專利名稱：滅除慢性丙型肝炎感染患者可檢測的hcv－rna的聯(lián)合治療的制作方法
丙型肝炎病毒的慢性感染是隱伏和慢性發(fā)展的疾病，其對生活質(zhì)量具有顯著的影響。它最終導(dǎo)致肝硬化、代償失調(diào)性肝病和/或肝細(xì)胞瘤。
α干擾素單獨(dú)治療常用來治療慢性丙型肝炎感染。但是，此治療并不總有效且有時導(dǎo)致不能耐受的與劑量和治療時間有關(guān)的副作用。已建議利巴韋林(ribavirin)作為對丙型肝炎感染的單獨(dú)治療(Thomas等，AASLD摘要，肝病學(xué)Vol.20，NO.4，Pt2，Number 440，1994)。然而，已發(fā)現(xiàn)此單獨(dú)治療常相對無效并且其自身有不利的副作用。有人建議α干擾素和利巴韋林的聯(lián)合治療(Lai等，亞太聯(lián)合會第九次雙年度科技會議肝研究專題討論會(Symposium to the 9thBiennial Scientific Meeting Asian Pacific Association for theStudy of the Liver.)1994)。初步的結(jié)果提示此聯(lián)合治療可能比各單獨(dú)治療更有效，Hayden FG，Schlepushkin AN。體外實驗聯(lián)合應(yīng)用干擾素-2a、金剛乙胺鹽酸鹽和利巴韋林可抑制流感病毒的復(fù)制，Antimicrob Agents Chemother.1984；2553-57.Schvarcz R，AndoY，Snnerborg A，Weiland O.用干擾素α-2b和利巴韋林治療慢性丙型肝炎患者，這些患者對單獨(dú)的干擾素沒有達(dá)到持續(xù)的反應(yīng)Swedish experience.J Hepatology.1995；232(Suppl 2)17-21.Brouwer JT，Nevens F，Michielsen P等。當(dāng)丙型肝炎對干擾素沒有反應(yīng)時還有什么選擇？安慰劑對照的比盧(Benelux)多中心再治療試驗對利巴韋林單獨(dú)治療同與干擾素聯(lián)合治療進(jìn)行了比較，J.Hepatol.1994；212(Suppl 1)S17.Abstract WP2/08.ChemelloL，Cavalletto L，Bernardinello E等。慢性丙型肝炎患者對利巴韋林、干擾素和二者聯(lián)合應(yīng)用的反應(yīng)及其與HCV基因型的關(guān)系，JHepatol.1994；212(Suppl 1)S12.Abstract GS5/29。但是，沒有人描述以任何長期的、有效的方式用α干擾素和利巴韋林滅除HCV-RNA的方法。
確實需要以任何長期的、有效的方式用α干擾素和利巴韋林聯(lián)合治療慢性丙型肝炎感染以滅除HCV-RNA的方法。
發(fā)明概述按照本發(fā)明的一方面，提供了利巴韋林在制備治療慢性丙型肝炎感染患者以滅除可檢測的HCV-RNA的藥物組合物中的用途，上述治療方法使用與有效量的α干擾素聯(lián)合的有效量的利巴韋林，其中該患者已對前期的α干擾素治療無反應(yīng)。
按照本發(fā)明的另一方面，提供了α干擾素在制備治療慢性丙型肝炎感染患者以滅除可檢測的HCV-RNA的藥物組合物中的用途，上述治療方法使用與有效量的利巴韋林聯(lián)合的有效量的α干擾素，其中該患者已對前期的α干擾素治療無反應(yīng)。
本發(fā)明還提供了利巴韋林和α干擾素在制備治療慢性丙型肝炎感染患者以滅除可檢測的HCV-RNA的藥物組合物中的用途，上述治療方法使用與有效量的α干擾素聯(lián)合的有效量的利巴韋林，其中該患者已對前期的α干擾素治療無反應(yīng)。
這些藥物組合物對治療慢性丙型肝炎感染患者以滅除可檢測的HCV-RNA具有特別的用途，包括在20至30周內(nèi)使用治療有效量的利巴韋林和治療有效量的α干擾素，以致于至少30％的患者在所述20至30周治療期末沒有可檢測的HCV-RNA，在所述給藥后至少24周內(nèi)也無可檢測的HCV-RNA。優(yōu)選至少約40％的患者在所述20至30周治療期末沒有可檢測的HCV-RNA，在所述給藥后至少24周內(nèi)也無可檢測的HCV-RNA。
在另一個實施方案中，它們可用于治療慢性丙型肝炎感染患者以滅除可檢測的HCV-RNA，包括在40至50周內(nèi)使用治療有效量的利巴韋林和治療有效量的α干擾素，以致于至少約40％的患者在所述40至50周治療期末沒有可檢測的HCV-RNA，在所述給藥后至少24周內(nèi)也無可檢測的HCV-RNA。優(yōu)選至少約50％的患者在所述40至50周治療期末沒有可檢測的HCV-RNA，在所述給藥后至少24周內(nèi)也無可檢測的HCV-RNA。
在另一個實施方案中，它們可用于治療慢性丙型肝炎感染患者以滅除可檢測的HCV-RNA，包括在60至80周內(nèi)使用治療有效量的利巴韋林和治療有效量的α干擾素，以致于至少約50％的患者在所述60至80周治療期末沒有可檢測的HCV-RNA，在所述給藥后至少24周內(nèi)也無可檢測的HCV-RNA。優(yōu)選至少約60％的患者在所述60至80周治療期末沒有可檢測的HCV-RNA，在所述給藥后至少24周內(nèi)也無可檢測的HCV-RNA。
