專利名稱：Vegf相關(guān)疾病的治療的制作方法
本申請(qǐng)要求1996年5月1日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)60/016,658的優(yōu)先權(quán)。
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及總體上講，本發(fā)明涉及使用蛋白激酶C(PKC)β同功酶抑制劑抑制血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)相關(guān)的內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)和毛細(xì)血管滲透(如VEGF誘導(dǎo)的更高細(xì)胞生長(zhǎng)和滲透)的方法。該VEGF誘導(dǎo)的疾病與哺乳動(dòng)物腫瘤和包括肺水腫在內(nèi)的其它疾病密切相關(guān)。
具體而言，本發(fā)明涉及使用蛋白激酶C(PKC)β同功酶抑制劑治療腫瘤以及本文所述的一些其它VEGF相關(guān)疾病，所述腫瘤包括毛細(xì)血管成血管細(xì)胞瘤，乳房癌，Kaposi氏肉瘤，成蝕質(zhì)細(xì)胞瘤，血管瘤，結(jié)腸癌，成神經(jīng)管細(xì)胞瘤，胃癌，消化道腺瘤，惡性黑素瘤，卵巢癌，非小細(xì)胞性肺癌，前列腺癌，惡性滲漏，腫瘤周邊水腫，如與腦腫瘤相關(guān)的大腦內(nèi)水腫和囊腫，膀胱癌，von Hippel Lindau綜合征，腎細(xì)胞瘤，皮膚癌，甲狀腺癌，宮頸癌，肝細(xì)胞瘤，橫紋肌肉瘤和平滑肌肉瘤。
2．相關(guān)技術(shù)VPF/VEGF為具有多種功能的糖基化細(xì)胞因子。VPF/VEGF的過(guò)量表達(dá)與腫瘤和一些其它疾病相關(guān)。
VPF/VEGF通過(guò)激活囊泡細(xì)胞器介導(dǎo)的運(yùn)輸，遷移和伴隨形狀改變和皺縮的肌動(dòng)蛋白重排引起內(nèi)皮細(xì)胞增殖，過(guò)度滲透。它改變內(nèi)皮細(xì)胞的基因表達(dá)，引起組織因子和一些蛋白酶的產(chǎn)生增加，所述蛋白酶包括間質(zhì)膠原酶以及尿激酶樣和組織纖維蛋白溶酶原激活物。這些相同基因的大多數(shù)由佛波醇肉豆蔻酸·乙酸酯刺激PKC激活誘導(dǎo)。
大多數(shù)已檢查過(guò)的人和動(dòng)物腫瘤大量表達(dá)和分泌VPF/VEGF。VPF/VEGF可以直接影響腫瘤細(xì)胞，如成蝕質(zhì)母細(xì)胞瘤的瘤細(xì)胞，并在腫瘤血管生成的誘發(fā)中起重要作用(Claffey等，Cancer Research 56,172-181(1996)及其中所引文獻(xiàn))。
VEGF的血管生成潛能由細(xì)胞破裂或死亡釋放的成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的協(xié)同活性增強(qiáng)。(Pepper等，Biochem Biophys Res.Commun.,189:824-831(1992)；Muthukrishnan等，J.Cell Physiol.,148:1-16(1991))。
腫瘤生長(zhǎng)和遷移與VEGF的表達(dá)增加密切相關(guān)。來(lái)自腫瘤細(xì)胞的化學(xué)信號(hào)可以使靜止內(nèi)皮細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榭焖偕L(zhǎng)。在12種已知的血管生成蛋白中，腫瘤細(xì)胞中最常見(jiàn)的似乎是堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)，后者也被稱為血管通透因子(VPF)(Folkman,J.New England J.Of Medicine.,Vol 999(26):1757-1763(1995)及其中引用的文獻(xiàn))。
認(rèn)識(shí)到腫瘤生長(zhǎng)需要新血管和鑒定到介導(dǎo)新血管形成或血管生成的化學(xué)因子拓寬了對(duì)病理過(guò)程的理解，開(kāi)辟了治療此類(lèi)疾病的新途徑。9種不同的血管生成抑制物正在進(jìn)行1期或2期臨床試驗(yàn)，用于治療多種實(shí)體性腫瘤，包括乳房癌，結(jié)腸癌，肺癌和前列腺癌以及Kaposi氏肉瘤。(Folkman,J.Tumor angiogenesis In Mendelsohn J.Howley PM,IsraelMA.Liotta LA編，癌癥的分子基礎(chǔ)，Philadelphia:W.B.Saunders.1995:206-232)。這些藥物中的一種，TNP-170，是煙曲霉素的合成類(lèi)似物(Denekamp J.Br J Radiol 66:181-196,1993)，它已被FDA批準(zhǔn)用于許多實(shí)體性腫瘤病人的1期臨床試驗(yàn)?，F(xiàn)在正在晚期癌癥病人中進(jìn)行臨床試驗(yàn)的其它血管生成抑制劑包括血小板因子4，羧基氨基三唑，BB-94和BB-2516，金屬蛋白酶抑制劑，硫酸化多糖tecogalan(DS-152)；酞胺哌啶酮，白介素-12和linomide。(Flier等，The New England Journalof Medicine,vol333 pp 1757-1763,1995及其中所引的參考文獻(xiàn))。
PKC抑制劑也被用于治療癌癥，見(jiàn)US 5,552,396。但是，PKCβ同功酶抑制劑對(duì)特定腫瘤的效果尚不清楚。如果VEGF在某些腫瘤和其它疾病中起作用，則有必要鑒定特異針對(duì)VEGF功能的其它藥物。
發(fā)明概述本發(fā)明的目的之一是提供治療腫瘤的方法。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的方法。
本發(fā)明的又一個(gè)目的是提供治療瘢痕瘤的方法本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供治療肺水腫相關(guān)疾病如成人呼吸窘迫綜合征(ARDS)的方法。
本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供治療腕管綜合征的方法。
