專利名稱：血漿病毒滅活的方法及其裝置的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及臨床輸注用血漿病毒滅活的方法及實(shí)施該方法的裝置，特別涉及一種采用光化學(xué)方法和過濾、吸附物理方法相結(jié)合的血漿病毒的滅活方法及實(shí)施該方法的裝置。
本發(fā)明提及的血漿是一種血液成分，它由供血者捐獻(xiàn)的全血中分離或用血液單采技術(shù)從捐獻(xiàn)者體內(nèi)分離而得，是臨床輸血治療一主要的血液成分。用于臨床輸注的血漿含有大量不穩(wěn)定的蛋白、凝血因子，它們往往在制備血漿過程中因環(huán)境溫度過高而喪失功能。常規(guī)制備血漿必須在一定的環(huán)境溫度下進(jìn)行，并在血液采集或單采后6小時(shí)內(nèi)完成，置于-20～-40℃冰凍保存。
光化學(xué)滅活病毒的研究始于30年代，自80年代起人們?cè)谘獫{中加入光敏物質(zhì)-亞甲藍(lán)，發(fā)現(xiàn)其吸收光能后對(duì)血漿中的脂包膜和一些非脂包膜病毒具有殺滅作用。亞甲藍(lán)滅活病毒的機(jī)理是亞甲藍(lán)與病毒核酸的G-C堿基對(duì)具有較大的親和性，當(dāng)亞甲藍(lán)吸收光能后，可激發(fā)產(chǎn)生單態(tài)分子氧，這種分子氧的能量形態(tài)可破壞病毒的核酸尤其是鳥嘌呤核，從而導(dǎo)致病毒基因的破壞。近年來，因輸注未經(jīng)病毒滅活的血漿或血漿制品導(dǎo)致的病毒性傳染疾病嚴(yán)重威脅著人們的健康，已經(jīng)采用的血漿病毒滅活技術(shù)如巴斯德法、有機(jī)溶劑/表面活性劑法，均因其僅適用于制備血漿制品等大批量樣品的處理，而使臨床輸注的血漿病毒滅活仍處于實(shí)驗(yàn)室摸索階段。
目前國外已有一些廠商針對(duì)臨床輸注血漿的病毒滅活提出了一些實(shí)施方案，如美國專利U.S.Pat.No.5,639,376A，但他們存在以下問題1.用于去除白細(xì)胞、吸附光敏劑的輸血過濾器件沒有與血液采集、分離系統(tǒng)組成一體，這在實(shí)際操作時(shí)血漿易被污染，它對(duì)保持被處理血漿中有效成份不受損傷帶來諸多不利因素。
2.光化學(xué)法滅活血漿病毒方法中，所采用的光敏劑劑量雖對(duì)人體無毒副作用，但輸入人體內(nèi)不易被排泄，超過一定積累量，仍可能會(huì)產(chǎn)生毒副作用。光敏劑的添加量決定病毒滅活的效果，以往的滅活技術(shù)忽視了它的添加方式，以及滅活病毒后將其即時(shí)排除。
3.給予光敏劑激發(fā)態(tài)能量的光源可以是全色光，但不同波段不同光強(qiáng)的光源對(duì)血漿中蛋白、凝血因子的損傷不一。采用熒光照射可最有效地降低對(duì)血漿中有效成分損傷。
目前臨床使用的沒有光敏劑添加組件和熒光照射塑料袋的四聯(lián)袋采血密閉系統(tǒng)可進(jìn)行各種血液成分的制備，其血液成分之一的血漿病毒滅活必須在這一系統(tǒng)中附設(shè)光敏劑添加組件和熒光照射塑料袋。由該四聯(lián)袋系統(tǒng)分離的血漿包括單采血漿仍包含約1.0×107的白細(xì)胞，這些白細(xì)胞攜帶了大量細(xì)胞內(nèi)病毒，光化學(xué)法對(duì)其滅活效果較差。另外，光化學(xué)法添加的光敏劑濃度雖對(duì)人體無毒副作用，但若大量輸入人體超出一定的積累量，亦有可能產(chǎn)生毒副作用。目前雖無明確證據(jù)，但其長期滯留于人體的潛在危害不可忽視。
