專利名稱：化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及為氨基螺環(huán)哌啶喹唑啉衍生物的新化合物。本發(fā)明還涉及其相關(guān)方面包括這些化合物的制備方法、含有這些化合物的組合物以及將它們作為藥品的用途。本發(fā)明也提供對制備這些化合物有用的化學(xué)中間體。
本發(fā)明背景一氧化氮在哺乳動物細胞內(nèi)由L-精氨酸在特異性的一氧化氮合成酶(NOSs)的作用下生成。這些酶分為兩種不同的類型--組成NOS(cNOS)和誘導(dǎo)NOS(iNOS)。目前，已鑒定出兩種組成NOSs和一種誘導(dǎo)NOS。組成NOS中，內(nèi)皮酶(ecNOS)與平滑肌松弛及調(diào)節(jié)血壓和血流有關(guān)，而神經(jīng)酶(ncNOS)作為神經(jīng)遞質(zhì)并顯示與調(diào)節(jié)多種生物學(xué)功能如腦缺血有關(guān)。誘導(dǎo)NOS特別與炎性疾病發(fā)病機理有關(guān)。因此調(diào)節(jié)這些酶為治療多種疾病狀況提供了極大的潛力(J.E.Macdonald，ann.Rep.Med.Chem.，1996，31，221-230)。
WO97/14686公開的化合物中，有如下結(jié)構(gòu)的用作藥品的氨基螺環(huán)哌啶喹唑啉衍生物
其中R3代表各種取代基。治療和預(yù)防炎癥疾病作為特別藥學(xué)用途而被公開。
本發(fā)明的公開根據(jù)本發(fā)明，提供式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、對映體、外消旋體或互變異構(gòu)體
其中R1和R2獨立地代表氫、C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、鹵素、羥基、三氟甲基或氨基；R3代表一個或一個以上的取代基，所述取代基獨立地選自氫、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、鹵素、羥基、三氟甲基、氨基、氰基、硝基、三氟甲氧基、甲磺?；?、氨磺酰基、-NR4R5、-COOR6、-CONR7R8、芐氧基、苯基、含有1-3個相同或不同的選自O(shè)、N或S雜原子的五元雜環(huán)芳環(huán)，其苯基和五元雜環(huán)芳環(huán)被任選取代，其任選取代基是C1-6烷基、鹵素、氰基、硝基、羥基、C1-6烷氧基、三氟甲基或三氟甲氧基；R4、R5和R6獨立地代表氫或C1-6烷基；R7和R8獨立地代表氫、C1-6烷基或苯基，其苯基任選被一個或一個以上的獨立選自C1-6烷基、鹵素、氰基、硝基、羥基、C1-6烷氧基、三氟甲基或三氟甲氧基的基團取代；X代表-(CH2)n-，其中n代表0或1；且A代表芳族碳環(huán)或含有1-3個相同或不同的選自O(shè)、N和S雜原子的5或6元雜環(huán)芳環(huán)。
式(I)化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽、對映體、外消旋體或互變異構(gòu)體的優(yōu)點在于它們是巨嗜細胞中存在的一氧化氮合成酶的可誘導(dǎo)的同工酶(iNOS)是強效抑制劑。
本發(fā)明進一步提供這些化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、對映體、外消旋體或互變異構(gòu)體的制備方法。
根據(jù)本發(fā)明本文還提供式(I)化合物、或其藥學(xué)上可接受的鹽、對映體、外消旋體或互變異構(gòu)體作為藥物。
本發(fā)明的另一個方面是提供式(I)化合物、或其藥學(xué)上可接受的鹽、對映體、外消旋體或互變異構(gòu)體在用于治療或預(yù)防其中抑制一氧化氮合成酶活性是有益的疾病或病癥的藥物制備中的用途。
本發(fā)明的另一個更特殊的方面是提供式(I)化合物、或其藥學(xué)上可接受的鹽、對映體、外消旋體或互變異構(gòu)體在用于，以治療或預(yù)防炎性疾病的藥物制備中的用途。
根據(jù)本發(fā)明，還提供治療或減少其中抑制一氧化氮合成酶有益的疾病或病癥發(fā)病危險的方法，該方法包括給予患有或可能有患所述疾病或病癥危險的人有效治療量的式(I)化合物、或其藥學(xué)上可接受的鹽、對映體、外消旋體或互變異構(gòu)體。
更具體地，本發(fā)明還為患有或可能有患炎癥疾病危險的人提供治療或減少患炎性疾病危險的方法，其中的方法包括給予患者有效治療量的式(I)化合物、或其藥學(xué)上可接受的鹽、對映體、外消旋體或互變異構(gòu)體。
本發(fā)明化合物還可有利地與第二種藥學(xué)活性物質(zhì)，尤其是可誘導(dǎo)的環(huán)氧酶(COX-2)同工酶的選擇性抑制劑聯(lián)合用藥。由此，本發(fā)明的再一個方面是提供將式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、對映體、外消旋體或互變異構(gòu)體與COX-2抑制劑聯(lián)合用藥以治療炎癥、炎性疾病以及與炎癥相關(guān)的疾病的用途。并且，對于患有或可能有患炎癥、炎性疾病和與炎癥相關(guān)疾病危險的人，本發(fā)明還提供治療或減少所述疾病發(fā)病危險的方法，其中的方法包括以有效治療量的式(I)化合物、或其藥學(xué)上可接受的鹽、對映體、外消旋體或互變異構(gòu)體與COX-2抑制劑對患者聯(lián)合用藥。
在式(I)中的A優(yōu)選代表苯并環(huán)。
在式(I)中的R1優(yōu)選代表氫。此外，在式(I)中R1優(yōu)選代表氟代。
在式(I)中的R2優(yōu)選代表氟代。
在其他優(yōu)選實施方案中，式(I)中n值為0。
本發(fā)明的具體化合物包括(R*R*)-4′-氨基-5′-氟-1，3，4，10a-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)喹唑啉]-6-酮；(R*S*)-4′-氨基-5′-氟-1，3，4，10a-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)喹唑啉]-6-酮；(R*R*)-4-氨基-5-氟-3b′，4′，6′，7′-四氫螺環(huán)[喹唑啉-2，5′(2H，9′H)-噻吩并[3，2-a]中氮茚]-9′-酮；(R*S*)-4-氨基-5-氟-3b′，4′，6′，7′-四氫螺環(huán)[喹唑啉-2，5′(2H，9′H)-噻吩并[3，2-a]中氮茚]-9′-酮；(R*R*)-4-氨基-5-氟-6′，7′，9′，9a′-四氫螺環(huán)[喹唑啉-2，8′(2H，4′H)-噻吩并[2，3-a]中氮茚]-4′-酮；(R*S*)-4-氨基-5-氟-6′，7′，9′，9a′-四氫螺環(huán)[喹唑啉-2，8′(2H，4′H)-噻吩并[2，3-a]中氮茚]-4′-酮；(R*R*)-4′-氨基-7-氯-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮；(R*S*)-4′-氨基-7-氯-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮；(R*R*)-4′-氨基-8-氯-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮；(R*S*)-4′-氨基-8-氯-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮；(R*R*)-4′-氨基-9-氯-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮；(R*S*)-4′-氨基-9-氯-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮；(R*R*)-4′-氨基-10-氯-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮；(R*S*)-4′-氨基-10-氯-