專利名稱：生物制品的終末滅菌的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及得自血液和其它生物來源的產(chǎn)品的滅菌。本發(fā)明涉及在海藻糖存在下，和在足以殺死病毒特別是細(xì)小病毒的條件下加熱生物學(xué)活性產(chǎn)品一段時(shí)間。
背景技術(shù)：
從生物學(xué)活性產(chǎn)品中完全除去病毒和其它污染物對種類繁多的治療和預(yù)防產(chǎn)品的生產(chǎn)和使用是必需的。目前使用一些方法。這些方法主要是干熱處理、層析、溶劑-去污劑(SD)處理和巴氏消毒法。這些方法都有缺點(diǎn)并且沒有一個(gè)在消除所有已知的病毒方面成功。也可能有尚未被表征的通過這些方法不能滅活的病毒。關(guān)于綜述參見Cuthbertson等(1991)Blood Separation and Plasma Fractionation,Wiley-Liss,Inc．第385-435頁；Mozen(1993),J.Clin.Apheresis 8:126-130；Ingerslev(1994)Haemostasis 24:311-323；Dorner等(1993)VirologicalSafety Aspects of Plasma Derivatives,Brown編輯，Dev.Biol.Stand.,Basel,Karger，第81卷，第137-143頁；Mannucci(1993)Vox Sang.64:197-203；和Hamman等(1994)Vox Sang.67:72-77。
種類繁多的具有治療效用的產(chǎn)品是得自諸如血漿和細(xì)胞系的生物來源。在美國大多數(shù)用于分級分離的血漿是在遍及全國分布的收集中心通過血漿除去法獲得的。該中心在美國和歐洲提供商業(yè)的分級分離產(chǎn)品。每年從大約一千三百萬捐贈(zèng)中收集大約九百萬升血漿。紅十字會(huì)增加大約800,000升到這個(gè)數(shù)目中。
可以將來自人類血漿的產(chǎn)品劃分為幾組白蛋白產(chǎn)品、免疫球蛋白、冷不溶球蛋白、凝結(jié)產(chǎn)品和蛋白酶抑制劑。所述白蛋白產(chǎn)品也稱為Ⅴ部分產(chǎn)品，主要用來在諸如燒傷或出血性休克的休克疾病中恢復(fù)膠體滲透壓，在這些疾病中，液體喪失是一個(gè)基本問題。
所述免疫球蛋白或“γ球蛋白”是從Ⅱ部分分離的，且包含代表血漿庫來源的抗體的混合物。用于被動(dòng)免疫的許多超免疫球蛋白是從具有高水平保護(hù)性抗體的供體血漿分離的。所述冷不溶球蛋白包括血纖蛋白原和von Willebrand氏因子。
所述凝結(jié)產(chǎn)品包括分別用于血友病A和B的替代治療的抗血友病因子Ⅷ和因子Ⅸ復(fù)合物。制備了活化形式的稱為抗抑制劑凝結(jié)復(fù)合物的因子Ⅸ復(fù)合物并用于治療具有因子Ⅷ抑制劑的病人。所述蛋白酶抑制劑包括αl蛋白酶抑制劑，也稱為αl抗胰蛋白酶，它用于治療先天性缺陷。抗凝血酶Ⅲ也是導(dǎo)致血栓形成并發(fā)癥的先天性缺陷的抑制劑。
其它體液是治療產(chǎn)品的來源。例如，以前從再生障礙性貧血病人的血液或尿中純化紅細(xì)胞生成素。美國專利第4,677,195號。高純度的白蛋白也得自人胎盤。Grandgeorge和Veron(1993)Virological SafetyAspects of Plasma Derivatives,Brown編輯，Dev.Biol.Stand.,Basel,Karger，第81卷，第237-244頁?，F(xiàn)在在轉(zhuǎn)基因羊的奶中生產(chǎn)重組蛋白是一個(gè)商業(yè)的事實(shí)。
現(xiàn)在大量的治療產(chǎn)品得自表達(dá)重組蛋白的細(xì)胞培養(yǎng)物。所述細(xì)胞培養(yǎng)物一般在動(dòng)物或人血清存在下生長。所述產(chǎn)品得自這些細(xì)胞或細(xì)胞培養(yǎng)上清液，因此包含來自培養(yǎng)基或細(xì)胞自身的病毒。這些獲得的產(chǎn)品包括但不限于集落刺激因子、單克隆抗體和其衍生物、生長因子，諸如紅細(xì)胞生成素、白細(xì)胞介素。生長因子單獨(dú)代表數(shù)百萬美元的工業(yè)。關(guān)于綜述參見Erikson(1991)Sci.Am.,Feb.1991第126-127頁。
雖然得自細(xì)胞培養(yǎng)物的蛋白的病毒污染風(fēng)險(xiǎn)比與血漿產(chǎn)品相關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)小得多，但是當(dāng)涉及細(xì)胞時(shí)總是有這種病毒污染的風(fēng)險(xiǎn)。由于這個(gè)原因，為了滅活病毒將諸如單克隆抗體的產(chǎn)品經(jīng)受熱處理。而且，加入人血清白蛋白(HSA)以穩(wěn)定重組蛋白的制劑是通常的做法。
臨床關(guān)注的主要血液運(yùn)載的病毒是乙型肝炎和丙型肝炎病毒以及HIV和HTLV逆轉(zhuǎn)錄病毒。至于血液衍生物，HTLⅥ和Ⅱ以及巨細(xì)胞病毒(CMB)似乎與細(xì)胞相關(guān)，并且因此在無細(xì)胞產(chǎn)品中不存在危險(xiǎn)。
當(dāng)發(fā)現(xiàn)新的病毒時(shí)，要改變滅活方法以適應(yīng)它們。例如，人免疫缺陷病毒(HIV)經(jīng)受得住因子Ⅷ的標(biāo)準(zhǔn)加工的發(fā)現(xiàn)需要改變要求加入HSA的方法，以在新的、更嚴(yán)格的條件下穩(wěn)定該產(chǎn)品。Mozen(1993)。
在血漿部分中滅活HIV和肝炎病毒的方法是公知的。如以上描述，在HSA的存在下在60℃加熱10小時(shí)滅活HIV。在因子Ⅷ和因子Ⅸ的制劑中通過在凍干狀態(tài)下在80℃加熱72小時(shí)發(fā)現(xiàn)非甲、非乙肝炎(NANBH)被滅活。英國血友病中心的研究小組，即監(jiān)視通過濃縮物傳遞病毒的指導(dǎo)者(1988)Lancet Oct.8，第814-816頁。
