專利名稱：作為nmda受體亞型阻斷劑的4－苯基3、6－二氫－2h－吡啶基衍生物的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有以下通式的化合物或其藥學(xué)允許的鹽
其中，R1是氫，鹵素，低級(jí)烷基或低級(jí)烷氧基；R2是氫；R3是氫，氨基，脲基，低級(jí)烷羰基，低級(jí)烷基磺酰氨基，低級(jí)烷基氨基甲?；被柞；图?jí)烷氧基氨基甲?；图?jí)烷基氨基或R2和R3組成-(CH2)m-；X是亞甲基，羥基亞甲基，低級(jí)烷氧基亞甲基或羰基；n是1或2；m是3或4。
以上描述的物質(zhì)與其鹽是已知化合物。在US 3723445和DE 1 964421這些物質(zhì)被報(bào)告作為抗炎劑、抗變性反應(yīng)劑、鎮(zhèn)咳劑和止疼劑。
令人驚奇的是現(xiàn)在這類物質(zhì)被發(fā)現(xiàn)是NMDA受體亞型的選擇性阻斷劑。
NMDA受體在調(diào)節(jié)神經(jīng)元的活性和可塑性方面起到關(guān)鍵性的作用，這使其在調(diào)整CNS的基本發(fā)展過程和學(xué)習(xí)、記憶的形成中扮演了一個(gè)關(guān)鍵角色。病理情況下NMDA受體的急性和慢性的過度神經(jīng)變性是促使神經(jīng)元細(xì)胞死亡的決定因素。
NMDA受體由兩族有不同亞單位的物質(zhì)組成，分別稱為NR-1(8個(gè)不同的剪接變體)和NR-2(A至D)，它們來源于不同的基因。這兩族物質(zhì)在腦內(nèi)不同區(qū)域的分布狀況有很大差異。NR-1的成分與NR-2的不同亞單位的異側(cè)結(jié)合形成了不同的NMDA受體，顯示出不同的藥理特性。
NMDA受體亞型的特殊阻斷劑可能的治療適應(yīng)征包括由例如中風(fēng)和腦外傷導(dǎo)致的急性神經(jīng)變性，和慢性神經(jīng)變性例如阿爾茨海氏默癥、帕金森氏癥、亨廷頓舞蹈病、ALS(amyotrophic laterial slcerosis)以及由細(xì)菌或病毒感染引起的神經(jīng)變性。
因此，本發(fā)明化合物可用于治療由例如中風(fēng)和腦外傷導(dǎo)致的急性神經(jīng)變性，和慢性神經(jīng)變性例如阿爾茨海氏默癥帕金森氏癥、亨廷頓舞蹈病、ALS(amyotrophic laterial slcerosis)以及由細(xì)菌或病毒感染引起的神經(jīng)變性。
本發(fā)明的目的在于具有通式Ⅰ結(jié)構(gòu)的化合物在治療和預(yù)防由不同MNDA受體亞型過度活躍導(dǎo)致的疾病，由例如中風(fēng)和腦外傷導(dǎo)致的急性神經(jīng)變性，和慢性神經(jīng)變性如阿爾茨海氏默癥、帕金森氏癥、亨廷頓舞蹈病、ALS(amyotrophic laterial slcerosis)以及由細(xì)菌或病毒感染引起的神經(jīng)變性中的應(yīng)用，這些化合物在制造相應(yīng)的治療藥物中的應(yīng)用，和含有這些化合物的治療藥物。
另一方面，本發(fā)明也涉及一種降低急性或慢性神經(jīng)變性的治療法，該方法包括給予需要這種治療的病人服用有效劑量的具有通式Ⅰ的化合物。
以下對(duì)文中使用的常用術(shù)語的定義不論這些術(shù)語在問題中單獨(dú)出現(xiàn)還是組合出現(xiàn)都適用。
在本說明書中使用過的術(shù)語“低級(jí)烷基”是指含1到4個(gè)碳的直鏈或支鏈的烷基，例如甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基等。