這些和本發(fā)明的其它目的通過(guò)以下所述一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案提供。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，提供了一種治療腫瘤的方法，包括向該哺乳動(dòng)物給予治療有效量的蛋白激酶Cβ同功酶抑制劑。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了治療瘢痕瘤的方法，包括向該哺乳動(dòng)物給予治療有效量的蛋白激酶Cβ同功酶抑制劑。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了治療肺水腫的方法，包括向該哺乳動(dòng)物給予治療有效量的蛋白激酶Cβ同功酶抑制劑。
本發(fā)明提供了鑒定治療和預(yù)防腫瘤及其它血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)相關(guān)疾病有效的化合物的方法。
附圖簡(jiǎn)述

圖1顯示PKC抑制劑(S)-3,4-[N,N’-1,1’-((2”-乙氧基)-3”’(O)-4”’-(N,N-二甲氨基)-丁烷)-雙-(3,3’-吲哚基)]-1(H)-吡咯-2,5-二酮對(duì)重組人VEGF刺激的內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用。
圖2進(jìn)一步顯示PKC抑制劑(S)-3,4-[N,N’-1,1’-((2”-乙氧基)-3”’(O)-4”’-(N,N-二甲氨基)-丁烷)-雙-(3,3’-吲哚基)]-1(H)-吡咯-2,5-二酮對(duì)重組人VEGF刺激的內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用。
圖3顯示PKC抑制劑對(duì)缺氧條件下培養(yǎng)的視網(wǎng)膜周皮細(xì)胞表達(dá)的內(nèi)源VEGF活性的影響。
圖4進(jìn)一步顯示PKC抑制劑對(duì)重組人VEGF刺激的內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用。
發(fā)明詳述本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，特定種類(lèi)蛋白激酶C抑制劑，即蛋白激酶Cβ同功酶抑制劑，特別是PKCβ同功酶選擇性抑制劑的治療應(yīng)用抵銷(xiāo)了VEGF的作用。具體而言，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，使用該特定種類(lèi)的蛋白激酶C抑制劑阻礙內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)和毛細(xì)血管滲透，特別是由生長(zhǎng)因子VEGF刺激的內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)和毛細(xì)血管滲透。因而，這些化合物可用來(lái)治療VEGF相關(guān)疾病，如腫瘤和其它VEGF相關(guān)疾病。
本發(fā)明的方法優(yōu)選使用有效抑制β同功酶的蛋白激酶C抑制劑?，F(xiàn)有技術(shù)中，通常認(rèn)為雙吲哚基馬來(lái)酰亞胺類(lèi)或大環(huán)雙吲哚基馬來(lái)酰亞胺類(lèi)是合適的化合物。現(xiàn)有技術(shù)中認(rèn)識(shí)較清楚的雙吲哚基馬來(lái)酰亞胺類(lèi)包括美國(guó)專利5621098,5552396,5545636,5481003,5491242和5057614中所述的化合物，所有這些專利在此引作參考。大環(huán)雙吲哚基馬來(lái)酰亞胺的典型代表是通式Ⅰ的化合物。這些化合物及其制備方法在美國(guó)專利5,552,396中已經(jīng)公開(kāi)，該專利在此引作參考。這些化合物以抑制VEGF相關(guān)的內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)或毛細(xì)血管滲透的有效量給予哺乳動(dòng)物，從而抑制腫瘤和其它疾病如類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，瘢痕瘤，腕管綜合征和肺水腫相關(guān)的VEGF作用。這些化合物也可以給予有患上述疾病危險(xiǎn)的病人，作預(yù)防之用。
用于本發(fā)明方法的一類(lèi)優(yōu)選化合物具有以下通式或?yàn)槠淇伤幱玫柠}，前體藥物或酯(Ⅰ)
其中W為-O-,-S-,-SO-,-SO2-,CO-,C2-C6亞烷基，取代亞烷基，C2-C6亞鏈烯基，-芳基-，-芳基(CH2)mO-，-雜環(huán)-，-雜環(huán)-(CH2)mO-，-稠合雙環(huán)-，-稠合雙環(huán)-(CH2)mO-,-NR3-,-NOR3-,-CONH-或-NHCO-；X和Y獨(dú)立地是C1-C4亞烷基，取代亞烷基，或X,Y和W共同組成-(CH2)n-AA-；R1為氫或可達(dá)4個(gè)任選的取代基，獨(dú)立地選自鹵素，C1-C4烷基，羥基，C1-C4烷氧基，鹵代烷基，硝基，NR4R5，或-NHCO(C1-C4烷基)；R2為氫，CH3CO-,NH2，或羥基；R3為氫，(CH2)m芳基，C1-C1烷基，-COO(C1-C4烷基)，-CONR4R5，-(C=NH)NH2,-SO(C1-C4烷基)，-SO2(NR4R5)，或-SO2(C1-C4烷基)；R4和R5獨(dú)立地是氫，C1-C4烷基，苯基，芐基，或與同其相連的N形成飽和或不飽和的5元或6元環(huán)；AA為氨基酸殘基；m獨(dú)立地是0,1,2或3；n獨(dú)立地是2,3,4或5。
用于本發(fā)明的更優(yōu)選的一類(lèi)化合物可用式Ⅰ表示，其中-X-W-Y-含4到8個(gè)原子，可以是取代或未取代的。最優(yōu)選-X-W-Y-含6個(gè)原子。
用于本發(fā)明方法的其它優(yōu)選化合物為式Ⅰ的化合物，其中R1和R2為氫；W為取代亞烷基，-O-,-S-,-CONH-,-NHCO-或-NR3-。用于本發(fā)明的特別優(yōu)選的化合物為式Ⅰa的化合物或?yàn)槠淇伤幱玫柠}，前體藥物或酯(Ⅰa)
其中Z為-(CH2)p-或-(CH2)p-O-(CH2)p-；R4為氫，-SH,C1-C4烷基，(CH2)m芳基，-NH(芳基)，-N(CH3)(CF3),-NH(CF3)或-NR5R6；R5為氫或C1-C4烷基；R6為氫，C1-C4烷基或芐基；p為0,1或2；m獨(dú)立地是2或3。最優(yōu)選的式Ⅰa化合物中Z為CH2；R4為-NH2,-NH(CF3)或-N(CH3)2。
