專利名稱：酰胺衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥，特別是具有鈣釋放依賴性鈣通道阻滯作用的酰胺衍生物，以及以此為有效成分的醫(yī)藥組合物，還特別涉及鈣釋放依賴性鈣通道阻滯劑。
以往，人們就知道各種細(xì)胞活化過(guò)程中作為細(xì)胞內(nèi)傳遞機(jī)制的鈣離子(Ca2+)的重要性。即使在炎癥細(xì)胞中Ca2+作為重要的調(diào)節(jié)因子也起一定作用。但是，以往作為Ca2+拮抗劑的硝苯吡啶(nifedipine)等膜電位依賴性Ca2+通道(以下略稱為VOCC)阻滯劑對(duì)炎癥細(xì)胞活化沒(méi)有抑制作用，這就表明在炎癥細(xì)胞中存在VOCC以外的Ca2+流入機(jī)制。
Hoth等報(bào)道在肥大細(xì)胞和淋巴細(xì)胞中存在由于Ca2+貯藏枯竭而引起的從具有選擇性的細(xì)胞外導(dǎo)入Ca2+的Ca2+流入機(jī)制，即鈣釋放依賴性鈣通道(Ca2+releaseactivated Ca2+channel；以下略稱為CRACC；也可稱為鈣貯藏依賴性鈣通道(Store-dependent Ca2+channel))，以及肥大細(xì)胞和淋巴細(xì)胞對(duì)膜電位無(wú)感應(yīng)性(PflugersArch.,430,p315-22(1995))。人們都知道CRACC存在于肥大細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、星形細(xì)胞(J.Biol.Chem.,270,p29-32(1995))等幾乎所有的炎癥細(xì)胞中，對(duì)細(xì)胞因子的產(chǎn)生及脂質(zhì)介質(zhì)的游離等有很大的影響(J.Immunol.,155,p285-96(1995)及Br.J.Pharmacol.,144,p598-601(1995))。
近年，由于明確了作為慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療劑的tenidap的作用機(jī)制之一是對(duì)CRACC的阻滯作用(Cell Calcium 14,p1-16(1993))，所以，CRACC阻滯劑在臨床上可能對(duì)慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等慢性炎癥有用。
此外，CRACC也存在于內(nèi)皮細(xì)胞(Am.J.Physiol.,269,C733-8(1995))及上皮細(xì)胞(J.Biol.Chem.,270,p169-75(1995))中。內(nèi)皮細(xì)胞受到自由基損傷與持續(xù)的鈣流入有關(guān)(Am.J.Physiol.,261,C889-896(1991)),CRACC阻滯劑對(duì)與內(nèi)皮細(xì)胞有關(guān)的組織損傷具有保護(hù)作用。
而且，有報(bào)道認(rèn)為抑制鈣的流入還可抑制細(xì)胞增殖和白細(xì)胞介素-2(IL-2)的產(chǎn)生(Br.J.Pharmmacol.,133,p861-8(1994)),CRACC阻滯劑作為惡性腫瘤等增殖性或進(jìn)行性疾病、自身免疫疾病的預(yù)防.治療劑有用，作為移植時(shí)排斥反應(yīng)的抑制劑也有用。
另一方面，已知代表平滑肌細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞的興奮性細(xì)胞通過(guò)VOCC調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的鈣，與CRACC無(wú)關(guān)。所以，相對(duì)于VOCC而言，對(duì)CRACC具有選擇性的鈣通道阻滯劑對(duì)血管平滑肌和中樞神經(jīng)沒(méi)有顯現(xiàn)出不良作用，可作為對(duì)各種炎癥性疾病、變應(yīng)性疾病、自身免疫疾病、組織損傷、增殖性疾病等的預(yù)防或治療有用的藥物使用。
近年，還報(bào)道了一些具有CRACC阻滯作用的化合物，例如，德國(guó)公開(kāi)公報(bào)4404249號(hào)揭示了環(huán)烷基-哌嗪乙醇衍生物、WO94/00435號(hào)公報(bào)揭示了2-(3,4-二氫-1-異喹啉基)乙酰胺衍生物。此外，文獻(xiàn)(J.Pharm.Exp.Ther.,257,p967-971(1991))揭示了具有CRACC阻滯作用的5-氨基-1-[[3,5-二氯-4-(4-氯苯甲酰)苯基]-甲基]-1H-1,2,3-三唑-4-羧酰胺。但是，沒(méi)有報(bào)道對(duì)VOCC具有CRACC選擇性的化合物。
