專利名稱：治療狗的疼痛和炎癥的cox－2選擇性咔洛芬的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用抗炎劑治療狗的疼痛和炎癥，這些抗炎劑是非類固醇性抗炎藥(NSAID)，特別是這些藥劑具有減少發(fā)生胃腸道副作用的功效，而這些副作用是狗中流行且具有潛在嚴(yán)重危害的問(wèn)題。
背景技術(shù)：
正如本領(lǐng)域普通技術(shù)人員如獸醫(yī)所熟知的那樣，犬科動(dòng)物，即狗，特別是老齡狗，非常容易患慢性炎癥，如關(guān)節(jié)變性疾病。由于大量狗被視為寵物，或者出于利用的目的，如警衛(wèi)犬或?qū)と?，人們一直在努力尋找一種藥劑，以阻止或消除終止這些炎癥在狗身上的發(fā)展，或者至少減緩炎癥的癥狀，如疼痛和水腫。近來(lái)專門用作抵抗人體，更用于狗體的消炎鎮(zhèn)痛藥是非類固醇性抗炎藥(NSAID)，這一類型的抗炎藥已被廣泛使用，且此類型的用于人體的、新的、改進(jìn)的藥劑已被發(fā)現(xiàn)和發(fā)展了幾十年。
但是，將NSAID用于狗體受到了限制，例如，美國(guó)食品藥品管理局獸藥委員會(huì)(FDA/CVM)在美國(guó)只批準(zhǔn)了兩種NSAID用于狗的治療，即ARQUEL，甲氯芬那酸，和RIMADYL，咔洛芬。因此，對(duì)NSAID用于狗身上的治療的安全性和有效性還缺乏經(jīng)驗(yàn)和知識(shí)。在獸藥方面，例如，NSAID的最常見的適應(yīng)證是治療關(guān)節(jié)變性疾病(DJD)，它在狗群中經(jīng)常源于各種發(fā)育性疾病，例如，髖部發(fā)育異常，和骨軟骨病，以及對(duì)關(guān)節(jié)的外部創(chuàng)傷。除了治療慢性疼痛和炎癥外，NSAID還可用于治療狗的手術(shù)后的急性疼痛，以及與骨關(guān)節(jié)炎相關(guān)的臨床癥狀。
對(duì)犬類作NSAID治療的需求，連同不準(zhǔn)許NSAID用于此目的，導(dǎo)致了被批準(zhǔn)用于人體的NSAID在未批準(zhǔn)情況下大量用于狗體，有時(shí)帶來(lái)災(zāi)難性的后果。獸醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)充滿了用經(jīng)批準(zhǔn)用于人體的NSAID，例如吲哚美辛、萘普生、阿斯匹林、布洛芬、和保泰松，用在狗身上導(dǎo)致胃腸出血、穿孔和腹膜炎的報(bào)道。盡管用于人也會(huì)發(fā)生這些胃腸副作用而使病人苦惱，但狗還是經(jīng)常接受不合適的高劑量，這是因?yàn)槿鄙俸线m劑量的信息，以及犬類固有的易發(fā)生這種胃腸副反應(yīng)的特性。因此，迫切需要用于治療狗的疼痛和炎癥的安全而有效的NSAID。
用于治療狗的安全有效的NSAID藥劑的研究，必須處理嚴(yán)重的胃腸副反應(yīng)、其他副反應(yīng)，包括腎和肝的毒性的可能性。但是，最為嚴(yán)重的副反應(yīng)是胃腸作用，例如單發(fā)或多發(fā)性潰瘍，包括食道、胃、十二指腸或大、小腸的穿孔和出血。這些副反應(yīng)通常較弱，但也可能是嚴(yán)重的，偶爾甚至?xí)?dǎo)致生命危險(xiǎn)。實(shí)際上，用NSAID治療狗的指數(shù)如此低，以致于成為該治療的禁忌。
“治療指數(shù)”有時(shí)一般是指藥品的LD50對(duì)ED50的比例，旨在描述藥品在產(chǎn)生其所欲達(dá)到的療效時(shí)的可選擇性。但是在這里所使用的“治療指數(shù)”與動(dòng)物健康領(lǐng)域中所使用的定義更為一致，即，動(dòng)物的最大耐受劑量與最小有效劑量的比例。當(dāng)然，在本發(fā)明中，“動(dòng)物”是指狗。特別是犬類受試體的最大耐受劑量通常將利用大量不同的試驗(yàn)和技術(shù)來(lái)確定。例如，胃腸出血可以利用常用于檢測(cè)糞便樣品中潛血的試驗(yàn)方法來(lái)測(cè)定，同時(shí)可以用內(nèi)窺鏡檢查來(lái)檢測(cè)潰瘍或穿孔的發(fā)生。當(dāng)作為研究的一部分將動(dòng)物處死時(shí)，尸檢也能提供有價(jià)值的信息。
現(xiàn)有技術(shù)中迄今仍估計(jì)任何一種NSAID試用的藥品，特別是用于犬類治療的，其治療指數(shù)都很低。人們總是希望這類藥品的治療指數(shù)不會(huì)低到不能用在狗身上的程度。因此，本發(fā)明的一個(gè)重要方面是令人驚奇地發(fā)現(xiàn)，這里所描述的抗炎組合物在用于治療狗的疼痛和炎癥時(shí)具有相當(dāng)高的治療指數(shù)，此外，唯獨(dú)該抗炎組合物才具有這一未曾預(yù)料的特性而實(shí)際上排除了其他所有NSAID。
近年來(lái)，積累了大量的有關(guān)用NSAID治療獲得抗炎療效的資料，同時(shí)也積累了產(chǎn)生嚴(yán)重胃腸副作用的作用機(jī)理的知識(shí)。盡管這些知識(shí)大部分是涉及NSAID用于人體上的情形，它們?cè)诤艽蟪潭壬贤瑯舆m用于在狗身上的作用機(jī)理，雖然有些明顯的種類特異性。下文將對(duì)此作進(jìn)一步的闡述。關(guān)于NSAID的治療有效性，很長(zhǎng)時(shí)間以來(lái)，人們就知道其作用機(jī)理是NSAID能減少炎癥，是因?yàn)樗鼈兙哂写驍嗷ㄉ南┧峒?jí)聯(lián)的能力，花生四烯酸級(jí)聯(lián)會(huì)導(dǎo)致前列腺素、血栓烷和白三烯的外原性生成。這些脂質(zhì)化合物被統(tǒng)稱為“類二十烷酸”，因?yàn)樗鼈兺ǔＴ从贑20多不飽和脂肪酸和二十碳烯酸，其中最豐富的成分是花生四烯酸?；ㄉ南┧崾莄is-Δ5、cis-Δ8、cis-Δ11、cis-Δ14十二碳四烯酸，這是許多前列腺素和白三烯等炎癥介體的主要前體。
在花生四烯酸級(jí)聯(lián)的第一階段，花生四烯酸作為被激素或蛋白酶、或被膜擾亂所導(dǎo)致的組織特異性刺激的結(jié)果而釋放，并牽涉到特異性磷脂酶A2的作用。游離花生四烯酸鹽在該級(jí)聯(lián)的第二階段作為雙功能酶前列腺素內(nèi)切過(guò)氧化物合成酶，也稱之為前列腺素H合成酶(以后簡(jiǎn)稱PGH合成酶)。其第一活性是作為環(huán)加氧酶，其第二活性涉及兩電子還原。多數(shù)NSAID是作為PGH合成酶的環(huán)加氧酶活性的抑制劑，因此，阻礙各種前列腺素生成，局部地作為激素通過(guò)結(jié)合在特定細(xì)胞受體上而發(fā)揮它們的作用。前列腺素是非常強(qiáng)有力的，但也會(huì)很快異化。這些前列腺素中，有些是炎癥過(guò)程的介體；但是，有些前列腺素也具有胃腸保護(hù)功能。阻斷這些有益的前列腺素的生成是導(dǎo)致在用NSAID治療時(shí)產(chǎn)生胃腸副反應(yīng)的主要因素。因此，人們?cè)诓粩鄬ふ易鳛榄h(huán)加氧酶抑制劑的藥劑，同時(shí)通過(guò)一些其他作用方式，實(shí)質(zhì)上減少了胃腸副反應(yīng)和產(chǎn)生的副作用。
近期已經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，在人體和所有其他哺乳動(dòng)物上，環(huán)加氧酶(COX)包含兩種同功酶，組成酶(COX-1)和誘導(dǎo)酶(COX-2)，它們?cè)诓煌南到y(tǒng)具有不同的活性。COX-2同功酶的確定導(dǎo)致以前猜想它可能引起前列腺素排他地或主要地在炎癥部位產(chǎn)生。由于現(xiàn)在已顯示這是事實(shí)，COX-2同功酶的選擇性抑制將減少炎癥，而不產(chǎn)生胃腸毒副作用。COX-1和COX-2具有60％同源性、類似的Km值、和相同的花生四烯酸結(jié)合部位，但是COX-2比COX-1可接受更廣范圍的底物。
另一種代謝途徑是從上述花生四烯酸鹽通過(guò)脂氧合酶作用產(chǎn)生白三烯。有一些白三烯也是炎癥的介體，因此，很多努力是在尋找具有環(huán)加氧酶和脂氧合酶雙重抑制的藥劑上。
一種特定的已用于治療狗的炎癥的、已經(jīng)美國(guó)食品和藥品管理局獸醫(yī)委員會(huì)(FDA/CVM)審批通過(guò)目前可在美國(guó)使用的兩種NSAID藥品之一是上述咔洛芬。咔洛芬，外消旋6-氯-α-甲基咔唑-2-乙酸，屬于NSAID中的芳基丙酸類。該類中的其他成員是，例如，苯洛芬、環(huán)洛芬、非諾洛芬、氟比洛芬、苯呋丙酸、吲哚洛芬、酮洛芬、吡洛芬和舒洛芬。盡管這些化合物結(jié)構(gòu)上很相近，它們?nèi)匀粨碛胁煌目寡缀推渌锾匦裕?，咔洛芬顯示出它是相對(duì)較弱的環(huán)加氧酶抑制劑，但是，它在人體和不同動(dòng)物模型中顯示能夠顯著地減少疼痛和腫脹，以及其他炎性癥狀。在技術(shù)文獻(xiàn)中，對(duì)咔洛芬的這些評(píng)估作了記載，下文對(duì)此作了一些引述和討論。咔洛芬在大鼠中也顯示出不與脂氧合酶反應(yīng)，推測(cè)上，也不阻斷白三烯的生成。盡管咔洛芬的作用模式仍不被人所知，它已經(jīng)顯示了具有某些對(duì)抗磷脂酶A2的活性。
現(xiàn)有技術(shù)描述本領(lǐng)域中目前的認(rèn)識(shí)，正如下面所討論的參考文獻(xiàn)公開顯示的那樣，對(duì)于咔洛芬能在狗身上擁有良好的抗炎活性而同時(shí)又顯示出低的胃腸和其他負(fù)反應(yīng)的現(xiàn)象，而當(dāng)試圖解釋其作用機(jī)理時(shí)產(chǎn)生了極大的困惑?，F(xiàn)有技術(shù)中描繪咔洛芬的特性是具有弱到無(wú)的環(huán)加氧酶抑制劑活性，并因此得出結(jié)論認(rèn)為它必定與一些不同的作用機(jī)理一起起作用。
如上文已提及的，近來(lái)已報(bào)道存在組成酶COX-1和誘導(dǎo)酶COX-2同功酶，包括它們分別在保護(hù)胃腸粘膜和介導(dǎo)炎癥中的不同作用。自然，這導(dǎo)致了人們?nèi)パ芯磕切┯糜诠芬约捌渌麆?dòng)物和人時(shí)有可能僅抑制誘導(dǎo)型COX-2同功酶的化合物，即選擇性COX-2抑制劑。這些研究具體包括對(duì)各種NSAID，尤其是酮洛芬、酮咯酸和氟比洛芬的對(duì)映體的抑制活性的評(píng)估。檢測(cè)這些特定的NSAID的一種對(duì)映體與另一種對(duì)映體之間抑制效力的差異，以及分別用每一種對(duì)映體治療時(shí)的抑制效力，它們抗COX-1酶與抗COX-2酶的抑制效力的比較。這些研究的結(jié)果顯示，對(duì)于這三種NSAID，它們的對(duì)映體抗COX-1和抗COX-2酶的效力相等。因此，這些NSAID的任何一種R-和S-對(duì)映體對(duì)COX-1或COX-2都沒(méi)有選擇性。雖然各對(duì)映體之間的效力確實(shí)有差異，在每種情況下S-對(duì)映體更有效，但對(duì)COX-1的抑制與對(duì)COX-2的抑制相比，每種對(duì)映體顯示出相等的抑制效力，即，兩種對(duì)映體都不能把這兩種同功酶區(qū)別開來(lái)。
因此，由于現(xiàn)有技術(shù)中的這些研究，該領(lǐng)域的目前狀態(tài)是，無(wú)論是咔洛芬，還是任何其他具有羧酸部分的典型的NSAID，都未發(fā)現(xiàn)是狗或任何其他動(dòng)物的選擇性COX-2抑制劑。在現(xiàn)有技術(shù)中有關(guān)與各種抑制劑復(fù)合的COX-1同功酶以及COX-2同功酶的序列結(jié)構(gòu)的構(gòu)象，在基本官能分子構(gòu)型水平上，這些結(jié)論已得到證實(shí)。這些研究報(bào)道的結(jié)果是，現(xiàn)今在該領(lǐng)域中認(rèn)為，含有羧酸基的抑制劑如咔洛芬本來(lái)就不能是選擇性COX-2抑制劑。迄今為止，只有含有磺酰部分的化合物和那布米酮，一種萘-2-丁酮化合物被認(rèn)為是COX-2同功酶的選擇性抑制劑。
近來(lái)在本領(lǐng)域中，隨著上面所提到的發(fā)現(xiàn)了有組成型COX-1和誘導(dǎo)型COX-2同功酶存在，已利用各種種類的動(dòng)物進(jìn)行了研究，為的是查明是否存在對(duì)一種或多種所述種類的動(dòng)物具有特異性的立體選擇性抑制。對(duì)于某些NSAID的R-和S-對(duì)映體在不同種類動(dòng)物身上對(duì)COX-1的抑制與對(duì)COX-2的抑制的單獨(dú)活性的研究已顯示，在所研究的所有手性NSAID的R-和S-對(duì)映體之間存在一致的效力差異。但是，這些研究也顯示，所研究的手性NSAID的任何R-或S-對(duì)映體對(duì)于COX-1比COX-2均沒(méi)有種類特異性的選擇性。例如，當(dāng)S-對(duì)映體在所給種類動(dòng)物身上對(duì)于COX-1和COX-2同功酶的抑制效力是R-對(duì)映體的三倍時(shí)，對(duì)于這兩種同功酶中任一種來(lái)說(shuō)，S-對(duì)映體顯示出相等的抑制COX-1和COX-2同功酶的效力，即，在該種類動(dòng)物身上S-對(duì)映體沒(méi)有顯示出對(duì)COX-2的選擇性抑制。
從該領(lǐng)域的上述狀況來(lái)看，尤其是當(dāng)狗是已研究過(guò)的動(dòng)物種類時(shí)，人們根本不能預(yù)料的是，本發(fā)明已研究出的咔洛芬是狗的令人驚奇的COX-2同功酶的強(qiáng)抑制劑；并且它是狗的選擇性COX-2抑制劑。另外，咔洛芬對(duì)COX-2的選擇性事實(shí)上比其他所有NSAID、包括含有羧酸部分的NSAID和聲稱的COX-2選擇性含有磺酰部分的NSAID的大兩倍。排除所有其他NSAID而選擇咔洛芬作為狗的卓越的COX-2同功酶的選擇性抑制劑，不僅與本領(lǐng)域中的現(xiàn)有教導(dǎo)相反，而且在所達(dá)到的驚奇結(jié)果方面是完全出乎意料的。本文中評(píng)估的所有其他代表性NSAID在美國(guó)均已批準(zhǔn)可作為人用，包括甚至目前在商業(yè)上可購(gòu)得的那些，這進(jìn)一步肯定了這些結(jié)論的公正。咔洛芬從本文中評(píng)估的所有NSAID中突出出來(lái)，包括那些已批準(zhǔn)用于人或已進(jìn)行了臨床試驗(yàn)評(píng)估的。
從上述的現(xiàn)有技術(shù)狀況看，尤其是當(dāng)狗是已研究過(guò)的動(dòng)物種類時(shí)，更加未預(yù)料到的是，按照本發(fā)明，已發(fā)現(xiàn)咔洛芬的S-對(duì)映體是狗的COX-2同功酶比COX-1同功酶的高選擇性抑制劑，并且對(duì)于所有其他NSAID或它們的S-對(duì)映體，包括含有羧酸部分的NSAID和表示的COX-2選擇性含有磺酰部分的NSAID來(lái)說(shuō)，這種情況達(dá)到顯著高的程度。排除所有其他NSAID而選擇咔洛芬的S-對(duì)映體作為狗的COX-2同功酶的極強(qiáng)的和選擇性的抑制劑，同時(shí)還顯示出狗的胃腸或其他負(fù)反應(yīng)較小或是沒(méi)有，不僅與本領(lǐng)域中的現(xiàn)有教導(dǎo)相反，而且在所達(dá)到的驚奇結(jié)果方面是完全出乎意料的。本文中評(píng)估的所有其他代表性NSAID均已在美國(guó)批準(zhǔn)可用于人，包括甚至目前在商業(yè)上可購(gòu)得的那些，這進(jìn)一步肯定了這些結(jié)論的公正。
從上述的現(xiàn)有技術(shù)狀況看，尤其當(dāng)狗是已研究過(guò)的動(dòng)物種類時(shí)，更加未預(yù)料到的是，按照本發(fā)明，已發(fā)現(xiàn)由于咔洛芬的S-對(duì)映體是COX-2同功酶的高選擇性抑制劑，所以它與所有其他NSAID、包括具有羧酸部分的那些、或它們的S-對(duì)映體相比，具有令人驚奇的改善的抗炎、鎮(zhèn)痛和退熱活性，以及與所有其他NSAID、包括具有羧酸部分的那些、或它們的S-對(duì)映體相比的、令人驚奇地減少的胃腸和其他負(fù)反應(yīng)。
如上所述，咔洛芬屬于芳基丙酸類NSAID，并且是被取代的咔唑乙酸這樣一些化合物的子類中的一員。美國(guó)專利3,896,145中描述了這些化合物和它們作為抗炎、鎮(zhèn)痛和抗風(fēng)濕劑的用途。McKellar等人于1990年在《小型動(dòng)物實(shí)踐雜志》(Jourmal of Small Animal Practice)31卷第443-448頁(yè)上發(fā)表的文章“咔洛芬在狗身上的藥動(dòng)學(xué)、耐受性和血清血栓烷抑制作用”中報(bào)道了有關(guān)咔洛芬在狗身上的抗炎活性的研究情況。McKellar等人對(duì)咔洛芬的單獨(dú)的(-)(R)和(+)(S)對(duì)映體以及外消旋咔洛芬在狗身上的生物活性作了進(jìn)一步研究，并在《獸醫(yī)藥理學(xué)與治療雜志》(J.Vet.Pharmacol.Therap.)1994年17卷第447-454頁(yè)上發(fā)表的文章“咔洛芬在狗身上的立體有擇藥效學(xué)和藥動(dòng)學(xué)”中作了報(bào)道。根據(jù)該研究的結(jié)果，作者得出結(jié)論“CPF[咔洛芬]的作用方式仍不清楚……CPF以外消旋混合物或(+)(S)或(-)(R)對(duì)映體的形式給藥都沒(méi)有顯著抑制血液中TxB2的產(chǎn)生和炎性滲出液中PGE2和12-HETE的產(chǎn)生，提議它不能用作常規(guī)NSAID。
已知多數(shù)NSAID作用的主要方式是在從花生四烯酸生成炎性前列腺素的過(guò)程中抑制該酶的環(huán)加氧酶?！F(xiàn)今已知的與炎癥有關(guān)的大量介體提供了許多抗炎藥物的可能的靶子，并且很有可能，CPF對(duì)一個(gè)或許多尚未確定的介體具有其主要作用活性?！币虼耍绢I(lǐng)域中的這些研究者得出結(jié)論，咔洛芬具有一種“主要不是由于”環(huán)加氧酶抑制的作用方式；并且的確，“咔洛芬對(duì)環(huán)加氧酶、脂氧合酶和磷脂酶的低活性提示了其主要作用方式可能是通過(guò)類二十烷酸抑制以外的機(jī)理?！背吮景l(fā)明的令人驚奇的發(fā)現(xiàn)以外，這些發(fā)現(xiàn)和結(jié)論也提示本領(lǐng)域中的其他研究者，狗服用咔洛芬顯示出幾乎完全抑制了PGE2的合成，這在下文的實(shí)施例中也得到進(jìn)一步證明。
Holtsinger等人在V.C.O.T.1992年第5卷第140-4頁(yè)上發(fā)表的文章“咔洛芬(Rimadyl-VTM)對(duì)209例臨床犬關(guān)節(jié)變性疾病的療效”中也報(bào)道了咔洛芬在狗身上的研究。作者從體外研究結(jié)果推論，咔洛芬可能是通過(guò)抑制嗜中性白細(xì)胞的遷移而發(fā)揮其抗炎作用，至少部分是如此。并且這也可能解釋為何咔洛芬與吲哚美辛的抗炎作用是相等的，然而致潰瘍可能性卻比其小16倍。但是，作者也聲稱關(guān)于他們的結(jié)論有許多保留，因此并沒(méi)有指明本發(fā)明所基于的發(fā)現(xiàn)的方向。
Vasseur等人在《美國(guó)獸醫(yī)學(xué)協(xié)會(huì)雜志》(J Am Vet Med Assoc)206(6)807-811，1995上的文章“非類固醇性抗炎藥咔洛芬治療狗的骨關(guān)節(jié)炎的功效的隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)”中報(bào)道了有關(guān)用咔洛芬治療狗的骨關(guān)節(jié)炎的研究情況。這些研究者也沒(méi)能解釋咔洛芬的活性。另一方面，他們得出結(jié)論，前列腺素是胃腸粘膜的保護(hù)劑，并且“咔洛芬，與其他NSAID一樣，抑制前列腺素合成酶，阻斷前列腺素的生物合成”。然而，這一結(jié)論與他們的研究結(jié)果不一致，這就確定了“咔洛芬對(duì)狗的胃腸粘膜有最小或者是沒(méi)有有害作用?！盠ascelles等人在《獸醫(yī)記錄》134187-191，1994上的文章“咔洛芬和哌替啶對(duì)狗的手術(shù)后鎮(zhèn)痛和鎮(zhèn)靜作用”中報(bào)道了用咔洛芬治療狗的急性手術(shù)后疼痛的研究情況。這些研究者同樣對(duì)咔洛芬的作用方式感到迷惑，一方面寫道“咔洛芬……以治療劑量，似乎是前列腺素合成酶(或環(huán)加氧酶)的不良抑制劑，該酶引起由組織破壞產(chǎn)生的炎癥介體的合成”，同時(shí)另一方面又承認(rèn)“無(wú)論如何，研究已顯示，它是急性和慢性疼痛的良好鎮(zhèn)痛劑?！备缙诘年P(guān)于吲哚美辛與咔洛芬的立體異構(gòu)體和外消旋體對(duì)人的生物活性的對(duì)比研究在Gaut等于《前列腺素》1995年7月第10卷第1期上的文章“抗炎活性、血小板聚集的抑制、和前列腺素合成酶的抑制中的立體異構(gòu)關(guān)系”中作了報(bào)道。該研究的結(jié)論是，咔洛芬的外消旋體與吲哚美辛不同，對(duì)血小板聚集不起作用，因此具有抗炎活性的劑量可能不會(huì)導(dǎo)致出血時(shí)間延長(zhǎng)。該研究的數(shù)據(jù)也提示，咔洛芬外消旋體和[S]異構(gòu)體的抗炎活性具有更大的特異性，并且比吲哚美辛具有更小的致潰瘍性。
