專利名稱：抗新城疫卵內(nèi)免疫接種方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種適于抗新城疫感染卵內(nèi)免疫接種的疫苗、一種新城疫病毒株在制備上述疫苗中的應(yīng)用、以及通過用含有新城疫病毒株的疫苗進(jìn)行卵內(nèi)免疫接種預(yù)防家禽新城疫感染的方法。
Sharma等人(美國專利4458630)曾詳細(xì)敘述了含病毒疫苗的卵內(nèi)免疫接種方法。具體地說，該專利教導(dǎo)了可以將活的馬立克氏病病毒注入到卵內(nèi)的羊水中，然后使胚胎感染，疫苗病毒復(fù)制達(dá)到高效價(jià)，從而誘導(dǎo)所處理的胚胎中形成保護(hù)性抗體。(Sharma，AvianDiseases 29，1155，1167-68，1985)。
Ahmad等人的美國專利5427791描述了抗新城疫的胚胎免疫接種方法。在該專利中，為了實(shí)現(xiàn)活新城疫病毒(NDV-B1株)的非致病性減毒，使用甲磺酸乙酯(EMS)對病毒進(jìn)行了修飾。
這類修飾的缺點(diǎn)是，EMS是一種誘變劑，所以人們懷疑該疫苗也會起誘變劑的作用，這對疫苗的正常使用是不利的。另一方面，未經(jīng)處理的NDV-B1不能用于卵內(nèi)免疫接種，因?yàn)槁褍?nèi)注射這種未修飾的病毒后幾乎所有的胚胎都會死亡。
另外，已發(fā)現(xiàn)這些修飾的病毒的最低有效劑量和最大安全劑量之間相差不到10(以對數(shù)計(jì)不到1)。就實(shí)用的目的而言，并考慮到由生產(chǎn)過程造成的及由于儲存過程中的損耗產(chǎn)生的誤差，上述差額過小。
現(xiàn)已出人意料地發(fā)現(xiàn)，含有NDW株新城疫病毒的疫苗制劑特別適用于卵內(nèi)應(yīng)用。因此，本發(fā)明涉及NDW株新城疫病毒在家禽的卵內(nèi)免疫接種中的應(yīng)用。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案涉及NDW株新城疫病毒在制備適于給家禽卵內(nèi)施用的疫苗中的應(yīng)用。
新城疫病毒NDW株的樣品保藏于巴斯德研究所的國立微生物保藏中心(CNCM of Institut Pasteur)，保藏編號為781。參見EP 351908。
NDW株的施用量最好在每卵10-1至103之間，尤其是10-0.7至102.2之間。
為獲得最佳免疫效果，發(fā)現(xiàn)可以在孵化17-19天，優(yōu)選孵化18天時(shí)施用含NDW的疫苗。
實(shí)施例1
用于卵內(nèi)施用的NDW疫苗的制備將原種病毒(保藏于巴斯德研究所的國立微生物保藏中心，保藏編號為I-781)接種到含胚SPF雞卵的尿囊腔中，制得工作種子病毒儲液。
以同樣方式將工作種子病毒接種到含胚SPF卵的尿囊腔中，制得疫苗。孵化后，收集含有疫苗病毒的尿囊液。將尿囊液稀釋并于-50℃下冷凍儲存。
分裝前，將尿囊液融化，進(jìn)一步稀釋至所需的疫苗病毒濃度，與穩(wěn)定劑混合后分裝到小瓶中并冷凍干燥。
實(shí)施例2NDW疫苗在SPF卵內(nèi)的安全性利用Sharma和Burmester所述的方法(Avian Diseases 26(1)，134-149)，在羊膜中孵化18天時(shí)，用實(shí)施例1所述的疫苗對SPF卵進(jìn)行免疫接種。
按下表所示的方案對6組卵進(jìn)行免疫接種。
表1用NDW疫苗對SPF卵進(jìn)行卵內(nèi)免疫接種的安全性組別 疫苗劑量(以EID50計(jì)) 卵數(shù) 孵化百分比1 102.225 762 101.225 843 100.225 844 10-0.825 885 10-1.825 926 對照 25 96結(jié)論用NDW疫苗在胚胎發(fā)育18天時(shí)對SPF卵進(jìn)行卵內(nèi)免疫接種，在每卵101.2至102.2EID50之間的最大劑量下是安全的。
實(shí)施例3卵內(nèi)NDW疫苗在帶有母體抗體的商品雞卵中的安全性利用Sharma和Burmester所述的方法(Avian Diseases 26(1)，134-149)，在羊膜中孵化18天時(shí)，用實(shí)施例1所述的疫苗對帶有母體抗體的商品雞卵進(jìn)行免疫接種。
按下表所示的方案對8組卵進(jìn)行免疫接種。
