專利名稱：一氧化氮生成抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及痘苗病毒接種炎癥組織提取物的新藥理作用，具體地說就是涉及以痘苗病毒接種炎癥組織提取物為有效成分的一氧化氮生成抑制劑、敗血癥治療劑、抗內(nèi)毒素劑、內(nèi)毒素休克治療劑等醫(yī)藥品。
已知，針對病毒等外界而來的侵襲或內(nèi)在的病理狀態(tài)的進(jìn)行，機(jī)體具有對過度反應(yīng)的抑制作用和對機(jī)能降低的增強(qiáng)作用的兩重性。機(jī)體為了維持穩(wěn)定性、調(diào)節(jié)機(jī)體機(jī)能使之正常化，會(huì)生成各種機(jī)體機(jī)能調(diào)節(jié)物質(zhì)。例如，接種痘苗病毒后炎癥組織產(chǎn)生的機(jī)體機(jī)能調(diào)節(jié)物質(zhì)，從病變組織提取該物質(zhì)的方法及其藥理活性都已有種種報(bào)告(特公昭63-39572號公報(bào)、特公昭63-25600號公報(bào)、特公平3-43279號公報(bào)等)。
此外，作為實(shí)際的藥品有痘苗病毒接種家兔炎癥皮膚提取物制劑。這種制劑例如《醫(yī)療藥日本醫(yī)藥品集》(1994年8月版，日本醫(yī)藥情報(bào)中心編，藥業(yè)時(shí)報(bào)社發(fā)行)1434頁所記載的，為含有從接種了痘苗病毒的家免炎癥皮膚組織提取分離的非蛋白性活性物質(zhì)的制劑，其適應(yīng)癥有腰痛病、頸肩腕綜合癥、肩周炎、變形性關(guān)節(jié)病、綜合性神經(jīng)痛、伴有皮膚病(濕疹、皮炎、蕁麻疹)的搔癢、變態(tài)反應(yīng)性鼻炎、亞急性脊髓視神經(jīng)癥后遺癥的無感覺、疼痛、感覺異常等，作為上市的制劑成品有皮下、肌肉、靜脈注射用的注射劑和片劑等。
對于上述痘苗病毒接種炎癥組織提取物來說，已知其有鎮(zhèn)痛作用、鎮(zhèn)靜作用、抗變態(tài)反應(yīng)作用、改善微循環(huán)作用等種種藥理作用，但對于一氧化氮生成抑制作用、敗血癥治療作用、抗內(nèi)毒素作用以及內(nèi)毒素休克治療作用等涉及到本發(fā)明的新藥理作用方面迄今卻完全未見報(bào)道。
在敗血癥和其它嚴(yán)重細(xì)菌感染癥中，產(chǎn)生了大量內(nèi)毒素(細(xì)胞內(nèi)毒素)，其作用是引起休克的癥狀。內(nèi)毒素對機(jī)體具有發(fā)熱、白細(xì)胞增多、補(bǔ)體和激肽系統(tǒng)活化、誘發(fā)彌散性血管內(nèi)凝血綜合癥(DIC)、骨髓抑制等多種多樣的作用。內(nèi)毒素引起的休克癥狀如果持續(xù)進(jìn)行，則使機(jī)體血壓過度下降，心輸出量過分降低，產(chǎn)生無尿、意識障礙等，使機(jī)體陷入極其危險(xiǎn)的狀態(tài)。由于發(fā)生內(nèi)毒素休克時(shí)血壓急劇下降，暗示內(nèi)毒素作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，使之異常產(chǎn)生過量的一氧化氮，因而已有討論將例如精氨酸衍生物等一氧化氮合成酶抑制劑作為內(nèi)毒素休克時(shí)的低血壓癥治療劑。
本發(fā)明人等對關(guān)于痘苗病毒接種炎癥組織提取物的藥理活性進(jìn)行了種種的實(shí)驗(yàn)研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該物質(zhì)對內(nèi)毒素誘發(fā)的細(xì)胞致死和一氧化氮的過度產(chǎn)生有抑制作用，對內(nèi)毒素誘發(fā)的低血壓癥有改善作用，從而完成了本發(fā)明。
本發(fā)明的目的在于提供以痘苗病毒接種炎癥組織提取物為有效成分的一氧化氮生成抑制劑、敗血癥治療劑、抗內(nèi)毒素劑、內(nèi)毒素休克治療劑等新型藥物組合物。