在1994年召開的前列腺素及相關(guān)化合物的第9次國(guó)際研討會(huì)上發(fā)表的部分有關(guān)前列腺素研究進(jìn)展的論文，其焦點(diǎn)是COX-2選擇性。Battistini等的題為“COX-1和COX-2更多選擇性NSAID的開發(fā)”的會(huì)議報(bào)告，其于1994年10月發(fā)表在DN&P第7卷第8期上，其中回顧并引用了由Battistini等在技術(shù)文獻(xiàn)中報(bào)道過(guò)的利用不同的刺激針對(duì)大量不同類型的細(xì)胞、包括人、小鼠或大鼠類型得到的對(duì)比數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)顯示了多數(shù)抗炎化合物包括咔洛芬抗COX-1和COX-2的IC50值，并用COX-2/COX-1的比值來(lái)確定COX-2選擇性。將Battistini等報(bào)道的比值顛倒，使其與本文中所用的一致，以利于進(jìn)行對(duì)比，大多數(shù)COX-2選擇性化合物的比值為1428.57至50,000.00。咔洛芬對(duì)COX-1和COX-2同功酶的IC50(μM)值顯示是完全相同的(10.96)，比值為1.00，這清楚地證明，咔洛芬沒(méi)有COX-2選擇性。Battistini等引用的值最初是由Akarasereenont等在《英國(guó)藥理學(xué)雜志，會(huì)議論文增刊》1994年1月第183P，5-7上的文章“非類固醇性抗炎藥作為環(huán)加氧酶-1或環(huán)加氧酶-2的抑制劑的相對(duì)效能”中報(bào)道的；以及Mitchell等在《美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院報(bào)》9011693-7，1993上的文章“非類固醇性抗炎藥作為組成和誘導(dǎo)環(huán)加氧酶的抑制劑的選擇性”中報(bào)道的。咔洛芬對(duì)COX-1(來(lái)自牛主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞)和COX-2(源于脂多糖刺激的J774.2巨噬細(xì)胞)抑制的IC50(μg/mL)值(n＝9)分別為3±0.41和3±1.72，比值為1.00。這與顯示對(duì)COX-2具有1000至4000倍選擇性的數(shù)種化合物的數(shù)據(jù)完全相反。該報(bào)告注意到，所描述的選擇性COX-2抑制劑沒(méi)有一種是羧酸，如大多數(shù)現(xiàn)存的NSAID，包括咔洛芬。的確，所有COX-2選擇性抑制劑的分子中都有磺?；诿缆逦艨档那闆r下，該磺酰基加入到它的1，2-苯并噻嗪-1，1-二氧化物環(huán)結(jié)構(gòu)中。報(bào)告推測(cè)，如果這種關(guān)系保持的話，COX蛋白質(zhì)的Arg 150殘基可能不是COX-2的選擇性抑制劑的必需結(jié)合部位。Arg是CXO活性必需的，因?yàn)樗Y(jié)合到花生四烯酸的末端羧基上，因此是多數(shù)現(xiàn)存NSAID的羧酸官能團(tuán)的最有可能的結(jié)合部位。因此，人們期望對(duì)COX-2具有選擇性的抑制劑只能結(jié)合到COX-2同功酶蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的專有位置上，而不結(jié)合到COX-1和COX-2同功酶蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)二者共有的部位上。
對(duì)于有PGH合成酶、更常稱之為環(huán)加氧酶蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的經(jīng)典NSAID和COX-2選擇性抑制劑的分子相互作用的更具體的解釋，Kurumbail等在《自然》1996年12月第384卷644-648頁(yè)上的文章“抗炎藥對(duì)環(huán)加氧酶-2的選擇性抑制的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)”中作了報(bào)道。該解釋是基于所報(bào)道的未配體化的(unliganded)鼠COX-2以及其與氟比洛芬、吲哚美辛、和SC-558的絡(luò)合物的結(jié)構(gòu)，選擇性COX-2抑制劑具有苯磺酰氨基，而沒(méi)有羧酸基，這是在3.0至2.5分離度下確定的。
該主題報(bào)道顯示，人和鼠COX-2同功酶可預(yù)期是非常類似的，因?yàn)樵诃h(huán)加氧酶活性部位有87％特性和嚴(yán)格序列保存。氟比洛芬，COX-1和COX-2的一種慢結(jié)合競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑，它結(jié)合在長(zhǎng)疏水通道上，并排斥環(huán)加氧酶活性部位的底物。SC-558是一種二芳基雜環(huán)抑制劑，它具有中心吡唑環(huán)，并有一個(gè)磺酰氨基附著在其中一個(gè)芳環(huán)上。在COX-2中，從膜到環(huán)加氧酶活性部位的通道在SC-558結(jié)合部位分岔，一個(gè)分支形成接受SC-558的溴苯基環(huán)的腔，另一個(gè)分支形成口袋狀，它事實(shí)上在COX-1結(jié)構(gòu)中是不可進(jìn)入的，而在COX-2中可容納整個(gè)苯磺酰胺部分。這個(gè)口袋在COX-2中是更易進(jìn)入的，是因?yàn)槔i氨酸被取代為異亮氨酸，它在523位上具有更長(zhǎng)的側(cè)鏈。434位上的另一個(gè)異亮氨酸改變?yōu)槔i氨酸可促進(jìn)苯磺酰氨基進(jìn)入COX-2中的這個(gè)新口袋，這種改變形成了一個(gè)穿過(guò)該新的親水性口袋延伸的分子門。最終，在COX-1中513位的組氨酸被替換為COX-2中的精氨酸，這兩種酶的疊加提示，COX-1酶中組氨酸的咪唑環(huán)不會(huì)延伸到足以與SC-558的磺酰氨基直接起作用，而與COX-2酶中的精氨酸卻是這樣的。該主題報(bào)告提到，在上述三種情況的每一種下，單一氨基酸的變化都顯著改變了COX-2的抑制曲線。
該主題報(bào)告得出的結(jié)論，看來(lái)有可能在SC-558所屬的二芳基雜環(huán)類抑制劑中COX-2的主要決定簇是苯磺酰胺部分。但是，沒(méi)有羧酸基也是重要的。120位上的精氨酸與其胍基是疏水性環(huán)加氧酶通道中少數(shù)帶電殘基之一，它通過(guò)電荷間的相互作用使經(jīng)典NSAID如氟比洛芬的羧酸基穩(wěn)定。在SC-558中不存在這樣的羧酸基，這也有可能是其COX-2選擇性的重要組分。試圖通過(guò)在該二芳基雜環(huán)結(jié)構(gòu)的吡唑上加入酸基來(lái)改善其對(duì)COX-2的效能的研究結(jié)果也支持了上述結(jié)論，此研究也始終得到了不好的選擇性。
該主題報(bào)告具體體現(xiàn)在第一個(gè)實(shí)施例，膜蛋白被成功地研究作為基于結(jié)構(gòu)的藥物設(shè)計(jì)的靶子，并粗略估計(jì)了本領(lǐng)域中有關(guān)NSAID與環(huán)加氧酶同功酶的結(jié)構(gòu)/活性關(guān)系和它們的所得抗炎活性對(duì)比它們的胃腸負(fù)反應(yīng)的目前的狀況。在本領(lǐng)域中目前的這種背景下，將看到本發(fā)明是完全未預(yù)料到的一種發(fā)展，它令人驚奇地提供了治療狗炎癥的一種最佳功效/安全性的方案。
Carabaza等在《臨床藥理學(xué)雜志》1996年第36卷505-512頁(yè)上的文章“手性非類固醇性抗炎藥對(duì)誘導(dǎo)環(huán)加氧酶的立體選擇性抑制”中研究并報(bào)道了COX-2同功酶的對(duì)映選擇性抑制的可能性。在三個(gè)不同體外系統(tǒng)中研究了酮洛芬、氟比洛芬、和酮咯酸對(duì)COX-2的立體選擇性抑制，所得結(jié)果在三個(gè)平行體外模型中與對(duì)COX-1的抑制作了對(duì)比。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，所有三種NSAID的S-對(duì)映體以相等的效力抑制了這兩種同功酶；但是它們的R-對(duì)映體對(duì)這兩種同功酶的抑制的效力顯著地且相應(yīng)地減少。換句話說(shuō)，所有三種R-對(duì)映體在COX-1和COX-2的抑制方面顯示出相等的效力，但是在所有情況下，它們的效力水平都比相應(yīng)的S-對(duì)映體低得多。在所報(bào)道的此研究中提到的“對(duì)映選擇性的顯著程度”僅是指R-與S-的對(duì)比，而不是指本發(fā)明咔洛芬的S-對(duì)映體獨(dú)特具有的COX-2選擇性。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了對(duì)需要進(jìn)行治療的家犬種成員的疼痛和炎癥病變以及與誘導(dǎo)環(huán)加氧酶-2(COX-2)的活性有關(guān)的疾病的治療或預(yù)防方法，同時(shí)通過(guò)相對(duì)于COX-1活性而選擇性抑制COX-2活性使得與組成環(huán)加氧酶-1(COX-1)的活性的同時(shí)抑制有關(guān)的不期望的副作用降低或消除，其中COX-2∶COX-1活性抑制的選擇性比值至少為3∶1，這是基于以產(chǎn)生≥80％COX-2抑制、優(yōu)選≥90％COX-2抑制的劑量在全血中測(cè)量的來(lái)自體外的抑制水平，該方法包含給所述這種家犬成員服用按照上述限制的治療疼痛和炎癥的治療有效量的抗炎選擇性COX-2抑制化合物，該化合物包含一種獨(dú)立地選自以下成員的抗炎化合物水楊酸衍生物；對(duì)氨基苯酚衍生物；吲哚和茚乙酸；雜芳基乙酸；芳基丙酸；鄰氨基苯甲酸；烯醇酸；和鏈烷酮。
在本發(fā)明的范圍內(nèi)，也可能通過(guò)給予一種以上選自上述抗炎化合物組的成員來(lái)實(shí)現(xiàn)上述治療或預(yù)防疼痛和炎性疾病和過(guò)程的方法。任何一種這樣復(fù)合的抗炎活性藥劑可能均需要以有關(guān)的單獨(dú)藥劑的藥動(dòng)學(xué)性能得到良好平衡為基礎(chǔ)。例如，迅速起作用可以與延長(zhǎng)治療半存留期平衡，或者在某些組織中形成大細(xì)胞貯液槽的傾向可以用血漿蛋白結(jié)合的較高速率來(lái)平衡。所有這樣的復(fù)合物都被考慮在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
本發(fā)明提供了滿足上述限制的任何抗炎選擇性COX-2抑制劑。其中這樣的選擇性抑制化合物是式(I)表示的、用于治療或預(yù)防一種家犬成員的疼痛和炎癥病變和疾病的咔洛芬化合物優(yōu)選的亞屬
其中R2是
其中A是羥基、(C1-C4)烷氧基、氨基、羥基-氨基、一-(C1-C2)烷基氨基、二-(C1-C2)烷基氨基；X和Y獨(dú)立地為H或(C1-C2)烷基；n為1或2；R6是鹵素、(C1-C3)烷基、三氟甲基、或硝基；R9是H；(C1-C2)烷基；苯基或苯基-(C1-C2)烷基，其中苯基可選地被氟或氯一取代；-C(＝O)-R，其中R是(C1-C2)烷基或苯基，可選地被氟或氯一取代；或-C(＝O)-O-R1，其中R1是(C1-C2)烷基；當(dāng)X和Y不同時(shí)，其(-)(R)和(+)(S)對(duì)映體；以及具有治療或預(yù)防疼痛和炎癥的治療活性的其所有藥學(xué)上可接受的鹽形式、藥物前體和代謝物。當(dāng)式(I)的抑制劑作為(-)(R)和(+)(S)對(duì)映體存在時(shí)，本發(fā)明提供單獨(dú)的(+)(S)對(duì)映體，或者當(dāng)兩種對(duì)映體一起存在時(shí)，提供其外消旋或非外消旋混合物。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了上述治療或預(yù)防需要這種治療的家犬成員的疼痛和炎癥病變和疾病的方法優(yōu)選的一個(gè)方面，是通過(guò)給予所述家犬成員治療疼痛和炎癥的有效量的抗炎選擇性COX-2抑制化合物，它對(duì)所述家犬成員的COX-2體外IC50效價(jià)比其對(duì)COX-1的體外IC50效價(jià)至少大30倍，優(yōu)選至少大40倍，更優(yōu)選至少大50倍，更優(yōu)選至少大60倍，甚至更優(yōu)選至少大80倍，最優(yōu)選至少大100倍，其中所述抑制劑選自以下本質(zhì)上由水楊酸衍生物；對(duì)氨基苯酚衍生物；吲哚和茚乙酸；雜芳基乙酸；芳基丙酸；鄰氨基苯甲酸；烯醇酸；和鏈烷酮組成的抗炎化合物組中。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了上述治療或預(yù)防需要這種治療的家犬成員的疼痛和炎癥病變和疾病的方法的另一個(gè)優(yōu)選方面，是通過(guò)給予所述家犬成員治療疼痛和炎癥的有效量的抗炎選擇性COX-2抑制化合物，該化合物能實(shí)質(zhì)上僅選擇性地抑制誘導(dǎo)型COX-2，而實(shí)質(zhì)上不抑制相應(yīng)的組成型COX-1。
本發(fā)明還提供了上述方法，其中所述治療有效量的如式(I)定義的抗炎化合物，尤其是所述6-氯-α-甲基-9H-咔唑-2-乙酸的(+)(S)-對(duì)映體，以全身給藥方式用予所述家犬成員，其中所述全身給藥包含(1)將含有合適的液體形式的所述抑制劑的藥物組合物注射或輸入合適的身體組織或腔中，以使所述抑制劑通過(guò)系統(tǒng)給藥而釋放，該系統(tǒng)給藥是動(dòng)脈內(nèi)給藥、真皮內(nèi)或經(jīng)真皮給藥、皮下給藥、肌內(nèi)給藥、脊柱內(nèi)給藥、鞘內(nèi)給藥、或靜脈給藥，其中所述抑制劑是(a)作為溶質(zhì)包含在溶液中；(b)包含在乳劑的不連續(xù)相中，或包含在注射或輸注時(shí)反轉(zhuǎn)的反向乳劑的不連續(xù)相中，所述乳劑含有合適的乳化劑；或(c)作為膠態(tài)或微粒形式的懸浮固體包含在懸浮液中，所述懸浮液含有適當(dāng)?shù)膽腋?2)將含有合適的液體形式的所述抑制劑的藥物組合物注射或輸入合適的身體組織或腔中，以作為貯存用于通過(guò)系統(tǒng)給藥釋放所述抑制劑，其中所述組合物貯存所述抑制劑，并隨后將所述抑制劑延遲、緩慢、和/或控制釋放以達(dá)到系統(tǒng)分布；(3)將含有合適的固體形式的所述抑制劑的藥物組合物滴注、吸入或吹入到合適的身體組織或腔中，其中所述抑制劑是(a)包含在一個(gè)固體植入組合物中，該植入組合物安置在合適的身體組織或腔中，所述組合物提供了所述抑制劑的延遲、緩慢、和/或控制釋放；(b)包含在吸入到肺里的顆粒組合物中；或(c)包含在吹入到合適的身體組織或腔中的顆粒組合物中，其中所述組合物可選地提供所述抑制劑的延遲、緩慢、和/或控制釋放；或者(4)攝取含有適當(dāng)?shù)墓腆w或液體形式的所述抑制劑的藥物組合物，以將所述抑制劑口服釋放，其中所述抑制劑是(a)包含在固體劑型中；或(b)包含在液體劑型中。栓劑可以認(rèn)為是一種特殊型式的植入物，因?yàn)樗鼈儼谑覝叵聻楣腆w而在體溫下熔解的基質(zhì)，緩慢地將活性成分釋放，同時(shí)它們浸滲到身體的周圍組織中，在此活性成分被吸收并轉(zhuǎn)輸為有效的系統(tǒng)給藥。允許經(jīng)皮和經(jīng)粘膜給藥以實(shí)現(xiàn)系統(tǒng)釋放的劑型也包括在本發(fā)明內(nèi)，尤其包括經(jīng)皮貼片技術(shù)。
上述治療或預(yù)防疼痛和炎癥的方法還包含固體口服劑型的攝食和給藥，所述劑型選自延遲釋放的口服片劑、膠囊劑、丸劑、錠劑、糖錠、和多顆粒劑，防止在胃中釋放和吸收的腸溶片劑和膠囊劑以便于遠(yuǎn)離狗的胃釋放，緩釋口服片劑、膠囊劑和微粒劑，它們可使活性成分以可控制的方式系統(tǒng)釋放至少10小時(shí)，速溶片劑，密封溶液，口服糊劑，給予所治療的狗或加入到其食物中的顆粒劑型，以及可咀嚼劑型，其中所述活性成分可以在所治療的狗的咀嚼過(guò)程中，與美味的咀嚼物一起被消耗，或者也可以通過(guò)不會(huì)被消耗的咀嚼物中浸提而釋放。與上述劑型一起使用的還包括活性成分的微膠囊制劑，它們可以加入到片劑、膠囊劑或其他最終制劑中。另外，所述方法還包含液體口服劑型的攝食，這些劑型選自溶液、懸浮液、乳劑、反向乳劑、酏劑、提取液、酊劑、和濃縮液，可加入到所治療的狗的飲用水中。這些液體劑型中的任何一種，當(dāng)按照本領(lǐng)域中的熟知方法配制時(shí)，既可以直接給予所治療的狗，也可以加入到所治療的狗的飲用水中。另一方面，濃縮液體劑型配制成首先加入到一定量的水中，然后取出等分?jǐn)?shù)量直接給予狗或加入到狗的飲用水中。
本發(fā)明進(jìn)一步提供的上述方法是其中所述治療有效量的如式(I)定義的抗炎化合物局部應(yīng)用到所述家犬成員的炎癥部位。還提供了所述局部給藥方法，其中所述局部給藥包含(1)將含有合適的液體形式的所述抑制劑的藥物組合物注射或輸入局部炎癥部位以通過(guò)局部給藥釋放所述抑制劑，所述局部給藥是動(dòng)脈內(nèi)給藥、關(guān)節(jié)內(nèi)給藥、軟骨內(nèi)給藥、肋內(nèi)給藥、囊內(nèi)給藥、真皮內(nèi)或經(jīng)真皮給藥、束內(nèi)給藥、韌帶內(nèi)給藥、髓內(nèi)給藥、肌內(nèi)給藥、神經(jīng)內(nèi)給藥、骨內(nèi)給藥、骨盆內(nèi)給藥、心包內(nèi)給藥、脊柱內(nèi)給藥、胸骨內(nèi)給藥、滑膜內(nèi)給藥、跗骨內(nèi)給藥、或鞘內(nèi)給藥；包括將所述抑制劑延遲釋放、控制釋放、和/或緩慢釋放到所述局部炎癥部位的組分；其中所述抑制劑是(a)作為溶質(zhì)包含在溶液中；(b)包含在乳劑的不連續(xù)相中，或包含在注射或輸注時(shí)轉(zhuǎn)化的反向乳劑的不連續(xù)相中，所述乳劑含有合適的乳化劑；或(c)作為膠態(tài)或微粒形式的懸浮固體包含在懸浮液中，所述懸浮液含有適當(dāng)?shù)膽腋?2)將含有合適的液體形式的所述抑制劑的藥物組合物注射或輸入作為貯存用于將所述抑制劑釋放到所述局部炎癥部位；其中所述組合物貯存所述抑制劑，并隨后將所述抑制劑延遲、緩慢、和/或控制釋放到所述局部炎癥部位；或者(3)將含有合適的固體形式的所述抑制劑的藥物組合物滴注、吸入或吹入以將所述抑制劑釋放到所述局部炎癥部位，其中所述抑制劑是(a)包含在一個(gè)固體植入組合物中，該植入組合物安置在所述局部炎癥部位，所述組合物可選地將所述抑制劑延遲、緩慢、和/或控制釋放到所述局部炎癥部位；(b)包含在吸入到包括肺在內(nèi)的局部炎癥部位的顆粒組合物中；或(c)包含在吹入到局部炎癥部位的顆粒組合物中，其中所述組合物可選地將所述抑制劑延遲、緩慢、和/或控制釋放到所述局部炎癥部位。在本發(fā)明范圍內(nèi)還可包括用于局部給藥的其他特定劑型。例如，應(yīng)用于皮膚的組合物，優(yōu)選通過(guò)機(jī)械方法用力增強(qiáng)吸收，通過(guò)摩擦將該組合物涂布在皮膚上，這樣就可以在需要這種治療時(shí)，用該組合物將抑制劑活性成分釋放到局部區(qū)域，例如發(fā)炎的關(guān)節(jié)處。這樣的組合物可以是凝膠、洗液、軟膏、油膏、以及其他設(shè)計(jì)用于局部應(yīng)用的制劑的形式。
本發(fā)明還提供上述方法，其中治療有效量的抗炎抑制劑是以這樣的量給予所述家犬成員，該量表示為mg/kg所述犬的體重/天，范圍是從約0.01mg/kg/天至約20.0mg/kg/天，優(yōu)選從約0.1mg/kg至約12.0mg/kg/天，更優(yōu)選從約0.5mg/kg至約10.0mg/kg/天，最優(yōu)選從約0.5至約8.0mg/kg/天。6-氯-α-甲基-9H-咔唑-2-乙酸一般是以約4.0mg/kg/天的劑量給藥。
按照本發(fā)明，還提供了一種用于治療或預(yù)防需要治療的家犬成員的疼痛和炎癥病變和疾病的藥物組合物，它包含藥學(xué)上可接受的載體以及治療疼痛和炎癥有效量的環(huán)加氧酶-2(COX-2)的抗炎選擇性抑制劑，其中基于以得到≥80％COX-2抑制、優(yōu)選得到≥90％COX-2抑制的劑量在全血中測(cè)量的來(lái)自體外的抑制水平，COX-2與COX-1的選擇性比值至少為3∶1。在所述用于治療或預(yù)防疼痛和炎癥病變和疾病的藥物組合物的優(yōu)選方面，所述治療有效的抗炎選擇性COX-2抑制劑的體外IC50效能比環(huán)加氧酶-1(COX-1)的體外IC50效能大至少30倍，優(yōu)選大至少40倍，更優(yōu)選大至少50倍，更優(yōu)選大至少60倍，甚至更優(yōu)選大至少80倍，最優(yōu)選大至少100倍；其中所述抑制劑選自以下基本上由水楊酸衍生物；對(duì)氨基苯酚衍生物；吲哚和茚乙酸；雜芳基乙酸；芳基丙酸；鄰氨基苯甲酸；烯醇酸；和鏈烷酮組成的抗炎化合物組中。
本發(fā)明還提供了上述藥物組合物，其中所述抑制劑選自芳基丙酸；并且所述抑制劑仍是上文定義的式(I)化合物。還提供了上述藥物組合物，其中式(I)表示的抑制性化合物的環(huán)加氧酶-2(COX-2)的體外IC50效能比其環(huán)加氧酶-1(COX-1)體外IC50效能大至少100倍；且其中X和Y之一是H，另一個(gè)是甲基；且其中當(dāng)所得兩種對(duì)映體都存在時(shí)，(+)(S)對(duì)映體的量至少占75％。特別是，本發(fā)明提供了上述藥物組合物，其中在式(I)中，對(duì)于R2，n＝1，X和Y之一為H，另一個(gè)為甲基，且A為羥基、(C1-C2)烷氧基、或氨基；R6是氯或三氟甲基；R9是H、甲基、乙酰基、苯甲?；?、或乙酸基；且其中當(dāng)所得兩種對(duì)映體一起存在時(shí)，(+)(S)對(duì)映體的量至少占85％，優(yōu)選至少占90％，更優(yōu)選至少占95％，最優(yōu)選至少占99％。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了上述藥物組合物，其中所述的抑制劑包含6-氯-α-甲基-9H-咔唑-2-乙酸；其中當(dāng)兩種所得對(duì)映體都存在時(shí)，(+)(S)對(duì)映體的含量至少為85％，優(yōu)選地至少為90％，更優(yōu)選地至少為95％，最優(yōu)選地至少為99％。特別是本發(fā)明提供了上述和下述藥物組合物，其中所述的抑制劑包含的完全是6-氯-α-甲基-9H-咔唑-2-乙酸的(+)(S)對(duì)映體。