術(shù)語“鹵素”是指氯，碘，氟或溴。術(shù)語“低級(jí)烷氧基”是前面所述的烷基加上一個(gè)氧原子。
術(shù)語“氨甲?；笔侵富鶊F(tuán)NH2CO-。
術(shù)語“羥基亞甲基”是指含有-CH(OH)-的基團(tuán)，“烷氧基亞甲基”是指基團(tuán)-CH(烷氧基)-。
具有通式Ⅰ的化合物中，X所代表的羥基亞甲基或低級(jí)烷氧基亞甲基有一個(gè)不對(duì)稱碳原子。所以形成兩個(gè)對(duì)映體是可能的。本發(fā)明包括外消旋混合物以及它們各自的對(duì)映體。
優(yōu)選化合物例如[4-[3-[4-(4-氟-苯基)-3,6-二氫-2H-吡啶-1-基]-2-羥基-丙氧基]-苯基]-脲，N-[4-3-[4-(4-氟-苯基)-3,6-二氫-2H-吡啶-1-基]-丙氧基]-苯基]-甲磺酰胺鹽酸鹽(1∶1)，N-[4-3-[4-(4-氟-苯基)-3,6-二氫-2H-吡啶-1-基]-2-羥基-丙氧基]-苯基]-甲磺酰胺，[4-3-[4-(4-氟-苯基)-3,6-二氫-2H-吡啶-1-基]-2-羥基-丙氧基]-苯基]-氨基甲酸乙酯，N-[4-3-[4-(4-氯-苯基)-3,6-二氫-2H-吡啶-1-基]-丙氧基]-苯基]-乙酰胺和N-[4-2-[4-(4-氟-苯基)-3,6-二氫-2H-吡啶-1-基]-乙氧基]-苯基]-甲磺酰胺。具有通式Ⅰ的化合物和其藥用允許的鹽類的制備方法可以從上文提到的文獻(xiàn)中獲得，在DE 1 964 421中的方法是將具有通式Ⅱ的化合物
其中，R2,R3和X在上文中描述過，Z是一個(gè)離去基團(tuán)如鹵素。和一個(gè)具有以下結(jié)構(gòu)物質(zhì)反應(yīng)
其中R1如前所述。在US 3.723.445中敘述了另一條路線，是將具有以下通式
Ⅳ其中R1,R2,R3,X和n如前所述，和一種礦酸，如濃鹽酸進(jìn)行反應(yīng)。
如上所述，具有通式Ⅰ的化合物含有一個(gè)不對(duì)稱碳原子，有可能形成兩個(gè)對(duì)映體。如果我們?cè)敢?，外消旋體能通過本身已知的方法分離成它們的旋光對(duì)映體，例如用與有旋光活性的酸如α-酒石酸，二苯甲?；?α-酒石酸或α-樟腦磺酸形成的鹽進(jìn)行分步結(jié)晶法等。
具有通式Ⅰ的化合物能被轉(zhuǎn)化為藥學(xué)允許的酸加成鹽。這些鹽能根據(jù)本身已知的和任何本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的方法制備出來。
通式Ⅰ的化合物的活性通過以下方法驗(yàn)證3H-MK801(Dizcilpine)體外結(jié)合試驗(yàn)150-200克雄性大鼠取全腦，在冰上去掉小腦和延髓。組織用Ultra-Turrax以最高速在4℃50份體積的冷Tris-HCl(50mM)、EDTA二鈉(10mM)緩沖液(pH=7.4，濕重/體積)中勻化30秒，勻漿在48’000xg(20’000rpm,SS34,Sorvall RC5C)中離心10分鐘。沉降物在相同體積的緩沖液中再勻化，勻漿在37℃下培養(yǎng)10分鐘。在用上述方法離心后，沉降物再一次在相同體積緩沖液中勻化然后在-80℃條件下將勻漿每35ml份冷凍至少16小時(shí)，不多于兩周。
為了結(jié)合實(shí)驗(yàn)，勻漿用上述方法離心，沉降物以上述方法在25份體積冷Tris-HCl緩沖(50mM,pH=7.4)中用Ultra-Turrax以最高速勻化30秒清洗，三次，然后離心。最終的沉降物在25份體積的緩沖液(原始濕重)中再勻化后在實(shí)驗(yàn)中使用。實(shí)驗(yàn)中的最終膜濃度是20mg/ml(濕重)。
