專利名稱：抗愛滋病新藥了哥王提取物的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，確切地說它是抗愛滋病(AIDS)新藥了哥王提取物的制備方法。
了哥王(Wikstroemia indica)為瑞香科莬花屬植物，生于山腳及山坡潮濕的灌叢中，主要分布于廣東、廣西、福建、臺(tái)灣、浙江、江西、湖南、四川等地。本植物的莖葉、根和果實(shí)均可入藥，具有清熱解毒、消腫散結(jié)、止痛之功效，治癰腫、風(fēng)濕痛、跌打損傷[江蘇新醫(yī)學(xué)院編，中藥大辭典(1977年，上海人民出版社)，pp.51-53]。在民間，了哥王常與其他中草藥配伍，廣泛用于治療肺癌、宮頸癌、乳腺癌、淋巴癌等多種腫瘤[王冰主編，抗癌中藥方選(1992年，人民軍醫(yī)出版社)，pp.16-17]。然而迄今為止，對(duì)了哥王的研究較少，多見于化學(xué)成分報(bào)道，活性研究?jī)H見抑制小鼠體內(nèi)淋巴癌P-338瘤株作用[Kato et al.，J.Nat.Prod.，1979，42159-162]以及PKC酶抑制作用[Ko et al.，Biochem.J.，1993，295321-327；Wang et al.，Euro.J.Pharm.，1995，288341-348；Chen et al.，Biochem.Pharm.，1996，521025-1032]。除此之外，未見任何有關(guān)抗愛滋病(AIDS)或者人體免疫缺陷病毒HIV-1和HIV-2的報(bào)道。愛滋病是一種傳染性很高并且極難治療的疾病，目前國內(nèi)外還未發(fā)現(xiàn)有治愈率較高的藥物的報(bào)道。本發(fā)明人在尋找中草藥抗愛滋病(AIDS)活性成分過程中，發(fā)現(xiàn)了哥王提取物具有很好的抗愛滋病(AIDS)活性，并且從中獲得多個(gè)具有抗愛滋病(AIDS)活性的雙香豆素、木脂素、黃酮、黃酮甙以及雙黃酮等多種骨架類型的化合物。
本發(fā)明的目的在于系統(tǒng)地研究了哥王的抗愛滋病(AIDS)活性成分，尋找得到抗愛滋病(AIDS)有效部位，開發(fā)了哥王抗愛滋病(AIDS)新用途，提供了一種抗愛滋病新藥了哥王提取物，并且提供了簡(jiǎn)單實(shí)用的工藝路線。
本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的以了哥王(Wikstroemia indica)的全草、根、莖葉或者果實(shí)為原料，采用溶劑提取法、溶劑萃取法、樹脂吸附法、聚酰胺吸附柱層析法、正相柱層析法、反相柱層析法等工藝中的一種或者多種工藝，并結(jié)合濃縮干燥、冷凍干燥、噴霧干燥等常用干燥方法制備成了哥王提取物。將制成的了哥王提取物作為抗愛滋病(AIDS)活性成分，使之與適宜的賦形劑相結(jié)合按照常規(guī)方法制成散劑、顆粒劑、片劑、膠囊劑、丸劑、栓劑、腸溶劑、注射劑、糖漿劑、乳劑、混懸劑、酊劑、膏劑、噴霧劑等劑型，用于治療包括由HIV-1和HIV-2病毒以及其他病毒引起的愛滋病(AIDS)及其各種并發(fā)癥。
植物原料了哥王(Wikstroemia indica)可以是全草，也可以是根、莖葉或者果實(shí)。原料可以是新鮮采集的，也可以是經(jīng)過炮制的。
作為抗愛滋病(AIDS)活性成分的了哥王提取物包括其中所含的各種類型的香豆素、雙香豆素、木脂素、黃酮、黃酮甙、雙黃酮以及其他骨架類型的化合物。
所采用的溶劑提取法中，可選用水、甲醇、乙醇或者其他低級(jí)脂肪醇中的一種溶媒，也可和其中的任意兩種或多種溶劑以任意比例所組成的混合溶媒，在室溫下浸潤提取或者用超聲波振蕩儀超聲振蕩提取，或者在加熱狀態(tài)下浸潤提取或回流提取。提取次數(shù)可以是一次，也可以是多次。
