專利名稱：含有極難溶于水的活性組分的含水藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含有極難溶于水的活性組分的含水藥物組合物。更具體地說，本發(fā)明涉及一種活性組分分散于脂質(zhì)體中的藥物組合物。
在制藥領(lǐng)域正進(jìn)行著大量研究，以期發(fā)現(xiàn)新的脂質(zhì)體制劑。然而，尤其在涉及極難溶于水的活性組分時(shí)出現(xiàn)了許多困難，特別是在水中溶解度小于≤0.01％(w/v)的活性組分。
實(shí)際上，用于制備含有低水溶性活性組分的脂質(zhì)體的現(xiàn)有技術(shù)包括a)將活性組分及預(yù)選的磷脂溶解在適宜的有機(jī)溶劑，如氯仿中；b)減壓蒸發(fā)溶劑得到一種活性組分/磷脂薄膜；c)加入第二有機(jī)溶劑，如叔丁醇(terbutylic alcohol)；d)在液氮溫度下將所得溶液冷凍；e)將冷凍的溶液凍干；f)將凍干溶液用緩沖液進(jìn)行水合處理，得到多薄層脂質(zhì)體(MLV)懸浮液；并g)用超聲波處理此懸浮液得到更小的脂質(zhì)體(SUV)懸浮液。
A.Sharma等在《藥物研究》，2(6)，889-896(1994)描述了此方法的一個(gè)例子。
然而此技術(shù)的缺點(diǎn)是非常費(fèi)工，并會(huì)導(dǎo)致在脂質(zhì)體中出現(xiàn)微量的有機(jī)溶劑。
然而，該文作者聲稱考察了各種制備MLV脂質(zhì)體的技術(shù)，如干燥脂質(zhì)薄膜水合法(手搖動(dòng))、凍融，和用各種技術(shù)如擠壓和用超聲波處理以降低隨后產(chǎn)生的(加工后的)脂質(zhì)體的大小(MLV→SUV)，并得出結(jié)論上述詳細(xì)記載、含有所述的過程a)至g)的方法經(jīng)證實(shí)是最能被接受的(此文獻(xiàn)第890頁，右列，51-57行)。但是該作者并未指出如何將制備MLV脂質(zhì)體的第一種技術(shù)和所述的能夠降低脂質(zhì)體大小的第二種技術(shù)相互結(jié)合起來。
意外地，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，凍融技術(shù)與擠壓結(jié)合起來即能夠不用任何有機(jī)溶劑而制備水溶性≤0.01％(w/v)的活性組分的含水脂質(zhì)體組合物。
在此說明書和其后的權(quán)利要求書中，將水溶性≤0.01％(w/v)的活性組分定義為“極難溶于水”。
因此，本發(fā)明的第一目的是一種含水組合物，其特征是它含有一種極難溶于水的活性組分分散在脂質(zhì)體中。
以下是極難溶于水的活性組分的幾個(gè)典型例子氯尼達(dá)明(lonidamine)(溶解度3×10-6g/ml)、N-乙酰-5-甲氧基色胺(褪黑激素)[“幾乎不溶”，G.S.Shida等，“松果體研究雜志”，16，198-201(1994)]、環(huán)孢菌素-A[不溶于水，環(huán)孢菌素-A?？八幬锍煞值姆治鰣D”，16，163，(1987)]和bindarit(溶解度1×10-4g/ml)。
本發(fā)明組合物的脂質(zhì)體優(yōu)選由選自磷酸甘油酯、甘油酯、甘油二酯、甘油三酯、磷脂、半乳糖基脂質(zhì)和葡萄糖基脂質(zhì)、膽固醇及其衍生物、鞘脂及其混合物的一種成分組成。更優(yōu)選它們由磷脂組成。
本發(fā)明脂質(zhì)體組合物的一個(gè)典型例子含有磷脂酰膽堿、溶血磷脂酰膽堿、N-?；?磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰絲氨酸、鞘磷脂、非極性脂質(zhì)、甘油三酯、游離脂肪酸、DL-α-維生素E。