本發(fā)明也提供了上述藥物組合物，其中在所用劑量制度和給藥參數(shù)的背景下，治療有效量的抗炎抑制劑足以提供動(dòng)物一定量的所述抑制劑，以mg每kg所述動(dòng)物體重每天表示，其范圍為約0.01mg/kg至約20.0mg/kg/天，優(yōu)選為約0.1mg/kg至約12.0mg/kg/天，更優(yōu)選為約0.5mg/kg至約10.0mg/kg/天，最優(yōu)選為約0.5mg/kg至約8.0mg/kg/天。6-氯-α-甲基-9H-咔唑-2-乙酸的給藥一般是以4.0mg/kg/天的速率進(jìn)行。
本發(fā)明藥物組合物的進(jìn)一步優(yōu)選方面提供了抗炎的選擇性COX-2抑制劑，該抑制劑選擇性地基本上僅抑制誘導(dǎo)COX-2，而基本上不抑制相應(yīng)的組成COX-1。特別優(yōu)選的實(shí)施方式包含一種藥學(xué)上可接受的載體以及有效治療疼痛和炎癥所需量的抗炎的選擇性COX-2抑制劑，該抑制劑包含一種式(1)化合物，其中對(duì)R2來(lái)說(shuō)，n＝1，X與Y之一為H，另一個(gè)為甲基，A為羥基、C1-C2烷氧基或氨基；R6為氯或三氟甲基；R9為H、甲基、乙?；⒈郊柞；蚣籽趸驶?+)(S)對(duì)映體的含量為至少99％。所述抑制劑尤其是，其包含的完全是6-氯-α-甲基-9H-咔唑-2-乙酸的(+)(S)對(duì)映體。優(yōu)選地，在所述藥物組合物中，在所用劑量制度和給藥參數(shù)的背景下，所述治療有效量的所述抑制劑足以提供動(dòng)物一定量的所述抑制劑，以mg每kg所述動(dòng)物體重每天表示，其范圍為約0.5mg/kg至約8.0mg/kg/天。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了以一種劑型存在的上述藥物組合物，該劑型能夠在一種適當(dāng)制度中提供所需的治療疼痛和炎癥所需有效量的抗炎的選擇性COX-2抑制劑。不過(guò)，許多上述和下述藥物組合物用來(lái)具有長(zhǎng)效作用，也就是說(shuō)，提供長(zhǎng)于幾小時(shí)或一天的抑制活性，即提供長(zhǎng)達(dá)幾天至一周或更長(zhǎng)的抑制活性。這種長(zhǎng)效藥物組合物特別例如植入物和藥庫(kù)，一部分這些例子用來(lái)提供長(zhǎng)達(dá)一個(gè)月或更長(zhǎng)的抑制活性。在治療學(xué)上對(duì)治療或預(yù)防疼痛和炎癥來(lái)說(shuō)所必需的有效量的抑制劑以mg每kg所述家犬體重每天表示，其范圍為約0.01mg/kg至約20.0mg/kg/天，優(yōu)選為約0.1mg/kg至約12.0mg/kg/天，更優(yōu)選為約0.5mg/kg至約10.0mg/kg/天，最優(yōu)選為約0.5mg/kg至約8.0mg/kg/天。6-氯-α-甲基-9H-咔唑-2-乙酸的給藥一般是以4.0mg/kg/天的速率進(jìn)行。
特別是本發(fā)明進(jìn)一步提供了上述藥物組合物，其中所述的治療疼痛和炎癥所需有效量的抗炎抑制劑是以適合于對(duì)所述家犬進(jìn)行全身給藥的劑型提供的，其中所述藥物組合物含有液體形式的所述抑制劑，這種液體形式適合于通過(guò)下列方法釋放所述的抑制劑(1)注射或輸入，其方式為動(dòng)脈內(nèi)、真皮內(nèi)或經(jīng)真皮、皮下、肌內(nèi)、脊柱內(nèi)、鞘內(nèi)或靜脈內(nèi)，其中所述抑制劑(a)作為溶質(zhì)包含在溶液中；(b)包含在乳劑的不連續(xù)相中，或者包含在經(jīng)過(guò)注射或輸入發(fā)生反轉(zhuǎn)的反乳劑的不連續(xù)相中，所述乳劑含有適當(dāng)?shù)娜榛瘎?；或?c)作為被懸浮的固體以膠體或微粒形式包含在懸浮液中，所述懸浮液含有適當(dāng)?shù)膽腋?2)作為藥庫(kù)注射或輸入適當(dāng)?shù)纳眢w組織或體腔中，其中所述組合物提供了所述抑制劑的儲(chǔ)藏以及其后的所述抑制劑的延遲釋放、緩釋和/或控釋，用于全身分布；(3)將所述藥物組合物以適當(dāng)?shù)墓腆w形式滴注、吸入或吹入適當(dāng)?shù)纳眢w組織或體腔中，其中所述抑制劑(a)包含在固體植入組合物中，該組合物提供了所述抑制劑的延遲釋放、緩釋和/或控釋；(b)包含在用于吸入肺中的微粒組合物中；或者(c)包含在用于吹入適當(dāng)身體組織或體腔中的微粒組合物中，其中所述組合物可選地提供了所述抑制劑的延遲釋放、緩釋和/或控釋；或者(4)以適當(dāng)固體或液體形式攝取所述藥物組合物，用于所述抑制劑的經(jīng)口釋放，其中所述抑制劑(a)含在固體劑型中；或者(b)含在液體劑型中。
在尤其優(yōu)選的提供了所述抗炎的選擇性COX-2抑制劑的延遲釋放、緩釋和/或控釋的上述藥物組合物中，包括了所有這樣的劑型，它們對(duì)COX-2同功酶活性產(chǎn)生≥80％的抑制作用，并使所述抑制劑至少為10μg/ml的血漿濃度保持至少4小時(shí)，優(yōu)選地至少為8小時(shí)，更優(yōu)選地至少為12小時(shí)，還更優(yōu)選地至少為16小時(shí)，進(jìn)而更優(yōu)選地至少為20小時(shí)，最優(yōu)選地至少為24小時(shí)。優(yōu)選地，所包括的上述劑型對(duì)COX-2同功酶活性產(chǎn)生≥80％的抑制作用，并使所述抑制劑至少為15μg/ml的血漿濃度保持至少4小時(shí)，優(yōu)選地至少為8小時(shí)，更優(yōu)選地至少為12小時(shí)，還更優(yōu)選地至少為20小時(shí)，最優(yōu)選地至少為24小時(shí)。更優(yōu)選地，所包括的上述劑型對(duì)COX-2同功酶活性產(chǎn)生≥90％的抑制作用，并使所述抑制劑至少為20μg/ml的血漿濃度保持至少4小時(shí)，優(yōu)選地至少為8小時(shí)，更優(yōu)選地至少為12小時(shí)，還更優(yōu)選地至少為20小時(shí)，最優(yōu)選地至少為24小時(shí)。
上述藥物組合物的具體劑型包括栓劑，作為植入物的一種特殊類型，所包含的基質(zhì)在室溫下為固體，但在體溫下熔化，緩慢釋放充滿其中的活性成分進(jìn)入身體的周圍組織，其中活性成分被吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)，實(shí)現(xiàn)全身給藥；固體經(jīng)口劑型，選自由下列劑型組成的組延遲釋放的口服片劑、膠囊劑、caplet、糖錠、錠劑和多顆粒劑，防止在狗胃中釋放和吸收以促進(jìn)在胃遠(yuǎn)端釋放的腸衣片劑和膠囊劑，以控制方式提供活性成分長(zhǎng)達(dá)24小時(shí)全身釋放的緩釋口服片劑、膠囊劑和微粒劑，速溶片劑，包封溶液，口服糊劑，加入或待加入受治療狗食物中的顆粒狀劑型，可咀嚼劑型、其中所述抑制活性成分是同可口的咀嚼物一起被消耗的，或者另一種選擇是在受治療狗的咀嚼過(guò)程中，通過(guò)自不被消耗的咀嚼物中過(guò)濾出活性成分來(lái)進(jìn)行釋放；液體經(jīng)口劑型，選自由下列劑型組成的組溶液、懸浮液、乳劑、反乳劑、酏劑、浸膏劑、酊劑和濃縮液，可選地將其加入到受治療狗的飲水中。當(dāng)按照本領(lǐng)域熟知的方法進(jìn)行配制后，任意這些液體劑型能夠直接對(duì)受治療狗給藥，或者可以加入到受治療狗的飲水中。另一方面，濃縮液在配制時(shí)首先向其中加入一定量的水，從中可以取出可分量用于直接對(duì)狗給藥，或者加入到狗的飲水中。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了上述藥物組合物，其中所述治療疼痛和炎癥所需有效量的所述抗炎抑制劑是以適合于對(duì)所述家犬炎癥部位進(jìn)行局部給藥的劑型提供的，其中所述藥物組合物含有液體形式的所述抑制劑，這種液體形式適合于通過(guò)下列方法釋放所述的抑制劑(1)注射或輸入局部炎癥部位，其方式為動(dòng)脈內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、軟骨內(nèi)、肋內(nèi)、囊內(nèi)、真皮內(nèi)或經(jīng)真皮、束內(nèi)、韌帶內(nèi)、髓內(nèi)、肌內(nèi)、鼻內(nèi)、神經(jīng)內(nèi)、眼內(nèi)-眼部給藥-、骨內(nèi)、骨盆內(nèi)、心包內(nèi)、脊柱內(nèi)、胸骨內(nèi)、滑膜腔內(nèi)、跗骨內(nèi)或鞘內(nèi)；包括提供所述抑制劑延遲釋放、控釋和/或緩釋進(jìn)入所述局部炎癥部位的組分；其中所述抑制劑包含在(a)在溶液中，作為一種溶質(zhì)；(b)乳劑的不連續(xù)相中，或經(jīng)過(guò)注射或輸入發(fā)生反轉(zhuǎn)的反乳劑的不連續(xù)相中，所述乳劑含有適當(dāng)?shù)娜榛瘎换蛘?c)懸浮液中，作為被懸浮的固體以膠體或微粒形式，所述懸浮液含有適當(dāng)?shù)膽腋?；或?2)作為用于釋放所述抑制劑的藥庫(kù)，注射或輸入所述的局部炎癥部位；其中所述組合物提供了所述抑制劑的儲(chǔ)藏以及其后的所述抑制劑的延遲釋放、緩釋和/或控釋，進(jìn)入所述的局部炎癥部位，其中所述組合物也包括確保所述抑制劑顯著具有局部活性、幾乎沒(méi)有遍及全身的活性的組分；或者，其中所述藥物組合物含有固體形式的抑制劑，這種固體形式適合于通過(guò)下列方法釋放所述抑制劑(3)滴注、吸入或吹入所述的局部炎癥部位，其中所述抑制劑包含在(a)固體植入組合物中，該組合物被安裝在所述的局部炎癥部位中，所述組合物可選地提供了所述抑制劑的延遲釋放、緩釋和/或控釋，進(jìn)入所述的局部炎癥部位；(b)微粒組合物中，用于吸入包括肺在內(nèi)的局部炎癥部位；或者(c)用于吹入局部炎癥部位的微粒組合物中，其中所述組合物包括確保所述抑制劑具有顯著的局部活性和不明顯的留在全身活性的組分，并可選地提供了所述抑制劑的延遲釋放、緩釋和/或控釋，進(jìn)入所述的局部炎癥部位。
按照本發(fā)明，提供了一種或幾種其他的治療活性劑與活性成分的復(fù)合物，用于治療疼痛和炎癥，該復(fù)合物形成了上述本發(fā)明的藥物組合物。當(dāng)關(guān)節(jié)嚴(yán)重發(fā)炎并同時(shí)被微生物感染時(shí)，例如細(xì)菌、真菌、原生動(dòng)物、病毒等，需要將本發(fā)明的活性成分與一種或幾種抗菌劑、抗真菌劑、抗原生動(dòng)物劑、抗病毒劑或類似治療劑復(fù)合給藥。并且，本發(fā)明的活性成分不僅可以與其他NSAID復(fù)合給藥，也可以與其他炎癥介質(zhì)的抑制劑復(fù)合給藥，包含一種或幾種選自基本上由這樣幾類抑制劑組成的組的成分，其例子包括H1受體拮抗劑；激肽B1和B2受體拮抗劑；前列腺素抑制劑，如PGD、PGF、PGI2和PGE受體拮抗劑；血栓烷A2(TXA2)抑制劑；5-及12-脂氧合酶抑制劑；白三烯LTC4、LTD4/LTE4和LTB4抑制劑；PAF受體拮抗劑；以金硫基與不同親水性基團(tuán)形式存在的金；免疫抑制劑，例如環(huán)孢菌素、硫唑嘌呤和甲氨蝶呤；抗炎糖皮質(zhì)激素；青霉胺；羥氯喹；抗痛風(fēng)劑，例如秋水仙堿；黃嘌呤氧化酶抑制劑，例如別嘌呤醇；排尿酸劑，例如丙磺舒、磺吡酮和苯溴馬隆。進(jìn)一步提供了將本發(fā)明的抗炎劑與用來(lái)治療老年狗疾病病癥、綜合征和癥狀的治療劑結(jié)合給藥，包含一種或幾種選自基本上由治療劑和所治療病癥組成的組的要素，包括認(rèn)知治療劑，用來(lái)阻礙記憶喪失和減退；抗高血壓劑和其他心血管藥物，用來(lái)抵銷動(dòng)脈粥樣硬化的后果，包括高血壓、心肌局部缺血包括絞痛、充血性心力衰竭、和心肌梗塞，選自利尿劑、血管舒張劑如肼苯噠嗪、β-腎上腺素受體拮抗劑如普萘洛爾，血管緊張素II轉(zhuǎn)化酶抑制劑(ACE抑制劑)如用于治療二尖瓣閉鎖不全的老年狗的依那普利、以及單用和與中性內(nèi)肽酶抑制劑結(jié)合使用的依那普利、血管緊張素II受體拮抗劑如losartan、腎素抑制劑、鈣通道阻滯劑如硝苯地平、抗交感神經(jīng)劑如甲基多巴、α2-腎上腺素激動(dòng)劑如可樂(lè)定、α-腎上腺素受體拮抗劑如哌唑嗪、和HMG-CoA-還原酶抑制劑(抗血膽甾醇過(guò)多劑)、如洛伐他丁或atorvastatin；抗腫瘤劑，尤其是抗有絲分裂藥，包括長(zhǎng)春花屬生物堿如長(zhǎng)春堿和長(zhǎng)春新堿；生長(zhǎng)激素促分泌劑；強(qiáng)止痛劑；局部和全身麻醉劑；以及H2受體拮抗劑和其他胃保護(hù)劑。進(jìn)一步提供了上述治療劑的復(fù)合物用于治療狗的急性病癥，包括細(xì)菌感染，同時(shí)伴發(fā)變性關(guān)節(jié)疾??；治療狗的慢性病癥，其中用于此目的的制度包含本發(fā)明抗炎劑的給藥結(jié)合其他藥物療法，其他藥物療法是在規(guī)則制定的基礎(chǔ)上，用于治療慢性病癥，包括骨關(guān)節(jié)炎；將本發(fā)明抗炎劑與一種或幾種用來(lái)形成組合的其他治療劑配制成適當(dāng)劑型，劑型中含有全部形成該復(fù)合的藥物，包括其中所述不同的藥物具有不同的半衰期，通過(guò)產(chǎn)生所述具有不同釋放時(shí)間的藥物的控釋劑型，實(shí)現(xiàn)相對(duì)均勻的給藥；含藥飼料劑型，其中所述的復(fù)合使用的藥物在所述飼料組合物中一起以混合物存在。按照本發(fā)明，進(jìn)一步提供了并合給藥，其中通過(guò)以復(fù)合方式給出的所述藥物的同時(shí)給藥，實(shí)現(xiàn)藥物的復(fù)合；包括以不同劑型和給藥途徑方式的并合給藥；按照不同的但也是有規(guī)則和連續(xù)的給藥程序的各種復(fù)合物的用途，由此保持了受治療狗體內(nèi)所涉及藥物的所需血漿水平，即使組成所述組合的各種藥物沒(méi)有對(duì)所述的狗同時(shí)給藥。
令人矚目的還有按照本發(fā)明，提供了工業(yè)上適用的包裝，在家犬需要接受該治療時(shí)，用于疼痛和炎癥病變和疾病的治療處理或預(yù)防，該包裝包括一個(gè)適當(dāng)?shù)娜萜?，該容器的形式可以是一層外包裝和一個(gè)可移動(dòng)的固定其中的內(nèi)部容器；包封在所述容器中的是適當(dāng)劑型的活性成分，該活性成分包含選擇性COX-2抑制劑，其中根據(jù)體外抑制水平，COX-2對(duì)COX-1的選擇比至少為3∶1，正如本文另有所述，該抑制水平是在全血中、在產(chǎn)生≥80％COX-2抑制作用的劑量下測(cè)量得到的，優(yōu)選為在產(chǎn)生≥90％COX-2抑制作用的劑量下；和關(guān)于所述容器的指導(dǎo)性和介紹性印刷資料，可以附在所述容器上，并且它們包封在所述容器中，或者作為所述容器的固有部分顯示出來(lái)，所述指導(dǎo)性和介紹性資料在開頭傳達(dá)給讀者的是所述活性成分在對(duì)受治療狗給藥時(shí)，在所述狗的現(xiàn)有或預(yù)期產(chǎn)生疼痛和炎癥的部位有效地抑制所誘導(dǎo)的COX-2，其中根據(jù)體外抑制水平，COX-2對(duì)COX-1的選擇比至少為3∶1，該抑制水平是在全血中、在產(chǎn)生≥80％COX-2抑制作用的劑量下測(cè)量得到的，因此治療或預(yù)防所述的疼痛和炎癥，否則將從此導(dǎo)致疼痛和炎癥。在一種優(yōu)選的適用于商業(yè)用途的所述包裝中，所述指導(dǎo)性和介紹性資料在敘述上將傳達(dá)給讀者的是所述活性成分在對(duì)受治療狗給藥時(shí)，將在所述狗體內(nèi)有效提供對(duì)所誘導(dǎo)的COX-2的完全抑制作用，因此治療或預(yù)防那里的疼痛和炎癥；而且當(dāng)所述成分對(duì)所述的狗給藥時(shí)，將在所述狗體內(nèi)基本上不產(chǎn)生對(duì)組成COX-1的抑制作用，因此將在多數(shù)狗體內(nèi)有效地避免因?qū)嵸|(zhì)上抑制所述的COX-1而導(dǎo)致的不良胃腸副作用及其他副作用。
令人矚目的還有按照本發(fā)明，進(jìn)一步提供了即如上述類型的包裝，包含一個(gè)所述的適當(dāng)?shù)娜萜?；包封在所述容器中的是口服劑型的?1)化合物，該劑型可以是可咀嚼的或可攝取的口服片劑、稱之為小藥囊的單位劑量小包、由單位劑量小包制得的懸浮液、用于口服懸浮液的粉末、或口服懸浮液本身，它不會(huì)不利地起到食物的作用；和如上所述的關(guān)于所述容器的指導(dǎo)性和介紹性印刷資料，其中沒(méi)有任何關(guān)于所述口服劑型是否能夠與食物一起攝取的表述或含蓄的限制。
發(fā)明的詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的目的是找到一個(gè)數(shù)十年來(lái)獸醫(yī)領(lǐng)域所面臨的嚴(yán)重問(wèn)題的解決辦法，該問(wèn)題是有關(guān)對(duì)狗的有效而安全的抗炎治療的需求。該問(wèn)題的嚴(yán)重性和難操作性來(lái)自這樣一個(gè)事實(shí)，所有抗炎劑、尤其是已在狗體內(nèi)試用過(guò)的NSAID，事實(shí)上在狗體內(nèi)都具有不可接受的、有時(shí)是危險(xiǎn)的副反應(yīng)，這就大為減少了它們的用途。迄今為止，最普遍存在的和最具威脅性的副反應(yīng)是胃腸粘膜功能失調(diào)和刺激作用，導(dǎo)致潰瘍、出血，最終是穿孔和腹膜炎。這些不良副反應(yīng)是由不同前列腺素的抑制作用介導(dǎo)產(chǎn)生的，該抑制作用是由NSAID抑制劑引起的，從而導(dǎo)致對(duì)保護(hù)性胃腸粘膜的有限血液供應(yīng)，進(jìn)而嚴(yán)重減少了胃腸粘膜的總量和保護(hù)功能。
由NSAID帶來(lái)的胃損傷至少具有兩種明顯的機(jī)理?？诜o藥的NSAID產(chǎn)生局部刺激作用，使酸逆擴(kuò)散進(jìn)入胃粘膜，誘發(fā)組織損傷。另一方面，胃腸外給藥也能導(dǎo)致?lián)p傷和出血，這與抑制胃前列腺素的生物合成有相互關(guān)系， 胃前列腺素在胃粘膜中起到細(xì)胞保護(hù)功能。這些前列腺素、尤其是PGI2和PGE2，抑制胃酸分泌，增加粘膜血流量，促進(jìn)腸中細(xì)胞保護(hù)粘液的分泌。NSAID的其他不良副作用包括血細(xì)胞功能失調(diào)、延長(zhǎng)妊娠或自然分娩、改變腎臟功能、和過(guò)敏反應(yīng)。
所有上述NSAID的不良副作用很可能取決于內(nèi)源性前列腺素的合成阻滯。因此，發(fā)現(xiàn)不會(huì)導(dǎo)致全身產(chǎn)生該不良副作用的NSAID引起了人們的濃厚興趣。狗不僅尤其易受炎癥病變和疾病的傷害，如變性關(guān)節(jié)炎，而且特別易患來(lái)自繼發(fā)的不利胃腸反應(yīng)的并發(fā)癥。
本文所用的“狗”一詞表示任意家犬，其中有大量不同的品種。盡管可以使用特定的品種進(jìn)行生物活性的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，不過(guò)令人矚目的是將發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的抑制性化合物可用于治療任意這些眾多品種的疼痛和炎癥。
從廣義上說(shuō)，本發(fā)明的要點(diǎn)是令人驚奇地發(fā)現(xiàn)了一小類抗炎劑，其中咔洛芬是最好的例子，即6-氯-α-甲基-9H-咔唑-2-乙酸，它具有犬環(huán)加氧酶-2(COX-2)高度的選擇性，還發(fā)現(xiàn)這種選擇性在一大類羧基C1-C4烷基芳基和/或雜芳基抗炎劑中是獨(dú)特的，咔洛芬類化合物也屬于這類抗炎劑。這種在狗中獨(dú)特和意外的選擇性對(duì)安全而有效地治療患有任意一種大量炎癥病變和疾病的狗來(lái)說(shuō)具有深遠(yuǎn)的含義。
現(xiàn)在已被尤其是狗的炎癥病變和疾病治療領(lǐng)域所充分接受的是，在體內(nèi)產(chǎn)生不同前列腺素化合物的內(nèi)源反應(yīng)級(jí)聯(lián)開始于花生四烯酸，并通過(guò)一種名為環(huán)加氧酶的必需酶的作用進(jìn)行下去。已經(jīng)確定，這種酶以兩種同功酶的形式存在，它們是分離的，也是獨(dú)立地發(fā)揮作用，一種是組成環(huán)加氧酶-1(COX-1)同功酶，另一種是環(huán)加氧酶-2(COX-2)同功酶。狗中COX-1同功酶負(fù)責(zé)產(chǎn)生在胃、腸、腎和血小板中發(fā)揮重要功能的前列腺素，其中一部分在本質(zhì)上是保護(hù)性的，尤其是對(duì)胃腸粘膜來(lái)說(shuō)。狗中COX-2同功酶負(fù)責(zé)產(chǎn)生在嗜中性白細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞內(nèi)介導(dǎo)急性和慢性炎癥的前列腺素，如PGE2，其中COX-2基因被表達(dá)。COX-2能夠被內(nèi)毒素、脂多糖(LPS)、各種細(xì)胞活素(例如IL-1和TNF)、生長(zhǎng)因子(例如EGF和PDGF)和很多其他試劑所誘導(dǎo)。例如，在大鼠角叉菜膠誘發(fā)胸膜炎模型中，胸膜滲出物的單核細(xì)胞的免疫印跡法能夠檢測(cè)到COX-2同功酶。
最終，本領(lǐng)域把目標(biāo)針對(duì)于發(fā)現(xiàn)能夠在100％基礎(chǔ)上有效抑制狗COX-2同功酶活性的化合物，與此同時(shí)在0％基礎(chǔ)上有效抑制COX-1同功酶活性。實(shí)際情況是，這等同于尋找選擇性地抑制COX-2同功酶的化合物，也即通過(guò)相對(duì)較高水平的COX-2同功酶抑制作用提供最佳抗炎療效的化合物，而其劑量也通過(guò)相對(duì)較低水平的COX-1同功酶抑制作用產(chǎn)生最少不良副作用。直到本發(fā)明所述的發(fā)現(xiàn)為止，唯一表現(xiàn)出COX-2選擇性的化合物具有磺?；騺喕酋０被皇囚然?，這是經(jīng)典NSAID的最主要特征。從這些觀察結(jié)果推測(cè)，COX-1同功酶的Arg 150殘基對(duì)選擇性COX-2抑制劑來(lái)說(shuō)不是必要的鍵合部位，而Arg 150殘基對(duì)COX-1活性來(lái)說(shuō)才是必要的，因?yàn)樗I合了花生四烯酸的末端羧基，類似地也束縛了上文所指的經(jīng)典NSAID的羧酸功能?？梢灶A(yù)測(cè)，COX-2選擇性抑制劑將束縛犬COX-2同功酶的某種獨(dú)特特征，而不是犬COX-1和COX-2同功酶的共同特征。