用于本發(fā)明方法的其它優(yōu)選化合物為式Ⅰ中W為-O-,Y為取代亞烷基，X為亞烷基的化合物。這些優(yōu)選化合物由式Ⅰb表示或?yàn)槠淇伤幱玫柠}，前體藥物或酯(Ⅰb)
其中，Z-(CH2)p-；R4為-NR5R6,-NH(CF3)或-N(CH3)(CF3)；R5和R6獨(dú)立地是氫或C1-C4烷基；p為0,1或2；m獨(dú)立地是2或3。最優(yōu)選的式Ⅰb化合物中p為1,R5和R6為甲基。
因?yàn)槭舰?Ⅰa和Ⅰb的化合物含有堿性部分，它們也可以可藥用的酸加成鹽存在。通常用來(lái)形成這些鹽的酸包括無(wú)機(jī)酸，如鹽酸，氫溴酸，氫碘酸，硫酸和磷酸，以及有機(jī)酸如對(duì)苯甲磺酸，甲磺酸，草酸，對(duì)溴苯磺酸，碳酸，琥珀酸，檸檬酸，苯甲酸，乙酸，和有關(guān)的無(wú)機(jī)酸和有機(jī)酸。這些可藥用的鹽因而包括硫酸鹽，焦硫酸鹽，硫酸氫鹽，亞硫酸鹽，亞硫酸氫鹽，磷酸鹽，磷酸一氫鹽，磷酸二氫鹽，偏磷酸鹽，焦磷酸鹽，氯化物，溴化物，碘化物，乙酸鹽，丙酸鹽，癸酸鹽，辛酸鹽，丙烯酸鹽，甲酸鹽，異丁酸鹽，庚酸鹽，丙炔酸鹽，草酸鹽，丙二酸鹽，琥珀酸鹽，辛二酸鹽，癸二酸鹽，富馬酸鹽，馬來(lái)酸鹽，2-丁炔-1,4-二酯，3-丁炔-2,5-二酯，苯甲酸鹽，氯苯甲酸鹽，羥基苯甲酸鹽，甲氧基苯甲酸鹽，鄰苯二甲酸鹽，二甲苯磺酸鹽，苯乙酸鹽，苯丙酸鹽，苯丁酸鹽，檸檬酸鹽，乳酸鹽，馬尿酸鹽，β-羥基丁酸鹽，甘醇酸鹽，馬來(lái)酸鹽，酒石酸鹽，甲磺酸鹽，丙磺酸鹽，萘-1-磺酸鹽，萘-2-磺酸鹽，扁桃酸鹽等。具體使用的為鹽酸鹽和甲磺酸鹽。
除了可藥用的鹽之外，也可以存在其它鹽。它們可以作為化合物純化，其它鹽制備或化合物或中間體鑒定和表征的中間體。
式Ⅰ,Ⅰa和Ⅰb化合物的可藥用的鹽也可以各種溶劑化物存在，如水，甲醇，乙醇，二甲基甲酰胺，乙酸乙酯的溶劑化物等。也可以制備這些溶劑化物的混合物。這些溶劑化物可以來(lái)自結(jié)晶溶劑，為制備溶劑或結(jié)晶溶劑中固有的，或?yàn)槿軇┲信既淮嬖诘摹?br> 已經(jīng)認(rèn)識(shí)到，式Ⅰ,Ⅰa和Ⅰb的化合物可以存在各種立體異構(gòu)體形式，如在取代亞烷基部分，W可以包含手性碳原子。這些化合物通常制備成消旋體，并可以方便地這樣使用。或者，如果需要的話，兩種對(duì)映體可以分離或分別合成。這些消旋體和兩種對(duì)映體及其混合物形成用于本發(fā)明方法的部分化合物。
用于本發(fā)明的化合物也包括式Ⅰ,Ⅰa和Ⅰb化合物可藥用的前體藥物。前體藥物是已被化學(xué)修飾的藥物，在其作用部位可能無(wú)生物活性，但其可被一種或多種酶促或其它體內(nèi)過(guò)程降解或修飾成原來(lái)的生物活性形式。該前體藥物可能具有不同于母化合物的藥物動(dòng)力學(xué)，使其較容易穿過(guò)粘膜吸收，更容易成鹽或更容易溶解，和/或提高系統(tǒng)穩(wěn)定性(例如，血漿半衰期增加)。一般，這種化學(xué)修飾包括1)酯或酰胺衍生物，其可被酯酶或脂酶切割；2)可為特異或非特異蛋白酶識(shí)別的肽；或3)通過(guò)前體藥物形式或修飾的前體藥物形式的膜選擇在作用部位聚集的衍生物；或?yàn)橐陨?到3的組合。選擇和制備合適的前體藥物衍生物的常規(guī)方法見(jiàn)，例如，H.Bundgaard,Design of Prodrugs,(1985)。
各種雙吲哚基-N-馬來(lái)酰亞胺的合成見(jiàn)Davis等，美國(guó)專利5,057,614，適于在本發(fā)明中使用的優(yōu)選化合物的合成見(jiàn)前述美國(guó)專利5,552,396和Faul等，歐洲專利出版物0 657 411 A1，二者均引作參考。
用于本發(fā)明方法的一種特別優(yōu)選的蛋白激酶C抑制劑為上述美國(guó)專利5,552,396實(shí)施例5g所述的化合物((S)-3,4-[N,N’-1,1’-((2”-乙氧基)-3”’(O)-4”’-(N,N-二甲氨基)-丁烷)-雙-(3,3’-吲哚基)]-1(H)-吡咯-2,5-二酮鹽酸鹽)。該化合物為強(qiáng)效蛋白激酶C抑制劑。它選擇性作用于蛋白激酶C，對(duì)其它激酶影響不明顯，并且是高度同功酶選擇性的，即它選擇性作用于β-1和β-2同功酶。該化合物的其它鹽也比較合適，特別是甲磺酸鹽。
優(yōu)選的甲磺酸鹽可通過(guò)式Ⅱ的化合物(Ⅱ)
與甲磺酸在非反應(yīng)活性有機(jī)溶劑中反應(yīng)制備，優(yōu)選溶劑為有機(jī)溶劑/水混合物，最優(yōu)選水-丙酮。其它溶劑如甲醇，丙酮，乙酸乙酯及其混合物也可使用。溶劑與水的比例不嚴(yán)格，通常由反應(yīng)試劑的溶解性確定。通常優(yōu)選溶劑與水的比例為二者體積比為0.1∶1到100∶1。優(yōu)選比例為1∶1到20∶1，最優(yōu)選5∶1到10∶1。最佳比例取決于選用的溶劑，優(yōu)選使用丙酮時(shí)溶劑與水的比例為9∶1。
反應(yīng)通常使用大約等摩爾量的兩種試劑，但其它比例，特別是甲磺酸過(guò)量也可以。加入甲磺酸的速度對(duì)反應(yīng)并不重要，可以快速加入(＜5分鐘)或在6小時(shí)以上緩慢加入。反應(yīng)可在0℃到回流溫度下進(jìn)行。攪拌反應(yīng)混合物直至通過(guò)X射線粉末衍射測(cè)定鹽的形成已完成，通常需時(shí)5分鐘到12小時(shí)。
本發(fā)明的鹽優(yōu)選以晶體形式制備，這樣制備也比較方便。鹽的三水合物形式在干燥或20-60％相對(duì)濕度下容易轉(zhuǎn)變?yōu)橐凰衔铩Ｔ擕}基本上為表現(xiàn)出確定的熔點(diǎn)，雙折射和X射線衍射圖案的晶體。通常，晶體含有不到10％的無(wú)定形固體，優(yōu)選不到5％的無(wú)定形固體，最優(yōu)選不到1％的無(wú)定形固體。
甲磺酸鹽通過(guò)過(guò)濾或本領(lǐng)域已知的其它分離方法直接從反應(yīng)混合物中分離，產(chǎn)率為50％到100％。如果需要的話，可以使用重結(jié)晶和本領(lǐng)域已知的其它純化方法進(jìn)一步純化該鹽。