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮；(R*R*)-4′-氨基-7，8-二氯-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮；(R*S*)-4′-氨基-7，8-二氯-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮；(R*R*)-4′-氨基-7-甲基-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮；(R*S*)-4′-氨基-7-甲基-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮；(R*R*)-4′-氨基-8-甲基-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮；(R*S*)-4′-氨基-8-甲基-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮；(R*R*)-4′-氨基-8-甲氧基-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮；(R*S*)-4′-氨基-8-甲氧基-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮；(R*R*)-4′-氨基-8-氰基-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮；(R*S*)-4′-氨基-8-氰基-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮；(R*R*)-4′-氨基-8-氰基-5′，8′-二氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮；(R*S*)-4′-氨基-8-氰基-5′，8′-二氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮；(R*R*)-4′-氨基-5′-氟-7，8，10，10a-四氫螺環(huán)[吡啶并[3，4-a]中氮茚-9，2′(1′H)-喹唑啉]-5-酮；(R*S*)-4′-氨基-5′-氟-7，8，10，10a-四氫螺環(huán)[吡啶并[3，4-a]中氮茚-9，2′(1′H)-喹唑啉]-5-酮；(R*R*)-4′-氨基-5′-氟-6b，7，9，10-四氫螺環(huán)[萘并[2，1-a]中氮茚-8，2′(1′H)-喹唑啉]-12-酮；(R*S*)-4′-氨基-5′-氟-6b，7，9，10-四氫螺環(huán)[萘并[2，1-a]中氮茚-8，2′(1′H)-喹唑啉]-12-酮；及其藥學(xué)上可接受的鹽、對映體、外消旋體或互變異構(gòu)體。
除另有說明外，本文涉及的術(shù)語“C1-6烷基”是指含有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基或含有3-6個碳原子的環(huán)烷基。這些基團的實例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、環(huán)丙基和環(huán)己基。
除另有說明外，本文涉及的術(shù)語“C2-6鏈烯基”是指含有2-6個碳原子并含有一個雙鍵的直鏈或支鏈烴基或含有3-6個碳原子并含有一個雙鍵的環(huán)烴基。這些基團的實例包括乙烯基、1-和2-丙烯基、2-甲基-2-丙烯基、2-丁烯基、環(huán)戊烯基和環(huán)己烯基。
除另有說明外，本文涉及的術(shù)語“C2-6炔基”是指含有2-6個碳原子并含有一個叁鍵的直鏈或支鏈烴基。這些基團的實例包括乙炔基、1-和2-丙炔基和2-丁炔基。
除另有說明外，本文涉及的術(shù)語“C1-6烷氧基”是指含有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基。這些基團的實例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基。
其它基團，例如，烷硫基，作類似解釋。
前述的制備本發(fā)明化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽、對映體、外消旋體或互變異構(gòu)體的方法，包括使式(II)化合物
其中R1和R2的定義同上，與式(III)化合物或其保護的衍生物反應(yīng)，
其中R3、A和X的定義同上。
該反應(yīng)可以在極性溶劑，例如，甲醇、乙醇、乙腈、二甲基甲酰胺或二甲基亞砜中，在適當溫度下，通常在20℃至溶劑沸點之間進行，或沒有溶劑而在20℃-200℃之間的溫度下進行。我們發(fā)現(xiàn)有時采用保護形式的式(III)化合物較方便，例如縮醛如二乙氧基縮醛。該過程因此優(yōu)選在酸催化劑存在下進行。所需的縮醛可以采用本領(lǐng)域熟知的方法使未保護的式(III)化合物與醇如乙醇反應(yīng)而形成。
本發(fā)明包括鹽形式的式(I)化合物，尤其是酸加成鹽。合適的鹽包括與有機酸及無機酸形成的那些鹽。盡管在所討論的化合物的制備和純化中可能使用非藥學(xué)上可接受的酸，這些酸加成鹽通常是藥學(xué)上可接受的。由此，優(yōu)選的鹽包括那些與鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、檸檬酸、酒石酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、琥珀酸、富馬酸、馬來酸、甲磺酸或苯磺酸形成的鹽。
式(I)化合物的鹽可以使游離堿、或其鹽、對映體、外消旋體或互變異構(gòu)體與一個或一個以上當量的適當?shù)乃岱磻?yīng)形成。該反應(yīng)可以在該鹽不溶的溶劑或介質(zhì)或在該鹽可溶的溶劑中進行，例如，水、二噁烷、乙醇、四氫呋喃或乙醚、或它們的混合物，可用真空或冷凍干燥將其除去。該反應(yīng)也可能為復(fù)分解過程或者在離子交換樹脂上進行。
新的式(II)和式(III)中間體構(gòu)成了本發(fā)明的另一個方面。
式(II)化合物可采用諸如WO97/14686描述的方法制備。
式(III)化合物或者自身己知的或者采用本領(lǐng)域熟知的方法制備，例如，式(III)化合物可以通過式(IV)化合物環(huán)化獲得，
其中R3、A和X的定義如上而M是堿金屬或堿土金屬。這些金屬M的例子包括鋰、鈉、鉀或鎂。
式(IV)化合物可以采用本領(lǐng)域熟知的方法用金屬M或其有機金屬衍生物或鹽處理式(IV′)化合物而原位形成，
其中Hal代表鹵原子，尤其是溴或碘。該反應(yīng)最好在非質(zhì)子傳遞溶劑如乙醚、四氫呋喃或二甘醇二甲醚中于-100℃和30℃之間溫度下進行。
式(IV′)化合物可以通過式(V)化合物
與式(VI)化合物的酸衍生物反應(yīng)制備
其中R3、A、X和Hal的定義同前，而L是離去基團。該反應(yīng)可在有機溶劑如乙醇、二氯甲烷或二甲基甲酰胺中，在0℃至溶劑沸點之間的溫度下進行。該反應(yīng)可加堿催化；可用的堿包括有機胺(如，三乙胺或吡啶)和堿金屬的氫氧化物、醇鹽或氫化物。合適的離去基團包括鹵素(尤其是氯)和咪唑。這些酸的衍生物可以采用本領(lǐng)域熟知的方法由相應(yīng)的酸(式(VI)化合物其中L是OH)制備。
可以采用保護形式的中間體化合物。保護基以及將其除去的詳細過程可以通過查閱標準參考書Greene和Wuts編寫的“ProtectingGroups in Organic Synthesis(有機合成中的保護基)”第二版(1991)而發(fā)現(xiàn)。
本發(fā)明化合物及中間體可以從反應(yīng)混合物中分離出來并且，如果需要的話，采用標準技術(shù)進一步純化。
式(I)化合物可以以對映體形式存在。因此，所有對映體、非對映體、外消旋體及其混合物均包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。采用常規(guī)技術(shù)，如，分步結(jié)晶或HPLC分離化合物的外消旋體混合物可以將多種旋光異構(gòu)體分離出來。