因此，本發(fā)明提供了一種方法，用于選擇性抑制誘導(dǎo)環(huán)加氧酶-2(COX-2)，這是相對(duì)于抑制相應(yīng)的組成環(huán)加氧酶-1(COX-1)而言的，因此還用于在家犬需要接受該治療時(shí)，治療或預(yù)防與之有關(guān)的疼痛和炎癥病變和疾病，其中根據(jù)體內(nèi)和體外抑制水平，COX-2對(duì)COX-1的選擇比至少為3∶1，該抑制水平是在全血中、在產(chǎn)生≥90％COX-2抑制作用的劑量或劑量范圍下測(cè)量得到的，該方法包括將一定量的抗炎化合物對(duì)所述動(dòng)物給藥，按照上文敘述的限制，該給藥量在治療學(xué)上對(duì)治療疼痛和炎癥有效。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了上述治療或預(yù)防家犬疼痛和炎癥病變和疾病的方法，其中所述抗炎的選擇性COX-2抑制劑包含下式化合物
其中R2為
，其中A為羥基、C1-C4烷氧基、氨基、羥基氨基、一C1-C2烷基氨基、二C1-C2烷基氨基；X和Y獨(dú)立為H或C1-C2烷基；n為1或2；R6為鹵素、C1-C3烷基、三氟甲基或硝基；R9為H；C1-C2烷基；苯基或苯基C1-C2烷基，其中苯基是可選被氟或氯單取代的；-C(＝O)-R，其中R為C1-C2烷基或苯基，且是可選被氟或氯單取代的；或-C(＝O)-O-R1，其中R1為C1-C2烷基；若X和Y是不同的，則包含該化合物的(-)(R)與(+)(S)對(duì)映體；及其所有藥學(xué)上可接受的鹽形式、前體藥物和代謝產(chǎn)物，它們?cè)谥委煂W(xué)上具有治療或預(yù)防疼痛和炎癥的活性。當(dāng)式(1)抑制劑以(-)(R)與(+)(S)對(duì)映體存在時(shí)，按照本發(fā)明，提供了單獨(dú)的(+)(S)對(duì)映體，或者當(dāng)兩種對(duì)映體一起存在時(shí)，提供了它們的外消旋混合物或非外消旋混合物。
相當(dāng)令人驚奇的是，以α-甲基乙酸官能度為特征的優(yōu)選的咔洛芬類化合物所具有的犬COX-2選擇性比任意含羧基經(jīng)典NSAID高出很多倍，也比本領(lǐng)域所接受的作為高COX-2選擇性化合物的某些含磺酰基與亞磺酰氨基NSAID高出很多倍。本發(fā)明的這方面內(nèi)容體現(xiàn)在治療或預(yù)防狗的炎癥病變和疾病的方法上，該方法包括對(duì)其給以抗炎治療上有效量的犬環(huán)加氧酶-2(COX-2)抑制劑，COX-2在所述狗中的體外IC50效價(jià)至少比犬環(huán)加氧酶-1(COX-1)在狗中的體外IC50效價(jià)高50倍；其中所述的抑制劑是選自一組抗炎化合物的一種，這組化合物的組成基本上是水楊酸衍生物；對(duì)氨基苯酚衍生物；吲哚和茚乙酸；雜芳基乙酸；芳基丙酸；鄰氨基苯甲酸；烯醇酸；和烷酮；特別是選自由羧基C1-C4烷基芳基和/或雜芳基抗炎劑組成的組。特別是所述的抑制劑選自由芳基丙酸類非甾體抗炎藥物組成的組。
優(yōu)選用在本發(fā)明方法和組合物中的咔洛芬和咔洛芬衍生物類可以按照有機(jī)化學(xué)的普通技術(shù)人員所熟知的合成方法進(jìn)行制備。例如，其中R6為鹵素、C1-C3烷基、三氟甲基或硝基；R9為H或甲基的式(1)化合物的制備方法可以是使一種苯肼與一種環(huán)己酮反應(yīng)，其中該苯肼的苯基部分具有所需的R6取代，肼的α-氮具有所需的R9取代，該環(huán)己酮具有所需的R2取代。然后使所得1，2，3，4-四氫咔唑進(jìn)行芳化反應(yīng)，生成所需的式(1)咔唑。進(jìn)行芳化反應(yīng)的條件可以是(1)使用一種芳化劑，例如對(duì)氯醌、鄰氯醌、2，3-二氯-5，6-二氰基苯醌(DDQ)、硫、鈀炭或氧化鉛；在(2)一種溶劑的存在下，例如二甲苯、苯、甲苯、喹啉、二甲基亞砜(DMSO)和二甲基甲酰胺(DMF)；(3)在室溫至反應(yīng)混合物回流溫度的溫度范圍內(nèi)，優(yōu)選為后者。
若A為羥基，則式(1)化合物是酸，及其與堿所形成的鹽可以轉(zhuǎn)化為式(1)的酰胺，其中A為氨基、羥基氨基、一C1-C2烷基氨基和二C1-C2烷基氨基；轉(zhuǎn)化方法是(1)通過(guò)用五氯化磷(PCl5)處理生成對(duì)應(yīng)的酰氯；隨后是(2)與適當(dāng)?shù)陌贩磻?yīng)劑反應(yīng)，生成所需的酰胺，反應(yīng)在當(dāng)量吡啶或三乙胺的存在下進(jìn)行，后者的堿是質(zhì)子傳遞步驟所需的，并因此除去所生成的H+Cl-。步驟(1)中生成的該酰氯可以與適當(dāng)?shù)耐榇挤磻?yīng)，生成式(1)的酯，其中A為C1-C4烷氧基。該反應(yīng)也需要在一種堿的存在下進(jìn)行，例如吡啶，后者能夠中和所生成的H+Cl-，使其不會(huì)干擾任何對(duì)酸敏感的烷醇反應(yīng)劑。
美國(guó)專利No.3896145詳細(xì)描述了上述用來(lái)制備優(yōu)選用在本發(fā)明方法和組合物的咔洛芬類化合物的合成方法，該專利全文在此引用。
若在R2取代基的定義中X和Y不同時(shí)，則存在手性(不對(duì)稱)碳原子。若存在兩種對(duì)映體的50∶50混合物時(shí)，則得到(R)與(S)對(duì)映體的外消旋混合物。按照本發(fā)明，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，優(yōu)選的式(1)咔洛芬類化合物的具有一個(gè)手性碳的(S)對(duì)映體具有意外的并足以令人驚奇的犬COX-2選擇性，這是一種獨(dú)特的生物活性，事實(shí)上是任何具有羧酸部分的經(jīng)典NSAID所不具有的，尤其是其S對(duì)映體所不具有的。因此，優(yōu)選的式(1)咔洛芬類化合物的具有一個(gè)手性碳的(S)對(duì)映體與事實(shí)上所有其他具有羧酸部分的NSAID相比，尤其是與其S對(duì)映體相比，對(duì)狗具有令人驚奇的低水平的不利胃腸反應(yīng)和其他反應(yīng)。因此也完全令人意外的是，由于它是一種高度選擇性的犬COX-2同功酶抑制劑，咔洛芬的S對(duì)映體與事實(shí)上所有其他以羧酸部分為特征的NSAID相比，對(duì)狗具有令人驚奇的高水平的抗炎、止痛和解熱活性。
本發(fā)明一種尤其優(yōu)選的實(shí)施方式是在本發(fā)明的方法和組合物中僅使用咔洛芬、即6-氯-α-甲基-9H-咔唑-2-乙酸的(S)對(duì)映體作為活性成分或治療劑。不過(guò)，其他實(shí)施方式也屬于這類優(yōu)選的本發(fā)明范圍內(nèi)。例如，可以使用(R)與(S)對(duì)映體的非外消旋混合物，如果那樣的話，(S)對(duì)映體的含量為至少85％，優(yōu)選地至少為90％，更優(yōu)選地至少為95％，最優(yōu)選地至少為99％。由于(R)與(S)對(duì)映體的分子量、密度等都是相同的，也就沒(méi)有必要陳述上文敘述的百分比基礎(chǔ)。換句話說(shuō)，它們可以是重量百分比、體積百分比、化學(xué)當(dāng)量百分比等等。包括上文所示量的(R)對(duì)映體的原因僅在于從實(shí)際意義上來(lái)說(shuō)，不需要從外消旋混合物中絕對(duì)除去每一痕量的(R)對(duì)映體。這樣做的原因還可能與有益的整體生物性質(zhì)有關(guān)，本領(lǐng)域人員還將可以理解的是，本文另有敘述的優(yōu)選的咔洛芬類化合物的劑量范圍是關(guān)于對(duì)映體的50∶50外消旋化合物來(lái)進(jìn)行描述的，其中涉及手性化合物。這樣做在很大程度上是為了方便。如果用作治療劑的活性成分包含不同于50∶50混合物的對(duì)映體混合物，或者如果治療劑基本上僅包含100％的(+)(S)或(-)(R)對(duì)映體，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員將能夠以非常直接的方式計(jì)算所需的實(shí)際劑量，只要將所述劑量乘以一個(gè)系數(shù)即可，該系數(shù)反映了對(duì)映體的用量與所述基于對(duì)映體的50∶50混合物的含量之間的比例關(guān)系。因此，如果對(duì)50∶50外消旋混合物來(lái)說(shuō)，所述劑量為4mg/kg/天，那么實(shí)際上為100％(+)(S)對(duì)映體的相應(yīng)劑量使用所述劑量的一半，即2mg/kg/天。
由于含有一種優(yōu)選的咔洛芬類化合物的本發(fā)明藥物組合物涉及使用含有50％(S)對(duì)映體的外消旋混合物，以及含有約99％或以下(S)對(duì)映體與不到50％(R)對(duì)映體的非外消旋混合物，因此必須將具有一個(gè)手性碳的式(1)咔洛芬類化合物的外消旋物拆分為旋光活性異構(gòu)體。利用本領(lǐng)域已知的過(guò)程和技術(shù)，這一點(diǎn)是易于完成的。例如，某些外消旋混合物能夠以低共熔混合物形式沉淀出來(lái)，然后可以進(jìn)行分離。不過(guò)，通常優(yōu)選的作法是利用化學(xué)過(guò)程進(jìn)行拆分，按照該過(guò)程，外消旋混合物與一種旋光活性拆分劑生成非對(duì)映體。例如，一種旋光活性的堿，如D-α-甲基芐胺，它能夠與羧基反應(yīng)。然后用選擇結(jié)晶法分離如此生成的非對(duì)映體，再轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的旋光異構(gòu)體。
本發(fā)明范圍內(nèi)包括了優(yōu)選用在本發(fā)明中的咔洛芬類化合物的所有抗炎治療活性和藥學(xué)上可接受的鹽形式、前體藥物和代謝產(chǎn)物。尤其包括它的酸加成鹽，其中對(duì)A的定義是除羥基以外的任意基團(tuán)，生成該鹽的方法是將式(1)化合物用藥學(xué)上可接受的有機(jī)與無(wú)機(jī)酸處理，例如氫鹵酸鹽，如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽；其他無(wú)機(jī)酸及其對(duì)應(yīng)的鹽，如硫酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽等；烷基與一芳基磺酸鹽，如乙磺酸鹽、甲苯磺酸鹽和苯磺酸鹽；和其他有機(jī)酸及其對(duì)應(yīng)的鹽，如乙酸鹽、酒石酸鹽、馬來(lái)酸鹽、琥珀酸鹽、檸檬酸鹽、苯甲酸鹽、水楊酸鹽、抗壞血酸鹽等。
如果優(yōu)選用在本發(fā)明中的咔洛芬類化合物中的A定義為羥基，那么它的鹽可以通過(guò)用藥學(xué)上可接受的堿處理來(lái)生成。這類堿的例子是堿金屬氫氧化物，包括氫氧化鉀、氫氧化鈉和氫氧化鋰；堿土金屬氫氧化物，如氫氧化鋇和氫氧化鈣；堿金屬醇鹽，例如乙醇鉀和丙醇鈉；和各種有機(jī)堿，如哌啶、二乙醇胺和N-甲基谷酰胺。還包括式(1)化合物的鋁鹽。
除了使用各種上述式(1)化合物的鹽形式以外，本發(fā)明范圍內(nèi)還包括使用上述化合物的所有止痛和抗炎治療活性和藥學(xué)上可接受的前體藥物和代謝產(chǎn)物作為活性成分。特別是包括這樣的衍生物其中R9定義為C1-C2烷基，尤其是甲基；苯基或苯基C1-C2烷基，尤其是芐基，其中的苯基是可選被氟或氯單取代的，尤其是4-氟-苯基；-C(＝O)-R，其中的R為C1-C2烷基或苯基，尤其是乙?；捅郊柞；?，其中的苯基是可選被氟或氯單取代的；或-C(＝O)-O-R1，其中的R1為C1-C2烷基，尤其是乙酰氧基。這些N-部分在式(1)化合物的代謝過(guò)程中是易于斷裂的，使這些特定的衍生物成為所需的前體藥物。
本發(fā)明在上文剛結(jié)束的段落中已經(jīng)具體描述了優(yōu)選的式(1)咔洛芬類化合物。不過(guò)，關(guān)于提供抗炎的選擇性COX-2抑制劑，本發(fā)明涉及更寬的范圍。已如所示，這種選擇性COX-2抑制劑包含這樣一些抑制劑，其中根據(jù)體內(nèi)和體外抑制水平，COX-2對(duì)COX-1的選擇比至少為3∶1，該抑制水平是在全血中、在產(chǎn)生≥80％COX-2抑制作用的劑量或劑量范圍內(nèi)測(cè)量得到的。按照下文進(jìn)一步描述的藥代動(dòng)力學(xué)(PK)數(shù)據(jù)，已經(jīng)證明，在狗對(duì)本發(fā)明抗炎的選擇性COX-2抑制劑的藥理或毒性反應(yīng)與所述抑制劑在例如所述狗的血液或血漿中的可用濃度之間存在相互關(guān)系。出于立即闡述本發(fā)明的目的，這里將狗的所述藥理反應(yīng)看作是由抑制COX-2同功酶所導(dǎo)致的抗炎反應(yīng)；將狗的所述毒性反應(yīng)看作是由抑制COX-1同功酶所導(dǎo)致的不良副作用，例如胃腸反應(yīng)。因此，抑制性藥物在所述狗全身循環(huán)中的濃度將與抑制性藥物在其作用部位的濃度有關(guān)。
眾所周知，最重要的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)是生物利用度，指的是所述藥物被吸收進(jìn)入全身循環(huán)的部分；分布體積，涉及體內(nèi)有效含有所述藥物的空間大小；和廓清率，涉及身體排除特定藥物的能力。按照本發(fā)明，COX-2對(duì)COX-1的選擇比必須至少為3∶1，這是在體外測(cè)量犬全血中每種所述同功酶的百分(％)抑制作用的基礎(chǔ)上測(cè)定的。進(jìn)行所述體外測(cè)量的程序可以簡(jiǎn)要地概括為首先將選擇性抑制劑供試化合物以預(yù)定總劑量水平對(duì)預(yù)選擇的狗給藥，例如2mg/lb。按照預(yù)定劑量制度進(jìn)行給藥，例如一日一次(s.i.d.)、一日兩次(b.i.d.)等，然后從每只試驗(yàn)動(dòng)物中收集全血樣本。分別用鈣離子載體刺激所述血液的凝血噁烷B2(COX-1活性)或用脂多糖(LPS)刺激所述血液的前列腺素E2(COX-2活性)，在此基礎(chǔ)上化驗(yàn)COX-1和COX-2的活性。下文在舉例說(shuō)明時(shí)，更為詳細(xì)地描述了這些程序。
COX-2的選擇性是用在本發(fā)明中的抗炎抑制劑的一個(gè)必要特征，并要求與COX-1活性的抑制作用相比，其比例至少為3∶1。對(duì)給定化合物來(lái)說(shuō)，簡(jiǎn)單地具有3∶1選擇比是不夠的，這是因?yàn)榻o定化合物在總劑量范圍內(nèi)的某點(diǎn)上可能具有所需的選擇比，但是仍然不能提供足夠全面的COX-2活性抑制作用。因此，另外需要本發(fā)明范圍內(nèi)的抗炎抑制劑必須提供≥80％COX-2活性抑制作用，優(yōu)選為≥90％COX-2活性抑制作用。在治療和預(yù)防疼痛和炎癥方面，這被視為足以提供令人滿意的藥理活性所需的最低抑制作用水平。
對(duì)給定化合物來(lái)說(shuō)，簡(jiǎn)單地在給定劑量下具有3∶1選擇比、在其他劑量下提供≥80％COX-2活性抑制作用、優(yōu)選為≥90％COX-2活性抑制作用，也是不夠的。但不是在給藥相同時(shí)間、在一定暴露水平(level ofexposure)下必須同時(shí)滿足兩種標(biāo)準(zhǔn)。因此，也需要在提供≥80％COX-2活性抑制作用的同一劑量濃度或劑量濃度范圍內(nèi)具有3∶1選擇比。
為了證明上述限制適用于潛在的選擇性COX-2抑制劑，考慮下面的例子。所述候選者按照上述程序進(jìn)行評(píng)價(jià)，即在全血樣本中測(cè)量對(duì)COX-1和COX-2的抑制作用，s.i.d.給藥的總劑量為2mg/lb，在給藥后2、4和12小時(shí)測(cè)量活性水平。將COX-1、COX-2和未處理樣本的數(shù)據(jù)點(diǎn)標(biāo)繪在％抑制作用對(duì)時(shí)間的圖中，發(fā)現(xiàn)COX-1曲線在2小時(shí)處的％抑制作用為10-15％，但在12小時(shí)則已迅速降低為沒(méi)有觀察到抑制作用。而另一方面，在相同的時(shí)間階段內(nèi)，COX-2曲線僅有微小降低，2小時(shí)的％抑制作用約為95％，12小時(shí)的％抑制作用約為90％。
因此，應(yīng)當(dāng)注意的是，在s.i.d.給藥為2mg/lb的劑量下，潛在的抑制劑具有令人滿意的(1)至少為3∶1的選擇比，和(2)≥80％COX-2抑制作用的限制，這是屬于本發(fā)明范圍內(nèi)的抗炎的選擇性COX-2抑制劑所需的條件。因?yàn)檫@兩張圖的數(shù)據(jù)都是在相同劑量(2mg/lb)和相同的12小時(shí)時(shí)間階段下進(jìn)行比較的，所以第三個(gè)限制條件也已是令人滿意的，也就是說(shuō)在相同劑量或劑量范圍下，前兩個(gè)限制條件是令人滿意的。
對(duì)所述候選化合物的大量不同劑量可以進(jìn)行類似測(cè)定，并對(duì)所得數(shù)據(jù)繪圖。不過(guò)，用以證明聯(lián)合結(jié)果的圖是COX-1和COX-2抑制作用對(duì)劑量或血漿濃度、而不是對(duì)時(shí)間所作的圖。代表COX-2數(shù)據(jù)的曲線最先出現(xiàn)，并迅速上升，起點(diǎn)為產(chǎn)生可鑒別的％抑制作用的最小劑量濃度，隨著劑量達(dá)到更高的濃度，抑制作用達(dá)到≥80％的水平，之后成為漸近的。代表COX-1數(shù)據(jù)的曲線后出現(xiàn)，上升得也沒(méi)有COX-2數(shù)據(jù)曲線那么迅速，且是在明顯更低的％抑制作用水平下成為漸近的。如果一條平行于y軸的直線在相同劑量濃度下與兩條曲線相交，所得到的數(shù)據(jù)點(diǎn)滿足3∶1的比例和≥80％抑制作用的限制，那么這樣的候選化合物就是屬于本發(fā)明范圍內(nèi)的化合物。
利用上文使用過(guò)的不同的、但在本質(zhì)上是相同的術(shù)語(yǔ)，可以看待或表述所包括的有關(guān)抗炎的選擇性COX-2抑制劑這方面內(nèi)容的本發(fā)明范圍。例如，本發(fā)明可以被認(rèn)為是確切地提供了一種方法，用于治療或預(yù)防需要接受該治療的家犬的疼痛和炎癥病變和疾病，該方法包括對(duì)所述動(dòng)物給以治療疼痛和炎癥所需有效量的抗炎的環(huán)加氧酶-2(COX-2)抑制劑，該抑制劑對(duì)所述動(dòng)物的體外IC50效價(jià)比對(duì)所述動(dòng)物的環(huán)加氧酶-1(COX-1)體外IC50效價(jià)至少高30倍，優(yōu)選地至少為高40倍，更優(yōu)選地至少為高50倍，還更優(yōu)選地至少為高60倍，進(jìn)而更優(yōu)選地至少為高80倍，最優(yōu)選地至少為高100倍；其中所述的抑制劑選自主要由下列抗炎化合物組成的組水楊酸衍生物；對(duì)氨基酚衍生物；吲哚和茚乙酸；雜芳基乙酸；芳基丙酸；鄰氨基苯甲酸；烯醇酸；和烷酮。
按照上述本發(fā)明方法，更確切地提供了上述治療或預(yù)防疼痛和炎癥病變和疾病的方法，其中所述的式(1)抑制化合物的環(huán)加氧酶-2(COX-2)體外IC50效價(jià)比所述環(huán)加氧酶-1(COX-1)體外IC50效價(jià)至少高100倍；其中X和Y之一為H，另一個(gè)為甲基；其中當(dāng)兩種所得對(duì)映體都存在時(shí)，(+)(S)對(duì)映體的含量至少為75％。特別是提供了上述方法，其中對(duì)式(I)、對(duì)R2來(lái)說(shuō)，n＝1，X和Y之一為H，另一個(gè)為甲基，A為羥基、C1-C2烷氧基或氨基；R6為鹵素、尤其是氯，或?yàn)槿谆?；R9為H、甲基、乙?；?、苯甲?；蚣籽趸驶?；其中當(dāng)兩種所得對(duì)映體都存在時(shí)，(+)(S)對(duì)映體的含量至少為85％，優(yōu)選地至少為90％，更優(yōu)選地至少為95％，最優(yōu)選地至少為99％。
還進(jìn)一步提供了上述方法，其中所述的抑制劑包含6-氯-α-甲基-9H-咔唑-2-乙酸；其中當(dāng)兩種所得對(duì)映體都存在時(shí)，(+)(S)對(duì)映體的含量至少為85％，優(yōu)選地至少為90％，更優(yōu)選地至少為95％，最優(yōu)選地至少為99％。特別是提供了上述方法，其中所述的抑制劑完全由6-氯-α-甲基-9H-咔唑-2-乙酸的(+)(S)對(duì)映體組成。
本發(fā)明也可以被描述為提供了一種方法，該方法選擇性地基本上僅抑制誘導(dǎo)環(huán)加氧酶-2(COX-2)，而基本上不抑制相應(yīng)的組成環(huán)加氧酶-1(COX-1)，由此治療或預(yù)防需要接受該治療的家犬的相關(guān)疼痛和炎癥病變和疾病，該方法包括對(duì)所述動(dòng)物給以治療疼痛和炎癥所需有效量的上式(1)抗炎化合物，其中R2、X、Y、n、A、R6和R9是如上定義的；包括(-)(R)和(+)(S)對(duì)映體；和上述化合物所有具有抗炎治療活性的和藥學(xué)上可接受的鹽形式、前體藥物和代謝產(chǎn)物。這里再次說(shuō)明，當(dāng)式(I)抑制劑以(-)(R)和(+)(S)對(duì)映體存在時(shí)，按照本發(fā)明，提供了單獨(dú)的(+)(S)對(duì)映體，或者當(dāng)兩種對(duì)映體都存在時(shí)，提供了它們的外消旋或非外消旋的混合物。
按照本質(zhì)上相似于上述說(shuō)明的其他方式，本發(fā)明可以進(jìn)一步被描述為包括上述選擇性地基本上僅抑制誘導(dǎo)環(huán)加氧酶-2(COX-2)的方法，其中所述的抑制劑包含6-氯-α-甲基-9H-咔唑-2-乙酸；其中當(dāng)兩種所得對(duì)映體都存在時(shí)，(+)(S)對(duì)映體的含量至少為85％，優(yōu)選地至少為90％，更優(yōu)選地至少為95％，最優(yōu)選地至少為99％。特別是提供了上述方法，其中所述的抑制劑完全由6-氯-α-甲基-9H-咔唑-2-乙酸的(+)(S)對(duì)映體組成。