所采用的溶劑萃取法中，可將經(jīng)水或者低級(jí)脂肪醇中的一種溶媒或者混合溶媒提取并經(jīng)所獲得的提取物混懸于水中，用乙酸乙酯、正丁醇、含水乙酸乙酯或含水正丁醇中的一種或多種直接進(jìn)行萃取。或者經(jīng)低極性溶媒(如石油醚)脫脂后，再用乙酸乙酯、正丁醇、含水乙酸乙酯或含水正丁醇中的一種或多種進(jìn)行萃取。萃取次數(shù)可以是一次，也可以是多次。
所采用的樹脂吸附法中，樹脂可選用D-101型吸附樹脂、XAD-2型吸附樹脂、CHP-20P吸附樹脂以及其他類型的吸附樹脂，洗脫溶媒用甲醇、乙醇、丙酮、含水甲醇、含水乙醇或者含水丙酮中的一種或多種。洗脫時(shí)可以等濃度洗脫，也可以梯度洗脫。
所采用的聚酰胺吸附柱層析法中洗脫溶媒用甲醇或含水丙酮。洗脫時(shí)可以等濃度洗脫，也可以梯度洗脫。
所采用的正相柱層析法中，可選用常壓或加壓硅膠柱層析，所用柱填料可選柱層析用硅膠，或者薄層層析用硅膠，洗脫劑可選用苯/丙酮、二氯甲烷/丙酮、三氯甲烷/丙酮、二氯甲烷/甲醇、三氯甲烷/甲醇、乙酸乙酯/甲醇、苯/丙酮/水、二氯甲烷/丙酮/水、三氯甲烷/丙酮/水、二氯甲烷/甲醇/水、三氯甲烷/甲醇/水或者乙酸乙酯/甲醇/水等中的一種或者多種。洗脫時(shí)可以等濃度洗脫，也可以梯度洗脫。
所采用的反相柱層析法，可選用常壓或加壓反相柱層析，所用柱填料可選十八烷基鍵合相(ODS)或八烷基鍵合相，洗脫劑用含水甲醇或含水乙腈。洗脫時(shí)可以等濃度洗脫，也可以梯度洗脫。
所采用的干燥方法包括濃縮干燥、冷凍干燥、噴霧干燥等常用干燥方法。
作為抗愛滋病(AIDS)活性成分，了哥王提取物的用量為成年人每日1～1000mg，優(yōu)選30～800mg/天，每日服用2～3次。
口服給藥可制成片劑、散劑、顆粒劑、膠囊劑等常用劑型，至少需要一種賦型劑，如淀粉、乳糖、蔗糖、甘露糖、羥甲基纖維素等，片劑還可包衣。除這些賦型劑以外，還可使用硬脂酸鎂、月桂醇硫酸鈉、滑石粉等作為潤滑劑，糊精、結(jié)晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、阿拉伯膠、玉米淀粉、明膠等作為粘合劑，馬鈴薯淀粉、羥甲基纖維素作為崩解劑。此外，還可制成糖漿劑、乳劑、混懸劑等。對(duì)于這些劑型，可加入矯味劑、矯臭劑或著色劑等。
外用劑型包括栓劑、軟膏劑、外用散劑、噴霧劑、灌腸劑、乳劑等等。這里所使用的固體或液體添加劑是在本技術(shù)領(lǐng)域中經(jīng)常使用的。對(duì)于軟膏劑，選用由水、脂肪、脂肪油、羊毛脂、凡士林、甘油、蜂蠟、石蠟、液體石蠟、樹脂、高級(jí)醇、塑料、表面活性劑組成的疏水性基質(zhì)或親水性基質(zhì)(包括乳劑性基質(zhì)、水溶性基質(zhì)懸濁性基質(zhì))等在內(nèi)的添加劑。
制成注射劑時(shí)，一般用注射用蒸餾水、生理鹽水、葡萄糖水溶液、注射用植物油、丙二醇、聚乙二醇等。必要時(shí)，還可加入適宜的等張劑、助溶劑、抗氧劑、防腐劑等。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是為了哥王植物提供了新用途，工藝簡(jiǎn)單實(shí)用，抗愛滋病療效較好，并且無毒副作用。
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)的描述。
實(shí)施例1、溶劑提取法/溶劑萃取法合用提取制備了哥王提取物了哥王1.2kg用90％乙醇(101×3)在90℃下回流，合并提取液，濃縮得乙醇提取物。將乙醇提取物混懸于水中，用乙酸乙酯萃取，經(jīng)濃縮干燥即可得到了哥王提取物，收率為6.6％。
