專利名稱：哇巴因多克隆抗體在制備治療高血壓藥物的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于治療高血壓的藥物領域，涉及一種哇巴因多克隆抗體在制備治療高血壓藥物的應用。
內源性哇巴因(Endogenous Ouabain，EO)是由腎上腺皮質分泌的一種類固醇激素，研究證明EO是高血壓發(fā)病的重要因素之一，參與了高血壓的形成。哇巴因多克隆抗體是由哇巴因刺激機體而產生的一種大分子蛋白的免疫物質，可以用免疫動物的方法獲得。本發(fā)明前哇巴因多克隆抗體已作為一種試劑用于實驗室(由實驗室制備，非商品)檢測樣本內哇巴因的含量。本發(fā)明在應用哇巴因多克隆抗體檢測動物體內哇巴因的實驗研究中，發(fā)現(xiàn)給動物體內注射哇巴因多克隆抗體，可降低動物血壓，從而提出把哇巴因多克隆抗體應用在制備治療高血壓的藥物中。
高血壓是我國最常見的心血管疾病，也是腦卒中、冠心病、心、腎功能衰竭最主要的危險因素。有效地控制高血壓，可防止心、腦、腎靶器官的嚴重損害，大大降低死亡率。目前臨床上應用治療高血壓藥物很多，主要有利尿劑，腎上腺素能神經元阻斷藥、腎上腺素受體阻滯劑、血管擴張劑、鈣拮抗劑、血管緊張素轉換酶抑制劑等幾類，治療高血壓的機理主要是針對高血壓的病理變化，通過降低外周血管張力達到降壓目的。這類藥物多系化學合成制品，難免存在著副作用較多的缺點。而我國治療高血壓的中草藥種類較多，但大多未能從天然植物中提取確切的有效成份，臨床應用存在起效慢、療程長、服藥量大等缺點。
本發(fā)明的目的是將現(xiàn)有技術中的實驗檢測用的哇巴因多克隆抗體應用到制備治療高血壓的藥物中，而這種藥物具有與人體組織相容性好，降壓速度快，降壓效果明顯，毒副作用小的優(yōu)點。
本發(fā)明的解決方案是基于哇巴因多克隆抗體可與機體內哇巴因結合，從而降低體內哇巴因含量和效能而達到降低血壓的原理。
本發(fā)明的具體實施方案為一種哇巴因多克隆抗體在制備治療高血壓藥物的應用，其主要特點是把哇巴因多克隆抗體用于制備治療高血壓的藥物。具體方法是采用免疫學方法，通過用哇巴因免疫動物的方法制備哇巴因多克隆抗體。
哇巴因多克隆抗體的制備1、合成哇巴因-卵清蛋白哇巴因→加入NaIO4→室溫下攪拌→加入BSA→室溫攪拌→加入NaBH4，室溫攪拌1h→加入飽和硫酸胺，靜置→溶解沉淀→用生理鹽水透析。
2、免疫程序哇巴因→卵清蛋白與等量的弗氏完全佐劑混勻成為乳劑，常規(guī)消毒動物(兔)頸背部皮膚，皮下多點注射，末次免疫后從頸動脈放血，收集血清，用硫酸銨鹽析法+DEAE-纖維柱層析法提純，-20℃凍存。
由于哇巴因多克隆抗體只有通過靜脈給藥途徑才具有良好的降壓效果。將哇巴因多克隆抗體制成注射劑，為了貯存運輸方法，也可制成凍干粉劑。使用時，將哇巴因多克隆抗體室溫下生理鹽水稀釋后通過靜脈途徑用藥，凍干粉劑用溶液溶解后給藥。
本發(fā)明的動物藥效學實驗表明哇巴因多克隆抗體的降壓作用有以下特點①降壓效應與用藥劑量有關，降壓幅度和持續(xù)時間與用藥劑量呈正相關；②降壓效果比常用降壓藥物硝普鈉降壓持續(xù)時間長。③降壓起效快，用藥后2-5分鐘起效。
實驗方法及結果如下“一腎一夾”高血壓模型實驗實驗分為6組，即生理鹽水組、正常兔IgG組、硝普鈉組、3個劑量的哇巴因抗體組，每組8-10只。哇巴因多克隆抗體用量分大、中、小三組(即23mg/kg，4.6mg/kg，2.3mg/kg)。
各組大鼠均經25％烏拉坦麻醉，頸動脈插管監(jiān)測血壓，待血壓穩(wěn)定后舌靜脈給藥，陽性對照藥為硝普鈉(靜注劑量為0.3mg/kg體重)，陰性對照為生理鹽水及正常兔IgG。
哇巴因多克隆抗體急性毒性試驗(最大耐受性試驗)選擇18-22g體重的健康小鼠20只，雌雄各半，經尾靜脈及腹腔兩種途徑一次注入最大濃度(230mg/kg體重)哇巴因多克隆抗體50ml/kg體重(最大體積)，觀察①試驗即刻動物反應情況動物活動明顯減少，但無抽搐及呼吸急促等發(fā)生；②繼續(xù)觀察了10天，實驗第一天動物飲食及活動明顯減少，第二天好轉，第三天后恢復正常，觀察10天無動物死亡。
結論最大耐受性試驗顯示，哇巴因多克隆抗體的急性毒性作用較小。
本發(fā)明的優(yōu)點在于將免疫方法取得的哇巴因多克隆抗體用于制備治療高血壓藥物，具有組織相容性好，毒副作用小，降壓速度快(2-5分鐘起效)，作用時間長，效果顯著的特點。
圖1是一腎一夾高血壓模型藥效學試驗結果圖。
權利要求
1.一種哇巴因多克隆抗體在制備治療高血壓藥物的應用，其特征在于把哇巴多克隆抗體用于制備治療高血壓的藥物。
2.根據權利要求1所述的哇巴因多克隆抗體在制備治療高血壓藥物的應用，其特征在于把哇巴因多克隆抗體制備成靜脈注射劑。
全文摘要
該發(fā)明提供了一種哇巴因多克隆抗體在制備治療高血壓藥物的應用,制備的哇巴因多克隆抗體靜脈注射劑具有與機體組織相容性好,毒副作用小,降壓速率快(2—5分鐘起效),持續(xù)時間長,效果顯著的特點。
文檔編號A61K39/395GK1248472SQ98112970
公開日2000年3月29日 申請日期1998年9月21日 優(yōu)先權日1998年9月21日
發(fā)明者呂卓人 申請人:西安醫(yī)科大學第一臨床醫(yī)學院