在最近幾年，已鑒別出幾種輸血傳播的疾病，這些疾病雖然從公共健康觀點(diǎn)來說不常見，但是對血漿和血漿衍生物以及細(xì)胞產(chǎn)品的使用具有真實(shí)的和潛在的沖擊。這些包括細(xì)小病毒(B19)的傳播。這些病因?qū)W因子似乎抵抗目前用于病毒滅活的方法。Sherwood(1993)Brown編輯Virological Safety Aspects of Plasma Derivatives,Brown編輯，Dev.Biol.Stand.,Basel,Karger，第81卷，第25-33頁。
目前使用的病毒滅活方法也可能引起獲得的生物學(xué)產(chǎn)品的生物學(xué)活性的改變。所述產(chǎn)品的免疫原性尤其與滅菌處理可能誘導(dǎo)蛋白伸展和/或聚集有關(guān)。例如，已發(fā)現(xiàn)因子Ⅷ濃縮物顯示FⅧ活性的證據(jù)，一步法比二步法的效力更高、更快產(chǎn)生FVa和增加較低分子量的多肽。病毒滅活方法也可能誘導(dǎo)非-FⅧ成分的改變，而這些改變可能部分導(dǎo)致這些濃縮物的某些的免疫抑制活性。Barrowcliffe(1993)Virological Safety Aspects of Plasma Derivatives,Brown編輯，Dev.Biol.Stand.,Basel,Karger，第81卷，第125-135頁。
在頻繁暴露于生物學(xué)來源產(chǎn)品的病人中在體內(nèi)和離體均已發(fā)現(xiàn)在免疫系統(tǒng)功能方面的值得注意的變化。在HIV陰性的病人中，當(dāng)通過它們的對刺激的應(yīng)答和根據(jù)它們的細(xì)胞周轉(zhuǎn)(turnover)的標(biāo)志物評價(jià)時(shí)，變化包括免疫活性細(xì)胞的數(shù)目和功能下降。在當(dāng)慢性病毒疾病存在時(shí)，這些改變很可能發(fā)生。而且因子濃縮物的變性同種蛋白雜質(zhì)和其它污染物也可能導(dǎo)致免疫抑制。參見Ingerslev(1994)綜述。
人類細(xì)小病毒是最近發(fā)現(xiàn)的因子，給予的編碼名為B19。Cossart等(1975)Lancet 1:72-73。它是一個(gè)非常小(24nm)的單鏈DNA病毒，具有一個(gè)非常簡單的蛋白外殼，但是沒有脂質(zhì)包膜。它導(dǎo)致1-2周的短暫的病毒血癥，但是能獲得非常高的每ml至少1012病毒顆粒循環(huán)病毒滴度。雖然細(xì)小病毒正常情況下引起經(jīng)常沒有臨床表現(xiàn)的相對小病，引起稱為第五病或傳染性紅斑的輕度風(fēng)疹樣疹，但是它也能引起更嚴(yán)重的反應(yīng)。細(xì)小病毒感染骨髓干細(xì)胞，而這可在有先存在的、潛在的貧血的病人中導(dǎo)致嚴(yán)重的、危及生命的疾病。作為急性造血阻斷的結(jié)果的再生障礙危象可能在有先天性溶血性貧血和免疫缺陷狀態(tài)的病人中發(fā)生。細(xì)小病毒也在懷孕婦女導(dǎo)致胎兒水腫。因此細(xì)小病毒對那些接受血漿來源的治療劑的病人，特別是在那些有止血障礙的病人中代表感染的危險(xiǎn)。值得注意的是，盡管使用有效的殺病毒方法和層析除去，但該病毒仍通過某些濃縮物傳播，不僅有細(xì)小病毒傳播的危險(xiǎn)，而且由于可能存在其它具有同樣特征的病原性病毒。
有溶血疾病的兒童的一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)細(xì)小病毒在尚未熱處理的血漿衍生物中快速感染。在一項(xiàng)研究中，用熱處理因子Ⅷ濃縮物的一小組兒童(N=9)沒有被細(xì)小病毒感染。Williams等(1990)Vox Sang.58:177-181。然而，其它人已發(fā)現(xiàn)熱處理的產(chǎn)品確實(shí)傳播細(xì)小病毒。Corsi等(1988)，Med.Virol.25:151-153。不象肝炎和HIV，細(xì)小病毒在個(gè)體血漿捐贈(zèng)中檢測不到，并且因此存在于庫存的血漿中。
如上所述，各種處理都是計(jì)劃用于或正用于在生物學(xué)來源的治療產(chǎn)品中病毒的滅活。關(guān)于綜述參見Soumela(1993)Trans.Med.Rev.Ⅶ:42-57。通過均用來減少病毒負(fù)載的分配步驟和滅活步驟的結(jié)合獲得最終的產(chǎn)品。
通常使用的熱處理有幾種。對白蛋白產(chǎn)品常用的是在溶液中加熱。這種方法換句話說稱為巴氏消毒法。在諸如辛酸鹽或色氨酸鹽的少量穩(wěn)定劑存在下，通過將液體樣品在60℃加熱至少10小時(shí)滅活病毒。然而，這個(gè)方法不適合其它產(chǎn)品，因?yàn)榇蠖鄶?shù)蛋白在這些條件下變性。已顯示巴氏消毒法可滅活種類繁多的病毒，包括HIV、HBV、HCV、HAV、HSV、脊髓灰質(zhì)炎病毒CMV、腮腺炎病毒、麻疹病毒和風(fēng)疹病毒。Nowak等(1993)Virological Safety Aspects of PlasmaDerivatives,Brown編輯，Dev.Biol.Stand.,Basel,Karger，第81卷，第169-176頁；和Soumela(1993)。在這些研究中，沒有檢測細(xì)小病毒。而且，用巴氏消毒凝結(jié)因子的使用與新抗原的形成有關(guān)。Ingerslev(1994)。
當(dāng)凍干、不穩(wěn)定蛋白耐受高至68℃的溫度時(shí)進(jìn)行干躁產(chǎn)品的加熱。包括在60℃加熱的較早方法用于滅活肝炎病毒。如參見美國專利第4,456,590號。然而，這些條件不足以滅活HIV，如病毒通過純化的凝結(jié)因子傳播證實(shí)的。也發(fā)現(xiàn)在68℃處理72小時(shí)的產(chǎn)品不安全。Soumela(1993)。最近，已用更高的溫度和更長的時(shí)間如80℃72小時(shí)來保證肝炎病毒和HIV的滅活。如參見Knevelman等(1994)Vox Sang.66:89-95。然而，大多數(shù)不穩(wěn)定的生物學(xué)活性，特別是生物藥物的活性不能經(jīng)受暴露于這種極端溫度/時(shí)間條件下。這個(gè)方法的另一個(gè)缺點(diǎn)是關(guān)于細(xì)小病毒的滅活的經(jīng)常不能預(yù)料的結(jié)果。Santagostino等(1994)Lancet 343:798；和Yeed等(1995)Lancet345:794。