另一方面，德國(guó)公開(kāi)公報(bào)2525024號(hào)揭示了顯現(xiàn)抗炎作用的5-(雜環(huán)氨基苯基)-1-苯基吡唑衍生物。但是，既沒(méi)有揭示也沒(méi)有暗示它具有CRACC阻滯作用和抑制IL-2產(chǎn)生的作用。
WO95/18097號(hào)公報(bào)揭示了具有環(huán)GMP磷酸二脂酶抑制作用的下式表示的氨茴酸衍生物。式中，R1至R4表示可被H、鹵素、…取代的吡唑基、…，n表示0～6,W表示N或CH,Y表示O或S、…(詳細(xì)情況參考該公報(bào))。
日本專利公開(kāi)公報(bào)平9-59236號(hào)揭示了對(duì)類風(fēng)濕性、變應(yīng)性及其他炎癥性疾病的預(yù)防、治療有用的下式表示的R1、R2-二取代的苯甲酰胺衍生物。式中，R1表示取代或無(wú)取代的芳香族雜環(huán)基、…，R2表示鹵原子、硝基、-NR5R6、…,A表示-C(=Z)NR3R4或-NR4C(=Z)R3,R3表示取代或無(wú)取代的芳香族烴基、取代或無(wú)取代的芳香族雜環(huán)基…(詳細(xì)情況參考該公報(bào))。但是，作為R1的芳香族雜環(huán)基，對(duì)吡唑基沒(méi)有具體揭示。而且，對(duì)CRACC阻滯作用和抑制IL-2產(chǎn)生的作用也沒(méi)有揭示。
本發(fā)明者們對(duì)具有良好CRACC阻滯作用的化合物進(jìn)行認(rèn)真研究的結(jié)果是，發(fā)現(xiàn)結(jié)構(gòu)與以往報(bào)道的具有CRACC阻滯作用的化合物完全不同的酰胺衍生物具有良好的CRACC阻滯作用。而且，還發(fā)現(xiàn)這些化合物對(duì)VOCC具有很高的CRACC選擇性，從而完成了本發(fā)明。
即，本發(fā)明涉及以下通式(Ⅰ)表示的新穎的酰胺衍生物或其制藥學(xué)上允許的鹽。
(式中符號(hào)的含義如下D可帶有1至3個(gè)作為取代基的可被鹵素取代或無(wú)取代的低級(jí)烷基的吡唑基，B亞苯基或亞噻吩基，X式-NH-CO-或式-CO-NH-表示的基團(tuán)，A可被鹵素取代的苯基、可被低級(jí)烷基取代的5～6元單雜環(huán)芳基；但是，4-甲基-4′-[3,5-雙(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]-1,2,3-噻二唑-5-羧酰替酰胺(以下用化合物A表示)和4′-氯-5-(1-甲基-5-三氟甲基)-1H-吡唑-3-基)噻吩-2-羧酰替酰胺(以下用化合物B表示)除外。以下相同。)此外，化合物A和化合物B在MAYBRIDGE公司試劑目錄(UK,Cornwall,1995年8月發(fā)行)中作為SEW04225及KM02940記載，是公知的化合物。但是，對(duì)其用途，無(wú)論是醫(yī)藥方面的用途或其他用途都沒(méi)有任何報(bào)道。
本發(fā)明的通式(Ⅰ)表示的較好的化合物是D為至少可被1個(gè)三氟甲基取代的吡唑基或1-甲基-3-三氟甲基-1H-比唑-5-基或3,5-雙(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基，A為可被鹵原子取代的苯基或可被低級(jí)烷基取代的選自噻唑基、噻二唑基、噻吩基及吡啶基的5～6元單雜環(huán)芳基的酰胺衍生物或其制藥學(xué)上允許的鹽。
本發(fā)明還涉及包含化合物A及化合物B的以下通式(Ⅰ′)表示的酰胺衍生物或其制藥學(xué)上允許的鹽和制藥學(xué)上允許的載體的醫(yī)藥組合物。特別是鈣釋放依賴性鈣通道阻滯用醫(yī)藥組合物。較好的是IL-2產(chǎn)生抑制劑，變應(yīng)性、慢性炎癥性或自身免疫疾病的預(yù)防或治療劑、支氣管哮喘或慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的預(yù)防或治療劑。
(式中符號(hào)的含義如下D可帶有1～3個(gè)作為取代基的可被鹵素取代或無(wú)取代的低級(jí)烷基的吡唑基，B亞苯基或亞噻吩基，X式-NH-CO-或式-CO-NH-表示的基團(tuán)，A可被鹵素取代的苯基、可被低級(jí)烷基取代的5～6元單雜環(huán)芳基；以下相同)本說(shuō)明書(shū)中對(duì)“低級(jí)”沒(méi)有特別的限定，表示碳原子數(shù)為1～6的直鏈或支鏈碳鏈?！暗图?jí)烷基”較好的是甲基、乙基和丙基。“5～6元單雜環(huán)芳基”表示含有1～4個(gè)選自氮原子、硫原子和氧原子的雜原子的5～6元單雜環(huán)芳基，較好的是噻吩基、噻唑基、噻二唑基、吡啶基。“亞苯基”較好的是1,4-亞苯基，“亞噻吩基”較好的是2,5-亞噻吩基。