本發(fā)明藥物組合物的有效成分為從痘苗病毒接種炎癥組織提取的非蛋白性機(jī)體機(jī)能調(diào)節(jié)物質(zhì)，這可以使用前述《醫(yī)療藥日本醫(yī)藥品集》記載的已得到生產(chǎn)許可市售的痘苗病毒接種家兔炎癥皮膚的提取物制劑。此外，上述特許公報(bào)等文獻(xiàn)記載的各種痘苗病毒接種炎癥組織提取物也可作為本發(fā)明的有效物質(zhì)而使用，其制造方法和優(yōu)選給藥量等文獻(xiàn)中也都有說明。
至于對患者的給藥方法，市售藥劑中對注射劑來說有皮下、肌注和靜注給藥等，對片劑來說有口服給藥，但是對于其他種類的疾病來說，則也可能有最適合其治療的上述劑形及方法之外的給藥方法。給藥量應(yīng)因痘苗病毒接種炎癥組織提取物種類的不同而適當(dāng)設(shè)定；市售制劑認(rèn)可的給藥量，根據(jù)前述《醫(yī)療藥日本醫(yī)藥品集》(1434頁)，基本上為內(nèi)服每日16個(gè)神經(jīng)促進(jìn)素(neurotropin)單位，注射劑為每日3.6至7.2個(gè)神經(jīng)促進(jìn)素單位不過根據(jù)疾病種類、嚴(yán)重程度、患者個(gè)體差異、給藥方法、給藥時(shí)間等的不同，可以作適當(dāng)?shù)脑鰷p。
以下為涉及痘苗病毒接種炎癥組織提取物新藥理作用的藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果。(1)細(xì)胞保護(hù)作用每個(gè)3.5cm培養(yǎng)皿中有2×104個(gè)移植的人臍帶血管內(nèi)皮細(xì)胞，分別加入各種濃度的內(nèi)毒素(脂多糖LPS)，然后進(jìn)行內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)。7天后，用血細(xì)胞計(jì)算盤對細(xì)胞計(jì)數(shù)，以錐蟲藍(lán)染色法測定細(xì)胞的生死。以此實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)進(jìn)行在本發(fā)明物質(zhì)共存下LPS對內(nèi)皮細(xì)胞的致死作用的研究，從而考查本發(fā)明物質(zhì)的效果，

圖1所示為一例結(jié)果。
如圖1所示，LPS在超過0.1μg/ml的濃度顯示出濃度依賴性的內(nèi)皮細(xì)胞損傷和細(xì)胞死亡。對于這種LPS誘發(fā)的細(xì)胞致死，依照特公昭63-39572號公報(bào)中實(shí)施例1記載方法所得的本發(fā)明物質(zhì)具有優(yōu)良的細(xì)胞保護(hù)作用，可以顯著地改善細(xì)胞的生存率。(2)一氧化氮生成抑制作用將人臍帶血管內(nèi)皮細(xì)胞(2×104個(gè)/孔)在96孔的多凹孔培養(yǎng)皿中加入200ml培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，直到細(xì)胞生長匯合。然后除去培養(yǎng)基，加入含有LPS(0.001～100mg/ml)及上述本發(fā)明物質(zhì)的新鮮培養(yǎng)基，24小時(shí)后用Griess試劑以發(fā)色分析法對一氧化氮生成量進(jìn)行測定。也就是分別從各培養(yǎng)皿中取100ml，加入100ml的Griess試劑(1％磺胺及0.1％N-1-萘替乙撐二胺鹽酸鹽的2％磷酸溶液)，在25℃下溫育10分鐘后，測定540nm處的吸光度。以亞硝酸鈉水溶液為標(biāo)準(zhǔn)溶液，考察本發(fā)明物質(zhì)的一氧化氮生成抑制作用，圖2所示為一例結(jié)果。