在另一個實施方案中，它們可用于治療慢性丙型肝炎感染患者以滅除可檢測的HCV-RNA，該患者具有非1型的HCV基因型并通過HCV-RNA定量PCR檢測其血清中的病毒負(fù)荷量小于或等于2百萬拷貝每毫升，包括在20至30周內(nèi)使用治療有效量的利巴韋林和治療有效量的α干擾素，以致于至少60％并優(yōu)選至少70％的患者在所述20至30周治療期末沒有可檢測的HCV-RNA，在所述給藥后至少24周內(nèi)也無可檢測的HCV-RNA。優(yōu)選至少約80％的患者在所述20至30周治療期末沒有可檢測的HCV-RNA，在所述給藥后至少24周內(nèi)也無可檢測的HCV-RNA。
在另一個實施方案中，它們可用于治療慢性丙型肝炎感染患者以滅除可檢測的HCV-RNA，該患者具有非1型的HCV基因型并通過HCV-RNA/qPCR檢測其血清中的病毒負(fù)荷量大于2百萬拷貝，包括在20至30周內(nèi)使用治療有效量的利巴韋林和治療有效量的α干擾素，以致于至少約50％的患者在所述20至30周治療期末沒有可檢測的HCV-RNA，在所述給藥后至少24周內(nèi)也無可檢測的HCV-RNA。優(yōu)選至少約60％的患者在所述20至30周治療期末沒有可檢測的HCV-RNA，在所述給藥后至少24周內(nèi)也無可檢測的HCV-RNA。
在另一個實施方案中，它們可用于治療慢性丙型肝炎感染患者以滅除可檢測的HCV-RNA，該患者具有1型的HCV基因型并通過HCV-RNA/qPCR檢測其血清中的病毒負(fù)荷量小于或等于2百萬拷貝，包括在20至30周內(nèi)使用治療有效量的利巴韋林和治療有效量的α干擾素，以致于至少約30％的患者在所述20至30周治療期末沒有可檢測的HCV-RNA，在所述給藥后至少24周內(nèi)也無可檢測的HCV-RNA。優(yōu)選至少約40％的患者在所述20至30周治療期未沒有可檢測的HCV-RNA，在所述給藥后至少24周內(nèi)也無可檢測的HCV-RNA。
在另一個實施方案中，它們可用于治療慢性丙型肝炎感染患者以滅除可檢測的HCV-RNA，該患者具有1型的HCV基因型并通過HCV-RNA/qPCR檢測其血清中的病毒負(fù)荷量大于2百萬拷貝，包括在20至30周內(nèi)使用治療有效量的利巴韋林和治療有效量的α干擾素，以致于至少約15％的患者在所述20至30周治療期末沒有可檢測的HCV-RNA，在所述給藥后至少24周內(nèi)也無可檢測的HCV-RNA。優(yōu)選至少約20％的患者在所述20至30周治療期末沒有可檢測的HCV-RNA，在所述給藥后至少24周內(nèi)也無可檢測的HCV-RNA。
優(yōu)選利巴韋林給藥量為每天400至1200mg。更優(yōu)選利巴韋林給藥量為每天800至1200mg。
使用的α干擾素優(yōu)選選自干擾素-α-2a、干擾素-α-2b、共有序列干擾素(consensus interferon)、純化的α干擾素產(chǎn)品或聚乙二醇化α干擾素。更優(yōu)選，α干擾素選自干擾素-α-2a、干擾素-α-2b、或純化的α干擾素制品，而α干擾素給藥量為每周2百萬至1千萬IU，按周計每周三次，按日計隔天一次給藥。在優(yōu)選的實施方案中，使用的α干擾素是干擾素-α-2b，且α干擾素給藥量為3百萬IU每周三次。
或者，使用的α干擾素是共有序列干擾素，而α干擾素使用量為1至20微克每周，按周計每周三次，按日計隔天一次。在另一個實施方案中，使用的α干擾素是聚乙二醇化的干擾素α-2b，此α干擾素的使用量為0.5至2.0微克/千克每周，按周計每周三次，按日計隔天一次?；蛘?，使用的α干擾素是聚乙二醇化的干擾素α-2a，α干擾素使用量為20至250微克/千克每周，按周計每周三次，按日計隔天一次。
本發(fā)明令人驚奇地發(fā)現(xiàn)，與α干擾素或利巴韋林單獨(dú)治療比較，治療有效量的利巴韋林和治療有效量的α干擾素聯(lián)合治療至少20至30周，可導(dǎo)致較任何單獨(dú)治療10倍以上的患者在治療結(jié)束后至少24周內(nèi)其血清沒有可檢測的HCV-RNA。
發(fā)明詳述術(shù)語“α干擾素”用于本文指高度同源物特異性蛋白家族，該蛋白抑制病毒復(fù)制和細(xì)胞增殖并調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)。典型的適宜α干擾素包括但不限于重組干擾素α-2b，如Intron-A干擾素，由ScheringCorporation，Kenilworth，N.J.提供，重組干擾素α-2a，如Roferon干擾素，由Hoffmann-La Roche，Nutley，N.J.提供，重組干擾素α-2C，如Beroforα2干擾素，由Boehringer IngelheimPharmaceutical，Inc.，Ridgefield，CT.