在臨床上很需要沒有污染、有效成分不受破壞、已滅活病毒并已去除光敏劑和白細(xì)胞的血漿進(jìn)行輸注，以最大限度地降低由于輸注血漿對(duì)人體造成病毒傳染性疾病的傳播。一種理想的、且實(shí)際可操作的光化學(xué)法滅活臨床輸注用血漿病毒的流程，應(yīng)在一密閉的系統(tǒng)內(nèi)完成。這樣的系統(tǒng)既可避免滅活病毒操作繁復(fù)時(shí)間太長影響有效成分失去功能，又可防止操作時(shí)可能引起的二次污染以達(dá)到既能滅活細(xì)胞內(nèi)、細(xì)胞外病毒，又能保證臨床輸注安全的目的。
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供既可滅活血漿中游離病毒又能去除血漿中存在的細(xì)胞內(nèi)病毒，集血液采集、血漿分離、去除白細(xì)胞、吸附光敏劑為一體的血漿病毒滅活方法。
本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供實(shí)施上述方法的裝置。
本發(fā)明的目的是通過下列構(gòu)思來實(shí)現(xiàn)的一種血漿病毒的滅活方法，其特征在于它包括從全血中分離得血漿后，以光敏劑在血漿中的最終濃度達(dá)0.25-1.5微摩爾/升的量添加光敏劑；以30,000-45,000Lx的熒光強(qiáng)度照射20-80分鐘；過濾去除白細(xì)胞和光敏劑，這樣得到了滅活了病毒的血漿。
其中所述的光敏劑選自亞甲藍(lán)、甲基紫、甲苯胺藍(lán)、局部泌腺540(Merocanine540，Sigma Chemical Company生產(chǎn))、補(bǔ)骨脂素(Psoralen，Sigma Chemical Company生產(chǎn))。
一種用于滅活血漿病毒的裝置，包括光敏劑添加組件，袋體，去白細(xì)胞吸附光敏劑輸血過濾器件，導(dǎo)管，袋體與光敏劑添加組件、去白細(xì)胞吸附光敏劑輸血過濾器件組成一密閉系統(tǒng)。
其中所述的光敏劑添加組件包括易折導(dǎo)通式導(dǎo)管接頭、光敏劑加液管和儲(chǔ)液管。
所述的袋體包括采血袋、轉(zhuǎn)移袋、熒光照射袋和血漿儲(chǔ)存袋。


圖1是滅活血漿病毒的方法流程圖。
圖2是實(shí)施所述滅活血漿病毒方法的裝置的示意圖。
圖3是易折導(dǎo)通式光敏劑添加組件的示意圖。
圖4是本發(fā)明裝置的較佳實(shí)施方案。
圖5是溫控平行振搖式熒光照射儀控制示意圖。
下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步闡述。
參見附圖2，一種實(shí)施滅活血漿病毒方法的裝置，包括采血針1，采血袋3，導(dǎo)管2、4、5、7、8、10、12、13和16，第一轉(zhuǎn)移袋6，易折導(dǎo)通式光敏劑添加組件9，熒光照射袋11，去白細(xì)胞吸附光敏劑輸血過濾器件15和血漿儲(chǔ)存袋17。
采血袋3的容積可為常規(guī)大小，一般是200毫升，第一轉(zhuǎn)移袋6、熒光照射袋11和血漿儲(chǔ)存袋17的容積大小也可由本技術(shù)領(lǐng)域人員根據(jù)血漿的容量作出常規(guī)的選擇，較好的是200毫升。所述袋子的材料可為醫(yī)藥上可接受的聚合物材料，如聚氯乙烯等，導(dǎo)管材料可為聚氯乙烯等。