病毒的溶劑/去污劑(SD)滅活依賴于有脂質(zhì)包膜病毒的膜的破裂。通過結(jié)構(gòu)破裂或細(xì)胞受體識(shí)別位點(diǎn)的破壞，使該病毒為非感染性病毒。雖然大多數(shù)人類病原病毒有脂質(zhì)包膜，但是細(xì)小病毒和HAV沒有，并且通過這種方法不能被滅活。關(guān)于綜述參見Wieding等(1993)Ann.Hematol.67:259-266。該SD方法在許多國家使用。Horowitz等(1993)Virological Safety Aspects of Plasma Derivatives,Brown編輯，Dev.Biol.Stand.,Basel,Karger，第81卷，第147-161頁。在一個(gè)相關(guān)的方法中，將脂質(zhì)用于滅活有脂質(zhì)包膜的病毒。Isaacs等(1994)Ann.NY Acad,Sci.724:457-464。
已開發(fā)了或正在開發(fā)一些其它方法。例如，通過將血漿暴露于組合的9-丙酸內(nèi)酯和紫外線進(jìn)行血漿的冷滅菌。然而，這個(gè)方法降低不穩(wěn)定蛋白的活性。已提出的各種化學(xué)處理包括補(bǔ)骨脂素和UVA、BPD-MA和光的使用，雖然這些方法可能限于有脂質(zhì)包膜病毒的滅活。也已發(fā)現(xiàn)辛酸鹽和亞氯酸鈉可殺病毒。已確定的各種物理分離方法包括層析、冷乙醇分級分離、細(xì)孔膜和全氟化碳乳液。Lawrence(1993)Virological Safety Aspects of Plasma Derivatives,Brown編輯，Dev.Biol.Stand.,Basel,Karger，第81卷，第191-197頁；Burnouf(1993)同前，第199-209頁；Teh(1993)Vox Sang 65:251-257；Lebing等(1994)VoxSang.67:117-124；DiScipio(1994)Prot.Exp.Purif 5:178-186；Morgenthaler和Omar(1993)Virological Safety Aspects of plasmaDerivatives,Brown編輯，Dev.Biol.Stand.,Basel,Karger，第81卷，第185-190頁；Erickson(1992)Sci.Am.9月第163-164頁；和McCreath等(1993)J.Chromatog.629:201-213。
在血漿蛋白的生產(chǎn)中確定成功的病毒滅活需要具備三個(gè)先決條件。首先，生產(chǎn)程序必須盡可能完全地減少。第二，對加指示劑(spiking)實(shí)驗(yàn)必須選擇相關(guān)的檢測病毒。第三，必須就感染性病毒正確分析產(chǎn)生的樣品。這種檢測方法的詳細(xì)描述例如參見Hifenhaus等(1993)Brown編輯，Virological Safety Aspects of Plasma Derivatives,Dev.Biol.Stand.,Basel,Karger，第81卷，第117-123頁。這些指南已伴隨本文。
海藻糖(α-D-吡喃葡糖-α-D-吡喃葡糖苷)是一種天然產(chǎn)生的、非還原二糖，它起初被發(fā)現(xiàn)與某些可以干燥而不損傷、并且當(dāng)重新水化時(shí)能重活的植物和動(dòng)物中的脫水損傷的保護(hù)有關(guān)。海藻糖以二水合物的形式市售。已顯示海藻糖在脫水過程中防止蛋白、病毒和食品的變性方面有用。參見美國專利第4.891,319；5,149,653；5,026,566號；Blakeley等(1990)Lancet 336:854-855；Roser(1993)BioPharm.4:47-53；Colaco等(1992)Bio/Tech.10:1007-1011；和Roser等(1991年7月)Trends in Food Sci.and Tech.166-169；Colaco等(1992)Biotechnol.Internat 345-350；Roser等(1993年5月)New Scientist，第25-28頁。海藻糖二水合物以優(yōu)良生產(chǎn)工藝(GMP)級的結(jié)晶制劑使用。制備脫水、無水形式的海藻糖的方法在歐洲專利公布第600730號中描述。該方法涉及在晶種的存在下加熱海藻糖糖漿劑并回收無水海藻糖。
在諸如細(xì)菌、酵母、真菌、昆蟲和無脊椎動(dòng)物的種類不同的動(dòng)物和植物種中廣泛發(fā)現(xiàn)海藻糖。在許多昆蟲中，它是主要的血液糖。對于人類僅有的主要來源是諸如蘑菇或酵母產(chǎn)品的食物。Madsarovova-Nohejlova(1973)Gastroenterol.65:130-133。
在美國專利第4,879,280號中海藻糖被描述為用于腹膜透析系統(tǒng)，其中記載它作為取代利用葡萄糖的先有技術(shù)系統(tǒng)的幾種二糖的一種。記載海藻糖用于透析系統(tǒng)作為不容易將其分解為葡萄糖并且因此避免增加血液葡萄糖水平的二糖。海藻糖最初也被描述為適用于胃腸外制劑，因?yàn)橥ㄟ^高壓滅菌可將它滅菌，而沒有伴隨傳統(tǒng)的胃腸外制劑棕變。日本專利第6-70718號。
海藻糖是人類飲食的普通成分，可得到其代謝的資料。經(jīng)口消化后，海藻糖原封不動(dòng)通過胃腸道而不被吸收，因?yàn)閮H僅單糖能通過腸上皮。Ravich和Bayless(1983)Clin.Gast.12:335-356。通過海藻糖酶將海藻糖代謝為兩個(gè)分子的葡萄糖。Sacktor(1968)Proc.Natl.Acad,Sci.USA 60:1007-1041。海藻糖是大多數(shù)哺乳類機(jī)體(包括人類)的正常組分，并且在人血清、淋巴細(xì)胞和肝中已鑒定，但是基本上位于腸道的刷狀緣和腎近端小管。Belfiore等(1973)Clin.Chem.19:447-452；Eze(1989)Biochem.Genet.27:487-495；Yoshida等(1993)Clin.Chim.Acta215:123-124；和Kramers和Catovsky(1978)Brit.J.Haematol.38:4453-461。海藻糖是人和動(dòng)物腸道的一種膜結(jié)合蛋白。Bergoz等(1981)Digestion 22:108-112；Riby和Galand(1985)Comp.Biochem.Physiol.82B:821-827；和Chen等(1987)Biochem.J.247:715-724。
