專利名稱：凝集素組合物及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及凝集素在制備用于控制粘膜細(xì)胞增殖、減輕和/或治療因細(xì)胞損傷劑引起的損傷以及減輕和/或治療代謝性疾病之藥物中的用途，本發(fā)明還涉及含凝集素的組合物和食物，其在醫(yī)藥和非醫(yī)藥領(lǐng)域的用途以及大豆廢棄物，特別是大豆乳清成分在制備上述藥物和組合物中的用途。
凝集素通常是識(shí)別并粘附于特異性糖結(jié)合物結(jié)構(gòu)的來(lái)源于植物，甚至微生物或動(dòng)物的蛋白質(zhì)或糖蛋白。口服的凝集素如菜豆(Phaseolusvulgaris)凝集素、植物凝集素(PHA)對(duì)于大鼠腸是很有效的外源生長(zhǎng)因子，可誘導(dǎo)完全可逆的多胺依賴性小腸增生(Bardocz等，1992)。凝集素迅速與刷狀緣結(jié)合并部分被胞轉(zhuǎn)到循環(huán)中(Pusztai等，1991)。在特定的劑量下，凝集素如PHA會(huì)損傷腸壁，引起腸腔中大腸菌的過(guò)度生長(zhǎng)(Pusztai等，1993)，提高了脂動(dòng)員速率和葡萄糖的氧化作用(Grant等，1987)并顯著降低了骨骼肌中蛋白質(zhì)合成的分級(jí)速率(fractionalrate)(Palmer等，1987；Bardocz等，1992)。因此，通常認(rèn)為凝集素如PHA是營(yíng)養(yǎng)毒素，因?yàn)樵诟呖诜┝肯?，它們可誘導(dǎo)嚴(yán)重的體脂、糖原和肌肉蛋白損失(Pusztai等，1991)并可導(dǎo)致死亡。
在人和其他動(dòng)物中，對(duì)口服凝集素的安全無(wú)毒閾值是未知的。
粘膜細(xì)胞是組成任何粘膜(襯在許多管狀結(jié)構(gòu)中的濕膜)的細(xì)胞。許多是在外環(huán)境與動(dòng)物內(nèi)部器官之間提供保護(hù)層的細(xì)胞。粘膜細(xì)胞的例子包括皮膚的上皮細(xì)胞，消化道內(nèi)層，覆蓋眼睛的組織以及肺和鼻的內(nèi)層。粘膜細(xì)胞的許多疾病都是已知的，包括細(xì)胞分裂加速、減速的疾病，粘膜細(xì)胞受到損傷或失去保護(hù)性外層例如粘膜的疾病。與粘膜細(xì)胞增殖失控有關(guān)的疾病包括皮膚癌，牛皮癬，腸激惹綜合征，炎性腸疾病和粘膜炎。粘膜炎是一種痛苦的消耗性疾病，在該疾病中迅速生長(zhǎng)的上皮和粘膜細(xì)胞受到損傷，外層粘膜層被除去和/或不能被迅速取代。粘膜炎可導(dǎo)致微生物感染，所述微生物存在于例如口腔或腸道中。這種情況被認(rèn)為是癌癥治療的主要副作用。粘膜炎的發(fā)生率和嚴(yán)重程度可隨癌癥治療輪次的增加而增加，并最終影響患者治療的依從性和存活率。
可損傷粘膜(或其他)細(xì)胞并可造成粘膜炎的試劑包括化療劑、放療、化學(xué)物質(zhì)(有機(jī)或無(wú)機(jī)的)、毒素、酸、堿、任何放射源和自由基?；熀头暖?，單獨(dú)使用、同時(shí)使用或與外科手術(shù)結(jié)合使用是治療癌癥的主要方法。化療可使用可直接損傷靶細(xì)胞DNA的細(xì)胞毒性試劑。如果向靶組織即腫瘤施用了足夠劑量的細(xì)胞毒性試劑，DNA的錯(cuò)誤修復(fù)可導(dǎo)致DNA突變、損傷和染色體畸變的積累并最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡。放療使用輻射，該輻射或者可直接損傷靶細(xì)胞DNA，或者利用離子化輻射以產(chǎn)生可裂解DNA鏈之自由基的潛能(Steel,1996)。
癌癥化療的原理是施用細(xì)胞毒性藥物以抑制細(xì)胞分裂，并最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡。由于癌細(xì)胞通常比正常組織生長(zhǎng)迅速，所以預(yù)期細(xì)胞毒性藥物將殺死更多的癌細(xì)胞。但是與放療不同，以使細(xì)胞毒性藥物在全身發(fā)生作用的方式施用所述藥物。嚴(yán)重的副作用，例如對(duì)重要組織包括骨髓的毒性會(huì)限制被施用的細(xì)胞毒性藥物劑量以免殺死患者。與此相似，用輻射治療癌癥不會(huì)區(qū)別癌組織與正常組織。因此，放療的使用是通過(guò)導(dǎo)向輻射而對(duì)癌細(xì)胞誘導(dǎo)最大損傷，同時(shí)避免不可修復(fù)地?fù)p害正常組織之間的一種妥協(xié)。
已經(jīng)開(kāi)發(fā)了許多細(xì)胞毒性藥物并對(duì)癌癥的治療進(jìn)行了評(píng)估。這些藥物作用的主要原理是它們?cè)诩?xì)胞分裂途徑中干擾或抑制關(guān)鍵步驟。主要的靶標(biāo)是DNA復(fù)制、DNA修復(fù)；染色體分離或胞質(zhì)分裂。絕大部分細(xì)胞毒性藥物干擾DNA的合成和復(fù)制。在這類藥物中，5-氟尿嘧啶(5-FU)是最常用的細(xì)胞毒性藥物。通過(guò)加入還原葉酸如亞葉酸鈣還可調(diào)節(jié)5-FU的活性(Isacoff等，1994)。抑制DNA合成和復(fù)制的其他細(xì)胞毒性藥物是已知的，所述藥物導(dǎo)向合成DNA所用的不同脫氧核苷酸，例如阿糖胞苷。含阿糖胞苷的DNA鏈直接抑制DNA聚合酶的活性(Archimund&Thomas,1994)。
第二種主要的細(xì)胞毒性藥物是直接誘導(dǎo)DNA鏈斷裂的藥物，或者抑制DNA斷裂之修復(fù)的藥物。環(huán)磷酰胺是一種直接裂解DNA鏈的藥物(Sparano&Wiernik,1994)。第三種主要的藥物是實(shí)際上破壞微管蛋白裝配和解裝配，由此直接抑制有絲分裂和細(xì)胞分裂的藥物。紫杉烷類化合物如紫杉醇和docetaxel是可將微管蛋白聚合成穩(wěn)定的微管束的藥物。合成的長(zhǎng)春花生物堿例如長(zhǎng)春瑞賓是紡錘體毒素，該毒素通過(guò)抑制微管蛋白組裝成微管來(lái)發(fā)揮其抗腫瘤作用(Dieras&Pouillart,1995)。
目前的放療實(shí)踐使用各種輻射源以治療癌癥。最常用的輻射源是X射線、γ射線、質(zhì)子或中子源或α或β發(fā)射體。實(shí)踐中，在數(shù)天內(nèi)連續(xù)低劑量的放療可最佳地區(qū)分正常組織和癌組織。但是，該技術(shù)限于使用目前僅對(duì)幾種腫瘤例如甲狀腺癌有效的放射性同位素。在臨床中，大多數(shù)放療技術(shù)使用高劑量輻射，所述輻射在癌組織集中成一束。通過(guò)鉛屏蔽的使用或轉(zhuǎn)動(dòng)患者，盡可能地減少正常組織的接觸，以便使正常組織接受比癌細(xì)胞低的劑量。盡管這種方法可能是有效的，但是，其使用受限于正常組織與輻射的累積性接觸和許多腫瘤對(duì)高劑量輻射有抗性。
本領(lǐng)域熟知單一的細(xì)胞毒性藥物或輻射源可能更適用于某種特定的癌癥。例如順鉑被廣泛地用于睪丸癌，紫杉烷類化合物更適用于乳腺癌，5-FU被廣泛用于結(jié)腸癌。但是單一的藥物治療很少能夠完全治愈癌癥，而且存活率仍低。在多種藥物方案的使用方面已經(jīng)進(jìn)行了一些改進(jìn)(Au等，1996)。
本領(lǐng)域已經(jīng)對(duì)許多化合物使癌癥細(xì)胞對(duì)輻射和化療作用敏感(以便不損傷正常組織)的能力進(jìn)行了評(píng)估。但是，放射致敏劑如維生素K模擬劑磷鈉甲萘醌(Synkavit)和甲萘醌(Menadione)以及保護(hù)劑如含巰基化合物半胱氨酸、半胱胺和Ethyol是非常令人失望的(Denekamp,1996)。
盡管化療和放療是用于癌癥的最廣泛的治療方法，但是存活率受許多因素的限制。關(guān)鍵因素是細(xì)胞毒性藥物或輻射不能區(qū)分正常組織和癌癥組織。在大多數(shù)情況下，不可能提供足夠劑量的細(xì)胞毒性藥物或輻射以可靠地殺死所有癌組織，因?yàn)樗鰟┝繉?duì)于患者也是致死性的?，F(xiàn)有治療方案共有的副作用包括頭發(fā)脫落、骨髓抑制、惡心、嘔吐和腹瀉(Paulsen等，1996)。另外，在將放療用于特別是骨盆區(qū)的情況下，還會(huì)導(dǎo)致胃腸功能發(fā)生改變(Yeoh等，1993)，并會(huì)對(duì)腸造成長(zhǎng)期損傷，從而需要進(jìn)行外科手術(shù)(van Halteren等，1993)。
在過(guò)去10年里，利用造血生長(zhǎng)因子已取得了重要的突破?，F(xiàn)在可以施用較高劑量的細(xì)胞毒性藥物和輻射，然后通過(guò)施用重組生長(zhǎng)因子例如粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子拯救組織例如骨髓和白細(xì)胞(Erkisis等，1996)。所述方法改善預(yù)后和期望達(dá)到的存活率。盡管表皮特異性生長(zhǎng)因子例如表皮生長(zhǎng)因子是已知的，但是腸生長(zhǎng)調(diào)節(jié)的復(fù)雜性使得很難開(kāi)發(fā)有效的腸“拯救”方法(Podolsky,1993)。由于目前沒(méi)有用于腸的所述生長(zhǎng)因子，因細(xì)胞毒性藥物和輻射給胃腸道造成的損傷現(xiàn)在已成為劑量限制。
本發(fā)明利用低劑量凝集素的組織保護(hù)性和代謝效應(yīng)以便保護(hù)和修復(fù)因放療和/或化療損傷的生物材料。在治療如放療和/或化療前，由于凝集素組合物的顯著預(yù)防作用(陽(yáng)性生長(zhǎng)因子)，所以本發(fā)明是特別有利的。
代謝性疾病包括與身體代謝有關(guān)的疾病和/或是代謝結(jié)果的疾病，具體地說(shuō)是肥胖和與肥胖有關(guān)疾病如高血糖(Ⅱ型糖尿病)、心血管疾病、中風(fēng)、胃腸和胃腸相關(guān)的疾病。代謝性疾病需要控制粘膜細(xì)胞的增殖，或者粘膜細(xì)胞增殖的控制也可能與代謝性疾病無(wú)關(guān)。
本領(lǐng)域已知高劑量凝集素對(duì)動(dòng)物的代謝是有害的。例如高劑量凝集素會(huì)干擾甲狀腺，引起胰腺肥大，大腸菌過(guò)度生長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致?tīng)I(yíng)養(yǎng)和生長(zhǎng)不良。本發(fā)明首次描述了口服低劑量凝集素的有益代謝效果。令人驚奇的是，已發(fā)現(xiàn)施用低劑量凝集素可減少身體的脂肪含量，因此可將其用于治療肥胖和非醫(yī)學(xué)性的減肥。
大豆在人類食物中的使用正逐漸增加，大豆蛋白通常在動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)中提供大量的飲食蛋白。不幸的是，由于大豆含有許多抗?fàn)I養(yǎng)物(antinutrient)，主要是凝集素和胰蛋白酶抑制劑，因此含大豆產(chǎn)品之食物的營(yíng)養(yǎng)利用效率低于從化學(xué)組成所預(yù)期的效率(Gupta,1987)，特別是當(dāng)長(zhǎng)期食用(Rackis等，1986)以及與含有大部分大豆抗?fàn)I養(yǎng)物的大豆乳清一起食用時(shí)(Grant等，1986)。通常所持的觀點(diǎn)是如果可以降低大豆產(chǎn)品的抗?fàn)I養(yǎng)作用就可在人和動(dòng)物飲食中更廣泛地使用大豆產(chǎn)品。