表2用NDW疫苗對商品雞卵進(jìn)行卵內(nèi)免疫接種的安全性組別 疫苗劑量(以EID50計(jì)) 卵數(shù) 孵化百分比1 10650 682 10550 703 10450 744 10350 765 10250 916 10150 847 10050 968 對照50 88結(jié)論對帶有母體抗體的雞卵進(jìn)行卵內(nèi)免疫接種，在劑量高達(dá)每卵至少102EID50時(shí)是安全的(對孵化沒有任何影響)。
實(shí)施例4用NDW疫苗對SPF卵進(jìn)行卵內(nèi)免疫接種的效力在SPF卵中檢查按實(shí)施例1制備的NDW疫苗的效力。
預(yù)防作用的參數(shù)為接種后的抗體響應(yīng)(血凝抑制試驗(yàn)＝HI試驗(yàn))和接種后死亡百分率。接種病毒為新城疫病毒Hertz 33/56株，每只雞的施用量為105.0EID50。
按下表所示的方案對5組卵進(jìn)行免疫接種。
表3SPF卵卵內(nèi)接種的效力組別疫苗劑量HI效價(jià)接種后死亡百分率(以EID50計(jì)) (以2log計(jì))4周6周1101.74.6未測 02101.05.15.7 03100.03.63.3 0410-0.73.33.2 115對照 1.01.0 100結(jié)論用NDW疫苗在胚胎發(fā)育18天時(shí)對SPF卵進(jìn)行卵內(nèi)免疫接種是有效的。每卵約10-0.7的疫苗劑量是卵內(nèi)NDW免疫接種的最小劑量。
實(shí)施例5用NDW疫苗對帶有母體抗體的商品雞卵進(jìn)行卵內(nèi)免疫接種的效力在帶有母體抗體的商品雞卵中檢查按實(shí)施例1制備的NDW疫苗的效力(1日齡時(shí)HI效價(jià)為5.1)。
預(yù)防作用的參數(shù)為接種后的抗體響應(yīng)(HI試驗(yàn))和接種后死亡百分率。接種病毒為新城疫病毒Hertz 33/56株，每只雞的施用量為105.0EID50。
按下表所示的方案對3組卵進(jìn)行免疫接種。
表4商品雞卵卵內(nèi)接種的效力組別疫苗劑量3周齡時(shí)接種后3周齡時(shí)(以EID50計(jì)) HI效價(jià) 死亡百分率(以2log計(jì))1 1023.9 02 10-12.4 03 對照 1.0 100結(jié)論用NDW疫苗在胚胎發(fā)育18天時(shí)對商品雞卵進(jìn)行卵內(nèi)免疫接種是有效的，并不由于母體抗體的存在而受到影響。
權(quán)利要求
1.一種用于抗新城疫感染的家禽卵內(nèi)免疫接種疫苗，其特征在于該疫苗含有一種具有NDW株特征的病毒，NDW株的樣品保藏于巴斯德研究所的國立微生物保藏中心，保藏編號為I-781。
2.權(quán)利要求1的疫苗，其特征在于NDW株病毒的施用量為每卵10-1至103EID50之間。
3.權(quán)利要求1的疫苗，其特征在于NDW株病毒的施用量為每卵10-0.7至102.2EID50之間。
4.權(quán)利要求1的疫苗，其特征在于NDW株病毒在孵化17至19天時(shí)卵內(nèi)施用。
5.權(quán)利要求1的疫苗，其特征在于NDW株病毒在孵化18天時(shí)卵內(nèi)施用。
6.新城疫病毒NDW株在制備適于卵內(nèi)免疫接種的疫苗中的應(yīng)用，所述新城疫病毒NDW株保藏于巴斯德研究所的國立微生物保藏中心，保藏編號為I-781。
7.權(quán)利要求6的應(yīng)用，其特征在于NDW株病毒的量為每卵10-1至103之間。
8.權(quán)利要求6的應(yīng)用，其特征在于NDW株病毒的量為每卵10-0.7至102.2之間。
9.一種預(yù)防或治療家禽新城疫感染的方法，該方法包括卵內(nèi)施用一種疫苗，該疫苗含有一種具有NDW株特征的病毒，NDW株的樣品保藏于巴斯德研究所的國立微生物保藏中心，保藏編號為I-781。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于抗新城疫感染的家禽卵內(nèi)免疫接種疫苗。該疫苗含有一種命名為NDW的新城疫病毒株,NDW保藏于巴斯德研究所的國立微生物保藏中心,保藏編號為I－781。
文檔編號A61P31/12GK1240360SQ97180718
公開日2000年1月5日 申請日期1997年12月16日 優(yōu)先權(quán)日1996年12月17日
發(fā)明者F·G·達(dá)維拉爾 申請人:戴米納科有限公司