組織培養(yǎng)中VEGF等生長(zhǎng)因子刺激的內(nèi)皮細(xì)胞表現(xiàn)出較基礎(chǔ)細(xì)胞生長(zhǎng)速度更快的生長(zhǎng)速度。本發(fā)明中的試驗(yàn)證實(shí)，蛋白激酶C抑制劑(S)-3,4-[N,N’-1,1’-((2”-乙氧基)-3”’(O)-4”’-(N,N-二甲氨基)-丁烷)-雙-(3,3’-吲哚基)]-1(H)-吡咯-2,5-二酮酸鹽，在體外以大約0.1到100nM的濃度使用，顯著抑制生長(zhǎng)因子(如VEGF)刺激的非基礎(chǔ)細(xì)胞生長(zhǎng)。
重要的是，其它試驗(yàn)已證實(shí)該化合物不抑制組織培養(yǎng)中的正常內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)，表現(xiàn)為在正常含氧量條件培養(yǎng)基中，該化合物不抑制無(wú)VEGF刺激的內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)。在缺氧條件培養(yǎng)基中，缺氧細(xì)胞產(chǎn)生的內(nèi)源生長(zhǎng)因子VEGF的含量增加，使得細(xì)胞生長(zhǎng)速度增加。同樣，蛋白激酶Cβ同功酶選擇性抑制劑(S)-3,4-[N,N’-1,1’-((2”-乙氧基)-3”’(O)-4”’-(N,N-二甲氨基)-丁烷)-雙-(3,3’-吲哚基)]-1(H)-吡咯-2,5-二酮酸鹽使得這種缺氧條件引發(fā)的細(xì)胞生長(zhǎng)變得正常。
本發(fā)明的試驗(yàn)證實(shí)VEGF等生長(zhǎng)因子也影響毛細(xì)血管滲透。試驗(yàn)證實(shí)，在動(dòng)物模型中，VEGF顯著增加毛細(xì)血管通透性達(dá)3倍。該VEGF依賴的毛細(xì)血管通透性增加也是劑量依賴的。根據(jù)動(dòng)物體內(nèi)試驗(yàn)，在使用VEGF之前，以大約25毫克/千克/日使用蛋白激酶C抑制劑顯著抑制了VEGF引發(fā)的毛細(xì)血管滲透。具體使用濃度為1nM到5mM，優(yōu)選1nM到500nM。抑制可達(dá)80％，通常特異針對(duì)生長(zhǎng)因子引發(fā)的毛細(xì)血管滲透。毛細(xì)血管滲透可通過(guò)熒光素血管造影術(shù)測(cè)定。
本發(fā)明的PKCβ抑制劑可用于治療與內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)和毛細(xì)血管滲透相關(guān)的疾病，特別是腫瘤和其它VEGF相關(guān)疾病。
肺水腫也可以使用本發(fā)明的化合物治療。肺水腫的特征是由于毛細(xì)血管通透性增加，肺間質(zhì)液體含量增加。肺水腫與包括成人呼吸窘迫綜合征(ARDS)的幾種疾病有關(guān)。它可能主要與肺泡毛細(xì)血管膜破裂引起缺氧和VEGF含量增加有關(guān)。這種破裂也可以激活PKCβ。因而，本發(fā)明鑒定的化合物可以干擾生長(zhǎng)因子對(duì)毛細(xì)血管滲透的刺激和/或PKCβ，緩解導(dǎo)致肺水腫的疾病。
本發(fā)明的PKC抑制劑也可以用來(lái)治療哺乳動(dòng)物的腫瘤和其它VEGF相關(guān)疾病。VEGF的信號(hào)傳導(dǎo)途徑對(duì)腫瘤細(xì)胞具有直接的作用，并介導(dǎo)多種腫瘤和非腫瘤疾病的血管生成活性。已在多種人類(lèi)腫瘤中證實(shí)了VEGF的表達(dá)，所述腫瘤包括毛細(xì)血管成血管細(xì)胞瘤，乳房癌，Kaposi氏肉瘤，成蝕質(zhì)細(xì)胞瘤，血管瘤，結(jié)腸癌，成神經(jīng)管細(xì)胞瘤，胃癌，消化道腺瘤，惡性黑素瘤，卵巢癌，非小細(xì)胞性肺癌，前列腺癌，膀胱癌，von HippelLindau綜合征，腎細(xì)胞瘤，皮膚癌，甲狀腺癌，宮頸癌，肝細(xì)胞瘤，橫紋肌肉瘤和平滑肌肉瘤。
腫瘤預(yù)后不良經(jīng)常與同VEGF表達(dá)相偶聯(lián)的腫瘤血管供應(yīng)程度有關(guān)。若無(wú)血管供應(yīng)，則腫瘤生長(zhǎng)受到限制。因而，使用抗血管生成藥劑或抗VEGF藥劑可能通過(guò)限制血管供應(yīng)，阻止腫瘤進(jìn)一步生長(zhǎng)，引發(fā)腫瘤消退?？筕EGF藥劑可能也直接影響腫瘤細(xì)胞，如VEGF直接影響惡性黑素瘤細(xì)胞。
VEGF的表達(dá)由多種機(jī)制控制。VEGF的產(chǎn)生可由缺氧、一些癌基因和包括轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β、血小板衍生生長(zhǎng)因子在內(nèi)的幾種細(xì)胞因子正調(diào)節(jié)。
在一些實(shí)施方案中，PKCβ抑制劑可用于抗VEGF治療，用來(lái)治療腫瘤病人。本發(fā)明的PKCβ抑制劑可影響所有表達(dá)VEGF的腫瘤如以上所列腫瘤的生長(zhǎng)。特別優(yōu)選抗VEGF治療用來(lái)治療患以下腫瘤的病人不可切除的原發(fā)性腫瘤，手術(shù)或放射治療方法未完全消除的原發(fā)性腫瘤，已經(jīng)適當(dāng)治療但很有可能轉(zhuǎn)移的腫瘤，以及已經(jīng)發(fā)生轉(zhuǎn)移的病人。預(yù)后極差具有高度血管供應(yīng)的腫瘤，如乳房癌，膀胱癌，結(jié)腸癌，惡性黑素瘤，非小細(xì)胞性肺癌和頭/頸癌，是本發(fā)明抗VEGF治療或PKCβ抑制劑治療的極好對(duì)象。
嬰兒血管瘤在白種嬰兒中發(fā)病率為10-12％。通常，它不是致命的疾病，但在某些情況下，由于大小或解剖位置，可能引發(fā)較高的發(fā)病率和死亡率。VEGF與這些腫瘤的生長(zhǎng)有關(guān)。目前，干擾素α-2a用來(lái)引發(fā)這種腫瘤的消退?？紤]到這種腫瘤的血管生成特性，使用PKCβ抑制劑的抗VEGF治療應(yīng)該象干擾素α-2a一樣有效，或在干擾素α-2a治療失敗的情況下，作為補(bǔ)救治療。
PKCβ抑制劑或抗VEGF治療可用來(lái)治療腫瘤引發(fā)的腹水，惡性胸膜滲漏和腫瘤周邊水腫。由于患有排卵誘發(fā)的卵巢激素過(guò)多綜合征的女性acitic液中VEGF增加，PKCβ抑制劑可用于這種疾病。VEGF是強(qiáng)效的血管通透因子，例如其效力較組胺強(qiáng)50,000倍。由因惡性腫瘤而引起胸膜和腹膜滲漏的病人身上取得的樣液中，VEGF濃度升高。向裸鼠腹膜內(nèi)注入腫瘤細(xì)胞引起腹水積聚，這與分泌到腹膜內(nèi)的VEGF增加在時(shí)間上相對(duì)應(yīng)。中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤如成蝕質(zhì)細(xì)胞瘤的腫瘤周邊水腫與高水平VEGF相關(guān)?？筕EGF治療會(huì)減輕惡性腫瘤相關(guān)的腹水和胸膜滲漏以及卵巢激素過(guò)多綜合征。這種治療可以減少重復(fù)穿刺/胸腔穿刺的需求，降低這些方法的并發(fā)癥如感染、蛋白質(zhì)減少、肺萎縮的發(fā)病率。這種治療特別優(yōu)選用于抑制封閉的解剖部位如中樞神經(jīng)系統(tǒng)中發(fā)生的腫瘤周邊水腫。