通過(guò)以各種熱處理方法為基礎(chǔ)的加工方法，通?？沙ゴ蟛糠执蠖巩a(chǎn)品中的抗?fàn)I養(yǎng)物(Liener,1994)。但是，大部分方法很昂貴并可能導(dǎo)致必需氨基酸的損失和有毒副產(chǎn)品的產(chǎn)生。盡管最終可能會(huì)開(kāi)發(fā)出更便宜且更有效的熱加工方法，但是降低大豆產(chǎn)品之抗?fàn)I養(yǎng)作用的其他方法還包括飲食調(diào)配(diet manipulation)和新喂養(yǎng)方式的設(shè)計(jì)。提供無(wú)抗?fàn)I養(yǎng)物主要副作用的大豆產(chǎn)品，特別是幾乎未被利用的乳清成分可給飼料工業(yè)和動(dòng)物生產(chǎn)者帶來(lái)顯著的經(jīng)濟(jì)效益。
本發(fā)明提供了使凝集素的有益代謝作用達(dá)到最大的食物和飲食策略。具體地說(shuō)，由于降低了抗?fàn)I養(yǎng)成分的副作用而可以利用這些大豆成分。此外，可將低劑量凝集素的有益作用用于提高低營(yíng)養(yǎng)之大豆成分的食物轉(zhuǎn)化。
因此，本發(fā)明的第一個(gè)方面是提供凝集素在制備用于控制粘膜細(xì)胞增殖之藥物中的用途。控制粘膜細(xì)胞增殖包括減輕和/或治療對(duì)粘膜細(xì)胞和/或組織的任何損傷。在本文中，“減輕”指減輕任何損傷或醫(yī)學(xué)疾病至任何程度的任何效果，包括預(yù)防。在本文中，“治療”指失調(diào)、疾病、綜合征、疾病、疼痛或其兩種或多種組合情況的任何緩解。
具體地說(shuō)，本發(fā)明的第一個(gè)方面涉及在減輕和/或治療粘膜炎和/或腸損傷中對(duì)粘膜細(xì)胞增殖的控制。
粘膜細(xì)胞增殖的控制在減輕和/或治療因細(xì)胞損傷劑引起的損傷中是特別有用的。本發(fā)明所有方面的典型細(xì)胞損傷劑包括放療、化療或其組合。在本申請(qǐng)中，術(shù)語(yǔ)“輻射”和“放療”具有相同的含義，它可以是可用于或不用作治療技術(shù)的輻射源。
在放療、化療或其組合治療前、過(guò)程中或之后，本發(fā)明所述第一個(gè)方面在粘膜細(xì)胞增殖的控制中是特別有效的。本發(fā)明是由于凝集素的保護(hù)和修復(fù)能力而達(dá)到目的的。
粘膜細(xì)胞是組成任何粘膜(襯在許多管狀結(jié)構(gòu)和腔中的濕膜)的細(xì)胞。它們中的許多在動(dòng)物的外界環(huán)境和內(nèi)部器官之間提供一個(gè)保護(hù)層。粘膜細(xì)胞/組織包括鼻竇、呼吸道、皮膚、胃腸道以及膽和胰系統(tǒng)。口腔的表面也有一層粘膜。粘膜構(gòu)成上皮的表層，該上皮含有分泌粘液的腺體和下面的結(jié)締組織層和形成粘膜內(nèi)界的粘膜肌層。
就胃腸道細(xì)胞而言，凝集素用于控制粘膜細(xì)胞增殖的用途是特別有用的。所述控制可以是為了胃腸道的功能和/或長(zhǎng)度的提高或?yàn)榱丝刂莆改c細(xì)胞表達(dá)的表面糖蛋白的性質(zhì)和/或密度。在控制粘膜細(xì)胞增殖方面的其他用途包括減輕和/或治療腸疾病如炎性腸疾病和腸激惹綜合征以及減輕和/或治療腸損傷，及在放療、化療或其兩種或多種組合治療前、過(guò)程中或之后修復(fù)和替換粘膜細(xì)胞。
這些控制特征的應(yīng)用包括(a)腸細(xì)胞增殖導(dǎo)致功能腸面積和長(zhǎng)度增加，這對(duì)于例如因外科手術(shù)或事故引起的腸功能損傷是一種有用的治療，和/或(b)控制腸細(xì)胞更新率，這樣可以控制被表達(dá)的表面糖結(jié)合物的性質(zhì)和密度，因?yàn)檫@些會(huì)隨著細(xì)胞老化而逐漸變得更復(fù)雜。由于糖結(jié)合物影響特定的腸特性，例如細(xì)菌附著的傾向，因此，可將凝集素施用看作對(duì)這些特性的治療或預(yù)防性控制。
具體地說(shuō)，可將細(xì)胞增殖的控制用于使小腸營(yíng)養(yǎng)能力提高和/或控制腸細(xì)胞的糖結(jié)合物表達(dá)。所述作用不必是對(duì)疾病，除了令人滿意的醫(yī)學(xué)方面外，可以僅僅是在美容性或功能性方面。
根據(jù)本發(fā)明的第二方面，提供了凝集素在制備用于減輕和/或治療因細(xì)胞損傷劑引起的損傷的藥物中的用途。細(xì)胞損傷劑包括放療、化療或其組合應(yīng)用。具體地說(shuō)損傷包括腸損傷和/或粘膜炎。
對(duì)于本發(fā)明的第一和第二方面，放療源包括，但不限于X-射線、γ射線、質(zhì)子或中子源，α或β放射體或其兩種或多種組合?？蓪⒎暖熍c使用細(xì)胞毒性劑如氨甲蝶呤、順鉑和/或5-氟尿嘧啶的化療聯(lián)用，并且也可在外科手術(shù)過(guò)程中使用。
對(duì)于本發(fā)明的第一和第二方面，化療劑包括任何細(xì)胞毒性劑，包括但不限于如5-氟尿嘧啶、順鉑、阿霉素、氨甲蝶呤、紫杉醇或其兩種或多種試劑的組合。如上所述，可將一種或多種化療劑與放療聯(lián)用和/或在外科手術(shù)過(guò)程中使用。
本發(fā)明特別用于減輕和/或治療對(duì)哺乳動(dòng)物組織，特別是人組織的損傷。本發(fā)明對(duì)于人組織是特別重要的，因?yàn)樵谥委煱┌Y的過(guò)程中需要相當(dāng)多的放療和/或化療。但是本發(fā)明也適用于獸醫(yī)工業(yè)，包括飼養(yǎng)的動(dòng)物和寵物。
本發(fā)明的第一個(gè)方面涉及所有粘膜細(xì)胞和/或組織，包括整個(gè)體內(nèi)的粘膜細(xì)胞和組織以及整個(gè)體外粘膜細(xì)胞和組織，包括分離的粘膜細(xì)胞和組織。本發(fā)明的第二個(gè)方面涉及所有生物學(xué)材料，包括整個(gè)身體和其部分，包括分離的器官和分離的組織，包括粘膜細(xì)胞和組織。本發(fā)明還涉及故意的或非故意的接觸過(guò)任何細(xì)胞損傷劑的材料。
本發(fā)明特別用于對(duì)細(xì)胞損傷劑如放療和/或化療劑特別敏感的生物學(xué)材料。本發(fā)明第一個(gè)方面的生物學(xué)材料包括腸、口腔、鼻、食管、胃、肺、小腸、大腸(包括結(jié)腸和直腸)、上皮組織(如覆蓋眼睛的)的粘膜層以及任何其他粘膜細(xì)胞和/或組織。
本發(fā)明第二方面的所述生物學(xué)材料包括上述所有粘膜細(xì)胞和組織，以及骨髓、脾，所有造血細(xì)胞，血液組織，胸腺、生發(fā)組織、眼組織和睪丸/前列腺組織。腸對(duì)細(xì)胞損傷劑的敏感性與其代謝狀態(tài)有關(guān)。在施用細(xì)胞損傷劑之前和施用過(guò)程中，凝集素的生長(zhǎng)因子作用、特別是對(duì)腸(特別是小腸)的作用被認(rèn)為是對(duì)預(yù)防和/治療效果非常重要的。
可將凝集素分成“毒性”或“無(wú)毒的”。毒性凝集素包括或可將其歸類為2型核糖體失活蛋白(RIP)。它們是含有毒性(A)亞單位和凝集素亞單位(B)的雜合分子，所述毒性亞單位在進(jìn)入細(xì)胞后不可逆地抑制蛋白質(zhì)合成，所述凝集素亞單位促進(jìn)RIP進(jìn)入到細(xì)胞中。2型RIP如蓖麻毒蛋白是已知的對(duì)人最有毒性的物質(zhì)，潛在LD50值低至0.1g/kg體重。在長(zhǎng)期施用后，它們可以不可逆地?fù)p傷哺乳動(dòng)物，最終導(dǎo)致哺乳動(dòng)物死亡。
凝集素與細(xì)胞的結(jié)合有很大的差異。一些結(jié)合弱，而其他的一些結(jié)合很強(qiáng)。強(qiáng)結(jié)合是指當(dāng)將10mg凝集素口服給予大鼠時(shí)，與腸的結(jié)合超過(guò)75％(最高達(dá)100％)。菜豆凝集素是一種強(qiáng)結(jié)合的凝集素。在某些情況下，強(qiáng)結(jié)合可能產(chǎn)生毒性，因此，將這些凝集素稱為是有毒的。
本發(fā)明凝集素包括在天然組合物中的或從中純化(至任何程度)的凝集素，化學(xué)合成的凝集素、修飾的凝集素或其衍生物(天然或合成的)。凝集素衍生物包括多-亞單位凝集素中的一個(gè)或多個(gè)亞單位。用于生產(chǎn)凝集素的方法是本領(lǐng)域已知的，所述生產(chǎn)方法包括從天然來(lái)源中純化凝集素(Pusztai and Palmer,1977；Carvalho,1993)以及如在美國(guó)專利4889842中描述的用生物技術(shù)生產(chǎn)凝集素。
根據(jù)本發(fā)明的第一個(gè)方面，可以使用任何凝集素。許多凝集素是已知的。一種廣泛使用的用于表征凝集素的方法是其糖結(jié)合特性。糖結(jié)合特異性基團(tuán)包括N-乙酰-D-半乳糖胺，N-乙酰-D-甘露糖，N-乙酰-L-巖藻糖，β-乳糖，半乳糖基-β-(1-3)-N-乙酰-D-半乳糖胺，D-葡萄糖，N-乙酰-葡糖胺，N-乙酰-神經(jīng)氨酸。某些凝集素含有一個(gè)以上的糖結(jié)合特異性基團(tuán)。對(duì)于本發(fā)明特別有用的是來(lái)自菜豆、大豆、刀豆、小麥胚芽、蓮花種子、洋蔥、兵豆、番茄、馬鈴薯以及其兩種或多種組合的凝集素。
由于凝集素是蛋白質(zhì)，根據(jù)許多參數(shù)例如熱、酸、堿等，明顯地可將其進(jìn)行去穩(wěn)定/變性。一些凝集素比其他凝集素對(duì)這些影響有更強(qiáng)的抗性。由于凝集素在本發(fā)明(整個(gè))中的用途需要其蛋白質(zhì)特性，因此在凝集素使用前或使用過(guò)程中(例如在胃的強(qiáng)酸條件和下段小腸的溫和堿性條件下)，所述凝集素不會(huì)被完全破壞或變性是很重要的。因此，首先需就用于本發(fā)明的凝集素在加工和/或施用過(guò)程中如何受到影響來(lái)表征所述凝集素。所述表征是標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)，而且本領(lǐng)域技術(shù)人員可以很容易完成。如果本發(fā)明任何方面所需的凝集素已經(jīng)經(jīng)任何方法被變性或去穩(wěn)定，則所述凝集素的濃度就會(huì)發(fā)生變化。
本文已提供的凝集素的濃度是以其通過(guò)變性或去穩(wěn)定不會(huì)有效降低其活性的天然特性為基礎(chǔ)。因此，所提供的凝集素的濃度不是絕對(duì)的，但反映了凝集素的活性。因此，其凝集素活性降低了一半但濃度加倍了的組合物與凝集素的量降低了一半但凝集素活性未改變的組合物是相同的。此外，例如通過(guò)在重組生產(chǎn)中的修飾和/或通過(guò)生產(chǎn)活性已提高的截短突變體，可以提高任何凝集素的活性。有關(guān)凝集素濃度對(duì)活性的考慮也同樣適用于活性提高了的凝集素。所有修飾的凝集素均被本發(fā)明所覆蓋，包括活性提高或降低的凝集素，還包括例如具有全部或修飾活性的截短凝集素單體。
本發(fā)明的凝集素是組織保護(hù)劑。
本發(fā)明的第一個(gè)方面和第二方面涉及藥物的制備，由臨床醫(yī)生最終確定并考慮下列因素的具體劑量方案，例如所使用的凝集素、動(dòng)物類型、年齡、體重、癥狀嚴(yán)重程度和/或正在或?qū)⑹┯玫闹委煼椒ǖ膰?yán)重性等因素，組合物的給藥方法，不利反應(yīng)和/或其它禁忌證。具體確定的劑量范圍可根據(jù)完全被監(jiān)測(cè)之患者的疾病發(fā)展和恢復(fù)情況，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)設(shè)計(jì)的臨床試驗(yàn)來(lái)確定。所述試驗(yàn)可使用逐步升高的劑量方案，所述方案以動(dòng)物中最大耐受劑量的低百分?jǐn)?shù)作為人中的開(kāi)始劑量?？梢詮脑诒疚脑囼?yàn)部分給出的結(jié)果并通過(guò)已經(jīng)外推至人的下列范圍得出有關(guān)劑量范圍的初步指導(dǎo)。