提供，干擾素α-n1，一種天然α干擾素的純化混合物，如Sumiferon，由日本的Sumitomo提供，或Wellferon干擾素-n1(INS)，由Glaxo-Wellcome Ltd.，倫敦，英國提供，或者共有序列α干擾素如美國專利4897471和4695623(特別是其實施例7，8或9)所述，以及由Amgen，Inc.，Newbury Park，CA提供的特定的產(chǎn)品，或由Interferon Sciences生產(chǎn)由PurdueFredreick Co.，Norwalk，CT.以Alferon商標(biāo)提供的天然α干擾素的一種混合物干擾素α-n3。優(yōu)選使用干擾素α-2a和α-2b。因為在所有干擾素中干擾素α2b在治療慢性丙型肝炎感染中在全世界得到了最廣泛的認(rèn)可，因此是最優(yōu)選的。干擾素α2b的制備描述于美國專利4530901。
利巴韋林，1-D-呋喃核糖基-1H-1，2，4-三唑-3-甲酰胺，由ICNParmaceuticals，Inc.，Costa Mesa，California提供，其描述于Merck Index，化合物No.8199，第11版。其制備和制劑描述于美國專利4211771。
“對前期治療沒有反應(yīng)”指對前期的治療根本不反應(yīng)的患者(本領(lǐng)域一般稱為“無反應(yīng)者”)，或?qū)η捌谥委熡蟹磻?yīng)但隨后復(fù)發(fā)的患者(本領(lǐng)域一般稱為“非持續(xù)反應(yīng)者”)。
“難以治療患者”至迄今被分類為不容易對治療起反應(yīng)的患者；例如，因為高的病毒負(fù)荷量或由于HCV感染是難以治療的基因型如1型，例如1b型。HCV分為獨(dú)立的基因型的分類的詳細(xì)情況見，例如，“通過對NS-5區(qū)的系統(tǒng)發(fā)生分析將丙型肝炎病毒分為六種主要的基因型和一系列亞型”，Simmonds，P.等，J.Gen Virol.(1993)，74，2391-2399和“丙型肝炎病毒基因型命名的建議體系”，Simmonds，P.等，Hepatology，19(5)(1994)，13221-1323。
慢性丙型肝炎感染的患者可能表現(xiàn)出一種或多種下列體征或癥狀(a)ALT升高，(b)抗HCV抗體試驗陽性，(c)HCV-RNA檢測陽性表明存在HCV，(d)慢性肝炎臟疾病的臨床特征，(e)肝細(xì)胞損傷。
為了實施本發(fā)明，給表現(xiàn)出上述一種或多種體征或癥狀的患者，以足以消除或至少減輕一種或多種體征或癥狀的量，使用α干擾素(下文中為α-IFN)和利巴韋林。在優(yōu)選的實施方案中，給α干擾素單獨(dú)治療后不能消除HCV-RNA的患者使用本發(fā)明的聯(lián)合治療。
給患者聯(lián)合使用α-IFN和利巴韋林，即在此患者接受利巴韋林的同時間內(nèi)使用α-IFN。多數(shù)α-IFN制劑口服無效，因此優(yōu)選的α-IFN給藥方式是胃腸外，優(yōu)選皮下、IV或IM注射。利巴韋林可以與胃腸外給藥的α-IFN一起，以膠囊或片劑的形式口服給藥。當(dāng)然，可考慮兩種藥物的其它給藥形式，如通過鼻內(nèi)噴霧、經(jīng)皮給藥、通過栓劑、通過緩釋劑型等給藥。只要使用適當(dāng)?shù)膭┬投黄茐幕钚越M份，給藥的任何形式就都是可行的。
在本發(fā)明文本中，可檢測的HCV-RNA指通過定量的、多循環(huán)逆轉(zhuǎn)錄酶PCR方法檢測，每毫升患者血清少于100拷貝。在本發(fā)明中HCV-RNA優(yōu)選通過下述方法檢測。此方法在本文中稱為HCV-RNA/qPCR。
用硫氰酸胍-酚-氯仿混合(mister)，然后用乙醇-醋酸銨沉淀由患者血清中提取RNA。將沉淀的RNA離心并將粒狀沉淀在Centrivap操作臺(Labconco，Kansas City，Mo.)干燥。然后，將干燥的粒狀沉淀再懸浮于30微升的Rnasin(Promega Corp.，Madison，WI)、二硫蘇糖醇和二碳酸二乙酯處理的水混合物中。將樣本保持在-20℃以下直至RNA逆轉(zhuǎn)錄(RT)和PCR。
為了在逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中，將全部RNA序列轉(zhuǎn)成cDNA，隨機(jī)的六脫氧核苷酸(Pharmacia Biotech，Piscataway，NJ)用作第一條cDNA合成的引物。將兩等分3微升的再懸浮樣本加入到3微升的100ng/L隨機(jī)引物中并在70℃變性，然后在40℃在含5mM氯化鎂的標(biāo)準(zhǔn)緩沖液中用M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶(USB，Cleveland，OH)逆轉(zhuǎn)錄1小時。最終逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體積是26L。逆轉(zhuǎn)錄后立即開始PCR。