用于本發(fā)明的PKCβ抑制劑可用于抗VEGF治療，用來(lái)治療與VEGF表達(dá)相關(guān)的其它疾病。
類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的特征在于具有高度血管供應(yīng)的高可塑性滑膜關(guān)節(jié)翳，它侵入并破壞了正常的關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)。此外，滑液的滲出特性表明了高度的毛細(xì)血管通透性。VEGF可以刺激膠原酶表達(dá)，進(jìn)一步惡化破壞過(guò)程。與骨關(guān)節(jié)炎病人相比，類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人的滑液中，VEGF水平明顯升高。VEGF的產(chǎn)生已被定位于浸潤(rùn)性巨噬細(xì)胞。因而，類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎可以通過(guò)抗VEGF治療給予PKCβ抑制劑治療。
瘢痕瘤的特征在于傷口愈合過(guò)程中形成高度增生的肉芽組織，從而導(dǎo)致過(guò)度生長(zhǎng)的疤痕。這種疾病一般見(jiàn)于黑種人，并易于復(fù)發(fā)。向過(guò)度生長(zhǎng)的肉芽組織局部給予PKC抑制劑可以減少血管生成，減輕隨后的疤痕形成。
腕管綜合征也稱截流性神經(jīng)病，其特征在于神經(jīng)壓迫，從而導(dǎo)致感覺(jué)異常、肌肉衰弱和肌肉萎縮。它是由于正中神經(jīng)通過(guò)腕骨和橫向腕部韌帶形成的空間時(shí)，受到壓迫所致。腕管綜合征為糖尿病相關(guān)綜合征，或發(fā)生于非糖尿病人群中。
腕管綜合征中神經(jīng)水合作用增強(qiáng)可由VEGF水平升高所致。神經(jīng)周?chē)M織VEGF水平升高通過(guò)引起血管滲透和液體流入神經(jīng)周邊組織，可導(dǎo)致神經(jīng)截流。在腕管綜合征中，膠原合成的改變和/或降解可由高水平TGFβ引起。TGFβ表達(dá)增加能促進(jìn)細(xì)胞外蛋白包括膠原合成，并降低其降解，這導(dǎo)致神經(jīng)周?chē)M織中細(xì)胞外基質(zhì)沉積增加。已證實(shí)PKC激活通過(guò)刺激活化蛋白1活性，引發(fā)TGFβ的轉(zhuǎn)錄。因而，在腕管綜合征中，本發(fā)明的PKCβ抑制劑可用來(lái)抵銷(xiāo)VEGF和/或TGFβ活性。
本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)理解，根據(jù)本發(fā)明使用的蛋白激酶Cβ抑制劑的治療有效量為足以通過(guò)抑制VEGF而抑制內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)或毛細(xì)血管滲透形成的劑量，該劑量可以變化，特別取決于受影響的組織大小、治療用制劑中化合物的濃度和病人體重。通常，用作治療上述腫瘤和其它VEGF相關(guān)疾病的治療藥劑的蛋白激酶C抑制劑的量由主治醫(yī)師根據(jù)病情決定。原則是，確定合適劑量時(shí)，應(yīng)考慮新血管形成的程度、病人體重和年齡。
通常，合適的劑量是在治療部位蛋白激酶C抑制劑的濃度為0.5到200μM，更一般的情況是0.5到200nM。預(yù)計(jì)血漿濃度為0.5到100nM在大多數(shù)情況下應(yīng)該足夠。
優(yōu)選式Ⅰ的化合物和式Ⅰa和式Ⅰb的優(yōu)選化合物在使用之前制成制劑。合適的藥用制劑使用眾所周知、易于獲得的成分通過(guò)已知方法制備。在制備適用于本發(fā)明方法的組合物時(shí)，活性成分通常與載體混合，或用載體稀釋，或封裝于膠囊、小藥囊、紙或其它容器形式的載體中。當(dāng)載體作為稀釋劑時(shí)，它可以是固體、半固體或液體材料，作為活性成分的載劑、賦形劑或介質(zhì)。因而，組合物可以是片劑、丸劑、粉末、錠劑、粉劑、扁囊劑、酏劑、懸液、乳劑、溶液、糖漿、氣溶膠(作為固體或在液體介質(zhì)中)、軟和硬明膠膠囊、栓劑、無(wú)菌注射液和用于口服或局部用藥的無(wú)菌包裝粉末。
合適的載體、賦形劑和稀釋劑的實(shí)例包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯樹(shù)膠、磷酸鈣、藻蛋白酸鹽、黃蓍膠、明膠、硅酸鈣、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮，纖維素、糖漿、甲基纖維素、甲基和丙基羥基苯甲酸鹽、滑石、硬脂酸鎂和礦物油。制劑中還可包括潤(rùn)滑劑、濕潤(rùn)劑、乳化劑和懸浮劑、防腐劑、甜味劑或風(fēng)味劑。本發(fā)明的組合物可以配制成適當(dāng)?shù)男问?，使其向病人給藥后，提供活性成分的快速、持續(xù)或延遲釋放。該組合物優(yōu)選配制成單位劑量形式，每劑含活性成分大約0.05mg到3g，更一般的情況是大約750mg。但是，應(yīng)理解，使用的治療劑量要由醫(yī)師根據(jù)相關(guān)情況決定，包括待治療疾病的嚴(yán)重性、選用的化合物和給藥途徑。因此，上述劑量范圍決不意味著限制本發(fā)明的范圍?！皢挝粍┝啃问健敝赣糜谌祟?lèi)和其它哺乳動(dòng)物的單一劑量的物理上分離的單位，它與可藥用載體組合，每一單位含預(yù)定量的活性成分，根據(jù)計(jì)算它能產(chǎn)生所需的治療作用。
上述制劑中，多數(shù)是口服，除此之外，用于本發(fā)明方法的化合物也可以局部用藥。局部制劑包括軟膏、乳膏和凝膠。
軟膏通常通過(guò)以下方法制備(1)使用油質(zhì)基底，即由固體油或烴如白凡士林或礦物油組成的基底，或(2)使用吸收基底，即由無(wú)水物質(zhì)或吸水物質(zhì)如無(wú)水羊毛脂組成的基底。通常，在油質(zhì)或吸收基底形成后，加入活性成分(化合物)，直至達(dá)到所需濃度。