適宜的上限可以是高達(dá)約0.3g/kg體重的凝集素濃度。0.3g/kg體重/天的濃度會(huì)使患者發(fā)生胃腸道不適，但對(duì)于所述患者從疾病例如癌癥中存活下來(lái)的機(jī)會(huì)提高來(lái)說(shuō)，這些癥狀是可接受的。適宜的低限可以是0.0001mg(0.1μg)/kg體重/天左右的凝集素。優(yōu)選的中間劑量濃度包括存在高達(dá)約0.2g,0.15g和0.05g/kg體重/天的凝集素，此后，存在約1mg,0.5mg,0.1mg,0.01mg和0.005mg/kg體重/天的凝集素。可將這些給定濃度中的任何濃度用作上限和/或下限，從而提供各種有用的濃度范圍。就用于給藥的凝集素濃度來(lái)說(shuō)，當(dāng)不用于治療或預(yù)防作用時(shí)，可將凝集素的劑量稍微提高。
在每天的一次或多次“攝取”(“攝取”包括任何形式的給藥)中，可將本發(fā)明所有方面的藥物用于提供所需的凝集素濃度。本發(fā)明的某些方面適于一次攝入高濃度凝集素，而其他方面適于在同一時(shí)期內(nèi)以均勻的或不均勻的間隔多次攝入，但是每次攝入較低的凝集素濃度或等分劑量。
可將用于制備本發(fā)明任何藥物的凝集素與適宜的藥物載體和/或賦形劑結(jié)合。所述載體和賦形劑是本領(lǐng)域熟知的(例如藥物賦形劑手冊(cè)(Handbook of Pharmaceutical Excipients)(1994)第二版，A.Wade/P.J.Weller編，The Pharmaceutical Press,American PharmaceuticalAssociation)。根據(jù)本發(fā)明，特別有用的是使用結(jié)腸藥物傳遞系統(tǒng)或膠囊配制的組合物和/或藥物。
本發(fā)明的第一和第二方面還包括凝集素與細(xì)胞保護(hù)劑聯(lián)用的用途。所述細(xì)胞保護(hù)劑優(yōu)選是放射致敏劑，化學(xué)保護(hù)劑(包括自由基清除劑)，生長(zhǎng)因子或其兩種或多種物質(zhì)的組合。在上述細(xì)胞保護(hù)劑目錄中，下列物質(zhì)是優(yōu)選的放射致敏劑-維生素K模擬劑例如磷鈉甲萘醌或甲萘醌，texaphyrin釓配合物或碘芐胍(([[3-碘-13311)苯基]甲基]胍)；化學(xué)保護(hù)劑-Sulcraphate，半胱氨酸，巰基乙胺，Ethyol,balazipone或多司馬酯；自由基清除劑-WR3689(磷酸二氫2-[[3-甲基氨基)丙基]氨基]乙二醇酯，AD20(2-[[2-甲氧基苯基)乙酰]氨基]-2-丙烯酸或硝基氧抗氧化劑；生長(zhǎng)因子-粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)，粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)，促紅細(xì)胞生成素(EPO)，表皮生長(zhǎng)因子(EGF)，角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子(KGF)，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGFα和β)，任何種類的白細(xì)胞介素包括IL-11和IL-15，胰島素樣生長(zhǎng)因子(IGF)，神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)，血小板衍生的生長(zhǎng)因子(PDGR)，鈴蟾肽，松弛素，降鈣素，初乳衍生的生長(zhǎng)因子(CDGF)，氨氯地平或amoxanox，protegrin，鹽酸匹魯卡品，干細(xì)胞因子(STF)，血小板生成素，青灰因子(SF)，任何一種干擾素，包括干擾素α，或任何一種細(xì)胞因子。
除細(xì)胞保護(hù)劑外，所述藥物可含有一種或多種其他藥物化合物/試劑。具體地講，可包括抗微生物劑?？砂鲈噭┮缘挚垢腥?，例如與粘膜炎、炎性腸疾病、腸激惹綜合征等有關(guān)的二級(jí)感染。
盡管也可以將藥物通過(guò)胃腸外途徑給藥，但優(yōu)選將根據(jù)本發(fā)明任何方面制備的藥物通過(guò)口或直腸給藥(對(duì)于消化道的一個(gè)或多個(gè)部分方便的途徑)。
本發(fā)明第三方面提供了凝集素在制備用于減輕和/或治療代謝性疾病之藥物中的用途。本發(fā)明的第三個(gè)方面還包括凝集素在制備用于減輕體重之藥物中的用途。所述體重減輕不必與疾病(例如代謝性疾病)有關(guān)，而可以純粹是美容目的的體重減輕。所述凝集素可以是本發(fā)明的任何凝集素，所述凝集素最好是來(lái)自大豆或菜豆。
代謝性疾病包括與身體代謝有關(guān)的和/或是身體代謝結(jié)果的任何疾病，具體地講是肥胖癥和與肥胖癥有關(guān)的疾病例如高血糖(Ⅱ型糖尿病)，心血管疾病、中風(fēng)、胃腸疾病和胃腸相關(guān)疾病。代謝性疾病可能需要控制粘膜細(xì)胞增殖，或粘膜細(xì)胞增殖的控制可能與代謝性疾病無(wú)關(guān)。
本發(fā)明第一和第二方面的所有相關(guān)特征均適用于本發(fā)明的第三方面。
凝集素的濃度越高，就可以更快地預(yù)防或治療代謝性疾病。但是，正如本文所討論的，各種因素都可能影響凝集素劑量的優(yōu)選濃度。
根據(jù)本發(fā)明的第四個(gè)方面，提供了含有凝集素的組合物，所述組合物用于控制粘膜細(xì)胞增殖，減輕和/或治療因細(xì)胞損傷劑引起的損傷，減輕和/或治療代謝性疾病，或其兩種或多種情況的組合。本發(fā)明該方面是應(yīng)用特別是以前未知具有醫(yī)用用途的凝集素。本發(fā)明第一、第二和第三的有關(guān)特征也與本發(fā)明的第四個(gè)方面有關(guān)。
根據(jù)本發(fā)明的第五方面，提供了含有凝集素和細(xì)胞保護(hù)劑的組合物。本發(fā)明的所述方面可能與本發(fā)明的第一和/或第二方面有關(guān)，因?yàn)樵摲矫婵梢允歉鶕?jù)本發(fā)明第一或第二方面制備之藥物的一個(gè)實(shí)施方案。因此，上述本發(fā)明第一和第二方面的有關(guān)特征也適用于本發(fā)明的第五個(gè)方面。特別優(yōu)選的組合物是其中凝集素至少被部分純化或分離的組合物。
對(duì)于給藥來(lái)說(shuō)，本發(fā)明第五方面的組合物可以是一種混合制品，或?yàn)橥瑫r(shí)、分開(kāi)或依次使用(或給藥)的組合制品。在組合制品中，可以首先施用所述組合物的凝集素或細(xì)胞保護(hù)劑部分。
本發(fā)明的第五個(gè)方面特別適用于減少或治療因細(xì)胞損傷劑特別是輻射和/或化療引起的損傷。因此，可以在所述組合物中適宜地包含本發(fā)明第一和第二方面所述的可藥用賦形劑和/或載體。如在本發(fā)明第一和第二方面已描述的，所述組合物對(duì)于對(duì)細(xì)胞損傷劑特別是輻射和化療最敏感的生物學(xué)材料最有效。
本發(fā)明一至四方面的所有相關(guān)特征均適用于所述第五方面。
本發(fā)明第六方面涉及制備本發(fā)明第五方面之組合物的方法。所述方法包括將凝集素與細(xì)胞保護(hù)劑混合，任選地與一種或多種成分例如其他細(xì)胞保護(hù)劑、抗微生物劑和/或可藥用賦形劑和/或載體混合?；蛘?，對(duì)于含有同時(shí)、分開(kāi)或依次給藥的不同成分的組合物來(lái)說(shuō)，可將單個(gè)組分與其他成分包括可藥用賦形劑和/或載體分別加以制備。
本發(fā)明的第七個(gè)方面提供了根據(jù)本發(fā)明第一方面控制粘膜細(xì)胞增殖的方法，根據(jù)本發(fā)明第二方面減輕和/或治療因細(xì)胞損傷劑引起的損傷的方法以及根據(jù)本發(fā)明第三方面減輕和/或治療代謝性疾病(包括相關(guān)特征)的方法。一至六方面的相關(guān)特征也適用于本發(fā)明的第七個(gè)方面。該方法包括攝入的凝集素的總食物濃度高達(dá)0.3g/kg體重/天，優(yōu)選0.2/kg體重/天。代謝性疾病可以是上述任何疾病。損傷凝集素可以是上述任何凝集素，優(yōu)選衍生于大豆或菜豆的凝集素(PHA)。
對(duì)于本發(fā)明的所有治療(單獨(dú))方面(即在任何治療、接觸細(xì)胞損傷劑等后僅使用凝集素)，優(yōu)選的凝集素劑量低于0.2/kg體重/天。
根據(jù)本發(fā)明的第八個(gè)方面，提供了含用于2至5天或不確定(長(zhǎng)期)期間之凝集素的食物。本發(fā)明一至七方面的相關(guān)特征也適用于第八方面。所述凝集素可以是上述本發(fā)明第一方面所述的任何凝集素，最佳為衍生于大豆或大豆乳清的凝集素。
本發(fā)明第八方面的食物優(yōu)選含有總量達(dá)0.3g/kg體重/天，優(yōu)選0.2g/kg體重/天的凝集素。還提供了食物補(bǔ)充物，所述補(bǔ)充物使凝集素的總食物攝入量達(dá)到0.3g/kg體重/天，優(yōu)選0.2g/kg體重/天的濃度。所述凝集素可以是上述本發(fā)明第一方面所述的任何一種凝集素，或兩種或多種凝集素的組合。食物凝集素優(yōu)選衍生于大豆和/或菜豆(PHA)。所述食物和/或食物補(bǔ)充物可用于控制本發(fā)明第一方面的粘膜細(xì)胞增殖，用于本發(fā)明第二方面減輕和/或治療因細(xì)胞損傷劑引起的損傷，用于本發(fā)明第三方面減輕和/或治療代謝性疾病或上述兩種或多種情況的組合。所述食物和/或食物補(bǔ)充物也可用于非醫(yī)用目的的體重減輕。
所述食物和/或食物補(bǔ)充物適用于任何動(dòng)物，包括人。
在接著供給一段時(shí)期的高質(zhì)量食物時(shí)，本發(fā)明第八方面的食物是特別有用的。根據(jù)本發(fā)明，可將高質(zhì)量食物定義為可提供動(dòng)物正常生長(zhǎng)所需的所有必需蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物、礦物質(zhì)和維生素的食物。高質(zhì)量食物的必需成分優(yōu)選是最佳比例的。該質(zhì)量食物不應(yīng)含有會(huì)延緩或抑制動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育的任何成分。高質(zhì)量食物的優(yōu)選特征是被攝入的食物可完全轉(zhuǎn)化成身體重量。
在本發(fā)明第八方面的凝集素食物后，優(yōu)選立即或相隔很短的時(shí)間(達(dá)2天)就繼續(xù)供給所述高質(zhì)量食物。所述高質(zhì)量食物對(duì)于達(dá)7天的期間來(lái)說(shuō)是最有用的，對(duì)于達(dá)5天的期間也是有利的。所述食物還可用于長(zhǎng)期(一個(gè)月以上，優(yōu)選一年以上)治療代謝性疾病和美容目的的體重減輕。