用熱穩(wěn)定的Taq聚合酶進(jìn)行改良形式的PCR方法以擴(kuò)增cDNA。向全部逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體積(26L)中加入75微升PCR混合物，至在總體積101L中的氯化鎂最終濃度為1.5mM。每個101L樣本再分為50.5L的樣本，并在上部加上礦物油以防止蒸發(fā)。
PCR循環(huán)由退火90秒、擴(kuò)增90秒和變性90秒組成，分別在55℃、74℃和94℃。將熱循環(huán)樣本進(jìn)行最后74℃擴(kuò)增10分鐘。使用四個不同的循環(huán)裝置。重復(fù)加入樣本，并在RT后平等地將這些樣本分開，每個樣本分成四個試管。這四個試管中的每個給出不同的循環(huán)數(shù)，提高此定量方法的靈敏度和準(zhǔn)確性。通過包括每套60個試管的已知拷貝數(shù)RNA標(biāo)準(zhǔn)物的滿意擴(kuò)增評價熱循環(huán)的效率。用兩套引物進(jìn)行此擴(kuò)增，它們都來自HCV基因組的5′非翻譯區(qū)。這兩對引物被仔細(xì)保存并檢測HCV的所有已知亞型。引物對1上游5′-GTG GTC TGC GGA ACCGGT GAG T3′，下游5′-TGC ACG GTC TAC GAG ACC TC-3′，其制備了190bp的產(chǎn)物。引物對2上游5′-CTG TGA GGA ACT ACT GTC TTC-3′，下游5′-CCC TAT CAG GCA GTA CCA CAA-3′，其制備了256bp的產(chǎn)物。
然后，將擴(kuò)增的cDNA在3％瓊脂糖凝膠上電泳并轉(zhuǎn)移至尼龍膜上。通過Southern印跡和免疫染色用無放射性地高辛配基標(biāo)記的DNA探針檢測靶DNA。用自動儀器進(jìn)行PCR熱循環(huán)、瓊脂糖凝膠電泳、真空轉(zhuǎn)移Southern印跡、雜交和免疫染色等操作程序。每個膜含有已知拷貝數(shù)的連續(xù)稀釋的標(biāo)準(zhǔn)物，它們用于建立標(biāo)準(zhǔn)曲線以定量檢測樣本帶。由小心稀釋的得自轉(zhuǎn)錄克隆的HCV-RNA作出原始標(biāo)準(zhǔn)曲線。對轉(zhuǎn)錄物進(jìn)行放射性摻入試驗、凝膠電泳和OD 260，以便確定它們到了期望的長度。定量克隆標(biāo)準(zhǔn)物的RNA轉(zhuǎn)錄物制備后，“收集”的標(biāo)準(zhǔn)物產(chǎn)生了，其更好地代表了HCV的多相性，人們可在天然感染中遇到。這些收集物通過混合大量得自已知感染個體的血清或血漿制備。這些血清/血漿收集物用PCR針對克隆轉(zhuǎn)錄物校準(zhǔn)，然后在已知的PCR陰性液中稀釋。最后，收集物的較高拷貝數(shù)的樣本用Chiron INc.(Emeryville，CA)的cDNA Quantiplex核酸檢測系統(tǒng)檢查。這些“雙定量的”收集物被分為等分并在-70℃保存。在每個試驗中使用5000000、1000000、500000、100000、10000和1000拷貝/毫升的稀釋度。
用自動掃描儀/密度計在反應(yīng)的間期內(nèi)將每個Southern印跡膜掃描進(jìn)計算機(jī)中，以確定何時標(biāo)準(zhǔn)曲線最接近線性。再從所得電子圖像中測量帶面積和平均帶密度。將所有的讀數(shù)標(biāo)準(zhǔn)化以積分帶密度并與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較，以得到每條帶中病毒拷貝數(shù)的值。
進(jìn)行以下臨床方案研究1本實驗的整體設(shè)計和計劃這是前瞻性、多中心、隨機(jī)、雙盲、平行組研究。此實驗比較INTRONA加利巴韋林和INTRONA加安慰劑治療代償期慢性丙型肝炎患者24周的結(jié)果，這些患者對α干擾素(INTRONA、Roferon-A或Wellferon)一個或兩個前期療程(最小3MU至最大6MU隔天1次或每周3次，至少20周至最多18個月)有反應(yīng)，但是最近的α干擾素治療后復(fù)發(fā)。通過血清HCV-RNA陽性、肝臟活組織檢查和實驗室檢查確定患慢性丙型肝炎的合格患者。
患者隨機(jī)用INTRONA加利巴韋林或INTRONA加安慰劑治療。INTRONA的劑量為3MU皮下每周三次；利巴韋林的劑量為1000或1200mg口服每天(根據(jù)體重)，分再次給藥。由中央隨機(jī)中心以同樣的比率指定治療組。設(shè)計的隨機(jī)方法用來平衡治療組在位點內(nèi)或通過位點、根據(jù)治療前肝臟活組織檢查中有無肝硬變、血清HCV-RNA/qPCR水平及HCV基因型。
實驗治療進(jìn)行24周。實驗的總過程為48周以明確治療的長期作用。