“鹵原子”較好的是F和Cl。“可被鹵原子取代的低級(jí)烷基”較好的是三氟甲基。
本發(fā)明的取代基有時(shí)存在幾何異構(gòu)體和互變異構(gòu)體，本發(fā)明包括從這些異構(gòu)體中分離出來(lái)的單體或昆合物。而且，本發(fā)明的化合物有時(shí)具有手性碳，存在以此為基礎(chǔ)的(R)體、(S)體旋光異構(gòu)體。本發(fā)明包括全部光學(xué)異構(gòu)體的混合物及分離出來(lái)的單體。
本發(fā)明的化合物(Ⅰ)或(Ⅰ′)還包括酸加成鹽或由于取代基的不同而與堿形成的鹽。這些鹽為制藥學(xué)上允許的鹽，較好的是與鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸、硝酸、磷酸等無(wú)機(jī)酸，甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、馬來(lái)酸、乳酸、蘋(píng)果酸、酒石酸、檸檬酸、甲磺酸、乙磺酸、天冬氨酸、谷氨酸等有機(jī)酸形成的酸加成鹽；與鈉、鉀、鎂、鈣、銨等無(wú)機(jī)堿，甲胺、乙胺、乙醇胺、賴氨酸、鳥(niǎo)氨酸等有機(jī)堿形成的鹽或銨鹽等。
此外，本發(fā)明還包括本發(fā)明化合物(Ⅰ)或(Ⅰ′)及其鹽的各種水合物和溶劑合物及多晶型物質(zhì)。
(制備方法)利用本發(fā)明的化合物及其制藥學(xué)上允許的鹽的基本骨架或以取代基的種類為基礎(chǔ)的特征，通過(guò)各種公知的合成方法能夠制備本發(fā)明的化合物及其制藥學(xué)上允許的鹽。此時(shí)，根據(jù)官能團(tuán)的種類有時(shí)用下列手段可在制備技術(shù)上獲得效果，即在原料至中間體階段將官能團(tuán)用適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)基保護(hù)起來(lái)，也就是轉(zhuǎn)變?yōu)榭扇菀椎剞D(zhuǎn)換為該官能團(tuán)的基團(tuán)。然后，如有必要可除去保護(hù)基，獲得所希望的化合物。這類官能團(tuán)包括羥基和羧基等。這類保護(hù)基包括Greene和Wuts著《(ProtectiveGroups in Organic Synthesis》第2版中記載的保護(hù)基，只要符合反應(yīng)條件即可使用。
以下，對(duì)本發(fā)明化合物的具有代表性的制備方法進(jìn)行說(shuō)明。
制備方法1
本制備方法如前述反應(yīng)式所示，使通式(Ⅱ)或(Ⅴ)表示的酰胺衍生物和通式(Ⅲ)或(Ⅳ)表示的羧酸衍生物進(jìn)行酰胺化反應(yīng)，就可獲得本發(fā)明化合物(Ⅰ-1)或(Ⅰ-2)。
可在制備方法1中使用的羧酸衍生物(Ⅲ)或(Ⅳ)為游離羧酸或其反應(yīng)性衍生物，作為反應(yīng)性衍生物包括酰氯、酰溴等酰鹵化物，?；B氮，用甲醇、乙醇、芐醇、可被取代的苯酚、1-羥基苯并三唑、N-羥基琥珀酰亞胺等調(diào)制成的活性酯，對(duì)稱酸酐，與烷基碳酸、對(duì)甲苯磺酸等的混合酸酐等。這些反應(yīng)性衍生物可使用市售產(chǎn)品，也可通過(guò)常用的方法制備。
酰胺化反應(yīng)可按照常用方法進(jìn)行。
在使用游離羧酸時(shí)，較好的是在反應(yīng)時(shí)使用N,N′-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺(WSCD)等縮合劑或1,1′-羰基二咪唑、N,N′-二琥珀酰亞胺基碳酸酯、二苯基磷酰迭氮、磷酰氯、三氯化磷、三苯膦/N-溴琥珀酰亞胺等羧酸的活化劑。
使用等摩爾或其中之一過(guò)量的通式(Ⅱ)或(Ⅴ)表示的酰胺衍生物和通式(Ⅲ)或(Ⅳ)表示的羧酸衍生物，在對(duì)反應(yīng)無(wú)影響的有機(jī)溶劑，例如，吡啶、四氫呋喃(THF)、二噁烷、乙醚、苯、甲苯、二氯甲烷、1,2-二氯乙烷(DCE)、氯仿、二甲基甲酰胺(DMF)、乙酸乙酯、乙腈等溶劑中進(jìn)行反應(yīng)。反應(yīng)溫度可根據(jù)反應(yīng)衍生物的種類作適當(dāng)?shù)倪x擇。