中間體化合物也可能以對映體形式存在并且可以使用純化的對映體、非對映體、外消旋體或混合物。
式(I)化合物可以互變異構(gòu)體形式存在。式(I)化合物以其中一種互變異構(gòu)體或其混合物形式提供。
式(I)化合物、和其藥學(xué)上可接受的鹽、對映體、外消旋體和互變異構(gòu)體是有用的，因為它們在動物體內(nèi)具有藥理學(xué)活性。特別是，這些化合物作為一氧化氮合成酶抑制劑是有活性的。更特別的是，它們是存在于巨嗜細胞的可誘導(dǎo)的一氧化氮合成酶的同工酶的抑制劑，而這預(yù)期在治療中，例如，作為抗炎藥是有用的。
這些化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽、對映體、外消旋體和互變異構(gòu)體的適應(yīng)癥是用于治療或預(yù)防部分原因是由于一氧化氮合成酶合成或過量合成所致的疾病或病癥。特別是，這些化合物的適應(yīng)癥是用于治療包括人在內(nèi)的哺乳動物的炎性疾病。
應(yīng)特別指出的疾病有骨關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性脊椎炎、痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎和其它關(guān)節(jié)疾病、關(guān)節(jié)發(fā)炎；濕疹、牛皮癬、皮炎或其它皮膚炎癥性疾病如曬斑；炎癥性眼病包括葡萄膜炎和結(jié)膜炎；與炎癥有關(guān)的肺病，例如，哮喘、支氣管炎、pigeon、農(nóng)民肺、急性呼吸窘迫綜合征；菌血癥、內(nèi)毒素血癥(膿毒性休克)、口瘡性潰瘍、牙齦炎、發(fā)熱、疼痛和胰腺炎；胃腸道病癥包括克羅恩氏病、萎縮性胃炎、胃炎varialoforme、潰瘍性結(jié)腸炎、腹腔疾病、局部性回腸炎、消化性潰瘍、刺激性腸道綜合征、由于感染如幽門螺桿菌(helicobacter pylori)感染或非甾體類抗炎藥治療引起的胃腸道損傷；以及其它與炎癥相關(guān)的病癥。
這些化合物對于治療和減輕急性或慢性炎癥性或神經(jīng)性疼痛或中樞源疼痛也是有用的。
除上文提及到的之外，式(I)化合物和其藥學(xué)上可接受的鹽、對映體、外消旋體和互變異構(gòu)體還可用于治療或預(yù)防其他疾病或病癥。例如，這些化合物可用于治療動脈粥樣硬化、囊性纖維變性、膿毒性/或中毒性休克有關(guān)的低血壓，治療免疫系統(tǒng)失調(diào)，在器官移植治療中作為短期免疫抑制輔助藥，治療與糖尿病有關(guān)的血管并發(fā)癥，與細胞因子如TNF或白介素聯(lián)合用藥。
式(I)化合物還可表現(xiàn)出對一氧化氮合成酶的神經(jīng)同工酶的抑制活性。因此也可有利于治療缺氧，如在下列情況下，心搏停止和休克，神經(jīng)變性病包括一些疾病中的神經(jīng)變性和/或神經(jīng)壞死如缺氧，低血糖，癲癇，和外部損傷(例如脊髓和頭部受傷)，高壓氧驚厥和中毒，癡呆如早老性癡呆，阿爾海默氏病和與愛滋病相關(guān)的癡呆，西登哈姆氏舞蹈病，帕金森氏病，拉塔氏綜合征，亨廷頓氏病，肌萎縮性側(cè)索硬化，科爾薩可夫氏病，與大腦脈管病相關(guān)的癡愚，睡眠障礙，精神分裂癥，抑郁，孤獨癖，季節(jié)性情感障礙，jet-lag，與經(jīng)前期綜合征(PMS)相關(guān)的抑郁或其它綜合征，焦慮和膿毒性休克。預(yù)期式(I)化合物還可顯示出在預(yù)防和逆轉(zhuǎn)對阿片制劑和安定類的耐受性，治療藥物成癮性，治療偏頭痛和其它血管性頭痛、神經(jīng)源性炎癥，治療胃腸道蠕動失調(diào)、癌癥和在引產(chǎn)方面顯示出活性。
對于上述治療上的適應(yīng)癥，自然，用藥劑量隨所用化合物、治療方式和所需的治療而變化。然而，一般地說，當每天以劑量1mg至2000mg之間的固體形式的化合物用藥時可取得滿意的效果。
式(I)化合物，及其藥學(xué)上可接受的衍生物，可以其自身使用，或以適合的藥用組合物形式使用，在組合物中該化合物或其衍生物與藥學(xué)上可接受的佐劑、稀釋劑或載體混合。可以通過，但不限于，腸內(nèi)(包括口服、舌下或直腸內(nèi))、鼻內(nèi)、靜脈內(nèi)、局部或其它胃腸外途徑用藥。選擇和制備合適的藥物制劑的常規(guī)方法參見，例如，“Pharmaceuticals-The Science of Dosage From Designs”，M.E.Aulton，Churchill Livingstone，1998。該藥用組合物優(yōu)選含有低于80％更優(yōu)選低于50％的式(I)化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽、對映體、外消旋體或互變異構(gòu)體。
本文還提供這些藥用組合物的制備方法，其包括混合各組分。
式(I)化合物，及其藥學(xué)上可接受的衍生物，還可優(yōu)先與COX-2抑制劑聯(lián)合用藥。特別優(yōu)選的COX-2抑制劑是Celecoxib和MK-966。NOS抑制劑和COX-2抑制劑可以共同配制成以單位劑量形式用藥的同一藥用組合物，或者對各組分進行分別制劑，這樣可以同時或順次地以各自的劑量用藥。
本發(fā)明以下列實施例說明，但不受其限制制備12，3-二氯-6-碘代苯甲酰氯a) 2，3-二氯-6-碘代苯甲酸0℃下將正-丁基鋰(1.45M的己烷溶液，19.4mmol，13.4ml)滴加到攪拌的二異丙胺(21.4mmol，3.0ml)的四氫呋喃(90ml)溶液中。 30分鐘后，將該溶液冷至-78℃并滴加1，2-二氟-4-碘代苯(5.30g，19.4mmol)的THF(10ml)溶液。10分鐘后，小心加入固體二氧化碳并任此混合物升至室溫并超過16小時。該混合物以水稀釋并以乙酸乙酯提取兩次。水層以稀釋的鹽酸水溶液酸化并以乙醚提取兩次。提取液以硫酸鈉干燥并蒸發(fā)給出黃色固體的標題化合物(3.59g)。300MHz1HNMR(d6-DMSO)11.5(1H，br.s)，7.82(1H，d，j8.4Hz)，7.44(1H，d，J8.4Hz)。b) 2，3-二氯-6-碘代苯甲酰氯將DMF(一滴)加到攪拌的2，3-二氯-6-碘代苯甲酸(1.53g，4.83mmol)和草酰氯(2ml)的乙酰乙酯(20ml)溶液中。2小時后，將溶劑蒸干并直接使用此產(chǎn)物。
制備23-氰基-6-碘代苯甲酰氯a)2-氨基-5-氰基苯甲酸甲酯2-氨基-5-溴苯甲酸甲酯(4.6g，20mmol)和氰化銅(I)(3.6g，40mmol)在N-甲基吡咯烷二酮(20ml)溶液中于200℃下加熱4小時。冷卻至室溫后，該溶液以水稀釋，并以乙酸乙酯提取。水提液以2N鹽酸酸化并過濾。分離有機層，以硫酸鈉干燥并蒸干。殘留物以含50％乙酸乙酯的己烷液作為洗脫劑經(jīng)快速硅膠柱層析純化而得到無色油狀的標題化合物(1.0g)。MS(+EI)m/z 176[M+]。b)2-碘-5-氰基苯甲酸甲酯在0℃下用10分鐘的時間里將亞硝酸鈉(0.8g，11.4mmol)滴加到攪拌的2-氨基-5-氰基苯甲酸甲酯(2.0g，11.4mmol)的水(30ml)溶液和濃硫酸(15ml)中。15分鐘后5℃下，快速加入碘化鉀(3.5g，21mmol)的水(30ml)溶液并任此混合物升至室溫。加入10％的硫代硫酸鈉水溶液，以乙酸乙酯提取混合物，提取物以硫酸鎂干燥并蒸干。殘留物以含20％乙酸乙酯的己烷作為洗脫劑經(jīng)快速硅膠柱層析純化而得到無色油狀的標題化合物(2.8g)。MS(+EI)m/z 287[M+]。c)2-碘-5-氰基苯甲酸將氫氧化鈉(0.44g，11mmol)的水(10ml)溶液加入到2-碘-5-氰基苯甲酸甲酯(2.7g，9.4mmol)的甲醇溶液中。將混合物攪拌20小時，然后最大限度地蒸發(fā)溶劑，殘留物以2N鹽酸酸化。過濾所得沉淀并干燥給出白色固體(1.7g)。MS(-CI)m/z 272[M-H]+。d)2-碘-5-氰基苯甲酰氯以制備1(b)的方法制備該化合物并直接應(yīng)用。
其它酰氯化合物或者本身已知或者由已知酸通過制備1(b)的方法制備。