乳膏為油/水乳劑。它們由油相(內(nèi)部相)和水相(連續(xù)相)組成，油相一般包括固體油、烴等，如蠟、凡士林、礦物油等，水相包括水相和任何水溶性物質(zhì)，如加入的鹽。兩相通過(guò)使用乳化劑來(lái)穩(wěn)定，乳化劑如十二烷基硫酸鈉等表面活性劑；阿拉伯膠狀粘土、veegum等親水膠等等。形成乳劑之后，通常加入活性成分(化合物)，直至達(dá)到所需濃度。
凝膠包括選自油質(zhì)基底、水或乳化-懸浮基底的基底。向基底加入膠凝劑，它在基底上形成基質(zhì)，增加其粘度。膠凝劑的實(shí)例為羥丙基纖維素、丙烯酸聚合物等。通常，活性成分(化合物)在加入膠凝劑之前加入制劑中，至所需濃度。
局部制劑中化合物的量不嚴(yán)格；其濃度應(yīng)允許制劑在所需部位直接使用，在此釋放所需量的化合物。
用于感染組織的局部制劑的常用量取決于感染組織大小和制劑中化合物的濃度。通常，該制劑在感染組織的用量應(yīng)向每平方厘米該組織提供大約1到500μg化合物。優(yōu)選化合物的用量為大約30到300μg/cm2，更優(yōu)選化合物的用量為大約50到200μg/cm2，最優(yōu)選化合物的用量為大約60到100μg/cm2。
以下制劑實(shí)施例僅用來(lái)說(shuō)明，決不意味著限制本發(fā)明的范圍。
制劑1硬明膠膠囊使用下列成分制備用量(毫克/膠囊)活性成分 250毫克干淀粉 200毫克硬脂酸鎂 10毫克總計(jì) 460毫克上述成分混合并460毫克的量裝入硬明膠膠囊。
制劑2片劑使用下列成分制備
用量(毫克/膠囊)活性成分 250毫克微晶纖維素400毫克霧化二氧化硅 10毫克硬脂酸5毫克總計(jì) 665毫克上述成分混和并壓成片劑，每片重665毫克。
制劑3每片含活性成分60毫克的片劑按如下制備用量(毫克/膠囊活性成分 60毫克淀粉 45毫克微晶纖維素35毫克聚乙烯吡咯烷酮(10％水溶液)4毫克羧甲基淀粉鈉 4.5毫克硬脂酸鎂 0.5毫克滑石 1毫克總計(jì) 150毫克活性成分、淀粉和纖維素通過(guò)美國(guó)標(biāo)準(zhǔn)45號(hào)篩，充分混合。聚乙烯吡咯烷酮溶液與所得粉末混合，然后通過(guò)美國(guó)標(biāo)準(zhǔn)14號(hào)篩。產(chǎn)生的顆粒在50℃干燥，通過(guò)美國(guó)標(biāo)準(zhǔn)18號(hào)篩。羧甲基淀粉鈉、硬脂酸鎂和滑石預(yù)先通過(guò)美國(guó)標(biāo)準(zhǔn)60號(hào)篩，然后加入至顆粒中，混合后，在壓片機(jī)上壓片，得到每個(gè)重150毫克的片劑。
實(shí)施例以下實(shí)施例證實(shí)使用(S)-3,4-[N,N’-1,1’-((2”-乙氧基)-3”’(O)-4”’-(N,N-二甲氨基)-丁烷)-雙-(3,3’-吲哚基)]-1(H)-吡咯-2,5-二酮鹽酸鹽抑制VEGF刺激的體外內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)和體內(nèi)毛細(xì)血管通透性增加。
實(shí)施例1該實(shí)施例使用重組人VEGF測(cè)定了上述化合物對(duì)VEGF刺激的內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用。
牛視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞通過(guò)勻漿和一系列過(guò)濾步驟分離自新鮮小牛眼。原代內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)物培養(yǎng)在纖連蛋白(NYBen Reagents,New York BloodCenter)包被的培養(yǎng)皿(Costar)中，培養(yǎng)基為Dulbecco改良Eagle’s培養(yǎng)基(DMEM)，其中含5.5mM葡萄糖，10％血漿衍生馬血清(Wheaton,Scientific)，肝素50mg/L，內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子50U/L(BoehringerMannheim)。細(xì)胞生長(zhǎng)至匯合后，將培養(yǎng)基換成含5％胎牛血清(HyClonc)的培養(yǎng)基。每三天更換培養(yǎng)基。內(nèi)皮細(xì)胞的均一性使用抗因子Ⅷ的抗體證實(shí)。
上述PKC抑制劑在體外對(duì)VEGF作用的抑制作用通過(guò)使用牛視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞的稀疏平板培養(yǎng)物評(píng)價(jià)，所述培養(yǎng)物已加入VEGF刺激其生長(zhǎng)。牛視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞稀疏涂布(每孔約2500細(xì)胞)于24孔培養(yǎng)皿上(Costar)，在含10％胎牛血清的DMEM(GIBCO)中溫育過(guò)夜。第二天更換培養(yǎng)基。
為測(cè)定上述PKC抑制劑對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制，進(jìn)行了一組試驗(yàn)，其中未給予任何活性藥物的細(xì)胞生長(zhǎng)作為對(duì)照，然后在VEGF存在(25ng/ml；Genentech)和不存在時(shí)，測(cè)定加入上述PKC抑制劑的影響。37℃溫育4天，然后細(xì)胞在0.1％十二烷基硫酸鈉(SDS)中裂解，使用Hoechst33258染料和熒光計(jì)(TKO-100；Hoefer)測(cè)定DNA含量。
所有測(cè)定至少做三個(gè)重復(fù)，試驗(yàn)至少重復(fù)三次。所有試驗(yàn)結(jié)果表示為平均值±SD。體外試驗(yàn)結(jié)果通過(guò)非配對(duì)Student t測(cè)驗(yàn)分析。P值小于0.050被認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
圖1示出使用重組VEGF所得的結(jié)果。如圖中最左邊3欄的數(shù)字所示，加入上述PKC抑制劑至內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)物中基本上對(duì)基礎(chǔ)細(xì)胞生長(zhǎng)速度無(wú)影響(第1欄)。加入VEGF明顯增加生長(zhǎng)速度(第4欄)。加入大于0.5nM的上述PKC抑制劑顯著降低生長(zhǎng)速度(最右邊4欄)。