在1nM的谷氨酸、甘氨酸、亞精胺的存在下進(jìn)行溫育。MK-801,(+)-[3-3H(N)],NEN(NET-972)20Ci/mmol，最終使用濃度為5nM。用100NM TCP測(cè)定非特異性結(jié)合。2小時(shí)的室溫溫孵后，混懸液被過濾(Whatmann GF/B，在0.1％聚氮雜環(huán)丙烷中浸潤2小時(shí))，再用3ml冷Tris-HCl(5mM,pH=7.4)緩沖液洗5次，在空氣中干燥的過濾材料用10ml Ultima-Gold(Packard)在Tri-Carb 2500TR閃爍計(jì)數(shù)儀經(jīng)攪動(dòng)后計(jì)數(shù)。
DPM數(shù)值被換算成特異性結(jié)合的百分?jǐn)?shù)并用非線性回歸計(jì)算方程(BINDING,H.Affolter,瑞士)計(jì)算出高、低親和結(jié)合部位的IC50(半數(shù)最大抑制濃度)值。每個(gè)實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)3次用每個(gè)實(shí)驗(yàn)的平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差來計(jì)算最終的IC50值。
參考R.W.Ransom和N.L.Stec神經(jīng)化學(xué)雜志Journal of Neurochemistry 51.830-836,1988重組NMDA受體的電生理學(xué)NMDA受體亞單位NMDAR1C和NMDAR2A的cDNA克隆編碼(參見Hollmann和Heinemann,1994,神經(jīng)科學(xué)年度評(píng)論Annu.Rev.Neurosci.17:31 NMDA受體亞單位命名法則)按已發(fā)表方法(Sigel等，1994，生物的化學(xué)雜志J.Biol.Chem.269:8204)從大鼠大腦的λgtllcDNA庫中分離出來。大鼠大腦NMDA受體亞單位NMDAR2B的克隆從S.Nakanishi(日本京都)處獲得。這些cDNA用已發(fā)表的方法(Malherbe等，1990，腦分子研究Mol.Brain Res.8:199)轉(zhuǎn)錄，5’端加帽和多聚(A+)加尾。南美蛙(爪蟾Xenopus laevis)的卵母細(xì)胞被用來表達(dá)NMDAR1C和NMDAR2A亞單位或NMDAR1C和NMDAR2B亞單位的結(jié)合。每個(gè)卵母細(xì)胞中大約注射入3fmol按1∶1混合的各自的mRNA種類。四到五天后用電壓鉗實(shí)驗(yàn)(參見Methfessel等，1986，普留格氏文獻(xiàn)PflügersArch.407:577關(guān)于卵母細(xì)胞細(xì)胞表達(dá)和電壓鉗法)測(cè)試通過NMDA受體通道的離子電流。膜電位被鉗到-80mV且受體被含有NMDA受體激動(dòng)劑L-天冬氨酸(Asp)和甘氨酸(Gly)的改良Ringer’s溶液活化。為了測(cè)出不同的激動(dòng)劑對(duì)兩種受體敏感性的差異，在兩類亞單位結(jié)合的實(shí)驗(yàn)中使用了不同濃度的激動(dòng)劑(70μM Asp+2.5μM Gly用于NMDAR1C-NMDAR2A,15μM Asp+0.2μM Gly用于NMDAR1C-NMDAR2B)。