在治療期間及治療后，隨訪生化(ALT)、病毒學(xué)(HCV-RNA)和組織學(xué)(肝臟活組織檢查)等檢查評價對實驗治療反應(yīng)的特性和時間。在治療后24周檢測時，主要效果的變量為定義為血清HCV-RNA/qPCR的消失(＜100拷貝/ml)的整體反應(yīng)，及治療后肝臟活組織檢查結(jié)果改善，由Knodell組織學(xué)活性指數(shù)(Knodell Histology Activity index(HAI))檢測。作為次要效果變量也檢測到了ALT的正?；?。此實驗治療的安全性通過監(jiān)控選擇的實驗室參數(shù)及記錄和評估副作用的發(fā)生來評價。
治療方案實驗治療方案有兩種—INTRONA 3 MU皮下每周三次，加利巴韋林1000至1200mg/天口服，以兩個分開的劑量，給藥24周；或—INTRONA 3 MU皮下每周三次，與以兩個分開的劑量的利巴韋林口服相匹配的安慰劑，給藥24周。
實驗治療給藥24周。以固定劑量3MU TIW使用治療丙型肝炎的標(biāo)準(zhǔn)INTRONA(重組干擾素α-2b)給藥方案。每個患者依制劑接受指導(dǎo)并皮下使用INTRONA。每天早晚兩次使用利巴韋林。通過記錄的患者體重確定劑量。體重75千克的患者每天接受1000mg，即早晨兩個200mg的膠囊，晚上三個200mg的膠囊。體重大于75千克的患者每天接受1200mg，即早晚各三個200mg的膠囊。
設(shè)計隨機(jī)方法以平衡與以下基礎(chǔ)特性有關(guān)的組A.治療前肝組織學(xué)(肝硬變或無肝硬變)；B.血清HCV-RNA/qPCR情況(HCV-RNA/qPCR 2000000或HCV-RNA/qPCR＞2000000拷貝/ml)；及C.HCV基因型(1型或其它)。為了平衡將混合基因型(包括1型)的患者分類為1型。
效果首要效果目標(biāo)是根據(jù)完全反應(yīng)率比較兩個治療組，定義為在治療結(jié)束24周后血清HCV-RNA/qPCR降至檢測不出的水平或小于100拷貝/ml水平，同時按Knodell HAI炎癥評分定義的在治療后肝臟活組織檢查結(jié)果改善。也檢測以下的次要效果終點次要效果終點D.在隨訪24周時部分患者的ALT正?；籈.部分患者的活組織檢查有所改善(分類I+II+III綜合評分)；F.活組織檢查評分較基礎(chǔ)值有所變化(分類I+II+III綜合評分)；G.在治療終點HCV-RNA/qPCR的反應(yīng)率；H.在治療終點部分患者的ALT正常化。
I.在隨訪24周時HCV-RNA/qPCR的反應(yīng)率。
病毒學(xué)登記的特性和自登記時的變化由中心實驗室進(jìn)行血清HCV-RNA/qPCR檢測。在基礎(chǔ)值需要陽性的HCV-RNA檢測結(jié)果；只有HCV-RNA陽性的患者有資格參加。在4、12、24周及隨訪的12和24周重復(fù)測定。
按以下定義評價反應(yīng)反應(yīng)者在給出的時間點如果HCV-RNA/qPCR陰性(＜100拷貝每毫升)，則將患者確定為反應(yīng)者。
持續(xù)反應(yīng)者如果在隨訪24周時患者為反應(yīng)者，則將該患者確定為持續(xù)反應(yīng)者。
注意不符合這些標(biāo)準(zhǔn)的患者，包括在要求的HCV-RNA/qPCR評價得到前停藥的患者，作為無反應(yīng)者。
完全反應(yīng)者根據(jù)血清HCV-RNA/qPCR和由Knodell HAI炎癥評分評價的肝臟組織學(xué)的變化。如果此患者為持續(xù)反應(yīng)者且相對于治療前其治療后Knodell HAI炎癥評分(分類I+II+III之和)改善了2分或更多，則將此患者確定為對治療完全反應(yīng)者。
肝臟組織學(xué)在患者登記前6個月內(nèi)和在治療后隨訪24周時需要肝臟活組織檢查。由一個病理學(xué)家用Knodell組織學(xué)活性評分進(jìn)行活組織檢查的評價。中心病理學(xué)家不知道患者的身份、治療組和相對于治療(治療前或后)得到的活組織檢查時間。實驗治療的效果通過比較在基礎(chǔ)時和治療后24周時觀察到的炎癥活性的程度進(jìn)行評價。
結(jié)果在31個國際中心登記了195位患者并隨機(jī)分為用INTRONA加利巴韋林(N＝98)或INTRONA加安慰劑(N＝97)治療。3個患者未治療，其中兩個隨機(jī)接受INTRONA加利巴韋林，而1個隨機(jī)接受INTRONA加安慰劑；因此，所有的治療組由192位患者組成(接受INTRONA加利巴韋林和INTRONA加安慰劑的各有96位患者)。此三位未治療患者中的兩人，是因為不希望繼續(xù)治療，第3個是因為不符合方案的標(biāo)準(zhǔn)。在此報告中所有的效果和安全性討論是基于所有治療組的數(shù)據(jù)。
效果本研究的目的是比較INTRONA加利巴韋林和INTRONA加安慰劑的完全反應(yīng)率和病毒學(xué)反應(yīng)率(基于HCV-RNA/qPCR)。此實驗主要的效果變量是完全反應(yīng)率。
根據(jù)效果得出的結(jié)論如下J.聯(lián)合利巴韋林和INTRONA可明顯地增加滅除HCV-RNA的患者的比率，并使肝炎炎癥顯著降低。