制備31-(2-溴-6-氯苯甲?；?-2，3-二氫-4-吡啶酮將2-溴-6-氯苯甲酰氯(0.5mmol)的二氯甲烷(5ml)溶液滴加到2，3-二氫-4-吡啶酮(5.1mmol，495mg)和三乙胺(1.2ml)的二氯甲烷(20ml)溶液中。攪拌30分鐘后，該溶液以水稀釋，分離，水提液進一步以二氯甲烷提取，合并有機提取液并以鹽水洗滌，硫酸鈉干燥并蒸發(fā)，殘留物以含30％乙酸乙酯的己烷作為洗脫劑經(jīng)快速硅膠柱層析純化而得到淺黃色油狀的標題化合物(629mg)。MS(+CI)m/z 316[M+H]+。
下列中間體由2，3-二氫-4-吡啶酮和適當酰氯化合物類似地制備(i)1-(2-溴-5-甲基苯甲?；?-2，3-二氫-4-吡啶酮無色油狀，MS(+EI)m/z 293/295[M+]。
(ii)1-(3-溴-4-吡啶?；?-2，3-二氫-4-吡啶酮白色固體，MS(+EI)m/z 280/282[M+]。
(iii)1-(2，3-二氯-6-碘代苯甲酰基)-2，3-二氫-4-吡啶酮白色固體，MS(+EI)m/z 395/397[M+]。
(iv)1-(5-氰基-2-碘代苯甲?；?-2，3-二氫-4-吡啶酮無色油狀，不經(jīng)過純化而使用。
(v)1-(2-甲基-6-碘代苯甲?；?-2，3-二氫-4-吡啶酮MS(+EI)m/z 341[M+]。
(vi)1-(2-溴-3-氯代苯甲酰基)-2，3-二氫-4-吡啶酮MS(+EI)m/z313/315[M+]。
(vii)1-(2-溴-4-氯代苯甲酰基)-2，3-二氫-4-吡啶酮MS(+EI)m/z314[M+]。
(viii)1-(2-溴-5-氯代苯甲?；?-2，3-二氫-4-吡啶酮MS(+EI)m/z314[M+]。
(ix)1-(2-溴-3-噻吩酰基)-2，3-二氫-4-吡啶酮MS(-CI)m/z284/286[M-H]+。
(x)1-(2-溴-5-甲氧基苯甲酰基)-2，3-二氫-4-吡啶酮MS(+EI)m/z 309/311[M+]。
(xi)1-(2-碘-1-萘?；?-2，3-二氫-4-吡啶酮MS(-CI)m/z 376[M-H]+。
(xii)1-(2-碘-3-噻吩?；?-2，3-二氫-4-吡啶酮無色油狀300MHz1H NMR(d6-DMSO)7.55(1H，d，J5.4Hz)，7.47-7.43(1H，m)，7.00(1H，d，J5.4Hz)，5.40(1H，d，J8.1Hz)，4.18(2H，t，J7.2Hz)，2.68(2H，t，J7.2Hz)。
制備4(±)-7-氯-1，3，4，10b-四氫吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，6-二酮將1-(2-溴-6-氯苯甲酰基)-2，3-二氫-4-吡啶酮(制備3)(300mg，0.954mmol)，三乙胺(0.39mmol，0.54ml)，甲酸(0.05ml，1.3mmol)和雙(三苯基膦)二乙酸基鈀(47mg，0.063mmol)的DMF(3ml)混合液在80℃下加熱2小時。溶液冷卻后以硅藻土過濾，用水稀釋，用乙酸乙酯提取兩次，提取液以硫酸鈉干燥并蒸發(fā)。殘留物以50％乙酸乙酯的己烷為洗脫液通過快速硅膠柱層析純化得到無色油狀的標題化合物(70mg)。MS(+CI)m/z 235/23 7[M+H]+。
制備5-7中的化合物采用制備4的方法合成制備5(±)-7，8-二氯-1，3，4，10b-四氫吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，6-二酮從1-(2，3-二氯-6-碘苯甲?；?-2，3-二氫-4-吡啶酮起始。白色固體。MS(+EI)m/z 269/271[M+]。
制備6(±)-8-氯-1，3，4，10b-四氫吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，6-二酮從1-(2-溴-5-氯苯甲?；?-2，3-二氫-4-吡啶酮起始。無色油狀物。MS(+EI)m/z 235/237[M+]。
制備7(±)-3b，4，6，7-四氫噻吩并[3，2-a]中氮茚-5，9-二酮從1-(3-溴-2-噻吩)-2，3-二氫-4-吡啶酮起始。無色油狀。MS(+CI)m/z 208[M+H]+。
制備8(±)-8-甲基-1，3，4，10b-四氫吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，6-二酮將1-(2-溴-5-甲基苯甲?；?-2，3-二氫-4-吡啶酮(1.19g，4.03mmol)，三-正-丁基氫化錫(1.14ml，4.24mmol)和偶氮雙(異丁腈)(AIBN，66mg，10mol％)的甲苯(40ml)混合液在95℃下加熱2小時，冷卻，蒸發(fā)并以30％乙酸乙酯的己烷為洗脫液通過快速硅膠柱層析純化得到淺黃色油狀的標題化合物(276mg)。MS(+EI)m/z 215[M+]。
制備9-12中的化合物采用制備8的方法合成制備9(±)-8-氰基-1，3，4，10b-四氫吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，6-二酮從1-(5-氰基-2-碘苯甲酰基)-2，3-二氫-4-吡啶酮起始。MS(-CI)m/z226[M+]。
制備10(±)-7，8，10，10a-四氫吡啶并[3，4-a]中氮茚-5，9-二酮從1-(3-溴-4-吡啶酰基)-2，3-二氫-4-吡啶酮起始。MS(+EI)m/z 202[M+]。
制備11(±)-7-甲基-1，3，4，10b-四氫吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，6-二酮從1-(2-甲基-6-碘苯甲?；?-2，3-二氫-4-吡啶酮起始。MS(+EI)m/z215[M+]。
制備12(±)-6b，7，9，10-四氫萘并[2，1-a]中氮茚-8，12-二酮從1-(2-碘-1-萘?；?-2，3-二氫-4-吡啶酮起始。MS(+CI)m/z 252[M+H]+。
制備13(±)-8-甲氧基-1，3，4，10b-四氫吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，6-二酮在-78℃下將丁基鋰(3.1ml，0.9M的己烷液，2.8mmol)滴加到1-(2-溴-5-甲氧基苯甲?；?-2，3-二氫-4-吡啶酮(0.75g，2.4mmol)的THF(20ml)溶液中。攪拌2小時后，以水淬滅反應(yīng)，乙酸乙酯提取，提取液以硫酸鎂干燥并蒸發(fā)。殘留物以50％乙酸乙酯的己烷為洗脫液通過快速硅膠柱層析純化得到無色油狀的標題化合物(240mg)。MS(+EI)m/z 231[M+]。
制備14-16中的化合物采用制備13的方法合成制備1410-氯-1，3，4，10b-四氫吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，6-二酮從1-(2-溴-3-氯苯甲?；?-2，3-二氫-4-吡啶酮起始無色油狀物。MS(+EI)m/z 235/237[M+]。
制備159-氯-1，3，4，10b-四氫吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，6-二酮從1-(2-溴-4-氯苯甲?；?-2，3-二氫-4-吡啶酮起始無色油狀物。MS(+EI)m/z 235/237[M+]。
制備166，7，9，9a-四氫噻吩并[2，3-a]中氮茚-4，8-二酮從1-(2-溴-3-噻吩?；?-2，3-二氫-4-吡啶酮起始。MS(+CI)m/z 208[M+H]+。
實施例1(±)-(R*R*)-4′-氨基-5′-氟-1，3，4，10a-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)喹唑啉]-6-酮
將2-氨基-6-氟苯甲脒(0.13g，0.61mmol)和1，3，4，10a-四氫[吡啶并[2，1-a]]異吲哚-2，6-二酮(0.12g，0.59mmol)(J.C.S.Perkin Trans.1，1984，2477；Tetrahedron，1993，2239)的乙醇(15ml)溶液攪拌回流18小時。使混合物冷卻并過濾得到黃色固體(0.1g)，以快速中性氧化鋁柱層析純化，以二氯甲烷/甲醇(99∶1-95∶5)為洗脫液進行洗脫，得到黃色固體的標題化合物的一種非對映異構(gòu)體(含有RR和SS對映體)(0.05g)。M.p.207-209℃。