去白細(xì)胞吸附光敏劑輸血過濾器件15包括至少一個(gè)進(jìn)口和一個(gè)出口的塑料外殼，用作濾除白細(xì)胞的濾芯材料可以是聚丙烯、聚酯不織布，無鈣玻璃纖維、醋酸纖維或它們與天然棉纖維的混合物和對(duì)光敏劑亞甲藍(lán)及其產(chǎn)物有強(qiáng)吸附作用的活性碳纖維。通過改變這些濾芯材料表面特征，與血漿的接觸截面積或?yàn)V芯的填充量，調(diào)節(jié)自重流動(dòng)速率，實(shí)現(xiàn)白細(xì)胞去除率大于99.9％。
進(jìn)一步的是，過濾部件中還含有活性碳纖維，它對(duì)光敏劑及其產(chǎn)物有強(qiáng)的吸附作用，在去除白細(xì)胞的同時(shí)將85％以上的光敏劑吸附，使其對(duì)人體的影響降到最低限度。
參見圖3，所述的易折導(dǎo)通式光敏劑添加組件9包括易折導(dǎo)通式導(dǎo)管接頭20，光敏劑加液管21，儲(chǔ)液管22和易折封閉頭23。用于光敏劑添加組件的材料可為醫(yī)用高分子塑料避光材料，如含有色母的聚氯乙烯或醫(yī)用PBS。
其中儲(chǔ)液管22的容積可為3-5毫升，可由含有棕色色母的聚氯乙烯制成，易折封閉頭23可由硬性聚氯乙烯注塑制成，這樣只需用手一折，封閉頭23即被打開，從而使導(dǎo)管8與組件9、組件9與導(dǎo)管10得以溝通。
參見圖4，在本發(fā)明的較佳技術(shù)方案中，所述的滅活病毒裝置可進(jìn)一步包括導(dǎo)管18和血小板保存袋19。在離心后，采血袋3中放置的全血被分離成血漿和血小板，所述的血漿經(jīng)導(dǎo)管4和7進(jìn)入熒光照射袋11，所述的血小板經(jīng)導(dǎo)管7和18進(jìn)入血小板保存袋19供臨床上的使用。
將用采血針1收集的全血放在采血袋3中，離心分離后獲得的血漿經(jīng)導(dǎo)管4和5放在第一轉(zhuǎn)移袋6中，折斷易折導(dǎo)通式導(dǎo)管接頭20中的易折封閉頭23，使血漿經(jīng)導(dǎo)管7、8與易折導(dǎo)通式光敏劑添加組件9內(nèi)的光敏劑混合，其中這樣選擇光敏劑的量，使光敏劑在血漿中的最終濃度為0.25-1.5微摩爾/升，然后血漿和光敏劑混合經(jīng)導(dǎo)管10進(jìn)入熒光照射塑料袋11，高頻熱合導(dǎo)管10。將含有血漿的熒光照射塑料袋11、去白細(xì)胞吸附光敏劑輸血過濾器件15、血漿儲(chǔ)存袋17等組件，置于溫控平行振搖式熒光照射儀中，根據(jù)圖5所示的溫控平行振搖式熒光照射儀控制示意圖的工作方式，在4-18℃下于光強(qiáng)度為30,000-45,000Lx下照射20-80分鐘來滅活病毒，然后在去白細(xì)胞吸附光敏劑輸血過濾器件15以自重流動(dòng)工作方式、過濾速度為10-35毫升/分鐘來去除由白細(xì)胞攜帶的病毒并吸附光敏劑，再經(jīng)導(dǎo)管16流入儲(chǔ)存袋17，在冷凍保存前用排氣夾14排去空氣，高頻熱合導(dǎo)管16，將血漿儲(chǔ)存袋17保存在-20～-40℃環(huán)境下供臨床輸注或制備血漿制品用。
實(shí)施例110℃的環(huán)境溫度下，在全血經(jīng)離心后，分離得到123毫升血漿。分離后得到的血小板經(jīng)導(dǎo)管7到導(dǎo)管18進(jìn)入血小板保存袋19。血漿經(jīng)導(dǎo)管4、7、8、折斷易折導(dǎo)通式導(dǎo)管接頭20中的易折封閉頭23與易折導(dǎo)通式光敏劑添加組件9內(nèi)的0.123微摩爾亞甲藍(lán)(泰興市制藥廠生產(chǎn))混合，然后血漿和光敏劑混合物經(jīng)導(dǎo)管10進(jìn)入熒光照射袋11。