隨訪終點完全反應(yīng)率由血清HCV-RNA(qPCR)的消除和在隨訪終點(治療結(jié)束后24周)肝臟組織學(xué)變化組成。如果在治療后24周HCV-RNA(qPCR)為陰性且治療后較治療前Knodell HAI炎癥評分(分類I+II+III之和)改善了2單位或更多，則該患者被確定為完全反應(yīng)者。隨訪終點的病毒學(xué)反應(yīng)、組織學(xué)反應(yīng)和完全反應(yīng)率總結(jié)于表1、2和3。
隨訪終點HCV-RNA反應(yīng)治療結(jié)束后24周時HCV-RNA的持續(xù)消失用INTRONA加利巴韋林聯(lián)合治療組與接受INTRONA單獨(dú)治療組相比，治療結(jié)束后24周血清中HCV-RNA滅除的患者的比例大了十倍(p＜0.001)。表1總結(jié)了隨訪終點患者血清HCV-RNA的反應(yīng)。
表1 隨訪終點血清HCV-RNA在治療結(jié)束后24周HCV-RNA滅除的患者的比例患者數(shù)(％)患者反應(yīng)狀態(tài) INTRONA加 INTRONA加 p值利巴韋林 安慰劑接受治療的所有患者50/96 5/96 ＜0.001每組治療的95％置信區(qū)間 (52) (5)4％-58％ 1％-10％治療之間的差別 42％-62％治療結(jié)束時的反應(yīng)者c49/80 5/41(61) (12)治療前后INTRONA 加利巴韋林治療組有81％(78/96)進(jìn)行了活組織檢查，接受INTRONA加安慰劑組77％(74/96)進(jìn)行了活組織檢查。表2總結(jié)了治療對肝炎患者的作用，包括治療前后的肝臟活組織檢查結(jié)果。因為HCV-RNA復(fù)制的持續(xù)消失，聯(lián)合治療組與INTRONA單獨(dú)治療組比較，肝臟炎癥改善的患者比例顯著增加(p＜0.001)。
表2 隨訪終點肝臟組織學(xué)在治療結(jié)束后24周根據(jù)KnodellHAI(I+II+III)評分肝臟組織學(xué)的改善患者數(shù)(％)b患者狀態(tài) INTRONA 加 INTRONA加 p值c利巴韋林(n＝78) 安慰劑(n＝74)活組織檢查改善d49(51) 30(31) ＜0.001b 接受了治療前后活組織檢查的患者。
c Fisher′s精確檢驗。
d 治療前至治療后Knodell組織學(xué)指數(shù)(HAI)評分(I+II+III之和)的變化，較治療前降低了2或更多。
完全反應(yīng)設(shè)計實驗時，應(yīng)意識到由于肝臟活組織檢查是侵入性操作，不可能得到所有患者的治療后的肝臟活組織檢查。因此，記錄和統(tǒng)計分析計劃指定對完全反應(yīng)的分析將基于所有被治療患者的數(shù)據(jù)，并通過最大可能性方法(MLE)評價其完全反應(yīng)性不能被確定的患者，即HCV-RNA陰性而沒有(治療后)活組織檢查評價的患者。記錄還指定對有治療前后活組織檢查結(jié)果的患者(即數(shù)據(jù)完全的患者)進(jìn)行補(bǔ)充分析?；谙铝蟹治?，完全反應(yīng)總結(jié)于表3。
K.最大可能性評價(MLE)；L.數(shù)據(jù)完整(有治療前后活組織檢查結(jié)果)的患者；M.數(shù)據(jù)缺失(HCV/活組織檢查二者之一或全部)的患者視為失敗。表3 完全反應(yīng)率數(shù)據(jù)分析 INTRONA加 INTRONA加 p值b利巴韋林 安慰劑最大可能性評價 43％ 5％ ＜0.001數(shù)據(jù)完整的患者c39/78(50％)4/74(5％) ＜0.001數(shù)據(jù)缺失視為失敗d39/96(41％)4/96(4％) ＜0.0011.MLE基于對數(shù)回歸。
1.Fisher′s精確檢驗。
1.完整數(shù)據(jù)＝治療前后的活組織檢查結(jié)果。
1.病毒學(xué)或活組織檢查數(shù)據(jù)之一或全部缺失的患者計為失敗。
與從隨訪終點HCV-RNA滅除和肝炎炎癥改善各自結(jié)果預(yù)期的，治療作用一樣對于所有評價方法，與在INTRONA加安慰劑組觀察的結(jié)果比較，INTRONA加利巴韋林治療組的完全反應(yīng)率明顯更大(＜0.001)，得到了10至14倍的改善。
在所有的基礎(chǔ)人口統(tǒng)計變量和疾病特征的基礎(chǔ)上，進(jìn)行對數(shù)回歸分析。預(yù)見隨訪終點持續(xù)反應(yīng)的、唯一的、有統(tǒng)計學(xué)意義的特征是基因型不是1型且病毒負(fù)荷量為2百萬。
對于病毒拷貝數(shù)(2百萬，＞2百萬)，統(tǒng)計學(xué)差異支持在2百萬拷貝的患者有較高的反應(yīng)率(表4)。