當(dāng)使用式(I)化合物或其對(duì)映體或鹽作為本發(fā)明方法和組合物中的活性成分時(shí)，可以將它們結(jié)合在標(biāo)準(zhǔn)的藥物劑型中。例如，當(dāng)以全身或局部、口服或胃腸外方式給藥時(shí)，它們是有用的，并且為此與常用的藥物賦型劑、稀釋劑和助劑混合，例如有機(jī)和無(wú)機(jī)惰性載體物質(zhì)，如水、明膠、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、滑石、植物油、樹膠、聚亞烷基二醇等。這些藥物制劑可以以固體劑型加以利用，例如片劑、錠劑、栓劑、膠囊劑，尤其是與狗用可口食品結(jié)合或混合；或者它們可以以液體劑型給藥，例如溶液、懸浮液、標(biāo)準(zhǔn)和反乳劑、和酏劑。可以加入的藥物賦型劑和助劑包括防腐劑、抗氧化劑、抗微生物劑和其他穩(wěn)定劑；濕潤(rùn)劑、乳化劑和懸浮劑，和防結(jié)塊化合物；芳香和著色添加劑；用于提高壓縮性的組合物，或用來(lái)為活性成分產(chǎn)生延遲釋放、緩釋或控釋的組合物；改變藥物制劑滲透壓或起到緩沖劑作用的鹽。已被成功使用過(guò)的確切劑型包括用于靜脈內(nèi)注射的5％咔洛芬混合微膠粒溶液，3％可口糊劑，和25mg、75mg與100mg劑量的口服片劑。
在尤其是抑制劑包含6-氯-α-甲基-9H-咔唑-2-乙酸、且兩種所得對(duì)映體都存在的本發(fā)明方法和組合物中，使用非外消旋混合物是優(yōu)選的實(shí)施方式。確切地說(shuō)，在該優(yōu)選的非外消旋混合物中，具有至少為85％的(+)(S)對(duì)映體含量是可取的，優(yōu)選地至少為90％，更優(yōu)選地至少為95％，最優(yōu)選地至少為99％。于是在該非外消旋混合物中，(+)(S)對(duì)映體將是主要組分，不僅是因?yàn)樗鼘?duì)環(huán)加氧酶-2(COX-2)的抑制能力顯著強(qiáng)于(-)(R)對(duì)映體，而且因?yàn)榕c環(huán)加氧酶-1(COX-1)相比，它高度選擇性地抑制環(huán)加氧酶-2(COX-2)?？蛇x地包括相應(yīng)更少量的(-)(R)對(duì)映體，也就是分別小于15％、小于10％和小于5％，其中環(huán)加氧酶或其他酶抑制性質(zhì)的平衡被認(rèn)為是可取的。當(dāng)(-)(R)對(duì)映體的含量小于5％和小于1％時(shí)，包含它的原因通常反映了用于拆分對(duì)映體的方法的實(shí)用性。如果該方法消耗時(shí)間或需要原料，從實(shí)用觀點(diǎn)來(lái)說(shuō)，簡(jiǎn)單地允許該少部分的(-)(R)對(duì)映體存在到最后、即非外消旋混合物終產(chǎn)物中，通常是可取的。
本發(fā)明的式(1)抗炎抑制劑可以作為藥物組合物的適當(dāng)液體劑型，通過(guò)注射或輸液對(duì)受治療狗進(jìn)行全身給藥。狗身體中有大量部位和器官系統(tǒng)允許適當(dāng)配制的藥物組合物在一旦注射或輸液后，散布于受治療狗的整個(gè)身體和所有器官系統(tǒng)中。注射方法是將單劑量的藥物組合物、通常用注射器注入有關(guān)組織中。最常見類型的注射是肌內(nèi)、靜脈內(nèi)和皮下注射。相形之下，輸液是將藥物組合物逐漸地引入有關(guān)組織中。最常見類型的輸液是靜脈內(nèi)方式。其他類型的注射或輸液包括動(dòng)脈內(nèi)，真皮內(nèi)或經(jīng)真皮(包括皮下)或脊柱內(nèi)、尤其是鞘內(nèi)方式。在這些液體藥物組合物中，抗炎抑制劑可以作為溶質(zhì)包含在溶液中。這是這類組合物最常見和最優(yōu)選的類型，不過(guò)它需要鹽形式的抑制劑具有相當(dāng)好的水溶性。水(或鹽水)是目前最優(yōu)選適用于這類組合物的溶劑。有時(shí)可以利用過(guò)飽和溶液，但是它們存在穩(wěn)定性問(wèn)題，從每天使用的基礎(chǔ)上來(lái)看，是不實(shí)用的。
如果不可能得到具有必要程度水溶性形式的某種式(1)化合物，而這種情況有時(shí)是有可能發(fā)生的，那么就制備一種乳劑，這是在技術(shù)人員的技術(shù)范圍之內(nèi)的，該乳劑是作為不連續(xù)相或內(nèi)相的一種液體的小液滴遍及作為連續(xù)相或外相的第二種液體的分散系，第二種液體是不能與之混合的。利用藥學(xué)上可接受的乳化劑，保持兩種液體處于乳化狀態(tài)。于是，如果抗炎抑制劑是一種水不溶性的油，它也可以以乳劑的方式給藥，其中抗炎劑是該乳劑的不連續(xù)相。如果抑制劑是水不溶性的、但是能夠溶解在一種不能與水混合的溶劑中，也能夠使用乳劑。盡管最常見的是用抑制劑作為被稱為水包油型乳劑的不連續(xù)相或內(nèi)相，也可能將抑制劑用作反乳劑的不連續(xù)相或內(nèi)相，反乳劑通常被稱為油包水型乳劑。這里，抗炎抑制劑是可溶于水的，能夠以簡(jiǎn)單的水溶液給藥。不過(guò)，一旦注射或輸液到含水介質(zhì)、如血液中，反乳劑發(fā)生逆轉(zhuǎn)，提供了以下一個(gè)優(yōu)點(diǎn)，使抑制劑分散到該含水介質(zhì)中，且比使用水溶液所能得到的分散作用更為快速和有效。在反乳劑的制備中要用到本領(lǐng)域熟知的適當(dāng)?shù)乃帉W(xué)上可接受的乳化劑。如果抗炎抑制劑具有有限的水溶性，它的給藥方式也可以是以膠體或微顆粒形式懸浮在一種懸浮液中的固體，該懸浮液是用適當(dāng)?shù)乃帉W(xué)上可接受的懸浮劑制備的。含有抑制劑的懸浮固體也可以配制成延遲釋放、緩釋和/或控釋組合物。
盡管全身給藥最經(jīng)常是通過(guò)液體注射或輸液的方式進(jìn)行的，也有很多情況是以固體形式釋放抗炎抑制劑，并且是有利的、甚至是必要的。進(jìn)行固體的全身給藥的方式是滴注、吸入或吹入以適當(dāng)固體形式的含有抑制劑的藥物組合物。將固體植入組合物安裝到適當(dāng)?shù)纳眢w組織或體腔中，可以是抑制劑的滴注法所必需的。植入物可以包含由生物相容的和生物腐蝕的材料制成的基質(zhì)，并使固體抑制劑顆粒分散其中，或者還可能使液體抑制劑的液滴或孤立單元陷入其中?？扇〉氖窃摶|(zhì)將被破碎，并完全被身體吸收。優(yōu)選地還對(duì)基質(zhì)的組成進(jìn)行選擇，使其提供抑制劑長(zhǎng)時(shí)間的控釋、緩釋和/或延遲釋放，甚至長(zhǎng)達(dá)幾個(gè)月。
本文所述的大量劑型可以進(jìn)行配制，以提供活性成分從所述劑型中的控釋、緩釋和/或延遲釋放。在提供了抗炎的選擇性COX-2抑制活性成分的延遲釋放、緩釋和/或控釋的本發(fā)明尤其優(yōu)選的藥物組合物中，包括了所有這樣的口服給藥劑型，它們對(duì)COX-2同功酶活性產(chǎn)生≥80％的抑制作用，并使所述抑制劑至少為10μg/ml的血漿濃度保持至少4小時(shí)；優(yōu)選地至少為8小時(shí)；更優(yōu)選地至少為12小時(shí)；還更優(yōu)選地至少為16小時(shí)；進(jìn)而更優(yōu)選地至少為20小時(shí)；最優(yōu)選地至少為約24小時(shí)。優(yōu)選地，所包括的上述劑型對(duì)COX-2同功酶活性產(chǎn)生≥80％的抑制作用，并使所述抑制劑至少為15μg/ml的血漿濃度保持至少4小時(shí)，優(yōu)選地至少為8小時(shí)，更優(yōu)選地至少為12小時(shí)，還更優(yōu)選地至少為20小時(shí)，最優(yōu)選地至少為約24小時(shí)。更優(yōu)選地，所包括的上述劑型對(duì)COX-2同功酶活性產(chǎn)生≥90％的抑制作用，并使所述抑制劑至少為20μg/ml的血漿濃度保持至少4小時(shí)，優(yōu)選地至少為8小時(shí)，更優(yōu)選地至少為12小時(shí)，還更優(yōu)選地至少為20小時(shí)，最優(yōu)選地至少為約24小時(shí)。
因此按照本發(fā)明，有用的咔洛芬控釋劑型在一次口服2mg/lb劑量后，保持咔洛芬血漿水平在一天的多數(shù)時(shí)間內(nèi)大于2μg/ml。按照本發(fā)明，優(yōu)選的咔洛芬口服控釋劑型保持血漿咔洛芬濃度大于10μg/ml的時(shí)間長(zhǎng)于保持可比較的血漿水平的咔洛芬立即釋放劑型，其中所述的立即釋放劑型和控釋劑型的給藥劑量是相等的，例如2、1.8、1.6或1.4mg/lb。例如，本發(fā)明優(yōu)選的2mg/lb口服控釋劑型保持血漿咔洛芬濃度大于10μg/ml的時(shí)間長(zhǎng)于10.5小時(shí)。
含有1.8、1.6和1.4mg/lb劑量的立即釋放咔洛芬劑型保持血漿咔洛芬濃度大于10μg/ml的時(shí)間分別為9.5小時(shí)、8.5小時(shí)和7.5小時(shí)。優(yōu)選的1.8mg/lb口服控釋咔洛芬劑型保持血漿咔洛芬濃度大于10μg/ml的時(shí)間長(zhǎng)于9.5小時(shí)。同樣，1.6mg/lb和1.4mg/lb劑量的持續(xù)時(shí)間閾值分別為8.5小時(shí)和7.5小時(shí)。利用假定的線性藥代動(dòng)力學(xué)，類似地可以計(jì)算劑量高于2mg/lb或低于1.4mg/lb的優(yōu)選口服控釋咔洛芬的性能特性。更優(yōu)選的口服控釋咔洛芬劑型保持血漿咔洛芬濃度大于10μg/ml的時(shí)間階段長(zhǎng)于或等于立即釋放咔洛芬劑型以任意更高劑量給藥后所觀察到的結(jié)果。因此，這些控釋劑型在犬血中保持至少80％COX-2抑制作用的時(shí)間階段長(zhǎng)于由更高劑量的立即釋放劑型所獲得的結(jié)果。
最優(yōu)選的口服控釋咔洛芬劑型能夠保持血漿咔洛芬水平高于大約10μg/ml的時(shí)間階段長(zhǎng)于或等于立即釋放的2mg/lb咔洛芬劑型所觀察到的時(shí)間(10.5小時(shí))，其中所述的口服控釋咔洛芬劑型是以低于2mg/lb的劑量給藥的。為了進(jìn)行比較，將2mg/lb口服立即釋放劑型的表現(xiàn)作為基本標(biāo)準(zhǔn)，這是因?yàn)榘凑毡疚乃龅谋景l(fā)明，2mg/lb/天是目前被推薦的和被接受的有效口服劑量。
術(shù)語(yǔ)“植入物”一直表示含有抗炎抑制劑的固體藥物組合物，術(shù)語(yǔ)“藥庫(kù)”通常指含有抗炎抑制劑的液體藥物組合物，它沉積在任意適當(dāng)?shù)纳眢w組織或體腔中，形成貯水器或水池，后者緩慢移行至周圍組織和器官，最終成為全身分布。不過(guò)，本領(lǐng)域?qū)@些區(qū)別不總是很嚴(yán)格的，所以，令人矚目的是在本發(fā)明范圍內(nèi)包括了液體植入物和固體藥庫(kù)，和各自的甚至是混合的固體和液體形式。栓劑可以被認(rèn)為是植入物的一種類型，因?yàn)樗鼈兯幕|(zhì)在室溫下為固體，但在體溫下熔化，緩慢釋放充滿其中的活性成分進(jìn)入身體的周圍組織，其中活性成分被吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)，實(shí)現(xiàn)全身給藥。
通過(guò)粉末的吸入法或吹入法，也可以實(shí)現(xiàn)全身給藥，粉末即含有抑制劑的顆粒組合物。例如，利用常規(guī)的煙霧化顆粒制劑用裝置，以粉末形式的抑制劑可以被吸入肺中。作為顆粒制劑的抑制劑也可以通過(guò)吹入法給藥，也就是說(shuō)，通過(guò)簡(jiǎn)單的撒布或利用常規(guī)的煙霧化顆粒制劑用裝置，吹入或分散到適當(dāng)?shù)纳眢w組織或體腔中。按照充分理解的原理和已知材料，也可以將這些顆粒制劑配制成提供抗炎抑制劑的延遲釋放、緩釋和/或控釋。
可以以液體或固體形式利用本發(fā)明抑制劑的其他全身給藥方式包括經(jīng)真皮、鼻內(nèi)和眼用途徑。特別是按照熟知的藥物釋放技術(shù)制備的經(jīng)真皮藥貼是可以制備的，并貼于受治療狗的皮膚上，其后基于所配制的溶解度性質(zhì)，活性成分移行穿過(guò)狗皮膚的表皮并進(jìn)入真皮層，在那里被溶解為狗大循環(huán)的一部分，最終提供歷經(jīng)所需延長(zhǎng)時(shí)間階段的活性成分的全身分布。還包括植入物，放置于受治療狗皮膚的表皮層下方，即皮膚的表皮和真皮之間。這樣一種植入物將按照該釋放技術(shù)的熟知原理和常用材料進(jìn)行配制，并且可以以這樣一種方式制備，以提供活性成分的控釋、緩釋和/或延遲釋放，進(jìn)入狗的全身循環(huán)。該表皮下(皮下)植入物提供了與經(jīng)真皮藥貼相同的安裝設(shè)施和釋放效率，但是不會(huì)受到因?yàn)楸┞对诠菲つw頂層上而降解、損害或意外除去的限制。
也可以設(shè)計(jì)適用于對(duì)狗口服給藥的特殊類型的藥物組合物。適用于經(jīng)口給藥的藥物組合物可以是固體或液體，即用嘴攝食或通過(guò)嘴給藥。優(yōu)選的用于全身給藥的經(jīng)口劑型為固體，例如可口的口用組合物，如速溶可口的薄餅、片劑、膠囊劑、caplet、錠劑、糖錠等等；和液體，例如溶液、懸浮液、乳劑、酏劑、酊劑等等?？梢允褂眠m用于對(duì)狗口服給藥的特殊類型的藥物組合物，包括但不限于釋放到受治療狗舌頭背面的口服糊劑、通過(guò)加入到狗食中釋放的顆粒形式、活性成分隨著可口的咀嚼被消耗的可咀嚼形式、或者這樣一種可咀嚼形式，在受治療狗的咀嚼過(guò)程中，可以通過(guò)自不被消耗的咀嚼物中過(guò)濾出活性成分來(lái)進(jìn)行釋放。正如本領(lǐng)域中已知的那樣，該可口組合物的配制考慮到了犬在對(duì)劑型的咀嚼程度上將產(chǎn)生的行為和所得的給藥水平。
至于本文所述的其他給藥途徑和相應(yīng)劑型，打算用來(lái)口服給藥的劑型也進(jìn)行適當(dāng)配制，以提供活性成分的控釋、緩釋和/或延遲釋放。一般來(lái)說(shuō)，這些劑型包括延遲釋放的口服片、膠囊和多顆粒，以及腸衣片和膠囊，腸衣劑型防止活性成分在狗胃中的釋放和吸收，并促進(jìn)在胃遠(yuǎn)側(cè)的腸釋放，即在狗的腸中。其他典型的口服劑型包括緩釋口服片、膠囊和多顆粒，它們以控釋方式提供活性成分歷經(jīng)較長(zhǎng)時(shí)間階段的全身釋放，例如24小時(shí)。如果活性成分的快速釋放是所需的或可取的，那么可以將控釋口服劑型制備成速溶片的形式，其中也優(yōu)選包括活性成分的高度可溶的鹽形式。
在很大程度上出于方便的考慮，本文對(duì)包括在本發(fā)明范圍內(nèi)的劑型的說(shuō)明將這些劑型分為用于口服和全身給藥的，還分成固體和液體形式。不過(guò)，這些區(qū)別是相當(dāng)隨意的，無(wú)論如何不應(yīng)被認(rèn)為是對(duì)關(guān)于給藥途徑和劑型的本發(fā)明范圍的限制。例如，本文的說(shuō)明已經(jīng)很明顯的是，某些給藥途徑盡管在表面上是口服，也可以具有全身作用或結(jié)果。本文在液體和固體劑型之間的劃分界線在實(shí)際應(yīng)用中也可以是模糊的。例如，適用于本發(fā)明的口服劑型包括包封溶液，這是一種固體與液體的混合制劑。微乳劑也在本發(fā)明范圍內(nèi)，它也可以是以固體與液體的混合劑型為特征。
抗炎抑制劑可以局部給藥到受治療狗的炎癥部位。局部對(duì)全身給藥需要更具體對(duì)更一般的使含有抗炎抑制劑的藥物組合物釋放到患有疼痛和炎癥的狗的方式。不過(guò)，藥庫(kù)和植入物以及延遲釋放、緩釋和/或控釋制劑的使用會(huì)使這些區(qū)別變得模糊。因此，上述含有抗炎抑制劑的液體和固體藥物組合物大部分也能用于局部給藥，但是重點(diǎn)在于為所述組合物選取組分，該組合物將促進(jìn)抑制劑吸收進(jìn)入位于給藥部位的局部組織，但是也將防止抑制劑浸潤(rùn)和移行進(jìn)入更外側(cè)和更遠(yuǎn)側(cè)的組織而導(dǎo)致全身轉(zhuǎn)運(yùn)。
局部給藥集中在適當(dāng)?shù)慕M織和體腔中，抗炎抑制劑可以注射、輸液、植入、沉積、插入、滴注或吹入其中。其給藥方式可以包括但不限于動(dòng)脈內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、軟骨內(nèi)、肋內(nèi)、囊內(nèi)、真皮內(nèi)或經(jīng)真皮、束內(nèi)、韌帶內(nèi)、髓內(nèi)、肌內(nèi)、鼻內(nèi)、神經(jīng)內(nèi)、眼內(nèi)-即眼部給藥-、骨內(nèi)、骨盆內(nèi)、心包內(nèi)、脊柱內(nèi)、胸骨內(nèi)、滑膜腔內(nèi)、跗骨內(nèi)、鞘內(nèi)或靜脈內(nèi)。
含有抑制劑的液體形式的藥物組合物所提供的優(yōu)點(diǎn)在于允許液體注射進(jìn)入或非常接近于炎癥部位。這種情況特別涉及發(fā)炎的關(guān)節(jié)和變性的關(guān)節(jié)疾病。通過(guò)將抑制劑直接注射到關(guān)節(jié)內(nèi)，有可能使抑制劑在較短時(shí)間內(nèi)達(dá)到較高濃度，不僅在本質(zhì)上提高了抑制劑與炎癥部位的接近程度，從而提高了抑制劑的治療活性，而且與此同時(shí)，減少了事與愿違的副反應(yīng)的發(fā)生，否則這些副反應(yīng)是有可能發(fā)生的。結(jié)果是抑制劑的局部濃度較高，而相應(yīng)地全身轉(zhuǎn)運(yùn)濃度較低。
也可以將含有抑制劑的藥物組合物制成注射劑，其中的藥物組合物是延遲釋放、控釋或緩釋形式。這些被確認(rèn)的組合物的制劑可以是固體、半固體、凝膠或其他液體/固體組合，其中可腐蝕基質(zhì)或一系列包衣用來(lái)提供抑制劑以預(yù)定速率的連續(xù)釋放，如果需要的話，釋放速率也可是可變的。術(shù)語(yǔ)“延長(zhǎng)釋放”和“長(zhǎng)效”以及其他用來(lái)描述這些制劑。所有這些使用了不同可生物腐蝕聚合物-例如各種纖維素聚合物-與天然材料-例如玉米淀粉和硬脂酸鎂-的組合，以得到包含在基質(zhì)內(nèi)的抑制劑的緩慢和/或均勻分散。如果是適當(dāng)?shù)囊后w或可懸浮形式，可以將這些藥物組合物注射到部位中，或者如果在性質(zhì)上更接近于固體，可以通過(guò)其他方式釋放之。
將用于治療疼痛和炎癥的治療有效量的式(I)抑制劑化合物給受治療的狗給藥，給藥量以每天每公斤狗體重毫克計(jì)算“毫克/公斤/天”。本文所用術(shù)語(yǔ)“每天”不應(yīng)當(dāng)理解為必須是對(duì)受治療的狗來(lái)說(shuō)任何特定劑型都以一天為基礎(chǔ)給藥。該術(shù)語(yǔ)“每天”只是表示為方便的但又是任意的最小時(shí)間段，以用作衡量所給藥抗炎抑制劑劑量的總量單位的部分單位。該劑量，即，用于治療疼痛和炎癥的該抑制劑的治療有效量范圍通常是大約0.01毫克/公斤/天-大約20.0毫克/公斤/天，優(yōu)選是大約0.1毫克/公斤/天-大約12.0毫克/公斤/天，更優(yōu)選是大約0.5毫克/公斤/天-大約8.0毫克/公斤/天。例如，一只50lb.的狗重23公斤(1公斤＝2.2lb.)，因此，最好是每天用大約10毫克-大約180毫克的治療劑進(jìn)行治療。其部分用量不是很大，而且其單劑量可以合適分成與可方便獲得的單位劑量相當(dāng)?shù)臄?shù)量。如果劑型是注射液，則可以更準(zhǔn)確地獲得優(yōu)選劑量。另一方面，如果劑型是口服片劑，則必須制備成較為接近的優(yōu)選劑量。因此，可以通過(guò)將一個(gè)25毫克的片劑分成兩半而獲得大致一個(gè)10毫克的單劑量，而且可以通過(guò)將一個(gè)100毫克和一個(gè)75毫克或者三個(gè)25毫克的片劑一起使用獲得一個(gè)180毫克的單劑量，因?yàn)檫@些是用于口服片劑的典型單位劑量。正如本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所公知的，如果最常用的劑型是口服片劑，而且大量的狗均以每天量為基礎(chǔ)進(jìn)行治療，則可以通過(guò)使用一種含有全部可獲得單劑量片劑，如，25毫克、75毫克和100毫克片劑的調(diào)配器可方便使用。實(shí)際上，通過(guò)這種方式利用所說(shuō)片劑和/或其半片的組合可以獲得任何接近的優(yōu)選單劑量。
對(duì)于熟練技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，如獸醫(yī)，不僅必須確定優(yōu)選的給藥途徑和相應(yīng)劑型與劑量，而且該技術(shù)人員還必須確定給藥方案，即，給藥次數(shù)。一般來(lái)說(shuō)最常見的是在一天一次(s.i.d)和一天兩次(b.i.d)之間選擇，并且前者會(huì)提供更為快速和強(qiáng)烈的治療，而后者會(huì)提供不太強(qiáng)烈但更為持續(xù)的治療。盡管如此，這種一般的方案沒(méi)有考慮進(jìn)去一些重要的可變因素，如特異性的疼痛或相關(guān)炎癥、所用特定治療劑及其藥代動(dòng)力學(xué)、以及所治療的特定患者(狗)。對(duì)于準(zhǔn)許的市場(chǎng)上銷售的產(chǎn)品，上述的很多信息已經(jīng)由為通過(guò)批準(zhǔn)而進(jìn)行的臨床研究結(jié)果所提供。在其他情況下，這種信息可以根據(jù)當(dāng)時(shí)的說(shuō)明書中的教導(dǎo)和指示參考技術(shù)人員的知識(shí)和技術(shù)而直接獲得。也可以將獲得結(jié)果與以相同檢測(cè)方法對(duì)市場(chǎng)批準(zhǔn)產(chǎn)品的進(jìn)行相應(yīng)評(píng)價(jià)所獲得數(shù)據(jù)相互聯(lián)系起來(lái)。