2、了哥王提取物的體外抑制HIV-1病毒實(shí)驗(yàn)了哥王提取物的體外抑制HIV-1病毒實(shí)驗(yàn)采用XTT法。1％的DMSO測(cè)試樣品溶液與等體積的感染上HIV-1病毒的T4淋巴細(xì)胞(CEM cell line)在96孔板上混合并以每孔10倍量依次稀釋，在37℃下于含有10％小牛血清(FCS)和50μg/ml gentamicin的PRMI-1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)6天。1％的DMSO測(cè)試樣品溶液與等體積的未感染HIV-1病毒的T4淋巴細(xì)胞(CEMcellline)液混合，于相同的培養(yǎng)條件下進(jìn)行培養(yǎng)作為對(duì)照。經(jīng)6天培養(yǎng)后，每孔加入XTT，通過顯微鏡觀察生存細(xì)胞數(shù)目以及評(píng)價(jià)細(xì)胞保護(hù)活性，并由對(duì)照組計(jì)算出測(cè)試樣品的IC50，EC50和TI50(IC50/EC50)。結(jié)果表明，了哥王提取物的IC50，EC50和TI50(IC50/EC50)值分別為130μg/ml，0.25μg/ml和520。
3、了哥王提取物50g與微晶纖維素45g及硬脂酸鎂5g混合，混合物用單沖壓片機(jī)打成Ф6mm，重量300mg的片劑。本片劑中每片含了哥王提取物150mg。結(jié)合癥狀。每次1～2次，每日服2～3次。
4、了哥王提取物10g與玉米淀粉40g混合，加水制成軟材，過12目篩造粒，干燥，得顆粒劑。本顆粒劑中，每500mg中含了哥王提取物100mg。結(jié)合癥狀，每次0.5～1.0g，每日服用2～3次。
5、了哥王提取物80g與乳糖110g，硬脂酸鎂10g混合，以每600mg填充膠囊。本膠囊劑中，每個(gè)膠囊含了哥王提取物150mg。結(jié)合癥狀，每次1～2個(gè)，每日服用2～3次。
6、了哥王提取物30g，加水300ml溶解，加橙皮甙4ml，加單糖漿至100ml得糖漿劑。本糖漿劑1ml中含了哥王提取物30mg。結(jié)合癥狀，每次6～10ml，每日服用2～3次。
7、了哥王提取物50g與微晶纖維素90g及硬脂酸鎂10g混合，混合物用單沖壓片機(jī)打成Ф6mm的片劑，并用CAP薄膜包表，制成重量300mg的腸溶制劑。本處方中每片含了哥王提取物100mg。結(jié)合癥狀，每次2～3片，每日服用2～3次。
8、了哥王提取物40g與乳糖100g、硬脂酸鎂10g混合，以每600mg填充腸溶膠囊。本腸溶膠囊劑中，每個(gè)膠囊含了哥王提取物160mg。結(jié)合癥狀，每次1～2個(gè)，每日服用2～3次。
9、了哥王提取物25g以普通注射劑制造法，用加熱至60℃的注射用蒸餾水1000ml溶解，用NaCl調(diào)解等張，封入安瓶。本注射劑10ml中含了哥王提取物250mg。結(jié)合癥狀，每次肌肉注射10ml，每日注射2～3次。
權(quán)利要求
1.一種抗愛滋病(AIDS)新藥了哥王提取的制備方法，其特征在于以了哥王(Wikstroemia indica)為原料，采用溶劑提取法、溶劑萃取法、樹脂吸附法、聚酰胺吸附柱層析法、正相柱層析法、反相柱層析法等工藝中的一種或者多種工藝，并結(jié)合濃縮干燥、冷凍干燥、噴霧干燥等常用干燥方法制備成了哥王提取物，將制成的了哥王提取物作為抗愛滋病(AIDS)活性成分，使之與適宜的賦形劑相結(jié)合，按照常規(guī)方法制成的口服給藥的內(nèi)用劑型及非口服給藥的注射劑和外用劑型在愛滋病(AIDS)及其各種并發(fā)癥治療中進(jìn)行應(yīng)用。
2.一種如權(quán)利要求1所述的抗愛滋病(AIDS)新藥了哥王提取物的制備方法，其特征在于植物原料了哥王(Wikstroemia indica)可以是全草，也可以是根、莖葉或者果實(shí)，原料可以是新鮮采集的，也可以是經(jīng)過炮制的。
3.一種如權(quán)利要求1所述的抗愛滋病(AIDS)新藥了哥王提取物的制備方法，其特征在于作為抗癌活性成分的了哥王提取物包括其中所含的各種類型的香豆素、雙香豆素、木脂素、黃酮、黃酮甙、雙黃酮以及其他骨架類型的化合物。