實施例2(±)-(R*S*)-4′-氨基-5′-氟-1，3，4，10a-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)喹唑啉]-6-酮
將沉淀的實施例1產(chǎn)物過濾后濃縮得到棕色油(0.19g)。以快速中性氧化鋁柱層析純化，以二氯甲烷/甲醇(99∶1-95∶5)為洗脫液進行洗脫，得到第二種黃色固體的標題化合物的非對映異構(gòu)體(含有RS和SR對映體)(0.03g)。M.p.184-186℃。
實施例3(±)-(R*R*)-4-氨基-5-氟-3b′，4′，6′，7′-四氫螺環(huán)[喹唑啉-2，5′(2H，9′H)-噻吩并[3，2-a]中氮茚]-9′-酮
將2-氨基-6-氟苯甲脒二鹽酸鹽(100mg，44mmol)和3b，4，6，7-四氫噻吩并[3，2-a]中氮茚-5，9-二酮(制備7，80mg，39mmol)的乙醇(10ml)溶液加熱回流5小時。蒸發(fā)溶劑，殘留物采用二氯甲烷-甲醇混合液為洗脫液通過快速硅膠柱層析分離。第一洗脫部分提供標題化合物(63mg，43％)的淺黃色固體，m.p.193-195℃。MS(+CI)m/z 343[M+H]+。
實施例4(±)-(R*S*)-4-氨基-5-氟-3b′，4′，6′，7′-四氫螺環(huán)[喹唑啉-2，5′(2H，9′H)-噻吩并[3，2-a]中氮茚]-9′-酮
從實施例3中所述層析的第二洗脫部分得到標題化合物(33mg，22％)，m.p.218-220℃。MS(+CI)m/z 343[M+H]+。
實施例5-30的化合物采用所述中間體以實施例3和4的方法制備。
實施例5-6的化合物得自2-氨基-6-氟苯甲脒二鹽酸鹽和6，7，9，9a-四氫噻吩并[2，3-a]中氮茚-4，8-二酮(制備16)。
實施例5(±)-(R*R*)-4-氨基-5-氟-6′，7′，9′，9a′-四氫螺環(huán)[喹唑啉-2，8′(2H，4′H)-噻吩并[2，3-a]中氮茚]-4′-酮
獲得其鹽酸鹽，m.p.＞275℃。MS(+CI)m/z 343[M+H]+。
實施例6(±)-(R*S*)-4-氨基-5-氟-6′，7′，9′，9a′-四氫螺環(huán)[喹唑啉-2，8′(2H，4′H)-噻吩并[2，3-a]中氮茚]-4′-酮
獲得其鹽酸鹽，m.p.225-230℃。MS(+CI)m/z 343[M+H]+。
實施例7和8的化合物得自2-氨基-6-氟苯甲脒二鹽酸鹽和7-氯-1，3，4，10b-四氫吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，6-二酮(制備4)。
實施例7(±)-(R*R*)-4′-氨基-7-氯-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮鹽酸鹽
MS(+CI)m/z 371/373[M+H]+；300MHz1H NMR(d6-DMSO)7.62(1H，d，J7.5Hz)，7.54(1H，t，J7.5Hz)，7.45(1H，d，J7.2Hz)，7.13(1H，dt，J6.6，6.6，8.1Hz)，6.59(1H，s)，6.40(1H，d，J7.2Hz)，6.37-6.33(1H，m)，5.85-5.8(2H，br，s)，4.79(1H，dd，J3.3，11.4Hz)，4.12(1H，dd，J3.9，13.8Hz)，3.40-3.35(1H，m)，2.60-2.55(1H，m)，1.91(1H，d，J12Hz)，1.37(1H，dt，J5.7，12.9，12.9Hz)，1.04(1H，t，J11.7Hz)。
實施例8(±)-(R*S*)-4′-氨基-7-氯-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮鹽酸鹽
MS(+CI)m/z 371/373[M+H]+；300MHz1H NMR(d6-DMSO)7.61-7.46(4H，m)，7.27-7.20(2H，m)，6.74(1H，d，J8.1Hz)，6.44(1H，dd，J8.4，12.3Hz)，4.75(1H，dd，J3.6，3.9Hz)，3.32-3.19(1H，m)，2.0-1.95(1H，m)，1.5-1.4(1H，m)，1.3-1.1(1H，m)。
實施例9和10的化合物得自2-氨基-6-氟苯甲脒二鹽酸鹽和8-氯-1，3，4，10b-四氫吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，6-二酮(制備6)。
實施例9(±)-(R*R*)-4′-氨基-8-氯-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮
獲得其鹽酸鹽，m.p.308℃。(分解)。
實施例10(±)-(R*S*)-4′-氨基-8-氯-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮
經(jīng)反向HPLC純化后得其三氟乙酸鹽(無定形)。MS(+CI)m/z 371[M+H]+；MS(-CI)m/z 369[M-H]+。
實施例11和12的化合物得自2-氨基-6-氟苯甲脒二鹽酸鹽和9-氯-1，3，4，10b-四氫吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，6-二酮(制備15)。
實施例11(±)-(R*R*)-4′-氨基-9-氯-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮
獲得其鹽酸鹽，m.p.225℃。(分解)。
實施例12(±)-(R*S*)-4′-氨基-9-氯-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮
獲得其鹽酸鹽，m.p.210℃。(分解)。
實施例13和14的化合物得自2-氨基-6-氟苯甲脒二鹽酸鹽和10-氯-1，3，4，10b-四氫吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，6-二酮(制備14)。
實施例13(±)-(R*R*)-4′-氨基-10-氯-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮
獲得其鹽酸鹽，MS(+CI)m/z 371[M+H]+。
實施例14(±)-(R+S*)-4′-氨基-10-氯-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮
獲得其鹽酸鹽，MS(+CI)m/z 371[M+H]+。
實施例15和16的化合物得自2-氨基-6-氟苯甲脒二鹽酸鹽和7，8-二氯-1，3，4，10b-四氫吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，6-二酮(制備5)。
實施例15(±)-(R*R*)-4′-氨基-7，8-二氯-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮
獲得其鹽酸鹽，m.p.258-260℃。
實施例16(±)-(R*S*)-4′-氨基-7，8-二氯-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮
獲得其鹽酸鹽，m.p.259-261℃。
實施例17和18的化合物得自2-氨基-6-氟苯甲脒二鹽酸鹽和7-甲基-1，3，4，10b-四氫吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，6-二酮(制備11)。
實施例17(±)-(R*R*)-4′-氨基-7-甲基-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮
獲得其鹽酸鹽，m.p.201-204℃。
實施例18(±)-(R*S*)-4′-氨基-7-甲基-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮
獲得其鹽酸鹽，m.p.215-218℃。
實施例19和20的化合物得自2-氨基-6-氟苯甲脒二鹽酸鹽和8-甲基-1，3，4，10b-四氫吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，6-二酮(制備8)。
實施例19(±)-(R*R*)-4′-氨基-8-甲基-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮
獲得其鹽酸鹽，m.p.238-239℃。
實施例20(±)-(R*S*)-4′-氨基-8-甲基-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮
獲得其鹽酸鹽，m.p.222-224℃。
實施例21和22的化合物得自2-氨基-6-氟苯甲脒二鹽酸鹽和8-甲氧基-1，3，4，10b-四氫吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，6-二酮(制備13)。
實施例21(±)-(R*R*)-4′-氨基-8-甲氧基-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮
獲得其鹽酸鹽，MS(+CI)m/z 367[M+H]+。
實施例22(±)-(R*S*)-4′-氨基-8-甲氧基-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮
獲得其鹽酸鹽，MS(+CI)m/z 367[M+H]+。
實施例23和24的化合物得自2-氨基-6-氟苯甲脒二鹽酸鹽和8-氰基-1，3，4，10b-四氫吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，6-二酮(制備9)。
實施例23(±)-(R*R*)-4′-氨基-8-氰基-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮
獲得其鹽酸鹽，m.p.241℃(分解)。
實施例24(±)-(R*S*)-4′-氨基-8-氰基-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1 ′H)-喹唑啉]-6-酮
獲得其鹽酸鹽，m.p.290℃(分解)。
實施例25和26的化合物得自2-氨基-3，6-二氟苯甲脒二鹽酸鹽和8-氰基-1，3，4，10b-四氫吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，6-二酮(制備9)。
實施例25(±)-(R*R*)-4′-氨基-8-氰基-5′，8′-二氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮
獲得其鹽酸鹽，m.p.243℃(分解)。
實施例26(±)-(R*S*)-4′-氨基-8-氰基-5′，8′-二氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮
M.p.180℃(分解)。
實施例27和28的化合物得自2-氨基-6-氟苯甲脒二鹽酸鹽和7，8，10，10a-四氫吡啶并[3，4-a]中氮茚-5，9-二酮(制備10)。
實施例27(±)-(R*R*)-4′-氨基-5′-氟-7，8，10，10a-四氫螺環(huán)[吡啶并[3，4-a]中氮茚-9，2′(1′H)-喹唑啉]-5-酮
獲得其鹽酸鹽。MS(+CI)m/z 338[M+H]+；300MHz1H NMR(d6-DMSO)8.97(1H，s)，8.72(1H，d，J5.1Hz)，7.67(1H，d，J5Hz)，7.20(1H，q，J7Hz)，6.8(1H，br.s)，6.46-6.38(2H，m)，4.97(1H，dd，J3.6，12Hz)，4.18(1H，dd，J4.5，12.6Hz)，3.45(1H，dt，J3.3，12.9Hz)，2.76-2.72(1H，m)，1.97(1H，d，J12Hz)，1.45(1H，dt，J5.4，12.9Hz)，1.10(1H，t，J12.0Hz)。
實施例28(±)-(R*S*)-4′-氨基-5′-氟-7，8，10，10a-四氫螺環(huán)[吡啶并[3，4-a]中氮茚-9，2′(1′H)-喹唑啉]-5-酮
MS(+CI)m/z 338[M+H]+；300MHz1H NMR(d6-DMSO)8.95(1H，s)，8.74(1H，d，J4.8Hz)，7.69(1H，d，J5.1Hz)，7.44-7.25(3H，m)，6.78(1H，d，J7.5Hz)，6.52-6.46(1H，m)，4.94(1H，dd，J3.6，12.3Hz)，4.20(1H，dd，J4.8，13.8Hz)，3.8-3.43(1H，dd，被H2O遮蔽)，2.71(1H，br.d，J9Hz)，1.98(1H，d，J13.2Hz)，1.55(1H，dt，J5.1，12.9Hz)，1.26(1H，t，J12.9Hz)。
實施例29和30的化合物得自2-氨基-6-氟苯甲脒二鹽酸鹽和6b，7，9，10-四氫萘并[2，1-a]中氮茚-8，12-二酮(制備12)。
實施例29(±)-(R*R*)-4′-氨基-5′-氟-6b，7，9，10-四氫螺環(huán)[萘并[2，1-a]中氮茚-8，2′(1′H)-喹唑啉]-12-酮
獲得其鹽酸鹽，m.p.208-210℃。
實施例30(±)-(R*S*)-4′-氨基-5′-氟-6b，7，9，10-四氫螺環(huán)[萘并[2，1-a]中氮茚-8，2′(1′H)-喹唑啉]-12-酮
獲得其鹽酸鹽，m.p.235-237℃。
篩選根據(jù)本發(fā)明的化合物的藥理學(xué)活性以下列實驗篩選篩選1式(I)化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽、對映體或互變異構(gòu)體的一氧化氮合成酶抑制活性可以根據(jù)Frstermann等，Eur.J.Pharm.，1992，225，161-165中的步驟篩選。一氧化氮合成酶將3H-L-精氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)?H-L-瓜氨酸，后者可通過陽離子交換層析分離并以液體閃爍計數(shù)定量。
從誘導(dǎo)后的培養(yǎng)的鼠巨嗜細胞系J 774A-1(得自皇家癌癥研究基金會實驗室)制備酶。J-774A-1細胞在補充10％胎牛血清、4mM L-谷氨酰胺和抗生素(青霉素G 100單位/ml，鏈霉素100mg/ml和兩性霉素B 0.25mg/ml)的Dulbeccos氏改良Eagles培養(yǎng)基(DMEM)中培養(yǎng)。細胞在37℃恒溫的含有35ml培養(yǎng)基的225cm3培養(yǎng)瓶中和含5％CO2的調(diào)節(jié)濕度的空氣下常規(guī)生長。
以細胞對干擾素-g(IFNg)和脂多糖(LPS)的反應(yīng)誘導(dǎo)一氧化氮合成酶產(chǎn)生。從融合培養(yǎng)瓶中去除培養(yǎng)基而以25ml(每瓶)含有1mg/mlLPS和10單位/ml IFNg的新鮮培養(yǎng)基代替。為時17-20小時的培養(yǎng)后，將培養(yǎng)瓶表面的細胞層刮取到培養(yǎng)基中而收獲細胞。離心(1000g離心10分鐘)收集細胞并將含有50mM Tris-HCl(20℃下pH7.5)、10％(v/v)甘油、0.1％(v/v)Triton-X-100、0.1mM二硫蘇糖醇和混合的蛋白酶抑制劑包括亮肽素(2mg/ml)、大豆胰蛋白酶抑制劑(10mg/ml)、抑肽酶(5mg/ml)和苯甲基磺酰氟(50mg/ml)的溶液加入細胞團以制備溶胞產(chǎn)物。
檢測時，將25μl底物混合液(50mM Tris-HCl(20℃下pH7.5)、400μM NADPH、20μM黃素腺嘌呤二核苷酸、20μM黃素單核苷酸、4μM四氫生蝶呤、12μM L-精氨酸和0.025mCi L-[3H]精氨酸)加入到含有25μl檢測化合物的50mM Tris-HCl溶液的96孔濾板(孔徑0.45μM)的孔中。加入50μl細胞溶解物(制備如上)啟動反應(yīng)并在室溫下孵育1小時后加入50μl 3mM硝基精氨酸和21mM EDTA的水溶液終止反應(yīng)。