當(dāng)與細(xì)胞損傷劑聯(lián)用時(shí)(盡管不需同時(shí)給藥)，最好將飲食中供給凝集素的部分限于5天的時(shí)間，因?yàn)?8-72小時(shí)通常足以完成一個(gè)完整的腸更新循環(huán)并由此可在所述循環(huán)的控制供食部分產(chǎn)生較高的營(yíng)養(yǎng)吸收和利用率。最好將所述循環(huán)的高質(zhì)量供食部分限于約5天的時(shí)間以便對(duì)食物轉(zhuǎn)化效率產(chǎn)生最大的提高。
優(yōu)選將包括供給凝集素時(shí)期、然后是供給高質(zhì)量食物時(shí)期的飲食重復(fù)至少兩次以形成周期性的飲食。可將所述飲食期重復(fù)達(dá)20次，優(yōu)選達(dá)10次，最佳達(dá)6次。
所述周期性的飲食提供了由凝集素施用介導(dǎo)的暫時(shí)的營(yíng)養(yǎng)攝入效率增加。因此，含凝集素和不含凝集素食物的周期性供給，可控制營(yíng)養(yǎng)依賴性狀態(tài)的提高。例如，通過(guò)適宜食物的定時(shí)供給，運(yùn)動(dòng)員可優(yōu)化主要項(xiàng)目的運(yùn)動(dòng)能力。
在用輻射和/或化療進(jìn)行治療前或之后，本發(fā)明第八方面的食物是特別有用的。在這種情形中，當(dāng)與細(xì)胞保護(hù)劑，例如本發(fā)明第一和第二方面所述的那些聯(lián)用時(shí)，所述食物甚至更有效。
本發(fā)明第九方面，提供了大豆廢物的用途，所述廢物包括本發(fā)明任何方面或相關(guān)方面的大豆乳清成分。所述大豆廢物的使用減少了在大豆產(chǎn)品被用作食物前從所述大豆產(chǎn)品中除去凝集素的需求，并有效地利用了低值大豆廢物。
現(xiàn)在通過(guò)大量非限制性實(shí)施例來(lái)說(shuō)明本發(fā)明。所述實(shí)施例涉及附圖，其中
圖1表示用含不同量的植物血球凝集素的食物飼喂10天后，大鼠的干重(實(shí)驗(yàn)1a,b,c)。圖1a為干重對(duì)mg PHA/天，圖1b為相對(duì)干重對(duì)log10(mg PHA/天)。(o，實(shí)驗(yàn)1a;□實(shí)驗(yàn)1b;Δ實(shí)驗(yàn)1c)。
圖2表示在重復(fù)周期中用大豆白蛋白食物，然后用乳白蛋白食物飼喂大鼠的生長(zhǎng)情況與在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中用對(duì)照食物飼喂大鼠時(shí)的生長(zhǎng)情況進(jìn)行比較。還標(biāo)明了大鼠轉(zhuǎn)換到不同食物的時(shí)間和食物攝入情況。
圖3表示施用5-FU和PHA對(duì)鮮重的影響。
圖4表示施用5-FU和PHA對(duì)每日食物攝入的影響。
圖5表示在接受6.75 Gy劑量的輻射后，含凝集素食物在30天后對(duì)動(dòng)物存活的影響。
實(shí)施例材料和方法PHA的純化對(duì)于肥胖癥和化療實(shí)施例，用Pusztai&Palmer(1977)的方法，稍加改進(jìn)(Carvalho,1993)，在Sepharose 4B-胎球蛋白上，通過(guò)親和色譜純化PHA。將菜豆用0.05M硼酸鈉緩沖液(pH8.0)提取，并通過(guò)對(duì)0.033M乙酸鈉緩沖液(pH5.0)透析將其分離成球蛋白和白蛋白。將E-型PHA(紅細(xì)胞凝集)餾分吸附到pH7.6(0.05M Tris-HCl)的Sepharose4B-胎球蛋白上，用含0.5MNaCl的0.05M甘氨酸-HCl緩沖液，pH3.0解吸，然后透析并凍干。對(duì)于L-型(淋巴細(xì)胞凝集)PHA的純化，在通過(guò)Sepharose 4B-胎球蛋白從白蛋白中除去少量E-型PHA后，將未吸附的餾分在含0.1MNaCl的0.005M乙酸鈉-乙酸緩沖液，pH3.8中的磺基丙基陽(yáng)離子交換HPLC柱(TSK SP-5PW,21.5mm×150mm；Anachem GB Ltd)上分級(jí)分離，用程序化的遞增離子強(qiáng)度梯度(0.1-0.5M NaCl)洗脫。最后，通過(guò)在Sephadex G-100上色譜除去低分子量雜質(zhì)，透析和凍干后，回收純的L型PHA?；厥章拭?00g菜豆粉分別為0.32g和0.61gE型和L型PHA。
對(duì)于放療實(shí)施例，如下分離PHA用帶有孔大小為1mm的篩的磨磨碎50克菜豆。加入500ml含0.1g抗壞血酸的0.02M乙酸并在室溫下攪拌30分鐘。用1M氫氧化鈉將pH調(diào)到5.0并將溶液在室溫再攪拌2小時(shí)。4℃將所述溶液放置過(guò)夜，然后以9000rpm離心15分鐘。將0.075g CaCl2加到上清液中，用1M氫氧化鈉將pH調(diào)到9.0。4℃，將上清液再放置過(guò)夜，然后將樣品以3000rpm離心10分鐘。在于胎球蛋白-Sepharose4B親和柱上純化前，將樣品用Tris(pH7.6)透析。用0.05M甘氨酸緩沖液洗脫P(yáng)HA峰，然后在凍干前將PHA餾分用水透析。胰島素試驗(yàn)用雙抗體沉淀技術(shù)(MacRae等，1991)和大鼠胰島素標(biāo)準(zhǔn)物(Incstar Corporation,Stillwater,Min.USA)測(cè)量免疫反應(yīng)性血漿胰島素濃度。5μCi/0.1μg的125I-標(biāo)記的牛胰島素(ref.IM38)是由Amersham International plc(Amersham Bucks)提供的，由MilesScientific(Stoke Poges,Slough)提供用豚鼠產(chǎn)生的抗豬胰島素的抗血清?？?豚鼠豬IgG血清和正常豚鼠豬血清均來(lái)自Scottish AntibodyProduction Unit(Law Hospital,Carluke,Lanarkshire)。血漿葡萄糖用Trinder的自動(dòng)分析儀方法(1967)測(cè)定血漿樣品中葡萄糖的濃縮?？贵w生產(chǎn)按照以前描述的(Hajos等，1995)Harboe-Inglid方法(1973)，用兔生產(chǎn)KTI,BBI,LA抗體。抗SBA抗體從Sigma Chemical Co(英國(guó)公司)獲得。競(jìng)爭(zhēng)性間接ELISA將間接ELISA試驗(yàn)用于定量確定腸樣品中的SBA(Hajos等，1995)。但是，用LA涂覆ELISA平板，用兔抗-LA IgG-型抗體形成免疫復(fù)合物。將結(jié)果表示為胃內(nèi)飼喂劑量的回收物質(zhì)百分比。腸樣品中抗?fàn)I養(yǎng)物的電泳分離按以前所述(Hajos等，1995)，進(jìn)行SDS凝膠電泳，然后轉(zhuǎn)印到硝酸纖維素膜上，并用抗?fàn)I養(yǎng)物的抗原-特異性抗體進(jìn)行免疫染色。實(shí)驗(yàn)食物的組成表1用于肥胖癥和化療實(shí)施例之食物的組成乳白蛋白 菜豆 KB白蛋白(LA) (KB)(KBA)玉米淀粉 373 177 372馬鈴薯淀粉 100 100 100葡萄糖 150 150 150玉米油 150 150 150維生素混合物5050 50礦物質(zhì)混合物5050 50乳白蛋白 12763 102菜豆粉 -260 -菜豆白蛋白 - -26L-甲硫氨酸 -2.1 0.9L-色氨酸- 0.25 0.13硅酸 0.4 0.4 0.4
所有組分均以克/kg食物給出。有關(guān)維生素和礦物質(zhì)混合物的組成參見(jiàn)Carvalho(1993)。
表2用于大豆抗?fàn)I養(yǎng)物實(shí)施例之食物的組成食物1.對(duì)照 2.大豆白蛋白(SBALB)乳白蛋白120 0大豆白蛋白 0110玉米淀粉380 390馬鈴薯淀粉 100 100葡萄糖 150 150玉米油 150 150維生素 50 50礦物質(zhì) 50 50L-色氨酸00.3L-甲硫氨酸 01.2L-苯丙氨酸 01.0L-亮氨酸02.3L-異亮氨酸 02.6L-纈氨酸02.6硅酸0.4 0.4所有組分均以克/kg食物給出。有關(guān)維生素和礦物質(zhì)混合物的組成參見(jiàn)Grant等(1993)。
表3放療實(shí)施例之食物的組成食物10％乳白蛋白 PHA(豆蛋白)乳白蛋白120 90菜豆0 127.5玉米淀粉379.6 280.9馬鈴薯淀粉 100 100葡萄糖 150 150玉米油 150 150維生素 50 50礦物質(zhì) 50 50L-色氨酸 0 0.14L-甲硫氨酸 0 1.07硅酸 0.400.40所有食物組分均g/kg食物給出。菜豆的PHA含量為2.6％。因此，限制每日食物攝入為6克時(shí)，PHA/小鼠的輸入為20mg。維生素混合物的組成硫胺素1000毫克；維生素B6 1000毫克；核黃素100毫克；對(duì)氨基苯甲酸，1000毫克；煙酸3000毫克；泛酸鈣2000毫克；葉酸500毫克；生物素550毫克；肌醇40,000毫克；α生育酚25克；乙酸視黃酯，1150毫克；麥角鈣化醇(D3),1500毫克；維生素B12，2.5毫克；亞硫酸氫鈉甲萘醌，500毫克；氯化膽鹼,100g；玉米淀粉，5000克。施用5-FU將300毫克5-氟尿嘧啶在14毫升蒸餾水中攪拌。緩慢加入1M氫氧化鈉直到5-FU溶解。將溶液配成20毫升的終體積。所述溶液的最終pH為8.3。通過(guò)腹膜內(nèi)注射，將150mg/kg體重的劑量施用給動(dòng)物。注射后，立即給大鼠提供15克的對(duì)照食物，在實(shí)驗(yàn)的其余時(shí)間內(nèi)將食物不受限制地供給動(dòng)物。輻射源鈷60Co槍；共6.75Gy，完全的身體接觸；劑量率0.3Gy/分。實(shí)施例1
對(duì)相同的設(shè)計(jì)，完成三組不同的試驗(yàn)(1a,b,c)。將在19天斷奶的大鼠以貯備食物保持11天，然后用LA-食物飼喂3天(表1)達(dá)到82-84克的起始體重。然后，根據(jù)體重，將大鼠選擇性地分成每5只大鼠一組，在每組中，將大鼠隨機(jī)分配進(jìn)行處理。每天早晨，將每組中的大鼠飼喂6克對(duì)照食物、LA-食物或包含不同水平PHA的LA-食物，以便其每天的PHA攝入在0.65-42mg/大鼠(0.007和0.45g/kg體重)之間。10天后，早晨給大鼠飼喂2克相應(yīng)的食物，并準(zhǔn)確地在2小時(shí)后將其殺死。將腓腸肌切出并漂洗，將尸體和肌肉凍干并稱重。在試驗(yàn)1c中，將尸體磨成粉末并用氯仿-甲醇(2∶1;v/v)提取以進(jìn)行脂確定。
在試驗(yàn)1a,b,c中，對(duì)照組的平均體重非常接近，在23.2-24g之間。用含0-42mg/大鼠/天(0-0.45g/kg體重)PHA的食物飼喂大鼠，以二相性方式減輕了其體重(圖1a,b；表4,5)。甚至在低水平PHA，體重也有很小的減輕(例如4％，以3.5mg/大鼠/天；0.04g/kg體重)，此后，凝集素劑量相對(duì)大量的增加(至約0.32g/kg)僅使體重產(chǎn)生了進(jìn)一步的中度減輕。因此，在低于10毫克PHA/天(0.12g/kg體重)的劑量，平均所有的試驗(yàn)，與對(duì)照相比，平均體重減輕1.14(標(biāo)準(zhǔn)誤差0.25)g(對(duì)照體重的4.9％)。在每日10-27毫克(0.12至0.32g/kg體重)的PHA劑量，有0.64(標(biāo)準(zhǔn)誤差0.21)g(對(duì)照體重的2.7％)的進(jìn)一步減輕。但是，在較高的劑量(0.20-0.45g/kg體重)，所述減輕變得更明顯。從三次獨(dú)立的飼喂試驗(yàn)(實(shí)驗(yàn)1a,b,c)求出相對(duì)干體重(作為零劑量對(duì)照的比例)RBDW與PHA劑量(以mg/天表示)之間的關(guān)系，當(dāng)PHA劑量低于27毫克/天時(shí)，所述關(guān)系為RBDW=0.918(標(biāo)準(zhǔn)誤差0.008)-0.0334(標(biāo)準(zhǔn)誤差0.0062)×log10(劑量PHA/27)高于該P(yáng)HA劑量時(shí)，方程為RBDW=0.918(標(biāo)準(zhǔn)誤差0.008)-0.5138(標(biāo)準(zhǔn)誤差0.0876)×log10(劑量PHA/27)腓腸(骨骼)肌干重的變化與不斷增加的凝集素輸入有相似的趨勢(shì)(表4,5)。與對(duì)照大鼠相比，肌肉重量損失的比例是體重當(dāng)量損失的1.5-2.0倍，但是，在每日的劑量低于10毫克PHA(0.12g/kg體重)時(shí)，身體與肌肉重量比例損失之間的差異不顯著(p＞0.05)。