上述列舉的劑量范圍(這些劑量范圍在本文的其他地方也有引用)是用于具有手性碳原子的式(I)化合物的外消旋混合物，或用于沒(méi)有手性碳原子的式(I)單一化合物。正如本領(lǐng)域普通技術(shù)人員，即，執(zhí)行獸醫(yī)或在動(dòng)物健康方面具有高級(jí)水平和經(jīng)驗(yàn)的人所能理解的，除了涉及到式(I)化合物的外消旋混合物之外，該抗炎治療有效量將會(huì)發(fā)生變化，例如，如果混合物的85％是(S)-對(duì)映異構(gòu)體，這通常會(huì)趨向于減少所需劑量。這種考慮是基于一種假設(shè)的相同趨向，以及(S)-對(duì)映異構(gòu)體比(R)-對(duì)映異構(gòu)體更為有效的事實(shí)。盡管如此，對(duì)于兩種對(duì)映異構(gòu)體活性之間的差異程度在確定合適劑量時(shí)還必須考慮到其他方面的差異，特別是兩種對(duì)映異構(gòu)體藥代動(dòng)力學(xué)之間的差異。例如，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在(+)(S)和(-)(R)對(duì)映異構(gòu)體之間其清除率有很大區(qū)別。這又會(huì)對(duì)所用活性化合物的量產(chǎn)生一種可計(jì)算的影響。通常，是由技術(shù)人員根據(jù)不同具體情況而作出決定，但是這種決定是在本領(lǐng)域普通技術(shù)的范圍之內(nèi)，從而形成一種方法，借此可以獲得為支持計(jì)算所必須的數(shù)據(jù)。
典型的劑型和用量包括(1)以4.0毫克/公斤體重/天的劑量的靜脈內(nèi)給藥咔咯芬，注射到頭右側(cè)靜脈內(nèi)；(2)以4.0毫克/公斤體重/天的劑量給藥，舌下口服咔咯芬口服糊劑，進(jìn)食前1小時(shí)給藥；和(3)以4.0毫克/公斤體重/天的劑量，給被治療的狗舌下口服咔咯芬25毫克、75毫克和100毫克的片劑，進(jìn)食前1小時(shí)給藥。
本發(fā)明的活性成分還可以與其他的治療活性成分結(jié)合使用，這對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見的，而且通常根據(jù)本發(fā)明治療劑給藥環(huán)境來(lái)確定。例如，如果一個(gè)關(guān)節(jié)同時(shí)感染有多種微生物，如，細(xì)菌、真菌、原蟲、病毒等，并出現(xiàn)嚴(yán)重的炎癥，理想的是將本發(fā)明的活性成分與一種或多種抗菌素、抗真菌劑、殺原蟲劑、抗病毒劑和類似治療劑結(jié)合使用。本發(fā)明的活性成分不僅要與上述類型的其他NSAIDs結(jié)合使用，而且還要與炎癥其他因素的抑制劑結(jié)合使用，以便獲得多重抗炎抑制活性。其他類型的這種抑制劑及其例子包括，例如，H1-受體拮抗劑；激肽-B1-和B2-受體拮抗劑；前列腺素抑制劑如PGD-，PGF-PGl2-，和PGE受體拮抗劑；血栓烷A2(TXA2-)抑制劑；5-和12-脂肪氧合酶抑制劑；白三烯LTC4-，LTD4/LTE4-，和LTB4-抑制劑；PAF-受體拮抗劑；帶有各種親水基團(tuán)的金硫基團(tuán)形式的金；免疫抑制劑，例如，環(huán)孢菌素，硫唑嘌呤，和甲氨喋呤；抗炎糖皮質(zhì)激素；青氨酶；羥氯喹；抗痛風(fēng)藥如秋水仙堿，黃嘌呤氧化酶抑制劑如別嘌呤醇，和利尿酸劑如羧苯磺胺，苯磺唑酮，和苯溴香豆酮。
因?yàn)檠装Y最主要發(fā)生于老齡狗當(dāng)中，所以對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)可以預(yù)料到本發(fā)明的抗炎劑也可以與能夠治療老齡狗當(dāng)中大量出現(xiàn)的疾病、綜合征和癥狀的治療劑聯(lián)合給藥。這些治療劑以及用它們治療的疾病包括，例如，認(rèn)識(shí)治療劑以拮抗記憶喪失或障礙。另一大類的這種治療劑包括抗高血壓藥和其它心血管藥物，這些藥物可以緩解高血壓、心肌缺血，包括心絞痛、充血性心力衰竭和心肌梗死例如利尿劑、血管擴(kuò)張劑如肼苯噠嗪、β-腎上腺素受體拮抗劑如心得安、血管緊張素-II轉(zhuǎn)化酶抑制劑(ACE-抑制劑)如用于治療老齡狗左房室瓣不全的依那普利、以及依那普利單獨(dú)使用和與中樞肽鏈內(nèi)切酶抑制劑聯(lián)合使用、血管緊張素-II受體抑制劑如羅撒坦(losartan)、腎素抑制劑、鈣通道阻滯劑如心痛定，交感神經(jīng)阻滯劑如甲基多巴、α2-腎上腺素能興奮劑如可樂(lè)寧、α-腎上腺素受體拮抗劑如哌唑嗪、和HMG-CoA-還原酶抑制劑(抗高膽固醇血證藥物)如洛伐他汀。
還有其它類型的這種治療劑包括抗腫瘤藥，尤其是抗有絲分裂藥包括長(zhǎng)春花堿如長(zhǎng)春堿和長(zhǎng)春新堿，用于治療各種腫瘤；用于治療腎功能衰竭的治療劑；用于治療狗體重過(guò)于肥胖的減肥藥；用于治療通常寄生在狗中的內(nèi)和外寄生蟲的抗寄生蟲藥；和用于治療各種狗搔癢證的抗搔癢證藥物。
其它可以與本發(fā)明抗炎劑結(jié)合使用的藥物包括生長(zhǎng)激素催分泌素；強(qiáng)力止痛藥；局部和全身麻醉藥；和H2-受體拮抗劑以及其它胃保護(hù)劑。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)承認(rèn)上述治療劑的某些組合可以經(jīng)常被用來(lái)治療狗的各種急性疾病，例如，與退行性關(guān)節(jié)疾病同時(shí)發(fā)生的細(xì)菌感染。盡管如此，如果技術(shù)人員在治療狗的慢性疾病時(shí)沒(méi)有更好的方案，也可以采取同樣的治療方法。
根據(jù)用于治療這種目的的方案，可以將本發(fā)明的抗炎劑與用于治療慢性疾病如骨關(guān)節(jié)炎的常規(guī)其它用藥結(jié)合使用。還應(yīng)當(dāng)認(rèn)識(shí)到聯(lián)合給藥可以設(shè)計(jì)出幾種不同的劑型，并且屬于本發(fā)明的范圍之內(nèi)。例如，本發(fā)明的抗炎劑可以與一種或幾種其它治療劑簡(jiǎn)單地形成所需的復(fù)合，制成方便的劑型，如含有該復(fù)合全部藥物的口服片劑。技術(shù)人員在制劑過(guò)程中可以通過(guò)制備具有不同釋放時(shí)間的所說(shuō)藥物的控釋劑型對(duì)各種藥物的不同半衰期進(jìn)行調(diào)劑，從而獲得相對(duì)統(tǒng)一的給藥劑量。也可以根據(jù)制劑領(lǐng)域的公知原則制備用作單位劑型的醫(yī)療飼料，其中將復(fù)合用藥物簡(jiǎn)單地與飼料組合物一起混合。本發(fā)明也可以通過(guò)同時(shí)給藥所需復(fù)合給藥的幾種藥物而達(dá)到復(fù)合藥物的聯(lián)合給藥。這種聯(lián)合給藥甚至可以通過(guò)不同的劑型和不同的給藥途徑來(lái)實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明也可以根據(jù)各種不同但是常規(guī)和連續(xù)的給藥方案來(lái)實(shí)現(xiàn)這種組合，從而保持被治療狗的藥物血漿濃度達(dá)到理想水平，即使這樣，構(gòu)成該藥物組合的各個(gè)單獨(dú)藥物可以不必同時(shí)給狗給藥。所有這些聯(lián)合給藥均屬于本領(lǐng)域設(shè)計(jì)和給藥技術(shù)的范圍之內(nèi)。
本發(fā)明的方法和組合物可用于治療或預(yù)防狗的疼痛和/或炎癥。疼痛是對(duì)不適、痛苦或悲痛的或多或少的局部敏感性，它源于局部神經(jīng)末梢的刺激，它的發(fā)生或被認(rèn)為是與炎癥無(wú)關(guān)。例如，慢性疼痛或因手術(shù)引起和/或相關(guān)的疼痛，例如，手術(shù)局部周圍和手術(shù)后疼痛，開始時(shí)與炎癥沒(méi)有聯(lián)系。鴉片類止痛劑能夠有效地治療手術(shù)后疼痛，但對(duì)炎癥沒(méi)有影響。盡管如此，非類固醇性抗炎藥在治療某些手術(shù)后疼痛方面優(yōu)于這些鴉片類止痛劑，并且它們對(duì)緩解因炎癥引起的疼痛受體對(duì)正常無(wú)痛機(jī)械或化學(xué)刺激的敏感性特別有效。盡管非類固醇類抗炎藥能夠抑制前列腺素的生物合成和釋放(前列腺素是炎癥介導(dǎo)因素)，但是有數(shù)據(jù)表明非類固醇類抗炎藥可以通過(guò)抑制前列腺素合成之外的其它機(jī)制產(chǎn)生止痛效果。
因此，本發(fā)明被描述為適用于治療和預(yù)防疼痛和炎癥，因?yàn)槎咴诮M織損傷和疾病過(guò)程中以及在COX-2介導(dǎo)的病態(tài)中最常見的是同時(shí)出現(xiàn)。盡管如此，關(guān)于本發(fā)明在應(yīng)用于治療和預(yù)防疼痛和炎癥時(shí)并非有意將二者必須牽強(qiáng)地聯(lián)系在一起；而且，在本發(fā)明說(shuō)明書當(dāng)中疼痛和炎癥二者被認(rèn)為是本發(fā)明方法、組合物和其它方面的對(duì)象，可以是單獨(dú)和分開的，也可以是組合在一起。
炎癥過(guò)程本身有許多促發(fā)因素，包括，感染因素、局部缺血、抗原-抗體反應(yīng)和熱或其它物理?yè)p傷。對(duì)這些因素的每一種作出的反應(yīng)具有不同的特征，但是它們都具有一個(gè)很強(qiáng)的共性。臨床癥狀包括紅斑、腫脹、觸痛和疼痛?？梢詫⑵浞譃槿齻€(gè)不同的期，但是每一期的產(chǎn)生機(jī)制各不相同。第一期，即短暫急性期，包括局部血管擴(kuò)張和毛細(xì)血管通透性增加；第二期，即延遲期，亞急性期，包括白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)；第三期，即慢性增殖期，包括組織變性和纖維化。非類固醇類抗炎藥作為一類抗炎治療劑，似乎通過(guò)抑制酶的產(chǎn)生和前列腺素的釋放這一炎癥和發(fā)熱病理機(jī)制而發(fā)揮作用。但是，非類固醇類抗炎藥并不抑制二十烷類物質(zhì)如白細(xì)胞三烯的形成，而它們可以引起炎癥，該抗炎藥也不影響許多其它炎癥介導(dǎo)因素的形成。
根據(jù)本發(fā)明已經(jīng)發(fā)現(xiàn)式(I)的咔咯芬類化合物，特別是咔咯芬本身，尤其是咔咯芬的(S)-對(duì)映體，是帶有羧酸基團(tuán)的非類固醇類抗炎藥當(dāng)中唯獨(dú)對(duì)COX-2同工酶具有驚人的意想不到的高度選擇性。雖然這種特定同工酶是炎癥的一種重要介導(dǎo)因子，但是還有其它許多重要的炎癥介導(dǎo)因子與非類固醇類抗炎藥沒(méi)有相互作用，或者說(shuō)與非類固醇類抗炎藥的作用之間的關(guān)系尚不清楚。這些因子包括各種白細(xì)胞；細(xì)胞粘合分子；可溶性因子包括C5a，PAF和白細(xì)胞三烯B4；細(xì)胞素如IL-1和TNF；生長(zhǎng)因子如GM-CSF和TGF-β1；組胺，緩激肽和5-HT。盡管本申請(qǐng)中將式(I)的化合物表示為COX-2的特定抑制因子，但是本申請(qǐng)并非表示將其限定為式(I)化合物所能表現(xiàn)的其抗炎活性的特定作用機(jī)理。
的確，前文曾經(jīng)指出咔咯芬及式(I)其它化合物的抗炎作用機(jī)理尚不清楚，而且以前也有過(guò)說(shuō)明其實(shí)際作用機(jī)理可能涉及到中性白細(xì)胞，也稱作多形核白細(xì)胞。PAF刺激這些細(xì)胞聚集，釋放白細(xì)胞三烯和溶酶體酶，并產(chǎn)生過(guò)氧化物，所有這些都促使炎癥的發(fā)生。
已經(jīng)從整體上對(duì)咔咯芬和式(I)化合物在非類固醇類抗炎藥中的獨(dú)特性進(jìn)行了說(shuō)明。盡管式(I)化合物很清楚屬于非類固醇類抗炎藥，但是不容易將其分入任何已知的非類固醇類抗炎藥的化學(xué)分類水楊酸......................................阿司匹林對(duì)氨基酚..................................撲熱息痛吲哚/indene乙酸............吲哚美辛，蘇靈大，乙哚乙酸(etodolac)乙酸雜芳酯..............甲苯酰吡酸，雙氯高滅酸，酮咯酸氨丁三醇芳基丙酸..................布洛芬，奈普生，氟聯(lián)苯丙酸林氨苯甲酸..............甲滅酸，甲氯滅酸烯醇酸............氧噻嗪類(oxicams)，例如，吡氧噻嗪，痛能喜康(tenoxicam)吡唑烷二酮類.............................保泰松烷基酮類(Alkanone)....................奈丁美酮咔咯芬及式(I)化合物盡管是丙酸，也不屬于芳基丙酸的小類，因?yàn)檫强┓业倪沁蚧鶊F(tuán)是雜芳基，而不是芳基。咔咯芬也不屬于乙酸雜芳酯小類，因?yàn)檫强┓沂潜幔皇且宜?。在不破壞分類基礎(chǔ)的情況下則不能將咔咯芬分入任何小類。在上述公認(rèn)具有人COX-2特異選擇性而證實(shí)可用于治療人體疾病的唯一非類固醇類抗炎藥是奈丁美酮，它不是一種酸，而是一種2-丁酮。盡管該活性成分是一種酸代謝物，該代謝物在狗中只有一小部分咔咯芬的COX-2選擇性。
在此廣泛分類中的許多傳統(tǒng)非類固醇類抗炎藥的例子列于下表，其中給出了每一化合物的通用名和IUPAC名稱及其結(jié)構(gòu)式。所有列舉的化合物在美國(guó)藥典協(xié)會(huì)(Rockville，MD.)1995年C.A.Fleeger版的美國(guó)外來(lái)名稱和國(guó)際藥物名稱USP詞典中均有記載。USAN(美國(guó)外來(lái)名稱)項(xiàng)目對(duì)藥物給出簡(jiǎn)易和適用的非專有名稱，而且一旦該藥物進(jìn)入臨床觀察階段就會(huì)啟動(dòng)其名稱選擇程序。在下表的開始給出了咔咯芬的名稱和結(jié)構(gòu)式以便進(jìn)行比較。
表1
1注冊(cè)的商標(biāo)；準(zhǔn)許用于美國(guó)以外的狗
優(yōu)選實(shí)施方案的描述咔咯芬類化合物的特征是具有α-甲基-乙酸官能團(tuán)，在狗體內(nèi)的COX-2選擇性比上表中任何含有羧基或磺基或磺?；姆穷惞檀碱惪寡姿幎即笤S多倍。為了說(shuō)明這種意外的特性，在本發(fā)明化合物咔咯芬與選自上表中的某些化合物之間進(jìn)行了COX-2選擇性比較。通過(guò)下述的實(shí)施例對(duì)所得結(jié)果進(jìn)行說(shuō)明。
如上所述，通常將對(duì)COX-2的選擇性確定為COX-1抑制率與COX-2抑制率的比，或COX-2抑制率與COX-1抑制率的比。在本發(fā)明當(dāng)中，為了簡(jiǎn)便起見，使用了狗體內(nèi)的COX-1抑制率與COX-2抑制率的比。兩個(gè)抑制率的值是IC50值，其含義是實(shí)驗(yàn)化合物活性越強(qiáng)，其IC50值就越大小。這實(shí)際上與COX-1∶COX-2的比成反比，而實(shí)驗(yàn)化合物對(duì)狗COX-2具有非常大的選擇性，其比率為較大數(shù)與較小數(shù)的比。因此，對(duì)狗COX-2最具選擇性的實(shí)驗(yàn)化合物是那些具有最高比率的化合物。
實(shí)施例1咔咯芬及其它非類固醇類抗炎藥對(duì)狗環(huán)氧合酶-1和-2抑制率的比較評(píng)價(jià)對(duì)狗COX-1活性評(píng)價(jià)的方案設(shè)計(jì)在測(cè)試的前一天用0.1毫升的DMSO/9.9毫升的漢格氏平衡鹽溶液(HBSS)溶解并稀釋測(cè)試藥物化合物，并在4℃下儲(chǔ)存過(guò)夜。在實(shí)驗(yàn)的當(dāng)天，從供體狗抽取血液并加入構(gòu)櫞酸鹽，在室溫下以190×g離心25分鐘，將獲得的富集血小板的血漿轉(zhuǎn)移到一只新的試管中用于進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)。通過(guò)在室溫下以1500×g離心10分鐘洗滌該血小板。用含有漢格氏緩沖液(不含Ca)和0.2％牛血清白蛋白(BSA)及20mM HEPES的血小板緩沖液洗滌該血小板。然后將血小板樣品調(diào)節(jié)至1.5×107/ml，之后，將50μl鈣離子載體(A23187)和氯化鈣溶液加至含有50μl測(cè)試藥物化合物稀釋液的平皿中，得到最終濃度為1.7μMA23187和1.26mM Ca。然后，加入100μl洗滌的狗血小板，并將樣本在37℃下保溫15分鐘，之后加入20μl的77mM EDTA終止反應(yīng)，然后將平皿在4℃下以2000×g離心10分鐘，之后取50μl血清通過(guò)酶聯(lián)免疫測(cè)定(EIA)檢測(cè)血栓素B2(TXB2)。通過(guò)每個(gè)平皿的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算TXB2的pg/ml，從中能夠計(jì)算出測(cè)試藥物化合物的COX-1百分抑制率和IC50值。
對(duì)狗COX-2活性的評(píng)價(jià)方案使用來(lái)自美國(guó)典型培養(yǎng)物中心的保藏號(hào)為DH82的狗組織細(xì)胞瘤(巨噬細(xì)胞樣)細(xì)胞系建立各種測(cè)試藥物化合物的COX-2抑制活性評(píng)價(jià)方案。向含有這些細(xì)胞的燒瓶中加入10μg/mL的LPS，之后將燒瓶中的培養(yǎng)物孵育過(guò)夜，在測(cè)定的前一天制備并使用上述檢測(cè)COX-1方案的同樣測(cè)試藥物化合物進(jìn)行COX-2測(cè)定。從培養(yǎng)物燒瓶中刮取收集細(xì)胞，然后用最低伊格爾介質(zhì)(MEM)和1％胎牛血清洗滌，在1500rpm下離心2分鐘，并調(diào)節(jié)至濃度為3.2×105個(gè)細(xì)胞/毫升。向50μl的測(cè)試藥物稀釋液中加入50μl的花生四烯酸MEM液，得到最終濃度10μM，然后加入100μl細(xì)胞懸浮液獲得最終濃度為1.6×105個(gè)細(xì)胞/毫升。將測(cè)試樣本懸浮液孵育1小時(shí)，然后在4℃以1000rpm離心10分鐘，之后將每份50μl的等份每種測(cè)試藥物樣本轉(zhuǎn)移到EIA平皿中。進(jìn)行EIA實(shí)驗(yàn)測(cè)定前列腺素E2(PGE2)，并從每個(gè)平皿上的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算PGE2的pg/ml濃度。從此數(shù)據(jù)中能夠計(jì)算出每種測(cè)試藥物化合物的COX-2百分抑制率和IC50值。在幾個(gè)月的時(shí)間內(nèi)重復(fù)觀察COX-1和COX-2的抑制率。將所得結(jié)果進(jìn)行平均，計(jì)算單獨(dú)的COX-1∶COX-2比。將所得數(shù)據(jù)與每個(gè)測(cè)試樣本所進(jìn)行的測(cè)試數(shù)據(jù)表示列于下表中。
表2
實(shí)施例2
用狗全血體外測(cè)定咔咯芬的COX-1和COX-2活性抑制率本實(shí)驗(yàn)的目的是通過(guò)體外方法測(cè)定咔咯芬在狗全血中對(duì)COX-1和COX-2活性的抑制能力。以10mg/kg外消旋6-氯-α-甲基-咔唑-2-乙酸(咔咯芬)的劑量給三只狗口服(PO)給藥膠囊劑型的藥物，再以2mg/kg的咔咯芬以相同方式給另外三只狗給藥，還有三只狗是不給藥。在實(shí)驗(yàn)給藥前從全部狗身上采集零小時(shí)血樣，在此之后的1、3、和6小時(shí)采集血樣。準(zhǔn)備試管使之含有2μl的(A)鈣離子載體A23187達(dá)到最終濃度為50μM，它可以刺激血栓素B2(TXB2)的產(chǎn)生用于COX-1活性測(cè)定；或者(B)脂多糖(LPS)達(dá)到10μg/ml的最終濃度，它可以刺激前列腺素E2(PGE2)的產(chǎn)生用于測(cè)定COX-2活性。用作對(duì)照組的測(cè)試試管含有載體，在加入任何試劑時(shí)都不會(huì)產(chǎn)生激發(fā)。向每個(gè)上述測(cè)試試管中加入500μl血樣，之后，如果試管含有鈣離子載體，則在37℃下保溫1小時(shí)，如果試管含有LPS，則保溫過(guò)夜，保溫之后，加入10μl的EDTA達(dá)到最終濃度0.3％，以便防止在融化冷凍血漿樣本之后有時(shí)出現(xiàn)的血漿凝聚。在4℃離心保溫的樣本，收集-200μl的所得血漿樣本并儲(chǔ)存在-20℃的聚丙烯96-孔培養(yǎng)皿中。為了確定本實(shí)驗(yàn)的終點(diǎn)，使用來(lái)源于Cayman的酶聯(lián)免疫測(cè)定(EIA)試劑盒，利用標(biāo)記物與抗體的競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定TXB2和PGE2的產(chǎn)生，并通過(guò)比色法確定終點(diǎn)。將血漿樣本稀釋到大約在診斷或研究工具試劑盒中所提供的標(biāo)準(zhǔn)用量范圍之內(nèi)，即，對(duì)于TXB2是1/500而對(duì)于PGE2是1/750。
在下表3中的數(shù)據(jù)表明了基于其零小時(shí)值的COX-1和COX-2活性百分抑制率。該數(shù)據(jù)表示為每樣本產(chǎn)生的pg/ml TXB2和PGE2的處理組平均值。在所說(shuō)數(shù)據(jù)值當(dāng)中沒(méi)有血漿稀釋因素的影響。
表3中的數(shù)據(jù)表明2mg/kg劑量在所有時(shí)間點(diǎn)都表現(xiàn)出明顯的COX-2抑制。與10mg/kg劑量組獲得的數(shù)據(jù)比較，發(fā)現(xiàn)在給藥后3和6小時(shí)COX-2抑制有所下降。表3中的數(shù)據(jù)還表示2mg/kg劑量在任何時(shí)間點(diǎn)對(duì)COX-1活性沒(méi)有明顯抑制。此結(jié)果與實(shí)驗(yàn)中觀察到的狗對(duì)咔咯芬的明顯耐受性相一致。10mg/kg劑量組的數(shù)據(jù)表明在每一時(shí)間點(diǎn)都具有完全的的COX-2活性抑制，而在1小時(shí)開始具有非常強(qiáng)的COX-1活性抑制，在3和6小時(shí)時(shí)間點(diǎn)的值較平緩。因此，表3中的數(shù)據(jù)清楚地表明在2mg/kg劑量濃度的咔咯芬具有良好的COX-2選擇性。隨著劑量從2mg/kg增加到10mg/kg，對(duì)COX-1活性抑制的增加表現(xiàn)的更為明顯。