采用Dowex AG-50W從標記的L-精氨酸中分離標記的L-瓜氨酸。150μl 25％的Dowex 50W(Na+形式)的水漿加入檢測液后全部濾入96孔板。75μl濾液樣品加到含有固體閃爍劑的96孔板中。任樣品干燥后以閃爍計數(shù)定量測定L-瓜氨酸。
在典型的實驗中，每份75μl樣品的本底活性為300dpm，其在試劑對照組中升至1900dpm?；衔锘钚砸訧C50(檢測中對酶產(chǎn)生50％抑制的藥物濃度)表示并檢測氨基胍，其IC50(50％抑制濃度)為10μM，以此為標準校正實驗步驟。檢測一定濃度范圍的化合物并以其抑制作用計算IC50值。在100μM下抑制酶活性至少達25％的化合物被歸入有活性，并且至少重復(fù)檢測一次。
在上述篩選中，檢測實施例1-30中的化合物并得到低于25μM的IC50值，說明其有希望顯示出有用的治療活性。篩選2下列檢測可證實化合物對誘導(dǎo)的人體一氧化氮合成酶也具有抑制作用。
自誘導(dǎo)后的培養(yǎng)的人單克隆腎上腺癌細胞系DLD1(得自European Collection of Animal Cell Culture--細胞系編號90102540)制備酶。DLD1細胞以補充10％胎牛血清、4mM L-谷氨酰胺和抗生素(100單位/ml青霉素G、100μg/ml鏈霉素和0.25μg/ml二性霉素B)的RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)。細胞在37℃恒溫的含有35ml培養(yǎng)基的225cm3培養(yǎng)瓶中并在調(diào)節(jié)濕度的含5％CO2的空氣下常規(guī)生長。
以細胞對干擾素-γ(IFN-γ)和白介素-1β(IL-1β)的反應(yīng)誘導(dǎo)一氧化氮合成酶產(chǎn)生。從融合培養(yǎng)瓶中去除培養(yǎng)基而代之以25ml(每瓶)含有250單位/mlIL-1β和1000單位/mlIFN-γ的新鮮培養(yǎng)基。為時17-20小時的培養(yǎng)后，將培養(yǎng)瓶表面的單細胞層刮取到培養(yǎng)基中而收獲細胞。離心(1000g離心10分鐘)收集細胞，將含有50mM Tris-HCl(20℃下pH7.5)、10％(v/v)甘油、0.1％(v/v)Triton-X 100、0.1mM二硫蘇糖醇和混合的蛋白酶抑制劑包括亮肽素(2μg/ml)、大豆胰蛋白酶抑制劑(10μg/ml)、抑肽酶(5μg/ml)和苯基磺酰氟(50μg/ml)的溶液加入細胞團而制備溶胞產(chǎn)物。
檢測時，將25μl底物混合液(50mM Tris-HCl(pH7.5)、400μMNADPH、20μM黃素腺嘌呤二核苷酸、20μM黃素單核苷酸和4μM四氫生物蝶呤)加入96孔板的孔中。待測化合物與酶預(yù)孵育并加入40μl細胞溶解物(制備如上)在37℃下孵育1小時，1小時后，加入溶于50mM Tris-HCl的10μl的30μM L-精氨酸和0.025μCi L-[3H]精氨酸以啟動酶促反應(yīng)。繼續(xù)在37℃下孵育1小時，加入50μl 3mM硝基精氨酸和21mM EDTA的水溶液終止反應(yīng)。
采用Dowex AG-50W從標記的L-精氨酸中分離標記的L-瓜氨酸。將120μl 25％的Dowex 50W的水漿加入到96孔濾板(孔徑0.45μm)中。向孔中加入120μl最終的檢測混合液。取75μl濾液樣品并加到含有固體閃爍劑的96孔板中。任樣品干燥后以閃爍計數(shù)定量測定L-瓜氨酸。
在典型的實驗中，試劑對照組的每份75μl樣品的本底活性為300dpm，在酶存在時升至3000dpm?；衔锘钚砸訧C50(檢測中對酶產(chǎn)生50％抑制的藥物濃度)表示并檢測L-NMMA，其IC50約為0.4μM，以此為為標準校正實驗步驟。檢測一定濃度范圍的化合物并以其抑制作用計算IC50值。
在這項篩選中，實施例1-30中的化合物的IC50值低于25μM，說明其有希望顯示出有用的治療活性。
權(quán)利要求
1.式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、對映體、外消旋體或互變異構(gòu)體
其中R1和R2獨立地代表氫、C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、鹵素、羥基、三氟甲基或氨基；R3代表一個或一個以上的取代基，它們獨立地選自氫、C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、鹵素、羥基、三氟甲基、氨基、氰基、硝基、三氟甲氧基、甲磺?；?、氨磺?；?、-NR4R5、-COOR6、-CONR7R8、芐氧基、苯基、或含有1-3個可能相同或不同的選自O(shè)、N或S的雜原子的五元雜環(huán)芳環(huán)，其苯基和五元雜環(huán)芳環(huán)被任選取代，而任選取代基是C1-6烷基、鹵素、氰基、硝基、羥基、C1-6烷氧基、三氟甲基或三氟甲氧基；R4、R5和R6獨立地代表氫或C1-6烷基；R7和R8獨立地代表氫、C1-6烷基或苯基，其苯基任選被一個或一個以上的獨立選自C1-6烷基、鹵素、氰基、硝基、羥基、C1-6烷氧基、三氟甲基或三氟甲氧基的基團取代；X代表-(CH2)n-，其中n代表0或1；且A代表芳族碳環(huán)或含有1-3個可能相同或不同的且選自O(shè)、N或S的雜原子的5或6元雜環(huán)芳環(huán)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的式(I)化合物，其中A代表苯并環(huán)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的式(I)化合物，其中R1代表氫。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2的式(I)化合物，其中R1代表氟代。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任何一項的式(I)化合物，其中R2代表氟。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任何一項的式(I)化合物，其中X代表-(CH2)n-且n代表零。
7.式(I)化合物為(R*R*)-4′-氨基-5′-氟-1，3，4，10a-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)喹唑啉]-6-酮；(R*S*)-4′-氨基-5′-氟-1，3，4，10a-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)喹唑啉]-6-酮；(R*R*)-4-氨基-5-氟-3b′，4′，6′，7′-四氫螺環(huán)[喹唑啉-2，5′(2H，9′H)-噻吩并[3，2-a]中氮茚]-9′-酮；(R*S*)-4-氨基-5-氟-3b′，4′，6′，7′-四氫螺環(huán)[喹唑啉-2，5′(2H，9′H)-噻吩并[3，2-a]中氮茚]-9′-酮；(R*R*)-4-氨基-5-氟-6′，7′，9′，9a′-四氫螺環(huán)[喹唑啉-2，8′(2H，4′H)-噻吩并[2，3-a]中氮茚]-4′-酮；(R*S*)-4-氨基-5-氟-6′，7′，9′，9a′-四氫螺環(huán)[喹唑啉-2，8′(2H，4′H)-噻吩并[2，3-a]中氮茚]-4′-酮；(R*R*)-4′-氨基-7-氯-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮；(R*S*)-4′-氨基-7-氯-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮；(R*R*)-4′-氨基-8-氯-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮；(R*S*)-4′-氨基-8-氯-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮；(R*R*)-4′-氨基-9-氯-