與身體和肌肉重量的減輕相似，大鼠身體脂含量也隨食物中PHA劑量的增加而減少(表5；試驗(yàn)1c)。但是，從比例上講，脂損失超過(guò)了身體或骨骼肌的損失，盡管對(duì)于所有劑量，所述損失大致保持穩(wěn)定。表4用含不同水平PHA的食物飼喂10天后，大鼠的體重和腓腸肌重量PHA劑量干體重(BDW)腓腸肌干重mg/大鼠/天 g(與對(duì)照相比的損失％) g(與對(duì)照相比的損失％)試驗(yàn)1a0 24.0 -0.184 -2.623.5 2.2 0.183 0.75.221.9 8.7 0.166 9.710.5 22.0 8.5 0.155 15.521.0 22.4 7.0 0.153 16.542.0 20.4 15.2 0.129 29.8SED0.61 0.0074試驗(yàn)1b0 23.2 -0.178 -0.622.7 2.3 0.174 2.11.321.8 6.0 0.161 9.415.0 21.2 8.4 0.151 15.330.0 20.9 10.0 0.143 19.9SED0.35 0.0039每組用5只大鼠測(cè)定所有劑量。表5用含不同水平PHA的食物飼喂10天的大鼠的身體組成(試驗(yàn)1c)PHA劑量mg/大鼠/天 0 3.5 7 14 21 30 42SED干體重(g) 23.222.2 22 22.421 20.6 18.4 0.47(與對(duì)照相比的損失％) - 4.3 5.23.4 9.511.2 20.7腓腸肌干重(克)0.196 0.1880.184 0.185 0.167 0.154 0.134 0.0061(與對(duì)照相比的損失％) - 4.1 6.15.6 14.8 21.4 31.6脂重量(克)4.183.9 3.86 3.563.39 2.82 2.25 0.17(與對(duì)照相比的損失％) - 6.7 7.714.818.9 32.5 46.1總肌肉干重※(克) 9.278.89 8.78.757.97.28 6.39其他干重※※(克) 9.7510.399.46 10.14 9.69 10.46 9.75腓腸肌損失％與脂損失％- 0.61 0.79 0.380.79 0.66 0.69的比率表5的腳注。所有的組每組均有5只大鼠?！鵗MDW是以假設(shè)(ⅰ)腓腸肌干重/TMDW對(duì)于所有處理均是相同的和(ⅱ)對(duì)于對(duì)照組，TMDW/BDW=0.4為基礎(chǔ)而評(píng)估的?！鵒W是從總重量中減去LW和TMSW的和而計(jì)算的。
因?yàn)榇笫髢H僅用含高水平PHA(0.8-1.0g/kg體重)菜豆蛋白食物飼喂會(huì)在數(shù)天內(nèi)死亡，因此，普遍認(rèn)為PHA是營(yíng)養(yǎng)毒素。但是由于PHA對(duì)無(wú)細(xì)菌大鼠無(wú)害，其對(duì)帶有常規(guī)微生物群的大鼠的毒性作用可能是大量大腸桿菌在小腸腔中過(guò)度生長(zhǎng)的結(jié)果，這在低于0.2g/kg時(shí)是可忽略不計(jì)的，但隨PHA水平在食物中的增加而明顯提高并與PHA水平在食物中的增加成正比(Pusztai等，1993)。實(shí)施例1表明在沒(méi)有細(xì)菌過(guò)度生長(zhǎng)的所述低濃度(低于0.2g/kg)下，在含常規(guī)微生物群的大鼠中，PHA的作用很小，因?yàn)樵谂c凝集素接觸10天后，大鼠體重的減輕極小。此外，與在高劑量(0.45g/kg和0.45g/kg以上)觀察到的肌肉萎縮相反，在低于0.10g/kg體重的PHA劑量下，骨骼肌重量的減輕很少并與最終體重的損失成正比(表4,5)。但是，相對(duì)于對(duì)照，脂的比率損失大于肌肉的比率損失，盡管它們之間的比率大致保持穩(wěn)定(表4,5)。因此，凝集素的第一作用是刺激身體脂的分解代謝，因此，低劑量的凝集素可適用于治療代謝性疾病如肥胖癥。實(shí)施例2在實(shí)施例2-5中，檢測(cè)大鼠對(duì)PHA的胰島素反應(yīng)。在實(shí)施例2中，給大鼠飼喂含42mg PHA/天的食物，然后，分別在9和10天，測(cè)量血液胰島素水平。將在19天斷奶的逐個(gè)單獨(dú)安置的雄性Hooded Listerspf(無(wú)特異性病原體)大鼠不受限制地用儲(chǔ)備食物(Special Diet Services,Maner,Cambridgeshire)喂養(yǎng)約14天，然后用對(duì)照食物乳白蛋白食物(LA；表1)限制喂養(yǎng)(8g/大鼠/天)5天。每天喂養(yǎng)大鼠三次；09.00am 2.5g；13.00pm 1.0g和18.00pm 4.5g。在第五天，在9.00-9.30之間給大鼠1.5g LA食物，2小時(shí)后，從尾靜脈收集試驗(yàn)前血樣。用肝素化試管(含26USP單位/試管的25μl肝素溶液)收集血液并在+1℃，用臺(tái)式離心機(jī)離心15分鐘。使用塑料顆粒以幫助將血漿與紅細(xì)胞分開(kāi)；將其分成100μl等份，并于-20℃貯存直到檢測(cè)。然后將大鼠隨機(jī)分成每組13只動(dòng)物組成的兩個(gè)組并單獨(dú)安置。將組1僅用含菜豆的食物(KB-食物；表1)喂養(yǎng)10天(8g食物/大鼠/天；分成3餐，09.00am 2.5g；13.00pm 1g和18.00pm 4.5g)，而將對(duì)照組在相同的條件下用LA食物喂養(yǎng)。在第9天，在早晨喂養(yǎng)1.5g KB食物后整2小時(shí)收集血樣，并在第10天(最后一次)重復(fù)該操作。然后在乙醚麻醉下殺死大鼠，切開(kāi)腹部，從心臟收集其余血液。取出胃腸道和胰腺，用冰冷水迅速漂洗后，將其在液氮中冷凍。將對(duì)照大鼠用相同的方式處理，不同之處是在取血樣前，給大鼠飼喂1.5g LA食物。將血漿冷凍直到用于檢測(cè)胰島素。
將胰腺樣品(約25-50毫克干重)用10毫升酸化乙醇(乙醇∶水∶濃硫酸=96∶18∶2.5；v/v/v)在冷房間中過(guò)夜勻漿，然后在冷的條件下，以1500g離心10分鐘，由此從胰腺(每組6只隨機(jī)選擇的大鼠)中提取胰島素。用胰島素檢測(cè)緩沖液將清澈的上清液稀釋至約1∶200(v/v)，然后將其放在胰島素放射免疫檢測(cè)器中。
用含42mg PHA/大鼠/天(0.45g/kg體重)的KB喂養(yǎng)了10天的大鼠，其血漿胰島素濃度從試驗(yàn)前的2.97(sd0.84)ng/ml顯著地降到該試驗(yàn)第9天的0.36(sd0.05)ng/ml(表6)。在接觸PHA的過(guò)程中，這種下降一直保持著，因?yàn)樵诘?0天取的血樣也相似地降低，為0.23(sd0.06)ng胰島素/ml。相反，在對(duì)照組中，血漿胰島素的水平一直高，在喂養(yǎng)的第9和第10天，分別為3.31(sd0.30)和1.55(sd0.21)ng/ml。表6用含菜豆或乳白蛋白(對(duì)照)的食物喂養(yǎng)了10天的大鼠之胰腺的重量和胰島素含量
KB=菜豆食物L(fēng)A=乳白蛋白食物數(shù)值是每組6只動(dòng)物的平均值±SD。※與乳白蛋白喂養(yǎng)的對(duì)照動(dòng)物有顯著差異(p＞0.01)。
與相應(yīng)喂養(yǎng)的對(duì)照動(dòng)物相比，以最高PHA劑量，用KB食物喂養(yǎng)了10天的大鼠胰腺的絕對(duì)和相對(duì)于重均有顯著增加(表6)。相反，用μg/胰腺或μg/g蛋白質(zhì)表示的胰腺胰島素含量顯著降低。盡管胰島素水平有高顯著性的降低，但是，用KB喂養(yǎng)的動(dòng)物的血漿葡萄糖濃度沒(méi)有顯著改變，對(duì)于處理組和對(duì)照組大鼠，總平均值為1.7(sd0.1)mg葡萄糖/ml。
以前認(rèn)為的高劑量PHA對(duì)身體脂、碳水化合物和蛋白質(zhì)代謝的強(qiáng)分解代謝作用與其降低血漿胰島素水平之間的關(guān)系現(xiàn)已得到證實(shí)(Pusztai,1991)。事實(shí)上，不僅在給大鼠口服PHA10天的過(guò)程中血液循環(huán)中的胰島素水平下降，而且在這些動(dòng)物中，胰腺的胰島素含量也顯著降低。實(shí)施例3使大鼠在19天斷奶，將其分成8-10只大鼠的組并用儲(chǔ)備食物飼喂12天。然后將其隨機(jī)分成兩組(每組13只大鼠)，在實(shí)驗(yàn)的其余時(shí)間內(nèi)單獨(dú)安置，并再用儲(chǔ)備食物喂養(yǎng)8天。在禁食過(guò)夜后，在早晨供給大鼠2克儲(chǔ)備食物，2小時(shí)后收集血樣(試驗(yàn)前樣品)。此后，將大鼠用1毫升KB提取物(50毫克；5-7毫克PHA)胃內(nèi)飼喂，同時(shí)給對(duì)照施用0.01M磷酸緩沖的鹽水(0.9％NaCl；w/v；PBS)。在培養(yǎng)15、60和120分鐘后，從每只動(dòng)物取血樣。單劑量的可溶性KB蛋白質(zhì)樣品使血漿胰島素逐漸下降。從試驗(yàn)前的1.78(sd0.22)ng胰島素/ml血漿降至120分鐘后的1.05(sd0.22)ng/ml，即初值的大約59％(表7)。在對(duì)照大鼠中，在所有時(shí)間點(diǎn)，胰島素水平在試驗(yàn)誤差內(nèi)大致保持恒定[1.76(sd0.42)ng/ml]。表7與菜豆蛋白質(zhì)或純化的E型或L型凝集素急性胃內(nèi)接觸后，大鼠中的相對(duì)胰島素水平(表示為對(duì)照的％)
所述結(jié)果是平均值±SD,※表示平均值有顯著差異100(p＜0.05)。實(shí)施例4用與實(shí)施例3相同的方法完成實(shí)施例4，不同之處是用5毫克E型或L型凝集素的1毫升溶液管飼試驗(yàn)動(dòng)物。將這些凝集素樣品中的一部分用125I標(biāo)記(總量為2.5-3百萬(wàn)cpm)。對(duì)照大鼠接受PBS。按前述在0、15、60和120分鐘時(shí)取血樣。為了測(cè)量傳遞至十二指腸的實(shí)際PHA量，在管飼1或2小時(shí)后殺死的一些大鼠中，測(cè)量胃和小腸洗液的放射性。