本發(fā)明優(yōu)選的脂質(zhì)體組合物含有組分 ％(w/w)磷脂酰膽堿85-97溶血磷脂酰膽堿 0-5N-?；掖及?-4磷脂酰乙醇胺 0-10甘油三酯 0-4游離脂肪酸 0-3DL-α-維生素E0-1本發(fā)明一種特別優(yōu)選的脂質(zhì)體組合物含有組分％(w/w)磷脂酰膽堿 94溶血磷脂酰膽堿 3N-?；掖及?磷脂酰乙醇胺 0.1甘油三酯1游離脂肪酸 0.75DL-α-維生素E0.15一般地，本發(fā)明脂質(zhì)體的大小在500nm以下。優(yōu)選50-250nm。
本發(fā)明第二個(gè)目的是具有極難溶于水的活性組分分散在脂質(zhì)體中的含水藥物組合物的制備方法，此方法的特征在于包括以下步驟a)在20-30℃的溫度下，將活性組分分散在脂質(zhì)中；b)將此分散相懸浮于水相中；c)將此懸浮液靜置于環(huán)境溫度0-48小時(shí)；d)加熱到30-75℃10-40分鐘；e)在-150/-200℃冷凍；f)重復(fù)步驟d)和e)至少2次，且不超過8次；g)通過一種孔徑為500-1000nm的濾膜過濾；h)擠壓通過一種孔徑為50-400nm的膜；并同時(shí)I)除去所有未被封閉的活性組分。
根據(jù)將被封閉到脂質(zhì)體中的極難溶于水的活性組分的數(shù)量確定步驟c)的持續(xù)時(shí)間。本領(lǐng)域的技術(shù)人員根據(jù)一些簡(jiǎn)單的常規(guī)試驗(yàn)可以很容易地確定對(duì)應(yīng)于各種活性組分和脂質(zhì)體組合物的正確時(shí)間。
水相將優(yōu)選由0.05％-0.9％(w/v)的氯化鈉水溶液組成。
一般地，對(duì)應(yīng)于每重量份水溶液，所用脂質(zhì)的量為0.01-0.4重量份。而對(duì)應(yīng)于每重量份脂質(zhì)，活性組分的量一般為0.01-0.3重量份。
一般地，分散器為UltraturraxTM型勻漿器。
一般地，用壓縮空氣或選自氮?dú)?、氦氣和氬氣的一種惰性氣體作為擠壓氣進(jìn)行擠壓。優(yōu)選的惰性氣體是氦氣。在擠壓步驟中，壓力將優(yōu)選在500-5500kPa，溫度優(yōu)選在20-75℃，尤其優(yōu)選40-65℃。適宜擠壓機(jī)的典型例子是安裝有過濾器的Lipex生物膜熱桶型(Lipex Biomembranes Thermobarrel type)或Emulsiflex CCAvestin型擠壓機(jī)，過濾器所用濾膜是孔徑為50-600nm的聚碳酸酯CostarTM膜。
一般地，步驟h)重復(fù)至少2次，而不超過8次。優(yōu)選6次。
以下實(shí)施例用于說明而不以任何方式限制本發(fā)明。實(shí)施例1采用UltraturraxTM型勻漿器，在30℃用10分鐘將100mg褪黑激素分散于1g磷脂中。隨即將此分散相用所述勻漿器懸浮于10ml0.9％(w/v)氯化鈉水溶液中，并在55℃的水浴中加熱20分鐘。
以此方法得到的懸浮液經(jīng)過以下冷卻和加熱循環(huán)-在液氮中冷卻1分鐘，-加熱到55℃直至磷脂完全流動(dòng)。
此循環(huán)重復(fù)6次。
用Lipex生物膜裝置使此懸浮液兩次通過0.6μm濾膜。
因此，得到一種“多薄層大囊”(Multilamellar Large Vesicles，MLV)懸浮液，在55℃，用裝有0.1μm聚碳酸酯CostarTM濾膜的10mlLipex生物膜熱筒型擠壓機(jī)，使懸浮液經(jīng)過6次連續(xù)擠壓，所用壓縮氣體為氦氣，壓力為1000-4800kPa。
如上操作制備3批產(chǎn)品(LM/186，LM/188和LM/190)。