本文引用的所有參考文獻(xiàn)都通過引用結(jié)合到本文中。
本發(fā)明的說明書本發(fā)明涉及產(chǎn)品特別是得自生物來源的治療產(chǎn)品的滅菌方法，以及通過所述方法獲得的組合物。所述方法包括在足以對該產(chǎn)品提供熱穩(wěn)定性的量的海藻糖的存在下干燥該產(chǎn)品，并且將該干燥的樣品以一定的溫度和足以大體上滅活病毒的持續(xù)時(shí)間暴露于加熱條件中。最好是，該加熱條件足以滅活非脂質(zhì)包膜病毒。所述干燥方法是任何本領(lǐng)域公知的方法，包括環(huán)境干燥條件(包括噴霧干燥和真空干燥)和凍干。該加熱條件覆蓋了寬范圍的溫度和加熱時(shí)間的組合。
本發(fā)明還包括通過所述方法獲得的組合物。這些組合物包含穩(wěn)定的生物學(xué)產(chǎn)品，而不包含可檢測的感染性病毒，特別是細(xì)小病毒。
本發(fā)明的最佳實(shí)施方式如本文詳細(xì)描述的，有大量的血液來源的生物制品的終末滅菌方法。這些方法在本領(lǐng)域是公知的，如本文引用的參考文獻(xiàn)，并且不需要詳細(xì)描述。雖然諸如抗體親和層析的嚴(yán)格的純化方法可能產(chǎn)生無病毒的生物制品，但是尚沒有發(fā)現(xiàn)任何商業(yè)上可行的方法能始終如一地提供無感染性病毒、特別是無非脂質(zhì)包膜病毒的產(chǎn)品。此外，為了提供無感染性病毒的產(chǎn)品而增加滅菌條件的嚴(yán)格性具有減低產(chǎn)品活性和/或增加產(chǎn)品的免疫原性的缺點(diǎn)。
除了血液來源的產(chǎn)品，還有大量的可從本文提供的滅菌方法中獲益的生物學(xué)活性產(chǎn)品。這些包括但不限于重組產(chǎn)生的蛋白、天然分離的蛋白、抗體、酶、細(xì)胞因子和生長因子以及諸如鎮(zhèn)痛劑、麻醉劑、抗催吐藥、抗生素、化療劑、激素維生素和類固醇的藥學(xué)活性分子。
要求保護(hù)的方法也適用于任何無菌導(dǎo)入個(gè)體的物質(zhì)。這些包括但不限于藥物、抗生素、顯象劑的診斷試劑。重要的是，在將待給予的產(chǎn)品不穩(wěn)定時(shí)，例如頭孢菌素、治療抗體和紅細(xì)胞生成素，本發(fā)明提供在使用前可重水化的穩(wěn)定的、干燥的、無菌組合物。海藻糖特別適合于可注射的、不熔等的藥物，因?yàn)樗ㄟ^暴露在血流中的海藻糖酶斷裂成2個(gè)葡萄糖分子。該葡萄糖可以引起血糖水平小的、瞬時(shí)增加，但是這幾乎沒有臨床影響。
本發(fā)明包括需要無菌給予個(gè)體的產(chǎn)品的終末滅菌方法。該方法的步驟包括獲得含該產(chǎn)品和足以對該產(chǎn)品基本熱穩(wěn)定的量的α-D-吡喃葡糖基-α-D-吡喃葡糖苷(海藻糖)的干燥樣品；以及在足以基本上滅活病毒的溫度和持續(xù)時(shí)間(最好是在滅活非脂質(zhì)包膜病毒的加熱條件下)加熱該干燥的樣品。該干燥的樣品還可包含適當(dāng)?shù)木彌_液、輔助劑等。最好是以再水化時(shí)產(chǎn)生合適濃度的量。
該產(chǎn)品可以得自多種材料。最好是，該產(chǎn)品得自任何已知的生物來源，包括但不限于血液、血漿、血清、胎盤、奶、尿、細(xì)胞培養(yǎng)和細(xì)胞培養(yǎng)上清液。此外，該產(chǎn)品可以是通過化學(xué)合成或酶促合成或利用重組DNA技術(shù)合成衍生的。這些材料的制備方法和所述產(chǎn)品的分離方法是本領(lǐng)域公知的。
通常，從血液、血漿和血清分離或獲得的產(chǎn)品包括但不限于白蛋白產(chǎn)品、免疫球蛋白、凝結(jié)產(chǎn)品和蛋白酶抑制劑。白蛋白產(chǎn)品包括但不限于HSA、冷不溶球蛋白和血纖蛋白原。免疫球蛋白包括但不限于抗破傷風(fēng)、百日咳、乙型肝炎、Rho(D)、水痘帶狀皰疹和狂犬病的抗體。凝結(jié)產(chǎn)品包括擔(dān)不限于抗血友病因子Ⅷ、因子Ⅸ復(fù)合物和活化的因子Ⅸ復(fù)合物。蛋白酶抑制劑包括但不限于α-1蛋白酶抑制劑、α-1抗胰蛋白酶和抗凝血酶Ⅲ。也可得到其它來源的這些產(chǎn)品，例如，白蛋白可得自胎盤來源。
該生物來源是細(xì)胞培養(yǎng)物或細(xì)胞培養(yǎng)上清液時(shí)，所述產(chǎn)品包括但不限于集落刺激因子、單克隆抗體和其衍生物以及生長因子。典型的生長因子包括但不限于天然獲得的和重組的紅細(xì)胞生成素、細(xì)胞因子和白細(xì)胞介素。
當(dāng)該產(chǎn)品是需要無菌給予的藥物時(shí)，所述產(chǎn)品包括但不限于鎮(zhèn)痛劑、麻醉劑、化療劑、激素和疫苗。鎮(zhèn)痛劑包括但不限于嗎啡、苯佐卡因、哌替啶和杜冷丁，麻醉劑包括但不限于布比卡因、阿曲庫銨和維庫銨。
化療劑包括但不限于放射性同位素、諸如長春堿、長春新堿和硫酸長春地辛的長春堿類(vinca alkaloids)、阿霉素、硫酸搏來霉素、卡鉑、順鉑、環(huán)磷酰胺、阿糖胞苷、甲氮咪胺、放線菌素、柔紅霉素鹽酸鹽、阿霉素鹽酸鹽、鬼臼乙叉甙、氟尿嘧啶、鹽酸氮芥、抗瘤氨酸、巰基嘌呤、氨甲喋呤、絲裂霉素、鄰氯苯對氯苯二氯乙烷、戊制菌素、溴丙哌嗪、鹽酸甲基芐肼(procarbaze)、鏈脲霉素、紫杉醇、硫鳥嘌呤和尿嘧啶氮芥。
適合的激素包括但不限于雌激素、睪酮、孕酮及其合成的類似物。典型的疫苗包括單抗原亞基疫苗和多抗原亞基疫苗、以及殺死的細(xì)菌和病毒制劑和癌抗原。典型的抗菌素包括但不限于頭孢菌素和氨基糖苷。
該方法包括獲得干燥樣品的第一步。可以用多種方法干燥樣品。這些方法包括但不限于風(fēng)干、真空干燥、噴霧干燥和凍干。這些方法在本文提出的實(shí)施例中有詳細(xì)的舉例說明，而且在本領(lǐng)域是公知的。參見美國專利第4,891,319；5,026,566和5,149,653號。