根據(jù)反應(yīng)性衍生物的種類可添加三乙胺、吡啶、甲基吡啶、N,N-二甲基苯胺、碳酸鉀、氫氧化鈉等堿以促進(jìn)反應(yīng)的進(jìn)行。其中吡啶兼有溶劑的作用。制備方法2
(式中，Ra和Rb表示H或低級(jí)烷基。)本制備方法就是使與通式(Ⅵ)表示的化合物的酮相連的碳原子三氟乙?；?，使其與肼衍生物反應(yīng)環(huán)化而獲得本發(fā)明化合物(Ⅰ-3)。
步驟1的三氟乙?；稍诩状尖c、乙醇鈉、堿金屬六甲基二甲硅烷基胺、氫化鈉、烷基鋰、三乙胺等堿存在下，在-78℃使三氟乙?；瘎?例如，三氟乙酸乙酯、三氟乙酸酐等)在甲醇、乙醇、1,3-二甲基咪唑烷基-2-酮(DMI)、THF、DMF等溶劑中加熱回流而反應(yīng)。
步驟2的環(huán)化反應(yīng)是在乙酸、鹽酸等酸或異丙醇鈦(Ⅳ)、氯化鈦(Ⅳ)、三氟化硼-乙醚配位化合物等路易斯酸存在下或非存在狀態(tài)下，在甲醇、乙醇等溶劑中或無(wú)溶劑狀態(tài)下使步驟1獲得的化合物和肼衍生物反應(yīng)。該反應(yīng)可在冷卻下至加熱回流條件下進(jìn)行。
(原料化合物的制備方法)上述制備方法中的原料化合物可使用市售產(chǎn)品，也可通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法合成。
通過(guò)上述各制備方法獲得的反應(yīng)生成物可作為游離化合物、其鹽、其水合物或各種溶劑合物而分離精制。鹽可通過(guò)常用的成鹽反應(yīng)獲得。分離精制可使用萃取、濃縮、蒸餾、結(jié)晶化、過(guò)濾、重結(jié)晶、各種色譜法等常用化學(xué)方法。各種異構(gòu)體可利用異構(gòu)體間的物理化學(xué)性質(zhì)差通過(guò)常用方法分離。例如，旋光異構(gòu)體可通過(guò)一般的消旋拆分法，如分別結(jié)晶化或色譜法等被分離。此外，旋光異構(gòu)體也可由具備適當(dāng)光學(xué)活性的游離化合物合成。
本發(fā)明化合物作為醫(yī)藥組合物的活性成分有用。由于特別具有CRACC阻滯作用和抑制IL-2產(chǎn)生的作用，所以，作為CRACC阻滯劑或IL-2產(chǎn)生抑制劑有用。
特別是作為與CRACC和IL-2的產(chǎn)生有關(guān)的變應(yīng)性、慢性炎癥性或自身免疫疾病的預(yù)防治療劑有用。變應(yīng)性、慢性炎癥性或自身免疫疾病是指支氣管哮喘、牛皮癬、包括特應(yīng)性皮炎在內(nèi)的特應(yīng)性疾病、包括克羅恩病在內(nèi)的炎癥性大腸疾病、消化性潰瘍、腎炎、肝炎、胰腺炎、膠原性疾病、慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、變形性關(guān)節(jié)炎、移植時(shí)的排斥反應(yīng)等，包括與CRACC或IL-2產(chǎn)生有關(guān)的各種疾病。
通過(guò)后述的CRACC阻滯作用和IL-2產(chǎn)生抑制作用等體外試驗(yàn)結(jié)果，以及使用作為支氣管哮喘的代表性疾病模型的抗原誘發(fā)氣管內(nèi)嗜酸細(xì)胞浸潤(rùn)模型，與T細(xì)胞活化有關(guān)的疾病模型及小鼠膠原性關(guān)節(jié)炎模型等動(dòng)物疾病模型的各種試驗(yàn)結(jié)果，可明確本發(fā)明化合物對(duì)上述疾病的作用。此外，本發(fā)明化合物還具有抑制IL-4和IL-5產(chǎn)生的作用、抑制MMP-1產(chǎn)生的作用、抑制TNFα產(chǎn)生的作用等，從這些結(jié)果也可說(shuō)明對(duì)上述疾病的作用。
另一方面，由于CRACC阻滯劑對(duì)細(xì)胞增殖具有抑制作用，所以，對(duì)惡性腫瘤、動(dòng)脈硬化、多臟器硬化癥、各種纖維化疾病及燒傷后瘢痕等增殖性或進(jìn)行性疾病的預(yù)防或治療有用。此外，由于CRACC阻滯劑還能夠抑制肥大細(xì)胞、炎癥細(xì)胞或星形細(xì)胞這些外周或中樞組織中與炎癥反應(yīng)有關(guān)的細(xì)胞的活化，所以，對(duì)缺血再回流損傷、頭部外傷、腦梗塞和心肌梗塞這些組織損傷有保護(hù)作用。
特別是相對(duì)于VOCC，具有選擇性CRACC阻滯作用的本發(fā)明化合物可顯現(xiàn)出CRACC阻滯作用，但不會(huì)因阻滯VOCC而對(duì)中樞神經(jīng)或血管平滑肌產(chǎn)生不良作用，所以十分有用。