在用純E型PHA培養(yǎng)的大鼠中，與用KB蛋白質(zhì)管飼的動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)的相似(表7)，在前60分鐘，試驗(yàn)前的血漿胰島素水平也下降到1.03(sd0.22)ng/ml。但是，在接下來(lái)的60分鐘內(nèi)有輕微的回升，這使得在120分鐘的胰島素水平與試驗(yàn)前的值沒(méi)有顯著差異(p＞0.05)。單劑量的L型PHA也會(huì)使血漿胰島素逐漸降低，但在120分鐘試驗(yàn)過(guò)程中的任何時(shí)間點(diǎn)，所述變化均不顯著(在120分鐘為1.39 sd0.35ng/ml)。凝集素灌胃大鼠的胃排空率減慢，對(duì)于所述兩種PHA來(lái)說(shuō)，沒(méi)有顯著差異(p＞0.05)。用E型，120分鐘后，初劑量的約52％到達(dá)了小腸，而用L型PHA，所述比率稍微高些，約63％。在與PHA和/或KB白蛋白急性接觸后，血漿葡萄糖水平有輕微的下降，從1.6(sd0.2)下降至1.4(sd0.2)ng/ml，但所述下降不顯著(p＞0.05)。
正如用含菜豆蛋白質(zhì)的食物所證明的，含純E或L型PHA的食物能夠降低血清胰島素。因此，降低血清胰島素的作用是由于PHA的直接作用，而不是由于豆蛋白質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)質(zhì)量差。實(shí)施例5將16只大鼠在19天斷奶并單獨(dú)安置，在試驗(yàn)過(guò)程中，用儲(chǔ)備食物喂養(yǎng)15天，然后用LA食物(8克食物/大鼠/天)喂養(yǎng)5天。將12只隨機(jī)選出的大鼠再用含菜豆白蛋白的食物(KBA-食物；表1)喂養(yǎng)3天，使每日的攝入量為約30毫克PHA/大鼠，而4只對(duì)照大鼠繼續(xù)用LA-食物喂養(yǎng)。在第3天的晚上，不用晚餐，用含25毫克PHA的100毫克KBA樣品的1毫升溶液胃內(nèi)管飼飼喂KBA-食物的大鼠，而給對(duì)照大鼠飼喂其LA食物的晚餐部分。此后，不再喂養(yǎng)所述動(dòng)物，直到第二天早晨，給所有動(dòng)物飼喂2克LA-食物以提高其血漿胰島素水平。整2小時(shí)后，取大鼠血樣(試驗(yàn)前樣品)，將用KBA預(yù)喂養(yǎng)的動(dòng)物隨機(jī)選出，分成4組，用20毫克KBA或5毫克E型PHA或5毫克L型PHA凝集素的1毫升溶液管飼所述大鼠，其中所述凝集素中的一部分是125I標(biāo)記的。將4只對(duì)照大鼠用KBA管飼(40毫克；4-6毫克PHA)作為對(duì)照。在120分鐘，取大鼠血樣，將其殺死，取出胰腺并冷凍用于胰島素檢測(cè)。
用含KB白蛋白的食物或?qū)φ帐澄镱A(yù)飼喂的大鼠用單劑量純化PHA同工凝集素胃內(nèi)管飼或用插管施用PHA3天都顯著降低了循環(huán)中的血漿胰島素濃度。對(duì)于E型和L型凝集素來(lái)說(shuō)，試驗(yàn)前
和120分鐘值[(0.15(sd 0.09)ng/ml]之間的胰島素水平差異是顯著的(p＞0.05)。預(yù)飼喂也可以加速胃內(nèi)所施用的E型凝集素的胃排空速率，在前60分鐘內(nèi)，80％的劑量到達(dá)十二指腸。相反，L型凝集素到達(dá)十二指腸仍然很慢，而且在前60后，初始量約50％的PHA仍留在胃中。盡管在用KBA食物(低)預(yù)飼喂的大鼠和用對(duì)照食物(中高)保持的大鼠之間的絕對(duì)胰島素濃度方面有差異，但用KB白蛋白管飼后，在這兩組大鼠中，血漿胰島素降低比例相似。在用KBA食物預(yù)飼喂3天后，胰腺胰島素含量有一點(diǎn)降低，但不顯著，從對(duì)照的58.3(sd10.8)降到42.5(sd8.3)(g胰島素/胰腺)。但是，試驗(yàn)前血漿葡萄糖水平?jīng)]有顯著變化，為約1.6(sd0.2)mg/ml，盡管該值在試驗(yàn)過(guò)程中稍有下降。與PHA接觸3天后，身體和肌肉重量沒(méi)有顯著變化。實(shí)施例6在大鼠與高凝集素含量的大豆乳清短時(shí)間接觸后，通過(guò)研究食物轉(zhuǎn)換效率的提高而用于克服大豆抗?fàn)I養(yǎng)作用的飲食策略將雄性Hooded-Lister大鼠在19天斷奶，在7天內(nèi)使其自由攝取儲(chǔ)備食物(Labsure,Manea,U.K.)，此后將大鼠用LA對(duì)照食物(100g乳清蛋白/kg；表2)不限量地供給3天，然后飼喂6g相同食物/大鼠/天，喂養(yǎng)5天。在所有時(shí)間，水都是可自由得到的。然后將大鼠分成2組，每組5只。試驗(yàn)組的食物含有100g/kg基于SBALB的蛋白質(zhì)(表2)。在整個(gè)試驗(yàn)中，給對(duì)照組大鼠飼喂LA食物，并將LA食物量限于試驗(yàn)大鼠的志愿攝入量。試驗(yàn)設(shè)計(jì)如下(圖2)，開(kāi)始給大豆組飼喂大鼠食物7天，換成LA食物飼喂8天，然后分別用大豆食物飼喂7天和用LA食物飼喂7天。接著，用大豆食物飼喂6天后，用LA食物飼喂20天，最后使大鼠攝取大豆食物5天。在第二天早晨即聯(lián)合飼喂試驗(yàn)第61天，給所有大鼠飼喂2克LA食物，此后，給大豆組胃內(nèi)插管飼喂溶解于2毫升鹽水中的280毫克SBALB，而對(duì)照只接受鹽水。整90分鐘后，用過(guò)量氟烷殺死大鼠并徹底解剖。將胃和小腸取出，并將后者切成10厘米長(zhǎng)的段。將每個(gè)組織的腔用2毫升冰冷蒸餾水清洗，凍干，然后用蒸餾水重溶(1mg干物質(zhì)/100μl)并用于ELISA。將2厘米清洗過(guò)的腸段(來(lái)自幽門(mén)第5-7厘米)用于組織檢查。將所有組織凍干并稱重。將大鼠軀體也凍干并用于確定蛋白質(zhì)和脂含量。將胃和小腸段用0.1MD-半乳糖溶液(5ml/干樣品)勻漿(3次)并將這些提取物用于ELISA。在整個(gè)試驗(yàn)中，每天收集糞便并用于氮的測(cè)定。
在對(duì)照試驗(yàn)中，重復(fù)第一循環(huán)的轉(zhuǎn)換試驗(yàn)，但這次，除SBALB組外，第二組試驗(yàn)大鼠首先用含LD-SBALB代替SBALB的食物飼喂7天，然后用LA食物飼喂8天，同時(shí)整個(gè)15天的試驗(yàn)中，給對(duì)照大鼠飼喂LA食物。在該循環(huán)的兩個(gè)不同部分中將兩組的重量增長(zhǎng)、消化性和食物轉(zhuǎn)換效率與對(duì)照組的值進(jìn)行比較。
ELISA表明，在飼喂試驗(yàn)中所用的制品含38.7g SBA/kg。LD-SBALB含不到4g SBA/kg。在每個(gè)大豆飼喂期末，包括最后一個(gè)，用大豆和LA食物輪流飼喂之大鼠的重量顯著低于相應(yīng)對(duì)照大鼠的重量(表8&9)。但是，在大豆飼喂后的LA食物期，試驗(yàn)組的大鼠的生長(zhǎng)總是快于完全用LA食物保持的對(duì)照大鼠(圖2；表9)。此外，在LA期，試驗(yàn)組的食物轉(zhuǎn)化效率總是顯著高于對(duì)照組的效率(表9)。表8大鼠體重(BW)和組成食物對(duì)照 試驗(yàn)(SBALB)初始BW(g) 88.8±3.5a86.5±2.1a最終BW(g) 283.5±7.5a263.6±7.2b干重(g)111.5±3.0a104.6±3.2b脂(g) 54.1±4.5a51.8±5.5a蛋白質(zhì)(g) 45.7±1.5a44.2±2.1a脂(g/kg干BW) 485.2±33.3a493.8±36a蛋白質(zhì)(g/kg干BW) 410.7±19.9a402.1±25.5a結(jié)果以每組5只大鼠的平均值±SD給出。水平欄中帶有不同上標(biāo)的數(shù)值有顯著性差異(p≤0.05)。表9試驗(yàn)和對(duì)照期內(nèi)，大鼠的重量變化和食物轉(zhuǎn)換效率處理 初始體重(g) 最終體重 食物轉(zhuǎn)化(g/g攝入)試驗(yàn)期大豆或LA食物轉(zhuǎn)換1 1-7天對(duì)照 88.8±3.5a92.2±1.0a0.08±0.02a試驗(yàn) 86.6±2.1a81.7±3.2b負(fù)值b轉(zhuǎn)換2 16-22天對(duì)照 133±3.0a137±2.8a0.06±0.04a試驗(yàn) 129±3.0a120±3.9b負(fù)值b轉(zhuǎn)換3 30-35天對(duì)照 168.5±3.7a174±4.0a0.11±0.08a試驗(yàn) 163.5±3.7a153±5b負(fù)值b轉(zhuǎn)換4 56-61天對(duì)照 282.5±6a283.5±6a0.01±0.08a試驗(yàn) 281.6±5.1a263.6±7.2b負(fù)值b對(duì)照期(LA食物)8-15天對(duì)照 92.2±1a133±3a0.43±0.03a試驗(yàn) 81.7±3.2b129±3a0.49±0.03b23-29天對(duì)照 137±2.8a168.5±3.7a0.38±0.04a試驗(yàn) 120±3.9b163.5±3.7a0.52±0.04b36-55天對(duì)照 174±4a282.5±7.5a0.36±0.02a試驗(yàn) 153±5b281.6±5.1a0.43±0.02b對(duì)于各期間，水平欄中帶有不同上標(biāo)的數(shù)值有顯著性差異(p≤0.05)。
在大豆飼喂期，試驗(yàn)組糞便的重量和氮含量顯著高于對(duì)照大鼠。但是，在LA期，試驗(yàn)組和對(duì)照組大鼠之間的這些糞便值沒(méi)有顯著差異。此外，兩組的脂和蛋白質(zhì)含量以及其在大鼠身體中的濃度都沒(méi)有顯著差異(表8)。
在試驗(yàn)期用LD-SBALB飼喂的大鼠比用SBALB飼喂的大鼠在重量上增加更多，而且食物轉(zhuǎn)化效率更高，但其行為表現(xiàn)仍不如用LA食物飼喂的大鼠(表10)。但是，在對(duì)照期，從LD-SBALB轉(zhuǎn)用LA食物飼喂的大鼠與在循環(huán)周期的LA食物喂養(yǎng)部分用SBALB喂養(yǎng)的大鼠相比，食物的轉(zhuǎn)化效率沒(méi)有明顯提高(表10)。表10凝集素消耗對(duì)增重和食物轉(zhuǎn)化的影響處理 初重(g) 最終重量(g) 食物轉(zhuǎn)化(g/g攝入)試驗(yàn)期，大豆或LA食物對(duì)照 80.8±1.5a86.8±2.0a0.14±0.03aSBALB 80.6±1.1a78.7±0.7b負(fù)值bLD-SBALB 80.1±1.1a83±1.1c0.07±0.03c對(duì)照期(LA食物)對(duì)照 86.8±2a126.8±2.5a0.42±0.03aSBALB 78.7±0.7b126.7±2.7a0.50±0.03bLD-SBALB 83.0±1.1c124.2±2.6a0.43±0.03a對(duì)于各期間，水平欄中帶有不同上標(biāo)的數(shù)值有顯著性差異(p≤0.05)。
對(duì)體內(nèi)器官的影響。用大豆和LA食物交替喂養(yǎng)大鼠61天，對(duì)胃、小腸和大腸、脾、腎、胸腺、肺、心和腓腸肌肌肉的重量沒(méi)有影響。但是，與對(duì)照相比，試驗(yàn)組的胰腺重量顯著高，而肝的重量較低。
可以得出結(jié)論，用含大豆或乳白蛋白的食物于短周期中交替飼喂大鼠的食物轉(zhuǎn)換表明，可以利用SBA或其他凝集素誘導(dǎo)的增生以在飼喂高質(zhì)量食物時(shí)，提高高質(zhì)量營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收和利用。在這種新方法中加工大豆或其他含凝集素食物是不必要的，而且還可以利用含大量凝集素的大豆廢產(chǎn)物或其他含凝集素食物(具體包括在除去用于許多工業(yè)用途的大豆球蛋白后剩余的乳清成分)。實(shí)施例7研究了口服消化的PHA保護(hù)大鼠耐受高劑量化療的能力，特別是其對(duì)腸的組織保護(hù)作用。