所述樣品通常以溶液或懸浮液制備，并且包括該產(chǎn)品、足以提供該產(chǎn)品熱穩(wěn)定性的量的海藻糖、以及任何其它一般的添加劑，如適當(dāng)?shù)木彌_液、輔助劑等。通常，海藻糖的存在量為溶液重量的1-50％然而，該海藻糖可以更稀或更濃。如果不太稀，則干燥時(shí)間可能起阻礙作用，而如果更濃，則該溶液可能變得粘稠。產(chǎn)品、海藻糖和任何添加劑的精確起始濃度將需要憑經(jīng)驗(yàn)確定，但已知本文提供的實(shí)施例，則這完全在本領(lǐng)域技術(shù)人員的技術(shù)范圍內(nèi)。優(yōu)選該產(chǎn)品和海藻糖的濃度使得在干燥后產(chǎn)生的產(chǎn)品活性的損失不到大約30％。更優(yōu)選它不到15％的活性損失，而最優(yōu)選它不到10％的損失。
一旦獲得了干燥的樣品，則將其經(jīng)受加熱條件，其溫度和持續(xù)時(shí)間足以滅活病毒。通常，該干燥的樣品在80加熱72小時(shí)以滅活有脂質(zhì)包膜病毒，并在90℃加熱72小時(shí)進(jìn)一步滅活非脂質(zhì)包膜病毒。加熱和加熱持續(xù)時(shí)間的最佳組合將根據(jù)經(jīng)驗(yàn)確定。已知本文提供的實(shí)施例，則這種確定在本領(lǐng)域技術(shù)人員的技術(shù)范圍內(nèi)。通常，通過或用待滅活的病毒或用具有相似物理特征的病毒給測試樣品加指示劑確定所述最佳條件。因?yàn)?log10的滴度下降是喪失，是管理機(jī)構(gòu)對病毒滅活/除去方法的要求，所以4log10的加指示劑病毒的滴度喪失通常被認(rèn)為是“滅活”。
該方法基本導(dǎo)致該產(chǎn)品的熱穩(wěn)定。優(yōu)選該方法導(dǎo)致該產(chǎn)品的活性損失不到大約30％。更優(yōu)選該方法導(dǎo)致該產(chǎn)品的活性損失不到15％。最優(yōu)選該方法導(dǎo)致該產(chǎn)品的活性損失不到10％。
該方法提供穩(wěn)定性高并能長時(shí)間貯存的干燥樣品。該貯存穩(wěn)定性涉及滅菌產(chǎn)品的殘留水分。優(yōu)選該方法產(chǎn)生殘留含濕量不到4％的干燥樣品。更優(yōu)選該殘留含濕量不到2％。最優(yōu)選該殘留含濕量大約為0.8-1％。殘留含濕量可以通過多種方法測定，包括但不限于各種差熱分析、熱解重量分析法和費(fèi)歇爾庫侖滴定。
加熱溫度和時(shí)間的范圍變化很寬，該領(lǐng)域的知識(shí)和本文提供的實(shí)施例，則對特定樣品的最佳時(shí)間可以根據(jù)經(jīng)驗(yàn)確定。本文提出的結(jié)果表明，在大約80℃加熱大約72小時(shí)是有效的，在90℃加熱20小時(shí)也同樣有效?？梢允褂酶L的時(shí)間周期和/或更高的溫度，同時(shí)潛在地伴隨著產(chǎn)品活性的喪失。
最好是，該方法導(dǎo)致4log10污染病毒感染性的降低。對進(jìn)行這種檢測的一些方法是公知的。其中許多在上文中引用，而其它一些在本領(lǐng)域是公知的。由于有脂質(zhì)包膜病毒對熱處理的抗性不如非脂質(zhì)包膜病毒，所以確定非脂質(zhì)包膜病毒感染性的喪失表明所有的有脂質(zhì)包膜病毒均已被滅活。該非脂質(zhì)包膜病毒包括但不限于甲肝病毒和細(xì)小病毒。最好是，該非脂質(zhì)包膜病毒為細(xì)小病毒。
本發(fā)明也包括通過本發(fā)明要求保護(hù)的方法獲得的組合物。所述組合物沒有可檢測的病毒并且貯存非常穩(wěn)定。另外，在加工過程中治療產(chǎn)品的變性和化學(xué)降解的減少導(dǎo)致對該產(chǎn)品接受者的免疫反應(yīng)的發(fā)生率下降。
該組合物最好為單劑量形式，特別是對于諸如鎮(zhèn)痛劑和化療劑。單劑量形式可以通過將原始溶液或懸液等分在合適的容器中并且單獨(dú)加工該容器而產(chǎn)生。最好是，這種等分和加工是自動(dòng)化的。或者，該材料可以以多于一個(gè)劑量的分批量加工，并且將干燥的產(chǎn)品分成單劑量。本發(fā)明因此包括要求保護(hù)的組合物的單劑量形式。
對諸如HSA的產(chǎn)品，分批量方式是最好的?？杉庸ご笈恳源罅刻峁┥逃谩１景l(fā)明因此還包括大批量形式的要求保護(hù)的組合物。
提供以下實(shí)施例是為了說明，但不限制要求保護(hù)的本發(fā)明。
實(shí)施例1不同的糖對細(xì)小病毒感染性和堿性磷酸酶活性的影響比較將在50％海藻糖溶液中的1mg/ml堿性磷酸酶貯液配制于含50mM碳酸氫胺和2％HSA的25mM HEPES緩沖液中，該貯液用106.5TCID 50/ml犬細(xì)小病毒加指示劑。該貯液用106.5TCID 50/ml犬細(xì)小病毒加指示劑。采用FTS干燥器或Labconco凍干器，將250μl等份的該加指示劑制劑在3ml Wheaton玻璃藥用管制瓶中真空干燥或凍干。
對于真空干燥，將架子的溫度最初設(shè)置在30℃，而當(dāng)架子溫度增加至60℃時(shí)，真空以分段方式減少至30mTorr，并將干燥再進(jìn)行12-16小時(shí)。對于凍干，將所述樣品通過以每分鐘5℃降低架子溫度至-40℃凍干，并在真空減少至10mTorr前使管制瓶完全凍1小時(shí)并將樣品在-40℃干燥40小時(shí)。然后將該架子溫度以每分鐘0.05℃升高至+20℃，并將樣品在+20℃干燥3小時(shí)，最后將該架子溫度以每分鐘0.05℃升高至40℃并將樣品在+40℃再干燥2小時(shí)。將管制瓶在真空下蓋好并將樣品保持在4℃作為干燥對照。對于終末滅菌，將管制瓶在Heraeus干燥箱中于80℃處理72小時(shí)或于90℃處理20小時(shí)。評價(jià)Log10細(xì)小病毒活性的減少和堿性磷酸酶活性減少％。
通過滴定細(xì)胞培養(yǎng)物分析細(xì)小病毒，通過豬血紅細(xì)胞的凝集反應(yīng)確定終點(diǎn)。簡短地說，用無菌蒸餾水和在Eagles極限必需維持培養(yǎng)基(EMEM)中制備的10倍稀釋系列，將干燥的樣品以其起始體積重建。通過胰酶消化融合瓶的細(xì)胞，制備含5％胎牛血清的EMEM中的A72細(xì)胞懸液，并且將含2-5×103細(xì)胞/ml的1ml細(xì)胞懸液等分到24孔細(xì)胞培養(yǎng)板的孔中。將100μl每個(gè)稀釋度的管制瓶樣品接種到細(xì)胞培養(yǎng)板的4個(gè)平行測定孔中，并將所述板在37℃5％CO2的環(huán)境中培養(yǎng)14天。