以下是為了證明本發(fā)明化合物的藥理作用而進(jìn)行的試驗(yàn)及其結(jié)果。
(1)CRACC阻滯作用將載有鈣指示熒光色素fura-2(1μM)的PCI2-h5大鼠成神經(jīng)細(xì)胞(Jurkat細(xì)胞，6×106/ml)懸浮液100μl分別注入96孔微量測(cè)定板的各個(gè)孔內(nèi)。在各個(gè)孔中再添加包含最終濃度2倍濃度的受試藥物和2μM鈣泵抑制劑サプシガルギン(最終濃度為1μM)的Hanks平衡鹽溶液100μl，使サプシガルギン刺激細(xì)胞內(nèi)鈣濃度上升，添加30分鐘后獲得激發(fā)波長(zhǎng)340nm/500nm和激發(fā)波長(zhǎng)380nm/500nm的熒光強(qiáng)度，由這兩個(gè)熒光強(qiáng)度可算出熒光強(qiáng)度比(R)。計(jì)算該熒光強(qiáng)度比時(shí)，事先用不存在細(xì)胞的體系，以同樣的方法測(cè)定受試藥物自身的熒光性，校正自身熒光對(duì)fura-2熒光的影響。
從25μMイォノマイシン刺激獲得的最大反應(yīng)熒光強(qiáng)度比(Rmax)、5μMイォノマイシン+1mMEGTA刺激獲得的最小反應(yīng)熒光強(qiáng)度比(Rmin)、激發(fā)波長(zhǎng)為380nm時(shí)的鈣結(jié)合色素的熒光率(Sb2)和激發(fā)波長(zhǎng)為380nm時(shí)的鈣解離色素的熒光率(Sf2)算出細(xì)胞內(nèi)的鈣濃度。
計(jì)算式細(xì)胞內(nèi)鈣濃度(nM)=224×[(R-Rmin)/(Rmax-R)]×[Sf2/Sb2]。
從在所得各濃度受試藥物存在下的細(xì)胞內(nèi)鈣濃度和僅由溶劑獲得的對(duì)照組的細(xì)胞內(nèi)鈣濃度，可算出各濃度受試藥物對(duì)鈣流入細(xì)胞內(nèi)的阻滯(CRACC阻滯)率，算出表示50％CRACC阻滯的濃度(IC50值)。
實(shí)施例1～6的化合物的IC50值在0.51～0.050μM的范圍內(nèi)。
(2)對(duì)VOCC阻滯作用的選擇性將載有鈣指示熒光色素fura-2(1μM)的PC12-h5大鼠成神經(jīng)細(xì)胞(Jurkat細(xì)胞，2×106/ml)懸浮液100μl分別注入96孔微量測(cè)定板的各個(gè)孔內(nèi)。在各個(gè)孔中再添加包含最終濃度2倍濃度的受試藥物和100mM KCl(最終濃度為50mM)的Hanks平衡鹽溶液l00μl，使高濃度氯化鈣刺激細(xì)胞內(nèi)鈣濃度上升，添加30分鐘后獲得激發(fā)波長(zhǎng)340nm/500nm和激發(fā)波長(zhǎng)380nm/500nm的熒光強(qiáng)度，由這兩個(gè)熒光強(qiáng)度算出熒光強(qiáng)度比(R)。計(jì)算該熒光強(qiáng)度比時(shí)，事先用不存在細(xì)胞的體系，以同樣的方法測(cè)定受試藥物自身的熒光性，校正自身熒光對(duì)fura-2熒光的影響。
與前述CRACC阻滯作用相同，算出VOCC阻滯作用的IC50值，并進(jìn)行比較。
實(shí)施例1～6的化合物的VOCC阻滯作用比各自的CRACC阻滯作用弱16倍以上。
(3)抑制IL-2產(chǎn)生的作用使用PC12-h5大鼠成神經(jīng)細(xì)胞(Jurkat細(xì)胞)，按照S.Clare Chung等在Br.J.Pharmacol.,113:861-868,1994中記載的方法測(cè)試抑制IL-2產(chǎn)生的活性，求出IC50值。
本發(fā)明化合物顯示1μM以下的IC50值。
(4)對(duì)TNCB誘發(fā)接觸性過(guò)敏癥(TNCB-induced Contact Hypersensitivity)的作用使用5周齡的雄性ICR小鼠，采用與記載在Current Protocol inImmunology(John Wiley & Sons,Inc.1994)上相同的方法測(cè)試本發(fā)明化合物對(duì)TNCB誘發(fā)接觸性過(guò)敏癥的效果。
(5)對(duì)ConA誘發(fā)小鼠肝病模型的保肝作用使用4～5周齡的Balb/c小鼠(SLC)，采用與G.Tiegs等在J Clin.Invest.1992.90:196-203上記載的相同方法進(jìn)行試驗(yàn)。其結(jié)果是本發(fā)明化合物顯現(xiàn)出劑量依賴性的保肝效果。