作為本發(fā)明物質(zhì)對上述LPS誘發(fā)的細(xì)胞損害的細(xì)胞保護(hù)作用的作用機(jī)制之一，研究其對LPS引起的一氧化氮生成所具有的抑制作用。如圖2所示，LPS濃度在0.1μg/ml以上時(shí)一氧化氮生成顯著增加，本發(fā)明物質(zhì)對這種LPS引發(fā)的一氧化氮生成有顯著的抑制作用。此外，對于LPS處理的小鼠肺、肝臟及腎臟的NADPH-硫辛酰胺脫氫酶陽性物質(zhì)及誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶的增加，本發(fā)明物質(zhì)(在LPS給與的同時(shí)給與)顯示出對這種增加的抑制作用。因此提示本發(fā)明物質(zhì)對一氧化氮生成的抑制作用是基于對誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶出現(xiàn)的抑制。(3)LPS誘發(fā)致死的抑制作用雄性ddy系小鼠(25～30g)，LPS(0.75mg/只)和本發(fā)明物質(zhì)溶液或磷酸緩沖化生理鹽水共同腹腔內(nèi)給藥。在這次給藥后五天內(nèi)每隔12小時(shí)再給與本發(fā)明物質(zhì)溶液(40單位/千克)或磷酸緩沖化生理鹽水(對照組)，每天2次測定死亡數(shù)。圖3所示為一例結(jié)果。
如圖3所示，給與LPS后，小鼠生存率隨時(shí)間推移而降低，但本發(fā)明物質(zhì)(痘苗病毒接種炎癥皮膚提取物制劑、商品名為“神經(jīng)促進(jìn)素”Neurotropin)給藥組可觀察到明顯的對LPS誘發(fā)致死的抑制作用。和圖1所示的培養(yǎng)內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)一樣，通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)確證了本發(fā)明物質(zhì)對LPS誘發(fā)致死的抑制作用。(4)對LPS誘發(fā)低血壓的改善作用雄性費(fèi)歇爾系大鼠(230～250g)以戊巴比妥(40mg/kg)腹腔給藥麻醉，為測定血壓和心跳以及給與本發(fā)明物質(zhì)，作動(dòng)脈插管。血壓和心跳次數(shù)穩(wěn)定以后，靜脈給與本發(fā)明物質(zhì)(60mg/kg)或生理鹽水(對照組)。30分鐘后給與LPS(15mg/kg)，3小時(shí)內(nèi)每隔10分鐘測定一次血壓。
暴露在LPS下的大鼠平均動(dòng)脈血壓在給與LPS后40分鐘左右開始下降，1小時(shí)半至2小時(shí)半時(shí)約下降20％，與此相對，痘苗病毒接種炎癥皮膚提取物制劑的給藥組不發(fā)生血壓下降，并僅觀察到5％程度的血壓上升。
從上述藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，針對內(nèi)毒素(脂多糖LPS)引起的細(xì)胞和動(dòng)物致死，作為本發(fā)明醫(yī)藥組合物的有效成分的痘苗病毒接種炎癥組織提取物具有優(yōu)良的防御作用；此外對于內(nèi)毒素誘發(fā)的一氧化氮過量生成，本品也有顯著的抑制作用。發(fā)生內(nèi)毒素休克時(shí)血壓急劇下降，提示內(nèi)毒素誘發(fā)血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生過量的一氧化氮；從上述LPS誘發(fā)低血壓的藥理實(shí)驗(yàn)來看，對一氧化氮生成有抑制作用的本發(fā)明物質(zhì)對LPS給與后的血壓下降有對抗作用，確認(rèn)具有維持正常血壓的良好作用。雖以上述藥理實(shí)驗(yàn)(內(nèi)毒素誘發(fā)致死抑制作用、一氧化氮生成抑制作用、LPS誘發(fā)低血壓的改善作用)中的一例實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行說明，但可以確認(rèn)除市售痘苗病毒接種炎癥皮膚提取物制劑之外，特公昭63-39572號公報(bào)中實(shí)施例記載的提取物、特公昭63-25600號公報(bào)實(shí)施例記載的提取物、特公平3-43279號公報(bào)實(shí)施例記載的提取物等其它各種的痘苗病毒接種炎癥組織提取物等也具有這種同樣的作用。