實(shí)施例2該實(shí)施例類(lèi)似于圖1報(bào)導(dǎo)的試驗(yàn)，使用重組人VEGF進(jìn)一步說(shuō)明上述PKC抑制劑對(duì)VEGF刺激的內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用。
按實(shí)施例1的方法，分離和培養(yǎng)牛視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞；然后制備稀疏涂布的培養(yǎng)物。再按照實(shí)施例1的方法進(jìn)行上述試驗(yàn)，測(cè)定存在(25ng/ml；Genetech)和不存在VEGF時(shí)上述PKC抑制劑對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。37℃溫育4天后，細(xì)胞在0.1％十二烷基硫酸鈉(SDS)中裂解，使用Hoechst 33258染料和熒光計(jì)(TKO-100；Hoefer)測(cè)定DNA含量。
圖2示出該試驗(yàn)的結(jié)果。如圖注VEGF上方各欄所示，向內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)物加入上述PKC抑制劑0.1nM到100nM對(duì)細(xì)胞的基礎(chǔ)生長(zhǎng)速度基本上無(wú)影響。用重組人VEGF(25ng/ml)刺激內(nèi)皮細(xì)胞4天后，與未刺激細(xì)胞相比，細(xì)胞DNA含量顯著增加，表明生長(zhǎng)速度增加(-VEGF0與+VEGF0比較)。加入上述PKC抑制劑該生長(zhǎng)速度明顯降低(圖注+VEGF上方最右邊4欄)。具體而言，加入PKC抑制劑0.1nM略微降低VEGF的刺激能力，加入1nM及更多的PKC抑制劑，則基本上消除了VEGF刺激能力。
實(shí)施例3該實(shí)施例測(cè)定上述PKC抑制劑對(duì)缺氧條件下培養(yǎng)的視網(wǎng)膜周皮細(xì)胞表達(dá)內(nèi)源VEGF活性的影響。
牛視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞和視網(wǎng)膜周皮細(xì)胞通過(guò)勻漿和一系列過(guò)濾步驟分離自新鮮小牛眼。按實(shí)施例1的方法培養(yǎng)內(nèi)皮細(xì)胞并稀疏涂布平板。使用類(lèi)似的方法，將牛視網(wǎng)膜周皮細(xì)胞培養(yǎng)在含20％胎牛血清的DMEM/5.5mM葡萄糖中。
按照下述方法分別制備用于內(nèi)源VEGF表達(dá)的缺氧條件培養(yǎng)基和正常含氧量對(duì)照培養(yǎng)基。使用Lab-Line Instruments計(jì)算機(jī)控制、帶有減氧控制的遠(yuǎn)紅外水夾套CO2培養(yǎng)箱(480型)，將匯合的視網(wǎng)膜周皮細(xì)胞單層培養(yǎng)物置于2％O2/5％CO2/93％N2下24小時(shí)。所有細(xì)胞在37℃下培養(yǎng)，光鏡下未見(jiàn)形態(tài)變化，除去臺(tái)盼藍(lán)染料(＞98％)，然后可以正常傳代。在正常含氧量條件(95％空氣/5％CO3)下培養(yǎng)的同一批細(xì)胞和其傳代物作為對(duì)照。隨后收集培養(yǎng)基并在使用前過(guò)濾(Nalgene；0.22μm)。
在該實(shí)施例的試驗(yàn)中，測(cè)定在正常含氧量條件培養(yǎng)基或缺氧條件培養(yǎng)基中上述PKC抑制劑對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。如以上實(shí)施例，在37℃下培養(yǎng)4天后，細(xì)胞在0.1％十二烷基硫酸鈉(SDS)中裂解，使用Hoechst33258染料和熒光計(jì)(TKO-100；Hoefer)測(cè)定DNA含量。
圖3所示的試驗(yàn)中，上述PKC抑制劑的使用濃度為10nM。如圖3所示，來(lái)自缺氧條件下培養(yǎng)的視網(wǎng)膜周皮細(xì)胞的條件培養(yǎng)基刺激視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)，已知缺氧條件誘導(dǎo)VEGF表達(dá)(圖3中第1欄與第3欄比較)。該生長(zhǎng)刺激作用在PKC抑制劑(S)-3,4-[N,N’-1,1’-((2”-乙氧基)-3”’(O)-4”’(N,N-二甲氨基)-丁烷)-雙-(3,3’-吲哚基)]-1(H)-吡咯-2,5-二酮鹽酸鹽存在時(shí)被抑制(成為正常)。
實(shí)施例4該實(shí)施例類(lèi)似于圖1和圖2報(bào)導(dǎo)的試驗(yàn)，使用重組人VEGF進(jìn)一步說(shuō)明上述PKC抑制劑對(duì)VEGF刺激的內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用。
按實(shí)施例1的方法，分離和培養(yǎng)牛視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞；然后制備稀疏涂布的培養(yǎng)物。再按照實(shí)施例1的方法進(jìn)行上述試驗(yàn)，測(cè)定存在(25ng/ml；Genetech)和不存在VEGF(-VEGF)時(shí)上述PKC抑制劑對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。同上述，37℃溫育4天后，細(xì)胞在0.1％十二烷基硫酸鈉(SDS)中裂解，使用Hoechst 33258染料和熒光計(jì)(TKO-100；Hoefer)測(cè)定DNA含量。
圖4示出該試驗(yàn)的結(jié)果。如圖注VEGF上方各欄所示，向內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)物加入上述PKC抑制劑10nM對(duì)細(xì)胞的基礎(chǔ)生長(zhǎng)速度基本上無(wú)影響。用重組人VEGF(25ng/ml)刺激內(nèi)皮細(xì)胞后，與未刺激細(xì)胞相比，細(xì)胞DNA含量顯著增加，表明生長(zhǎng)速度增加(-VEGF對(duì)照與+VEGF對(duì)照比較)。加入上述PKC抑制劑10nM該生長(zhǎng)速度明顯降低。