對(duì)3批產(chǎn)品測(cè)定以下指標(biāo)*含水脂質(zhì)體組合物中褪黑激素的含量(HPLC分析法)；*脂質(zhì)體大??；*封閉在脂質(zhì)體中的褪黑激素的量。
下表顯示了測(cè)量的參數(shù)及其意義
所得數(shù)據(jù)示于表1，它顯示-以3批測(cè)定的平均值計(jì)，得到含水脂質(zhì)體組合物制劑中褪黑激素的濃度是8.05×10-3g/ml；-三批脂質(zhì)體的平均大小為93nm；-以3批測(cè)定的平均值計(jì)，被封閉的藥物重量為80.5γ/mg；-制劑未顯示脂質(zhì)體聚集現(xiàn)象。表1
(*)表示每mg磷脂對(duì)應(yīng)的藥物量γ。
HPLC分析采用以下條件-固定相反相柱PKB-100(250×4.6mm；5μm Supelco)；-流動(dòng)相水∶乙腈80∶20(v/v)；-檢測(cè)UV254nm。
用兩部分裝置分析脂質(zhì)體的平均大小1)DELSA 440 Coulter，2)370型NICOMP亞微粒大小測(cè)定儀過程如下a)對(duì)于使用裝置1)進(jìn)行的檢測(cè)，用10ml 0.9％(w/v)的氯化鈉水溶液稀釋1ml脂質(zhì)體懸浮液；b)對(duì)于使用裝置2)進(jìn)行的檢測(cè)，用0.9％(w/v)的氯化鈉水溶液稀釋0.5ml溶液a)至10ml。實(shí)施例2用2g磷脂和50mg氯尼達(dá)明代替1g磷脂和100mg褪黑激素，如以上實(shí)施例1所述進(jìn)行。
如此制備3批產(chǎn)品(LM/195，GN/1L和GN/2L)。
所得數(shù)據(jù)示于表2，它顯示-含水組合物中氯尼達(dá)明的濃度由初始溶解度3×10-6g/ml增長到3批的平均值3.83×10-3g/ml；-3批脂質(zhì)體的平均大小為79.6nm；-以3批測(cè)定的平均值計(jì)，被封閉的藥物量為19.2γ/mg；-制劑未顯示脂質(zhì)體聚集現(xiàn)象。表2
(*)表示每mg磷脂對(duì)應(yīng)的藥物量γ。
實(shí)施例3用2g磷脂和200mg褪黑激素代替1g磷脂和100mg褪黑激素，如以上實(shí)施例1所述進(jìn)行。
如此制備3批產(chǎn)品(GN/1M、GN/2M和GN/3M)。所得數(shù)據(jù)示于表3，它顯示-以3批測(cè)定的平均值計(jì)，含水脂質(zhì)體制劑中褪黑激素的濃度為13.5×10-3g/ml；-3批脂質(zhì)體的平均大小為92.6nm；-以3批測(cè)定的平均值計(jì)，被封閉的藥物量為67.6γ/mg；-制劑未顯示脂質(zhì)體聚集現(xiàn)象。表3<
>(*)表示每mg磷脂對(duì)應(yīng)的藥物量γ。實(shí)施例4如以上實(shí)施例2所述進(jìn)行，區(qū)別僅在于擠壓時(shí)使其通過0.2μm而非0.1μm的聚碳酸酯膜。
如此制備3批產(chǎn)品(GN/3L、GN/4L和GN/5L)。
所得數(shù)據(jù)示于表4，它顯示通過將氯尼達(dá)明從20mg增加到50mg，將磷脂量從1g增加到2g，并擠壓通過0.2μm而非0.1μm的膜，由實(shí)施例2得到的含水組合物中氯尼達(dá)明的濃度顯著增加。事實(shí)上，所得到的氯尼達(dá)明濃度平均值為4.47×10-3g/ml；表4<
>(*)表示每mg磷脂對(duì)應(yīng)的藥物量γ。實(shí)施例5用UltraturraxTM型勻漿器，在30℃用10分鐘將20mg環(huán)孢菌素-A分散于1g磷脂中。隨即將此分散相用所述勻漿器懸浮于0.9％(w/v)氯化鈉水溶液中，并在65℃的水浴中加熱20分鐘。
對(duì)以此方法得到的懸浮液進(jìn)行以下冷卻和加熱循環(huán)-在液氮中冷卻1分鐘，-加熱到65℃直至磷脂完全流動(dòng)。