(6)對(duì)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型的抗關(guān)節(jié)炎作用使用5周齡的雄性DBA/1J小鼠(日本チヤ-ルスリバ-)，以記載在FumioNishikaku and Yoshihiko Koga,Immunopharmacology,25,65-74(1993)和FuminoriKato,Masanao Nomura and Kyoko Nakamura,Annal of the Rheumatic Disease 55,535-539(1996)上的方法為基準(zhǔn)，測(cè)試抗關(guān)節(jié)炎作用。本發(fā)明的化合物顯現(xiàn)出明顯的抗關(guān)節(jié)炎作用。
(7)對(duì)嗜酸性細(xì)胞浸潤(rùn)的抑制作用(抗原引起的大鼠呼吸道嗜酸性細(xì)胞增多)使用4周齡的雄性BN大鼠，采用與W.Elwood等在Inflamm.Res.,44:83-86,1995上記載的相同方法，測(cè)試對(duì)嗜酸性細(xì)胞浸潤(rùn)的抑制作用。此外，靜脈給藥在抗原暴露30分鐘前進(jìn)行，經(jīng)口給藥在抗原暴露1小時(shí)前和3小時(shí)后進(jìn)行。
本試驗(yàn)中，本發(fā)明化合物使白細(xì)胞總數(shù)和嗜酸性細(xì)胞數(shù)減少，對(duì)嗜酸性細(xì)胞的浸潤(rùn)有抑制作用。
包括本發(fā)明化合物(Ⅰ′)或其鹽和制藥學(xué)上允許的載體的醫(yī)藥組合物可由1種或2種以上通式(Ⅰ′)表示的化合物或其鹽，利用制劑化時(shí)常用的藥劑用載體、賦形劑、其他添加劑，通過(guò)常用方法調(diào)制而得。給藥時(shí)可采用片劑、丸劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑、溶液劑等經(jīng)口給藥，或靜注、肌注等注射劑、栓劑、經(jīng)皮等非經(jīng)口給藥的任何一種方式。
本發(fā)明經(jīng)口給藥的固體組合物包括片劑、散劑、顆粒劑等。這些固體組合物中混合了1種或1種以上的活性物質(zhì)和至少1種惰性稀釋劑，如乳糖、甘露糖醇、葡萄糖、羥丙基纖維素、微晶纖維素、淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、硅鋁酸鎂。根據(jù)常用方法，組合物中還可包含惰性稀釋劑以外的添加劑，如硬脂酸鎂等潤(rùn)滑劑和纖維素乙醇酸鈣等崩解劑，乳糖等穩(wěn)定劑，谷氨酸或天冬氨酸等助溶劑。如有必要，還可在片劑或丸劑外包裹蔗糖、明膠、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯等糖衣或胃溶性、腸溶性薄膜。
經(jīng)口給藥的液體組合物包括藥劑學(xué)上允許的乳濁劑、溶液劑、混懸劑、糖漿劑和酏劑等，其中包含常用的惰性稀釋劑，如精制水、乙醇等。這種組合物中除了惰性稀釋劑以外還可包含濕潤(rùn)劑、懸浮劑等助劑，甜味劑，矯味劑，芳香劑和防腐劑。
非經(jīng)口給藥的注射劑包括無(wú)菌水性或非水性溶液劑，混懸劑，乳濁劑。水性溶液劑和混懸劑中包含注射用蒸餾水和生理鹽水。非水性溶液劑和混懸劑中包含丙二醇，聚乙二醇，橄欖油等植物油，乙醇等醇類，吐溫80等。這些組合物中還可包含防腐劑，濕潤(rùn)劑，乳化劑，分散劑，穩(wěn)定劑(例如乳糖)，助溶劑(例如谷氨酸、天冬氨酸)等助劑。它們可通過(guò)濾菌薄膜過(guò)濾，配合使用滅菌劑或通過(guò)照射達(dá)到無(wú)菌化目的?；?qū)⑺鼈冎瞥蔁o(wú)菌固體組合物，在使用前用無(wú)菌水或無(wú)菌注射用溶劑溶解。
通常經(jīng)口給藥時(shí)1天的藥量相對(duì)于體重約為0.001～10mg/kg，可1次或分為2～4次給藥。靜脈注射時(shí)1天的給藥量相對(duì)于體重約為0.0001～1mg/kg，可1次或分為數(shù)次給藥。給藥量可根據(jù)癥狀、年齡、性別等的情況作適當(dāng)選擇。
以下，以實(shí)施例為基礎(chǔ)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更為詳細(xì)的說(shuō)明。本發(fā)明化合物并不僅限于實(shí)施例中記載的化合物。