將每組由5只大鼠組成的4個(gè)組以精確的食物方案保持7天(表11)。表11化療食物方案處理食物方案1 整個(gè)試驗(yàn)中均用LA食物，不用5-FU2 LA3天，注射5-FU,LA4天3 PHA3天，注射5-FU,LA4天4 PHA3天，注射5-FU,PHA3天，LA1天關(guān)鍵詞LA=乳白蛋白PHA=菜豆凝集素5-FU=5-氟尿嘧啶給預(yù)施用PHA的大鼠(約100克)提供10克含10％乳白蛋白的對(duì)照食物(表1)。通過(guò)管飼法給予每只動(dòng)物在0.9％鹽水中的20毫克PHA。在1000&1700小時(shí)，給大鼠提供兩次對(duì)照食物。將所給所食物量嚴(yán)格限于PHA預(yù)施用動(dòng)物所吃的食物量。如果對(duì)動(dòng)物立即后施用PHA，在注射5-FU兩小時(shí)后，通過(guò)管飼法施用凝集素。給未預(yù)施用或后施用PHA的動(dòng)物通過(guò)管飼法提供1毫升0.9％鹽水。3天后，給3組中的動(dòng)物施用150mg/kg體重的5-FU。每天記錄每只動(dòng)物的體重，然后計(jì)算平均體重。
圖3(另參見(jiàn)下文圖3數(shù)據(jù))說(shuō)明在施用5-FU后，食物對(duì)動(dòng)物體重的影響。在整個(gè)試驗(yàn)中，未處理對(duì)照組中的動(dòng)物以穩(wěn)定的速度生長(zhǎng)(數(shù)據(jù)未給出)。在開(kāi)始失重前，接受5-FU食物后，用乳白蛋白保持的動(dòng)物繼續(xù)生長(zhǎng)2天。由于該組與用PHA預(yù)施用的組(其攝入因PHA在食物中的存在而減少)配對(duì)飼喂，因此，將食物再次不限重地供應(yīng)時(shí)，在5-FU全部發(fā)揮細(xì)胞毒性作用前，對(duì)于其食物攝入有一種補(bǔ)償性增加。在接受5-FU前預(yù)施用3天PHA并用含乳白蛋白的前述食物飼喂的動(dòng)物在接下來(lái)的4天中均能保持穩(wěn)定的體重并表現(xiàn)正常。在剩下的處理組中，在施用5-FU后4天，動(dòng)物有5-10％的失重。
每天記錄每只動(dòng)物的食物攝入量，并計(jì)算平均食物攝入量(下文圖4和圖4數(shù)據(jù))。在預(yù)施用PHA的所有處理組中，在注射5-FU前，動(dòng)物的食物攝入量穩(wěn)定增加。未處理對(duì)照組的動(dòng)物每天的食物攝入量保持穩(wěn)定增加(數(shù)據(jù)未給出)。在接受5-FU給藥后，僅用乳白蛋白食物飼喂的動(dòng)物其食物攝入量減少大約持續(xù)了一天。在接受5-FU后，預(yù)施用PHA3天的動(dòng)物其約7g/天的穩(wěn)定食物攝入量保持了4天。剩余處理組在施用5-FU后，食物攝入量大幅度減少持續(xù)了4天。
在試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，將動(dòng)物殺死并進(jìn)行解剖。記錄每只動(dòng)物之主要器官的干重并計(jì)算平均重量。將每種處理組的胃腸道主要器官的平均干重列于表12中。附圖數(shù)據(jù)附錄圖3 5-FU和PHA施用對(duì)鮮體重(g)的影響<
圖4 5-FU和PHA施用對(duì)每日食物攝入量(g)的影響
表12．7天后，胃腸道主要器官的平均干重(g)處理 胃 小腸 空腸 回腸 盲腸 結(jié)腸1141±6887±28185±1151±8124±4147±62140±7509±5590±8 94±1199±11130±113136±13 840±253 189±37 109±24 114±29 143±244125±6759±318 168±70 91±2493±18117±21關(guān)鍵詞處理，參見(jiàn)表11結(jié)果表明在施用5-FU之前或之后，施用PHA對(duì)胃的干重沒(méi)有什么影響。但是，PHA施用確實(shí)對(duì)小腸干重有影響。如果在食物中僅含有乳白蛋白，小腸會(huì)被5-FU損傷并且使干重降低幾乎50％。但是，在施用5-FU之前(處理組3)或者施用5-FU之前和之后(處理組4)各施用3天PHA，凝集素能夠保護(hù)小腸免受5-FU的損傷，而且小腸的干重與對(duì)照相似。
在小腸內(nèi)，空腸和回腸組織對(duì)5-FU引起的損傷最敏感(表12)。但是，如果在5-FU注射之前或者之前和之后施用PHA，凝集素特別是對(duì)空腸能夠發(fā)揮顯著的組織保護(hù)作用。在施用5-FU前，給動(dòng)物施用3天PHA也對(duì)整個(gè)小腸有顯著的保護(hù)作用(表12)。在施用5-FU之前(處理組3)或者施用5-FU之前和之后(處理組4)施用PHA可以產(chǎn)生最佳的組織保護(hù)作用。該結(jié)果表明，施用的PHA劑量能夠刺激小腸活細(xì)胞的生長(zhǎng)和修復(fù)并提供抵御5-FU細(xì)胞毒作用的保護(hù)作用。
7天后，從動(dòng)物中收集血液并對(duì)關(guān)鍵分子和細(xì)胞組分進(jìn)行分析。結(jié)果列于表13。
表13對(duì)照組和處理組動(dòng)物之關(guān)鍵分子和細(xì)胞組分的分析處理 WBCRBC HGB HCT MCVMCH MCHC PLTno/mm3no/mm3g/100ml g/100mlμm3pgg/100ml no/mm315.5×1036×10312.1 34.2 57.5 20.4 35.4 552×10323×1037.4×10312.7 37.1 50.4 17.3 34.3 274×10332.4×1037.1×10313 34.7 48.7 18.2 37.4 296×10344×1037.4×10313 35.1 47.8 17.7 37.1 321×103注釋處理同表3WBC 白細(xì)胞RBC 紅細(xì)胞HGB 血紅蛋白HCT 血細(xì)胞比容MCV 紅細(xì)胞平均容量MCH 紅細(xì)胞平均血紅蛋白量MCHC 紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度PLT 血小板給飼喂含乳白蛋白之食物的大鼠施用5-FU后，從白細(xì)胞和血小板數(shù)可觀察到預(yù)期的細(xì)胞毒性。與未處理對(duì)照組相比，沒(méi)有一個(gè)處理組對(duì)紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白和血細(xì)胞比容含量、紅細(xì)胞平均容量或血紅蛋白濃度有任何顯著影響。與僅用乳白蛋白處理的組(處理組2)相比，在施用5-FU前施用PHA(處理組3)，對(duì)測(cè)量的參數(shù)沒(méi)有什么影響。相對(duì)于乳白蛋白對(duì)照而言，在施用5-FU之前和之后施用PHA(處理組4)增加了產(chǎn)生的白細(xì)胞數(shù)。
上述結(jié)果表明，施用口服劑量的凝集素相對(duì)于細(xì)胞毒性藥物的時(shí)間可影響所述藥物的血液毒性。實(shí)施例8鑒定預(yù)施用PHA可保護(hù)胃腸道免受5-FU損傷的劑量范圍將3組大鼠(每組5只)喂以標(biāo)準(zhǔn)食物(表1)并每天用200、100和50mg/kg/天PHA管飼，飼喂3天。每天記錄每只大鼠的食物攝入量。將第二大組的3組對(duì)照大鼠(每組5只)喂以標(biāo)準(zhǔn)食物，并每天用1毫升鹽水管飼，飼喂3天。將對(duì)照組的每只動(dòng)物與PHA施用組的每只動(dòng)物對(duì)應(yīng)飼喂。在第4天的早晨，給每只動(dòng)物注射150mg/kg體重5-FU，然后用標(biāo)準(zhǔn)食物飼喂6天。將2只大鼠以標(biāo)準(zhǔn)食物不限量地供給9天。在第9天早晨，將大鼠殺死并解剖動(dòng)物。在用液氮冷凍后，記錄濕組織的重量。
表14在施用150mg/kg/BW5-FU后，用200、100和50mg/kg/天PHA管飼，飼喂3天對(duì)空腸和回腸濕重(mg)的影響處理 空腸(mg) 回腸(mg)未注射1006 909PHA200mg/kg/天1031 778對(duì)應(yīng)的對(duì)照200mg/kg/天 848753PHA100mg/kg/天984800對(duì)應(yīng)的對(duì)照100mg/kg/天 783747PHA50mg/kg/天 989757對(duì)應(yīng)的對(duì)照50mg/kg/天 761722在注射5-FU前預(yù)施用200mg/kg/天PHA，與未注射的處理組和對(duì)應(yīng)的對(duì)照組相比，在空腸觀察到顯著的保護(hù)作用(表14)。將PHA的劑量降至100或50mg/kg/天，與未注射的處理組和對(duì)應(yīng)的對(duì)照組相比，在空腸組織觀察到顯著的保護(hù)作用。用回腸組織，當(dāng)與未注射的對(duì)照相比時(shí)，在所檢測(cè)的劑量，PHA沒(méi)有如此完全的組織保護(hù)作用。但在每種情況下，用預(yù)施用PHA的動(dòng)物比相應(yīng)的配對(duì)飼喂對(duì)照有較大的回腸組織。
上述實(shí)施例表明，化療可嚴(yán)重?fù)p害動(dòng)物的生長(zhǎng)和生存力。食物措施，特別是施用細(xì)胞毒性藥物之前或之后加入凝集素可賦予抵御化療的保護(hù)作用。具體地說(shuō)，該保護(hù)作用涉及胃腸組織的生存力和生長(zhǎng)。在施用細(xì)胞毒性藥物后的這種保護(hù)作用在200mg/kg/天至50mg/kg/天的凝集素劑量范圍內(nèi)均可觀察到。實(shí)施例9對(duì)口服消化的PHA保護(hù)小鼠抵抗致死量輻射的能力，特別其對(duì)腸組織保護(hù)作用進(jìn)行了研究。
每次用6.75Gy的輻射劑量(0.3Gy/分)照射每組由12只白化雄性小鼠組成的8組小鼠。將每組小鼠以精確的食物方案保持30天(表15)。
表15所用8組小鼠的食物方案小鼠組號(hào) 食物方案輻射處理組1SD2天LA3天SD11天*ir*LA14天2SD2天LA3天*ir*PHA7天LA7天SD11天3SD2天LA1.5天FT1.5天*ir*PHA7天LA7天SD11天4SD2天LA2天PHA1天*ir*PHA7天LA7天SD11天5SD2天PHA3天*ir*PHA7天LA7天SD11天對(duì)照6SD2天LA3天 LA14天SD11天7SD2天LA2天 PHA1天PHA7天LA7天SD11天8SD2天PHA3天 PHA7天LA7天SD11天表15關(guān)鍵詞SD標(biāo)準(zhǔn)市售食物(Charles River Ltd.,Bioplan Ltd,Esaszeg,Hungary)。LA乳白蛋白食物。用表1中已知組分在實(shí)驗(yàn)室中配制的半合成食物(無(wú)凝集素)。乳白蛋白得自Sigma(Poole,Dorset)。PHA菜豆食物。用表1中已知組分在實(shí)驗(yàn)室中配制的食物(含菜豆凝集素PHA)。菜豆源自栽培的‘Processor’(任何其他含PHA的菜豆也同樣適用)。FT禁食(無(wú)食物)*ir*輻射時(shí)間記錄30天后存活的小鼠數(shù)和其平均體重。