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮；(R*S*)-4′-氨基-9-氯-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮；(R*R*)-4′-氨基-10-氯-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮；(R*S*)-4′-氨基-10-氯-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮；(R*R*)-4′-氨基-7，8-二氯-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮；(R*S*)-4′-氨基-7，8-二氯-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮；(R*R*)-4′-氨基-7-甲基-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮；(R*S*)-4′-氨基-7-甲基-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮；(R*R*)-4′-氨基-8-甲基-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮；(R*S*)-4′-氨基-8-甲基-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮；(R*R*)-4′-氨基-8-甲氧基-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮；(R*S*)-4′-氨基-8-甲氧基-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮；(R*R*)-4′-氨基-8-氰基-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮；(R*S*)-4′-氨基-8-氰基-5′-氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮；(R*R*)-4′-氨基-8-氰基-5′，8′-二氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮；(R*S*)-4′-氨基-8-氰基-5′，8′-二氟-1，3，4，10b-四氫螺環(huán)[吡啶并[2，1-a]異吲哚-2，2′(1′H)-喹唑啉]-6-酮；(R*R*)-4′-氨基-5′-氟-7，8，10，10a-四氫螺環(huán)[吡啶并[3，4-a]中氮茚-9，2′(1′H)-喹唑啉]-5-酮；(R*S*)-4′-氨基-5′-氟-7，8，10，10a-四氫螺環(huán)[吡啶并[3，4-a]中氮茚-9，2′(1′H)-喹唑啉]-5-酮；(R*R*)-4′-氨基-5′-氟-6b，7，9，10-四氫螺環(huán)[萘并[2，1-a]中氮茚-8，2′(1′H)-喹唑啉]-12-酮；(R*S*)-4′-氨基-5′-氟-6b，7，9，10-四氫螺環(huán)[萘并[2，1-a]中氮茚-8，2′(1′H)-喹唑啉]-12-酮；或其藥學(xué)上可接受的鹽、對映體或互變異構(gòu)體。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任何一項的式(I)化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽、對映體或互變異構(gòu)體，用作藥物。
9.包含根據(jù)權(quán)利要求1-7任何一項的式(I)化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽、對映體或互變異構(gòu)體及藥學(xué)上可接受的輔助、稀釋劑或載體的藥用組合物。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-7任何一項的式(I)化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽、對映體或互變異構(gòu)體在制備用于治療或預(yù)防其中抑制一氧化氮合成酶活性是有益的人體疾病或病癥的藥物中的用途。
11.權(quán)利要求10的用途，其中優(yōu)先抑制可誘導(dǎo)的一氧化氮合成酶。
12.權(quán)利要求1-7任何一項的式(I)化合物、或其藥學(xué)上可接受的鹽、對映體或互變異構(gòu)體在制備用于治療或預(yù)防炎性疾病的藥物中的用途。
13.權(quán)利要求12的用途，其中所述疾病是哮喘或類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
14.根據(jù)權(quán)利要求1-7任何一項的式(I)化合物、或其藥學(xué)上可接受的鹽、對映體或互變異構(gòu)體在制備用于治療或預(yù)防疼痛的藥物中的用途。
15.根據(jù)權(quán)利要求1-7任何一項的式(I)化合物、或其藥學(xué)上可接受的鹽、對映體或互變異構(gòu)體，與COX-2抑制劑一起在制備用于治療或預(yù)防炎性疾病的藥物中的用途。
16.治療和減少其中抑制一氧化氮合成酶活性是有益的人類疾病或病癥危險的方法，該方法包括給予患有或患這樣的疾病或病癥危險增加的人治療有效量的權(quán)利要求1-7任何一項的的式(I)化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽、對映體或互變異構(gòu)體。
17.根據(jù)權(quán)利要求16的治療方法，其中優(yōu)先抑制可誘導(dǎo)的一氧化氮合成酶。
18.在患有或有患炎性疾病危險的人中治療所述疾病或減少其危險的方法，該方法包括給予患者治療有效量的權(quán)利要求1-7任何一項的的式(I)化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽、對映體或互變異構(gòu)體。
19.權(quán)利要求18的治療方法，其中所述疾病是哮喘或類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
20.在疼痛患者、或有患該病危險的人中治療所述疾病或減少其危險的方法，該方法包括給予患者治療有效量的權(quán)利要求1-7任何一項的的式(1)化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽、對映體或互變異構(gòu)體。
21. 在炎癥性疾病患者、或有患該病危險的人中治療所述疾病或減少其危險的方法，該方法包括聯(lián)合給予患者治療有效量的權(quán)利要求1-7任何一項的的式(I)化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽、對映體或互變異構(gòu)體，及COX-2抑制劑。
22.式(III)化合物
其中R3、A及X的定義同權(quán)利要求1，條件是R3不代表氫。
23.權(quán)利要求1-7任一項的式(I)化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽、對映體或互變異構(gòu)體的制備方法，該方法包括使式(II)化合物或其鹽
其中R1和R2的定義同權(quán)利要求1，與式(III)化合物或其保護的衍生物反應(yīng)
其中R3、A和X的定義同權(quán)利要求1。
全文摘要
本發(fā)明提供式(Ⅰ)化合物,其中A代表芳族碳環(huán)或含有1—3個可能相同或不同的選自O(shè)、N或S的雜原子的5或6元雜芳環(huán);X代表－(CH
文檔編號A61P11/06GK1268138SQ98808429
公開日2000年9月27日 申請日期1998年6月22日 優(yōu)先權(quán)日1997年7月1日
發(fā)明者P·哈姆利, A·皮姆, A·蒂克 申請人:英國阿斯特拉藥品有限公司