于治療骨質(zhì)疏松、血管生成、腫瘤生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移、動(dòng)脈粥樣硬化、再狹窄及炎癥。
文檔編號(hào)A61P9/10GK1238689SQ97180168
公開(kāi)日1999年12月15日 申請(qǐng)日期1997年10月1日 優(yōu)先權(quán)日1996年10月2日
發(fā)明者J·F·卡爾拉漢, R·D·考辛斯, R·M·克南, C·夸恩, W·H·米勒, I·N·烏什卡斯 申請(qǐng)人:史密絲克萊恩比徹姆公司