實(shí)施例1在室溫下徹夜攪拌4-甲基噻唑-5-羧酸(108mg)、4-[3,5-雙(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]苯胺(223mg)、WSCD鹽酸鹽(152mg)和DCE(5ml)的混合物。在反應(yīng)液中添加水(10ml)，用乙醚(5ml)和乙酸乙酯(10ml)的混合溶劑萃取生成物。然后依次用1當(dāng)量的鹽酸、飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和食鹽水洗滌萃取液。用無(wú)水硫酸鎂干燥有機(jī)層后，在減壓條件下濃縮。所得殘?jiān)霉枘z柱色譜法(洗脫液正己烷∶乙酸乙酯=2∶1)精制后，用乙酸乙酯和正己烷的混合溶劑重結(jié)晶，獲得為無(wú)色針狀結(jié)晶的4-甲基-4′-[3,5-雙(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]噻唑-5-羧酰替苯胺(143mg)。
實(shí)施例2在2-氯苯胺(68mg)、吡啶(42mg)和二氯甲烷(2ml)的混合物中添加5-(1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-5-基)噻吩-2-酰氯(150mg)和二氯甲烷(1.5ml)的混合物，在室溫下攪拌30分鐘。然后在反應(yīng)液中添加飽和碳酸氫鈉水溶液，用乙酸乙酯萃取生成物后，用飽和食鹽水洗滌萃取液。用無(wú)水硫酸鎂干燥有機(jī)層后，在減壓條件下濃縮。所得殘?jiān)靡掖贾亟Y(jié)晶，獲得為無(wú)色結(jié)晶的2′-氯-5-(1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-5-基)噻吩-2-羧酰替苯胺(80mg)。此外，使5-(1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-5-基)噻吩-2-羧酸和草酰氯反應(yīng)，獲得為褐色固體的上述原料化合物5-(1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-5-基)噻吩-2-酰氯。
實(shí)施例3在冰冷卻條件下，在4′-乙?；?4-氯苯甲酰替苯胺(1.00g)和DMI(10ml)的混合物中添加甲醇鈉(257mg)，在室溫下攪拌2小時(shí)。然后在反應(yīng)液中添加三氟乙酸乙酯(0.522ml)，于60℃攪拌2天。接著在反應(yīng)液中添加水(50ml)和1當(dāng)量鹽酸(10ml)，用乙酸乙酯萃取生成物后，依次用水、飽和食鹽水洗滌萃取液。用無(wú)水硫酸鎂干燥有機(jī)層后，在減壓下濃縮。然后在室溫下攪拌所得殘?jiān)图谆?0.206ml)、乙酸(2ml)和乙醇(20ml)的混合物，歷時(shí)21小時(shí)。在減壓下濃縮反應(yīng)液后，在所得殘?jiān)刑砑右宜嵋阴?100ml)，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和食鹽水洗滌。用無(wú)水硫酸鎂干燥有機(jī)層后，在減壓下濃縮。所得殘?jiān)霉枘z柱色譜法(洗脫液正己烷∶乙酸乙酯=3∶1)精制后，用乙酸乙酯和正己烷的混合溶劑重結(jié)晶，獲得為無(wú)色粉末狀結(jié)晶的4-氯-4′-(1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-5-基)苯甲酰替苯胺(440mg)。
與實(shí)施例1同樣操作，能夠分別獲得后述表1的實(shí)施例4(4-甲基-4′-[3,5-雙(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]-1,2,3-噻二唑-5-羧酰替苯胺)、實(shí)施例5(3-甲基-4′-[3,5-雙(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]噻吩-2-羧酰替苯胺)及實(shí)施例6(4′-[3,5-雙(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]吡啶-3-羧酰替苯胺)的化合物。
實(shí)施例化合物的結(jié)構(gòu)和物理化學(xué)性質(zhì)如表1所示。表中Ex表示實(shí)施例編號(hào)，Str表示結(jié)構(gòu)式，Dat表示物理化學(xué)性質(zhì)，mp表示熔點(diǎn)，NMR表示核磁共振譜(DMSO-d6,TMS內(nèi)標(biāo))δppm。
表權(quán)利要求
1．酰胺衍生物或其制藥學(xué)上允許的鹽，其特征在于，由以下通式(Ⅰ)表示，