將含有血漿的熒光照射塑料袋11、去白細(xì)胞吸附光敏劑輸血過濾器件15、血漿儲(chǔ)存袋17等組件，置于溫控平行振搖式熒光照射儀中，在4℃下于光強(qiáng)度為38,000Lx下照射30分鐘來滅活病毒，然后在過濾、吸附截面積為12厘米2的去白細(xì)胞吸附光敏劑輸血過濾器件15中以自重流動(dòng)工作方式、過濾速度為25-35毫升/分鐘來去除由白細(xì)胞攜帶的病毒并吸附亞甲藍(lán)，再經(jīng)導(dǎo)管16流入儲(chǔ)存袋17。用VSV、Sindbis指示病毒測(cè)量血漿logTCID50的變化，結(jié)果如下表1所示。在冷凍保存前用排氣夾14排去空氣，將血漿儲(chǔ)存袋17保存在-20～-40℃環(huán)境下供臨床輸注或制備血漿制品用，血小板保存袋19置于22℃環(huán)境備用。
根據(jù)實(shí)施例1所述的方法，除了熒光照射的時(shí)間30分鐘被照射時(shí)間5分鐘、10分鐘和15分鐘替代外其它基本根據(jù)實(shí)施例1所述的方法得到了血漿制品，用VSV，Sindbis指示病毒測(cè)定熒光照射時(shí)間不同對(duì)滅活血漿病毒效果的影響，結(jié)果如下表1所示。
表1亞甲藍(lán)+熒光照射不同時(shí)間含VSV，Sindbis病毒血漿log TCID50的變化光照時(shí)間(分鐘)病毒 滴度 100ml血漿稀釋 0(含MB) 5 10 15 30VSV 8.5 6.38 4.83 1.51.5 0.50.5Sindbis 8.5 6.33 4.52.33 1.250.50.5按照實(shí)施例1所述的方法，分別對(duì)下表2所列出的血漿進(jìn)行滅活病毒處理，結(jié)果如下表2所示。
表2亞甲藍(lán)/熒光照射煤火血漿病毒實(shí)施例結(jié)果序 血漿 亞甲 剩余 血漿蛋白回收率 凝血因子回收率號(hào) 體積 藍(lán)去 白細(xì)除率 胞(mL) (％) (×104) IgG IgM IgA Fg II VII VIII IXPLG AT-III1 123 ≥85.0 ≤1.0 87.30 92.77 100. 81.70 77.78 84.71 86.67 100. 98.59 75.862 117 ≥85.0 ≤1.0 83.56 100. 79.67 82.74 82.02 100. 71.21 81.25 75.32 90.123 109 ≥85.0 ≤1.0 100. 81.21 100. 87.82 78.65 100. 100. 71.21 98.21 98.654 132 ≥80.0 ≤1.0 95.81 100. 95.12 100. 94.25 100. 95.81 100. 86.57 94.125 105 ≥90.0 ≤1.0 90.91 99.00 100. 92.58 98.84 76.90 90.91 91.30 67.02 1006 116 ≥85.0 ≤1.0 98.08 88.68 94.79 73.99 78.65 87.38 98.08 73.13 85.53 90.287 106 ≥85.0 ≤1.0 100. 100. 100. 100. 100. 91.96 100. 90.74 73.17 95.458 103 ≥90.0 ≤1.0 88.69 96.84 84.27 82.74 86.42 91.67 88.69 89.83 91.84 100.9 121 ≥85.0 ≤1.0 91.67 100. 100. 100. 82.72 89.32 91.67 100. 100. 100.10 107 ≥85.0 ≤1.0 100. 90.00 100. 72.67 100. 