當(dāng)結(jié)合基因型和基礎(chǔ)病毒負(fù)荷量時，觀察到分級反應(yīng)?；蛐筒皇?型且基礎(chǔ)病毒負(fù)荷量為2百萬拷貝的患者具有最好的隨訪終點反應(yīng)；基因型為1型且＞2百萬拷貝的患者具有最差的隨訪終點反應(yīng)。表4 疾病特征與持續(xù)反應(yīng)所有治療的患者患者數(shù)(％)疾病特征bINTRONA加 INTRONA加利巴韋林(n＝96)安慰劑(n＝96)HCV-RNA/qPCR2百萬 24/36(67)5/29(17)2百萬 26/60(43)0/67(0)HCV基因型c1 16/53(30)2/53(4)其它 34/43(79)3/19(7)基因型/基礎(chǔ)HCV-RNA/qPCR其它/2百萬拷貝15/16(93)3/14(21)其它/＞2百萬拷貝 18/27(67)0/29(0)1/2百萬拷貝 8/20(40) 0/15(0)1/＞2百萬拷貝 7/33(21) 0/38(0)b 在登記時，按病毒拷貝數(shù)(2百萬，＞2百萬)、基因型(1型或其它)和肝硬變(有或無)分級。
研究2通過與實驗1所述基本上相同的方法，進(jìn)行第二個實驗。結(jié)果總結(jié)如下。
效果治療終點完全反應(yīng)率由血清HCV-RNA(qPCR)的消失和隨訪終點(治療結(jié)束24周)的肝臟組織學(xué)變化組成。如果在治療結(jié)束后24周HCV-RNA(qPCR)為陰性且治療后較治療前Knodell HAI炎癥評分(分類I+II+III之和)改善了2單位或更多，則該患者被確定為完全反應(yīng)者。隨訪終點病毒學(xué)反應(yīng)、組織學(xué)反應(yīng)和完全反應(yīng)率總結(jié)于表5、6和7。
隨訪終點HCV-RNA反應(yīng)治療結(jié)束后24周時HCV-RNA的持續(xù)滅除用INTRONA加利巴韋林聯(lián)合治療的患者與接受INTRONA單獨(dú)治療的患者相比，治療結(jié)束后24周血清中滅除HCV-RNA的患者比例大十倍(p＜0.001)。表5總結(jié)了血清HCV-RNA顯示的隨訪終點時患者的反應(yīng)。
表5 隨訪終點血清HCV-RNA在治療結(jié)束后24周HCV-RNA滅除的患者的比例患者數(shù)(％)患者反應(yīng)狀態(tài) INTRONA加 INTRONA加 p值利巴韋林安慰劑接受治療的所有患者34/77(44) 3/76(4) ＜0.001對于每個治療的95％置 33％-56％ 0％-8％信區(qū)間在治療之間的差異 28％-52％治療終點的反應(yīng)者c34/54(63) 3/32(9)隨訪終點肝臟組織學(xué)基于Knodell組織學(xué)活性指數(shù)(HAI)評分(I+II+III)，治療結(jié)束后24周肝臟組織學(xué)的改善治療前后INTRONA加利巴韋林治療組有79％(61/77)進(jìn)行了活組織檢查，接受INTRONA加安慰劑組有84％(64/76)進(jìn)行了此項檢查。表6總結(jié)了治療對肝炎患者的作用，包括治療前后的肝臟活組織檢查結(jié)果。因為HCV-RNA復(fù)制的持續(xù)消失，接受聯(lián)合治療組與接受INTRONA單獨(dú)治療組比較，肝臟炎癥改善的患者的比例顯著增加(p＜0.001)。
表6 隨訪終點肝臟組織學(xué)在治療結(jié)束后24周基于KnodellHAI(I+II+III)評分的肝臟組織學(xué)的改善患者數(shù)(％)a患者狀態(tài)INTRONA加INTRONA加p值b利巴韋林(n＝61) 安慰劑(n＝64)活組織檢查改善c38(49) 27(36) ＜0.0012.接受了治療前后活組織檢查的患者。
2.Fisher′s精確檢驗。
2.治療前至治療后Knodell組織學(xué)指數(shù)(HAI)評分(I+II+III之和)的變化，較治療前降低了2或更多。
完全反應(yīng)基于下列分析的完全反應(yīng)總結(jié)于表7N.最大可能性評價(MLE)；O.數(shù)據(jù)完整(有治療前后活組織檢查結(jié)果)的患者；P.數(shù)據(jù)缺失(HCV/活組織檢查二者之一或全部)的患者視為失敗。表7 完全反應(yīng)率數(shù)據(jù)分析 INTRONA加利 INTRONA加 p值b巴韋林 安慰劑最大可能性評價a36.5％ 2.7％ ＜0.001數(shù)據(jù)完整的患者c25/61(41.0％) 2/64(3.1％) ＜0.001數(shù)據(jù)缺失視為失敗d25/77(32.5％) 2/76(2.6％) ＜0.0011.MLE基于對數(shù)回歸。
1.Fisher′s精確檢驗。
1.完整數(shù)據(jù)＝治療前后的活組織檢查結(jié)果。
1.病毒學(xué)后活組織檢查數(shù)據(jù)之一或全部缺失的患者計為失敗。
與從隨訪終點HCV-RNA滅除和肝臟炎癥改善的各自結(jié)果預(yù)期的治療作用一樣，對于所有評價方法，與在INTRONA加安慰劑組觀察的結(jié)果比較，INTRONA加利巴韋林治療組的完全反應(yīng)率明顯更大(＜0.001)，得到了10至14倍的改善。
在所有的基礎(chǔ)人口統(tǒng)計變量和疾病特征的基礎(chǔ)上，進(jìn)行對數(shù)回歸分析。預(yù)示隨訪終點持續(xù)反應(yīng)的、唯一的、有統(tǒng)計學(xué)意義的特征是基因型不是1型。