式中符號(hào)的含義如下D可帶有1至3個(gè)作為取代基的可被鹵素取代或無(wú)取代的低級(jí)烷基的吡唑基，B亞苯基或亞噻吩基，X式-NH-CO-或式-CO-NH-表示的基團(tuán)，A可被鹵素取代的苯基、可被低級(jí)烷基取代的5～6元單雜環(huán)芳基；但是，4-甲基-4′-[3,5-雙(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]-1,2,3-噻二唑-5-羧酰替酰胺和4′-氯-5-(1-甲基-5-三氟甲基)-1H-吡唑-3-基)噻吩-2-羧酰替酰胺除外。
2．如權(quán)利要求1所述的酰胺衍生物或其制藥學(xué)上允許的鹽，其中的D為可被至少1個(gè)三氟甲基取代的吡唑基。
3．如權(quán)利要求1所述的酰胺衍生物或其制藥學(xué)上允許的鹽，其中的D為1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-5-基或3,5-雙(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基，A為可被鹵原子取代的苯基或可被低級(jí)烷基取代的選自噻唑基、噻二唑基、噻吩基和吡啶基的5～6元單雜環(huán)芳基。
4．鈣釋放依賴性鈣通道阻滯用醫(yī)藥組合物，其特征在于，包含以下通式(Ⅰ′)表示的酰胺衍生物或其制藥學(xué)上允許的鹽和制藥學(xué)上允許的載體，
式中符號(hào)的含義如下D可帶有1至3個(gè)作為取代基的可被鹵素取代或無(wú)取代的低級(jí)烷基的吡唑基，B亞苯基或亞噻吩基，X式-NH-CO-或式-CO-NH-表示的基團(tuán)，A可被鹵素取代的苯基、可被低級(jí)烷基取代的5～6元單雜環(huán)芳基。
5．如權(quán)利要求4所述的醫(yī)藥組合物，其特征還在于，它是一種IL-2產(chǎn)生抑制劑。
6．如權(quán)利要求5所述的醫(yī)藥組合物，其特征還在于，它是變應(yīng)性、慢性炎癥性或自身免疫疾病的預(yù)防或治療劑。
7．如權(quán)利要求6所述的醫(yī)藥組合物，其特征還在于，它是支氣管哮喘的預(yù)防或治療劑。
8．如權(quán)利要求6所述的醫(yī)藥組合物，其特征還在于，它是慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的預(yù)防或治療劑。
9．如權(quán)利要求4～8的任一項(xiàng)所述的醫(yī)藥組合物，其中包含選自4-甲基-4′-[3,5-雙(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]噻唑-5-羧酰替苯胺、2′-氯-5-(1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-5-基)噻吩-2-羧酰替苯胺、4-氯-4′-(1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-5-基)苯甲酰替苯胺、4-甲基-4′-[3,5-雙(三氟甲基)-1H-吡唑-1基]-1,2,3-噻二唑-5-羧酰替苯胺、3-甲基-4′-[3,5-雙(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]噻吩-2-羧酰替苯胺及4′-[3,5-雙(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]吡啶-3-羧酰替苯胺的酰胺衍生物或其制藥學(xué)上允許的鹽。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥,特別是具有鈣釋放依賴性鈣通道阻滯作用的以下通式(I′)表示的酰胺衍生物及以其為有效成分的醫(yī)藥組合物,尤其是鈣釋放依賴性鈣通道阻滯劑。式中符號(hào)的含義如下:D:可帶有1至3個(gè)作為取代基的可被鹵素取代或無(wú)取代的低級(jí)烷基的吡唑基,B:亞苯基或亞噻吩基,X:式－NH－CO－或式－CO－NH－表示的基團(tuán),A:可被鹵素取代的苯基、可被低級(jí)烷基取代的5～6元單雜環(huán)芳基。
文檔編號(hào)A61K31/4439GK1218046SQ9812135
公開(kāi)日1999年6月2日 申請(qǐng)日期1998年10月13日 優(yōu)先權(quán)日1997年10月13日
發(fā)明者洼田浩一, 米德康博, 菅澤形造, 船津雅志, 川添聡一郎, 豐島啟, 岡本芳典, 石川淳, 竹內(nèi)誠(chéng) 申請(qǐng)人:山之內(nèi)制藥株式會(huì)社