卵母細(xì)胞與含有激動(dòng)劑的溶液的快速超融(superfusion)過程給予激動(dòng)劑，每2.5分鐘激動(dòng)劑的使用有15秒的間歇，并且在每次操作結(jié)束之前立即測(cè)出由激動(dòng)劑激發(fā)的電流振幅。在一系列最初的對(duì)照給藥后把將要測(cè)定的濃度逐漸增加的拮抗劑加入到基礎(chǔ)Ringer’s液和含有激動(dòng)劑的溶液中。拮抗劑濃度通常以十倍增加而且卵母細(xì)胞暴露在任何濃度下至少5分鐘。在數(shù)據(jù)分析中以激動(dòng)劑誘導(dǎo)的電流振幅作Y軸，拮抗劑濃度為X軸作圖，所得對(duì)數(shù)方程y=A/[1+(x/IC50)H]用來估算50％抑制濃度(IC50)。對(duì)每一種拮抗劑要試驗(yàn)3-6個(gè)卵母細(xì)胞。如果可能的話，至少3種濃度(包括IC50)被用到每個(gè)卵母細(xì)胞上。然而在NMDAR1C加NMDAR2A亞單位的結(jié)合實(shí)驗(yàn)中，在化合物的溶解極限(20-30μM)沒有達(dá)到50％抑制。在這種條件下，最高測(cè)試濃度在表格的“測(cè)試結(jié)果”一欄中用大于“＞”號(hào)標(biāo)出。其它所有條件下由對(duì)數(shù)曲線匹配決定的IC50數(shù)據(jù)都是算術(shù)平均數(shù)值。
具有通式Ⅰ結(jié)構(gòu)的被測(cè)化合物
<p>實(shí)驗(yàn)結(jié)果
通過對(duì)具有通式Ⅰ結(jié)構(gòu)的化合物的篩選可以確定其是NMDA受體亞型的選擇性阻斷劑，而且對(duì)于被選擇的化合物而言，它們對(duì)NMDAR-2B亞單位有更好作用的特點(diǎn)能夠通過使用克隆NMDA受體亞型在卵母細(xì)胞中的表達(dá)產(chǎn)生的電生理特性得到證明。
如本說明書所述的具有通式Ⅰ的化合物及其鹽能被用在標(biāo)準(zhǔn)的藥物制劑中，例如使用諸如有機(jī)或無機(jī)惰性載體材料如水、明膠、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、滑石粉、植物油、膠類物質(zhì)、聚亞烷基二醇等等藥用輔料制成的口服或非腸道途徑的各種劑型。藥物劑型可以制成固體劑型如片劑、栓劑、膠囊或液體劑型如溶液劑、混懸液、乳劑。藥用輔料可以用作防腐劑、穩(wěn)定劑、保濕劑或乳化劑，鹽類物質(zhì)用來改變滲透壓或用作緩沖體系。制劑中還可以含有其它具有治療活性的物質(zhì)。
對(duì)于不同的具有通式Ⅰ結(jié)構(gòu)的化合物，不同給藥途徑，以及不同病人，每天給藥劑量也有所不同。具有通式Ⅰ的結(jié)構(gòu)化合物的代表性給藥方案是口服和非腸道途徑給藥。對(duì)成人來說，每天任選口服具有通式Ⅰ的結(jié)構(gòu)化合物的制劑500mg至1.5mg，每天任選非腸道給具有通式Ⅰ結(jié)構(gòu)的化合物的制劑5至1000mg。以下實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明。實(shí)施例1片劑(濕式造粒)
制備過程1．將1,2,3,4四種成分在純凈水中混勻造粒。2．將顆粒在50℃條件下干燥。3．將顆粒通過合適的粉碎設(shè)備。4．加入成分5，混合3分鐘，在合適壓片設(shè)備上壓片。實(shí)施例2膠囊劑
制備步驟1．將1,2,3三種成分在合適的容器中混合30分鐘。2．加入成分4,5后混合3分鐘。3．裝入合適的膠囊中。實(shí)施例3片劑(濕法造粒)