14天后，從每個(gè)孔收集細(xì)胞培養(yǎng)基并用1％豬血紅細(xì)胞測試血凝素活性。用對在病毒感染性分析中終點(diǎn)定量的Karber公式計(jì)算以log10TCID 50/ml表示的病毒滴度，即Karber公式=-log稀釋度區(qū)間(dilution interval)-(陽性試驗(yàn)總和)-0.5。
用商用試劑Sigma fastTM堿性磷酸酶底物分析，通過比色分析堿性磷酸酶。簡短地說，對樣品和標(biāo)準(zhǔn)堿性磷酸酶制劑(1 mg/ml)制備雙倍稀釋系列，在EIA板中的100 T1樣品中加入100 T1底物，并在黑暗處孵育30分鐘。用與6軟板讀板儀軟件包聯(lián)接的titertek多路掃描儀(multiscan)在405 nm讀出顯色，并從對應(yīng)于標(biāo)準(zhǔn)曲線線性部分的吸收值計(jì)算所述樣品的活性。將干燥的對照確定為100％活性，在從這些值計(jì)算處理樣品活性減少的百分比。
對于所有的病毒分析，通過從干燥對照的log10TCID 50/ml值中減去log10TCID 50/ml回收的病毒，計(jì)算處理樣品的log10滴度的減少。結(jié)果顯示于表1。在表1中，≥表示該病毒在該分析的檢測水平以下，RIT表示“滴度降低”，HSA代表人血清白蛋白，*表示在干燥對照中的細(xì)小病毒的log10TCID 50/ml=6.5，**表示在干燥對照中堿性磷酸酶活性=100％，GPS代表吡喃葡萄糖基山梨醇，而n.d.代表沒有做。全部實(shí)施例部分和表中的縮寫均相同。
表1

實(shí)施例2通過在海藻糖中真空干燥以消除細(xì)小病毒感染性而不喪失生物學(xué)活性的終末滅菌；溫度和時(shí)間的影響將在50％海藻糖溶液中的1mg/ml堿性磷酸酶貯液配制在含50mM碳酸氫胺和2％HSA的25mM HEPES緩沖液中，該貯液用106.5TCID 50/ml犬細(xì)小病毒加指示劑。用達(dá)到30 mTorr真空和60℃架子溫度的最終操作參數(shù)的手控程序，在FTS干燥器中將250μl等份的制劑在30ml管制瓶中干燥。將管制瓶在真空下蓋好并將樣品保持在4℃作為干燥對照。
對于終末滅菌，將管制瓶在Heraeus干燥箱中于80℃處理72小時(shí)或于90℃處理最多至144小時(shí)。在細(xì)小病毒活性中評價(jià)Log10減少，而在堿性磷酸酶活性中評價(jià)％減少。如實(shí)施例1描述通過滴定細(xì)胞培養(yǎng)物，接著進(jìn)行豬血紅細(xì)胞的血凝集分析細(xì)小病毒。用實(shí)施例1中描述的Karber公式以log10TCID 50/ml計(jì)算病毒滴度。如實(shí)施例1描述用商用試劑Sigma fastTM堿性磷酸酶底物分析，通過比色法分析堿性磷酸酶。
得到的結(jié)果的總結(jié)示于表2，表2描述在80℃72小時(shí)或90℃144小時(shí)的終末滅菌后細(xì)小病毒滴度的log10降低和堿性磷酸酶活性降低％。在表2中，*代表在干燥對照中l(wèi)og10TCID50/ml細(xì)小病毒=6.5。**代表在干燥對照中堿性磷酸酶活性=100％，而≥代表在該分析的檢測限制以下。
表2

<p>實(shí)施例3通過在海藻糖中真空干燥消除有包膜和非包膜病毒感染性而不喪失生物學(xué)活性的終末滅菌在這個(gè)實(shí)驗(yàn)中，將與實(shí)施例1相同的制劑用3種不同的病毒制劑加指示劑脊髓灰質(zhì)炎病毒；細(xì)小病毒(分別含RNA和DNA的非包膜病毒)；和麻疹病毒(包膜RNA病毒)。如先前或以下描述評價(jià)病毒滴度的log10降低和堿性磷酸酶活性降低％。用細(xì)胞病分析評價(jià)脊髓灰質(zhì)炎病毒。簡短地說，用無菌蒸餾水和在EMEM中制備的10倍稀釋系列，將干燥的樣品以其起始體積重建，將100μl稀釋液接種到含Vero細(xì)胞融合單層的96孔細(xì)胞培養(yǎng)板的5個(gè)平行測定孔中。將所述板培養(yǎng)7天并通過用光學(xué)顯微鏡觀察所述孔記錄病毒誘導(dǎo)的細(xì)胞病作用。然后又用對病毒感染性分析中的終點(diǎn)定量的Karber公式以log10TCID 50/ml回收的病毒計(jì)算病毒滴度。對于所有的病毒分析，通過從干燥對照的log10TCID 50/ml值中減去log10TCID 50/ml回收的病毒，計(jì)算處理樣品滴度的log10降低。
用空斑分析檢測麻疹病毒的感染性。簡短地說，用無菌蒸餾水和在EMEM中制備的10倍稀釋系列，將干燥的樣品以其起始體積重建。將200μl每種稀釋液接種到含Vero細(xì)胞融合單層的6孔細(xì)胞培養(yǎng)板的雙份平行測定孔中。在37℃病毒吸收到細(xì)胞1小時(shí)后，對每個(gè)孔加入2ml上層培養(yǎng)基(含1％羧甲基纖維素和5％胎牛血清的EMEM)。然后將所述板在37℃5％CO2環(huán)境中培養(yǎng)7天。通過龍膽紫染色肉眼觀察在細(xì)胞單層中噬菌斑形成誘導(dǎo)的病毒。
計(jì)數(shù)噬菌斑，并通過計(jì)算每ml空斑形成單位將回收的病毒定量，每ml空斑形成單位即PFU/ml=空斑的數(shù)目×稀釋系數(shù)×5。對于所有的病毒分析，通過從干燥對照的log10PFU/ml值中減去log10PFU/ml回收的病毒，計(jì)算處理樣品滴度的log10降低。獲得的結(jié)果表示在表3，表3顯示在80℃72小時(shí)或90℃20小時(shí)的終末滅菌后，脊髓灰質(zhì)炎病毒、細(xì)小病毒和麻疹病毒滴度的log10降低和在堿性磷酸酶活性降低％。在表3中，*代表在干燥對照中l(wèi)og10TCID 50/ml脊髓灰質(zhì)炎病毒=4.5；**代表在干燥對照中l(wèi)og10PFU/ml麻疹病毒=5.10；***代表在干燥對照中l(wèi)og10TCID 50/ml細(xì)小病毒=6.5；****代表在干燥對照中堿性磷酸酶活性=100％；而≥代表在該分析的檢測極限以下。
表3