圖5說(shuō)明對(duì)動(dòng)物30天后存活的影響。非輻射對(duì)照處理組6、7和8組中的動(dòng)物表明施用標(biāo)準(zhǔn)食物、乳白蛋白食物和菜豆食物對(duì)存活沒(méi)有影響。未觀察到死亡。相反，在輻射后用標(biāo)準(zhǔn)市售食物、乳白蛋白食物和PHA食物飼喂的輻射處理組1,2和3中的動(dòng)物有顯著的死亡率(處理組3包括禁食期)。在處理組1-3中，共僅有2只動(dòng)物存活。
若在將進(jìn)行輻射前，給動(dòng)物飼以含PHA的食物(處理組4和5)，動(dòng)物的存活有顯著的提高。存活的動(dòng)物數(shù)與在輻射前用PHA食物飼喂動(dòng)物的時(shí)間長(zhǎng)短很相關(guān)。
表16 30天后的動(dòng)物平均體重小鼠組號(hào) 平均體重(g±標(biāo)準(zhǔn)偏差)129.9229.63-423.0±5.63530.12±1.83631.88±2.02731.18±1.46831.03±2.1130天后，對(duì)照處理組6-8中動(dòng)物的重量為30-32克(表16)。處理組1-3中的動(dòng)物有很高的死亡率。但是在處理組4和5中的動(dòng)物，其體重的增加與輻射前用含PHA食物飼喂的時(shí)間成正比。在處理組5中(在輻射前用含PHA的食物飼喂3天)，平均體重與對(duì)照處理組相似。以所研究的劑量將PHA加到食物中沒(méi)有有害作用。若在輻射前施用凝集素，可觀察到PHA的顯著保護(hù)作用。
在輻射動(dòng)物后，對(duì)每個(gè)處理組測(cè)定小腸、脾和睪丸的平均濕重(表17)。未測(cè)定處理組7的平均重量。
表17存活小鼠的小腸、脾和睪丸重量(mg±標(biāo)準(zhǔn)偏差)小鼠組號(hào) 小腸 脾睪丸1 999.872.5 49.42 1335.2 176.5 62.03 -- -4 1032.0±266.7105.2±25.7 53.6±1.65 1312.3±258.4111.4±37.4 62.8±8.96 1477.3±111.1117.8±13.5 208.0±36.57 nd ndnd8 1522.2±159.3107.8±15.4 194.5±18.8表17的注釋-表示由于沒(méi)有小鼠存活，所以沒(méi)有數(shù)據(jù)nd表示未記錄數(shù)據(jù)這些結(jié)果表明睪丸組織對(duì)輻射的作用最敏感。在輻射前或后施用PHA對(duì)睪丸的生長(zhǎng)作用不大。
處理組1-3在輻射后有很低的存活率。處理組4和5的結(jié)果表明小腸重量有劑量依賴性增加，所述增加與輻射前用含PHA食物飼喂動(dòng)物的時(shí)間成正比。處理組4和5的脾組織的平均重量與對(duì)照組相似。
該實(shí)施例表明輻射嚴(yán)重?fù)p害了動(dòng)物的生存力，而通過(guò)飲食可改善輻射損害存活率的程度。輻射前禁食不能賦予對(duì)抗輻射的保護(hù)作用，反而可能是有害的。就重量的減少而言，食物中的PHA對(duì)測(cè)量參數(shù)沒(méi)有不利影響(組7和8的數(shù)據(jù)與組6相比)，而所研究的睪丸組織對(duì)輻射損傷最敏感。在所述實(shí)施例中，預(yù)先施用PHA可賦予抵御輻射損傷的保護(hù)作用，而保護(hù)作用的程度取決于施用PHA的時(shí)間長(zhǎng)短。
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權(quán)利要求
1．凝集素在制備用于控制粘膜細(xì)胞增殖的藥物中的用途。
2．根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中所述控制是針對(duì)腸損傷和/或粘膜炎。
3．根據(jù)權(quán)利要求1或2的用途，其中所述控制是指對(duì)細(xì)胞損傷劑引起之損傷的控制。
4．根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)的用途，是為了控制受到損傷的哺乳動(dòng)物細(xì)胞和/或組織，特別是受到損傷的人細(xì)胞和/或組織。
5．根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)的用途，其中所述細(xì)胞和/或組織是腸、口腔、鼻通道、食管、胃、肺、小腸、大腸(包括結(jié)腸)、上皮組織(如覆蓋眼睛的)的粘膜層和其他粘膜細(xì)胞和組織。
6．凝集素在制備用于減輕和/或治療因細(xì)胞損傷劑引起之損傷的藥物中用途。
7．根據(jù)權(quán)利要求6的用途，是為了減輕和/或治療受到損傷的哺乳動(dòng)物細(xì)胞和/或組織，特別是受損傷的人細(xì)胞和/或組織。
8．根據(jù)權(quán)利要求6或7的用途，其中所述細(xì)胞和/或組織是腸、口腔、鼻通道、食管、胃、肺、小腸、大腸(包括結(jié)腸)、上皮組織(如覆蓋眼睛的)的粘膜層和其他粘膜細(xì)胞和組織，骨髓、脾，所有造血細(xì)胞，血液組織，胸腺，生發(fā)組織，眼組織和睪丸/前列腺組織。
9．根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)的用途，其中所述細(xì)胞損傷劑是放療、化療劑或其組合。
10．根據(jù)權(quán)利要求9的用途，所述放療包括X-射線，γ射線，質(zhì)子源，中子源，α-發(fā)射體，β-發(fā)射體或其兩種或多種情況的組合。
11．根據(jù)權(quán)利要求9或10中的用途，其中所述化療劑包括5-氟尿嘧啶，順鉑，阿霉素，氨甲喋呤，紫杉醇或其兩種或多種物質(zhì)的組合。
12．根據(jù)權(quán)利要求1至11中任一項(xiàng)的凝集素的用途，其中所述凝集素來(lái)自菜豆、大豆、刀豆、小麥胚芽、蓮花種子、洋蔥、兵豆、番茄、馬鈴薯或來(lái)自其兩種或多種組合的凝集素。
13．根據(jù)權(quán)利要求1至12中任一項(xiàng)的凝集素的用途，其與細(xì)胞保護(hù)劑聯(lián)用。
14．根據(jù)權(quán)利要求13的凝集素的用途，其中所述細(xì)胞保護(hù)劑是放射致敏劑、化學(xué)保護(hù)劑，生長(zhǎng)因子或其兩種或多種物質(zhì)的組合。
15．根據(jù)權(quán)利要求14的凝集素的用途，其中所述放射致敏劑是維生素K模擬劑，texaphyrin釓配合物，碘芐胍或其兩種或多中物質(zhì)的組合。
16．根據(jù)權(quán)利要求14或15的凝集素的用途，其中所述化學(xué)保護(hù)劑是Sulcraphate、半胱氨酸、巰基乙胺、Ethyol、balazipone，多司馬酯，WR3689(磷酸二氫2-[[3-甲基氨基)丙基]氨基]乙二醇酯，AD20(2-[[2-甲氧基苯基)乙酰]氨基]2-丙烯酸或硝基氧抗氧化劑或其兩種或多種物質(zhì)的組合。
17．根據(jù)權(quán)利要求14至16中任一項(xiàng)的凝集素的用途，其中所述生長(zhǎng)因子是粒細(xì)胞集落刺激因子，粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子，促紅細(xì)胞生成素，表皮生長(zhǎng)因子，角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子，白細(xì)胞介素，胰島素樣生長(zhǎng)因子，神經(jīng)生長(zhǎng)因子，血小板衍生的生長(zhǎng)因子，鈴蟾肽，松弛素，降鈣素，初乳衍生的生長(zhǎng)因子(CDGF)，氨氯地平或amoxanox,protegrin，鹽酸匹魯卡品，干細(xì)胞因子，血小板生成素，青灰因子，任何一種干擾素，包括干擾素α，任何一種細(xì)胞因子或其兩種或多種物質(zhì)的組合。
18．凝集素在制備用于減輕和/或治療代謝性糖尿病之藥物中的用途。
19．根據(jù)權(quán)利要求18的凝集素的用途，其中所述代謝性疾病是肥胖癥或與肥胖癥相關(guān)的疾病，心血管、中風(fēng)、胃腸道或相關(guān)疾病，粘膜細(xì)胞增殖的控制或其兩種或多種情況的組合。
20．根據(jù)權(quán)利要求1至19中任一項(xiàng)的凝集素的用途，其中所述藥物施用的凝集素濃度為0.3g-0.1μg/kg體重/天。
21．根據(jù)權(quán)利要求1至19中任一項(xiàng)的凝集素的用途，其中所述藥物施用的凝集素濃度為1mg-0.15μg/kg體重/天。
22．含有凝集素的組合物，所述組合物用于控制粘膜細(xì)胞增殖，減輕和/或治療因細(xì)胞損傷劑引起的損傷，減輕和/或治療代謝性疾病，或其兩種或多種情況組合。
23．含凝集素和細(xì)胞保護(hù)劑的組合物。
24．權(quán)利要求22或23的組合物，同時(shí)、分開(kāi)或相繼使用、用于預(yù)防或治療因細(xì)胞損傷劑引起的損傷。
25．根據(jù)權(quán)利要求22至24中任一項(xiàng)的組合物，其中所述凝集素是純化的或分離的。
26．根據(jù)權(quán)利要求22至25中的任一組合物，其中所述凝集素來(lái)自菜豆、大豆(或乳清)、刀豆、小麥胚芽、蓮花種子、洋蔥、兵豆、番茄、馬鈴薯或來(lái)自其兩種或多種組合的凝集素。
27．根據(jù)權(quán)利要求22至26中任一項(xiàng)的組合物，其中所述細(xì)胞保護(hù)劑是放射致敏劑或化學(xué)保護(hù)劑，生長(zhǎng)因子或其兩種或多種物質(zhì)的組合。
28．根據(jù)權(quán)利要求22至27中任一項(xiàng)的組合物，其中含有的凝集素濃度為0.3g-0.1μg/kg體重/天，優(yōu)選1mg-0.15μg/kg體重/天。
29．減輕和/或治療因放療和/或化療引起的損傷，減輕和/或治療代謝性疾病、控制粘膜細(xì)胞增殖或其兩種或多種情況的方法，該方法包括總的食物凝集素?cái)z入量為0.3g-0.1μg/kg體重/天。
30．可供消費(fèi)2-5天的含凝集素的食物。
31．根據(jù)權(quán)利要求23的食物，接著是為期達(dá)7天的高質(zhì)量食物。
32．周期性食物，含有至少兩個(gè)周期的權(quán)利要求31中的食物。
33．根據(jù)權(quán)利要求30-32中任一項(xiàng)的食物，其中所述食物含有的凝集素劑量為0.2g-0.05g/kg體重/天。
34．權(quán)利要求30-32中任一項(xiàng)食物，其與放療和/或化療結(jié)合使用。
35．權(quán)利要求30-32中任一項(xiàng)食物，在進(jìn)行放療和/或化療前、過(guò)程中或之后施用。
36．任選包括大豆乳清成分的大豆廢產(chǎn)物在制備權(quán)利要求1至21中任一項(xiàng)的藥物的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及凝集素在制備用于控制粘膜細(xì)胞增殖、減輕和/或治療因細(xì)胞－損傷劑引起的損傷以及減輕和/或治療代謝性疾病之藥物中的用途,本發(fā)明還涉及含凝集素的組合物和食物,其在醫(yī)藥和非醫(yī)藥領(lǐng)域的用途以及大豆廢棄產(chǎn)物,特別是大豆乳清成分在制備上述藥物和組合物中的用途。
文檔編號(hào)A61K33/24GK1230891SQ9719683
公開(kāi)日1999年10月6日 申請(qǐng)日期1997年6月20日 優(yōu)先權(quán)日1996年6月21日
發(fā)明者A·J·普茨泰, Z·M·巴多斯, R·M·J·帕爾默, N·W·菲施, G·J·克特勒斯 申請(qǐng)人:阿利茨默治療學(xué)有限公司