表3
當(dāng)測(cè)定的百分抑制率大于對(duì)照組測(cè)得的抑制率時(shí)則觀察到了COX抑制。上述表中的百分抑制率可以根據(jù)下述公式直接計(jì)算出來(lái)
實(shí)施例3用狗全血體外測(cè)定咔咯芬的COX-2活性抑制率本實(shí)驗(yàn)按照上述實(shí)施例2的步驟進(jìn)行，只是按照下述的詳細(xì)描述有所改變。
在零小時(shí)以2mg/kg外消旋6-氯-α-甲基-咔唑-2-乙酸(咔咯芬)的劑量給三只狗片劑口服(PO)給藥，再以4mg/kg的咔咯芬以相同方式在零小時(shí)給另外三只狗給藥，還有三只狗是不給藥。在實(shí)驗(yàn)給藥前從全部狗身上采集零小時(shí)血樣，在此之后的2和4小時(shí)采集血樣。準(zhǔn)備試管使之含有2μl的脂多糖(LPS)達(dá)到10μg/ml的最終濃度。未給藥組的測(cè)得試管用作對(duì)照組。向每個(gè)上述測(cè)試試管中加入500μl血樣，之后，在37℃下保溫過(guò)夜，保溫之后，加入10μl的EDTA達(dá)到最終濃度0.3％。在4℃離心保溫的樣本，收集-200μl的所得血漿樣本并儲(chǔ)存在-20℃的聚丙烯96-孔培養(yǎng)皿中。使用來(lái)源于Cayman的酶聯(lián)免疫測(cè)定(EIA)試劑盒測(cè)定PGE2的產(chǎn)生并通過(guò)比色法確定終點(diǎn)。將血漿樣本稀釋到用于PGE2的1/750。
還要通過(guò)使用一種帶有5微米，100×4.6mm Chromtech手性AGP柱和由10∶90v/v 2-丙醇∶0.1M磷酸鹽緩沖液PH6.0組成的流相及熒光檢測(cè)(285nm激發(fā)光，345nm發(fā)射光)的HPLC來(lái)測(cè)定血漿樣本的總血漿咔咯芬濃度。在加入(S)-甲氧奈丙酸作為內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)之后用0.05M構(gòu)櫞酸PH5.1配制血漿樣本緩沖液，然后用4∶1v/v的乙醚∶二氯甲烷萃取。分離乙醚層，然后再用0.005M Na2CO3反萃取，之后吸出有機(jī)相棄去，用0.05M構(gòu)櫞酸PH5.1將水相配制成緩沖液，再用乙醚∶二氯甲烷萃取。將乙醚轉(zhuǎn)移至清潔試管中，在氮?dú)庀抡舭l(fā)，將在HPLC流相中再次形成殘留物用于分析。
下述表4的數(shù)據(jù)表示PGE2(pg/mL/孔)的產(chǎn)生，基于每只狗零小時(shí)值的COX-2活性百分抑制率，以及每只狗的血漿濃度。
表4中的數(shù)據(jù)表明在給藥后2和4小時(shí)，劑量組之間只有很小的差別，4mg/kg組表現(xiàn)出較大的COX-2抑制。體外COX-2抑制與咔咯芬血漿濃度具有很好的相關(guān)性。
表4
<p>上述表中的百分抑制率可以根據(jù)下述公式直接計(jì)算出來(lái)
實(shí)施例4在角叉菜膠誘導(dǎo)的狗炎癥模型中測(cè)定咔咯芬的體內(nèi)COX-2活性抑制率本實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖潜O(jiān)測(cè)在誘導(dǎo)炎癥過(guò)程中皮下植入腔中的COX-2活性。在角叉菜膠處理后5小時(shí)盡早通過(guò)western分析測(cè)定COX-2酶(T.Kirchner et al.，J.Pharmacol.Exp.Ther.(1997)282，1094-1101)。另外，可以通過(guò)實(shí)施例2中所述體外方法同時(shí)測(cè)定COX-1活性。在6只獵犬的肩胛骨后的皮下手術(shù)植入外徑大約為4.2cm的聚乙烯可活動(dòng)高爾夫球體。使這些狗手術(shù)后恢復(fù)1個(gè)月后再指定為實(shí)驗(yàn)組。
該實(shí)驗(yàn)重復(fù)進(jìn)行兩批。在實(shí)驗(yàn)的當(dāng)天，有三只狗在炎癥開始前30分鐘口服給藥2mg/kg的咔咯芬，而另外三只狗作為對(duì)照組。將球體周圍的毛發(fā)剃光，確定位置以便能夠找到移動(dòng)球體中的一個(gè)孔。然后標(biāo)記此區(qū)域，并用2％碘酊消毒。用針刺入該孔中取出1.5cc的液體，將此定義為滲出液“EF”。取出1.5cc的EF之后，向該球體內(nèi)加入0.33％角叉菜膠水溶液，誘導(dǎo)出一種炎癥。在注射角叉菜膠0、5、和24小時(shí)后，采集EF樣本。而且也采集血樣以便按照實(shí)施例2所述進(jìn)行COX-1的體外全血測(cè)定。
由于在體內(nèi)樣本中發(fā)現(xiàn)PGE2的量較低，在測(cè)定之前要對(duì)所需要的EF樣本進(jìn)行純化。這可以通過(guò)使用4mL PGE2親和柱(Cayman Chemical)來(lái)完成。首先用10mL的0.1M磷酸鹽緩沖液洗滌柱子，再用10mL水洗滌柱子。之后用0.1M磷酸鹽緩沖液將EF稀釋1∶5，并加到柱子上。用10mL的磷酸鹽緩沖液洗滌柱子，再用10mL水洗滌柱子。最后，用2.5mL95％乙醇從柱子中取出PGE2。在氮?dú)庀聯(lián)]發(fā)該樣本，然后稀釋，通過(guò)CaymanEIA PGE2(COX-2)試劑盒按照實(shí)施例2和3所述分析PGE2。
表5表明與背景水平相比在可移動(dòng)球體中角叉菜膠誘導(dǎo)出了幾乎4倍的PGE2合成增加。這種增加在5小時(shí)時(shí)可以觀察到，并且保持至少24小時(shí)。2mg/kg咔咯芬劑量給藥的動(dòng)物表現(xiàn)出接近全部的PGE2合成抑制，該抑制在5小時(shí)和24小時(shí)時(shí)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。P值分別為0.013和0.015。體外COX-1數(shù)據(jù)表明在任何時(shí)間點(diǎn)的測(cè)試對(duì)TXB2沒(méi)有抑制。這表明咔咯芬在體內(nèi)表現(xiàn)出COX-2抑制的同時(shí)在體外對(duì)COX-1活性沒(méi)有影響。
表5<
實(shí)施例5計(jì)算出比立即釋放咔咯芬劑型能夠持續(xù)更長(zhǎng)一段時(shí)間而達(dá)到狗體內(nèi)COX-80％抑制率的咔咯芬控釋劑型口服藥物傳遞攝入率和劑量通過(guò)本實(shí)驗(yàn)獲得的數(shù)據(jù)確定適用的、優(yōu)選的、更優(yōu)選的、和最優(yōu)選的適用于本發(fā)明的口服咔咯芬控釋劑型。
對(duì)上述實(shí)施例3中采集的狗體血漿樣本，通過(guò)使用一種帶有5微米，100×4.6mm Chromtech手性AGP柱和由10∶90v/v 2-丙醇∶0.1M磷酸鹽緩沖液PH6.0組成的流相及熒光栓測(cè)(285nm激發(fā)光，345nm發(fā)射光)的HPLC來(lái)測(cè)定總血漿咔咯芬濃度。在加入(S)-甲氧奈丙酸作為內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)之后用0.05M構(gòu)櫞酸PH5.1配制血漿樣本緩沖液，然后用4∶1v/v的乙醚∶二氯甲烷萃取。分離乙醚層，然后再用0.005M Na2CO3反萃取，之后吸出有機(jī)相棄去，用0.05M構(gòu)櫞酸PH5.1將水相配制成緩沖液，再用乙醚∶二氯甲烷萃取。將乙醚轉(zhuǎn)移至清潔試管中，在氯氣下蒸發(fā)，將在HPLC流相中再次形成殘留物用于分析。
以咔咯芬血漿水平和％COX-2抑制率(來(lái)源于實(shí)施例3)繪制曲。觀察此曲線發(fā)現(xiàn)在咔咯芬血漿濃度大約10μg/ml時(shí)表現(xiàn)出80％的COX-2抑制率，而在在咔咯芬血漿濃度大約2μg/ml時(shí)表現(xiàn)出50％的COX-2抑制率，在咔咯芬血漿濃度大約20μg/ml時(shí)表現(xiàn)出90％的COX-2抑制率。
以2mg/lb劑量給狗口服給藥一種立即釋放咔咯芬制劑之后，血漿咔咯芬濃度在10μg/ml之上的時(shí)間大約10.5小時(shí)。根據(jù)本發(fā)明，2mg/lb/天處于咔咯芬的優(yōu)選劑量范圍之內(nèi)。
根據(jù)本發(fā)明的適用咔咯芬控釋劑型應(yīng)當(dāng)是在單劑量口服給藥2mg/lb之后咔咯芬血漿濃度大于2μg/ml的水平要保持幾乎一天。
根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的咔咯芬控釋劑型應(yīng)當(dāng)是，在將立即釋放劑型和控釋劑型以相同劑量，即，2、1.8、1.6、或1.4mg/lb給藥時(shí)，控釋劑型所保持的血漿咔咯芬濃度大于10μg/ml水平的時(shí)間，要大于立即釋放劑型的咔咯芬保持相當(dāng)血漿濃度的時(shí)間。例如，本發(fā)明的優(yōu)選2mg/lb口服控釋劑型保持血漿咔咯芬濃度大于10μg/ml的時(shí)間大于10.5小時(shí)。
立即釋放劑型的咔咯芬在1.8、1.6、和1.4mg/lb劑量時(shí)保持血漿咔咯芬濃度大于10μg/ml的時(shí)間分別是9.5小時(shí)、8.5小時(shí)、和7.5小時(shí)。
優(yōu)選的1.8mg/lb劑量的口服控釋咔咯芬劑型保持血漿咔咯芬濃度大于10μg/ml的時(shí)間大于9.5小時(shí)。而1.6mg/lb和1.4mg/lb劑量的相應(yīng)最長(zhǎng)時(shí)間分別是8.5小時(shí)和7.5小時(shí)。在假定為線性藥物動(dòng)力學(xué)情況下，可以類似的計(jì)算出優(yōu)選口服控釋咔咯芬劑型在大于2mg/lb或小于1.4mg/lb的劑量表現(xiàn)特征。
更優(yōu)選的口服咔咯芬控釋劑型應(yīng)當(dāng)是所保持的血漿咔咯芬濃度大于10μg/ml水平的時(shí)間要大于或等于在將立即釋放劑型以任何較高劑量給藥時(shí)所表現(xiàn)出的時(shí)間。因此這種控釋劑型保持至少80％COX-2狗血漿抑制率的時(shí)間大于立即釋放劑型在較高劑量時(shí)所達(dá)到的時(shí)間。
更優(yōu)選的口服咔咯芬控釋劑型應(yīng)當(dāng)是，在將所說(shuō)口服控釋咔咯芬劑型以小于2mg/lb劑量給藥時(shí)，能夠保持血漿咔咯芬濃度大于大約10μg/ml水平的時(shí)間要大于或等于立即釋放劑型2mg/lb給藥時(shí)所表現(xiàn)出的時(shí)間(10.5小時(shí))。由于2mg/lb/天是根據(jù)本發(fā)明當(dāng)前推薦和接受的有效口服劑量，因此為了進(jìn)行這種比較，將2mg/lb口服立即釋放進(jìn)行的表現(xiàn)作為基礎(chǔ)標(biāo)準(zhǔn)。
如下所述，計(jì)算出的控釋口服劑型的咔咯芬釋放率導(dǎo)致狗咔咯芬血漿濃度大于10μg/ml。為了計(jì)算方便，這些計(jì)算的釋放率稱之為“0級(jí)”釋放率，因此，計(jì)算的釋放率適用于能夠以一個(gè)恒定釋放率(即，0級(jí))釋放的控釋結(jié)構(gòu)。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)預(yù)料到實(shí)際劑型以“0級(jí)”釋放的時(shí)間只是該藥物釋放時(shí)間的一部分，而后它們會(huì)以“1級(jí)”或者“混合級(jí)”釋放。為在下面的分析中給本領(lǐng)域的熟練技術(shù)人員一個(gè)更為清楚的咔咯芬傳遞率(或釋放率)定義，根據(jù)該劑型釋放出80％咔咯芬的時(shí)間定義了適用的釋放率，而不考慮藥物釋放機(jī)制。
通過(guò)Zhou和Notari的方法確定可以產(chǎn)生設(shè)定的血漿咔咯芬濃度大于10μg/ml的0-級(jí)釋放率，參見Zhou，M和N.“使用口服給藥藥物動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)選擇持續(xù)釋放劑型藥物的方法學(xué)以及使用模擬數(shù)據(jù)的方法有效性”，Biopharm Drug Disp，1995.16，319-331。以立即釋放劑型給狗口服給藥2mg/lb咔咯芬所得的平均數(shù)據(jù)適合于下述等式C=Ci(e-S2t-e-S1t)]]>其中Ci，S2和S1是參數(shù)，而t是時(shí)間。在零級(jí)釋放過(guò)程中，通過(guò)下述公式得到咔咯芬血漿濃度C=(KoCi/Dref)[(e-S1t-1)/S1-(e-S2t-1)/S2]]]>其中k0是零級(jí)釋放率，而Dref是參照劑量。在釋放完成之后，下述等式是可適用的C=(KoCi/Dref)[[[(1-e-S1t)/S1]e-S2t-[(1-eS2t)/S2]e-S2t]]]>其中T＝DCR/k0，而DCR是對(duì)照釋放劑量。
優(yōu)選口服控釋咔咯芬劑型下表6表明口服控釋咔咯芬劑型(2mg/lb劑量)釋放80％其結(jié)合的咔咯芬的時(shí)間范圍為1.6-19.2小時(shí)，能夠維持咔咯芬血漿濃度大于10μg/ml的時(shí)間大于10.5小時(shí)。因此，它們是劑量2mg/lb的優(yōu)選劑型。
下表7表明口服控釋咔咯芬劑型(1.8mg/lb劑量)釋放80％其結(jié)合的咔咯芬的時(shí)間范圍為1.6-19.2小時(shí)，能夠維持咔咯芬血漿濃度大于10μg/ml的時(shí)間大于9.5小時(shí)。因此，它們是劑量1.8mg/lb的優(yōu)選劑型。
下表8表明口服控釋咔咯芬劑型(1.6mg/lb劑量)釋放80％其結(jié)合的咔咯芬的時(shí)間范圍為1.6-19.2小時(shí)，能夠維持咔咯芬血漿濃度大于10μg/ml的時(shí)間大于8.5小時(shí)。因此，它們是劑量1.6mg/lb的優(yōu)選劑型。
下表9表明口服控釋咔咯芬劑型(1.4mg/lb劑量)釋放80％其結(jié)合的咔咯芬的時(shí)間范圍為1.6-19.2小時(shí)，能夠維持咔咯芬血漿濃度大于10μg/ml的時(shí)間大于7.5小時(shí)。因此，它們是劑量1.4mg/lb的優(yōu)選劑型。
更優(yōu)選的口服咔咯芬控釋劑型本發(fā)明的控釋咔咯芬劑型特別適用是因?yàn)?，即使在低?mg/lb的優(yōu)選有效使用劑量時(shí)給藥它們能夠保持咔咯芬血漿濃度大于10μg/ml的時(shí)間大于10.5小時(shí)。表7表明口服控釋咔咯芬劑型(1.8mg/lb劑量)釋放80％其結(jié)合的咔咯芬的時(shí)間范圍為4.8-19.2小時(shí)，能夠維持咔咯芬血漿濃度大于10μg/ml的時(shí)間大于10.5小時(shí)。因此，它們是劑量1.8mg/lb的更優(yōu)選劑型。
表8表明口服控釋咔咯芬劑型(1.6mg/lb劑量)釋放80％其結(jié)合的咔咯芬的時(shí)間范圍為4.8-19.2小時(shí)，能夠維持咔咯芬血漿濃度大于10μg/ml的時(shí)間大于9.5小時(shí)，即大于1.8mg/lb立即釋放劑型所能夠達(dá)到的時(shí)間。因此，它們是劑量1.6mg/lb的更優(yōu)選劑型。
表9表明口服控釋咔咯芬劑型(1.4mg/lb劑量)釋放80％其結(jié)合的咔咯芬的時(shí)間范圍為4.8-19.2小時(shí)，能夠維持咔咯芬血漿濃度大于10μg/m的間大于8.5小時(shí)，即大于1.6mg/lb立即釋放劑型所能夠達(dá)到的時(shí)間。因此，它們是劑量1.4mg/lb的更優(yōu)選劑型。
最優(yōu)選的口服咔咯芬控釋劑型最優(yōu)選的口服咔咯芬控釋劑型應(yīng)當(dāng)是，在將所說(shuō)口服控釋咔咯芬劑型以小于2mg/lb劑量給藥時(shí)，能夠保持血漿咔咯芬濃度大于大約10μg/ml水平的時(shí)間要大于或等于立即釋放劑型2mg/lb給藥時(shí)所表現(xiàn)出的時(shí)間(10.5小時(shí))。由于2mg/lb/天是根據(jù)本發(fā)明當(dāng)前推薦和接受的有效口服劑量，因此為了進(jìn)行這種比較，將2mg/lb口服立即釋放進(jìn)行的表現(xiàn)作為基礎(chǔ)標(biāo)準(zhǔn)。用表6-9的數(shù)據(jù)定義了本發(fā)明最優(yōu)選口服控釋劑型的特征。
在1.6mg/lb劑量時(shí)，最優(yōu)選口服控釋咔咯芬劑型應(yīng)當(dāng)是釋放80％其結(jié)合的咔咯芬的時(shí)間范圍為6.4-19.2小時(shí)。在1.4mg/lb劑量時(shí)，最優(yōu)選口服控釋咔咯芬劑型應(yīng)當(dāng)是釋放80％其結(jié)合的咔咯芬的時(shí)間范圍為12.8小時(shí)(10-14小時(shí))。
表6在以不同釋放率釋放咔咯芬的控釋劑型給藥后，咔咯芬血漿濃度大于10μg/ml的小時(shí)數(shù)(計(jì)算的)；劑量＝2mg/lb
表7在以不同釋放率釋放咔咯芬的控釋劑型給藥后，咔咯芬血漿濃度大于10μg/ml的小時(shí)數(shù)(計(jì)算的)；劑量＝1.8mg/lb。
表8
在以不同釋放率釋放咔咯芬的控釋劑型給藥后，咔咯芬血漿濃度大于10μg/ml的小時(shí)數(shù)(計(jì)算的)；劑量＝1.6mg/lb。
表9在以不同釋放率釋放咔咯芬的控釋劑型給藥后，咔咯芬血漿濃度大于10μg/ml的小時(shí)數(shù)(計(jì)算的)；劑量＝1.4mg/lb。
實(shí)施例6給狗植入咔咯芬利用咔咯芬植入傳遞咔咯芬持續(xù)一段時(shí)間，例如，3天、7天、30天或更長(zhǎng)。下面詳述的實(shí)施例描述了從含有咔咯芬的植入物中釋放咔咯芬的適用和優(yōu)選釋放率，而且還定義了與之相關(guān)劑量。
使用來(lái)源于Gibaldi，M.和D.Perrier，“藥物動(dòng)力學(xué)”，第二版，藥物和藥物科學(xué)，ed.J.Swarbrick，Vol.15，1982，New YorkMarcel Dekker，Inc.的下述等式計(jì)算能夠維持10μg/ml咔咯芬穩(wěn)定血漿濃度的狗體咔咯芬攝入率。Css=R0C1]]>其中Css是穩(wěn)定的咔咯芬血漿濃度，R0是攝入率，而C1是系統(tǒng)清除率。利用下述等式從給狗口服給藥2mg/lb咔咯芬之后觀察到的藥物動(dòng)力學(xué)計(jì)算系統(tǒng)清除率C1=FDAUC]]>其中F是生物利用度(假定為一個(gè)植入物為1)，D是口服劑量，而AUC是咔咯芬血漿濃度與時(shí)間曲線下的平均面積，外推至無(wú)限大。
獲得的清除率C1＝5mL/小時(shí)每磅體重。利用此清除率，計(jì)算出來(lái)目標(biāo)Css是10μg/ml，咔咯芬釋放率R0是50μg/lb/小時(shí)，再次基礎(chǔ)上乘以24小時(shí)/天得出每天的攝入率為1.2mg/lb/天。對(duì)于3、7、或30天的療程，其總劑量分別為3.6mg/lb或8.4mg/lb或36mg/lb。概而言之，一個(gè)含有每磅體重8.4mg咔咯芬的植入物，以每小時(shí)每磅體重50μg釋放率釋放咔咯芬，保持10μg/ml的咔咯芬血漿濃度7天。這將保持80％COX-2抑制率7天。
為了獲得為保持2μg/ml的咔咯芬血漿濃度(50％COX-2抑制率)所需的植入劑量和咔咯芬釋放率，可以通過(guò)乘以0.2對(duì)10μg/ml目的濃度的劑量和釋放率進(jìn)行線性調(diào)節(jié)。因此，為了獲得2μg/ml的咔咯芬血漿濃度，需要10μg/lb/小時(shí)咔咯芬釋放率，或者，0.24mg/lb/天的釋放率。對(duì)于3、7、或30天療程來(lái)說(shuō)，分別需要0.72mg/lb或1.68mg/lb或7.2mg/lb的總劑量。
為了獲得為保持20μg/ml的咔咯芬血漿濃度(90％COX-2抑制率)所需的植入劑量和咔咯芬釋放率，可以通過(guò)乘以2對(duì)10μg/ml目的濃度的劑量和釋放率進(jìn)行線性調(diào)節(jié)。因此，為了獲得20μg/ml的咔咯芬血漿濃度，需要100μg/lb/小時(shí)的咔咯芬釋放率，或者，2.4mg/lb/天的釋放率。對(duì)于3、7、或30天療程來(lái)說(shuō)，分別需要7.2mg/lb或16.8mg/lb或72mg/lb的總劑量。
本發(fā)明適用的咔咯芬植入物以0.24mg/lb/天或更大的釋放率向狗體內(nèi)釋放咔咯芬。
本發(fā)明優(yōu)選的咔咯芬植入物以0.24至1.2mg/lb/天的釋放率向狗體內(nèi)釋放咔咯芬。
本發(fā)明更優(yōu)選的咔咯芬植入物以1.2至2.4mg/lb/天的釋放率向狗體內(nèi)釋放咔咯芬。
適用的咔咯芬植入物中咔咯芬總劑量為2gm，這取決于給狗合理給藥的植入物的大小。當(dāng)然，同時(shí)可以植入一個(gè)以上的植入物給藥。
實(shí)施例7(S)-6-氯-α-甲基-咔唑-2-乙酸的拆分將4.3克的(R)-α-甲基苯胺溶于20mL乙酮的溶液加入一種9.7克部分拆分的6-氯-α-甲基-咔唑-2-乙酸(通過(guò)過(guò)濾以前拆分的外消旋物回收)溶液中。在室溫下靜止24小時(shí)后，過(guò)濾混合物，用冷乙酮洗滌濾餅，干燥后得3克。在從乙酮中再進(jìn)行兩次重結(jié)晶后，得到1.9克(S)-6-氯-α-甲基-咔唑-2-乙酸(R)-α-甲基苯胺鹽，[α]η22-13.6℃。從乙酮中再進(jìn)一步重結(jié)晶則不改變其旋光性。將該鹽溶于50mL的熱乙酮中，將溶液過(guò)濾后到入500mL的稀鹽酸中。過(guò)濾和干燥之后，得到1.4充，通過(guò)氯仿結(jié)晶得到0.9克(S)-6-氯-α-甲基-咔唑-2-乙酸，m.p.198°-201°，[α]η22+53.2°，(c1.33，CH3OH).