實(shí)施例4通過在海藻糖中真空干燥消除來自血液制品的細(xì)小病毒而不喪失生物學(xué)活性的終末滅菌將血纖蛋白原(組分1,1-S型，Sigma Chemical company)溶解在含10％檸檬酸鈉和15％氯化鈉的或者10％海藻糖或者25％蔗糖的溶液中，并將所述溶液離心以除去任何不溶的材料，將蛋白濃度調(diào)節(jié)至血纖蛋白原終濃度為5mg/ml。將血纖蛋白原貯液用106.5TCID 50/ml犬細(xì)小病毒加指示劑，并將12ml等份的血纖蛋白原溶液分裝到5mlWheaton藥用玻璃管制瓶中，將所述樣品在FTS干燥器中真空干燥或在Labconco凍干機(jī)中凍干。對于真空干燥樣品，將干燥器架預(yù)冷至10℃并將真空減至30,000 mTorr。然后將架溫升至40℃并將真空減至30,000 mTorr 2分鐘、20,000m mTorr 2分鐘和10,000 mTorr 20分鐘。然后將該真空升至30,000 mTorr 5分鐘，然后再減至30mTorr，并所述樣品在60℃架溫干燥過夜。對于凍干樣品，將所述樣品以5℃/min冷凍至-40℃，在-40℃保持16小時(shí)，然后將該架溫升至-35℃并將樣品在10mTorr真空下干燥80小時(shí)。將該架溫升至25℃并將樣品在10mTorr真空下再干燥5小時(shí)。所有的管制瓶在真空下密封，通過在Heraeus爐中于90℃加熱20小時(shí)或48小時(shí)樣品將該終末滅菌的樣品熱滅菌。
將管制瓶重建，測定總的可溶蛋白和可凝結(jié)蛋白。對血纖蛋白原的凝結(jié)分析是國立生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)研究所對凝血酶凝結(jié)分析的修改。簡短地說，通過向血纖蛋白原溶液加入凝血酶，將血纖蛋白原樣品和標(biāo)準(zhǔn)凝結(jié)，并通過在7M尿素中溶解凝塊并在280nm定量吸收，測定凝塊中蛋白的濃度。
加入3ml水時(shí)，除了已暴露于90℃/20小時(shí)的血纖蛋白原/蔗糖制劑，所有的制劑均容易重建。已暴露于90℃/20小時(shí)的凍干血纖蛋白原/蔗糖制劑顯示明顯的褐色。蛋白分析顯示，重建時(shí)大多數(shù)的蛋白已溶解(～90％)，除了在血纖蛋白原/蔗糖90℃/20小時(shí)的情況中，管制瓶顯示很少的可溶蛋白。該凝結(jié)分析顯示對于可溶的蛋白，加入凝血酶時(shí)～95％的蛋白凝結(jié)。獲得的結(jié)果總結(jié)示于表4，表4顯示可凝結(jié)的血纖蛋白原和細(xì)小病毒滴度的log10降低。表4

雖然為說明和理解的目的，通過描述和實(shí)施例已在某種程度上詳細(xì)地描述了前述發(fā)明，但是那些本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)明顯看出可以實(shí)施某些變化和修改。因此，不應(yīng)當(dāng)認(rèn)為所述描述和實(shí)施例限制了本發(fā)明的范圍，本發(fā)明的范圍由所附的權(quán)利要求描述。
權(quán)利要求
1．用于無菌給予的生物學(xué)活性產(chǎn)品的終末滅菌方法，包含以下步驟(a)獲得含該產(chǎn)品的干燥樣品和一定量的α-D-吡喃葡糖-α-D-吡喃葡糖苷(海藻糖)的干燥產(chǎn)品，所述海藻糖的量足以對該產(chǎn)品提供基本熱穩(wěn)定性；以及(b)加熱該干燥樣品，加熱溫度和持續(xù)時(shí)間足以基本上滅活感染性病毒。
2．按照權(quán)利要求1的方法，其中所述產(chǎn)品得自血液并選自白蛋白產(chǎn)品、免疫球蛋白、凝結(jié)產(chǎn)品和蛋白酶抑制劑。
3．按照權(quán)利要求2的方法，其中所述的白蛋白產(chǎn)品選自HSA、冷可溶球蛋白和血纖蛋白原。
4．按照權(quán)利要求2的方法，其中所述的免疫球蛋白選自抗破傷風(fēng)、百日咳、肝炎、皰疹、水痘帶狀皰疹和狂犬病的抗體。
5．按照權(quán)利要求2的方法，其中所述的凝結(jié)產(chǎn)品選自抗血友病因子Ⅷ、因子Ⅸ復(fù)合物和活化的因子Ⅸ復(fù)合物。
6．按照權(quán)利要求2的方法，其中所述蛋白酶抑制劑選自α-1蛋白酶抑制劑和抗凝血酶Ⅲ。
7．按照權(quán)利要求1的方法，其中所述的生物學(xué)活性產(chǎn)品得自選自血液、血漿、血清、胎盤、奶、尿、細(xì)胞培養(yǎng)物和細(xì)胞培養(yǎng)上清液的生物來源。
8．按照權(quán)利要求7的方法，其中所述的生物來源是細(xì)胞培養(yǎng)物或細(xì)胞培養(yǎng)上清液，并且該產(chǎn)品選自集落刺激因子、單克隆抗體和其衍生物以及生長因子。
9．按照權(quán)利要求7的方法，其中所述的生物來源是細(xì)胞培養(yǎng)物或細(xì)胞培養(yǎng)上清液，并且該產(chǎn)品是重組體。
10．按照權(quán)利要求8的方法，其中所述的生長因子選自紅細(xì)胞生成素、細(xì)胞因子和白細(xì)胞介素。
11．按照權(quán)利要求1的方法，其中所述生物學(xué)活性產(chǎn)品是鎮(zhèn)痛劑。
12．按照權(quán)利要求11的方法，其中所述的鎮(zhèn)痛劑選自嗎啡、苯佐卡因、哌替啶和杜冷丁。
13．按照權(quán)利要求1的方法，其中所述的生物學(xué)活性產(chǎn)品是麻醉劑。
14．按照權(quán)利要求13的方法，其中所述的麻醉劑選自布比卡因、阿曲庫銨和維庫銨。
15．按照權(quán)利要求1的方法，其中所述的生物學(xué)活性產(chǎn)品是化療劑。
16．按照權(quán)利要求15的方法，其中所述的化療劑選自放射性同位素、長春堿類(vinca alkaloids)、阿霉素、硫酸搏來霉素、卡鉑、順鉑、環(huán)磷酰胺、阿糖胞苷、甲氮咪胺、放線菌素D、柔紅霉素鹽酸鹽、阿霉素鹽酸鹽、鬼臼乙叉甙、氟尿嘧啶、鹽酸氮芥、抗瘤氨酸、巰基嘌呤、氨甲喋呤、絲裂霉素、鄰氯苯對氯苯二氯乙烷、戊制菌素、溴丙哌嗪、鹽酸甲基芐肼(procarbaze)、鏈脲霉素、紫杉醇、硫鳥嘌呤和尿嘧啶氮芥。
17．按照權(quán)利要求1的方法，其中所述的生物學(xué)活性產(chǎn)品是激素。
18．按照權(quán)利要求17的方法，其中所述的激素選自雌激素、睪酮、孕酮及其合成的類似物。
19．按照權(quán)利要求1的方法，其中所述的生物學(xué)活性產(chǎn)品是疫苗。
20．按照權(quán)利要求19的方法，其中所述的疫苗選自單抗原亞基疫苗和多抗原亞基疫苗，以及殺死的細(xì)菌和病毒制劑和癌抗原。