對于病毒拷貝數(shù)(2百萬，＞2百萬)，統(tǒng)計學(xué)差異支持在2百萬拷貝的患者有較高反應(yīng)率(表8)。當(dāng)結(jié)合基因型和基礎(chǔ)病毒負(fù)荷量時，觀察到分級反應(yīng)。基因型不是1型且基礎(chǔ)病毒負(fù)荷量為2百萬拷貝的患者具有最好的隨訪終點反應(yīng)；基因型為1型且＞2百萬拷貝的患者具有最差的隨訪終點反應(yīng)。
表8 疾病特征與持續(xù)反應(yīng)所有治療的患者患者數(shù)(％)疾病特征INTRONA加INTRONA加利巴韋林(n＝77) 安慰劑(n＝76)HCV-RNA/q PCR2百萬 6/9(67) 1/12(8)2百萬 28/68(41) 2/64(3)HCV基因型1 12/46(28) 1/42(2)其它 21/31(68) 2/34(6)基因型/基礎(chǔ)HCV-RNA/qPCR其它/2百萬拷貝4/4(100)0/3(0)其它/＞2百萬拷貝 17/27(62) 2/31(6)1/2百萬拷貝 2/5(40) 1/9(11)1/＞2百萬拷貝 11/39(28) 0/32(0)僅是舉例而已，本發(fā)明只由下面的權(quán)利要求以及與這些要求保護(hù)的權(quán)利要求等同的全部范圍來限定。
權(quán)利要求
1.利巴韋林在制備治療慢性丙型肝炎感染患者以滅除可檢測的HCV-RNA的藥物組合物中的用途，上述治療方法使用與有效量的α干擾素聯(lián)合的有效量的利巴韋林，其中該患者已對前期的α干擾素治療無反應(yīng)。
2.α干擾素在制備治療慢性丙型肝炎感染患者以滅除可檢測的HCV-RNA的藥物組合物中的用途，上述治療方法使用與有效量的利巴韋林聯(lián)合的有效量的α干擾素，其中該患者已對前期的α干擾素治療無反應(yīng)。
3.利巴韋林和α干擾素二者在制備治療慢性丙型肝炎感染患者以滅除可檢測的HCV-RNA的藥物組合物中的用途，上述治療方法使用與有效量的α干擾素聯(lián)合的有效量的利巴韋林，其中該患者已對前期的α干擾素治療無反應(yīng)。
4.權(quán)利要求1至3任一項的用途，其中該患者還是難以治療的患者。
5.權(quán)利要求4的用途，其中通過HCV-RNA定量PCR檢測，所述患者血清中病毒負(fù)荷量大于2百萬拷貝每毫升。
6.權(quán)利要求4或5的用途，其中所述患者是難以治療的HCV基因型感染。
7.權(quán)利要求6的用途，其中所述感染的是HCV基因型1型感染。
8.上述任一權(quán)利要求的用途，其中α干擾素選自干擾素-α-2a、干擾素-α-2b、共有序列干擾素、純化的α干擾素產(chǎn)品或聚乙二醇化的α干擾素。
9.上述任一權(quán)利要求的用途，其中使用的α干擾素是α-2b干擾素。
10.上述任一權(quán)利要求的用途，其中利巴韋林的給藥量是400-1200mg每天，優(yōu)選800-1200mg每天，α干擾素的給藥量為每周2百萬至1千萬IU，以周計為每周三次，以日計為隔日一次給藥，更優(yōu)選3百萬IU每周三次。
11.上述任一權(quán)利要求的用途，其中給藥作用時間為20-30周。
12.權(quán)利要求11的用途，其中給藥進(jìn)一步作用的總時間為40-50周。
13.權(quán)利要求11的用途，其中給藥進(jìn)一步作用的總時間為60-80周。
14.含有利巴韋林和α干擾素的藥品，其中這兩種組份以分離但鄰近的形式存在。
15.權(quán)利要求14的藥品，其中α干擾素是適于胃腸外注射的形式，優(yōu)選皮下注射，而利巴韋林是固體劑型，優(yōu)選適于口服給藥的劑型。
16.權(quán)利要求14或1 5的藥品，其中含有含量適于每天給藥的利巴韋林，以及含量適于至少一次注射給藥的α干擾素。
17.權(quán)利要求16的藥品，其中利巴韋林的含量為400至1200mg，優(yōu)選800-1200mg，而α干擾素的含量為3百萬IU，或至少3百萬IU。
18.權(quán)利要求14至17任一項權(quán)利要求所述的藥品，該藥品為帶有治療慢性丙型肝炎感染的聯(lián)合用途說明的藥盒形式。
全文摘要
本發(fā)明公開了利巴韋林、α干擾素或利巴韋林及α干擾素的聯(lián)合形式在制備治療慢性丙型肝炎感染患者以滅除可檢測的HCV－RNA的藥物組合物中的用途,上述治療方法是使用與有效量的利巴韋林聯(lián)合的有效量的α干擾素,其中該患者已對前期的α干擾素治療無反應(yīng)。可在20至80周的時間內(nèi),在治療慢性丙型肝炎感染患者以滅除可檢測的HCV－RNA,包括用治療有效量的利巴韋林和治療有效量的α干擾素聯(lián)合治療的方法中使用該組合物。
文檔編號A61K38/12GK1271292SQ98809350
公開日2000年10月25日 申請日期1998年9月16日 優(yōu)先權(quán)日1997年9月21日
發(fā)明者J·K·阿爾布雷克特 申請人:先靈公司