此循環(huán)重復(fù)6次。
用Lipex生物膜裝置使此懸浮液兩次通過0.6μm濾膜。
因此，得到一種“多薄層大囊”(MLV)懸浮液，用裝有0.1μm聚碳酸酯CostarTM膜的10ml Lipex生物膜熱筒型擠壓機(jī)，在65℃使之經(jīng)過6次連續(xù)擠壓，所用壓縮氣體為氦氣，壓力為1000-4800kPa。
如上操作制備3批產(chǎn)品(LM/416A，LM/416B和LM/416C)。
所得數(shù)據(jù)示于表5，它顯示-以3批測(cè)定的平均值計(jì)，含水脂質(zhì)體制劑中環(huán)孢菌素-A的濃度是0.96×10-3g/ml；-3批脂質(zhì)體的平均大小為103nm；-以3批測(cè)定的平均值計(jì)，被封閉的藥物量為9.6γ/mg；-制劑未顯示脂質(zhì)體聚集現(xiàn)象。表5
(*)表示每mg磷脂對(duì)應(yīng)的藥物量γ。實(shí)施例6用2g磷脂和50mg bindarit代替1g磷脂和100mg褪黑激素，如以上實(shí)施例1所述進(jìn)行。
如此制備3批產(chǎn)品(LM/356，LM/357和LM/358)。
所得數(shù)據(jù)示于表6，它顯示-含水脂質(zhì)體組合物中bindarit的濃度由初始溶解度1×10-4g/ml增加到3批的平均值4mg/ml；-3批脂質(zhì)體的平均大小為108.3nm；-以3批測(cè)定的平均值計(jì)，被封閉的藥物量為20.2γ/mg；-制劑未顯示脂質(zhì)體聚集現(xiàn)象。表6
(*)表示每mg磷脂對(duì)應(yīng)的藥物量γ。實(shí)施例7用UltraturraxTM型勻漿器，在30℃用10分鐘將30mg環(huán)孢菌素-A分散于2g磷脂中。隨即將此分散相用所述勻漿器懸浮于0.9％(w/v)氯化鈉水溶液中，并使其在環(huán)境溫度下靜置24小時(shí)。然后在65℃的水浴中加熱懸浮液20分鐘。
對(duì)以此方法得到的懸浮液進(jìn)行以下冷卻和加熱循環(huán)-在液氮中冷卻1分鐘，-加熱到65℃直至磷脂完全流動(dòng)。
此循環(huán)重復(fù)6次。
用Lipex生物膜裝置使此懸浮液兩次通過0.6μm濾膜。
因此，得到一種“多薄層大囊”(MLV)懸浮液，用裝有0.1μm聚碳酸酯CostarTM膜的10ml Lipex生物膜熱筒型擠壓機(jī)，在65℃使之經(jīng)過6次連續(xù)擠壓，所用壓縮氣體為氦氣，壓力為1000-4800kPa。
由此制備3批產(chǎn)品(LM/422a，LM/422b和LM/422c)。
所得數(shù)據(jù)示于表7，它顯示-以3批測(cè)定的平均值計(jì)，含水脂質(zhì)體制劑中環(huán)孢菌素-A的濃度是3mg/ml；-3批脂質(zhì)體的平均大小為119.5nm；-以3批測(cè)定的平均值計(jì)，被封閉的藥物量為15γ/mg；-制劑未顯示脂質(zhì)體聚集現(xiàn)象。表7
(*)表示每mg磷脂對(duì)應(yīng)的藥物量γ。
權(quán)利要求
1.一種含水藥物組合物，其特征在于含有一種極難溶于水的活性組分分散于脂質(zhì)體中。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于所述極難溶于水的活性組分選自氯尼達(dá)明、褪黑激素、環(huán)孢菌素A和bindarit。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的組合物，其特征在于脂質(zhì)體由選自磷酸甘油酯、甘油酯、甘油二酯、甘油三酯、磷脂、半乳糖基脂質(zhì)和葡萄糖基脂質(zhì)、膽固醇及其衍生物、鞘脂類及其混合物的組分組成。