4.一種如權(quán)利要求1所述的抗愛滋病(AIDS)新藥了哥王提取物的制備方法，其特征在于所采用的溶劑提取法中，可選用水、甲醇、乙醇或者其他低級(jí)脂肪醇中的一種溶媒，也可選用其中的任意兩種或多種溶劑以任意比例所組成的混合溶媒，在室溫下浸潤提取或者用超聲波振蕩儀超聲振蕩提取，或者在加熱狀態(tài)下浸潤提取或回流提取，提取次數(shù)可以是一次，也可以是多次。
5.一種如權(quán)利要求1所述的抗愛滋病(AIDS)新藥了哥王提取物的制備方法，其特征在于所采用的溶劑萃取法中，可將經(jīng)水或者低級(jí)脂肪醇中的一種溶媒或者混合溶媒提取并經(jīng)所獲得的提取物混懸于水中，用乙酸乙酯、正丁醇、含水乙酸乙酯或含水正丁醇中的一種或多種直接進(jìn)行萃取?；蛘呓?jīng)低極性溶媒(如石油醚)脫脂后，再用乙酸乙酯、正丁醇、含水乙酸乙酯或含水正丁醇中的一種或多種進(jìn)行萃取，萃取次數(shù)可以是一次，也可以是多次。
6.一種如權(quán)利要求1所述的抗愛滋病(AIDS)新藥了哥王提取物的制備方法，其特征在于所采用的樹脂吸附法中，樹脂可選用D-101型吸附樹脂、XAD-2型吸附樹脂、CHP-20P吸附樹脂以及其他類型的吸附樹脂，洗脫溶媒用甲醇、乙醇、丙酮、含水甲醇、含水乙醇或者含水丙酮中的一種或多種。洗脫時(shí)可以等濃度洗脫，也可以梯度洗脫。
7.一種如權(quán)利要求1所述的抗愛滋病(AIDS)新藥了哥王提取物的制備方法，其特征在于所采用的聚酰胺吸附柱層析法中洗脫溶媒用甲醇或含水丙酮。洗脫時(shí)可以等濃度洗脫，也可以梯度洗脫。
8.一種如權(quán)利要求1所述的抗愛滋病(AIDS)新藥了哥王提取物的制備方法，其特征在于所采用的正相柱層析法中，可選用常壓或加壓硅膠柱層析，所用柱填料可選柱層析用硅膠，或者薄層層析用硅膠，洗脫劑可選用苯/丙酮、二氯甲烷/丙酮、三氯甲烷/丙酮、二氯甲烷/甲醇、三氯甲烷/甲醇、乙酸乙酯/甲醇、苯/丙酮/水、二氯甲烷/丙酮/水、三氯甲烷/丙酮/水、二氯甲烷/甲醇/水、三氯甲烷/甲醇/水或者乙酸乙酯/甲醇/水等中的一種或者多種。洗脫時(shí)可以等濃度洗脫，也可以梯度洗脫。
9.一種如權(quán)利要求1所述的抗愛滋病(AIDS)新藥了哥王提取物的制備方法，其特征在于所采用的反相柱層析法，可選用常壓或加壓反相柱層析，所用柱填料可選十八烷基鍵合相(ODS)或八烷基鍵合相，洗脫劑用含水甲醇或含水乙腈，洗脫時(shí)可以等濃度洗脫，也可以梯度洗脫。
10.一種如權(quán)利要求1所述的抗愛滋病(AIDS)新藥了哥王提取物的制備方法，其特征在于蒸餾濃縮的同時(shí)回收有機(jī)溶媒。
11.一種如權(quán)利要求1所述的抗愛滋病(AIDS)新藥了哥王提取物的制備方法，其特征在于所制成的制劑包括以下劑型散劑、顆粒劑、片劑、膠囊劑、丸劑、栓劑、腸溶劑、注射劑、糖漿劑、乳劑、混懸劑、酊劑、膏劑、噴霧劑。
全文摘要
本發(fā)明是一種抗愛滋病新藥了哥王提取物的制備方法,它以了哥王提取物為原料,制成可以治療愛滋病的各種制劑。采用溶劑提取法、反相柱層析法等工藝中的一種或者多種工藝,并結(jié)合濃縮干燥等常用干燥方法制備成了哥王提取物,將制成的了哥王提取物作為抗愛滋病(AIDS)活性成分,使之與適宜的賦形劑相結(jié)合,按照常規(guī)方法制成的口服給藥的內(nèi)用劑型及非口服給藥的注射劑和外用劑型在愛滋病(AIDS)及其各種并發(fā)癥治療中進(jìn)行應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61P31/00GK1252285SQ9811440
公開日2000年5月10日 申請(qǐng)日期1998年10月23日 優(yōu)先權(quán)日1998年10月23日
發(fā)明者姚新生, 胡柯 申請(qǐng)人:沈陽藥科大學(xué)