71.43 100. 100. 76.19 93.65本發(fā)明采用光化學(xué)，并結(jié)合物理方法，制備經(jīng)病毒滅活、去白細(xì)胞的新鮮冰凍血漿，可滅活細(xì)胞內(nèi)、細(xì)胞外的病毒。整個(gè)制備過程在一次性使用、密閉的血液成分采集、分離、去白細(xì)胞、吸附光敏劑系統(tǒng)內(nèi)進(jìn)行，不需要無菌操作環(huán)境；病毒滴度下降6logTCID50以上，剩余白細(xì)胞數(shù)小于1.0×104，光敏劑的去除率大于85％，凝血因子回收率大于80％；操作方便，安全可靠，易推廣應(yīng)用。所述經(jīng)滅活病毒的血漿在常規(guī)的冰凍保存條件下能保存2年，大大方便了臨床上的使用。
權(quán)利要求
1.一種血漿病毒的滅活方法，其特征在于它包括從全血中分離得血漿后，以光敏劑在血漿中的最終濃度達(dá)0.25-1.5微摩爾/升的量添加光敏劑；以30,000-45,000Lx的熒光強(qiáng)度照射20-80分鐘；過濾去除白細(xì)胞和光敏劑，這樣得到了滅活了病毒的血漿。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的滅活方法，其特征在于所述的光敏劑選自亞甲藍(lán)、甲基紫、甲苯胺藍(lán)、局部泌腺540和補(bǔ)骨脂素。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的滅活方法，其特征在于所添加的光敏劑在血漿中的最終濃度為1.0微摩爾/升。
4.一種用于滅活血漿病毒的裝置，其特征在于它包括采血針(1)，采血袋(3)，導(dǎo)管(2)、(4)、(5)、(7)、(8)、(10)、(12)、(13)和(16)，第一轉(zhuǎn)移袋(6)，易折導(dǎo)通式光敏劑添加組件(9)，熒光照射袋(11)，去白細(xì)胞吸附光敏劑輸血過濾器件(15)和血漿儲(chǔ)存袋(17)。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的裝置，其特征在于所述的易折導(dǎo)通式光敏劑添加組件(9)包括易折導(dǎo)通式導(dǎo)管接頭(20)，光敏劑加液管(21)，儲(chǔ)液管(22)和易折封閉頭(23)。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的裝置，其特征在于該裝置進(jìn)一步包括血小板保存袋19，它通過導(dǎo)管18與所述的裝置相連。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種血漿病毒的滅活方法及其實(shí)施該方法的裝置,包括從全血中分離得血漿后,添加光敏劑;以30,000—45,000Lx的熒光強(qiáng)度照射20—80分鐘;過濾去除白細(xì)胞和光敏劑,這樣得到了滅活了病毒的血漿。該血漿的整個(gè)制備過程在一次性使用、密閉的血液成分采集、分離、去白細(xì)胞、吸附光敏劑系統(tǒng)內(nèi)進(jìn)行,不需要無菌操作環(huán)境;操作方便,安全可靠,易推廣應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61L2/08GK1249952SQ98121328
公開日2000年4月12日 申請(qǐng)日期1998年10月7日 優(yōu)先權(quán)日1998年10月7日
發(fā)明者許亞勇, 黃宇聞, 張欽輝, 錢開誠, 高峰, 謝如鋒 申請(qǐng)人:上海市血液中心