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的組合物，其特征在于所述脂質(zhì)體由一種含有磷脂酰膽堿、溶血磷脂酰膽堿、N-?；?磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰絲氨酸、鞘磷脂、非極性脂質(zhì)、甘油三酯、游離脂肪酸、DL-α-維生素E的組合物組成。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的組合物，其特征在于對(duì)應(yīng)于每重量份水的脂質(zhì)的量為0.01-0.4重量份。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的組合物，其特征在于對(duì)應(yīng)于每重量份脂質(zhì)的活性組分的量為0.01-0.3重量份。
7.有一種極難溶于水的活性組分分散在脂質(zhì)體中的含水藥物組合物的制備方法，其特征在于包括以下步驟a)在20-30℃的溫度下，將活性組分分散在脂質(zhì)中；b)將此分散相懸浮于水相中；c)使此懸浮液在環(huán)境溫度下靜置0-48小時(shí)；d)加熱到30-75℃10-40分鐘；e)在-150/-200℃冷凍；f)重復(fù)步驟d)和e)至少2次，且不超過8次；g)通過孔徑為500-1000nm的濾膜過濾；h)擠壓通過孔徑為50-400nm的膜；并同時(shí)i)除去所有未被封閉的活性組分。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于所述水相由0.05％-0.9％(w/v)的氯化鈉水溶液組成。
9.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的方法，其特征在于對(duì)應(yīng)于每重量份水所用的脂質(zhì)量為0.01-0.4重量份。
10.根據(jù)權(quán)利要求7至9中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于對(duì)應(yīng)于每重量份脂質(zhì)所用的活性組分量為0.01-0.3重量份。
11.根據(jù)權(quán)利要求7至10中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于在步驟h)中使用選自空氣、氮?dú)狻⒑夂蜌鍤獾臄D壓氣體。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其特征在于擠壓氣體的壓力為500-5500kPa。
13.根據(jù)權(quán)利要求7至12中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于步驟h)是在20-75℃的溫度下進(jìn)行的。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其特征在于溫度在40-65℃的范圍內(nèi)。
15.根據(jù)權(quán)利要求7至13中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于步驟h)被重復(fù)至少2次，且不超過8次。
全文摘要
含有極難溶于水的活性組分分散于脂質(zhì)體中的含水藥物組合物及其制備方法。
文檔編號(hào)A61K47/12GK1255057SQ98802733
公開日2000年5月31日 申請(qǐng)日期1998年2月12日 優(yōu)先權(quán)日1997年2月20日
發(fā)明者G·卡瓦洛, L·瑪奇托 申請(qǐng)人:方濟(jì)各安吉利克化學(xué)聯(lián)合股份有限公司