21．按照權(quán)利要求1的方法，其中所述的干燥樣品是通過選自風(fēng)干、真空干燥、噴霧干燥和凍干的方法獲得的。
22．按照權(quán)利要求1的方法，其中所述的基本熱穩(wěn)定性導(dǎo)致該產(chǎn)品的活性喪失不到大約30％。
23．按照權(quán)利要求22的方法，其中所述的穩(wěn)定性導(dǎo)致該產(chǎn)品的活性喪失不到大約15％。
24．按照權(quán)利要求23的方法，其中所述的穩(wěn)定性導(dǎo)致該產(chǎn)品的活性喪失不到大約10％。
25．按照權(quán)利要求1的方法，其中所述的干燥樣品的殘留含濕量不到大約4％。
26．按照權(quán)利要求25的方法，其中所述的殘留含濕量不到大約2％。
27．按照權(quán)利要求26的方法，其中所述的殘留含濕量不到大約1％。
28．按照權(quán)利要求1的方法，其中所述的加熱溫度是大約80℃，并且加熱的持續(xù)時(shí)間是大約至少72小時(shí)。
29．按照權(quán)利要求1的方法，其中所述的加熱溫度是大約90℃，并且加熱的持續(xù)時(shí)間是大約至少20小時(shí)。
30．按照權(quán)利要求1的方法，其中感染性病毒的基本滅活導(dǎo)致該病毒感染性降低大約104倍。
31．按照權(quán)利要求1的方法，其中所述的滅活導(dǎo)致非脂質(zhì)包膜病毒感染性降低大約104倍。
32．按照權(quán)利要求1的方法，其中所述的非脂質(zhì)包膜病毒選自甲肝病毒和細(xì)小病毒。
33．按照權(quán)利要求32的方法，其中所述的非脂質(zhì)包膜病毒是細(xì)小病毒。
34．按照權(quán)利要求1的方法可獲得的組合物。
35．按照權(quán)利要求34的組合物，其中所述的產(chǎn)品得自血液并選自并選自白蛋白產(chǎn)品、免疫球蛋白、凝結(jié)產(chǎn)品和蛋白酶抑制劑。
36．按照權(quán)利要求35的組合物，其中所述的白蛋白產(chǎn)品選自HSA、冷可溶球蛋白和血纖蛋白原。
37．按照權(quán)利要求35的組合物，其中所述的免疫球蛋白選自抗破傷風(fēng)、百日咳、乙型肝炎、Rho(D)、水痘帶狀皰疹和狂犬病的抗體。
38．按照權(quán)利要求35的組合物，其中所述的凝結(jié)產(chǎn)品選自抗血友病因子Ⅷ、因子Ⅸ復(fù)合物和活化的因子Ⅸ復(fù)合物。
39．按照權(quán)利要求35的組合物，其中所述蛋白酶抑制劑選自α-1蛋白酶抑制劑和抗凝血酶Ⅲ。
40．按照權(quán)利要求33的組合物，其中所述的生物學(xué)活性產(chǎn)品得自選自血液、血漿、血清、胎盤、奶、尿、細(xì)胞培養(yǎng)物和細(xì)胞培養(yǎng)上清液的生物來源。
41．按照權(quán)利要求40的組合物，其中所述的生物來源是細(xì)胞培養(yǎng)物或細(xì)胞培養(yǎng)上清液，并且該產(chǎn)品選自集落刺激因子、單克隆抗體和其衍生物以及生長因子。
42．按照權(quán)利要求41的組合物，其中所述的生物來源是細(xì)胞培養(yǎng)物或細(xì)胞培養(yǎng)上清液，并且該產(chǎn)品是重組體。
43．按照權(quán)利要求41的組合物，其中所述的生長因子選自紅細(xì)胞生成素、細(xì)胞因子和白細(xì)胞介素。
44．按照權(quán)利要求34的組合物，其中所述生物學(xué)活性產(chǎn)品是鎮(zhèn)痛劑。
45．按照權(quán)利要求44的組合物，其中所述的鎮(zhèn)痛劑選自嗎啡、苯佐卡因、哌替啶和杜冷丁。
46．按照權(quán)利要求34的組合物，其中所述的生物學(xué)活性產(chǎn)品是麻醉劑。
47．按照權(quán)利要求46的組合物，其中所述的麻醉劑選自布比卡因、阿曲庫銨和維庫銨。
48．按照權(quán)利要求34的組合物，其中所述的生物學(xué)活性產(chǎn)品是化療劑。
49．按照權(quán)利要求48的組合物，其中所述的化療劑選自放射性同位素、長春堿類、阿霉素、硫酸搏來霉素、卡鉑、順鉑、環(huán)磷酰胺、阿糖胞苷、甲氮咪胺、放線菌素D、柔紅霉素鹽酸鹽、阿霉素鹽酸鹽、鬼臼乙叉甙、氟尿嘧啶、鹽酸氮芥、抗瘤氨酸、巰基嘌呤、氨甲喋呤、絲裂霉素、鄰氯苯對氯苯二氯乙烷、戊制菌素、溴丙哌嗪、鹽酸甲基芐肼、鏈脲霉素、紫杉醇、硫鳥嘌呤和尿嘧啶氮芥。
50．按照權(quán)利要求34的組合物，其中所述的生物學(xué)活性產(chǎn)品是激素。
51．按照權(quán)利要求50的組合物，其中所述的激素選自雌激素、睪酮、孕酮及其合成的類似物。
52．按照權(quán)利要求34的組合物，其中所述的生物學(xué)活性產(chǎn)品是疫苗。
53．按照權(quán)利要求52的組合物，其中所述的疫苗選自單抗原亞基疫苗和多抗原亞基疫苗、殺死的細(xì)菌和病毒制劑以及癌抗原。
54．按照權(quán)利要求34的組合物，其中所述的干燥樣品的殘留含濕量不到大約4％。
55．按照權(quán)利要求54的組合物，其中所述的殘留含濕量不到大約2％。
56．按照權(quán)利要求55的組合物，其中所述的殘留含濕量不到大約1％。
57．按照權(quán)利要求34的組合物，其中所述的非脂質(zhì)包膜病毒選自甲肝病毒和細(xì)小病毒。
58．按照權(quán)利要求57的組合物，其中所述的非脂質(zhì)包膜病毒是細(xì)小病毒。
全文摘要
本發(fā)明涉及生物學(xué)活性產(chǎn)品特別是治療或預(yù)防產(chǎn)品的滅菌方法以及由所述方法獲得的組合物。所述方法包括獲得含足以對該產(chǎn)品提供熱穩(wěn)定性的量的海藻糖的干燥樣品,并且將該干燥的樣品以足以大體上滅活病毒特別是非脂質(zhì)外套包膜病毒的溫度和持續(xù)時(shí)間暴露于加熱條件中。所述干燥方法包括環(huán)境干燥條件和凍干。所述加熱條件包括任何在本領(lǐng)域已知的條件并覆蓋了寬范圍的溫度和加熱時(shí)間。獲得的組合物包含穩(wěn)定的產(chǎn)品,并且不包含可檢測的感染性病毒,特別是細(xì)小病毒。
文檔編號A61L2/00GK1225020SQ97196248
公開日1999年8月4日 申請日期1997年5月14日 優(yōu)先權(quán)日1997年5月14日
發(fā)明者J·坎平加, R·阿爾科克 申請人:廓德倫特控股劍橋有限公司