實(shí)施例8COX-2選擇性的種特異性Canis familiaris種(狗)成員中的活性與Rattus norvegicus種(白鼠)成員和Homo sapiens種(人)成員中的活性比較在實(shí)施例1當(dāng)中已經(jīng)充分描述了咔咯芬在狗體內(nèi)表現(xiàn)出的對(duì)COX-2的非常高度選擇性。同樣令人驚奇的是發(fā)現(xiàn)這種對(duì)COX-2酶的選擇性抑制似乎是一種對(duì)Canis familiaris種有特異性的活性，而對(duì)其它種則不具備。這種發(fā)現(xiàn)是基于外消旋性咔咯芬在Rattus norvegicus種(白鼠)成員和Homosapiens種(人)成員中的抑制活性評(píng)價(jià)獲得。
通過(guò)在Agent &amp; Actions，32，(1991)，313-320中所述的Griffiths et al.，的方法對(duì)環(huán)氧合酶在鼠體內(nèi)的選擇性進(jìn)行評(píng)價(jià)。根據(jù)外消旋咔咯芬對(duì)在鼠滑液中測(cè)得的前列腺素PGE2的產(chǎn)生發(fā)生的影響評(píng)價(jià)COX-2抑制活性?；菏怯苫し置?，并儲(chǔ)存于關(guān)節(jié)腔中。在關(guān)節(jié)炎過(guò)程中，關(guān)節(jié)組織中誘導(dǎo)出COX-2，并且前列腺素產(chǎn)物在滑液中積聚。根據(jù)外消旋咔咯芬對(duì)在鼠胃粘膜內(nèi)中測(cè)得的前列腺素PGE2的產(chǎn)生發(fā)生的影響評(píng)價(jià)COX-1抑制活性。對(duì)這種胃同工酶的抑制可以引起不利的胃腸道副作用。COX-1的ED50是6.4mg/kg，而COX-2的ED50是0.63mg/kg。這些結(jié)果表明在鼠體內(nèi)外消旋咔咯芬對(duì)COX-2只有10倍的選擇性。
對(duì)于人體來(lái)說(shuō)，按照J(rèn).Bio.Chem.，268，23448-23454，1993中所述的Habib等人的方法，根據(jù)外消旋咔咯芬對(duì)由IL-1和佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)刺激人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)產(chǎn)生的COX-2水平的影響評(píng)價(jià)COX-2抑制活性。這些內(nèi)皮細(xì)胞在白介素-1(IL-1)和PMA的刺激下最可能含有大量的可誘導(dǎo)COX-2同工酶。按照Inflamm.Res.，44，253-257，1995中所述的Grossman等人的方法，根據(jù)外消旋咔咯芬對(duì)通過(guò)人洗滌血小板(HWP)TXB2生化檢測(cè)所測(cè)得的COX-1水平的影響評(píng)價(jià)COX-1抑制活性。這些血小板最可能含有大量的構(gòu)成性COX-1同工酶。HUVEC(COX-2)IC50(μM)是1.2，而HWPTXB2(COX-1)IC50(μM)是0.77。這些結(jié)果表明在人體內(nèi)，外消旋咔咯芬對(duì)COX-2同工酶沒(méi)有選擇性。
實(shí)施例9
(S)-6-氯-α-甲基-咔唑-2-乙酸片劑片劑成分 每片重量(S)-6-氯-α-甲基-咔唑-2-乙酸 25.00mg乳糖，U.S.P. 64.50mg玉米淀粉 10.00mg硬脂酸鎂 0.50mg實(shí)施例10(S)-6-氯-α-甲基-咔唑-2-乙酸的膠囊劑膠囊劑成分每片重量(S)-6-氯-α-甲基-咔唑-2-乙酸 50mg乳糖，U.S.P. 124mg玉米淀粉U.S.P. 30mg滑石粉U.S.P. 5mg總重量210mg實(shí)施例11(S)-6-氯-α-甲基-咔唑-2-乙酸的非腸道制劑非腸道制劑每cc安瓿成分 每片重量(S)-6-氯-α-甲基-咔唑-2-乙酸 10.2mg羥苯甲酸甲酯U.S.P. 1.8mg對(duì)羥苯甲酸丙酯U.S.P. 0.2mg氫氧化鈉U.S.P.適量ph 9.0mg注射用水，U.S.P.足量加至 1.0毫升
權(quán)利要求
1.式(1)化合物在制備用于治療或預(yù)防一種家犬與誘導(dǎo)環(huán)加氧酶-2(COX-2)的活性有關(guān)的疼痛和炎性病變和疾病的藥物中的應(yīng)用，該化合物同時(shí)降低或消除通過(guò)相對(duì)于COX-1活性而選擇性抑制COX-2活性由此引起與組成環(huán)加氧酶-1(COX-1)的活性發(fā)生同步抑制有關(guān)的不希望有的副作用，其中COX-2∶COX-1活性抑制的該選擇性比值至少為3∶1，這是基于以產(chǎn)生≥80％COX-2抑制的劑量在全血中測(cè)量的來(lái)自體外的抑制水平，該化合物包括抗炎選擇性COX-2抑制化合物，由下式表示
其中R2是
其中A是羥基、(C1-C4)烷氧基、氨基、羥基氨基、一-(C1-C2)烷基氨基、二-(C1-C2)烷基氨基；X和Y獨(dú)立地為H或(C1-C2)烷基；n為1或2；R6是鹵素、(C1-C3)烷基、三氟甲基、或硝基；R9是H；(C1-C2)烷基；苯基或苯基-(C1-C2)烷基，其中苯基可選地被氟或氯一取代；-C(＝O)-R，其中R是(C1-C2)烷基或苯基，可選地被氟或氯一取代；或-C(＝O)-O-R1，其中R1是(C1-C2)烷基；當(dāng)X和Y不同時(shí)，其(-)(R)和(+)(S)對(duì)映體；以及具有治療或預(yù)防疼痛和炎癥的治療活性的其所有藥學(xué)上可接受的鹽形式、藥物前體和代謝物。
2.按照權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中所述抗炎選擇性COX-2抑制化合物是咔洛芬，6-氯-α-甲基-9H-咔唑-2-乙酸。
3.按照權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中所述抗炎選擇性COX-2抑制化合物包含的完全是咔洛芬，6-氯-α-甲基-9H-咔唑-2-乙酸的(S)-對(duì)映體。
4.如權(quán)利要求1、2或3所述的應(yīng)用，它進(jìn)一步包含其中所述抑制性化合物在以下條件下與一種或多種其他治療活性藥劑聯(lián)合使用A.當(dāng)關(guān)節(jié)已嚴(yán)重發(fā)炎以及同時(shí)被細(xì)菌、真菌、原生動(dòng)物、和/或病毒感染時(shí)，所述抑制化合物與一種或多種抗生素、抗真菌劑、抗原生動(dòng)物劑、和/或抗病毒治療劑聯(lián)合使用；B.當(dāng)疼痛和炎癥需要加倍治療時(shí)，所述抑制化合物與炎癥的其他介體的抑制劑聯(lián)合使用，包含一種或多種獨(dú)立地選自以下組中的成員(1)NSAID；(2)H1-受體拮抗劑；(3)激肽-B1-和B2-受體拮抗劑；(4)選自PGD-、PGF-、PGl2-、和PGE-受體拮抗劑的前列腺素抑制劑；(5)血栓烷A2(TXA2-)抑制劑；(6)5-和12-脂氧合酶抑制劑；(7)白三烯LTC4-、LTD4/LTE4-、和LTB4-抑制劑；(8)PAF-受體拮抗劑；(9)加有一個(gè)或多個(gè)親水基的金硫基形式的金；(10)選自環(huán)孢霉素、硫唑嘌呤和甲氨蝶呤的免疫抑制劑；(11)抗炎糖皮質(zhì)激素；(12)青霉胺；(13)羥氯喹；(14)包括秋水仙堿的抗痛風(fēng)藥；包括別嘌呤醇的黃嘌呤氧化酶抑制劑；和選自丙磺舒、磺吡酮和苯溴馬隆的促尿酸尿藥；C.當(dāng)治療患有老年期疾病、綜合征和癥狀的老齡狗時(shí)，所述抑制化合物與一種或多種獨(dú)立地選自以下組中的成員聯(lián)合使用(1)抵抗記憶喪失和障礙的認(rèn)知治療劑；(2)抗高血壓藥和其他用于抵銷動(dòng)脈粥樣硬化、高血壓、心肌局部缺血、咽痛、充血性心力衰竭、和心肌梗塞的結(jié)果的心血管藥物，它們選自以下成員a.利尿劑；b.血管舒張藥；c.β-腎上腺素能受體拮抗劑；d.血管緊張素-II轉(zhuǎn)化酶抑制劑(ACE-抑制劑)，單獨(dú)或可選地與中性內(nèi)肽酶抑制劑一起；e.血管緊張素II受體拮抗劑；f.腎素抑制劑；g.鈣通道阻滯劑；h.交感神經(jīng)阻滯劑；I.α2-腎上腺素能興奮劑；j.α-腎上腺素能受體拮抗劑；和k.HMG-CoA-還原酶抑制劑(抗高膽固醇血藥)；(3)抗腫瘤劑，選自a.抗有絲分裂藥，選自I.長(zhǎng)春花生物堿，選自[1]長(zhǎng)春花堿，和[2]長(zhǎng)春新堿；(4)生長(zhǎng)激素促分泌劑；(5)強(qiáng)鎮(zhèn)痛劑；(6)局部和系統(tǒng)麻醉劑；和(7)H2-受體拮抗劑，質(zhì)子泵抑制劑，以及其他胃保護(hù)劑。
5.一種用于治療或預(yù)防一種家犬與誘導(dǎo)環(huán)加氧酶-2(COX-2)活性有關(guān)的疼痛和炎性病變和疾病、同時(shí)減少或消除與組成環(huán)加氧酶-1(COX-1)的活性發(fā)生同步抑制有關(guān)的不希望有的副作用的藥物組合物，它包含A.一種治療疼痛和炎癥的治療有效量的抗炎選擇性COX-2抑制化合物，它選擇性地抑制相對(duì)于COX-1活性的COX-2活性，其中COX-2∶COX-1活性抑制的選擇性比值至少為3∶1，這是基于以產(chǎn)生≥80％COX-2抑制的劑量在全血中測(cè)量的來(lái)自體外的抑制水平，它包含一種抗炎選擇性COX-2抑制化合物，該化合物由以下式(1)表示
其中R2是
其中A是羥基、(C1-C4)烷氧基、氨基、羥基氨基、一-(C1-C2)烷基氨基、二-(C1-C2)烷基氨基；X和Y獨(dú)立地為H或(C1-C2)烷基；n為1或2；R6是鹵素、(C1-C3)烷基、三氟甲基、或硝基；R9是H；(C1-C2)烷基；苯基或苯基-(C1-C2)烷基，其中苯基可選地被氟或氯一取代；-C(＝O)-R，其中R是(C1-C2)烷基或苯基，可選地被氟或氯一取代；或-C(＝O)-O-R1，其中R1是(C1-C2)烷基；當(dāng)X和Y不同時(shí)，其(-)(R)和(+)(S)對(duì)映體；以及具有治療或預(yù)防疼痛和炎癥的治療活性的其所有藥學(xué)上可接受的鹽形式、藥物前體和代謝物；和B.藥學(xué)上可接受的載體。
6.按照權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其中所述抗炎選擇性COX-2抑制化合物是咔洛芬，6-氯-α-甲基-9H-咔唑-2-乙酸。
7.按照權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其中所述抗炎選擇性COX-2抑制化合物包含的完全是咔洛芬，6-氯-α-甲基-9H-咔唑-2-乙酸的(S)-對(duì)映體。
8.如權(quán)利要求5、6或7所述的藥物組合物，其中進(jìn)一步包含所述的抗炎選擇性COX-2抑制化合物通過(guò)下述方法以適合于全身給藥的劑型提供A.以合適的液體形式注射或輸入，包括動(dòng)脈內(nèi)、真皮內(nèi)或經(jīng)真皮、皮下、肌內(nèi)、脊柱內(nèi)、鞘內(nèi)、或靜脈注射或輸入，其中所述抑制化合物(1)作為溶質(zhì)包含在溶液中；(2)包含在乳劑的不連續(xù)相中，或包含在注射或輸注時(shí)轉(zhuǎn)化的反向乳劑的不連續(xù)相中，所述乳劑含有合適的乳化劑；或(3)作為膠態(tài)或微粒形式的懸浮固體包含在懸浮液中，所述懸浮液含有適當(dāng)?shù)膽腋?；B.作為貯存注射或輸入合適的身體組織或腔中，其中所述組合物提供了所述抑制劑的貯存處，并隨后將所述抑制化合物延遲、緩慢、和/或控制釋放以達(dá)到全身分布；C.以合適的固體形式滴注、吸入或吹入到合適的身體組織或腔中，其中所述抑制化合物(1)包含在一個(gè)固體植入組合物中，該組合物提供了所述抑制化合物的延遲、緩慢、和/或控制釋放；(2)包含在將被吸入到肺里的顆粒組合物中；或(3)包含在將被吹入到所述合適的身體組織或腔中的顆粒組合物中，其中所述組合物可選地提供所述抑制化合物的延遲、緩慢、和/或控制釋放；或者D.以適當(dāng)?shù)墓腆w或液體形式攝食，以將所述抑制化合物經(jīng)口釋放，其中所述抑制化合物(1)包含在固體劑型中；或(2)包含在液體劑型中。
9.按照權(quán)利要求8所述的藥物組合物，其中所述劑型包含獨(dú)立地選自以下這組成員的一種或多種栓劑；選自延遲釋放的口服片劑、膠囊劑、丸劑、錠劑、糖錠、和多顆粒劑的固體經(jīng)口劑型；防止在所述被治療犬的胃中釋放和吸收的腸溶衣片劑和膠囊劑，以便于遠(yuǎn)離所述犬的胃釋放；緩釋口服片劑、膠囊劑和微粒劑，它們可使所述抑制劑以可控制的方式全身釋放至少10小時(shí)；可咀嚼或可攝取的口服片劑；單位劑量裝的小藥囊，由所述單位劑量裝的小藥囊制備的懸浮液，用于口服懸浮液的粉末，或口服懸浮液本身；速溶片劑，封入膠囊的溶液，口服糊劑，給予所述犬或加入到其食物中的顆粒劑型，以及美味的可咀嚼劑型，其中所述抑制劑在所治療的犬的咀嚼過(guò)程中與所述美味的可咀嚼劑型一起被消耗，或者通過(guò)從未被消耗的咀嚼物中浸提而釋放；選自以下成員的液體經(jīng)口劑型溶液、懸浮液、乳劑、反向乳劑、酏劑、提取液、酊劑、和濃縮液，以及上述含有活性成分的微膠囊制劑的固體劑型，它被加入到所述固體劑型中。
10.如權(quán)利要求9所述的藥物組合物，它包含一種當(dāng)以約2mg/lb或更少的劑量給藥時(shí)能在大于10.5小時(shí)的期間內(nèi)保持血漿咔洛芬濃度在約10μg/mL以上的口服咔洛芬控釋劑型。
11.如權(quán)利要求5、6或7所述的藥物組合物，它進(jìn)一步包含所述抗炎選擇性COX-2抑制化合物與獨(dú)立地選自以下成員的一種或多種其他治療活性藥劑復(fù)合A.抗感染藥，包括一種或多種抗生素、抗真菌劑、抗原生動(dòng)物劑、或抗病毒治療劑；B.炎癥的其他介體的抑制劑，包含一種或多種獨(dú)立地選自以下組中的成員(1)NSAID；(2)H1-受體拮抗劑；(3)激肽-B1-和B2-受體拮抗劑；(4)選自PGD-、PGF-、PGl2-、和PGE-受體拮抗劑的前列腺素抑制劑；(5)血栓烷A2(TXA2-)抑制劑；(6)5-和12-脂氧合酶抑制劑；(7)白三烯LTC4-、LTD4/LTE4-、和LTB4-抑制劑；(8)PAF-受體拮抗劑；(9)加有一個(gè)或多個(gè)親水基的金硫基形式的金；(10)選自環(huán)孢霉素、硫唑嘌呤和甲氨蝶呤的免疫抑制劑；(11)抗炎糖皮質(zhì)激素；(12)青霉胺；(13)羥氯奎；(14)包括秋水仙堿的抗痛風(fēng)藥；包括別嘌呤醇的黃嘌呤氧化酶抑制劑；和選自丙磺舒、磺吡酮和苯溴馬隆的促尿酸尿藥；C.用于治療老齡狗的治療劑，它包含一種或多種獨(dú)立地選自以下組中的成員(1)抵抗記憶喪失和障礙的認(rèn)知治療劑；(2)抗高血壓藥和其他用于抵銷動(dòng)脈粥樣硬化、高血壓、心肌局部缺血、咽痛、充血性心力衰竭、和心肌梗塞的結(jié)果的心血管藥物，它們選自以下成員a.利尿劑；b.血管舒張藥；c.β-腎上腺素能受體拮抗劑；d.血管緊張素-II轉(zhuǎn)化酶抑制劑(ACE-抑制劑)，單獨(dú)或可選地與中性內(nèi)肽酶抑制劑一起；e.血管緊張素II受體拮抗劑；f.腎素抑制劑；g.鈣通道阻滯劑；h.交感神經(jīng)阻滯劑；I.α2-腎上腺素能興奮劑；j.α-腎上腺素能受體拮抗劑；和k.HMG-CoA-還原酶抑制劑(抗高膽固醇血藥)；(3)抗腫瘤劑，選自a.抗有絲分裂藥，選自I.長(zhǎng)春花生物堿，選自[1]長(zhǎng)春花堿，和[2]長(zhǎng)春新堿；(4)生長(zhǎng)激素促分泌劑；(5)強(qiáng)鎮(zhèn)痛劑；(6)局部和系統(tǒng)麻醉劑；和(7)H2-受體拮抗劑，質(zhì)子泵抑制劑，以及其他胃保護(hù)劑。
12.一種用于治療或預(yù)防一種家犬的疼痛和炎癥病變和疾病的藥物在工業(yè)上適用的包裝，它包含A.一種合適的容器，該容器的形式可以是一層外包裝，和一個(gè)裝在其中可移動(dòng)的內(nèi)部容器；B.一種合適劑型的、包封在所述容器中的下式表示的抗炎選擇性COX-2抑制化合物
其中R2是
其中A是羥基、(C1-C4)烷氧基、氨基、羥基氨基、一-(C1-C2)烷基氨基、二-(C1-C2)烷基氨基；X和Y之一是H，另一是(C1-C2)烷基；n為1或2；R6是鹵素、(C1-C3)烷基、三氟甲基、或硝基；R9是H；(C1-C2)烷基；苯基或苯基-(C1-C2)烷基，其中苯基可選地被氟或氯一取代；-C(＝O)-R，其中R是(C1-C2)烷基或苯基，可選地被氟或氯一取代；或-C(＝O)-O-R1，其中R1是(C1-C2)烷基；其中(+)(S)對(duì)映體的含量至少為75％；以及具有治療或預(yù)防疼痛和炎癥的治療活性的其所有藥學(xué)上可接受的鹽形式、藥物前體和代謝物；和C.關(guān)于所述容器的指導(dǎo)性和介紹性的資料，它附在所述容器上、包封在所述容器中、或者作為所述容器的固有部分顯示出來(lái)，所述指導(dǎo)性和介紹性資料向作為其本領(lǐng)域中普通技術(shù)人員的讀者簡(jiǎn)要地傳達(dá)了以下內(nèi)容所述包括式(I)化合物的治療劑包含在所述包裝中，當(dāng)將其給予所述要進(jìn)行治療的一種家犬種成員使用時(shí)，可有效地抑制所述狗身上的已存在或預(yù)期將出現(xiàn)的疼痛和炎癥部位所誘導(dǎo)的環(huán)加氧酶-2(COX-2)，從而治療或預(yù)防否則可能會(huì)導(dǎo)致的所述疼痛和炎癥，同時(shí)降低或消除通過(guò)選擇性抑制相對(duì)于COX-1活性的COX-2活性而引起的與組成環(huán)加氧酶-1(COX-1)的活性發(fā)生同步抑制有關(guān)的不希望有的副作用，其中COX-2∶COX-1活性抑制的選擇性比值至少為3∶1，這是基于以產(chǎn)生≥80％COX-2抑制的劑量在全血中測(cè)量的來(lái)自體外的抑制水平。
13.按照權(quán)利要求12所述的包裝，其中式(I)表示的所述抗炎選擇性COX-2抑制化合物包含咔洛芬，6-氯-α-甲基-9H-咔唑-2-乙酸。
14.按照權(quán)利要求12所述的包裝，其中所述抗炎選擇性COX-2抑制化合物包含的完全是咔洛芬，6-氯-α-甲基-9H-咔唑-2-乙酸的(S)-對(duì)映體。
全文摘要
治療或預(yù)防狗的與誘導(dǎo)環(huán)加氧酶－2(COX－2)的活性有關(guān)的炎性病變和疾病,同時(shí)降低或消除通過(guò)選擇性抑制相對(duì)于COX－1活性的COX－2活性而引起組成環(huán)加氧酶－1(COX－1)的活性發(fā)生同步抑制有關(guān)的不希望有的副作用,其中COX－2:COX－1活性抑制的選擇性比值至少為3:1,這是基于在全血中測(cè)量的來(lái)自體外的抑制水平;該抑制劑是選自以下基本上由水楊酸衍生物,對(duì)氨基苯酚衍生物,吲哚和茚乙酸,雜芳基乙酸,芳基丙酸,鄰氨基苯甲酸,烯醇酸,和鏈烷酮組成的抗炎化合物組中的一種;該抑制劑特別是含有6－氯－α－甲基－9H－咔唑－2－乙酸的(+)(S)一對(duì)映體。
文檔編號(hào)A61P43/00GK1255059SQ98804845
公開日2000年5月31日 申請(qǐng)日期1998年5月1日 優(yōu)先權(quán)日1997年5月5日
發(fā)明者克里斯汀·M·倫迪, 安東尼·P·里基茨 申請(qǐng)人:美國(guó)輝瑞有限公司