制備步驟1．將1,2,3,4四種成分在純凈水中混勻，造粒。2．將顆粒在50℃條件下干燥。3．將顆粒通過合適的粉碎設(shè)備。4．加入成分5，混合3分鐘，在合適壓片設(shè)備上壓片。
權(quán)利要求
1．具有以下通式的化合物以及藥學(xué)允許的鹽的應(yīng)用，
其中，R1是氫，鹵素，低極烷基或低級(jí)烷氧基；R2是氫；R3是氫，氨基，脲基，低級(jí)烷羰基，低級(jí)烷基磺酰氨基，低級(jí)烷基氨基甲?；被柞；?，低級(jí)烷氧基氨基甲?；?，低級(jí)烷基氨基或R2和R3組成-(CH2)m-；X是亞甲基，羥基亞甲基，低級(jí)烷氧基亞甲基或羰基；n是1或2；m是3或4。在鹽用于制造控制和治療體現(xiàn)出NMDA受體亞型特殊阻斷劑所治療疾病的適應(yīng)征的疾病的藥物中。
2．如權(quán)利要求1所述的具有通式Ⅰ結(jié)構(gòu)的化合物的應(yīng)用，其中能治療的適應(yīng)征包括由中風(fēng)和腦外傷導(dǎo)致的急性神經(jīng)變性，和慢性神經(jīng)變性例如阿爾茨海氏默癥、帕金森氏癥、亨廷頓舞蹈病，ALS--amyotrophiclaterial slcerosis以及由細(xì)菌或病毒感染引起的神經(jīng)變性。
3．以下化合物根據(jù)權(quán)利要求1的應(yīng)用[4-[3-[4-(4-氟-苯基)-3,6-二氫-2H-吡啶-1-基]-2-羥基-丙氧基]-苯基]-脲，N-[4-3-[4-(4-氟-苯基)-3,6-二氫-2H-吡啶-1-基]-丙氧基]-苯基]-甲磺酰胺鹽酸鹽(1∶1)，N-[4-3-[4-(4-氟-苯基)-3,6-二氫-2H-吡啶-1-基]-2-羥基-丙氧基]-苯基]-甲基磺酰胺，[4-3-[4-(4-氟-苯基)-3,6-二氫-2H-吡啶-l-基]-2-羥基-丙氧基]-苯基]-氨基甲酸乙酯，N-[4-3-[4-(4-氯-苯基)-3,6-二氫-2H-吡啶-1-基]-丙氧基]-苯基]-乙酰胺，N-[4-2-[4-(4-氟-苯基)-3,6-二氫-2H-吡啶-1-基]-乙氧基]-苯基]-甲磺酰胺。
4．含有一種或多種權(quán)利要求1中定義的具有通式Ⅰ結(jié)構(gòu)的化合物或其藥用允許的鹽的藥物，可以治療由例如中風(fēng)和腦外傷導(dǎo)致的急性神經(jīng)變性，和慢性神經(jīng)變性例如阿爾茨海氏默癥、帕金森氏癥、亨廷頓舞蹈病、ALS以及由細(xì)菌或病毒感染引起的神經(jīng)變性。
5．一種治療和預(yù)防疾病的方法，即給予需要這種治療和預(yù)防的病人一個(gè)有效劑量的如權(quán)利要求1所定義的具有通式Ⅰ結(jié)構(gòu)的化合物或其藥用允許的鹽。這里的疾病體現(xiàn)出NMDA受體亞型特殊阻斷劑治療的疾病的適應(yīng)征，例如由中風(fēng)和腦外傷導(dǎo)致的急性神經(jīng)變性，和慢性神經(jīng)變性例如阿爾茨海氏默癥、帕金森氏癥、亨廷頓舞蹈病、ALS--amyotrophiclaterial slcerosis以及由細(xì)菌或病毒感染引起的神經(jīng)變性。
全文摘要
本發(fā)明是有關(guān)具有通式(Ⅰ)的化合物的應(yīng)用,其中R
文檔編號(hào)A61P43/00GK1213304SQ97192889
公開日1999年4月7日 申請(qǐng)日期1997年2月27日 優(yōu)先權(quán)日1996年3月8日
發(fā)明者A·伯森, G·費(fèi)希爾, M-P·海茨內(nèi)德哈特, V·莫特爾, G·特魯伯 申請(qǐng)人:弗·哈夫曼-拉羅切有限公司