在敗血癥和其它嚴(yán)重細(xì)菌感染中產(chǎn)生了內(nèi)毒素(細(xì)胞內(nèi)毒素)，由于其作用引起休克癥狀。因此，如上所述對內(nèi)毒素誘發(fā)毒性有優(yōu)良抑制作用的本發(fā)明物質(zhì)對于內(nèi)毒素為誘因的休克癥狀、敗血癥以及伴隨著的其它癥狀的治療和預(yù)防非常有價(jià)值。此外，由于本發(fā)明物質(zhì)對于病態(tài)時(shí)異常的一氧化氮生成有抑制作用，所以它作為與過量一氧化氮生成有關(guān)的疾病，例如急性的低血壓等的治療和預(yù)防藥物是有用的。作為本發(fā)明藥品組成物有效成分的痘苗病毒接種炎癥組織提取物，可以和適當(dāng)?shù)乃幱幂d體或稀釋劑組合制成藥品，可以以通常的生產(chǎn)方法使之制劑化，可以用于口服或非口服給藥而以固體、半固體、液體或氣體劑形處方。在處方的時(shí)候，可以單獨(dú)應(yīng)用本發(fā)明物質(zhì)或以適當(dāng)組合應(yīng)用，此外也可以和其它藥物活性成分組成復(fù)方應(yīng)用。
制作注射劑時(shí)，可以和水性溶劑或非水性溶劑，例如注射用蒸餾水、生理鹽水、Ringer’s液、植物油、合成脂肪酸甘油酯、高級脂肪酸酯、丙二醇等作成溶液或混懸液，從而使之制劑化。
作為口服給藥制劑，可以以原型或適當(dāng)干燥或者加入適當(dāng)?shù)奶砑觿?，例如乳糖、甘露糖醇、玉米淀粉、馬鈴薯淀粉等常用的賦形劑，同時(shí)與結(jié)晶纖維素、纖維素衍生物、阿拉伯膠、玉米淀粉、明膠等粘合劑，玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、羧早基纖維素鉀等崩解劑，滑石、硬脂酸鎂等潤滑劑，其它的填充劑、濕潤化劑、緩沖劑、防腐劑、香料等適當(dāng)組合，作成片劑、散劑、顆粒劑或膠囊劑。此外，與疾病種類相適應(yīng)，也可作成對其最適治療的上述之外的劑形，例如栓劑、吸入劑、氣霧劑、點(diǎn)眼劑、軟膏、泥敷劑等。
附圖的簡要說明[圖1]表示本發(fā)明物質(zhì)對LPS所致內(nèi)皮細(xì)胞致死抑制效果圖。[圖2]表示本發(fā)明物質(zhì)對LPS所致一氧化氮過量生成抑制作用圖。[圖3]表示本發(fā)明物質(zhì)對LPS給藥引起的小鼠致死的抑制作用的圖。
權(quán)利要求
1.含有痘苗病毒接種炎癥組織提取物作為有效成分的一氧化氮生成抑制劑。
2.含有痘苗病毒接種炎癥組織提取物作為有效成分的敗血癥治療劑。
3.含有痘苗病毒接種炎癥組織提取物作為有效成分的抗內(nèi)毒素劑。
4.含有痘苗病毒接種炎癥組織提取物作為有效成分的內(nèi)毒素休克治療劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)記載的藥劑，所說的炎癥組織為皮膚組織。
6.根據(jù)權(quán)利要求5記載的藥劑，所說的炎癥動(dòng)物組織為哺乳動(dòng)物的皮膚組織。
7.根據(jù)權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)記載的藥劑，為注射劑。
8.根據(jù)權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)記載的藥劑，為口服制劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種含有痘苗病毒接種炎癥組織提取物為有效成分的藥物組合物,該組合物對內(nèi)毒素誘發(fā)的細(xì)胞致死和一氧化氮過量生成的抑制作用,對內(nèi)毒素誘發(fā)低血壓有改善作用,可以作為一氧化氮生成抑制劑、敗血癥治療劑、抗內(nèi)毒素劑、內(nèi)毒素休克治療劑等。此外,由于本發(fā)明物質(zhì)對于病態(tài)時(shí)異常的一氧化氮生成有抑制作用,所以它可用作為與過量一氧化氮生成有關(guān)的疾病,例如急性低血壓等的治療和預(yù)防藥物。
文檔編號A61P31/04GK1187369SQ9810391
公開日1998年7月15日 申請日期1998年1月7日 優(yōu)先權(quán)日1997年1月8日
發(fā)明者大野耕作, 小西甚右衛(wèi)門, 末廣誠之 申請人:日本臟器制藥株式會(huì)社