上述結(jié)果證實(shí)，本發(fā)明公開(kāi)的PKC抑制劑，特別是(S)-3,4-[N,N’-1,1’-((2”-乙氧基)-3”’(O)-4”’-(N,N-二甲氨基)-丁烷)-雙-(3,3’-吲哚基)]-1(H)-吡咯-2,5-二酮，在體外阻止外源和缺氧誘導(dǎo)的VEGF對(duì)視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)的刺激作用。由于VEGF表達(dá)與黃斑變性有關(guān)的新血管形成密切相關(guān)，這些結(jié)果支持使用PKC抑制劑治療黃斑變性。
本發(fā)明的原則、優(yōu)選實(shí)施方案和操作方式已在上面說(shuō)明書(shū)中敘述。但是，本發(fā)明的保護(hù)范圍并不限于此處公開(kāi)的具體細(xì)節(jié)，因?yàn)檫@些細(xì)節(jié)是用來(lái)說(shuō)明，而非限制本發(fā)明。在不偏離本發(fā)明精神的情況下，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行改變和變換。
權(quán)利要求
1．治療腫瘤的方法，包括向需要該治療的哺乳動(dòng)物給予治療有效量的蛋白激酶Cβ同功酶抑制劑。
2．權(quán)利要求1的方法，其中蛋白激酶Cβ同功酶抑制劑為雙吲哚基馬來(lái)酰亞胺或大環(huán)雙吲哚基馬來(lái)酰亞胺。
3．權(quán)利要求1的方法，其中抑制劑為同功酶選擇性，選擇性同功酶選自β-1和β-2同功酶。
4．權(quán)利要求3的方法，其中蛋白激酶C抑制劑具有下列通式或?yàn)槠淇伤幱玫柠}，前體藥物或酯(Ⅰ)
其中W為-O-,-S-,-SO-,-SO2-,CO-,C2-C6亞烷基，取代亞烷基，C2-C6亞鏈烯基，-芳基-，-芳基(CH2)mO-，-雜環(huán)-，-雜環(huán)-(CH2)mO-，-稠合雙環(huán)-，-稠合雙環(huán)-(CH2)mO-,-NR3-,-NOR3,-CONH-或-NHCO-；X和Y獨(dú)立地是C1-C4亞烷基，取代亞烷基，或X,Y和W共同組成-(CH2)n-AA-；R1為氫或可達(dá)4個(gè)任選的取代基，獨(dú)立地選自鹵素，C1-C4烷基，羥基，C1-C4烷氧基，鹵代烷基，硝基，NR4R5，或-NHCO(C1-C4烷基)；R2為氫，CH3CO-,NH2，或羥基；R3為氫，(CH2)m芳基，C1-C4烷基，-COO(C1-C4烷基)，-CONR4R5,-(C=NH)NH2,-SO(C1-C4烷基),-SO2(NR4R5)，或-SO2(C1-C4烷基)；R4和R5獨(dú)立地是氫，C1-C4烷基，苯基，芐基，或與同其相連的N形成飽和或不飽和的5元或6元環(huán)；AA為氨基酸殘基；m獨(dú)立地是0,1,2或3；n獨(dú)立地是2,3,4或5。
5．權(quán)利要求4的方法，其中蛋白激酶C抑制劑具有下列通式或?yàn)槠?br> 其中Z為-(CH2)p-或-(CH2)p-O-(CH2)p-；R4為氫，-SH,C1-C4烷基，(CH2)m芳基，-NH(芳基)，-N(CH3)(CF3),-NH(CF3)或-NR5R6；R5為氫或C1-C4烷基；R6為。
6．權(quán)利要求4的方法，其中蛋白激酶C抑制劑具有下列通式或?yàn)槠淇伤幱玫柠}，前體藥物或酯(Ⅰb)
其中，Z-(CH2)p-；R4為-NR5R6,-NH(CF3)或-N(CH3)(CF3)；R5和R6獨(dú)立地是氫或C1-C4烷基；p為0,1或2；m獨(dú)立地是2或3。
7．權(quán)利要求5的方法，其中蛋白激酶C抑制劑包括(S)-3,4-[N,N’-1,1’-((2”-乙氧基)-3”’(O)-4”’-(N,N-二甲氨基)-丁烷)-雙-(3,3’-吲哚基)]-1(H)-吡咯-2,5-二酮或其可藥用的酸鹽。
8．權(quán)利要求1的方法，其中腫瘤選自毛細(xì)血管成血管細(xì)胞瘤，乳房癌，Kaposi氏肉瘤，成蝕質(zhì)細(xì)胞瘤，血管瘤，嬰兒血管瘤，結(jié)腸癌，成神經(jīng)管細(xì)胞瘤，胃癌，消化道腺瘤，惡性黑素瘤，卵巢癌，非小細(xì)胞性肺癌，前列腺癌，惡性滲漏，腫瘤周邊水腫，膀胱癌，von Hippel Lindau綜合征，腎細(xì)胞瘤，皮膚癌，甲狀腺癌，宮頸癌，肝細(xì)胞瘤，橫紋肌肉瘤和平滑肌肉瘤。
9．權(quán)利要求10的方法，其中腫瘤選自毛細(xì)血管成血管細(xì)胞瘤，乳房癌，Kaposi氏肉瘤，成蝕質(zhì)細(xì)胞瘤，血管瘤，嬰兒血管瘤，結(jié)腸癌，惡性黑素瘤，卵巢癌，非小細(xì)胞性肺癌，前列腺癌，惡性滲漏，腫瘤周邊水腫，膀胱癌。
10．治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的方法，包括向需要該治療的哺乳動(dòng)物給予治療有效量的蛋白激酶Cβ同功酶抑制劑。
11．治療肺水腫的方法，包括向需要該治療的哺乳動(dòng)物給予治療有效量的蛋白激酶Cβ同功酶抑制劑。
12．治療與肺水腫相關(guān)的VEGF刺激的毛細(xì)血管滲透的方法，包括向需要該治療的哺乳動(dòng)物給予治療有效量的蛋白激酶Cβ同功酶抑制劑。
13．治療瘢痕瘤的方法，包括向需要該治療的哺乳動(dòng)物給予治療有效量的蛋白激酶Cβ同功酶抑制劑。
14．治療腕管綜合征的方法，包括向需要該治療的哺乳動(dòng)物給予治療有效量的蛋白激酶Cβ同功酶抑制劑。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了抑制VEGF刺激的內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)(如與腫瘤相關(guān)者)和毛細(xì)血管滲透(如與肺水腫相關(guān)者)的方法,特別是使用β同功酶選擇性PKC抑制劑(S)－3,4－[N,N’－1,1’－((2”－乙氧基)－3”’(0)－4”’－N,N－二甲氨基)－丁烷)－雙－(3,3’－吲哚基)]－1(H)－吡咯－2,5－二酮鹽酸鹽的抑制方法。
文檔編號(hào)A61P29/00GK1233177SQ97196010
公開(kāi)日1999年10月27日 申請(qǐng)日期1997年5月1日 優(yōu)先權(quán)日1996年5月1日
發(fā)明者M·R·吉羅瑟克, L·維格納蒂, D·K·韋斯, L·P·阿伊羅, G·L·金 申請(qǐng)人:伊萊利利公司